extraccion de pigmentos fotosinteticos

7/27/2019 Extraccion de Pigmentos Fotosinteticos

1/13

INTRODUCCION

La fotosntesis (proceso que permite a los vegetales a adquirir la materia y la

energa que necesitan para desarrollar sus funciones vitales) se lleva a cabo

por el aspecto en las hojas y en los tallos jvenes de pigmentos, capaces de

captar la energa lumnica.

Entre los distintos mtodos que existen para separar y adquirir esos pigmentos

se encuentra el de la cromatografa; una tcnica que accede a la separacin de

las sustancias de una mezcla, teniendo una afinidad diferente por el disolventeen el que se encuentran; al introducir una tira de papel en esa mezcla, el

disolvente arrastra con distinta velocidad a los pigmentos segn la solubilidad

que tengan y los separa, permitiendo identificarlos perfectamente segn su

color.

Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes tonalidades:

clorofila A (verde intenso), clorofila B (verde claro), caroteno (naranja) y

xantofila (amarillo).

La extraccin y reconocimiento de estos pigmentos es interesante para estudioy conocimiento de sus propiedades.


2/13

EXPERIENCIA N 3

EXTRACCION DE PIGMENTOS FOTOSINTETICOS

I. OBJETIVOS Conocer sobre las tcnicas de cromatografa.

Saber la importancia que tiene las tcnicas de cromatografa en la

separacin de pigmentos de las plantas.

identificar los tipos y el comportamiento de los pigmentos observados,

como su textura, su color; de acuerdo al solvente utilizado y saber que

estamos trabajando con la acelga y el geranio.

II. FUNDAMENTO TEORICO

En 1906, el botnico Ruso M. Tswett realiz un experimento que condujo aldescubrimiento de lo que hoy conocemos como cromatografa. Coloc un

extracto de pigmentos vegetales en la parte superior de una columna de vidrio

rellena de carbonato de calcio (CaCO3). Al agregar ter, observ que la mezcla

original se separaba en diversas bandas coloridas que descendan a travs de

la columna a diferentes velocidades.

La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los

componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos

contrapuestos.

a) Retencin. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por unafase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido anclado a un soporte

slido.

b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por

una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas.

La caracterstica que distingue a la cromatografa de la mayora de los mtodos

fsicos y qumicos de separacin, es que se ponen en contacto dos fases

mutuamente inmiscibles. Una fase es estacionaria y la otra mvil. Una muestra

que se introduce en la fase mvil es transportada a lo largo de la columna quecontiene una fase estacionaria distribuida. Las especies de la muestra

experimentan interacciones repetidas (repartos) entre la fase mvil y la fase

estacionaria. Cuando ambas fases se han escogido en forma apropiada los

componentes de la muestra se separan gradualmente en bandas en la fase

mvil. Al final del proceso los componentes separados emergen en orden

creciente de interaccin con la fase estacionaria. El componente menos

retardado emerge primero, el retenido ms fuertemente eluye al ltimo. El

reparto entre las fases aprovecha las diferencias entre las propiedades fsicas

y/o qumicas de los componentes de la muestra.


3/13

El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de la

fase estacionaria, impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de elucin. La

mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionara, mientras que la mvil

atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta

velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con

ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la

muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase mvil y la fase

estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase

estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario

los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven

con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de

la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse

cualitativa y/o cuantitativamente.

TIPOS DE CROMATOGRAFADependiendo de la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase mvil se

pueden distinguir distintos tipos de cromatografa

a) Cromatografa slido-lquido. La fase estacionaria es un slido y lamvil un lquido.

b) Cromatografa lquido-lquido. La fase estacionaria es un lquidoanclado a un soporte slido.

c) Cromatografa lquido-gas. La fase estacionaria es un lquido no voltilimpregnado en un slido y la fase mvil es un gas.

d) Cromatografa slido-gas. La fase estacionaria es un slido y la mvilun gas.

