hematologÍa aspectos microscópicos

FUNDACION BARCELO, FACULTAD DE MEDICINA

HEMATOLOGÍA

Aspectos Microscópicos


HEMATOLOGÍA

• La exploración de los elementos presentes en la sangre perisférica, sus precursores y algunos de sus productos constituyen la hematología

• La sangre esta formada por un líquido de composición compleja y variable, que es el plasma que contiene eritrocitos, leucocitos y plaquetas en suspensión.

• El plasma sanguineo y las células de la sangre forman el volúmen sanguíneo o la volemia que circula por los vasos sanguineos


HEMOGRAMA

• El Hemograma es el exámen clínico de laboratorio, determinado por el análisis del Hematocrito (Hto), Hemoglobina (Hb), Recuento de G. Blancos o leucocitos, Fórmula Leucocitaria y sus observaciones morfológicas.

• El profesional médico competente en el estudio del diagnóstico y tratamiento en patologías hematológicas y de hemostasia es el Hematólogo.


HEMATOPOYESIS


Visión Microscópica de la Sangre


HEMATOLOGÍA: Punción Venosa

• La punción para obtener una muestra representativa de sangre para su estudio es la venopuntura.

• Para evitar la hemólisis y el líquido histico de arrastre, no se deberá emplear la muestra sin sacar la aguja y se deberá desechar la primer gota antes de hacer el frotis.

• El EDTA como anticoagulante (concentración de 1 a 2 mgr/ ml de sangre), es aceptable para para el frotis o extensiones sanguíneas en porta hasta 3 horas después de la extracción y hasta 24 horas en heladera.

• El citrato trisódico al 3,8 % y de dilución aprox. en 1/9 con sangre, es satisfactorio para coagulación.


Muestra Sanguínea por Punción de Dedo

1. Limpiar la yema del dedo con una gota de alcohol a 70 grados y hacer una punción para conseguir una gota de sangre.

2. Depositar la gota de sangre, en un lado y en el centro de un porta bien limpio.

3. Seguidamente, con el empleo de un porta de borde esmerilado se hace un frotis o extensión de sangre. El porta con el que se hace la extensión debe deslizarse bien colocado y lo más perfectamente aplicado en su borde contra el otro porta sobre el que se hace la extensión. Sólo debe pasarse una vez, de forma continua e ininterrumpida.


Realización de las extensiones de sangre periférica

La extensión sanguínea es de gran importancia en algunas enfermedades hematológicas, ya que su diagnóstico puede realizarse o sospecharse sólo con observar la morfología de las células de la sangre.

Uno de los métodos más empleados para la realización del frotis sanguíneo es el método de los dos portaobjetos. Consiste en la extensión de una gota de sangre sobre un portaobjetos mediante otro portaobjetos. La técnica es la siguiente:

1. Depositar una pequeña gota de sangre en el extremo de un portaobjetos.

2. Con el borde de otro portaobjetos a 45 grados, tocar la gota, dejar que la sangre se distribuya por capilaridad y después deslizar suavemente un portaobjetos sobre el otro en sentido longitudinal hasta que la gota quede bien extendida sobre la superficie del primer portaobjetos.

3. Dejar secar el frotis.


FROTIS SANGUÍNEO

Cuando la extensión se realiza por este procedimiento, el frotis presenta tres zonas diferenciadas, en las que la morfología eritrocitaria puede variar y la distribución de leucocitos puede ser diferente.

La zona en que inicialmente se depositó la gota (“cabeza”) es excesivamente gruesa y no puede ser valorada adecuadamente. A continuación se extiende el “cuerpo” de la extensión, que corresponde a la región intermedia del frotis y en ella existe un reparto equilibrado de las células; es la zona ideal para la observación microscópica. Por último, al final de la extensión, se encuentran las “barbas” o la “cola”, es una zona fina dónde las células adoptan una disposición de cordones


FROTIS SANGUÍNEO

LECTURA en GUARDA GRIEGA


Técnica de Extensión o Frotis Sanguíneo


Técnica de Extensión o Frotis Sanguíneo

- Es conveniente realizar dos o tres extensiones, con el fin de seleccionar para la tinción la mejor lograda.

