gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research ce gène active la division...
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Gain de fonction, perte de fonction
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hypothesis-driven research
Ce gène active la division cellulaire
Puce à ADN
Discovery-driven research
Comparaison ARNm de cellules à division rapide Vs ARNm de cellules à division lente
gène x= candidat
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Sur-expression
Gain de fonction
Sous-expression
Perte de fonction
expressionphysiologique
24 h après
Produit de gène x
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Gain de fonction
Organisme
Cellule
perte de fonction
sous-expression
Knock Out
sur-expression
Transgénique
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Sur-expression
expressionphysiologique
Produit de gene x = protéine x
ARNm codant protéine x
ADN codant protéine x
Approche : Gain de fonction
protéine x
macromolécule informationnelle
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protéine x
ARNm codant protéine x
ADN codant protéine x
transcription
traduction
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? - Source de la macromolécule informationnelle
? - Introduction dans la cellule
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Source de la macromolécule informationnelle
Purifiée à partird’une source biologiqueProtéine recombinante
ADN
ARN
Protéine
PCR, Clonage
Transcription in vitro
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Transcription in vitro
Plasmide
Promoteur d’ARN polymérasede bactériophage
recombinant
ADN codant protéine x
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recombinant
Transcription in vitro
Plasmide
ARN polymérasede bactériophage
ARN
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Protéine recombinante
Escherichia coli
Transfection
Extraction et purification
Protéine x
Plasmide
ADN codant protéine x
recombinant
Promoteur bactérien
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Introduction dans la cellule
Transfection*
Transformation*
Transduction*Transfert de matériel génétique d'une bactérie à une autre ou d'une cellule à une autre par l'intermédiaire d'un virus.
Transfert de matériel génétique exogène dans une cellule.
Acquisition par un organisme de caractères héréditaires nouveaux après pénétration dans ses cellules de matériel génétique exogène.
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La membrane plasmique est une barrièrephysique à la transfection de protéines
et acides nucléiques
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Lipopolysaccharides
peptidoglycan
MembranePlasmiqueintérieurpeptidoglyca
n
MembranePlasmiqueextérieur
Périplasme
lipoprotéine
Porine(protéine)
Transporteur (protéine)
Paroi bactérien (gram -)
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Paroi de lévure
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Paroi d’une cellule végétale
Paroipectocellulosique
Membraneplasmique
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Digestionenzymatique
protoplaste
Cellulevégétale
Production de protoplastes
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Digestionenzymatique
Production de sphéroplastes
levure
sphéroplaste
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Micro-rupture de la membrane plasmique
Endocytose
Comment faire pénétrer une macromoléculeInformationelle à l’intérieure d’une cellule ?
Fusion membranaire
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- Micro-rupture de la membrane plasmique
- Micro-injection
- Choc-osmotique/choc-thermique
- éléctroporation
- Biolistique
- Onde de choc
- Endocytose
- Fusion membranaire
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Micro-rupture de la membrane plasmique
- Micro-injection
- artificielle
- biologique
- Choc-osmotique/choc-thermique
- éléctroporation
- Biolistique
- Onde de choc
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Micro-injection : artificielle
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Micro-injection : artificielle
Avantages : transfection très efficace
Inconvénients : lourdeur technique
transfection de populations de cellules impossible
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Micro-injection : biologique : bactéries
Pilus F
Bactériophage M13
M13
T7
Bactériophage T7
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Agrobacterium tumefaciens
galles
Micro-injection : biologique : cellules végétales
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Agrobacterium :cycle de vie
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Micro-rupture de la membrane plasmique
- Micro-injection
- Choc-osmotique/choc-thermique
- éléctroporation
- Biolistique
- Onde de choc
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CaCl2
Cl-
Ca++
LiCH3CO2
Li+
CH3CO2-
Choc-osmotique/choc-thermique
bactérielevure
37°C 42°C
perméabilisation perméabilisation
ADN
H2Oturgescence turgescence
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Avantage :
Inconvenients :
Peu onéreuse
transfection de populations de cellules
toxicité
échanges non-spécifiquesd’autres molécules
Choc-osmotique/choc-thermique
faible efficacité
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Micro-rupture de la membrane plasmique
- Micro-injection
- Choc-osmotique/choc-thermique
- éléctroporation
- Biolistique
- Onde de choc
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- ++++
++
+
--
-
---
10 - 100 kV/cm
10 - 1000 s
Electroporation
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Electroporation
Interrupteur # 1
Interrupteur # 2
résistance alimentation
capacitance
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Electroporation
Avantage :
Inconvenients :
efficacité de transfection
transfection de populations de cellules
toxicité
échanges non-spécifiquesd’autres molécules
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transfectées
....
