FUNDAMENTOS BIOLGICOS DE INMUNOHISTOQUMICA

Es una tcnica que permite localizar molculas en los tejidos mediante el empleo de anticuerpos (protenas del tipo inmunoglobulina G). La tcnica, por la gran especifcidad alta afinidad que tienen los anticuerpos para reconocer molculas unirse a ellas, permite detectar cantidades nfimas de molculas presentes en el tejido. La inmensa mayora de tcnicas de inmunohistoqumica pueden aplicarse a tejido fijado e incluido en parafina con buenos resultados, siempre que la fijacin tisular, su procesado e inclusin se realicen adecuadamente ya que la utilizacin de mtodos o reactivos inapropiados en el tratamiento tisular previo puede producir prdidas de antigenicidad que limitarn o impedirn la obtencin de resultados fiables.Para la tcnica de inmunohistoqumica, sern necesarios los anticuerpos monoclonales (puros) que slo podrn obtenerse a travs de tcnicas in vitro de una clula hbrida llamada KibridoPa. El hibridoma es la fusin de linfocitos B productores de anticuerpos y una lnea celular de mieloma (clulas B cancergenas) que no producen inmunoglobulinas propias y tienen una expectativa de vida infinita. La primera fase en la produccin de anticuerpos monoclonales (o mononucleados) consiste en la seleccin del antgeno (mediante fusin celular), stos son purificados parcialmente, vgr por disgregacin subcelular, lavado con un disolvente apropiado (elucin) de bandas protenicas a partir de geles de acrilamida o enriquecimiento cromotogrfico. Posteriormente, se inyecta al animal experimental con los antgenos seleccionados, esperando que cada linfocito produzca un anticuerpo especfico. Los linfocitos se extraern del bazo o del torrente sanguneo, y tendrn un carcter Portal que, al fusionarlo con un mieloma asumen un carcter inPortal. La clula resultante con una nueva carga genmica, guarda su especificidad en la produccin de anticuerpos homogneos (y nicos, de all su denominacin de

Anticuerpos monoclonales) al originar un clon de nuevas clulas, con la rapidez del mieloma. Los Ac monoclonales poseen las siguientes ventajas frente a los policlonales: 9Homogeneidad en el proceso de obtencin, consiguindose siempre Ac idnticos. 9No requiere usar Ag purificados. 9Los cultivos pueden proporcionar el Ac de forma ilimitada.

Tecnica inmunohistoquimica