I. Sterile media (principles, significance)

1. Bouillon (broth)2. Agar slant, tube

I/1,2 Steril táptalajok: Bouillon, Ferdeagar, Magasagar

3. Agar plate

I/3 Lemez agar táptalaj: (bouillon, 1-3% agar-agar)

4. Enrichment media: cooked meat (CM)- and serum bouillon

5. Blood agar plate

I/5 Véresagar táptalaj: (agar táptalaj, 5% defibrinált vér)

6. Chocolate agar plate

I/6 Csokoládé agar táptalaj: (hõvel kezelt véresagar táptalaj)

7. Selective and differentiating media

(a) Clauberg (tellurite) and Löfler(b) Löwenstein-Jensen, Sula(c) Eosine-methyleneblue(d) Bismuth sulphite(e) Brilliant green(f) Desoxycholate-citrate (DC)(g) TCBS

8. Transport media9. Blood culture bottles

Hemokultúra palackok: Baktériumoknak vérbõl való kitenyésztésére szolgáló rendszer.

10. Virus transport medium

II. Cultures (theoretical background, description)

1. Staphylococcus aureus, S. epidermidis on agar plate

Staphylococcus aureus és S. epidermidis agar táptalajon S. aureus: aranysárga pigment

S. epidermidis: porcelánfehér pigment

2. S. aureus on blood agar plate

Staphylococcus aureus véresagar táptalajon1-2 mm átmérõjû, kerek aranysárga, vajszerû telepek, melyeket béta-típusú haemolyticus udvar

vesz körül

3. S. epidermidis on blood agar plate

Staphylococcus epidermidis véresagar táptalajon1-2 mm átmérõjû, kerek, sima felszínû, vajszerû, csillogó porcelánfehér telepek, haemolysis nincs

4. S. saprophyticus and S. epidermidis on agar plate with novobiocin disc

Novobiocin érzékenységi tesztStaphylococcus epidermidis: érzékeny

Staphylococcus saprophyticus: rezisztens

5. Streptococcus pyogenes on blood agar plate

Streptococcus pyogenes véresagar táptalajon 0,1-1 mm átmérõjû, színtelen, kissé domború telepek, melyeket nagy béta-típusú haemolyticus

udvar vesz körül.

6. S. mitis on blood and chocolate agar plate

Streptococcus mitis véresagar táptalajonApró, gombostûfejnyi, színtelen telepek, melyeket

alfa típusú haemolyticus udvar vesz körül

Streptococcus mitis csokoládé agar táptalajonApró, gombostûfejnyi, színtelen telepek, melyeket alfa

típusú haemolyticus udvar vesz körül

7. S. pneumoniae on blood and on chocolate agar plate

Streptococcus pneumoniae véresagartáptalajon

1-2 mm átmérõjû, sima felszínû telepek,közepükön köldökszerû behúzódás A telepeket

alfa-típusú haemolyticus udvar veszi körül

Streptococcus pneumoniae csokoládé agartáptalajon

Apró színtelen, kerek telepek, alattuk alfahaemolyticus udvar

8. Haemophilus influenzae on chocolate agar plate

Haemophilus influenzae csokoládé agar táptalajon 0,5-1 mm átmérõjû, harmatcsepp szerû telepek, náthás orrváladékra emlékeztetõ szaggal.

9. Escherichia coli on agar and on eosin-methyleneblue medium

Escherichia coli Eozin metilénkék táptalajonLaktóz pozitivitás miatt kék színû telepek

10. Proteus sp. on blood agar plate and eosine-methyleneblue medium

Proteus vulgaris véresagar lemezenNem képez önálló telepeket, csillói segítségével a táptalaj felszínét befutja, (rajzik)

11. Pseudomonas aeruginosa on agar and blood agar plate

Pseudomonas aeruginosa agar lemezen2-3 mm átmérõjû telepek. A baktérium vízoldékony pigmentjei (pyocianin és fluorescein) a

táptalajba diffundálnak, és zöldes színûre festik azt. A tenyészet hársfavirág illatú, a telepek irizálófelszínûek

