Haemopoetikus sejt alapúHaemopoetikus sejt alapúhaematologiai immuntherapiahaematologiai immuntherapia

DEOEC Belgyógyászati Intézet II. sz. Belgyógyászati Klinika DEOEC Belgyógyászati Intézet II. sz. Belgyógyászati Klinika Hematológiai Tanszék, DebrecenHematológiai Tanszék, Debrecen

Prof. Dr. Udvardy MiklósProf. Dr. Udvardy Miklóstanszékvezető egyetemi tanár, tanszékvezető egyetemi tanár,

Belgyógyászati Intézet igazgatójaBelgyógyászati Intézet igazgatója

Onko-haematologia aranykorszak Célzott therapia: monoklonális antitestek,

jelátvitel gátlók (pl. imatinib), ATRA, proteaszóma gátlás sok kórkép megoldás felé halad

Vannak nehéz helyzetek, pl. időskori AML, indolens lymphomák ahol nincs áttörés

Sejtes vaccinatio ekkor indokolt, a részleges remissio (nem a nagy tumortömeg) mellett

ŐSSEJTEK….ŐSSEJTEK….

1. Embryonális blastocysta totipotens2. Embryonalis csira sejt pluripotens3. Köldökzsinór pluripotens4. Felnőtt őssejt multipotens(5. Embryonális cc. őssejt)

Haemopoetikus őssejt Multipotens szomatikus őssejt, tipusai:

1. CD133+, CD34-: pluripotensebb, long-term HSC (haemopoesis, máj?, izom?, angiogenesis?, neuron?) 2.CD34+, CD133+: HSC és haemangioblast

3. CD34+, CD133-, zöm, short term HSC Adheziv fehérjék (VLA -4-5) Cytokin receptorok (c-kit, flt-3)

Haemopetikus őssejttel végzett immun therapia Allogen transplantatio utáni és graft versus

host és graft versus tumor effektus Redukált, mini-, mikro- allotransplantatio

nem myeloablativ, hanem jelentős immun effektus (pl. időskori AML)

Donor lymphocyta infusio (CML, AML), további immnmodulatio (pl. Kepivance)

Aktiv immunizáció Releváns betegség (egyéb th. nem jelent

megoldást) Legalább részleges remissio állapotában

alkalmazható Hagyományos antigen ellenanyag képzés az

onkohaematologiában limitált hatékonyságu Sejtes alapu vakcina (pl. dendritikus sejt) a

jelen és jövő utja

Immunisatiós lehetőségek A beteg tumor sejtjeinek extractuma

pontatlan, részben túlhaladott, de mégis jó lehet (colorectalis, myeloma)

Több betegtől származó keverék, kultura Idiotypus (myeloma, lymphoma) fehérje,

körülményes izolálás Molecular rescue, Peptid lymphomában a hibás gén

szekvencia klónozása, amplifikációja vagy géntechnika (pl. tobamovirus nicotinia)

Más antigen, pl. CEA, 10 kD colon tumor

Beviteli utak Monocyta eredetű dendritikus sejt

döntően cellularis, erőteljes válasz másodlagos humoralis válasz változatos válasz arány (immun és klinikai)

Adjuváns (kulcslyuk csiga hemocianin, KLH) döntően humorális, jó válasz arány lymphomában is „Naked DNA” injectio

nem elég a tapasztalat Tumor-DC fusiós technika (myeloma, kisérletes) Géntechnologia-géntherapia (AML) DC + KLH (Id alapu, NHL, myeloma)

Dendritikus sejt Folliculáris dendritikus sejt

nyirokcsomó – integritas

vakcinációs célra invaziv Monocyta (CD14) eredetü

dendritikus sejt in vitro cytokin hatás

Bőr, Langerhans sejtek Lymphoid prekurzor eredetü

A dendritikus sejtes vakcináció alapjai Dendritikus sejt felveszi a tumor antigent Intracellularis fázis Antigen felszini expressio, döntően

MHC II presentatio A gazdaszervezetbe visszajuttatva főként

CD4, de további helper/suppressor sejt aktiválás, majd humoralis válasz is

T sejt proliferatio, cytokin válasz, antigen specifikus tumor lysis

B sejt válasz

Monocyta eredetü dendritikus sejt („Cologne model”)

