* CONCENTRACION DE PARASITOS POR FLOTACION

Y SEDIMENTACION *

OBJETIVO: El alumno aprendió a desarrollar y comprender el fundamento de la técnicas de flotación (faust) y sedimentación (ritchie) para diagnostico de parásitos intestinales diferenciando que se puede observar en cada uno y que sustancias se utilizan para una mejor observación en cada técnica.

INTRODUCCÍÓN:

Método Faust (flotación):

Permite comprobar la existencia de quistes de protozoos, huevos o larvas de helmintos, aún en pequeñas cantidades. El fundamento se basa en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor, para hacer flotar objetos menos densos, como los huevos y quistes de parásitos, Se basa en que los quistes y/o huevos de los parásitos flotan en la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc (33%), cuya densidad es 1.180 mg/dl. en la superficie del liquido. La técnica de con sulfato de zinc es muy buena para la recuperación de quistes de protozoarios y de la mayoría de los huevos de helmintos.

Es poco eficaz para huevos pesados como los de Tremátodos o como los huevos no fértiles de Ascaris con una densidad de 1.110mg/dl. ya que tienen una densidad mayor a la del sulfato de zinc es por eso que no es muy efectiva esta técnica por que no flotan estos huevos. Tampoco es muy efectivo para muestras de heces ricas en grasas.

Método Ritchie (sedimentación):

Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios .La sedimentación de parásitos intestinales en heces se logra por centrifugación

ligera o por gravedad del material fecal, conduciendo a la recuperación de todos los protozoarios, huevos y larvas, especialmente huevos de trematodos pero la desventaja de estas técnicas consiste en que los preparados contienen más residuos que los procesados por flotación.

Las modificaciones al método de Ritchie utilizar acetato de etilo .La técnica de sedimentación concentra los parásitos presentes en la muestra fecal. La técnica incluye tamizar primeramente las heces para separar los residuos grandes, tratar con formol para matar y preservar los organismos, y adicionar un solvente como éter o acetato de etilo para disolver las grasas.

 MATERIAL Y METODOS:

Método de Faust, con ZnSO4:

1. Con un abatelenguas se toma aproximadamente 1 g de heces (el tamaño de un cacahuate) y se deposita en un vasito que contenga de 10 a 15 ml de agua de la llave y se mezclan con un aplicador de madera.

2. La suspensión se filtra a través de una coladera o malla y se recibe el fltrado en un tubo de centrífuga de 14 ml. Se le adicionan 1-2 ml de éter. Se tapa con un tapon de hule y se agita vigorosamente. Se adiciona agua hasta que la muestra quede a 1cm por debajo del bordo superior del tubo.

3. Se centrifugua por 45 segundos a 2500 rpm. Debe romperse a cualquier acúmulo que pudiera haberse formado en la parte superior y se decanta el sobrenadante.

4. Se Añaden 2 a 3 ml de agua de la llave y se agita para resuspender el sedimento. Se resuspende nuevamente el sedimento, adicionando agua de la llave poco a poco, hasta que quede la muestra a 1 cm del borde superior del tubo. Se centrifuga de nuevo.

5. Se decanta el sobrenadante y se agregan al sedimento 2 a 3 ml de sulfato de zinc (dens. 1.180. Lo cual equivale a 330 g de sulfato de zinc en 1 litro de agua), moviendo con un aplicador para resuspender. Se agrega más sulfato de zinc hasta que llegue a unos 0.5 cm del borde superior del tubo.

6. Se centrifuga a 2300 rpm durante 2 min. y no no debe sacarse el tubo de la centrífuga.

7. Sin sacar el tubo de la centrífuga, se recojen algunas gotas del material que flota en la superficie con una asa de platino (se debe cuidar que el asa no penetre demasiado bajo la superficie) o con una pipeta Pasteur.

8. Se depositan las gotas en un portaobjetos y se agrega una gota de lugol. Enseguida se completa la preparación con un cubreobjetos.

9. Se observa al microscopio, a 10X y 40X. Es posible el hallazgo de protozoarios y helmintos.

10. Compare con la literatura para identificar los parásitos.

Método del Formol-éter (Método de Ritchie):

1. Coloque en un vasito 1 g de heces (aprox. el tamaño de un cacahuate) mediante la ayuda con un abatelenguas y adicione 10-12 ml de solución salina fisiológica. Mezcle con un aplicador de madera y homogenice.

2. Filtre la suspensión a través de un colador o malla y reciba el filtrado en un tubo de centrífuga de vidrio de 14 ml

3. Centrifugue 1 min a 1500 r.p.m. Elimine el sobrenadante y resuspenda en solución salina.

4. Repita el paso anterior, dos o tres veces para lavar, resuspendiendo el sedimento en solución salina y homogenizando con un aplicador, para obtener un sedimento más limpio.

5. Agregue al sedimento 10 ml de formol al 10% en solución salina, mezcle y deje en reposo durante 5 min.

6. Añada 3 ml de éter y agite vigorosamente 30 segundos.

7. Centrifugue 1 min a 1500 r.p.m.

8. Después de centrifugar, se observan 4 capas en orden descendente.

1) éter y lípidos en la superficie

2) un tapón de restos fecales 3) formaldehido 4) sedimento en el fondo del tubo conteniendo los parásitos.

9. Se decanta la muestra y se conserva el sedimento. Se le adiciona unas gotitas de lugol y se homogeniza. Se toma una gotita con una pipeta Pasteur y se monta entre porta y cubre. Se observa a 10 y a 40 X.

RESULTADOS:

Metodo de sedimentacion

Método de flotación

DISCUSION: No todos los equipos encontraron parásitos en sus muestras esto se puede

deber a que al tomar la muestra la tomaron mal o el tiempo de centrifugación fue demasiado

por lo que los parásitos no aparecieron en unas mesas. En el método de ritchie pudo haber

fallado el tiempo de centrifugación y en el de faust de que parte se tomo la muestra pues

recordemos que es una técnica de flotación.

CONCLUSION:

El método de Faust, con ZnSO4, es uno de los más utilizados, aunque es poco eficaz para huevos pesados como los de Trematodos o como los huevos no-fértiles de Áscaris. Tampoco es muy efectivo para muestras de heces ricas en grasas. esta técnica se basa en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor, para hacer flotar objetos menos densos, como los huevos y quistes de parásitos, los cuales son colectados en la superficie del liquido y observados

al microscopio. No es optima para huevos de helmintos ya que van a tener menos densidad que la solución de ZnSO4 por lo que no van a flotar.

El método de ritchie es un método que nos ayudo a encontrar parásitos en el fondo debido a la sedimentación que hicimos es muy eficaz para huevos de helmintos .demostró ser muy rápida y eficaz.

Biblografia

“Manual de prácticas de Microbiología I, II y Parasitología”, Evangelina Olivas, Primer Edición 2001, Cd Juárez Chih.

http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/parasitologia/parasitosis_humanas.html fecha de consulta 9 julio 2010

http://www.bvs.sld.cu/revistas/mciego/vol7_01_01/articulos/a6_v7_0101.html fecha consulta 10 julio 2010

Universidad Autónoma de Ciudad Juárez Instituto de Ciencias Biomédicas

Programa Medico Cirujano

Maestro: M. en C. Rosalba Murillo Quero

CONCENTRACION DE PARASITOS POR FLOTACION (FAUST) Y SEDIMENTACION (RITCHIE).Practica #7 y #8 Laboratorio de ParasitologíaHorario de 12-1 pm

Martha Cristina Ochoa González 102805