hacer laboratorios en colombia - cultivo celular

CULTIVO CELULAR

Luz Esmeralda Murcia UrregoBacteriólogaAdministradora en saludVerificadora de condiciones de habilitaciónAuditora ISO 9000 HACCP y [email protected]

CULTIVO CELULAR

CONTEXTO

• Cultivo celular• Un poco de historia• Ventajas y desventajas• ¿Qué se investiga?• Terminología• Tipos de cultivo celular• Usos

LABORATORIO DE CULTIVO CELULAR

• Planeación del laboratorio• Sistema Único de Habilitación• Capacidad tecnológica y científica• Recurso humano

• Programa de entrenamiento• Infraestructura – Instalaciones físicas - Mantenimiento• Dotación - Mantenimiento• Equipos• Instrumentos• Medicamentos y dispositivos médicos• Insumos y reactivos

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego. Bacterióloga – Verificadora Enero 2011

CONTEXTO


CULTIVO CELULAR

Cultivo celular abarca un conjunto de técnicas de laboratorio que permiten manipular células, tejidos y órganos en un ambiente artificial controlando su proliferación, mantenimiento, y/o funcionalidad.

El crecimiento celular in vitro ha sido posible gracias al descubrimiento de los antibióticos, la tripsina y a la definición química de los medios de cultivo realizados durante la primera mitad del siglo pasado, base vital para la escala industrial comercial desarrollada a partir de los años 60 gracias a introducción de nuevas tecnologías, a los equipos, que mejoraron las técnicas y herramientas del laboratorio e igualmente las aplicaciones biotecnológicas de esta útil herramienta.

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego. Bacterióloga – Verificadora Enero 2011Adaptado de: Ryan John A. Introduction to animal cell culture – Technical bulletin. Publicado por Corning incorporated. 2003.

UN POCO DE HISTORIA

Harrison 1907

• Fibras nerviosas embrionarias de rana.

Rous and Jones 1916

• Explantación de células.

Fisher, Carrel, Ebeling 1923-5

• Pases celulares.

Earle, Sanford, Enders 1948

• Fibroblastos continuos L929.

Enders 1949

• Crecimiento de virus en cultivo celular.

Gey 1952

• HeLa

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego. Bacterióloga – Verificadora Enero 2011Adaptado de: Freshney I. Cell culture of mamalian cels. Editorial Willey. 2006.

UN POCO DE HISTORIA

Dulbeco 1952

• Monocapas para plaqueo viral.

Morgan 1950, Parker 1954, Eagle 1955-9, Waymouth 1959, Ham 1963-65

• Medios de cultivo celular.

Kleinsmith & Pierce 1964

• Pluripotencialidad de las células madre embrionarias.

Kohler & Milstein 1975

• Hibridomas y anticuerpos monoclonales.

Illmense & Mintz 1976

• Totipotencialidad de células madre embrionarias.

Gospodarovicz 1978, Folkman & Moscona 1978,Reid & Rojkind, 1979

• Control de forma y crecimiento en matrices.


UN POCO DE HISTORIA

Darnell 1982

• Regulación en la expresión de los genes.

Peel & Ham 1980, Hammond et al 1984, Knedler & Ham 1987

• Desarrollo de líneas celulares especializadas.

Bell et all 1983

• Cultivos para reconstrucción de piel.

Butler 1991

• Cultivo celular escala industrial de células transfectadas para producción biofarmaceutica.

Aigner et all 1998

• Ingeniería del tejido cartilaginoso.

Dennis et all 2000

• Genómica, proteómica, deficiencias genéticas y expresión de errores.


VENTAJAS Y DESVENTAJAS

Lo bue

no

• Control fisico-químico y fisiológico del microambiente.

• Caracterización y homogeneidad de la línea.

• Economía, escala y mecanización.

• Reducción de modelos animales.

Lo mal

o

• Experiencia.

• Control microbiológico del microambiente.

• Cantidad, calidad y costos.

• Inestabilidad genética y fenotípica.

• Identificación de tipo celular.


¿QUE SE INVESTIGA?

Célula

Productos

Genómica

Farmacología

Inmunología

Toxicología

Interacciones

Ingeniería de tejidos

FlujoActividad

Intracelular


TERMINOLOGÍA

Cultivo de órganosCultivo

de tejidosCultivo celular

Cultivo histotípic

o

Cultivo organotípi

co


TIPOS DE CULTIVO CELULAR

•Órganos de embriones•Fragmentos de tejido adulto•Interfase G-L

Cultivo de órganos

•Fragmentos de tejido•Interfase L-SExplante

•Cultivo primario•Línea celular•Tejido disgregado•Interfase L-S

Cultivo celular

•Diferentes células son co-cultivadas con o sin matriz.

