Influence de la structure des chromosomes sur l’expression des gènes

Préparation et observation des chromosomes

Chromosomes polyténiques

Glandes salivaires de larves de troisième stade

Chez la drosophile: 4 paires de chromosomes

Glande salivaire

Corps gras

Intestin moyen

Caeca digestif

Proventricule

Oesophage

Corps gras

Ganglion ventral

Hémisphères cérébraux

Glandes salivaires

Disques imaginaux

Machoire

Glandes salivaires

Noyaux de cellules de glandes salivaires non éclatés (X100)

Bras droit du II

Bras droit du III

Bras gauche du III

IV

Bras gauche du II

X

Chromocentre

Chromosomes polyténiques bien étalés (x400 coloration orcéine acétique)

X

3L3R 2R

2L

4

Chromosomes polyténiques bien étalés (x400 vue en contraste de phase sans coloration)

W (B6, C2)

W

W

Carte de Bridges

Observation microscopephotonique

Observation microscopeelectronique

Observation de la région du gène white sur le chromosome X

Constriction (C) de la partie antérieure du chromosome X

Boucle de délétion

Partie délétée

Homologue

Appariement d’une délétion de la région des gèneszeste/white avec un chromosome normal

Délétions de la région white du chromosome X

Chromosome Xnon délété

Chromosome Xdélétion wN

Chromosome Xdélétion wpn

123

w

Inversion

Boucle d’inversion sur le chromosome X

Exemples d’inversion

Une inversion du chromosome X: In(I)wm4

Pour obtenir une bonne préparation de chromosomesde drosophile il faut :

Cultiver les mouches à basse température (19°/20°C)

Le milieu doit être enrichi par de la levure de boulangerie fraîche délayée dans un peu d’eau

Une faible densité d’individu pour ensemencer la culture (5 à 10 couples)

Prélever les larves avant leur immobilisation sur la paroi des flacons de culture, elles ne doivent pas présenter d’appendices antérieurs plumeux.

Choisir des larves femelles !!!

Glandes salivairesDisque labial

Disque prothoracique dorsal

Disque clypeo-labral

Disque patte T1Disque œil antenne

Disque patte T3

Lobe du cerveau

Disque patte T2Disque d’aile

ovaire

testicule

Nid d’histoblastedorsal antérieur

Nid d’histoblastedorsal postérieur

Disque génital

Tube de Malpighi

Ilots de cellules précurseursDe l’intestin adulte

Disque d’haltère

La Dissection

*Les larve de 3ème stade sont prélevées et déposées sur une lame de microscope dans du sérum physiologique.

*La larve est observée sur fond noir au grossissement x10 d’une loupe binoculaire

*Avec des pinces fines immobiliser la larve en la pinçant au tiers antérieur et avec une deuxième pince tirer sur la machoire

*Vous devez aboutir à la figure suivante

Dissection de la larve d’après : http://wwwusers.imaginet.fr/~pol/4chrgean.htm#Protocole

Glande salivaire

Corps gras

Intestin moyen

Caeca digestif

Proventricule

Oesophage

Corps gras

Ganglion ventral

Hémisphères cérébraux

Glandes salivaires

Disques imaginaux

Machoire

Dissection de la partie antérieure d’une larve de 3ème stade

*Les glandes salivaires se présentent sous la forme de deux tubesréunis en un canal unique au niveau de la mâchoire (voir photo).

*Les glandes sont souvent recouvertes de corps gras.

Glandes salivaires

Corps gras

*Prélever les deux glandes en essayant au maximum d’éliminer le corps gras ceci sans léser les glandes, les transporter sur une autre lame dans de l’acide acétique 45%, acide lactique, et laisser environ 30 secondes

*Remplacer l’acide acétique par la solution de coloration:orcéine/acide acétique/acide lactique (2g orcéine dans 50 ml acide acétique + 50ml acide lactique)

*Laisser colorer environ au moins 15 minutesCouvrir la préparation avec une lamelle

Eclatement des noyaux des cellules des glandes salivaires

Tapoter avec la pointe d’un crayon de papier sur la lamelle à l’endroit ou se trouve les glandes salivaires.

Taper fortement plusieurs fois sur la lamelle avec l’autre extrémité du crayon

Mettre la préparation sur du papier filtre et presser très fortement avec le pouce sur la lamelle en faisant attention à ce qu’elle ne glisse pas

Bras droit du II

Bras droit du III

Bras gauche du III

IV

Bras gauche du II

X

Chromocentre