histologie lp 1
DESCRIPTION
histoTRANSCRIPT
-
HISTOLOGIELucrare practic 1
-
HISTOLOGIAtiina care se ocup cu studiul structurii microscopice a celulelor, esuturilor i organelor
Compartimente: Citologia Histologia general: studiul esuturilorHistologia special: studiul organelor: org. tubulo-cavitare, org. parenchimatoase
Legturi: Biologia celular Histopatologia
-
HISTOLOGIARamuri: Histologia de diagnostic Obine continuu date privitoare la structura i funcia unui anumit esut sau organ
Histologia de cercetare Evideniaz i studiaz: - o categorie celular / tisular nedescoperit nc - modul de comportament al celulelor i esuturilor n condiii fiziologice i patologice neexplorate
-
HISTOLOGIA
ESUTURILEStructuri supracelulare alctuite din celule unite ntre ele printr-o substan intercelular Celulele ndeplinesc n organism aceeai funcie sau acelai grup de funcii.4 categorii de esuturi: epitelial, conjunctiv, muscular, nervosesuturile alctuiesc ORGANE
-
Metode de studiere a celulelor i esuturilor
Metode utilizate n practica clinic
Metode utilizate n cercetare
-
I. Metode utilizate n practica clinic
Coloraia uzual Hematoxilin-eozinColoraiile specialeExamenul microscopic extemporaneuColoraiile imunohistochimice
-
Preparatul microscopicTotalitatea obiectelor pregtite pentru a fi examinate la aparate optice mritoare n vederea studierii structurii lor.Componentele: ObiectulSuportul: lamaLamela Sunt de 2 tipuri: extemporanee i permanente
-
Preparatul microscopic I. RecoltareaBiopsie NecropsieDe la animale
-
Preparatul microscopic RecoltareaExcizia Incizia Rezecia Puncia biopsie
-
Preparatul microscopicII. FixareaPiesa e introdus n fixatori care previn degradarea enzimatic (autoliza) i pstreaz intact structura tridimensional a esutului.
Formaldehida
Fixatorii acioneaz asupra proteinelor din esuturi prin 3 mecanisme: denaturare, coagulare i precipitare
-
Preparatul microscopicFixarea Aspectul unui fragment de esut dup fixare
-
Preparatul microscopicIII. Splareandeprteaz excesul de fixatorSe face cu ap sau alcool (deshidratarea)
Decalcificarea Preparatele de os sau dinteSe face cu acizi i rini schimbtoare de ioni sau prin electroliz
-
Preparatul microscopicIV. Includerea n parafinPiesa e mbibat i nglobat ntr-o substan solidificabil, denumit mas de includere.Piesa devine rigid i poate fi secionat n felii de ordinul m (5m).
Aceast secionare este necesar pentru a permite luminii s treac prin preparatul microscopic i apoi s ajung la ochiul obsevatorului, care va examina imaginea microscopic a esutului
-
Preparatul microscopicIncluderea n parafinEtape: Deshidratarea- introducerea n bi de alcool de concentraii crescnde alcoolul va nlocui apa din esut;Clarificarea cu solveni organici (xilen, toluen) miscibili att n alcool ct i n parafin, vor scoate alcoolul din esutmbibarea cu parafin: parafina topit intr n celule esutul va fi complet inclus n parafina care se va ntri i va forma un bloc solid ce conine esutul;Includerea propriu-zis
-
Preparatul microscopicIncluderea n parafin
esuturi incluse n blocuri de parafin
-
Preparatul microscopicV. Secionarea
-
Preparatul microscopicSecionarea
-
Preparatul microscopicVI. Colorarea Evideniaz elementele structuraleColoranii histologici se fixeaz pe anumite componente structurale Colorani artificiali: derivai din hidrocarburi aromatice i, n funcie de natura cromoforului, pot fi: Bazici: albastrul de metilen, albastrul de toluidin, fuxina bazicAcizi: eozina, fuxina acid, eritrozina, orange GNeutri: eozinatul de azur de metilenIndifereni: Sudan III, Scharlach RothColorani naturali: carminul, hematoxilina, orceina
-
Preparatul microscopicColorarea BazofilieAcidofilieNeutrofilie Termeni care se refer la afinitatea tinctorial (de coloraie) a diferitelor elemente fa de baze, acizi sau substane neutre.