Organotípico

•Anclaje independientes•Linfocitos•U937•Rají

Suspensión

•Anclaje dependientes•Hepatocitos•OMK•HeLa

Monocapa

•Se obtienen directamente de un tejido disgregado.•Esplenocitos•Hepatocitos

Primarios

•Provienen de cultivos contínuos tipo linajes comerciales o hibridomas.•B-52•P3 X63 Ag8.653

Subcultivos o secundarios

ORIGEN

ANCLAJE

OTROS


USOS DEL CULTIVO CELULAR

Productos

de célul

as

• Vacunas

• rADN

• Interferón

• Anticuerpos monoclonales

Células

como prod

uctos

• Proliferación ex-vivo

• Cultivo de tejidos

• Terapia génica

• Cultivo de órganos

• Diagnóstico


USOS DEL CULTIVO CELULAR

AcMoAnti TNF

α

AcMo Anti β tubulin

a

Aplicación de la terapia génica en tratamiento contra

el cáncer.

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011

LABORATORIO DE CULTIVO CELULAR


PLANEACION DEL LABORATORIO

Recepción

Administración

Almacén

Toma de muestras

Equipos reactivos y

material

Lavado preparación y esterilización


SISTEMA UNICO DE HABILITACION

Capacidad tecnológica y científica

Suficiencia patrimonial y financiera

Capacidad técnico administrativa

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego. Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Decreto 1011 y Resolución 1043 del Ministerio de Protección Sooial.

CAPACIDAD TECNOLÓGICA Y CIENTÍFICA

Recurso humano

Infraestructura – Instalaciones físicas – Mantenimiento

Dotación – Mantenimiento

Medicamentos y Dispositivos médicos – gestión de medicamentos y dispositivos médicos

Procesos prioritarios asistenciales

Historia clínica y registros asistenciales

Interdependencia de servicios

Referencia y contrareferencia de pacientes

Seguimiento a riesgos en la prestación de serviciosCultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego. Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Anexo N°1 Resolución 1043 del 2006 del Ministerio de Protección Sooial.

RECURSO HUMANO

RECURSO HUMANO

COMPETENCIAS

Saber• Formación• Nivel de

desempeño

Hacer• Desempeño• Cantidad• Vinculación• Prestación

Ser• Comportament

ales• Actitudinales

IDONEIDAD

Eficiencia Efectividad Eficacia

ENTORNO

Identificación Normalización Evaluación

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego. Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Anexo N°1 Resolución 1043 del 2006 del Ministerio de Protección Sooial.

RECURSO HUMANO

Selección del personal

Inducción, capacitación y entrenamiento del personal

Perfil de cargos

Suficiencia

Forma de vinculación

Verificación de título

Hojas de vida con soportes

Análisis de hoja de vida

Autorización para ejercer

Certificados

Convenios docente – asistencial

Procedimiento de supervisión de

personal en entrenamiento

Carnet de radioprotección y dosímetro.

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Anexo N°1 Resolución 1043 del 2006 del Ministerio de Protección Sooial.

Matriz

Concentración

Medio

líquido

Medio gaseo

so

Temperatu

ra

PROGRAMA DE ENTRENAMIENTO

Básico

• Biología celular* - Técnica aséptica - Seguridad - Pipeteo – Preparación de medios, soluciones y colorantes - Conteo de células por hemocitómetro - Subcultivo de línea celular en suspensión – subcultivo de células adherentes – Calidad.

Intermedio

• Cultivos primarios – criopreservación y descongelamiento – detección de mycoplasma DAPI PCR - Clonación – ensayos de citotoxicidad - caracterización de línea celular – estudio cromosómico - isoenzimas – DNA fingerprint – citometría de flujo.