Segn el tipo de interaccin que se establece entre los componentes de la

mezcla y la fase mvil y estacionaria podemos distinguir entre.

a) Cromatografa de adsorcin. La fase estacionaria es un slido polar

capaz de adsorber a los componentes de la mezcla mediante interacciones detipo polar.

b) Cromatografa de particin. La separacin se basa en las diferenciasde solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y

mvil, que son ambas lquidas.

c) Cromatografa de intercambio inico. La fase estacionaria es un slidoque lleva anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se puede

intercambiar por aquellos iones presentes en la fase mvil.


4/13

Cromatografa en capa fina.

La cromatografa en capa fina se basa en la preparacin de una capa, uniforme

de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio,

aluminio u otro soporte. La fase mvil es lquida y la fase estacionaria consiste

en un slido. La fase estacionaria ser un componente polar y el eluyente ser

por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los

componentes que se desplacen con mayor velocidad sern los menos polares.

La mezcla a analizar se deposita a una pequea distancia del borde inferior de

la placa y se introduce en una cubeta que contiene la fase mvil, que asciende

a lo largo de la placa por capilaridad, desplazando a los componentes de la

mezcla a diferentes velocidades, lo que provoca su separacin. Cuando el

frente del disolvente se encuentra prximo al extremo superior de la placa esta

se saca y se visualiza.

La relacin entre la distancia recorrida por un compuesto y por el disolventedesde el origen se conoce como Rf (Factor de retencin).


5/13

La bsqueda del eluyente requiere probar con varios disolventes de diferente

polaridad o con mezclas.

Cromatografa en papel.

Es la ms sencilla de las tcnicas, pero slo nos dar resultados cualitativos.

Est casi en desuso. El mtodo se basa en un mecanismo de reparto, y

consiste en depositar una pequea cantidad de muestra en el extremo de una

tira de papel de filtro, que se deja evaporar. Luego se introduce la tira en una

cubeta que contenga el disolvente, de manera que ste fluya por la tira por

capilaridad.

Cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extremo, se retira elpapel y seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen

color propio se vern las manchas de distinto color separadas. Cuando los

componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de

revelado.

Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la eleccin

del disolvente y la del papel de filtro.

III.


6/13

MATERIALES Y PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

acelga

geranio

mortero

alcohol de 96

2 frascos mermeleros

4 gasas

algodn

4 tubos de ensayo13x15cm

2 tubos de ensayo 2x20cm

placa Petri

papel watman n3

cloroformo

bencina

acetona

regla

cuchillo

balanza analtica

IV. PROCEDIMIENTO

Pesar 200gr del material vegetal a usar.

Separar la hoja de la nervadura, desecharla, y picar el resto para luego

colocarlo en un mortero y moler el material vegetal completamente

agregndole 50ml de alcohol hasta hacer una masa, procurar que la masa

no sea pastosa.

El siguiente paso es el de la filtracin para lo cual usamos el frasco

mermelero que tendr como filtro una aglomeracin de gasa, algodn ygasa; en ese orden.

Para evitar prdidas de pigmento en el filtro, humedecer este con un poco

de alcohol.

Agregar lo molido al frasco y dejar filtrar.

o El filtrado obtenido se dividir para los siguientes recipientes:

o En 4 tubos de ensayos de 15 x 150 (dos de acelga y dos de geranio)

o En la placa Petri

o En 2 tubos de ensayo de 20 x 200o Lo sobrante en el frasco mermelero.

Luego cortar el papel Whatman en un cuadrado mediano, doblar e introducir

en el frasco mermelero que contiene el filtrado. Otro papel semejante

colocarlo verticalmente en la placa Petri. Esperar y ver los cambios.

De la misma manera preparar papel filtro del tamao de los tubos de 20 x

200.


7/13

En los tubos de ensayo pequeos con el lquido filtrado, agregar cloroformo,

bencina y acetona respectivamente. Observar lo que sucede con cada uno

de ellos.

