Inducción de proteína recombinante

-Lactamasa

Las proteínas recombinantes son aquellas que obtenemos a partir de una especie o una línea celular distinta a la célula original.

La proteína se obtiene por la expresión de un gen clonado en esa línea celular que nos interesa.

Inducción de proteínas recombinantes

expresar un gen de humanos en bacteria.....

conformaciónmodificaciones postraduccionales.... depende de la complejidad de la proteína

ventajas de expresar proteínas recombinantes en bacterias:

fácil de cultivarfácil de modificar genéticamentetrabajo rápidoalto rendimiento 80%

Sistemas biológicos de producción de PRSistemas biológicos de producción de PR

• Bacterias– E. coli– B. subtilis

• Células eucariontes– Hongos

• Levaduras– Saccharomyces cerevisiae– Pichia pastoris y otros metilotróficos

• Hongos filamentosos

– Células animales en cultivo– Células de insecto en cultivo– Plantas

Maximizar la expresión de proteínas codificadas por genes clonados

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Clonación del DNA

•DNA foráneo (secuencia que se desea clonar)

•Vector de clonación (vehículo)

•Organismo huésped (E. coli)

•Selección de vectores

Vector híbrido o recombinante

Vector de clonación pET-24a(+)

7200 bp

• Un gene siempre tiene que ir flanqueado por una zona promotora y otra terminadora de la transcripción

OPERON LAC

“Operón”: Se define como una unidad genética funcional formada por un grupo o complejo de genes capaces de ejercer una regulación de su propia expresión por medio de los sustratos con los que interaccionan las proteínas codificadas por sus genes.

Los genes involucrados en la utilización de la Lactosa como fuente de carbono, se encuentran agrupados y codifican para enzimas que participan en la misma vía metabólica.

COMPOSICIÓN.

a) Genes estructurales (en tándem).• gen lac z codifica para la β-galactosidasa

• el gen lac y que codifica para la permeasa de galactosido.• el gen lac a, codifica para la acetiltransferasa de tiogalactósido.

Se transcriben desde un promotor común en un mRNA polícistrónico, el cual es traducido para dar lugar a las tres enzimas.

COMPOSICIÓN

b)Promotor

Sitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA antes del inicio de la transcripción.

C) Operador• Se localiza en traslape con el promotor , sirve

como el sitio de unión para una proteína, que se conoce como represor.

d) Gen Regulador.• El gen regulador puede estar cerca o lejos de los genes que están

siendo regulados. El gen regulador codifica para una proteína específica, un producto denominado REPRESOR.

• El inductor del operón lac que utilizaremos será el isopropiltiogalactósido (IPTG).

Análogos de la lactosa

El sistema de expresión también debe tener las siguientes características:

Cromosoma de Escherichia coli

RESULTADOS DEL SEMESTRE PASADO

30 60 90 120 30 60 90 120 min

PREGUNTAS PARA EL GRUPO

1. ¿Cuál es el sistema y el vector de expresión que están utilizando en la práctica?

2. ¿Qué proteína se desea producir?

3. ¿Cómo sabrán que se llevó a cabo la inducción?