farmacologÍa proyecto

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS Facultad de Farmacia y Bioquímica

2012

Estudio Fitoquímico y Farmacológico de la

actividad Hipoglicemiante de la

¨Pasuchaca¨Cátedra de Farmacología II

C á t e d r a d e F a r m a c o l o g í a i i

Estudio Fitoquímico y Farmacológico de la actividad Hipoglicemiante de la ¨Pasuchaca¨

marc

Página 1

Campos Salazar, Brayan Cáceres Azaña, Carlos Gamarra Domínguez, Eliane Pérez Guerrero, Fiorella Sagua Ticona, Henry Yataco Lázaro, Marcela


INDICEI. RESUMEN/SUMMARY Pág.II. INTRODUCCIÓN Pág. III. OBJETIVO GENERAL Pág.IV. OBJETIVOS ESPECIFICOS Pág.V. GENERALIDADES Pág.

V.1. CLASIFICACIÓN BOTÁNICA Pág.V.2. PATOLOGÍA A TRATAR Pág.

VI. PARTE EXPERIMENTAL Pág.VI.1. EQUIPOS Y MATERIALES Pág.

VI.1.1.1. Material Biológico.VI.1.1.2. Equipos de Laboratorio.VI.1.1.3. Material de Laboratorio.VI.1.1.4. Material Farmacológico y Reactivos.

VI.2. METODOS Y TECNICAS PROCEDIMENTALES Pág.VI.2.1.1. Recolección y desecación del material botánico.VI.2.1.2. Obtención del extracto.VI.2.1.3. Preparación de los animales.VI.2.1.4. Determinación del efecto.

VII.RESULTADOS Pág.

VII.1. Ensayo de solubilidadVII.2. Análisis Cualitativo Fitoquímico del extractoVII.3. Resultado de la determinación del efecto Hipoglicemiante

VIII. DISCUSIÓN Pág.IX. CONCLUSIONES Pág.X. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Pág.XI. ANEXOS Pág.

Farmacología II Página 2


RESUMEN

En el presente estudio prospectivo, transversal y experimental tiene como objetivo determinar la valoración del efecto hipoglicemiante del extracto hidroalcohólico de Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca) en ratas normales y con hiperglucemia inducidas con glucosa 3g/Kg de peso corporal a partir de una solución glucosada al 50%. Este proyecto fue llevado acabo en el departamento de Farmacología II de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos entre los meses de octubre y diciembre del 2012, en donde fueron empleadas 20 ratas Albinas con un peso promedio de 223g y de 8-9 semanas de edad, provenientes del Bioterio de la Universidad Nacional Agraria la Molina; para el estudio experimental se lograron formar 4 grupos de 5 rata cada uno y en donde se evidenció una glicemia basal promedio de 85.7mg/dl, los tres grupos restantes fueron empleados para la comparación del efecto hipoglicemiante de la Pasuchaca en concentraciones de 500mg/Kg, 250mg/Kg y 5mg/Kg Glibenclamida respectivamente, el cual fue administrado por vía oral en una sola dosis a través de una cánula intragástrica. Los niveles de glicemia fueron medidos posteriormente mediante un glucómetro Accu-Chek Active de laboratorios Roche a los 30, 60,120 y 180min luego de haber administrado la primera dosis.

Según los resultados obtenidos se pudo evidenciar que la actividad hipoglicemiante para el extracto de Pasuchaca 250mg/Kg de peso es efectiva pero muy lenta en comparación con la de 500mg/Kg y la Glibenclamida por lo que se recomienda valorar la actividad hipoglicemiante de esta planta a largo plazo y en un modelo de diabetes mellitus no insulino-dependiente.

Palabras clave: hipoglicemiante, glicemia, cánula intragástrica, diabete mellitus.