Teljes vér (60-80 ml) vagy Apheresis, CD14 selectio (adherentia, poz. selectio)

dendritikus sejtté alakitás In vitro cytokin inkubáció (GM-CSF, IL-4) + tumor antigen/peptid

CD14 -, nincs T és B sejt marker MHC I, II (CD1+, 81+)

Aktiváció: LPS, TNF, CD40-ligand Immunsuppressio, tolerancia is kiváltható

inkubáció flt-3 (ligand) Legalább 2-8 M sejt, iv. (is) beadható

Keyhole limpet, kulcslyuk csiga•Immunstimultor és adjuváns•„B Immunostimulator” (AIDS), NHL tanulmányok (1993)•Döntően cellularis, de CD4 és 8 is•Idegen fehérje, mellékhatások•DC és KLH (myeloma, foll. NHL)•KLH – kulcslyukcsiga hemocyanin, kb. 1000 kD nagy fehérje

Lymphoma vakcinációs tanulmányok, folliculáris NHL

Első Stanford-tanulmány: 41 beteg, CVP utáni remissio, Id-KLH vaccinatio 14 immunválasz alakult ki, a responderek tulélése 12 évvel a diagnózis után100%, több molekuláris remissio, főleg CR-ben adott vakcina esetén

Bendandi tanulmány: 20 beteg, kemoth. utáni remissio, Id-GM-CSF vakcina cellularis válasz 2/3-ban, humoralis felében a 11 responderből 8 bcl-2 negativ lett

Naked DNA Fázis III tanulmány (USA, multicentrikus), eredmények inkább előzetesek Timmermann tanulmány, 35 folliculáris lymphoma

35 Id-DC folliculáris lymphoma (Stanford) kemotherapia után (első CR) első 10: 8 immunválasz 4 klinikai regressio

további 25 Id-DC+KLH booster injectio regressio (Id DC) 22%, progressio hiánya (Id DC+KLH) 70% (43 hónap %), részben molekuláris remissio jó eredmények a CR idején végzett vakcináció

Idiotype-pulsed dendritic cell vaccination

Pre-vaccine 11 months post-vaccine

0

20

40

60

80

100

0 2 4 6 8 10

PRO

BA

BIL

ITY

(%)

TIME (YEARS)

Responders (n=14)

non-Responders (n=18)p<0.0001

Freedom From Progression

Follicular Lymphoma first remission (Timmermann tanulmány)

DC vakcináció, myeloma Eisen, állatkisérlet,

izolált Id ellenes T (CD4) sejt, regressio Id-ellenes humoralis immunválasz th. értéke kicsi, keringő

PP-re hat Döntően Id-DC, ujabban KLH kombinációval Id-DC alapu hatékonyságot is korlátozza a jelentős

paraproteinaemia Mégis cytolysatum?? Uj tanulmányok: peptid alapu vakcináció, ill. Id alapu

DC+KLH, van válasz (30-40%) Autolog BMT után 3 hónappal (Stanford)

Id izolálás Paraproteinaemia legalább 0,4 g/l Izotípus és (al)osztály analízis Eltérő M, A, G-1, G-2, G-4, G-3 Affinitas chromatographia, kicsapás 95% tisztaság Alkalmas DC és KLH vakcina készitésre A hatás limitje - paraproteinaemia

Figyelemreméltó kazuisztika Maliander V et al. Leukemia, 1:165, 2004 Egyetlen AML-es beteg esete, akinek WT-1

elleni vakcinával – monotherapiaként -komplett remissioja alakul ki

Wilms tumor antigen (1), WT-1 Wilms tumorral

összefüggésben ismerték fel először

Zinc-finger transzkripciós faktor, sejt növekedés és proliferáció szabályozása, telomerease funkciók