- Las extensiones o frotis deben secarse al aire lo más rápidamente posible. La desecación se facilita con movimiento en forma de abanico, nunca soplando o por calor. La rápida desecación evita la deformación de los glóbulos sanguíneos.


Técnica de Tinción para Frotis

1. Depositar el porta con la extensión de sangre encima del soporte de tinciones y éste sobre la cubeta.

2. Cubrir la extensión con metanol y esperar que el alcohol se evapore si se cubrió con gotas. En caso de cubrir todo el extendido, no dejar más de 3 minutos y lavar con agua. De esta forma se consigue el fijado.

3. Cubrir toda la extensión con unas gotas de Giemsa puro o con una dilución de giemsa probada, (1:8 ó 1:10), evitar la desecación y dejar actuar el colorante unos cinco minutos si es giemsa pura o más minutos según la dilución que se ha elegido. (se prueba el punto exacto)

4. Lavar la preparación, hasta que arrastre todo el colorante.

5. Tomando el porta por los cantos, se seca aireando el porta, o bien al calor muy lento de la llama del mechero.


Frotis: Observación Microscópica

1. Con débil aumento ( objetivo de 10x ó 20x) explorar la preparación para localizar la zona en la que el frotis es más perfecto. Los lugares más aptos son aquellos en los que la extensión de los glóbulos se ha conseguido en una sola capa, están bien teñidos y no se han producido precipitados de los colorantes. Cuando se observe una zona apta, pasar a aumentos más fuertes: 40x para conteo y 100x para morfología patológica o diferenciar atípicos.

2. En el campo del microscopio, se verán con un dominio predominante los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos , teñidos en color rojo. No tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes. Los glóbulos blancos o leucocitos de identifican fácilmente por la presencia de núcleo.


Hematíes o Eritrocitos• Los eritrocitos son las células sanguíneas que

contienen en su interior la hemoglobina. Esta molécula es una proteína que contiene átomos de hierro que le otorgan el color rojo a la sangre, de allí su nombre: eritro (rojo) citos (células).

• Dado la forma bicóncava del eritrocito se observa en la foto un disminución del color en el centro. Cuando esta dismunución no se observa puede deberse a una alteración de la forma del glóbulo.

• El número promedio de glóbulos rojos en el hombre es de 5.000.000 por mm3 de sangre. La cifra media de glóbulos blancos es de 7.000 a 8.000 por mm3. Hay por tanto un glóbulo blanco por cada 600 ó 700 glóbulos rojos.


Frotis: Hematíes o Eritrocitos


Valores e Índices de la Serie Roja

En la evaluación de esta serie hematológica se considera:

1. Hematocrito (Hto): porcentaje de la sangre que corresponde a los glóbulos rojos.

2. Concentración de Hemoglobina (Hb)

3. Volumen Corpuscular Medio (MCV): tamaño globular promedio.

4. Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media (MCHC): conc. promedio de Hb del total de eritrocitos.

5. Hemoglobina Corpuscular Media (MCH): concentración de hemoglobina promedio en cada eritrocito

6. Distribución por Tamaño de los Glóbulos Rojos (RDW): es la dispersión en los tamaños de los eritrocitos.


Valores e Índices Hematométricos Normales

VCM: 82 - 95 . VCM < 85 microcitósis y >95 macrocitósis - (Hto/ n. hematíes)

HCM: 26 - 34 pgr./ célula. HCM < 26 hipocromía y < 34 hipercrómico

(Hto/ número de hematíes)

CHCM: 31 - 37 g/ dl . <31 hipocromía y > 37 hipercromía ( Hb/ Hto.)

RDW: 11.5 - 14.5 es la distribución o dispersión de los hematíes.

Sexo Número Eritrocitos

Hematocrito Hemoglobina

Hombres 4.2-5.4 x 106/mm3 42 - 52 % 14 - 17 g/dl

Mujeres 3.6-5.0 x 106/mm3 36 - 48 % 12 - 16 g/dl


ANEMIA: principal patología de G.R.

