OBJETIVOS

Praktika/Prctica: Extraccin de ADN humano

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Data/Fecha: KURTSOA/CURSO:

File/Fitxategia: Fecha/Data: 05/05/2010Pgina 1 de 5Biologa/biologia

OBJETIVOS

Generales

1. Aplicar los conceptos, leyes, teoras y modelos aprendidos a situaciones reales y cotidianas.2. Utilizar con cierta autonoma destrezas investigativas, tanto documentales como experimentales (plantear problemas, formular y contrastar hiptesis, realizar experiencias, etc.), reconociendo el carcter de la ciencia como proceso cambiante y dinmico.3. Desarrollar actitudes que suelen asociarse al trabajo cientfico tales como la bsqueda de informacin exhaustiva, la capacidad crtica, la necesidad de verificacin de los hechos, el cuestionamiento de lo obvio y la apertura ante nuevas ideas.4. Explicar expresiones cientficas del lenguaje cotidiano segn los conocimientos biolgicos adquiridos, relacionando la experiencia diaria con la cientfica.5. Comprender la naturaleza de la biologa y sus limitaciones, as como sus complejas interacciones con la tecnologa y la sociedad, valorando la necesidad de trabajar para lograr una mejora de las condiciones de vida actuales.Especficos1. El objetivo fundamental de esta prctica es utilizar unas sencillas tcnicas para poder extraer el ADN de un tejido animal y por el aspecto que presenta confirmar su estructura fabrilar.

2. A partir de la longitud enorme de las fibras tambin se confirma que en el ncleo el ADN se encuentra replegado.

3. Realizar una tincin especfica de ADN (con un colorante bsico) y observar al microscopio las fibras de ADN.

FUNDAMENTO TERICOLa extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar (romper la membrana plasmtica) las clulas mediante un detergente, vacindose su contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y separado de l por accin del detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampn y detergente, para lo cual se utiliza alcohol etlico.

MATERIAL NECESARIO

Material general de laboratorio Un vaso de precipitados. (250 ml)

Un tubo de ensayo

Una probeta

Una varilla de vidrio Balanza digital Papel de filtro

Un portaobjetos

Un cubreobjetos Microscopio

Productos qumicos y reactivos Clulas de la mucosa bucal.

Detergente lquido para vajillas (Mistol)

Cloruro sdico.

Alcohol etlico de 96.

Bicarbonato clcico.

Agua destilada.

Azul de metileno.

PROCEDIMIENTO1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes:

120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.

1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.

5 g de bicarbonato sdico.

5 ml de detergente lquido.2. Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca para eliminar restos de alimentos. Luego con ayuda de la lengua y la saliva arrastrar el mayor nmero posible de clulas de descamacin de la mucosa bucal.3. Mezclar en un tubo de ensayo 1 ml de saliva con 5 ml del tampn y agitar suavemente para no producir espuma.4. Colocar 5 minutos en un bao de agua a 37 C para acelerar el proceso.

5. Aadir, poco a poco, la misma cantidad de alcohol que la que aadiste entes de disolucin tampn; inclinando el tubo y vertiendo sobre la pared para que no mezclen las dos partes.

6. Agitando suavemente el tubo de ensayo, veremos cmo aparecen unos filamentos blancos disueltos en el alcohol.7. Introducir una varilla de vidrio en la parte del alcohol hacindola rotar, siempre, en la misma direccin, haciendo que se adhieran los filamentos blancos que se observan.

8. Pon una porcin de esos filamentos en un portaobjetos, y adele una gota de azul de metileno.

9. Cubre la preparacin con un cubreobjetos y obsrvala al microscopio con un objetivo de 40.

INFORME DE LABORATORIO

Felicidades! Acabas de completar la extraccin de tu ADN!

Ahora que has extrado exitosamente tu ADN, ests listo para contestar las siguientes preguntas.

Por qu hemos utilizado detergente?

Para qu hemos utilizado el cloruro sdico? Y bicarbonato?El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota en la parte superior. Debido a que se han formado dos capas separadas, el ADN y el resto de materia orgnica tienden a separarse. Quin se queda en la capa acuosa, la del fondo? Y en la capa superior, el alcohol?

Qu es esa cosa pegajosa?

La cosa blanca y pegajosa es ADN puro o una mezcla de cidos nucleicos?

Por qu decimos que el azul de metileno es un colorante especfico para el ADN?

Por qu crees que es necesario dejar libres los ncleos?

Al aadir un detergente se produce un medio hipertnico. Que efecto tiene dicho medio en las membranas del ncleo?

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