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TP extraction des enzymes et synthèse enzymatique de
glucosides
Année Scolaire 2012/2013
TS
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EXTRACTION DES ENZYMES ET SYNTHESE ENZYMATIQUE DE GLUCOSIDES
Aide fournie par les élèves du GLFL à l’Université de Grenoble
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Protocole expérimental
_ Extraction des enzymes
_ Réaction de glycolisation
_ Identification des produits de synthèse
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Groupe 1
Fruit choisi : Orange
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Groupe 3
Fruit choisi : Amande
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Groupe 4
Fruit choisi : Grenadine
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Groupe 10
Fruit choisi : Poivron rouge
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Groupe 11
Fruit choisi : Raisins
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Groupe 12
Fruit choisi : Avocat
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Groupe 13
Fruit choisi : Fève
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Groupe 14
Fruit choisi : Citron
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Groupe 15
Fruit choisi : Pomme
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Extraction des enzymes
Il appartient à la famille Solancae
Fruit choisi: Poivron rouge
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Filtrer sous pression réduite et mettre à l’étuve (40 ⁰C) pour éliminer l’acétate d’éthyle résiduel. On obtient ainsi une poudre de pépins dégraissé
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_ Fabriquer une solution aqueuse S contenant 1 mL d’eau et 9 mL d’alcool benzylique.
_ Boucher et agiter.
_ Mélanger dans un tube à essais environ 1 g de poudre de pépins dégraissée, 0,3 g de glucose et 5 mL de la solution S.
_ Boucher et agiter.
_ Placer le tube à essai dans un bain marie à 45 °C pour 48 h.
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Identification des produits de synthèses (Chromatographie sur couche
mince)
Et après la révélation à l’UV, puis au
permanganate de potassium (KMnO₄)
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VOICI LES RÉSULTATS !
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Groupe 3
Fruit choisi : Amande
Alcool Benzylique
Mélange réactionel
Glucose + Eau
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Groupe 10
Fruit choisi : Poivron rouge
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Groupe 12
Fruit choisi : Avocat
Alcool Benzylique
Mélange réactionel
Glucose + Eau
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Les raisins:
Éluant utilisé : Mélange d’acétate d’éthyle et d’éthanol en proportion 9/1 Mélange réactionnel : 0,16g de poudre d’amande, 0.24g de glucose, 5 Ml de solution d’eau et d’alcool benzylique
Apparition d’un nouveau produit
synthétisé mais qui n’as pas migré.
Choisir un autre éluant.
Tache trop grosse pour la solution
d’acide benzylique et d’acétate d’éthyle : il faut diluer encore plus .
Résultats :
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MR +
glucose
MR +
acétate
d’éthyle
+ alcool
benzyliq
ue
Éluant utilisé : Mélange d’acétate d’éthyle et d’éthanol en proportion 7/3 Mélange réactionnel : 0,16g de poudre d’amande, 0.24g de glucose, 5 Ml de solution d’eau et d’alcool benzylique
La tache a migré donc l’éluant est plus
propice. Il semble que les taches les
plus marquées sont celles de l’alcool
benzylique et celles peu visibles sont
celles du nouveau produit.
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Les cas négatifs CAS DE LA POIRE:
RÉVÉLATION À LA LAMPE ULTRAVIOLETTE:
•PRÉSENCE DE DEUX TACHES À LA MÊME HAUTEUR
UNIQUEMENT
• PAS DE TACHE CORRESPONDANTE AU GLUCOSE
• PAS DE NOUVEAUX PRODUITS FORMÉS
Révélation au permanganate de potassium:
Une seule tache marron apparaît correspondant à la tache de l’alcool benzylique et l’acétate d’ éthyle dans le mélange réactionnel.
Il n’y a pas de nouveaux produits formés.
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Des résultats imprévisibles
Un minimum de rigueur est nécessaire lors de la réalisation de la CCM
Présence d’une tache en dessous
de la ligne de dépôt Présence d’un nombre anormal
de taches
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Cas Positifs Cas négatifs
Amande sèche? Ananas
Orange? Fève
Pomme? Citron
Raisin? Grenade
Poire
Poivron Rouge
Pomelo
Prune
Tomate
Avocat?
Fraise?
Conclusion
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Merci