• Los parámetros normales para los glóbulos rojos son; tamaño normocítico de 7- 8 µm, color: normocrómico (coloración normal), forma: disco bicóncavo y ser anucleado.

• El mejor parámetro para evaluar si la cantidad de eritrocitos es adecuada para el organismo, es la hemoglobina que lleva oxígeno a la perisferia del organismo.

• La disminución de Hb también origina anemia, cuya clasificación será discutida junto con la disminución del número eritrocitario y Hto.


Función de los Índices Hematométricos

Los índices de los glóbulos rojos permiten diferenciar las anemias:

Según tamaño:

Microcíticas (MCV disminuido), Normocíticas (MCV normal) Macrocíticas (MCV aumentado).

Según concentración de hemoglobina: Hipocrómica (MCH o MCHC disminuido) Normocrómica (MCH o MCHC normal).

Hipercromía (MCH o MCHC aumentado)


ANEMIAS


ANEMIAS y RETICULOCITOS

Para evaluar si la capacidad regenerativa de los eritrocitos por parte de la médula ósea es adecuada, existe un examen llamado recuento de reticulocitos, (V. N. 0 - 2 %) que permite distinguir anemias causadas por falla medular.

- Para corregir anemias se calcula el Índice Reticulocitario (IR):

Reticulocitos corregidos = % reticulocitos x (Hto del paciente/ 45).

- Son hiporegenerativas con Indice Reticulocitario (IR) menor a 2. Las originadas por destrucción, se llaman regenerativas y tienen un IR mayor de 3.


Tinción para Reticulocitos

El azul brillante de cresilo tiñe el tramado nuclear que corresponde a cadenas de ARN del hematíe.


G. Rojos: Anormalidades

• Anisocitosis: amplia variación de tamaño globular, ( hay pequeños y grandes: anemia ferropénica, anemia hemolítica, Anisocromía: variedad de color globular.

• Microcitosis: glóbulos pequeños ( ANEMIA MICROCÍTICA). • Macrocitosis: glóbulos grandes ( ANEMIA MACROCÍTICA). • Hipocromía: color globular pálido ( ANEMIA HIPOCRÓMICA.

• Poiquilocitos: variación anormal de la forma. Son anemias más severas ( anemias ferropénicas, megaloblástica, síndrome mieloproliferativo, hemólisis, etc).

• Esferocitos: células esféricas sin centro pálido, frecuentemente pequeños (microesferocitosis): esferocitosis hereditaria, anemia hemolítica autoinmune Coombs (+) y post tranfusional.


Tipos de anemia: Normocítica Microcítica Macrocítica

Clasificación: Hemorragia Deficiencia de hierro Def. Ac. Fólico y B12 Enfermedad crónoica Falciforme Talasemia

AnemiaAnemia


Microcitos en Anemia Ferropénica


Macrocitos en Anemia Megaloblástica


Hipocromía, Anisocitosis y Reticulocitos


Patologías con Poiquilocitosis

• OVALOCITOS: células ovaladas: esferocitosis hereditaria, deficiencia de fierro.

• TARGET CELLS, LEPTOCITOS o Células en DIANA: glóbulos con centro y periferia oscuros y anillo claro entremedio (como disco de "tiro al blanco"): Insuficiencia hepática, talasemias.

• ESQUISTOCITOSIS: glóbulos contraídos irregularmente o fragmentados: uremia, anemia hemolítica, púrpura trombocitopénico trombótico.

• ACANTOSITOS: glóbulos pequeños con evaginaciones espinosas de membrana: abetalipoproteinemia.

• LAGRIMA: síndrome mieloproliferativo, talasemia. • Eritrocitos NUCLEADOS: glóbulos nucleados: anemias hemolíticas,

leucemias, síndrome mieloproliferativo, policitemia vera, mieloma múltiple, cualquier anemia muy severa.

• Cuerpos de HOWELL - JOLLY: cuerpos oscuros dentro de los glóbulos: esplenectomizados, anemia perniciosa, talasemia.