SUMMARY

In this prospective study, experimental cross and aims to determine the valuation of the hypoglycemic effect of hydroalcoholic extract of Geranium ruizii Hieron (Pasuchaca) in normal rats with induced hyperglycemia and body weight 3g/kg glucose from a glucose solution 50%. This project was carried out in the Department of Pharmacology II, Faculty of Pharmacy and Biochemistry, National University of San Marcos between October and December 2012, where they were used 20 albino rats with an average weight of 223g and 8-9 weeks of age, from the Vivarium of the Universidad Nacional Agraria La Molina, for the experimental study is able to form 4 groups of 5 rats each and where they showed an average basal glucose 85.7mg/dl, the three remaining groups were used for comparison of the hypoglycemic effect in concentrations Pasuchaca 500mg/kg, respectively 250mg/Kg and 5mg/Kg Glibenclamide, which was administered orally as a single dose via intragastric cannula. Glucose levels were subsequently measured using a glucometer Accu-Chek Active from Roche at 30, 60.120 and 180min after the first dose administered.



According to the results it was evident that the hypoglycemic activity of the extract weight 250mg/Kg Pasuchaca is effective but very slow compared to that of glibenclamide 500mg/kg and so it is recommended to assess the hypoglycemic activity of this plant long term and in a model of diabetes mellitus non-insulin dependent.

Keywords: hypoglycemic, glucose, intragastric cannula, diabetes mellitus.



INTRODUCCIÓN



OBJETIVO GENERAL

Determinar el efecto hipoglicemiante del extracto hidroalcohólico de Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca) al ser administrado por vía oral en ratas hiperglucemicas inducidas con glucosa.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Determinar la diferencia significativa de los niveles de glicemia en ratas inducidas a diabetes tipo II con glucosa tras la administración de dosis de 500 mg y 250mg por kg de peso del extracto hidroalcohólico Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca ) en tiempos específicos.

Determinar la eficiencia y eficacia de el Geranium ruizii Hieron como hipoglicemiante oral frente a los fármacos de uso común como la Glibenclamida en la terapia de la Diabetes tipo II.

HIPOTESIS

H1: Existe efecto hipoglicemiante del extracto hidroalcohólico de Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca) al ser administrado por vía oral en ratas hiperglucemicas inducidas con glucosa.

H0: No Existe efecto hipoglicemiante del extracto hidroalcohólico de Geranium Ruizii Hieron (Pasuchaca) al ser administrado por vía oral en ratas hiperglucemicas inducidas con glucosa.


DIVISIÓN: MAGNOLIOPHYTA

CLASE: MAGNOLIOPSIDA

SUB CLASE: ROSIIDAE

ORDEN: GERANIALES

FAMILIA: GERANIACEAE

GÉNERO: Geranium

ESPECIE: Geranium ruizzi Hieron


I. GENERALIDADESI.1. CLASIFICACIÓN BOTÁNICA

A. Nombre CientíficoLa muestra vegetal (Planta con flores) ha sido estudiada y clasificada como Geranium ruzzi hieron.

B. Clasificación botánicaTiene la siguiente posición taxonómica, según es Sistema de Clasificación de Cronquist(1988).

C. Descripción

Planta, acaule, silvestre que crece en forma espontánea; de porte herbáceo, con las hojas membranosas. Raíz típica o pivotante. Hojas basales

pubescentes, sostenidas por pecíolos de 21 mm de largo, alternas, palmatipartidas, con 7 lóbulos, dentibuladas. Los lóbulos ampliamente cuneado-abovados. Los 3 lóbulos medios, tridentados, y los 4 lóbulos laterales, bidentados, con estipulas pubescentes concrecentes, corolinas, de 13 mm de largo. Inflorescencia en umbela; pedúnculo floral de 10 mm de largo.

Flor períantica, diclamídea, heteroclamídea, hermafrodita, actinomorfa. Presenta en su base 5 verticilos de brácteas corolinas.



D. Origen y HabitadSSe encuentra en altitudes por encima de los 3,000 metros sobre el nivel del mar y se desarrolla sobre los

lugares soleados.Su presencia se ha reportado en los departamentos de Cerros de Pasco (Yanahuanca, Palca, Tambo pampa, Oxapampa.) Ancash, Apurímac, La Libertad, Huancayo, Junin y Cajamarca, hacia la cordillera de los Andes, entre los 2,500 y 3,500 m.s.n.m.

E. Partes usadasToda la planta seca: raíz, hojas y flores.

F. Componentes activosGlucósidos cianogenéticos, alcaloides, antraquinónicos, anticianicos, saponínicos, gomas,

mucílagos, taninos, saponinas, clorofila, grasas, esencias, ceras, resinas, flavonoides,

carotenoides, azúcares reductoras.