Luego usamos los dos tubos de ensayo de 2x20cm, en uno de ellos

echamos cloroformo y en el otro acetona. Hacer un tapn con el algodnpara evitar que los lquidos se evaporen. Introducir el papel Whatman

cortado anteriormente, previamente agregndole dos gotas del pigmento en

la punta del papel. Esto servir como referente del punto de inicio.

Luego marcar con lapicero el frente de corrida que es la distancia que

recorre el solvente. Evaluar en la ecuacin conocida y hallar Rf.


8/13

V. RESULTADOS

Para los tubos de ensayo de 20 x 200

Utilizando en pigmento del geranio

En el tubo con bencina

Distancia total: 12.8cm

Clorofila b

Distancia de recorrido: 4 cm

Clorofila a

Distancia de recorrido: 5.2 cm

Carotenos

Distancia de recorrido: 6 cm

En el tubo con cloroformo

Distancia total: 10.7cm

Clorofila b


9/13

Pigmentos en presencia de acetona, cloroformo, bencina y alcohol

Geranio en presencia de bencina, acetona y cloroformo:

Se observa que estos tres lquidos son no miscibles es decir no se

combinan, esto debido a que poseen distintas densidades: acetona

0.79 g/cm3, cloroformo 1,483 g/cm3y bencina 0.8 g/cm3.

De acuerdo a sus densidades en que se formaron las tres fases

distintas, estando la acetona arriba, luego la bencina y por ltimo el

cloroformo.Para el otro tubo de ensayo tambin se observa la presencia de 4

fases tambin porque el cuarto componente es un lquido no

miscible con el ter, la acetona y el cloroformo. La densidad del

alcohol 0.72 g/cm3, podemos interpretar entonces que el lquido que

est encima en el segundo tubo es el alcohol.
http://es.wikipedia.org/wiki/Gramohttp://es.wikipedia.org/wiki/Cent%C3%ADmetro_c%C3%BAbicohttp://es.wikipedia.org/wiki/Cent%C3%ADmetro_c%C3%BAbicohttp://es.wikipedia.org/wiki/Cent%C3%ADmetro_c%C3%BAbicohttp://es.wikipedia.org/wiki/Gramo


10/13

VII. CONCLUSIONES

Al hacer las mezclas de los productos bencina, cloroformo y acetona;

sobre la acelga y el geranio que estaban colocados en el tubo de

ensayo, se pudo observar las diferencias de densidades, ya que era

notorio, por los que se notaba en los cambios de fase.

La destilacin simple y fraccionada son tcnicas bsicas de separacin

de mezclas, que son necesarias para poder separar sustancias en su

estado puro cuando normalmente se encuentran mezcladas con otras

sustancias en la naturaleza. Es importante entender cmo se realizan

estos mtodos ya que sern de gran utilidad en un futuro.

En cuanto a la cromatografa en papel, es uno de los mtodos ms

usados, por lo cual es necesario aprender y entender cmo realizarlo

correctamente. al realizar la prctica, pudimos observar cmo los

diferentes pigmentos de la clorofila se separaron, y con esto se permiti

identificarlos.

Se pudo observar en los tubos de ensayo que la combinacin de un

pigmento con bencina forma una fase, lego al agregarle cloroformo hubomezcla pero poco a poco empez a separarse los lquidos debido a que

no son miscibles. De la misma manera sucedi al agregarle la acetona y

el alcohol, de manera que se obtuvieron 4 fases.


11/13

VIII. ANEXOS

Cortado y pesado de las hojas

Machacado y filtrado


12/13

Pigmento en presencia de acetona, bencina, cloroformo y alcohol. Presencia de

cuatro fases


13/13

IX. BIBLIOGRAFIA

o Raymond, CHANG. Qumica. 10a Edicin. Editorial Mc. Graw Hill.

Mxico D.F 2010.856 pgs.o Lumbrera editores. Anlisis de principios y aplicaciones. Tercera edicin.

