inclusion en parafina-grupo n_6

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUDESCUELA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO

CÁTEDRA DE:

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

DOCENTE:

LIC. IVÁN PEÑAFIEL

TEMA:

INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA

GRUPO: N°6

TERCER SEMESTRE

PERIODO ACADÉMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016

RIOBAMBA – ECUADOR

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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA

GRUPO N°-6

INTEGRANTES:

N°- APELLIDOS Y NOMBRES

1 DE LA TORRE ZABALA JESSICA KATHERINE

2 MACHADO YANZA CAROLINA MONSERRATH

3 OROZCO PILCO JOSUE ANDRES

TEMA:INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA

PARTICIPACIÓN

N°- 25% 50% 75% 100% Observación Cal. Docente

1 100%Colaboró con todas las necesidades requeridas, para la elaboración del

presente trabajo

2 100%Su colaboración fue clave

para la correcta elaboración del trabajo.

3 100%Trabajó correctamente, y

colaboró en todo lo necesario.

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INTRODUCCIÓN

Para poder ser estudiados con el microscopio, los tejidos de las biopsias, piezas

quirúrgicas o autopsias deben ser seccionados en cortes muy delgados, generalmente de

entre 3 y 6 micras (milésimas de milímetro). Previamente es necesario conferirles una

consistencia homogénea mediante lo que llamamos:

PROCESO DE INCLUSIÓN. Este se realiza habitualmente mediante procesadores

automáticos de tejidos y estaciones de inclusión.

Inclusión en parafina: Es el proceso que se utiliza habitualmente. Su objetivo es sustituir

el agua de los tejidos por parafina liquida caliente (58º C) que al enfriarse adquirirá una

consistencia adecuada para el corte. Como la parafina es insoluble en agua es preciso

eliminar previamente esta última del tejido, sustituyéndola inicialmente por alcohol

(deshidratación) y posteriormente por tolueno o xileno (aclaramiento) que al ser

solubles en parafina pueden ser sustituidos finalmente por ella. Así se obtendrá un tejido

embebido en parafina que será introducido en moldes con parafina liquida. Al enfriarse

los moldes obtendremos un "bloque de parafina" a partir del cual pueden obtenerse las

secciones. (Servicio de Anatomía Patológica, 2011)

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Adquirir el conocimiento necesario sobre la orientación e inclusión de tejidos en

parafina, para lograr un bloque consistente en el que esté incluido el tejido previamente

procesado.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Aprender la definición de inclusión y cuál es la finalidad de la misma.

Identificar el medio de inclusión usado con más frecuencia.

Reconocer los puntos de fusión de la parafina sólida y liquida.

Conocer el equipo para la inclusión de tejidos.

Diferenciar los moldes adecuados de acuerdo con el tamaño de la muestra.

Conocer la orientación del tejido para la realización de un bloque.

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FUNDAMENTO TEÓRICO

INCLUSIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA

Ilustración 1 Bloques de parafina

La inclusión es el proceso por el cual se incrementará la dureza y consistencia de la

pieza para permitir su corte. Esto se consigue incluyendo la pieza en una sustancia que

tenga la dureza y consistencia adecuada. La sustancia habitualmente utilizada en este

proceso es la parafina. El reto consiste en sustituir el agua que hay en el interior y

exterior de las células por parafina.

La parafina es una sustancia que por encima de los 600C es líquida y solidifica por

debajo de esta temperatura, esto facilita de difusión de la parafina por los tejidos cuando

está líquida, no obstante, otro problema que hay que salvar es el hecho que la parafina

es altamente hidrófoba, es decir no se puede mezclar con el agua o sustancias en medio

acuoso. Por ello el siguiente paso que debe sufrir las muestras es la eliminación del agua

de la muestra: la deshidratación.

La deshidratación de las muestras se consigue mediante una sustitución progresiva del

agua por etanol. Para conseguirlo se somete a las piezas a sucesivos baños de etanol de

gradación creciente, empezando por etanol 500 ó 700 y concluyendo con diferentes

baños de etanol absoluto (1000), pasando por baños de etanol 960.

La pieza, ya deshidratada, aún no puede ser pasada a parafina ya que el etanol no es

miscible con la parafina. Se usa un agente intermediario, es decir una sustancia que sea

miscible tanto con el etanol como con la parafina. El intermediario habitualmente usado

es el Xileno, en el que la pieza sufre varios baños para sustituir totalmente al etanol.