....
....
....
....
....
....
Rupture de la
hélium
Onde de choc
Biolistique
…………
membrane calibrée
Capsule à microbilles
Grille de rétention
cellules
microbilles en or
hélium
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Biolistique
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Biolistique
Avantage :
Inconvenients :
Utilisation avec cellules à paroi
transfection de populations de cellules
Endommage les cellules
Transfection peu uniforme
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Nanosecond pulsed laser-induced stress wave
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Nanosecond pulsed laser-induced stress wave
Avantage :
Inconvenients :
Technique trop récente
?
?
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Agrolistique
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Micro-rupture de la membrane plasmique
Endocytose
Comment faire pénétrer une macromoléculeInformationelle à l’intérieure d’une cellule ?
Fusion membranaire
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Endocytose
L’endocytose implique la
capture spécifique de
macromolécules ou
nanoparticules par la
membrane plasmique
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Nanoparticules
- molécules amphipathiques
- peptides cationiques
- phosphate de calcium
- polymères ramifiés
Endocytose
- lipides- peptides
Macromolécules cationiques
- hydrophobes - liposomes
- cationiques
- ligands membranaires - virus
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Nanoparticules
- molécules amphipathiques
- peptides cationiques
- phosphate de calcium
- polymères ramifiés
Endocytose
- lipides- peptides
Macromolécules cationiques
- hydrophobes - liposomes
- cationiques
- ligands membranaires - virus
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Peptides passe-membranes(cell-penetrating peptides : CPP)
-de la protéineantennapaedia
-de la protéinetat de VIH
- oligo arginine
R Q I K I W F Q N R R M K W K K+++ + + ++
G R K K R R Q R R R P P Q C+++ ++ + ++
R R R R R R R R R+++ ++ + +++
Peptides cationiquesEndocytose :
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cargo
CPP (conjugaison chimique)
CPP(peptide de synthèse)
conjugaison chimique(liaison covalente)
ProtéineARNADN
G R K K R R Q R R R P P Q C
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ADN codant protéine x
ADN codant CPP
Transfection dans E.coli
RQIKIWFQNRRMKWKK- Protéine x
Plasmiderecombinant
CPP (protéine de fusion recombinante)
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Nanoparticules
- molécules amphipathiques
- peptides cationiques
- phosphate de calcium
- polymères ramifiés
Endocytose
- lipides- peptides
Macromolécules cationiques
- hydrophobes - liposomes
- cationiques
- ligands membranaires - virus
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Phosphate de calcium
3 CaCl2 + 2 Na3PO4 Ca3PO4 + 6NaCl
nanoparticules
endosome
Précipitée Ca3PO4 / ADNnanoparticulaire
Membrane plasmique
ADNARNProtéine ?
Endocytose :
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
++
-
-
-
-
-
--
-
-
-
-
-
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Nanoparticules
- molécules amphipathiques
- peptides cationiques
- phosphate de calcium
- polymères ramifiés
Endocytose
- lipides- peptides
Macromolécules cationiques
- hydrophobes - liposomes
- cationiques
- ligands membranaires - virus
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Polymères ramifiés
Polyéthylénimine (PEI)
Complexe PEI / ADNnanoparticulaire
+
++
++
+
+
+
ADNARNProtéine ?
