histología: técnicas histológicas
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Dra. Zulamita Medina de Aguilar
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Conjunto de procedimientos y reglas a que son sometidos los tejidos para poder ser
estudiados microscópicamente.
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Métodos de Examen HistológicoInmediato (En vivo)Sin reactivos Modificadores ( al estado
fresco). Coloración Vital (Intravital y Supravital)
Uso: Animales pequeños transparentes,
membranas transparentes, órganos opacos
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Mediato (post morten) Uso de fijadores que detienen los procesos de putrefacción y conservan la estructura histológica que presentaban en vida.
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Líquidos Indiferentes
Constituyen un medio adecuado para conservar la vida de ciertos elementos de los tejidos, durante un periodo
determinado de tiempo.
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Naturales:PlasmaSuero SanguíneoLíquido Amniótico, líquido Ascítico y Humor
Acuoso
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Artificiales:RingerLockerTyrodeLíquidos que contienen Cloruro de Sodio,
Potasio y Calcio
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Procedimientos para la Obtención de la Muestra
CadáveresOrganismos Vivos (Biopsias)Animales Pequeños:
Sangría en BlancoTraumatismo Craneal
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Fijación
Método histológico de preservación destinado a obtener preparados duraderos que conservan la estructura morfológica y química que presentan las células y tejidos
al estado vivo y que permite realizar posteriormente el resto de procedimientos
histológicos.
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Características de un buen fijado
Actuar con RapidezAlto poder de Penetración para evitar la
autolisis.Conservar detalles estructurales que poseía
en vivoPermitir el uso de resto de Técnicas
HistológicasNo extraer SustanciaNo crear ArtificiosNo retraer excesivamente los tejidos
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Teorías de la Fijación
Coagulando las proteínas sin combinarse con ellos (Alcohol, Acido Pícrico y Yodo)
Formando combinaciones químicas con las sustancias orgánicas forma nuevas sustancias estables
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Reducción y formación de precipitados.
Oxidación de los tejidos.
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Fijadores Químicos
Simples (1 sola sustancia)Formol al 10% (fijador universal)Alcohol Etílico Absoluto al 95%
(usado en estudios histoquímicos)Alcohol Metílico (usados para
frotis)Acido Osmico ( M.E.)Bicloruro de MercurioBicromato de Potasio al 3 a 5%
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Fijadores QuímicosCompuestos:Líquido de Flemming
(Cromo-Osmio.Ac. Acético)Líquido de Zenker
(Bicromato sublimado- Ac. Acético).
Líquido de Helly( Zenker-formol).
Líquido de Bouin (Formol-Ac. Acético).
Líquido de Dubosca- Brasil
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Fijadores FísicosDesecación (extendidos o frotis).Calor seco (Bacteriología en
frotis desecado)Calor húmedoFríoCongelación y Desecación
Estudios histoquímicos).
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Elección de un Buen FijadorEstudios Citológicos: Acido Osmico, Liquido de Flemming (Fijación
Nuclear), Flemming sin Acido Acético, Zenker -Formol (Para fijar citoplasma)
Estudios Histoquímicos: Alcohol absoluto a 96º, Agentes Físicos, Calor,
Frió y Desecación, Incineración (Cenizas)Estudios Generales o Topográficos:Líquido de Zenker, de Helly , formol al 10%.
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Relación entre el Tamaño de la Muestra y el Volumen del Fijador
Tamaño de la Muestra: conviene fijar piezas pequeñas que no excedan de 0,5-1 cm de espesor, al fijar con acido osmico el espesor debe ser de 1-3mm.
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Relación entre el Tamaño de la Muestra y el Volumen del Fijador
Tiempo de Fijación: varia en relación al poder de penetración del fijador, del volumen de la pieza y de la temperatura de fijación, de 6-24 horas para el Flemming, de 12-24 horas para el Zenker y el Helly, Duboscq –Brasil y el formol al 10% de 3-4 horas.
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Relación entre el Tamaño de la Muestra y el Volumen del Fijador
Volumen de Fijador: la cantidad de fijador a usar debe ser 40 a 50 veces mayor que el de la pieza o muestra a fijar. Estas no deben apoyarse sobre el fondo del frasco que la contiene.
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Relación entre el Tamaño de la Muestra y el Volumen del Fijador
Lavado y Conservación de la Muestra: cumplido el tiempo de fijación se procede al lavado de las
mismas para eliminar los restos del fijador. Las piezas fijadas con líquidos a base de acido osmico y de bicarbonato(Flemming,Zenker y Helly) deberán
ser avadas con agua corriente, así como también las fijadas con formol al 10%; en cambio las fijadas con
Bouin, Duboscq-Brasil, no deben ser sometidas a lavado alguno.
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Técnicas Histológicas
Deshidratación: Extracción del agua de los espacios intercelulares de la muestra.
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Proceso:
Alcoholes 30º, 50º, 70º, 80º, 90º y dos baños 100º
Pureza del alcohol (xilol no blanquecino).Porque se realiza la Deshidratación ( La
inclusión se realiza con sustancias no miscibles con el agua que traen los tejidos).
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Aclaración
Proceso mediante el cual se sumerge la muestra deshidratada en dos baños de xilol, benzol o toluol (impregnación por un disolvente de parafina)
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Inclusión: La pieza deshidratada y aclarada, se sumerge en 2 baños de parafina (1 a 3 horas) en una estufa a no más de 56°C.
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Parafina: Blandas Duras
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Formación del Bloque
Cajas MetálicasBarras de LeuckatSimples Cajas de Papel
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MicrotomosTubo Cilíndrico Hueco, con Pinza en su
InteriorMicrotomo de DeslizamientoMicrotomo de MinotMicrotomo de CongelaciónUltramicrotomo
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Colorante: Sustancia que puede transferir su color a otra.
Coloración
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ClasificaciónNaturales Animales (Carmín) Vegetales (Hematoxilina, Azafrán)Artificiales
Ácidos (Eosina o Eosinato Sódico)Básico (Azul de Metileno)Neutros (Eosinato de Azul de Mitileno)Indiferentes (Rojo Escarlata)
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Teorías de la ColoraciónQuímica
Física
Teoría Físico-Química
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Coloración OrtocromáticaColoración MetacromáticaSustancia CromotropaColoración DirectaColoración IndirectaColoración ProgresivaColoración Regresiva
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Coloración PanópticaSustancia MordienteColoración PancrómicaColoración en MasaHematoxilina: Nuclear, Indirecta y
ProgresivaEosina: Citoplasmática, Directa y
Regresiva
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Desparafinación antes de la ColoraciónProceso: Pasar el corte por dos baños de xilol.Porque se realizaExtensión y Adhesión del corte al Porta
ObjetoHidratación del corteAlcoholes de 100º, 90º, 80º, 70ºPorque se realizaDeshidratación del corte durante el proceso
de coloraciónAlcoholes, 70º, 80º, 90º, , 100º Porque se realiza
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AclaraciónMontaje
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VirajeDiferenciación
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