Biología celular*

• Adhesión celular: CAMs , cadherinas , integrinas, proteglicanos transmembranales.• Uniones intercelulares: Desmosomas, AMPc.• Matriz extracelular : Lámina basal (colágeno, fibronectina, hialuron, proteoglicanos)• Citoesqueleto y motilidad celular:Actina , citoqueratina, microtubulos.• Proliferación : Ciclo celular G1, S, G2, M, control de proliferación EGF, PDGF, ciclinas, TGFβ.• Diferenciación y mantenimiento Matrigel, hidrocortisona, retinoides.• Dediferenciación • Señalización celular: Endocrina, paracrina, homocrina, autocrina.• Energía y metabolismo

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011Adaptado de: Freshney I. Cell culture of mamalian cels. Editorial Willey. 2006.

Técnica aséptica

• Código que hace parte de las buenas prácticas de laboratorio BPL compuesto por estándares oro cuyo objetivo es evitar la contaminación microbiana y asegurar la conservación de las condiciones estériles del producto.

• Se aprende en la práctica y apela al sentido común.• Involucra control de infraestructura, ambiente, insumos, equipos,

reactivos y personal científico y no científico.• Se deben institucionalizar por medio de guías, protocolos,

procedimientos operativos estandarizados o normalizados inmersos en un sistema de calidad.




Seguridad

Decreto 1011 del 2006

Marco normativo colombiano

Decreto 2676 del

2000

Resolución 2183 del

2004

Resolución 4816 del

2008Resolución

1995 de 1999



SeguridadMarco

Internacional

ESTADOS UNIDOS

OccupationalSafety and Health

Administration - OSHA

National Institutes of Health -NIHCDC – BMBLU.S. Nuclear Regulatory

Commission

REINO UNIDO

Magnament of Health and Safety at Work

RegulationsHealth and Safety

Commission - Provision and use of work

equipment – PUWERHealth and Safety

Commission - Control of substances harzadous

to healthSafe working and the

prevention of infection in clinical laboratories

Model reles for staff and visitors. A guide to the genetically modified

organismsWork with ionision

radiation

EUROPAManagement of Health

and Safety at Work Directive

Provision and use of Work Equipment

DirectiveCouncil Directive on the protection of the health and safety workers from

the risk related to chemical agents an

workDirective on the

Protection of workers fom risk Related to

exposure to biological agents at work


PROGRAMA DE ENTRENAMIENTO• Inestabilidad del terreno construído, incendio inundación, sismos,

delincuencia.• Plan de contingencia, comunicaciones de emergencia, bomberos,

policía.Infraestructura

• Experiencia, entrenamiento• Riesgos ocupacionales y de salud. Operador: SGSSS EPS y ARP

Responsabilidad institucional. PPE.Operador• Riesgos térmicos: Autoclaves, hornos, planchas, congeladores,

cilindros y mecheros.• Riesgos mecánicos y eléctricos: Instalación conexión, polo,

sobrecarga, desbalance.• PPE, POE, señalización, mantenimiento. Tecnovigilancia.

Responsabilidad de la dirección.

Equipos• Detergentes, clorados, DMSO, mutagénicos y cancerogénicos.• Riesgos gaseosos y líquidos. CO2 escaso N2 congelamiento, asfixia,

explosión. O2 Combustión.• PPE Guantes látex, silicona, nitrilo. Fichas técnicas. POE, bomberos.

Riesgo químico

•Manipulación genética, propagación de virus, trabajo con biopsias. Material de vidrio y cortopunzante

•POE líneas séricas base o bancos.

Riesgo biológico y cortopunzante

• 3H radiación ionizante tipo β por malas técnicas crean aerosoles que son ingeridos.125 I 131 I, 51 Cr radiación ionizante tipo β γ .Altas fuentes 60 Co, Rayos X , UV producen quemaduras.

• POE, PPE Plomado de 2mm, decaimiento, registro.

Riesgos por radiaciones



Recurso humano








Seguimiento a riesgos en la prestación de serviciosCultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Anexo N°1 Resolución 1043 del 2006 del Ministerio de Protección Sooial.

INFRAESTRUCTURA - INSTALACIONES FÍSICAS



Legislación

•Decreto 1011 de 2006•Resolución 1043 de 2006, Anexo Técnico No.1 y No. 2•Resolución 4445 de 1996•Resolución 5042 de 1996 (M)•Resolución 2680, Anexo Técnico No. 1 y No. 2•Resolución 3763, Anexo Técnico No 1•Ley 400 de 1998•Ley 361 de 1997•Ley 9 de 1979•Decreto 2105 de 1983•UNE 100-030-94•NTC 1500 Código colombiano de fontanería•NTC 2050 Código eléctrico colombiano•Reglamento técnico de instalaciones eléctricas.RETIE•Decreto 2676 del 200•Licencia de vertimientos? del 2010.


