i-2 -mioglobina espectros grupo1 pl2
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I-2. Mioglobina: Espectroscopia de
UV - Visível
Bioquímica Experimental II, PL2, 2011/2012, Grupo 1:
Alexandra Salvado 40267, Ana Lamy 40279, Andreia Sousa 40261 e Telmo Paiva 40243
Professora: Maria Luísa Serralheiro
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Objectivos
DQB-Licenciatura em Bioquímica 2
• Extracção e identificação da Oxi-Mb e da Met-Mb
através das suas propriedades espectrais;
• Estudo da reacção de oxidação-redução de
interconversão.
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Resumo
DQB-Licenciatura em Bioquímica 3
• Usou-se a amostra de mioglobina isolada para traçar os 3 espectros:
Mioglobina “total”
Espectro
Met-mioglobina (oxidada)
Agente oxidante:
Ferricianeto de Potássio
Espectro
Oxi-mioglobina (reduzida)
Agente redutor:
Ditionito de sódio
Espectro
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Grupo Hemo
4 DQB-Licenciatura em Bioquímica
• É um grupo prostético que consiste num
átomo de ferro contido no centro de um
anel heterocíclico designado protoporfirina;
• A protoporfirina é constituída por 4 anéis
pirrólicos que formam um anel tetrapirrólico.
• A região de Soret corresponde a uma banda
onde os grupos porfirínicos têm a absorção
máxima.
Amostra Região de Soret
Met – Mb (Fe3+) 409 nm
Oxi – Mb (Fe2+) 417 nm, 348 (nm) Figura 1 – Estrutura do grupo hemo
http://qnint.sbq.org.br/ Bylkas, S.A. & Anderson, L.A.
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Mioglobina
5 DQB-Licenciatura em Bioquímica
• Proteína globular
• Armazenamento de O2
• Possui um grupo hémico (protoporfirina IX de ferro) ligado através
de um resíduo de histidina
• Apresenta duas formas estáveis e bastante comuns:
Oxi-mioglobina
( Fe2+ – O2 – Mb) Met-mioglobina
( Fe3+ – H2O – Mb)
Figura 2 – Met-mioglobina e oxi-mioglobina
Bylkas, S.A. & Anderson, L.A.
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Procedimento
DQB-Licenciatura em Bioquímica 6
Centrifugação
5 000 RPM
(60 minutos)
Filtração
Espectro Mb
(200 a 800 nm)
Filtração em Gel
Espectro Met-Mb
(200 a 800 nm) Espectro Oxi-Mb
(200 a 800 nm)
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Espectro da Mioglobina
DQB-Licenciatura em Bioquímica 7
Número C.D.O /nm Absorvência Forma
23 348 (Soret) 1,108 Oxi-Mb
24 411 2,427 Oxi e
Met-Mb
25 540 0,449 Oxi-Mb
26 577 0,406 Oxi-Mb
Met-Mb
Oxi-Mb
504
635
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Espectro da Mioglobina (literatura)
DQB-Licenciatura em Bioquímica 8
Bylkas, S.A. & Anderson, L.A.
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Espectro da Oxi-Mb
Fe3+-H2O-Mb + Agente Redutor (Na2S2O4) Fe2+-O2-Mb
Número C.D.O /nm Absorvência
1 348 (Soret) 0,344
2 417 (Soret) 0,404
3 542 0,051
4 580 0,048
1
3
2
4
9 DQB-Licenciatura em Bioquímica
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Espectro da Oxi-Mb (literatura)
Fe3+-H2O-Mb + Agente Redutor (Na2S2O4) Fe2+-O2-Mb
10 DQB-Licenciatura em Bioquímica
Bylkas, S.A. & Anderson, L.A.
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Espectro da Met-Mb (diluição 1:3)
Fe2+-O2-Mb + Agente Oxidante (K6[FeCN6]) Fe3+-H2O-Mb
15 16
Número C.D.O /nm Absorvência
14 401(Soret) 1,467
15 504 0,303
16 637 0,182
11 DQB-Licenciatura em Bioquímica
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Espectro da Met-Mb (concentrada)
Fe2+-O2-Mb + Agente Oxidante (K6[FeCN6]) Fe3+-H2O-Mb
Número C.D.O /nm Absorvência
14 401(Soret) 1,467
15 504 0,303
16 637 0,182
15
16
12 DQB-Licenciatura em Bioquímica
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Espectro da Met-Mb (literatura)
Fe2+-O2-Mb + Agente Oxidante (K6[FeCN6]) Fe3+-H2O-Mb
13 DQB-Licenciatura em Bioquímica
Bylkas, S.A. & Anderson, L.A.
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Conclusões
DQB-Licenciatura em Bioquímica 14
• Espectro Mioglobina “total”
• Espectro Met – Mb
• Espectro Oxi - Mb
Semelhantes à
literatura
• Carne estava fresca
Porquê? No espectro da mioglobina
“total” , os picos mais
visíveis correspondiam à
mioglobina reduzida (Oxi-
Mb)
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Referências
DQB-Licenciatura em Bioquímica 15
• Bylkas, S.A. & Anderson, L.A. (1997) Microburger biochemistry: extraction and
spectral characterization of myoglobin from hamburger. J. Chem. Ed., 74, 426-430.
• Voet, O.H., Voet, J.G. (1995). Biochemistry. 2ª ed. John Wiley & Sons, Nova Iorque.
• http://www.imb-jena.de/ImgLibDoc/ftir/IMAGE_FTIR.html, consultado a 2 de Março
de 2012.
• http://pucrs.campus2.br/~thompson/Roca107.pdfm, consultado a 1 de Março de
2012.
• http://repositorio.ul.pt/bitstream/10451/1299/9/19332_ulfc091258_tm_9_CAPITULO_
1.pdf, consultado a 1 de Março de 2012.
• http://pfbrandt.faculty.noctrl.edu/teaching/CHM205/lab/7_burger.pdf, consultado a 12
de Março de 2012.