Endocytose :
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Nanoparticules
- molécules amphipathiques
- peptides cationiques
- phosphate de calcium
- polymères ramifiés
Endocytose
- lipides- peptides
Macromolécules cationiques
- hydrophobes - liposomes
- cationiques
- ligands membranaires - virus
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lipides amphipathiques
régioncationique
région lipidique(hydrophobe)
+
+
++
+
+
+
+
++
++
++
Lipoplexe (nanoparticule)
example : L-dioleoyl phosphatidylethanolamine (DOPE)
Endocytose :
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Nanoparticules
- molécules amphipathiques
- peptides cationiques
- phosphate de calcium
- polymères ramifiés
Endocytose
- lipides- peptides
Macromolécules cationiques
- hydrophobes - liposomes
- cationiques
- ligands membranaires - virus
![Page 55: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/55.jpg)
+ - +p ++++- -p pp p
K E T W W E T W W T E W S Q P K K K R K V Cp
Pep-1
Endocytose :peptides amphipathiques
N
O
O
O
O
C
C
régioncationique
régionhydrophobe
![Page 56: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/56.jpg)
+++++++
+++
+++++
+++++
+++++
+++++
+++++
Nanoparticule de Pep-1/cargo (protéine)
Endocytose :peptides amphipathiques
![Page 57: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/57.jpg)
Nanoparticules
- molécules amphipathiques
- peptides cationiques
- phosphate de calcium
- polymères ramifiés
Endocytose
- lipides- peptides
Macromolécules cationiques
- hydrophobes - liposomes
- cationiques
- ligands membranaires - virus
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ADNARNProtéine
Endocytose :nanoparticules hydrophobes
Lipofection
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Nanoparticules
- molécules amphipathiques
- peptides cationiques
- phosphate de calcium
- polymères ramifiés
Endocytose
- lipides- peptides
Macromolécules cationiques
- hydrophobes - liposomes
- cationiques
- ligands membranaires - virus
![Page 60: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/60.jpg)
recepteur membranaire
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
virus
virus
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Les virusGénome
ADN
ARN
db
sb
Famille
sb+
sb-
PoxviridaeHerpesviridae
Rhabdoviridae
Coronaviridae
Adenoviridae
Picornaviridae
Parvoviridae
Filoviridae
Retroviridae
Réoviridae
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Les virusGénome
ADN
ARN
db
sb
Famille
sb+
sb-
PoxviridaeHerpesviridae
Rhabdoviridae
Coronaviridae
Adenoviridae
Picornaviridae
Parvoviridae
Filoviridae
Retroviridae
Réoviridae
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Adenoviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
Ligands de protéines membranaires :
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Adenoviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
![Page 65: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/65.jpg)
Adenoviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
![Page 66: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/66.jpg)
Adenoviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
= réplication incompétente
E1 déleté
![Page 67: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/67.jpg)
Adenoviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
transgène
![Page 68: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/68.jpg)
Cellules transformées par E1
promoteur E1 genome avec transgène
plasmide
réplication incompétente transgènique virus
transfection
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Adenoviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
Avantages : transduction très efficace
grande tropisme
Inconvénients : Expression transitoire
Sécurité
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Les virusGénome
ADN
ARN
db
sb
Famille
sb+
sb-
PoxviridaeHerpesviridae
Rhabdoviridae
Coronaviridae
Adenoviridae
Picornaviridae
Parvoviridae
Filoviridae
Retroviridae
Réoviridae
![Page 71: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/71.jpg)
Genres :
* Alpharetrovirus * Betaretrovirus * Gammaretrovirus * Deltaretrovirus * Epsilonretrovirus * Lentivirus * Spumavirus
Retroviridae
![Page 72: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/72.jpg)
Genres :
* Alpharetrovirus * Betaretrovirus * Gammaretrovirus * Deltaretrovirus * Epsilonretrovirus * Lentivirus * Spumavirus
Retroviridae
![Page 73: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/73.jpg)
![Page 74: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/74.jpg)
![Page 75: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/75.jpg)
retroviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
