EXTRACCION DEL ADN

La extracción de ADN de una muestra celular

se basa en el hecho de que los iones salinos

son atraídos hacia las cargas negativas del

ADN, permitiendo su disolución y posterior

extracción de la celula. Se empieza por lisar

(romper) la célula mediante un detergente.

Lisis celular por

medio de

detergentes es

una manera más

suave de romper

la membrana

celular.

El detergente hace que la célula vacié su contenido

molecular en una disolución tampón en la que se

disuelve el ADN en ese momento, el tampón contiene

ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN,

carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor

proporción las proteínas asociadas al ADN, de gran

longitud, se habrán fraccionado en cadenas mas

pequeñas y separadas de el por acción del detergente.

Solo queda, por tanto, extraer el ADN de esa muestra de

tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol

isoamílico

Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y

vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su

composición con sencillas técnicas.

Observar la estructura fibrilar del ADN.

Establecer la relación entre el proceso de extracción y

propiedades quimico-fisicas del ADN.

REACTIVOS. MATERIAL BIOLÓGICO

Agua destilada

Sal común

Bicarbonato sodico

Detergente liquido o champú

Alcohol isoamilico a 0°C

Alcohol de 96°(isopropanol)

Alcohol de 90° (etanol)

Cebolla grandes frescas

Kiwis

Sumo de piña o de

papaya

Ajos

tomate

Preparar el tampón.

Mantener en un baño de

hielo.

Elegir la muestra que va a

proporcionar el ADN. Cortar en

cuadritos

Triturar la muestra con

un poco de agua .

Mezclar en un recipiente limpio

5 ml de triturado celular con 10

ml del tampón frio y agitar

vigorosamente durante 2mn.

Filtrar el liquido.

Retirar 5 ml del caldo molecular

a un tubo de ensayo y añadir

con pipeta 10 ml de alcohol

isoamílico enfriado a 0ºC.

Se introduce la punta de una varilla

estrecha hasta justo debajo de la

separación entre el alcohol y el tampón.

Remover la varilla hacia delante y hacia

atrás y poco a poco se irán enrollando los

fragmentos de mayor tamaño de ADN.

Añadir media cucharada pequeña de sal en medio vaso de agua. Añadir un chorro de líquido lavaplatos.

Incorpore con cuidado una cucharada

pequeña de etanol (alcohol 96º para las heridas)

helado en el vaso. El alcohol se debe de echar de

forma que vaya resbalando por las paredes del

vaso.

Una vez cogido el ADN trasládelo a un

vaso con alcohol para verlo mejor y para

mantenerlo.

Añadir al vaso entre media y una cucharada (2,5 ml) pequeña de la solución de sal y líquido de lavaplatos. Mueva la solución con una cucharilla despacio para que no se forme espuma.

Observe el punto en que se juntan las dos

capas. Atrapar los hilos de ADN con un

gancho de vidrio cucharilla) sumergiéndolo

con cuidado a través de las dos capas.

Poner aproximadamente una cucharada

grande (20 – 25 ml) de agua clara en la

boca. Enjuagar la boca con fuerza

moviendo el agua de una mejilla a otra

unos 30 segundos. Escupe el agua en

un vaso de agua limpio.

Se pudo comprobar mediante la técnica de extracción

y purificación el contenido de ADN, que las células

animales como vegetales contienen dentro de su

estructura una cantidad de información genética o

ADN.

El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es

ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de

ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo

enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden

que se unan al ADN.

ADN

alcohol

Zumo de piña y de papaya (contienen una enzima, la papaína, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN), está es una enzima que corta las proteínas se trata de romper lo que hay dentro de la célula dejando intacto el ADN al añadir el alcohol se consigue separar el ADN, que tiene mas afinidad con el alcohol que con el agua.

La saliva arrastra las células del epitelio que recubre las paredes internas de

la boca y que se están desprendiendo constantemente. La sal común

(NaCl), con esa concentración, es un medio hipertónico que provoca el

estallido de las células y los núcleos, quedando libre las fibras de cromatina.

El detergente cumple la misión de formar un complejo con las proteínas

histonas y separarlas del ADN

Al realizar adecuadamente el procedimiento sobre

extracción del ADN pudimos observar la estructura

fibrilar del ADN.

A través de este experimento pudimos analizar que

cada uno de los ingredientes tiene su propia función.

La solución de sal y jabón sirve para romper la

membrana plasmática y nuclear e incluso la pared

celular. El detergente elimina las proteínas que

degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para

precipitar el ADN.