12. Klebsiella sp. on agar plate and eosine-methyleneblue medium

Klebsiella pneumoniae agar lemezen2-3 mm átmérõjû, nyákos, összefolyó telepek, a nyákos küllemet a tokképzõdés okozza

13. Salmonella sp. on bismuth-sulphite medium

Salmonella typhi bizmutszulfit táptalajon A táptalaj brillantzöldet, valamint Bi- és Na-szulfitot tartalmaz. Értékelés: Salmonellák H2S képzéskövetkeztében a Bi- sót Bi-szulfiddá redukálják és fekete színû telepeket képeznek. A brillantzöld

az E. coli növekedését és a Proteus rajzását gátolja.

14. E. coli and Salmonella sp. on brilliant green medium

E. coli és S. typhi Brillantzöld táptalajon Brillantcukrot, Andrade indikátort és brillantzöldet (szelektáló anyag) tartalmazó táptalajon a

Salmonellák telepei színtelenek, az esetleg kinövõ E. coli telepei vörös színûek

15. E. coli and Shigella sp. on DC medium

Shigella és E. coli Dezoxicholát-citrát táptalajonA táptalaj tartalmaz dezoxycholsavat, Na-citrátot (szelektáló anyagként), Ferroammoniumszulfátot,laktózt, ólomacetátot, és neutrálvörös indikátort. Shigellák szabadon, jól nõnek, színtelen telepeketképeznek. E. coli és proteus gátlódik. E. coli telepei a laktózbontás következtében vörös színûek, az

epesavas sók a telep körül kicsapódnak.

16. Faeces of patient with dysentery on eosine-methyleneblue medium

Dysenteriás széklet Eozin-metilénkék táptalajonA táptalaj tartalmaz eozint, metilénkéket, rajzásgátlót és laktózt. Shigella telepek: színtelenek E. coli

telepek: kékeslilák

17. Russel medium(steril) and:

(a) lactose +, gas +

(b) lactose -, gas +

(c) lactose -, gas -Russel táptalaj szénhidrát fermentáció kimutatására gázképzéssel vagy gázképzés

nélkül a, laktóz fermentáció gázképzéssel

b, dextróz fermentáció gázképzéssel c, dextróz fermentáció gázképzés nélkül

18. Christensen medium(sterile) and:- Urease+- Urease-

Christensen táptalaj(ureum, cukrok és fenolvörös indikátor)

urease + baktériumok: lila urease - baktériumok: sárga

19. Corynebacterium diphtheriae on Clauberg (tellurite) and on Löffler medium

Corynebacterium diphtheriae Clauberg táptalajonA táptalaj tellursót tartalmaz, a baktériumok redukálják azt, a telepek fekete színûek. Szaguk

fokhagyma szagára emlékeztet.

20. Mycobacterium tuberculosis on Löwenstein medium

Mycobacterium tuberculosis Löwenstein-Jensen táptalajon: Tojást, burgonyalásztet, aszparagint, glicerint, szelektáló anyagként malachitzöldet tartalmaz. A

baktérium kenyérmorzsa szerû telepeket képez rajta.

21. Leptospira on Korthof medium

Leptospira Korthoff táptalajonA táptalaj peptont, sókat, valamint 10% nyúlsavót tartalmaz. 30°C-on inkubáljuk 6-7 napig. A

baktérium tenyészet dohányfüst szerûen gomolyog a folyékony táptalajban, ha elõbb megrázzuk akémcsövet.

??. TCBS-táptalaj

TCBS táptalajÖsszetétel:Tioszulfát

Citrát Bile (epe) Szacharóz

A brómtimolkék indikátort tartalmazó, lúgos pH-jú táptalajon a vibriók aranysárga telepeketképeznek

22. Bacillus cereus on agar and blood agar plate medium

Bacillus cereus agar táptalajonSzabálytalan szélû, egyenetlen felszínû, ún. "medúza-fõ" szerû telepek, telepek szélén kifutókkal.