Avantages : transduction très efficace
Expression stable (intégration)
Inconvénients : Intégration uniquement lors de la mitose
faible tropisme
sécurité
![Page 76: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/76.jpg)
retroviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
Avantages : transduction très efficace
Expression stable (intégration)
Inconvénients : Intégration uniquement lors de la mitose
faible tropisme
sécurité
![Page 77: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/77.jpg)
Genres :
* Alpharetrovirus * Betaretrovirus * Gammaretrovirus * Deltaretrovirus * Epsilonretrovirus * Lentivirus * Spumavirus
Retroviridae
![Page 78: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/78.jpg)
![Page 79: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/79.jpg)
retroviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
Avantages : transduction très efficace
Expression stable (intégration)
Inconvénients : Intégration uniquement lors de la mitose
faible tropisme
sécurité
![Page 80: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/80.jpg)
rétrovirus : défective pour la réplication
retroviridae
nanoparticules :Endocytose : ligands membranaires :virus
![Page 81: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/81.jpg)
Plasmide
LTR
LTR
Plasmide
Plasmide
gag/pol
env
transfection
Cellule productrice
![Page 82: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/82.jpg)
![Page 83: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/83.jpg)
Recombinaison pendant transcription inverse
U3 R U5 U3 R U5
transgene
3’ LTR inactive
U3 R U5 U3 R U5
transgene
5’ LTR auto-inactivé
promoteur
promoteur
![Page 84: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/84.jpg)
Comment savoir si les cellules transfectées/transduites
expriment la protéine x
- anticorps spécifique
- western blot
- immunofluorescence
- anticorps contre étiquette (epitope tag)
- western blot
- immunofluorescence
- protéine de fusion (fluorescente)
![Page 85: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/85.jpg)
Comment savoir si les cellules transfectées/transduites
expriment la protéine x
- anticorps spécifique
- western blot
- immunofluorescence
- anticorps contre étiquette (epitope tag)
- western blot
- immunofluorescence
- protéine de fusion (fluorescente)
![Page 86: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/86.jpg)
HIS HHHHHH
c-MYC EQKLISEEDL
HA YPYDVPDYA
VSV-G YTDIEMNRLGK
HSV QPELAPEDPED
V5 GKPIPNPLLGLDST
FLAG DYKDDDDK
étiquetage (epitope tagging)
Plasmide
ADN codant
étiquette
ADN codant
Protéine x
promoteur
![Page 87: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/87.jpg)
Comment savoir si les cellules transfectées/transduites
expriment la protéine x
- anticorps spécifique
- western blot
- immunofluorescence
- anticorps contre étiquette (epitope tag)
- western blot
- immunofluorescence
- protéine de fusion (fluorescente)
![Page 88: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/88.jpg)
![Page 89: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/89.jpg)
Etiquetage
Green Fluorescent Protéine (GFP) dsRED
![Page 90: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/90.jpg)
![Page 91: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/91.jpg)
![Page 92: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/92.jpg)
![Page 93: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/93.jpg)
Co-marquageco-transfectionco-traduction (IRES)
![Page 94: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/94.jpg)
mTrim17Pcmv his6 SV40 polyA
ires YFP
his6
YFP
![Page 95: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/95.jpg)
expression transitoire
ou
expression stable
![Page 96: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/96.jpg)
expression transitoire
![Page 97: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/97.jpg)
expression stable
Nécessite une intégration génomique
rétrovirus intégration fortuite
Événement rare
sélection
![Page 98: Gain de fonction, perte de fonction. hypothesis-driven research Ce gène active la division cellulaire Puce à ADN Discovery-driven research Comparaison](https://reader035.vdocuments.mx/reader035/viewer/2022062307/551d9dc4497959293b8e20e6/html5/thumbnails/98.jpg)
promoteur 1 promoteur 2
ADN x polyA
polyA
Gene de résistanceantibiotique
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expression inductible
tTA-NLSP CMV
SV40 polyA
P CMVmintetO tetOtetO tetO tetO tetO Gene x
Tet repressor/TA
doxycycline
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expression inductible
rtTA-NLSP CMV
SV40 polyA
P CMVmintetO tetOtetO tetO tetO tetO Gene x
Reverse Tet repressor/TA
doxycycline