GRAM POSITIVAS

Se conoce como bacterias gram positivas al grupo de bacterias que no posee una membrana externa capaz de proteger el citoplasma bacteriano, que tienen una gruesa capa de peptidoglicano y que presentan ácidos teicoicos en su superficie. Entre otras cosas, se distinguen especialmente por teñirse de azul oscuro o violeta por la tinción de gram aplicada en bacteriología para analizar muestras de laboratorio y es justamente esto último lo que explica su nombre de “gram positivas”, aunque cabe mencionar que la acepción grampositivas  también es correcta.

GRAM POSITIVA

 PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a la Medicina como apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias.

Consisten en distintos test químicos aplicados a medios biológicos, los cuales, conocida su reacción, nos permite identificar distintos microorganismos presentes.

Su sistema de funcionamiento consiste en determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo.

AGAR SANGRE DE CARNERO

Es un medio de cultivo enriquecido preparado para la recuperación y aislamiento de toda clase de microorganismos grampositivos y gramnegativos incluyendo aquellos decrecimiento exigente como Haemophilus spp y Listeria, El medio ha sido adicionado con sangre de cordero con el fin de establecer en los microorganismos características de hemolisis(alfa, beta ó gamma) que puedan ayudar a su identificación.

AGAR SANGREEl agar sangre es una combinación de un agar base

(agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina, también puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa también para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor de virulencia).

AGAR TRIPTICASA DE SOYA

Es un medio de cultivo recomendado para larecuperación y aislamiento de toda clase debacterias, grampositivas y gramnegativasaerobia

AGAR CHOCOLATE Es un medio de cultivo enriquecido y no

selectivo. Es una variante del agar sangre. Contiene glóbulos rojos, que han sido lisados por el suave calentamiento a 56 °C. Este agar se usa para el delicado y exigente crecimiento de bacterias respiratorias.Estas bacterias necesitan factores de crecimiento, como el NAD y hematina, componentes que podemos encontrar dentro de los glóbulos rojos; por lo tanto, un prerrequisito lógico para el crecimiento es la lisis de los glóbulos rojos. El agar se llama así debido a su parecido con el chocolate, pero no contiene nada de este.Debido a que este medio soporta muchos tipos de bacterias, no es muy útil para coprocultivos.

MANITOL

Principio Al utilizar el microorganismo al manitol como sustrato e incorporarlo al sistema Embden-Meyerhoff-Parnas, que tiene como productos finales ácidos que provocan la disminución del pH en el medio de cultivo, que se detecta mediante el viraje del indicador rojo de fenol a amarillo.Resultados - Positivo: cuando el indicador del medio vira a amarillo - Negativo: cuando conserva su color rojo

Prueba catalasa se usa con frecuencia, para diferenciar miembros de la familia Micrococcaceae de miembros de la familia Streptococcaceae.

Resultados - Positiva: Una prueba positiva esta dada por la aparición rápida y sostenida de burbujas o efervescencia. - Negativa: Unas pocas burbujas pequeñas después de 20 a 30 segundos se considera un resultado negativo.

CATALASA

Catalasa Positiva(+)Staphylococcus

Catalasa Negativa (-)Streptococcus

Detecta la producción deuna enzima que coagulalas proteínas de la sangre

•Se hace en medio quetiene plasma

•Típica de las Gram positivoS. aureus

PRUEBA DE COAGULASA

Principio La coagulasa es una proteína de composición química desconocida, que tiene actividad similar a la protombina, capaz de convertir el fibrinógeno en fibrina, lo que da como resultado la formación de un coágulo visible en los sistemas apropiados. Se utiliza para identificar Staphylococcus aureus de otras especies. La coagulasa se presenta en dos formas, ligada y libre y para determinarlas se utiliza dos procedimientos: en lámina y en tubo; si la prueba en lámina da positiva, no hay necesidad de hacer la prueba en tubo.

COAGULASA

Resultados - Positivo: La presencia de aglutinación o formación de grumos - Negativo: No se observa aglutinación, permanece emulsionada la colonia  Prueba en tubo (Coagulasa libre) Resultados - Positivo: La formación de un coágulo - Negativo: No se observa formación de coagulo, permanece líquido el plasma

Coagulasa Positiva (+)S. aureus

Coagulasa Negativa (-)S. epidermidisS. saprophyticus

PRUEBA DNASAPrincipio

Se basa en la presencia de la enzima termoestable DNAsa que es capaz de clivar los enlaces fosfodiester internos de la molécula de DNA. Para evidenciar la presencia de la enzima, se inunda el medio con ácido clorhídrico normal, el cual precipita la molécula del ácido pero no sus polímeros.

Resultados - Positivo: La formación de un halo transparente alrededor de la siembra indica presencia de DNAsa. - Negativo: La formación de un precipitado alrededor de la siembra indica ausencia de la enzima

• Detecta presencia de deoxiribonucleasa

• Prueba típica para cocos Gram positivo

• Típico de bacterias patógenas que rompen DNA en células del hospedero

• El tinte se pega a las cargas negativas del DNA; ausencia del tinte, ausencia DNA

• Producción de alcohol y 2,3 butanodiol en lugar de ácidos a partir de un azúcar• Especies de Enterobacter y Serratia y algunas Gram positivo como Bacillus• Se mide acetoína que es un precursor de 2,3 butanodiol• Luego de período de incubación se añade el reactivo de Barrit: alfa‐naftol 5% y KOH 40% en alcohol absoluto• Prueba positiva es la formación de un complejo rojo rosado

VOGES PROSKAUER

BACILOS

La mayoría de bacilos gram positivos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y pueden formar parte de la microbiota normal tanto en el hombre como en animales. