informe tincion simple y diferencial pamplona

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MILEYDI MARTINEZ DANILO ANDRÉS QUINTERO MAYRA ALEJANDRA MONTEJO JEFFERSON OCHOA LAURA GONZALES LEIDY CAROLINA LEAL CRISTIAN CARRILLO LUCIA JIMENA SANCHEZ EFRAIN OCHOA MARÍA ALEJANDRA ROJAS SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE CENTRO DE FORMACION PARA EL SECTOR RURAL Y MINERO CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS PAMPLONA, 1 DE AGOSTO DE 2014 TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

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tipos de tincion

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MILEYDI MARTINEZDANILO ANDRÉS QUINTERO

MAYRA ALEJANDRA MONTEJO

JEFFERSON OCHOALAURA GONZALES

LEIDY CAROLINA LEALCRISTIAN CARRILLO

LUCIA JIMENA SANCHEZEFRAIN OCHOA

MARÍA ALEJANDRA ROJAS

SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJECENTRO DE FORMACION PARA EL SECTOR RURAL Y MINERO

CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOSPAMPLONA, 1 DE AGOSTO DE 2014

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

1.TINCION SIMPLE1.1 FUNDAMENTACION DE LA TINCION1.2 REACTIVOS PARA REALIZAR TINCION SIMPLE1.3 FUNCIONALIDAD1.4 TECNICA1.5 MORFOLOGIA DE HONGOS

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

2.TINCION GRAM2.1 FUNDAMENTACION DE LA TINCION2.2 REACTIVOS PARA REALIZAR TINCION GRAM2.3 FUNCIONALIDAD2.4 TECNICA2.5 MORFOLOGIA BACTERIANA2.6 PARED CELULAR

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

3.TINCION DE ESPORAS3.1 FUNDAMENTACION DE LA TINCION3.2 REACTIVOS PARA REALIZAR TINCION DE ESPORAS3.3 FUNCIONALIDAD3.4 TECNICA3.5 MORFOLOGIA DE LAS ESPORAS

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

4.TINCION DE LEVADURAS4.1 FUNDAMENTACION DE LA TINCION4.2 REACTIVOS PARA REALIZAR TINCION DE LEVADURAS4.3 FUNCIONALIDAD4.4 TECNICA4.5 MORFOLOGIA DE LAS LEVADURAS

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

1.TINCION SIMPLE1.1. FUNDAMENTACION DE LA TINCION

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior.  Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul de metileno, fuscina diluida). La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las formas y las estructuras celulares básicas. En las tinciones simples se usa un único reactivo, que preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante y quedarán teñidas del mismo color. Por tanto, la tinción simple mejora la observación de la célula completa..

1.TINCION SIMPLE1.2 REACTIVOS PARA REALIZAR TINCION SIMPLE (HONGOS)

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Tinta china

Azul de Metileno de Loeffler

Azul de Lactofenol

Colorantes:

1.TINCION SIMPLE1.3 FUNCIONALIDAD

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

La tinta china o Nigrosina permite observar células levaduriformes capsuladas (Cryptococcus), sobre todo en LCR. Los polisacáridos capsulares rechazan la tinta china y la capsula aparece como un halo claro alrededor de los microorganismos. Azul de metileno de Loeffler puede agregarse a las preparaciones en fresco de heces para observar la presencia de leucocitos.

Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china, Azul de Metileno de Loeffler, Azul de Lactofenol).

El Hidróxido de potasio al 10% (solución de KOH) permite ver elementos de hongos, ya que el KOH digiere parcialmente los componente proteicos, por ejemplo de la célula huésped, pero no actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares de los hongos

1.TINCION SIMPLE1.4 TÉCNICA

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

1. Antes de empezar con la tinción se debe esterilizar el asa de siembra en el mechero Bunsen.

2. Se toma una porción pequeña de colonia mezclándola con el asa. Se fija pasando el portaobjetos por la llama del Bunsen un par de veces de manera rápida. Así se evitará que los hongos sean arrastradas por los líquidos para teñir.

3. Se deja enfriar la extensión y después se añade el colorante que en este caso es: Azul de metileno.

4. La extensión se coloca sobre un puente de tinción; y aquí se aplican las gotas de colorante hasta dejarla toda cubierta. Una vez teñida la extensión se elimina el exceso de colorante con agua destilada dejándola caer sobre el portaobjetos.

5. El secado sirve para eliminar el exceso de agua.

6. Una vez teñida la muestra, lavada y seca se le añade una gota de aceite (de cedro) de manera que cubra toda la extensión.

7. Se coloca el portaobjetos en el microscopio y se procede a la observación con el objetivo adecuado.

1.TINCION SIMPLE1.5 MORFOLOGÍA DE HONGOS

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

2.TINCION GRAM2.1. FUNDAMENTACION DE LA TINCION

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, gram-positivas y gram-negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias).

La tinción Gram aporta dos ideas básicas para la definición "taxonómica" de las bacterias: el color que adquieren tras la tinción y la forma que presentan las células bacterianas.

En cuanto al color, indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, es decir, hablamos de microorganismos Gram-positivos cuando aparecen teñidos de color azul-violeta y de Gram-negativos cuando se visualizan de color rojo-rosado.

2.TINCION GRAM2.1 REACTIVOS

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Colorantes: Los colorantes más utilizados: azul de metileno, cristal violeta, safranina, son catiónicos y se combinan fuertemente con componentes celulares cargados negativamente, como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos (las envueltas externas de los microorganismos están por lo general cargadas negativamente).

REACTIVOS UTILIZADOS PARA REALIZAR TINCION GRAM

Reactivos y Colorantes: • Cristal violeta• Lugol• Alcohol cetona• Safranina.

FUNCIONALIDAD DE LOS REACTIVOS Y/O COLORANTES

 PRODUCTOS UTILIZADOS

 

REACCION Y COLORACION DE LAS BACTERIAS 

 GRAM +  GRAM – 

 1) CRISTAL VIOLETA 

 Células color violeta  Células color violeta

  2) LUGOL: solución

iodada

 Se forma el complejo CV-I.  

 Se forma el complejo CV-I.

Las células continúan teñidas de color violeta. Las células continúan teñidas de color violeta. 

    

3) ALCOHOL CETONA

 Se deshidratan las paredes celulares.  

Eliminación por extracción de grasas de las paredes celulares.  

 Se contraen los poros.    Aumenta la porosidad.

 Disminuye la permeabilidad.    

El complejo CV-I, no sale de las células que continúan teñidas de color violeta. 

 El complejo CV-I, se separa de la célula.

  4) SAFRANINA O

FUSCINA

 Células no decoloradas.   Células decoloradas. 

 SE TIÑEN DE COLOR VIOLETA.   SE TIÑEN DE COLOR ROSADO

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

2.TINCION GRAM2.5. MORFOLOGÍA BACTERIANA

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Formas básicas en que se puede visualizar la morfología bacteriana en una tinción GRAM:

CocosMicrococos, aparecen aislados y dispersos tras la división celular. Diplococos, aparecen por pares. Estreptococoss, tienden a unirse formando cadenas. Estafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tamaño

2.TINCION GRAM2.5. MORFOLOGÍA BACTERIANA

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Cocos Gram positivos

Racimos: Forma típica de Sthaphylococcus sp, como S. aureus.

Cadenas: Forma típica de Streptococcus sp, como S. neumoniae, Streptococcus grupo B.

Tetradas: Forma típica de Micrococcus sp.

2.TINCION GRAM2.5. MORFOLOGÍA BACTERIANA

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Cocos Gram negativos

Racimos: Forma típica de Sthaphylococcus sp, como S. aureus.

Cadenas: Forma típica de Streptococcus sp, como S. neumoniae, Streptococcus grupo B.

Tetradas: Forma típica de Micrococcus sp.

2.TINCION GRAM2.5. MORFOLOGÍA BACTERIANA

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Bacilos grandes variaciones morfológicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos

2.TINCION GRAM2.5. MORFOLOGÍA BACTERIANA

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Espirales (Treponemas, Borrelias ...)

2.TINCION GRAM2.6. PARED CELULAR

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

2.TINCION GRAM2.6. PARED CELULAR BACTERIA GRAM POSITIVA

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La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico.  Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano.

2.TINCION GRAM2.6. PARED CELULAR BACTERIA GRAM NEGATIVA

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La pared de la célula gram-negativa, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas. Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gram-negativa es peptidoglicano.

3.TINCION DE ESPORAS3.1. FUNDAMENTACION DE LA TINCION

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Tinción diferencial para revelar estructuras celulares. Método de Wirtz: Algunos géneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en su interior formas de resistencia denominadas esporas.

Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, etc.) formándose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporogénesis, la célula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante años.

3.TINCION DE ESPORAS3.2 REACTIVOS PARA REALIZAR TINCION DE ESPORAS

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La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:  1. Verde malaquita

2. Safranina:

3.TINCION DE ESPORAS3.3. FUNCIONALIDAD

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

Se utiliza para teñir las estructuras de resistencia llamadas endosporas bacterianas.

La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:  1. Verde malaquita: Capaz de teñir las esporas en caliente.

2. Safranina: Colorante de contraste que tiñe las formas vegetativas.

Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante.  

3.TINCION DE ESPORAS3.4. TECNICA

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

1. Hacer un frotis de cultivo en medio sólido (preferentemente de al menos 48 horas) de Bacillus sphaericus y Bacillus thuringiensis. Secar al aire y fijar con calor.

2. Colocar el porta sobre un trípode y cubrir la preparación con papel de filtro de aproximadamente el mismo tamaño que la extensión (tienen por objeto mantener húmeda la preparación y evitar que los bordes del porta se manchen de colorante).

3. Añadir la solución de verde malaquita (solución acuosa al 2%), calentar con el mechero nuevamente, sin que llegue a hervir, hasta la emisión de vapores blancos.

Continuar calentando durante 5 minutos. Añadir más colorante si éste se evapora. Es importante que la muestra no se seque. 4. Lavar con agua intensamente y quitar el papel de filtro.

5. Teñir con safranina (como colorante de contraste) durante 1 minuto.

6. Lavar con agua, secar y observar al microscopio con objetivo de inmersión.

7. Se verá la endospora teñida de color verde y las células vegetativas de color rojo.

3.TINCION DE ESPORAS3.4. TECNICA

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS

3.TINCION DE ESPORAS3.5. MORFOLOGIA DE LAS ESPORAS

TINCIONES: SIMPLE, GRAM, DE ESPORAS Y DE LEVADURAS