G. Usos

Principalmente es un hipoglucémico, antidiabético, depurativo, astringente atonías, blenorragias, llagas, diarreas, faringitis., gripes, hemorragias hemoptisis, inflamaciones, menorragias, resfriados, ulceras bucales y de las mamas.

Esta planta posee acción



Hipoglicemiante, por lo que se recomienda su uso en casos de diabetes; si bien aún no se ha podido determinar el mecanismo de acción de sus componentes pero se cree que aumenta la utilización periférica de la glucosa o incrementa la captación de la glucosa por el músculo e inhibe la gluconeogénesis hepática aumentada en los diabéticos o aumenta la recepción de la insulina a sus receptores, considerando que la insulina no ejerce efecto para el transporte de la glucosa sobre ciertas células como las del epitelio tubular del riñón, nos hace suponer que la Pasuchaca impide la reabsorción de glucosa a través del epitelio tubular, de ser así, se eliminarían mayores concentraciones de glucosa en la orina que las presentadas en las condiciones fisiológicas de los diabéticos.

H. Uso tradicional

I. Preparación y Dosis

Para el tratamiento de la diabetes se realiza un cocimiento en el cual se debe hervir 3 tazas de agua, luego agregar 15 gramos de la planta (Pasuchaca), dejar reposar 5 minutos. Tomar una taza cada 4 horas


UsosDiarreas crónicas: Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10

minutos, 3 tazas al día.

Inflamación de la garganta:

Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10 minutos, 3 tazas al día.

Úlceras bucales: Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10 minutos, 3 tazas al día.

Hemorragias: Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10 minutos, 3 tazas al día

Cólera infantil: Cólera infantil: Cocimiento de las hojas secas por 5 a 10 minutos, 3 tazas al día.


J. Toxicidad

Se han efectuado estudios de toxicidad aguda, administrando extracto acuoso por vía oral mediante sonda metálica a ratones con ayuno de 14 horas; primero se buscó por tanteo la dosis aproximada (20, 30 y 100 g/Kg. p.c.) que determina el efecto de un pequeño número de animales, luego se procedió a hacer un ensayo de animales (10 ratones por grupo) observándose la mortalidad en cada dosis empleada por un período de 7 días, sobre cuyos resultados se practicaron los cálculos estadísticos a fin de determinar la DL50 exacta.

La dosis de 20 g/Kg. p.c. administrada al primer grupo no produjo muertes, en el segundo con la dosis de 30 g/Kg. p.c. se produjo el 10% de muertes. El porcentaje de mortalidad aumenta con el incremento de la dosis de 50 g/kg p.c. La DL50 corresponde a 35 g/Kg. p.c. Después de cada administración de la droga y especialmente con las mayores dosis se observó primero la fase de excitación con aumento de la frecuencia respiratoria, por aproximadamente 20 minutos, luego viene una fase de depresión disminuyendo la actividad espontánea y la reacción de alarma, y aumento de la pasividad; posteriormente algunos experimentaron convulsiones seguidos de una muerte lenta. En la disección de los ratones se observó distensión intestinal.

K. Recomendaciones y Contraindicaciones

No se recomienda consumir durante el tratamiento con alimentos azucarados ni bebidas alcohólicas.

Tampoco se recomienda el uso en mujeres embarazadas, en periodos de lactancia y en niños menores de 3 años.



I.2. PATOLOGIA A TRATAR

La Diabetes Mellitus es un grupo de enfermedades metabólicas caracterizadas por hiperglicemia a consecuencia de defectos en la secreción y/o en la acción de la insulina. La hiperglicemia crónica se asocia en el largo plazo daño, disfunción e insuficiencia de diferentes órganos especialmente de los ojos, riñones, nervios, corazón y vasos sanguíneos.