Con la pieza en Xileno, se suele pasar por un baño de una mezcla de Xileno-Parafina al

50% para favorecer la penetración de la parafina. Posterior a este baño se suceden

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varios baños en parafina pura hasta conseguir que la parafina haya penetrado

completamente en toda la pieza. Todos estos baños que incorporan parafina se realizan

en estufa 600C para mantener la parafina líquida. En algunos laboratorios todo este

proceso se realiza de forma automatizada usando un dispositivo (robot), que va

cambiando las muestras de un líquido a otro mediante un programa preestablecido.

Una vez pasado el tiempo necesario para que la parafina penetre en los tejidos, la

cuestión es realizar un bloque con todo ello, que pueda ser usado en el micrótomo para

obtener cortes.

(Martín, 2012)

ESTACION DE INCLUSION DE TEJIDOS EN PARAFINA

Ilustración 2 Estación de tejidos en parafina

La forma más sencilla es usar un molde en el que se vierte la parafina y en el que se

introduce la muestra procesada y se deja enfriar para que el conjunto se solidifique. En

muchos laboratorios se utiliza una estación a tal efecto. Estas estaciones disponen de

depósito de parafina líquida (600C), desde el que se puede dispensar parafina sobre el

molde mediante un grifo; dispone también de una cámara donde se guardan los

diferentes moldes a 600C y una placa caliente (600C) y otra fría (40C). La dinámica es

sencilla, se coloca el molde debajo del grifo dispensador de parafina y se llena con

parafina líquida, se coloca la pieza y se orienta, colocando, por último, la base del casete

de inclusión. Se desplaza con cuidado el conjunto encima de la placa fría para conseguir

una solidificación rápida que no forme cristales y una vez solidificado se extrae el

molde obteniendo un bloque listo para cortar.

(Martín, 2012)

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Ilustración 3 Colocación del molde Ilustración 4 Dispensador de parafina

Ilustración 5 Colocación de tejido y cubrir con la tapa Ilustración 6 Relleno con parafina la superficie

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Ilustración 7 Obtención del bloque de parafina

ENCASTRACIÓN EN PARAFINA

Las muestras de tejidos están encastradas en bloques de parafina (o PEG) usando

contenedores disponibles en plástico o porcelana, discos de aluminio, o en "botes

hechos con papel". Cuando uses estos métodos, extiende una fina capa de aceite de

parafina en la superficie antes de vaciar la parafina líquida para permitir que se

desmonte más fácilmente el bloque de parafina.

La encastración de tejidos inhibidos con parafina se realiza más fácilmente sobre una

plataforma de encastración. Esta es una superficie simple de aluminio, que tiene una de

sus superficies calentadas y no la otra. Cuando está caliente, el lado calentado mantiene

la parafina líquida permitiendo que el tejido pueda ser orientado.

(Anónimo)

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ORIENTACION DEL TEJIDO

Ilustración 3 Orientación de los tejidos en parafina

La calidad y la utilidad final de una sección de tejido depende de la ejecución impecable

de cada uno de los pasos del procesamiento; cada paso, a su vez, dependerá

completamente del paso anterior si se desea calidad óptima. Aún con fijación adecuada,

procesamiento impecable, y microtomía profesional, una sección de tejido puede ser

destruida si la inclusión, la localización y la orientación no son adecuadas. El técnico de

histopatología debe escrudiñar cada uno de los fragmentos del tejido recibido, analizar

su estructura, y decidir cómo situar el tejido en el bloque.

Consideraciones generales:

Las secciones de tejidos son incluidas perfectamente planas para asegurarse de que se

obtenga una sección completa. Use la presión justa para mantener la sección plana

contra la superficie del molde. Debe tenerse mucho cuidado para que después no

aparezcan artefactos causados por un manejo inadecuado de las muestras de tejido.

Estructuras Tubulares

Estructuras tubulares tales como vaso deferente, venas, arterias y oviductos deben ser

incluidas en una forma tal que la cuchilla corte a través de la luz tubular. La orientación

debería ser tan vertical como sea posible.