23. Clostridium tetani in Holman (chopped meat) and in thioglycolate medium

Clostridium tetani Holman táptalajon:gázképzõdés nincs, parafinndugó nem emelkedik fel. A táptalaj enyhén zavaros. A hús nem

emésztõdik (proteolitikus enzim O) Thioglikolátos táptalajon: gázképzõdés nincs A táptalaj enyhénzavaros. A hús nem emésztõdik (proteolitikus enzim O)

24. Gasgangraene clostridia in Hollman and thioglycolate medium

Gázgangréna clostridiumok Holmann és thioglycolat táptalajonA táptalajt megzavarosítják, a fõtt húst emésztik (proteolitikus enzimek), a paraffindugó a

gázképzés miatt felemelkedik.

III. Reactions and methods

1. Elek test

ELEK PRÓBAPatogén, toxint termelõ Corynebacterium diphtheriae törzsek elkülönítésére szolgáló agar-gél

diffúziós precipitáció.

2. Widal's type tube agglutination tests:

(a) Gruber-Widal reakció(b) Weil-Felix reakció(c) Wright reakció(d) Paul-Bunnel reakció

Csõ-agglutináció (kvantitatív agglutináció)Gruber-Widál reakcióban az antigén: S. typhi (hastífusz) Titer:1:200

Weil-Felix reakcióban az antigén: Proteus OX 19 (kiütéses tífusz) Titer: 1:800 Wright reakcióban az antigén: Brucella (Brucellosis) Titer: 1:80

3. Aspecific serological tests for the diagnosis of syphilis: Wasserman reaction, RPR, VDRL

4. Influenzavirus hemagglutination (HA) and haemagglutination inhibition (HAI), and complement fixation (CF) test - microtitre (Takátsy's) plate

Influenza vírus hemagglutináció(HA) Hemagglutináció gátlás (HAG)

Komplement kötési reakció (KKR)

5. Diagnosis of fresh rubella infection (HAI)

6. ELISA test:

• HIV-1 and HIV-2 • hepatitis viruses

7. Verification of HIV-1 infection by Western-blot

8. Phage typing

FágtipizálásSzerológiai és biokémiai módszerekkel tovább nem differenciálható baktériumtörzsek között

megfelelõ, virulens fágokkal további különbségek tehetõk. (Agar lemezre szélesztett baktériumokona megfelelõ fág litikus plakkot hoz létre) Fágtipizálás Szerológiai és biokémiai módszerekkel

tovább nem differenciálható baktériumtörzsek között megfelelõ, virulens fágokkal továbbikülönbségek tehetõk. (Agar lemezre szélesztett baktériumokon a megfelelõ fág litikus plakkot hoz

létre)

9. Blood cultures. Rules and regulations of collecting sample(s) for blood culture bottles

10. Gram staining

1. kristályibolya és Na-oxalát 1:4 keveréke - 2 perc2. Lugol oldat - 1 perc 3. 96%-os alkohollal differenciálás 4. carbol-fuchsinos utófestés - 1 perc 5. öblítés - szárítás (Gram +: sötétlila, Gram -: piros)

11. Ziehl-Neelsen staining

1. fixált kenetre karbol-fuchsin oldat 2. 3x gõzölgésig melegíteni 3. sósavas alkohollal differenciálni 4. utófestés: metilénkék oldat 1-2 perc 5. vízzel lemosni - szárítás Mycobacterium, baktérium spóra kimutatására

12. Antibiotic susceptibility tests with disc diffusion on agar plate with a Gram + and Gram - bacterium

13. Commercial kits for identification (ATB, API systems)

IV. Ready made microscopic preparations

1. With Gram staining

- Staphyloccus sp.

Staphylococcus sp. Gram festéssel Gram + coccusok szõlõfürthöz hasonló elhelyezkedésben

- S. pyogenes

Streptococcus pyogenes - Gram festés Gram + coccusok láncokban

- S. pneumoniae

Streptococcus pneumoniae - Gram festés Gram + coccusok párokban, lándzsa alak

- Neisseria sp.