En 1997 la Asociación Americana de Diabetes (ADA), propuso una clasificación que está vigente en donde se incluyen 4 categorías de pacientes y un 5º grupo de individuos que tienen glicemias anormales con alto riesgo de desarrollar diabetes:

Diabetes Mellitus tipo 2:

Caracterizada por insulino-resistencia y deficiencia (no absoluta) de insulina. Es un grupo heterogéneo de pacientes, la mayoría obesos y/o con distribución de grasa predominantemente abdominal, con fuerte predisposición genética no bien definida (multigénica). Con niveles de insulina plasmática normal o elevada, sin tendencia a la acidosis, responden a dieta e hipoglicemiantes orales, aunque muchos con el tiempo requieren de insulina para su control, pero ella no es indispensable para preservar la vida (insulino-requirentes).

Tratamiento Farmacológico


Diabetes Mellitus tipo 1

Diabetes Mellitus tipo 2

Diabetes Gestacional

Intolerancia a la glucosa y glicemia de ayunas alterada

Otros tipos específicos de Diabetes


Tratamiento No Farmacológico

El tratamiento de la diabetes mellitus se basa en tres pilares: dieta, ejercicio físico y medicación. Tiene como objetivo mantener los niveles de glucosa en sangre dentro de la normalidad para minimizar el riesgo de complicaciones asociadas a la enfermedad. En muchos pacientes con diabetes tipo II no sería necesaria la medicación si se controlase el exceso de peso y se llevase a cabo un programa de ejercicio físico regularmente. Sin embargo, es necesaria con frecuencia una terapia sustitutiva con insulina o la toma de fármacos hipoglicemiante por vía oral. Hoy en día el descubriendo de de los efectos hipoglicemiante en nuevas especies botánicas nos permite el uso y consumo de ciertas plantas como complemento homeopático, una de ellas es la Pasuchaca La Pasuchaca es una planta silvestre que contiene, según los homeópatas, sustancias como taninos, sapoínas, clorofila, grasas, esencias, resinas, carotenoides y azúcares reductores, que ayudan en tratamientos de ciertos tipos de diabetes y que se administra en especial a personas para complementar los tratamientos con insulina.

II. PARTE EXPERIMENTAL

El presente trabajo se realizó en el laboratorio de la Cátedra de Farmacología de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.


Fig 20 : Tratamiento farmacológico en la Diabetes Mellitus tipo II


El método utilizado para la investigación fue inductivo deductivo; con un tipo de investigación experimental a ciego simple y con un diseño experimental, longitudinal, prospectivo.

En el proceso de trabajo se indujo a las ratas a Hiperglucemia con una dosis elevada de glucosa a partir de una solución glucosada al 50%, posteriormente se administró el extracto de Pasuchaca con el objetivo de observar el efecto Hipoglicemiante del extracto en estudio.

1.1. EQUIPOS Y MATERIALES

1.1.1. Material Biológico

Se eligieron como animales de experimentación 20 ratas albinas, provenientes del Bioterio de la Universidad Nacional Agraria la Molina las cuales estuvieron bajo condiciones de humedad, luz y temperatura controladas (humedad 60 + 10%, temperatura 23 + 1ºC y periodos de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad).Fig 1 y 2

Se formaron 4 grupos de 5 ratas cada uno a los cuales se le indujo Hiperglucemia (Diabetes tipo II) mediante la administración de Glucosa vía oral 3g/Kg de peso corporal a partir de una solución glucosada al 50%; al mismo tiempo a las demás ratas se le administró la dosis del extracto correspondiente vía oral mediante cánulas intragástricas y fueron tomadas muestras adicionales a los 30, 60,120 y 180 minutos de administrado los tratamientos.

Doce horas antes del experimento los animales fueron privados de alimentos y se les permitió libre acceso al agua. Se tomó las primeras muestras de sangre y se determinaron los niveles de glicemia (normo glicemia de 70-100mg/dL)



1.1.2. Equipos de Laboratorio

A. Glucómetro

Para determinar los niveles de glucosa en sangre de ratas se usó un kit comercial, el glucómetro Accu-Chek Active de laboratorios Roche. Fig.3

El medidor de la glucosa en sangre está concebido y aprobado para analizar muestras de sangre capilar Fig.4 entera fresca (p.ej., sangre extraída de la yema de los dedos o de sitios alternativos como en las colas de ratas) fuera del cuerpo (uso como diagnóstico in vitro); la muestra de sangre se obtuvo luego de hacer una pequeña incisión en el ápice de la cola hasta obtener una gota homogénea y aplicar directamente sobre la tira reactiva del glucómetro.