Editorial Lumbreras. 729 pgs.

o http://fraymachete-fq.blogspot.mx/2008/11/destilacin-fraccionada.html>.

o http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia>.

o file:///F:/%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%2

0carpeta/Pr%E1ctica%20%236%20%20Destilaci%F3n%20simple%20y

%20Cromatograf%EDa%20en%20Papel%20-

%20Equipo%20Qu%EDmica%20Experimental%206.htm

o file:///F:/%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Alcohol%20-

%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htm


0carpeta/Cloroformo%20-



0carpeta/Cromatograf%EDa%20-



0carpeta/Cromatograf%EDa%20en%20papel%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htm


0carpeta/Cromatografia%20en%20papel..htm#.UkEbhjae3g8
http://fraymachete-fq.blogspot.mx/2008/11/destilacin-fraccionada.htmlhttp://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografiahttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Pr%C3%A1ctica%20%236%20%20Destilaci%C3%B3n%20simple%20y%20Cromatograf%C3%ADa%20en%20Papel%20-%20Equipo%20Qu%C3%ADmica%20Experimental%206.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Pr%C3%A1ctica%20%236%20%20Destilaci%C3%B3n%20simple%20y%20Cromatograf%C3%ADa%20en%20Papel%20-%20Equipo%20Qu%C3%ADmica%20Experimental%206.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Pr%C3%A1ctica%20%236%20%20Destilaci%C3%B3n%20simple%20y%20Cromatograf%C3%ADa%20en%20Papel%20-%20Equipo%20Qu%C3%ADmica%20Experimental%206.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Pr%C3%A1ctica%20%236%20%20Destilaci%C3%B3n%20simple%20y%20Cromatograf%C3%ADa%20en%20Papel%20-%20Equipo%20Qu%C3%ADmica%20Experimental%206.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Pr%C3%A1ctica%20%236%20%20Destilaci%C3%B3n%20simple%20y%20Cromatograf%C3%ADa%20en%20Papel%20-%20Equipo%20Qu%C3%ADmica%20Experimental%206.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Alcohol%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Alcohol%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Alcohol%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Alcohol%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cloroformo%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cloroformo%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cloroformo%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cloroformo%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20en%20papel%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20en%20papel%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20en%20papel%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20en%20papel%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatografia%20en%20papel..htm%23.UkEbhjae3g8http://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatografia%20en%20papel..htm%23.UkEbhjae3g8http://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatografia%20en%20papel..htm%23.UkEbhjae3g8http://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatografia%20en%20papel..htm%23.UkEbhjae3g8http://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatografia%20en%20papel..htm%23.UkEbhjae3g8http://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20en%20papel%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20en%20papel%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20en%20papel%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cromatograf%C3%ADa%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cloroformo%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cloroformo%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Cloroformo%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Alcohol%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Alcohol%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Alcohol%20-%20Wikipedia,%20la%20enciclopedia%20libre.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Pr%C3%A1ctica%20%236%20%20Destilaci%C3%B3n%20simple%20y%20Cromatograf%C3%ADa%20en%20Papel%20-%20Equipo%20Qu%C3%ADmica%20Experimental%206.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Pr%C3%A1ctica%20%236%20%20Destilaci%C3%B3n%20simple%20y%20Cromatograf%C3%ADa%20en%20Papel%20-%20Equipo%20Qu%C3%ADmica%20Experimental%206.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Pr%C3%A1ctica%20%236%20%20Destilaci%C3%B3n%20simple%20y%20Cromatograf%C3%ADa%20en%20Papel%20-%20Equipo%20Qu%C3%ADmica%20Experimental%206.htmhttp://f/%C2%A0/segundo%20ciclo/laboratorio%20de%20fisiologia/Nueva%20carpeta/Pr%C3%A1ctica%20%236%20%20Destilaci%C3%B3n%20simple%20y%20Cromatograf%C3%ADa%20en%20Papel%20-%20Equipo%20Qu%C3%ADmica%20Experimental%206.htmhttp://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografiahttp://fraymachete-fq.blogspot.mx/2008/11/destilacin-fraccionada.html

extraccion de pigmentos fotosinteticos

Documents