Interacciones microorganismos - planta

PRÁCTICO N° 5

Objetivo: Conocer las técnicas de laboratorio para el manejo de microorganismos que interactúan con las plantas

Positivas (sinérgicas)

• Simbiosis (micorrizas, rizobios)• Mutualismo (Azozpirillum)

Negativas (antagónicas)

• Competencia• Amensalismo

Interacciones más comunes

Técnicas de laboratorio

Aislamiento de microorganismos Selección de cepasProducción de inoculantes

Simbiosis: micorrizas

Ectomicorrizas Endomicorrizas

IntercelularesManto externoRaíz modificadaHongos superioresCultivables

Intercelulares e intracelularesSin manto externoSin raíz modificadaHongos inferioresNo cultivables

incubar

estriar en medio YEM

cortar la raíz lavar

seleccionar nódulos turgentes extraer los

nódulos

nódulos

desinfectar con H2O2 (5minutos)

macerar enjuagar con H2O estéril

1 ml de H2O estéril

incubar

repicar (pico de flauta)

colorear (Gram -)

conservar

Aislamiento de microorganismos: rizobios

Aislamiento de microorganismos: rizobios

Extraer los nódulosRaíz de leguminosa

Desinfectar con H2O2 (20%) 5 minutos

Enjuagar con H2O estéril

Aislamiento de microorganismos (rizobios)

Colocar los nódulos en un

tubo con 1ml de agua estéril

Extraer una alícuotaEstriar en medio YEM

Macerar con varilla de vidrio

Incubar (28-30° C)

Cultivo de rizobio Colorear y observar

Repicar a “pico de flauta”

Incubar y conservar

Aislamiento de microorganismos (rizobios)

Síntesis de aislamiento de rizobios

incubar

estriar en medio YEM

cortar la raíz lavar

seleccionar nódulos turgentes extraer los

nódulos

nódulos

desinfectar con H2O2 (5minutos)

macerar enjuagar con H2O estéril

1 ml de H2O estéril

incubar

repicar (pico de flauta)

colorear (Gram -)

conservar

incubar

cortar raíz lavar1 g de raíz

colocar en H2O estéril y agitar

extraer alícuotasembrar en medio NFB semisólido

incubar

crecimiento de Azospirillum

aislamiento en medio NFB sólido

incubar

repicar (pico de flauta)

colorear (Gram -)

conservar

Aislamiento de microorganismos: Azospirillum

Aislamiento de microorganismos: Azospirillum

Gramínea

Agitar

Suspender en H2O estéril

Cortar raíces

Extraer alícuota

Sembrar en medio NFB semisólido

Incubar

Halo de crecimiento de Azospirillum

Repicar a “pico de flauta"

Aislamiento de microorganismos: Azospirillum

Incubar y conservar

Síntesis de aislamiento de Azozpirillum

incubar

cortar raíz lavar1 g de raíz

colocar en H2O estéril y agitar

extraer alícuotasembrar en medio NFB semisólido

incubar

crecimiento de Azospirillum

aislamiento en medio NFB sólido

incubar

repicar (pico de flauta)

colorear (Gram -)

conservar

Selección de cepas para capacidad fijadora de N

Ensayo de laboratorio: alfalfa

Medio de cultivo: Yensen

Testigo: medio sin N sin inocular

Control: medio sin N inoculado con cepa eficiente

Tratamientos: medio sin N inoculados con cepas a testear

Testigo: medio con N sin inocular

Síntesis de selección de cepas

Testigo medio sin N sin inocular

Controlmedio sin Ninoculado con cepa eficiente

Tratamientosmedio sin Ninoculados concepas a testear

Testigomedio con Nsin inocular

Selección de cepas: parámetros de evaluación

• Cantidad de nódulos• Color• Posición en la raíz• Actividad Nasa• N en planta• Peso de raíz

Síntesis de producción de inoculante

incubar (4-5 días)

filtro de aire

manguera

aireador

cámara de aire 30%

incubar 3 o 4 días

extraer una alícuota de cultivo conservado

cultivar en medio YEM liquido (pie de cuba) colorear

(control del pie de cuba)

• agregar antibiótico

• colocar el pie de cuba

colorear(control del inoculante)

Primera etapa

cultivo de iniciación (pie de cuba)

Segunda etapa

cultivo a gran escala (biodigestor)

50 ml

Medio Ashby(estéril)

Producción de inoculantes

Aireador

Mechero

Mangueras

Tapones Biodigestores

Filtro de aire

Producción de inoculantes

Planta Industrial

Actividades

1. Micorrizas: observar raíces de pino

2. Rizobios: observar bacteroides y bacterias

3. Producción de inoculantes: observar un biodigestor