Fig 1 y 2: Ratas albinas provenientes del Bioterio de la Universidad Nacional Agraria la Molina. Condiciones de humedad, luz y temperatura controladas (humedad 60 + 10%, temperatura 23 + 1ºC y periodos de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad).

Fig. 3: Glucómetro Accu-Chek Active de laboratorios Roche.


B. Molino de cuchillas

El empleo de e este equipo tiene como objetivo disminuir el tamaño de las partículas de la droga vegetal y adecuarlas a la etapa siguiente de extracción. A menor tamaño de partícula mayor superficie de contacto, en este

caso específico también cabe mencionar que mientras las partículas de la droga vegetal se encuentren parcialmente destruidas facilitará la disolución de los constituyentes celulares en el medio de extracción.Los molinos de cuchilla poseen en la cámara de molienda, laminas afiladas rotativas y fijas. El número de malla acoplado en el molino fue igual a 20 (Fig. 5) lo cual nos brindó un polvo moderadamente grueso.


Toma de muestra

Fig. 4 Toma de muestra

Fig. 5 : Molino de cuchillas malla Nº20


C. Balanza analítica

Instrumento de medida más usados en laboratorio y de la cual dependen básicamente todos los resultados analíticos.

Las balanzas analíticas (Fig. 6) ofrecen valores de precisión de lectura de 0,1 µg a 0,1 mg,

están bastante desarrolladas de manera que no es necesaria la utilización de cuartos especiales para la medida del peso. Aún así, el simple empleo de circuitos electrónicos no elimina las interacciones del sistema con el ambiente. De estos, los efectos físicos son los más importantes porque no pueden ser suprimidos.

D. Balanza para roedores

Balanza con contenedor para animales (Fig.7), es una balanza electrónica que opera de acuerdo al principio de compensación de fuerza electromagnética, aplicable a desplazamiento o torques donde se combina la exactitud de los componentes mecánicos con los sistemas automáticos de lectura.

E. Cocinilla eléctrica de laboratorio

Instrumento de laboratorio que consiste en un alambre de alta resistencia enrollado varias veces alrededor de una placa rectangular de hierro. El alambre, que al conducir la


Fig. 6: Balanza analítica

Fig. 7: Balanza electrónica para roedores con

contenedor.

Fig. 8: Cocinilla eléctrica


electricidad adquiere un brillo blanco anaranjado, esta situado en el centro de una pantalla parabólica que concentra y difunde el calor en un haz. (Fig. 8)

1.1.3. Material de Laboratorio

Durante todo el estudio se emplearon los siguientes materiales:


Material de Vidrio Volumen CantidadFrascos grandes de vidrio oscuro con tapa 2L 2Frascos pequeños de vidrio oscuro con tapa 40 ml 3Pipeta 5ml , 10 ml 2Embudo de vidrio - 1Beaker 200 ml 2Placa Petri - 4

Material de Plástico Volumen CantidadColador de plástico - 1Lavatorio de plástico - 2Jeringas 2ml 2Pizeta 250ml 1

Otros materialesPapel craft - 4Papel filtro - 2Cuchillo - 1Tijera - 2Pinza - 1Cánula intragástricas - 1Jaula para ratones - 2

DIVISIÓN: MAGNOLIOPHYTA

CLASE: MAGNOLIOPSIDA

SUB CLASE: ROSIIDAE

ORDEN: GERANIALES


1.1.4. Material Farmacológico y Reactivos

Material Farmacológico CantidadExtracto de tallo seco de

Pasuchaca 2Kg

ReactivosAlcohol 70% 2L

Reactivo de Molish V gotasReactivo de Fehling V gotas

Reactivo de Benedict V gotasReactivo de Brow V gotas

Reactivo de Tollens V gotasReactivo de Dragendorff V gotas

Reactivo de Meyer V gotas

1.2. MÉTODOS Y TECNICAS PROCEDIMENTALES

1.2.1. Recolección y desecación del material botánico.

El material botánico fue recolectado en la provincia de Carabaya, departamento de Puno (mayor a 3,500 msnm). Se recolectó aproximadamente 3 kilos de la planta.Se realizó el Sistema de Clasificación de Cronquist (1988) para la muestra vegetal (planta con flores). La clasificación taxonómica es la siguiente:



En nuestro proyecto se trabajó con los tallos de Pasuchaca. Estos fueron sometidos a los proceso de lavado, selección, desinfectado, secado, trozado, molienda, extracto. Fig. 9


Secado

Trozado

Extracto

Nombre vulgar: “Pasuchaca”.