• ROULEAUX: eritrocitos agrupados uno sobre otro: mieloma múltiple, hipergammaglobulinemia, embarazo.


G.R. : Otras Anormalidades


Anormalidad: Hematíes Nucleados


Glóbulos Blancos o Leucocitos

La evaluación de esta serie hematológica considera el conteo total de los

leucocitos (WBC), y diferencial en neutrófilos, basófilos, eosinófilos,

monocitos, linfocitos, así como también el conteo diferencial de las series

hematopoyéticas de los neutrófilos y otros de condición inmadura o atípicas


Valores Normales de Rto. de Blancos

- Adultos : 4.000 - 11.000 / mm3

- Recién nacidos: 10.000 - 25.000 / mm3

- Niños de 1 año: 6.000 - 18.000 / mm3

- Niños de 4 a 7 años: 6.000 - 15.000 / mm3

- Niños de 8 a 12 años: 4.500- 13.000 / mm3


Recuento de Blancos

• Muestra: sangre anticoagulada con EDTA• Liquido de Dilución: solución 2% de Acético

Glacial. Líquido de Turk u otros.• Dilución; 1 en 20 (puede ser 1:10).

Ejemplo: 20ul. en 0,38 ml. • Secar bien la punta de la micropipeta antes de

descargar la sangre en el liquido de dilución.• Usar objetivo y ocular de 10x• Diafragma semicerrado y condensador arriba• Contar en los 4 ó 2 cuadrantes grandes


Cámara de Recuento - NEUBAUER


Cámara de Recuento - NEUBAUER

Los puentes exteriores se humedecen con agua destilada y luego se coloca el cubreobjeto a suave presión desde delante sobre la cámara de conteo.

¡Atención: Peligro de rotura del cubreobjeto!

La formación de líneas de interferencia (anillos de Newton) entre los puentes exteriores y el cubreobjeto indica que el

cubreobjeto ha sido correctamente colocado.


Técnica de conteo Para realizar el recuento se leen todos los blancos de los cuadrantes grandes. Si

se leen en los 4 cuadrantes grandes, el resultado se multiplica por 50. Si se lee solo los 2 cuadrantes que estan en diagonal, se multiplica el resultado por 100. El valor obtenido es por mm3. Ej: (25+28+29+27) x 50 = 5450 por mm3


Técnica de conteo Para que las células, que están en o cerca de las líneas de limitación, no

se cuenten dos veces o se sobrepasen en el conteo, hay que atenerse a determinadas reglas. Se cuentan todas las células dentro de una zona de medición definida.

También se cuentan las células (marcadas en negro), que se apoyan o

tocan en las 2 caras (I), p.ej. en la línea de medida izquierda y superior.


Valores Normales – Serie Blanca

• Número total de Leucocitos • 5.000 — 11.000 mm3

• Neutrófilos • 50 - 65 %

• Segmentados • 97 %

• Cayados • 1-2 x mm3 (0 - 3%)

• Juveniles • 0 x mm3

• Mielocitos • 0 x mm3

• Mieloblastos • 0 x mm3

• Basófilos • 0 - 1 %

• Eosinófilos • 1 - 3 %

• Monocitos • 2 - 8 %

• Linfocitos • 25 - 40 %


Anormalidades de la Serie Blanca

• La medición del número total de los leucocitos, (WBC), sirve para evaluar la severidad de la enfermedad.

• El análisis diferencial puede ayudar a precisar el diagnóstico del paciente, asociado a la clínica que presente. Un aumento de los WBC por sobre 10.000, se llama leucocitosis, que generalmente es causada por el aumento de una serie celular. Es raro que aumenten todas las series, ( ej. Hemoconcentración). Generalmente se produce en infecciones agudas, donde el número de los leucocitos depende de la gravedad de la infección, resistencia del paciente, edad, eficiencia y reserva de la médula ósea.

• La disminución de los WBC, se llama leucopenia y ocurre como consecuencia de infecciones virales, fiebre tifoidea, depresión medular por causas varias, etc.