-
Preparatul microscopicColorarea Clasificarea coloraiilorDup electivitate: difuze i electiveDup modul de aciune: directe i indirecteDup procedeul de executare: progresive i regresiveDup numrul de colorani folosii: simple i combinate: succesive sau simultaneColoraia ortocromaticColoraia metacromatic
-
Preparatul microscopicColoraia HEColoraie uzual (95% din lame); e o metod direct, progresiv, combinat, succesiv, ortocromatic.
Hematoxilina-colorant bazic- coloreaz n ALBASTRU structurile bazofile: acizii nucleici- ADN-nucleu; ARN- ribozomiEozina colorant acid- coloreaz n ROU structurile acidofile sau eozinofile: proteinele n citoplasm i n matricea extracelular
Structurile cu coninut ridicat de substane lipidice (celule adipoase, mielina) rmn optic vide;
-
Preparatul microscopicColoraia HECelulele: funcia biochimic i distribuia elementelor componente.
Nucleii Celulele tinere sau/i active metabolic, prezint nucleii eucromi sau hipocromi (eucromatina este palid). Celulele adulte sau mbtrnite, cu activitate metabolic redus, au nuclei hipercromi (heterocromatina inactiv se coloreaz intens bazofil)
-
Preparatul microscopicColoraia HECitoplasmaCelulele care sintetizeaz proteine conin numeroi ribozomi liberi i RER bine dezvoltat i prezint un aspect bazofil al citoplasmei (H coloreaz ARN din ribozomi n albastru)Celulele implicate n transportul de ioni conin numeroase mitocondrii i prezint un aspect eozinofil al citoplasmei (E coloreaz proteinele cationice: citocromii n rou). Fibrele musculare au aspect intens eozinofil datorit fixrii eozinei pe proteinele contractile din miofibrile.
-
Preparatul microscopicColoraia HE
-
Preparatul microscopicColoraia HE
-
Preparatul microscopicColoraii specialeTricrom Masson, tricrom Mallory - pune n eviden es. conjunctivFibrele de colagen se coloreaz n verde, respectiv albastru
-
Preparatul microscopicColoraii specialeRezorcin Fuxin Weigert: fibrele elastice sunt colorate n violet nchisOrcein: fibrele elastice sunt colorate n maro nchisRFWOrceina
-
Preparatul microscopicColoraii specialeImpregnarea argentic: pune n eviden fibrele dereticulin, neurofibrilele din neuroni (maro/negru) i cimentul intercelular n epiteliiFicat-impregnare argenticesut nervos- impregnare argentic
-
Preparatul microscopicColoraii specialeSudan III, Sudan negru, Scharlach Roth- folosite pentru a pune n eviden lipidele n esuturi, pe care le coloreaz n galben, negru i respectiv rou.!!! Fragmentele de esut nu sunt preparate cu solveni organici, pentru a nu dizolva subst. lipidice.
-
Preparatul microscopicColoraii specialeColoraia PAS (Periodic Acid Schiff)Coloreaz carbohidraii n roz intens. Evideniaz membrana bazala epiteliilor.
-
Preparatul microscopicColoraii specialeAcidul osmic- coloreaz n brun/negru substanele lipidiceEvideniaz teaca de mielin
-
Preparatul microscopicColoraii specialeHematoxilina Feric Heidenheim- coloreaz n negru miofibrilele i evideniaz aspectul striat al fibrelor musculare.
-
Preparatul microscopicColoraii specialeesutul osos compact lefuit, montat n balsam de Canada !!! Preparat necolorat
-
Preparatul microscopic VII. Montarea
VIII. Etichetarea
-
Preparatul microscopicExamenul extemporaneu (la ghea)Permite un diagnostic rapid (15-20 min), care orienteaz decizia terapeutic chirurgicalFrecvent utilizat n chirurgia oncologicNu are precizia examenului histologic clasic
-
Preparatul microscopic-examenul extemporaneu-
-
Imunohistochimia-principiu-Utilizeaz principiul antigen-anticorp (Ag-Ac) pentru a identifica prezena/absena unor proteine specifice la nivelul esuturilor.
antigen cautatanticorp primar (invizibil)anticorp secundar (brun)
-
ImunohistochimiaImunoperoxidaz Imunofluorescen
-
II. Metode utilizate n cercetareSEM - scanning electron microscopy
Imunoperoxidaz: Glanda tiroid: evidenierea calcitoninei n celulele parafoliculareImunofluorescen: esut epitelial infecie cu HPV: cu roz e marcat ADN-ul HPV n celulele epiteliale, nucleii celulelor apar albatri, citokeratina din celule e evideniat n verde. *