Determinado por: Blgo. Severo Baldeón.


1.2.2. Obtención del extracto

A fin de determinar la presencia de los principales grupos de compuestos químicos presentes, tanto libres como en la forma de glucósidos se procedió a preparar un extracto hidroalcohólico para la obtención de los elementos activos de los tallos de Pasuchaca; se sabe que los extractos hidroalcohólico son preparados con alcohol y agua y tienen la ventaja que el alcohol puede disolver muchas sustancias activas de las plantas medicinales, y por ser volátil, la evaporación es mucho más rápida, por lo que no se requiere tenerlo demasiado tiempo al calor para su concentración.

Se pesaron 106.2 g de polvo de tallo de Pasuchaca medianamente grueso obtenido por molienda y se dejó macerar por 11 días en 600ml del solvente hidroalcohólico (proporción 3:1 agua-alcohol); pasado los 11 días el extracto fue filtrado. El volumen de filtrado obtenido se distribuyó en 4 placas petri y se llevó a la estufa por 2 día para volatilizar el solvente, por ultimo se procedió al raspado obteniendo una cantidad de extracto seco de tallo de Pasuchaca igual a19g el cual fue incorporado en un recipiente ámbar previamente rotulado. Fig. 10




Se pesaron 106.2 g de polvo de tallo de Pasuchaca.

Macerar por 11 días en 600ml del solvente hidroalcohólico (proporción 3:1 agua-alcohol).

Filtrado.

El filtrado se distribuyó en 4 placas petri y se llevó a la estufa por 2 día para volatilizar el solvente.

Raspado

Obteniendo del extracto seco de tallo de Pasuchaca igual a19g.


1.2.3. Preparación de los animales

Se emplearon como animales de experimentación 20 ratas albinas con un peso promedio de 223g y de 8-9 semanas de edad, provenientes del Bioterio de la Universidad Nacional Agraria la Molina las cuales estuvieron bajo condiciones adecuadas y buenas prácticas de laboratorio.

Se formaron 4 grupos de 5 ratas cada uno (2machos y 3 hembras) a los cuales se le indujo Hiperglucemia (Diabetes tipo II) mediante la administración de Glucosa vía oral 3g/Kg de peso corporal a partir de una solución glucosada al 50% Fig. 11.

Doce horas antes del experimento los animales fueron privados de alimentos y se les permitió libre acceso al agua. Se tomó las primeras muestras de sangre y se determinaron los niveles de glicemia (normo glicemia de 70-100mg/dL)

Grupo Dosis Nº de ratasA Glucosa 5 ratasB Glucosa + Pasuchaca 500mg/Kg 5 ratasC Glucosa + Pasuchaca 250mg/Kg 5 ratasD Glucosa + Glibenclamida 5mg/Kg 5 ratas


Fig. 10: Diagrama de flujo II para la obtención de extracto seco de tallos de Pasuchaca.

Glucosa3g glucosa1Kg peso

X1 glucosa200gX1 = 0.6g

Glucosada al 50%50g100mL

0.6g X2X2= 1.2ml

Peso en ratasPara una rata de 200g1.2ml

PESO DE CADA RATAX3


1.2.4. Determinación del efecto Hipoglicemiante

Para determinar el efecto Hipoglusemiantes de la Pasuchaca se administró al Grupo A, B, C y D glucosa 3g/Kg, al Grupo B al mismo tiempo se le administró 500mg/Kg de peso del extracto de Pasuchaca, al Grupo C 250mg/Kg de peso del extracto de Pasuchaca y al Grupo D 5mg/Kg de peso de Glibenclamida correspondientemente vía oral mediante cánulas intragástricas y fueron tomadas muestras adicionales a los 30, 60,120 y 180 minutos de administrado los tratamientos.

