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Tropismo HIV
Capacidad del virus de HIV de infectar Capacidad del virus de HIV de infectar a una célula blanco usando un coa una célula blanco usando un co--receptor definido asociado al CD4.receptor definido asociado al CD4.receptor definido asociado al CD4.receptor definido asociado al CD4.
CD4
Para entrar a la célula, el HIV usa el receptor CD4
y un co-receptor, CCR5 o CXCR4
T-cell surface
CCR5
CD4
CXCR4
Berger EA, et al. Nature. 1998;391:240.
Co-receptores y tropismo viral
CCR5-trópico (R5)CCR5CCR5
CXCR4-trópico (X4)CXCR4CXCR4
DualDual--trópico trópico (R5X4)
Tropismo viralR5 HIV – Utiliza el receptor CCR5
solamente
X4 HIV – Utiliza el receptor CCX4
solamente
RR55
XX44
D/MD/MDual HIV – Puede utilizar cualquiera de los dos co-receptoresMixed HIV – La poblacion de virus contiene de los tipos de virus
Tropismo de HIV y Progresión de la enfermedad
R5 Mixed/DualFu
nci
ón
In
mu
ne
X4↑
Dual-tropic X4-tropic
Fu
nci
ón
In
mu
ne
Tiempo
Ca
rga
Vira
l
Limite deteccióndel ensayo de tropismo
R5-tropic
Ensayos de Tropismo Ensayos de Tropismo
Ensayos Fenotípicos Ensayos Fenotípicos --TROFILETROFILE
Ensayos Genotípicos Ensayos Genotípicos --GenotropismoGenotropismo
Test de Tropismo: TrofileTM
• Test para determinar la población de Virus de HIV existente en un paciente respecto de las características de sus proteínas de Envoltura que define el receptor utilizado para infectar las células.
5’LTR gaggag polpol
PR RT IN envenv
3’LTR
gp120 gp41
Genoma HIV y región involucrada en la definición de Tropismo
1
FenotipoFenotipo
C1 V1 V2 C2 C3V3 V4 C4V5 C5
6225 7747 87927114 7218GenotipoGenotipo
Ensayo Genotípico de Tropismo
Sangre Sangre �� Plasma Plasma �� HIVHIV--RNA RNA �� RTRT--PCR V3 PCR V3 looploop
Secuencia AutomáticaSecuencia AutomáticaInterpretación de resultadosInterpretación de resultados
V3
7114 7218
Estrategia utilizada
2) One Step RT2) One Step RT--PCR PCR (x triplicado)(x triplicado)
3) 23) 2ndnd PCR PCR (A1 A2 A3)(A1 A2 A3)
1) Extracción HIV RNA 1) Extracción HIV RNA
A1 A1 A2 A3A2 A3
4) Secuencuiación4) Secuencuiación
TGTACAAGACCCAACAACAATACAAGAAAAAGTATACATGTAGGACG
AGGGAGATCAATTTATGCAACAGAAAAAATAATAGGAGATACAAAAC
AAGCACATTGT
TGTACAAGACCCAACAACAATACAAGAAAAAGTATACATGTAGGACG
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AAGCACATTGTTGTACAAGACCCAACAACAATACAAGAAAAAGTATACATGTAGGACG
AGGGAGATCAATTTATGCAACAGAAAAAATAATAGGAGATACAAAAC
AAGCACATTGT
A1A1
A2A2
A3A3