fiktív példa az elisa, western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán...
DESCRIPTION
Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában. 1. . . . . 35 éves hölgy két időleges partnerrel. HIV pozitív? Ha igen, megfertőzte-e a partnereit?. B. C. A. 2. 2. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/1.jpg)
11
Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában
![Page 2: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/2.jpg)
222
A
B
C
35 éves hölgy két időleges partnerrel. HIV pozitív? Ha igen, megfertőzte-e a partnereit?
![Page 3: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/3.jpg)
333
ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent
Assay)• HIV-ellenes IgG kimutatása
• igen érzékeny, de nem 100% specifikus
• reprodukálható, általában mind a HIV-1 , mind a HIV-2 kimutatására alkalmas
• az újabb ELISA-k a fertőzéstől számított 3 hónapon belül képesek az antitestek kimutatására
![Page 4: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/4.jpg)
444
A HIV ellenanyag tesztek
Standard vérmintaA) ELISA- Enzyme Linked Immunosorbent AssayB) Western Blot (megerősíti az ELISA-t, spcifikusabb)
![Page 5: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/5.jpg)
555
HIV antigéneket kötünk az ELISA lemezhez
1. Coating
![Page 6: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/6.jpg)
666
A szabadon maradt felületeket indifferens féhérjével fedjük
2. blokkolás
![Page 7: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/7.jpg)
777
I. antitest: a vizsgálandó szérummal inkubáljuk a lemezt
![Page 8: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/8.jpg)
888
A le nem kötődött antitesteket kimossuk
![Page 9: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/9.jpg)
999
II. antitest: enzimmel konjugált anti-humán immunglobulinnal inkubáljuk a lemezt
![Page 10: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/10.jpg)
101010
A le nem kötődött antitesteket kimossuk
![Page 11: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/11.jpg)
111111
Szubsztrátot adunk a lemezhez
![Page 12: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/12.jpg)
121212
Szubsztrátot adunk a lemezhez
![Page 13: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/13.jpg)
131313
A másodlagos antitesthez kapcsolt enzim reagál a szubsztráttal és színes termék keletkezik
![Page 14: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/14.jpg)
141414
A színreakció eredménye mérhető adott hullámhosszon.
![Page 15: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/15.jpg)
151515
Pozitív ELISA Negatív ELISA
![Page 16: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/16.jpg)
161616
Az ELISA alapján ki HIV pozitív? (lásd a 405 nm-en mérhető optikai denzitás értékeket)
Negatív kontroll Pozitív kontroll A B C 0.153 1.689 0.055 0.412 1.999
- + C B A A B C
![Page 17: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/17.jpg)
171717
Mit mértünk ELISA-val?A. A HIV-ellenes antitesteketB. A HIV-vel szembeni antigéneketC. A betegben keringő szabad HIV vírustD. A HLA-val szembeni antitesteket
![Page 18: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/18.jpg)
181818
Mi lett volna a következménye annak, ha az anti-humán Ig-konjugátumot nem mostuk volna ki a szubsztrát hozzáadása előtt? A. Nem fejlődött volna ki színreakció a szubsztrát hozzáadásakor B. Az ELISA reakció ekkor is rendben működött volnaC. Minden lyuk egyformán erős színreakciót mutatott D. A és B.
C
![Page 19: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/19.jpg)
191919
Mi lett volna annak a következménye, ha szérum mintát elfelejtettük volna a lemezhez adni, minden más lépést azonban rendben elvégeztünk volna? A. Az anti-human Ig-konjugátum nem kötődött volna, így mosással eltávolítottuk volna.B. Az anti-human Ig-konjugátum aspecifikusan kötődött volna a lemezhez.C. Az optikai denzitás értékekek megközelítették volna a pozitív kontrollt minden lyukbanD. A és C.
A
![Page 20: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/20.jpg)
202020
Az ELISA eredmény megerősítésére a HIV diagnosztikában Western blot módszert alkalmazunk
![Page 21: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/21.jpg)
212121
Ha nincs csík: Negatív
p31 vagy p24 és és gp160 vagy gp120 csíkok egyidejűleg: Pozitív
van csík, de nem teljesülnek a pozitivitás kritériumai átmeneti
1, HIV+ szérum (pozitív kontroll) 2, HIV- szérum (negatív kontroll) A B C
HIV pozitívak az A, B és C személyek?
![Page 22: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/22.jpg)
2222
AIDS betegség• A betegekben a CD4 pozitív T sejtek száma lecsökken.• Normál: 500-1600/mm3, AIDS-ben néha 0-ra is leesik. • Egészségesekben a CD4/CD8 sejt arány ~ 0.9 -1.9• A CD4+ sejtek %-os aránya a limfociták közt 20- 40%• -> ha <14%, komoly immunkárosodást jelez
Szükség van a CD4+ és CD8+ sejtek arányának meghatározására. Milyen módszert alkalmazzunk?
Immunhisztokémiát?
Kvantitatív elemzésre az áramlási citometria alkalmas: lásd következő gyakorlat
![Page 23: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/23.jpg)
232323
Limfocita analízis áramlási citometriával
23%
4%
60%
FITC-CD8101100 102 103 104
FITC-CD8101100 102 103 104
PE
-CD
4100
101
102
103
104
51%
PE
-CD
4
C személy A és B személyek
![Page 24: Fiktív példa az ELISA, Western blot és áramlásos citometria alkalmazására a humán diagnosztikában](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022081603/56814bdc550346895db8b428/html5/thumbnails/24.jpg)
242424
A
B
C
- + C B A A B C
CA B
FITC-CD8
PE
-CD
4
+ -AIDSHIV + (?)HIV -