INFRAESTRUCTURA INSTALACIONES FISICAS

INFRAESTRUCTURA E INTALACIONES

Uso exclusivo

de una IPS• Reporte de

domicilio.

Garantiza• Agua • Energía• Comunicacion

es• Manejo y

evacuación de residuos

Tener• Impermeables• Sólidos• Fácil limpieza• Liso - drenajes• Resistente a

factores mediomabientales

Alta complejidad• Fuente de

energía de emergencia

Aseo• Pocetas • Depósito de

residuos• Depósito de

cadáveres• PGRHS• Tanques de 24

h.• Lavapatos

Cumplir• Ventilación • Iluminación• Distribución• Mantenimiento

.

Manual de bioseguridadPlan de gestión de residuos

hospitalarios y similares

Plan de mantenimiento de infraestructura e instalación

física


INFRAESTRUCTURA INSTALACIONES FÍSICAS Y MANTENIMIENTO

PEQUEÑO MEDIANO


INFRAESTRUCTURA INSTALACIONES FÍSICAS

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011Tomado de: Vélez R. Riesgo en infraestructura hospitalaria. Presentación Universidad del Bosque. 2010.


Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011Tomado de: Construcciones de salud. N°2. Legis. 2010


Recurso humano









DOTACION - MANTENIMIENTO


DOTACIÓN - MANTENIMIENTO

EQUIPOS

Condiciones• Indispensables

• Almacenamiento adecuados

• Técnicas de calidad• Licencia de radiación

ionizante

Mantenimiento• Programa de

mantenimiento preventivo

• Calibraciones• Corriente• Hoja de vida con

mantenimiento correctivo

• Profesional o técnico externo

Tener• Equipo de reanimación

uno por cada piso según servicios

Garantizar• Dotación por cada piso

Programa de mantenimiento preventivo de equipos

Hoja de vida y mantenimiento correctivo de equipos


EQUIPOS

Cabina de flujo laminar Clase II• Mínimo de 1.20, silenciosa,

ergonómica, fácil limpieza.

Bomba de vacío

Microscopio Invertido• Imágenes digitales.

Centrífuga• 80-100 G

Refrigerador y congelador• 4°C -20°C -70°C

Computador• Sistema de información

Autoclave•Bench top autoprogramable y cierre de seguridad.

Horno de secado – esterilizado

Incubadora• Monitoreo automáticos de CO2 % de

Humedad y Temperatura.

Termociclador• Perfil de DNA, test mycoplasma

Equipo de agua• Desionizada• Ultrapura

Citómetro de flujo

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Imágenes tomadas de: Catálogo Milipore, Catálogo Fisher, Catálogo Cole-Parmer, Catálogo New Brunswick, Ian Freshney y propias.

INSTRUMENTOS

Balanza• Electrónica - analítica de tare

automático.

pHmetro

Conductómetro• Control de calidad de soluciones.

Termohigrómetro

Hemocitómetro• Newbauer línea brillante

Dispensador

Agitador magnético térmico• Usar a menos de 50 rpm

Pipeteador• Sistema de información• Buenas prácticas de laboratorio

Micropipetas• Análisis celular multiparamétrico.

Repetidora

Multicanal

Homogenizador de tejidos

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Imágenes tomadas de: Catálogo Duran, Catálogo Fisher, Catálogo Cole-Parmer, Catálogo Brand.

MEDICAMENTOS Y DISPOSITIVOS MÉDICOS

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 .

MEDICAMENTOS Y DISPOSITIVOS MÉDICOS

INSUMOS Y REACTIVOS

Condiciones• Procesos para el manejo de dispositivos

médicos y reactivos• Cumplir con

condiciones de almacenamiento

• Cumplir con condiciones de entrega

Listado• Forma farmacéutica• Principio activo• Concentración• Lote• Fecha de vencimiento• Registro sanitario

INVIMA• Presentación comercial

Verificar• Registro INVIMA• Programa de

farmacovigilancia• Programa de

tecnovigilancia

Garantizar• Temperatura• Humedad• Ventilación• Segregación• Seguridad• No vencido• No reuso

Listado Kardex de existencias Procedimiento de adquisición

Procedimiento de Tecnovigilancia

Uso y reuso de

dispositivos


INSUMOS Y REACTIVOS

Plásticos• Probetas, tubos, cajas T, cajas

de pozos.