NEUTRÓFILO

• Los neutrófilos son los leucocitos más importantes y numerosos, (9-14 micras), que forman la primera defensa en contra de una invasión microbiológica. Neutrofilia es el aumento del número absoluto de neutrófilos a más de 8000/mm3 o más del 70% de los leucocitos, en respuesta a una infección o a células tumorales. Neutropenia es la disminución de estas células en cantidades menores a 1800/mm3 o menores del 40% de los leucocitos.

• Según la forma de su núcleo se los puede clasificar en neutrófilos en banda o cayados y en neutrófilos segmentados. Presentan divisiones de sus núcleos en lóbulos en un número que va de 3 a 5. Si es mayor el número de divisiones nucleares se habla de neutrófilos hipersegmentados.

• La denominada desviación a la izquierda es la aparición en el torrente circulatorio de un gran porcentaje de células inmaduras.


NEUTRÓFILO. Aumento: 20X


Borde Lateral. Aumento: 20X


Neutrófilos Normales – 40x

Leucocitos normalesReferencias:1-


NEUTRÓFILO. Aumento: 100X


Neutrófilos en Banda o Cayado. 10x


Neutrófilo en Banda o Cayado


LINFOCÍTOS

Los linfocitos son los leucocitos que migran más tardíamente a las zonas de inflamación. (6-10 micras).

Son células esféricas o ligeramente ovoides con un diámetro de 8 a 12 micrones. El núcleo (azul oscuro) ocupa el 90% de la célula. El citoplasma es muy delgado y se tiñe de color azul claro formando un anillo alrededor del núcleo. El linfocito bajo ciertos estímulos químicos endógenos puede dividirse y crear muchas células hijas para defender al cuerpo liberando anticuerpos.

Linfocitosis se llama a cantidades mayores de 4000 linfocitos/mm3 en adultos.

Se diferencian en los lugares de maduración: L.”B” si lo hacen en la médula ósea, y L.”T” si lo hacen en el timo.

Los linfocitos B originan los anticuerpos específicos, y los linfocitos T actúan en la inmunidad celular.


Sangre Normal en zona densa. Linfocitos y Neutrófilos. Aumento: 20X


Linfocito chico en 40x


Linfocito chico y un neutrófilo en zona densa del frotis


Linfocito grandes en 40x


Linfocito chico en 100x


Linfocito mediano y chico en 100x


Linfocito grande en 100x


EOSINÓFILO• Los eosinófilos son leucocitos que se activan en forma

tardía en una inflamación. Responden principalmente a enfermedades alérgicas y por parásitos, pero también se presentan en otras enfermedades como las endócrinas, linfomas y otros. Tamaño: 10-15 micras.

• Eosinofilia es el aumento de los eosinófilos circulantes (mayor a 5% leucocitos o 500/mm3). Eosinopenia (disminución de los eosinófilos circulantes bajo 50/mm3) es causada generalmente por un aumento de la producción de corticoides que acompaña la mayoría de las condiciones de stress del organismo

• Los Eosinófilos tienen actividad fagocítica, es decir que "se comen" a los agentes extraños al organismo. Sus gránulos tienen sustancias para degradar aquello que incorporan. Tienen un papel muy importante en las parasitosis donde con sus gránulos degradan las larvas para que puedan ser ingeridas por los neutrófilos y los macrófagos. El eosinófilo regula las reacciones alérgicas.


EOSINÓFILO a 100x


Eosinófilo machacado. 100X


BASÓFILOS• Los basófilos son un pequeño porcentaje del

total del conteo de los leucocitos. (8-12 micras). • Basofilia (conteo aumentado mayor de 100/mm3)

se asocia comúnmente a leucemia granulocítica, metaplasia mieloide, linfoma de Hodgkin. Menos frecuentemente se asocia a inflamación, alergia y otras patologías

• Los Basófilos poseen gránulos de heparina e histamina. Estas sustancias son mediadores químicos que modulan la inflamación. Tienen función en los estados alérgicos en la hipersensibilidad retardada. La liberación masiva del contenido de sus gránulos puede causar un shock anafiláctico que puede llegar hasta la muerte si no es controlado.