Para determinar los niveles de glucosa en sangre de ratas se usó un kit comercial, el glucómetro Accu-Chek Active de laboratorios Roche. La muestra de sangre se obtuvo luego de hacer una pequeña incisión en el


Fig. 11: Cálculo de glucosa


ápice de la cola hasta obtener una gota de sangre homogénea y aplica directamente sobre la tira reactiva del glucómetro. Fig. 12

III. RESULTADOS

3.1. Ensayo de solubilidad

Se realizó utilizando solventes en función a su polaridad creciente (etanol y agua destilada); para lo cual se pesó 1 gramo del extracto hidroalcohólico seco y se colocó en tubos de ensayo, a los cuales se les agregó 2 ml de cada solvente para verificar su solubilidad.

Agua ++Alcohol ++++

3.2. Análisis Cualitativo Fitoquímico del extracto


Coloque la tira reactiva en el dispositivo.

Realice una pequeña incisión en el ápice de la cola de la rata

hasta obtener una gota de sangre homogénea.

Cuando aparece el símbolo de un reloj de arena

coloque una gota de sangre sobre la

tira reactiva.

A continuación aparecerá el

resultado de la prueba.

Fig. 12: Determinación de la actividad hipoglicemiante


Se realizaron pruebas cualitativas para determinar la presencia de metabolitos secundarios presentes en el extracto hidroalcohólico de tallo de Pasuchaca

3.3. Resultado de la determinación del efecto Hipoglicemiante Control de Glucemia en Ratas

Grupo Código Peso (g)

GlucemiaInducción

con Hipoglicemiantes Tiempo (min)Basal

(mg/dL)Glucosa

(ml) (mililitros) 30' 60' 120' 180'

Negras

I 280 100 1.68 159 132 108 104II 252 88 1.51 112 97 88 90III 224 71 1.34 106 98 94 85IV 187 71 1.12 84 73 60 80V 170 82 1.02 105 98 94 90

Rojas

I 250 94 1.5 0.5 103 122 124 107II 250 84 1.5 0.5 113 115 106 99III 181 76 1.086 0.362 118 153 131 102IV 223 71 1.338 0.446 101 100 97 78V 176 80 1.056 0.352 140 124 105 98

Verdes

I 297 76 1.78 1.188 + 0.594 130 122 100 76II 227 70 1.36 0.908 + 0.454 108 103 103 98III 157 66 0.84 0.628 + 0.314 126 104 98 91IV 206 75 1.236 0.824 + 0.412 110 101 87 74V 175 74 1.074 0.716 + 0.358 118 115 94 86

Azul

I 152 111 0.91 0.76 67 71 60 67II 254 107 1.52 1.27 65 62 49 51III 222 112 1.33 1.11 70 55 50 64IV 236 108 1.42 1.18 58 57 49 70V 194 98 1.164 0.97 67 53 45 41


Fig. 13: Análisis Fitoquímico del extracto de Geraniun ruizii Hieron

COMPONENTES RESULTADOGrasas y aceites +Alcaloides +Lactonas y Cumarinas ++Triterpenos y/o esteroides -Catequinas +Resinas -Azucares reductores -Saponinas de tipo esteroidaly triterpenoide +Fenoles y taninos +Aminoacidos libres o aminas -Quinonas -Flavonoides +Antocianidinas +Principios amargos +


Cuadros comparativos por grupos de estudio


30' 60' 120' 180'0

20406080

100120140160180

NEGRAS

Ratón 1Ratón 2Ratón 3Ratón 4Ratón 5

Gluc

emia

mg/

dL

30' 60' 120' 180'0

20406080

100120140160180

ROJAS


Gluc

emia

mg/

dL

Fig. 15: Grupo A (Glucosa)

Fig. 16: Grupo B (Glucosa+500mg/KgPasuchaca)

NEGRAS(Glucosa) 30' 60' 120' 180'

Ratón 1 159 132 108 104Ratón 2 112 97 88 90Ratón 3 106 98 94 85Ratón 4 84 73 60 80Ratón 5 105 98 94 90

