hplc

HPLCTe na hromatografijaSTUDENT: Elmir Velispahi

Cilj radaO Upoznavanje sa osnovnim principima

hromatografije (HPLC)O Kao i sa osnovnim djelovima HPLC

HPLC Hromatografija- Elmir Velispahi

7.12.2011

2

HistorijatO Prvu hromatografsku tehniku je prona ao ruski

botani ar Mihail Cvet 1900.O nau nici Archer John Porter Martin i Richard

Laurence Millington Synge su dobili Nobelovu nagradu za hemiju za svoje otkri e particione hromatografije.O Od tada, hromatografija se brzo razvija


7.12.2011

3

HromatografijaO Hromatografija je metoda koja slu i za razdvajanje

sli nih i/ili potpuno razli itih jedinjenja. Razdvajanje je zasnovano na raspodjeli ispitivanih supstanci izme nu dvije faze koje se me nusobno ne mje aju. Jedna faza se ne kre e stacionarna faza dok se druga faza kre e mobilna faza.O Te na hromatografija (LC) je razdvajanje supstanci na

osnovu distribucije izme u vrste stacionarne faze i te ne mobilne fazeHPLC Hromatografija- Elmir Velispahi7.12.2011

4

Te na hromatografijaO Postoje dva tipa LC-a:O Klasi na LC O LC visokih preformansi Klasi na LC koristi velike kolone, du ine i do 50 cm, pakovane poroznim materijalom, a mobilna faza prolazi gravitaciono, pa je stoga mali protok i metoda nije efikasna. HPLC je moderna analiti ka tehnika kod koje se mobilna faza dovodi pomo u pumpe. Uzorak se ubacuje pomo u manualnog ili automatskog injektora a kolone za HPLC su punjene silikatnim ili polimernim materijalom. Tako da je instrument jako osjetljiv.HPLC Hromatografija- Elmir Velispahi7.12.2011

5

Prednosti i nedostatci HPLC-aPREDNOSTI O Laka za kontrolu i precizna.O Zahvaljuju i velikom izboru kolona i detektora mogu se

podesiti uslovi za analizu veoma velikog broja supstanci.O U pore enju sa gasnom hromatografijom smanjen je rizik

od degradacije uzorka jer se ne radi na visokim temperaturama.O Postupak je automatizovan

NEDOSTATCI O Tro e se velike zapremine organskih rastvaraHPLC Hromatografija- Elmir Velispahi7.12.2011

6

Shema HPLC-a


7.12.2011

7

Kolona- Stacionarna fazaO Jako va an dio HPLC-a kao i mjesto svih

hromatografskih de avanja


7.12.2011

8


7.12.2011

9

Retencioni parametriO

Retenciono vrijeme (tr), tj. vrijeme koje protekne od uno enja uzorka u kolonu do pojave maksimuma pika, Redukovano retenciono vrijeme (tr') vreme koje supstanca provede u stacionarnoj fazi, Relativno retenciono vreme (r) odnos retencionog vremena posmatranog pika u odnosu na referentni, Retenciona zapremina (Vr) i Retencioni faktor (k) koji predstavlja mjeru zadr avanja komponente u koloni.Fv brzina protoka mobilne faze t0 retenciono vreme pika mobilne faze.

O

O

O O


7.12.2011

10

Ako je k < 1 supstanca se pona a neretenciono tj. eluira se sa pikom mobilne faze. Ako je k > 10 supstanca se predugo zadr ava u koloni to za posledicu ima predugo trajanje analize. HPLC Hromatografija- Elmir Velispahi7.12.2011

11

HromatogramO Kako zapravo nastaje hromatogram?


7.12.2011

12

Kvalitativna i kvantitativna analizaO Kvalitativna analiza: pore enjem

retencionog vremena sa standardomO Kvantitativna analiza: za tu svrhu slu i nam

hromatogram u kojem je visina pika i povr ina pika direktno srazmjena sa koncentracijom komponente.


7.12.2011

13

Uslovi uspje nog rada sa HPLC-omO Izbor adekvatne metode O Izbor adekvatne stacionarne faze za datu

metodu O Izbor adekvatne mobilne fazeO Izbor na ina eluiranja (gradijentno i

izokratsko)O Adekvatni uslovi hromatografije

( temperatura, pH)HPLC Hromatografija- Elmir Velispahi7.12.2011

14

Uticaj protoka mobilne faze na separaciju


7.12.2011

15

Uticaj temperature na separaciju


7.12.2011

16

Uticaj pH na razdvajanje i redosljed eluiranja


7.12.2011

17

Kraj


7.12.2011

18

hplc

Documents