Vidrios•Pipetas, erlenmeyer. beackers tubos, embudos, frascos.

Filtros• Unidades de filtración,

membranas individuales, microfiltros jeringas. HEPA.

Papeles• Craft, algodón, gasa, parafilm

cintas.

Aseo• Churruscos, jabones, alcohol,

osyl, guardianes, toallas de papel, bolsas.

Buffer•PBS, DPBS.

Medios de cultivo•MEM, DMEM, RPMI 1640, TC100.

Colorantes•Azul de tripán, giemsa, Gram.

Aditivos•Insulina, piruvato, L-glutamina, HEPES, bicarbonato de sodio, glucosa, aminoácidos.

Disgregantes•Tripsina, EDTA.

Cultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Imágenes tomadas de: Catálogo Hyclone, Catálogo Fisher, Catálogo Cole-Parmer, Catálogo Duran.


Recurso humano









PROCESOS PRIORITARIOS ASISTENCIALES

PROCESOS PRIORITARIOS ASISTENCIALES

DOCUMENTACION

Condiciones• Acciones para divulgar• Responsables de ejecución y

control• Medicina basada en la evidencia• Coordinación esterilización –

comité de infecciones – programa de aseo.

Definición y documentación

• Procesos, procedimientos, guías, protocolos

• Procesos de auditoría para el mejoramiento de la calidad de la atención en salud

• Seguimiento a riesgos• Procedimiento de admisión y egreso de

pacientes

Garantizar• Divulgación• Control

Control de calidad Manual de bioseguridad

Manual de procedimientos

Protocolo de limpieza y

desinfección



Recurso humano









HISTORIA CLINICA Y REGISTROS ASISTENCIALES

HISTORIA CLINICA

Condiciones• Manejo adecuado• Consigna registros clínicos• Resolución 1995 de 1999• Archivo activo y muerto

Criterios• Única historia• Procedimientos definidos para

circulación desde y hacia el archivo

• Adecuadamente identificada• Consentimiento informado

Garantizar• Confidencialidad• Custodia• Conservación integral• Mecanismos de seguridad

Control de calidad Manual de bioseguridad

Manual de procedimientos Registros de temperaturas


HISTORIA CLINICA Y REGISTROS ASISTENCIALES


Recurso humano









INTERDEPENDENCIA DE SERVICIOS

SERVICIOS

Condiciones• Soporte o apoyo de otros

servicios o productos tipo asistencial o administrativo

Criterios• Servicio de esterilización propio o

contratado.• Transporte asistencial cuenta con

red de comunicaciones.• Transplantes*

Garantizar• Realización oportuna de

actividades, procedimientos e intervenciones.

Manual de esterilizaciónCultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Anexo N°1 Resolución 1043 del 2006 del Ministerio de Protección Sooial.


Recurso humano









REFERENCIA Y CONTRAREFERENCIA DE PACIENTES

REFERENCIA Y CONTRAREFERENCIA

Condiciones• Tener definidos guías, manuales,

procedimientos para la remisión urgente de pacientes.

Criterios• Destinos y flujos de pacientes• Equipos de comunicaciones• Disponibilidad de medios de

transporte

Garantizar• Realización oportuna de

actividades, procedimientos e intervenciones.

Guía de referencia y contrareferenciaCultivo celular - Luz Esmeralda Murcia Urrego - Bacterióloga – Verificadora Enero 2011 Anexo N°1 Resolución 1043 del 2006 del Ministerio de Protección Sooial.


Recurso humano









SEGUIMIENTO A RIESGOS EN LA PRESTACIÓN DE SERVICIOS

SEGUIMIENTO A RIESGOS EN LA PRESTACIÓN DE SERVICIOS

SEGUIMIENTO A RIESGOS

Condiciones• Proteger a los usuarios de los

principales riesgos mediante procesos obligatorios para evaluación y control.

Criterios• Evaluación y seguimiento de riesgos

Mortalidad intrahospitalaria, infecciones intrahospitalarias, complicaciones quirúrgicas inmediatas, complicaciones anestésicas, complicaciones terapéuticas especialmente medicamentosas y transfusionales.

Otros• Operacionalización del indicador:

Estandarización de la fuente, ficha técnica y responsables.

• Evaluación y seguimiento del comité técnico científico a los riesgos.

Guía de manejo de productos biológicos

Bioseguridad

Limpieza y desinfección Comité técnico científico


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