Superficies Epiteliales

Aquellos tejidos que tienen una superficie epitelial, con la piel, el intestino, la vesícula

biliar, la vejiga urinaria y el útero, deben ser colocados de forma tal que el plano de

sección pase a través de todas las capas del tejido. La superficie epitelial debe colocarse

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en la parte más alta del bloque para que así sea la última en ser cortada. El acto de llegar

al epitelio al final de la moción de corte va a minimizar la presión que es causa de

distorsión de la capa epitelial. El cortar de ultimo la capa de queratina reduce la

compresión, los rasguños y las cortadas de las capas subcutáneas.

Los especímenes, cuando son múltiples deben ser incluidos uno junto al otro con sus

superficies epiteliales orientadas en la misma dirección. Puede ser difícil identificar la

superficie epitelial cuando las biopsias de tejido son muy pequeñas.

Especímenes Grandes y Sólidos

Los especímenes rectangulares grandes o sólidos como el útero, la próstata, la glándula

tiroides y el tejido óseo deben ser incluidos con un ligero ángulo en relación al borde de

la cuchilla. Esta comienza el corte con menos resistencia, reduciendo así la posibilidad

de desplazar el tejido fuera del bloque. La vibración e inestabilidad del borde de la

cuchilla o del bloque también se minimizan notablemente.

Múltiples Especímenes

Múltiples fragmentos de tejido blando y ganglios linfáticos deben ser colocados uno

junto al otro con suficiente espacio entre ellos silos tejidos se colocan uno encima del

otro, existe la posibilidad de que el tejido de abajo distorsione el tejido que está encima.

La organización metódica de los tejidos hace que la lámina sea más fácil de estudiar y

que se vea más profesional que si los fragmentos se incluyen en desorden.

Los tejidos rectangulares pequeños deben ser orientados con su eje longitudinal casi

paralelo al borde de la cuchilla para minimizar los pliegues y la distorsión causados por

presión.

Estructuras Quísticas

Después de la bisección, los quistes pequeños adoptan una forma de cúpula. Por lo

tanto, los quistes deben ser incluidos con la superficie de corte hacia abajo para que así

la cuchilla corte a través de todas las capas de la pared del quiste. Hay que asegurarse de

que la cúpula no atrape burbujas de aire.

Entre los factores que afecta a la inclusión se encuentran.

1) agitación

2) calor

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3) viscosidad

4) ultrasonidos

5) vacío

(Buenas Tareas, 2012)

CONCLUSIONES

Se aprendió el significado de la palabra inclusión y para que nos sirve la misma

dentro del laboratorio de Anatomía Patológica.

Se identificó cual es el medio de inclusión o incrustación usado con más

frecuencia.

Se reconoció cuáles son los puntos de fusión de la parafina tanto en su estado

sólido como en su estado líquido.

Se conoció el equipo y las partes del mismo que se utilizan para realizar la

inclusión de tejidos en parafina.

Se realizó una diferenciación de los moldes a utilizar de acuerdo con el tamaño

de la muestra.

Se conoció la correcta orientación de los tejidos para la realización de los

bloques de parafina y su posterior corte en el micrótomo.

BIBLIOGRAFÍA

Anónimo. (s.f.). Inclusión en parafina. Obtenido de Inclusión en parafina: http://www.euita.upv.es/varios/biologia/tecnicas_de_histologia_vegetal/Documentos/Inclusion_p.htm

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Buenas Tareas. (10 de Julio de 2012). Obtenido de Buenas Tareas: http://www.buenastareas.com/ensayos/Orientacion-e-Inclusion-De-Tejidos/4750487.html#

Martín, V. (5 de Junio de 2012). Técnicas Histológicas. Obtenido de Técnicas Histológicas: http://www.wesapiens.org/es/class/4933003/file/3/T%C3%A9cnicas+Histol%C3%B3gicas%3A+Realizaci%C3%B3n+de+bloques+en+parafina

Servicio de Anatomía Patológica. (14 de Marzo de 2011). Obtenido de Servicio de Anatomía Patológica: http://www.chospab.es/area_medica/anapat/tecnicahistologica.htm

Técnicas Histológicas. (s.f.). Obtenido de http://www.wesapiens.org/es/class/4933003/file/3/T%C3%A9cnicas+Histol%C3%B3gicas%3A+Realizaci%C3%B3n+de+bloques+en+parafina

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