AML, ALL, CLL, számos nem- Hodgkin lymphoma

WT-1 RT-PCR és haematologia AML-ben rossz prognosztikai jel, de ez vitatott MDS-ben diagnosztikus lehet CML-ben ugyancsak jellemző, a szint csökkenése jól

jelzi a tirozinkináz gátló kezelés várható hatékonyságát

Jó MRD marker Tumor antigen peptidszekvenciák, HLA

asszociációkkal

Gvax WT-1, fázis I-II tanulmány WT-1 peptid, a beteg saját in vitro irradiált

tumor sejtjéval 54 AML eset, parciális remissioban 70%-ban esett a WT1 szint Az igy válaszolók 2 éves tulélése jelentősen

javult Lényegesebb szövődmény, mellékhatás nem

volt

February 2007 | 26! Peptide immunotherapy with a validated target: WT1! AML known to be immune responsive! Activity already demonstrated with analogous products• 66% immune response; 57% durable clinical response in AML! Short development path with indication of AML patients in first CR• 12 month PFS endpoint! Off the shelf approach addressing most immune haplotypes• Four synthetic and natural peptides for CD8 and CD4 response! Inexpensive to produce

Vaccine Therapy and GM-CSF in Treating Patients With Acute Myeloid Leukemia, Myelodysplastic Syndromes, Non-Small Cell Lung Cancer, or MesotheliomaThis study is currently recruiting patients.

Sponsored by: Memorial Sloan-Kettering Cancer Center

Information provided: National Cancer Institute (NCI)

ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00398138

Condition Intervention PhaseLeukemiaLung CancerMalignant MesotheliomaPeritoneal Cavity Cancer

Drug: WT-1 analog peptide vaccineDrug: incomplete Freund's adjuvantDrug: sargramostimProcedure: biological therapyProcedure: diagnostic testProcedure: flow cytometryProcedure: immunoenzyme techniquesProcedure: non-specific immune-modulator therapyProcedure: non-tumor cell derivative vaccineProcedure: polymerase chain reactionProcedure: vaccine therapy

Phase 1

1 47 F 0 Breast cancer Surgery, chemotherapy Weekly 12 SD

2 63 M 2 Glioblastoma Surgery, radiotherapy, chemotherapy, INF-ß Weekly 12 SD

3 68 M 0 Malignant fibrous histiocytoma None Weekly 12 PD

4 33 M 2 Glioblastoma Surgery, radiotherapy Weekly 12 PR

5 45 M 0 Glioblastoma Surgery, chemotherapy, radiotherapy, INF-ß Weekly 12 SD

6 21 M 0 Primary neuroectodermal tumor Surgery, chemotherapy, radiotherapy Weekly 6 PD

7 29 F 0 Glioblastoma Surgery, chemotherapy, radiotherapy, INF-ß Weekly 12 SD

8 69 M 1 Glioblastoma Surgery, radiotherapy, INF-ß Weekly 12 SD

9 52 M 0 Rectal cancer Surgery, chemotherapy Weekly 12 PD

10 48 F 0 Breast cancer Surgery, chemotherapy, hormonal-therapy Weekly 12 PD

Saját eddigi WT-1 eredményeink Peptid keverék vagy módositott peptidek

előállitása indul mRNS mérés beállitása vérből és csontvelői

mintákból (WT-1 splice varánsok mérésére is alkalmas), az erőteljes expresszióval járó esetek azonositására (Biró Sándor, Human Genetika), RT-PCR (Taqman, G6PDH)

Mérések AML, MDS, CML-ben, ill. nyitás a lymphoma vonalra

A GAPDH gén expressziója egészséges (1, 2, 3)és AML betegben (4, 5, 6)

Rn=normalizált fluoreszcencia szignál

1

2

3

4

5

6

A WT1 gén expressziója egészséges (1, 2, 3,) és AML betegben (4, 5, 6)

Rn=normalizált fluoreszcencia szignál

12 3

4

5

6

DEOEC program

Klinikai Sejttherapiás központ colorectális cc DC sejtes- CEA, Fázis I., melanoma, haematologia

HAEMATOLOGIA -auto PBSCT 100 eset,, allogen 2007 II. félév? - AML, adjuváns, DC alapu WT-1, 65 év feletti esetek

- haemangioblast-angiogenesis program, Fázis I, ETT 5 eset

- myocardium, fázis I. ETT, 8 eset

Dendritikus sejtek

Antigen presentatio, aktivált állapot