ROJAS(Glucosa+500mg/KgPasuchaca) 30' 60' 120' 180'


VERDES(Glucosa+250mg/KgPasuchaca) 30' 60' 120' 180'




30' 60' 120' 180'0

20

40

60

80

100

120

140

VERDES


Gluc

emia

mg/

dL

Fig. 17: Grupo C (Glucosa+250mg/KgPasuchaca)

AZUL(Glucosa+5mg/Kg Glibenclamida) 30' 60' 120' 180'



Cuadro General

La figura 19 refleja los efectos del extracto de Pasuchaca en los niveles de glucosa de taras albinas normoglicémicas. Cada valor representa la medida del grupo y las diferentes estadísticas se establecen con el valor basal (glicemia =0)


30' 60' 120' 180'0

1020304050607080

AZUL


Gluc

emia

mg/

dL

0 30 60 120 1800

20

40

60

80

100

120

140

Grupo A (Glucosa3g/Kg)Grupo B(Glucosa+500mg/Kg Pasuchaca)Grupo C (Glucosa+250mg/Kg Pasuchaca)Drupo D(Glucosa+5mg/Kg-Glibenclamida)

Glice

mia

(mg/

dL)

Fig. 18: Grupo D (Glucosa+5mg/Kg Glibenclamida)


IV. DISCUSIÓN

En el presente trabajo se han determinado varios puntos a discutir, en primer lugar el método que se empleó para la inducción de las ratas a hiperglucemia; como se sabe existen dos métodos muy convencionales de realizar este estudio y el primero se basa en la administración vía intraperitoneal de Haloxano 130mg/Kg de peso 1; sin embargo este método no fue aplicado en este diseño debido al gran daño que este puede producir a nivel de las células pancreáticas generando la destrucción de estas en menos de 5 día de administrada la dosis, punto parte que obtendríamos un tipo de Diabetes I dependiente de insulina, es por ello que se indujo a hiperglucemia mediante la administración de glucosa 3g/Kg de peso generando Diabetes de tipo 2 en las ratas de experimentación (modelo experimental de diabetes mellitus no insulino-dependiente)

Una vez inducida las ratas a hiperglucemia se administraron las dosis respectivas de 500mg, 250 mg del extracto hidroalcohólico de la Pasuchaca y 5mg/Kg de Glibenclamida, al observar los resultado se pudo evidenciar y corroborar la actividad hipoglicemiante de la Pasuchaca ya que hubo una disminución progresiva en las cifras de glicemia así como también lo demuestran otros trabajos experimentales ya realizados anteriormente2; sin embargo este no presentó una diferencia significativa en comparación con la Glibenclamida, hipoglicemiante oral de la clase de las sulfonilureas utilizado en el tratamiento de la Diabetes mellitus tipo 2.Con respecto al extracto hidroalcohólico del Geranium ruizii a dosis de 250 mg/kg, este demostró ser mucho más efectivo que el de 500mg/Kg ya que logró mejorar el nivel de glucosa en un 60% en el grupo experimental, con respecto a su glicemia inicial después de los 30min de administrada la primer a dosis, esta diferencia podría deberse a algunos errores en la determinación y preparación de las concentraciones del extracto.

Según los resultados obtenidos el Geranium ruizii podría ser considerado como una terapia natural o un complemento (de los fármacos utilizados) contra la diabetes mellitus de tipo II, por presentar una actividad hipoglicemiante; sin embargo se recomienda mejorara las concentraciones a administrar de este extracto.



V. CONCLUSIONES

Se demostró el efecto hipoglicemiante de Geraniun ruizii Hieron en rata Albinas inducidas a hiperglucemia mediante glucosa.

El extracto hidroalcohólico de Pasuchaca en las dosis utilizadas de 500mg y 250 mg por Kg de peso presentó una una diferencia poco significativa en comparación con la Glibenclamida.

El mayor efecto hipoglicemiante del extracto Geranium ruizii Hieron se evidenció a una dosis de 250mg/Kg de peso con una disminución progresiva en las cifras de glicemia a los 30min de administrado el extracto.



VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS



VII.ANEXOS


farmacologÍa proyecto

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