BASÓFILOS a 100x


Basófilo maduro. Sangre normal - 100X


Basófilo machacado. Sangre normal - 100X


Sangre Normal: Un basófilo y 3 eosinófilos Aumento: 100X


MONOCITOS• Los monocitos junto con los linfocitos son los

leucocitos agranulados o agranulocitos, que forman la segunda línea de defensa del organismo. Son los blancos más grandes: 12-20 micras.

• Monocitosis hay un aumento celular mayor de 500/mm3, donde las causas más frecuentes son infecciones bacterianas, TBC, endocarditis subaguda y sífilis

• Los Monocitos son células fagocíticas con gran capacidad bactericida. Ante estímulos de sustancias químicas siguen a los neutrófilos en la reacción inflamatoria. Por la fagocitosis aumentan de tamaño y pueden fijarse a los tejidos del baza, hígado y pulmón, dando lugar a los macrófagos tisulares que forman el sistema retículo endotelial encargado de remover el material extraño que circula en la sangre.


Sangre Normal: 1 Monoc. y 1 Linfoc. Aum. 40 x


Monocito con núcleo doblado y vacuola. Aumento 100 x


Sangre Normal: Monocito desgranulado. Aumento 100 x. Zona densa


Sangre Normal. Aumento 100 x. Zona densaUn linfocito pequeño, un monocito y un Neutrófilo


Sangre Normal.1 Ns, 1 Nc y 1L. Aumento: 100X


Linfocitos Atípicos

Estos linfocitos atípicos poseen un citoplasma mayor y un núcleo mas laxo que los normales. Aparecen en enfermedades virales


Neutrófilos Hipersegmentados

Los núcleos de los neutrófilos se encuentran divididos en un número de lóbulos mayor que lo normal.


Plaquetas: Muestra de Sangre con EDTA

El número medio normal de plaquetas en un campo apropiado se extiende a partir del 8 a 15. En muestras con EDTA, se distribuyen, se redondean generalmente para arriba y pueden ser levemente hinchadas y/o que desgranuladas.


Plaquetas Agrupadas


Plaquetas: Muestra de Sangre con EDTA

Tres plaquetas pequeñas, varias plaquetas grandes y 4 Megatrombocitos. Todos están de morfología normal.


LMA (leucemia mieloide aguda). 20x


LMA (leucemia mieloide aguda)- 100x


Leucemia Mieloide Aguda - Comparativo


LMA (leucemia mieloide aguda)- 100x


L.L.A.(Leucemia Linfocítica Aguda)- 100x


Leucemia Linfocítica Aguda - Comparativo


L.M.C. (Leucemia Mieloide Crónica) – 100x


Leucemia Mieloide Crónica - Comparativo


Linfoma Maligno – 100x


Linfoma Maligno - Comparativo


Linfoma de Hodgkin –100x


Linfoma de Hodgkin- Comparativo


Fuentes Bibiográficas y de Imágenes

• http://escuela.med.puc.cl/Publ/ManualSemiologia/Hemogramatext.html

• http://escuela.med.puc.cl/publicaciones/ManualPed/InterpretHemog.html

• http://medocs.ucdavis.edu/IMD/420A/dib/index.htm• http://pathy.med.nagoya-u.ac.jp/atlas/doc/• http://www.perinat.org.ar/Atlas%204%20-%206.html• http://www.forobioquimico.com.ar/atlashemato.html• http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/encyclopedia.html• http://www.galeon.com/hematologiauss/microteca.htm• http://www.arrakis.es/~rfluengo/frotissangre.html• http://www3.unileon.es/personal/wwdmamgi/

Sangre.pdf#search='frotis%20sanguineo‘• http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/

imagenes_de_neubauer.htm#Imágenes%20de%20la%20cámara%20de%20Neubauer


MUCHAS GRACIAS

POR SU ATENCIÓN

hematologÍa aspectos microscópicos

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