Neisseria sp - Gram festés Gram - coccusok párokban, bab alak

- E. coli

Escherichia coli - Gram festés Gram - pálca alak

- Haemophilus influenzae

Haemophilus influenzae - Gram festésGram - rövid pálcák vagy coccobacillusok

- Bacillus cereus

Bacillus cereus - Gram festés Gram + pálcák, centrálisan nem deformáló spóra festõdési hiányként látszik

- Gas-gangraene and tetanus spores

Clostridiumok - Gram festésGram + pálcák

C. tetani: kerek, terminálisan deformáló endospóra C. perfringens és egyéb gáz gangréna clostridiumok - ovális, excentrikus v. subterminálisan

deformáló endospóra

2. With methyleneblue staining

- Neisseria gonorrhoeae in pus

Neisseria gonorrheae urethra váladékban metilénkék festés

- Candida albicans from culture

Candida albicans - Metilénkék festés Nagy sarjadzó gomba sejtek

- Trichomonas vaginalis and soor (Candida albicans) positive vaginal smear

Candida albicans - Metilénkék festés Hüvelyváladék Trichomonas vaginalis hüvelyváladékban -

Metilénkék festésNagy metakromáziásan festõdõ flagellata,

sötéten festõdõ maggal

??. Neisser-festéssel: C. diphtheriae

Corynebacterium diphtheriae - Neisser festés Vékony sárgára festõdõ pálcák, végükön lila színû Babes-Ernst szemcsék (volutin szemcsék)

3. Silver impregnation: Leptospira sp.

Leptospira sp - Ezüst impregnáció

4. Ziehl-Neelsen staining: Mycobacterium tuberculosis in sputum

Mycobacterium tuberculosis köpetben - Ziehl Neelsen festés- saválló piros pálcák

- kék coccusok, fehérvérsejtek

5. Thin blood film (Giemsa):

- Plasmodium falciparum

Plasmodium falciparum - Giemsa festés

- Vérkenet Gyûrû alak a vörösvérsejtekben

- Trypanosoma brucei

Trypanosoma brucei - Giemsa festés- vérkenet

A centralis mag és a nagy kinetoplast pirosra festõdik

6. Anorectal cellulose-tape preparation (native): Enterobius vermicularis eggs

Enterobius vermicularis féregpete - Anorectalis cellux készítmény (natív) Az ovalis pete egyik oldala lapított

V. Principles of instrumentation of specimen collection

11. Cotton wool swab

2. Diphtheria (D) tube

3. Laryngeal swab

4. Typhus (Ty) container

5. Sputum container

6. Transpocult media

7. Uricult plus

8. Gastro-duodenal tubes

9. Cellulose tape and glass slides

10. Faeces container

11. Sterile syringes and hypodermic needles

VI. Principles of methods of specimen collection

1. Skin, wound and eye infections

2. Anterior nares, oro-pharynx, larynx

3. Acute and chronic medial otititis, paranasal sinusitis

4. Bronchitis, pneumonia (sputum)

5. Duodenal fluid

6. Mid-stream urine, urine via catheter and bladder puncture

7. Genital infections

8. Cerebrospinal fluid

9. Synovial fluid

10. Biopsy specimen

11. Faeces for the diagnosis of parasitic infections

12. Blood film (malaria, trypanosomiasis)

13. Paired sera for serological tests

VII. Tests to be performed by the students !

1. Wet-mount

2. Preparation and fixation of smears with cotton wool swabs and/or loop from broth and/or plate

3. Stainings

(a) Gram staining (fixed smear)

(b) Ziehl-Neelsen (fixed sputum)

4. Bacterium inoculation

(a) Surface streaking (Plating-out of a microbial culture) for isolation of bacterial colonies

From fluid to solid medium

From solid to solid medium

(b) Preparation of bacterial lawn cultures for susceptibility, as well as phage typing tests

(c) Transfer of bacteria

From solid to fluid medium

From solid to slant and tube agar

From fluid to fluid medium

5. Rapid biochemical reactions

(a) clumping (rabbit plasma)

(b) Oxidase reaction

(c) Catalase reaction

(d) Indole (on U-I medium with Kovacs reagent)

6. Slide agglutination: Escherichia coli from eosine methyleneblue medium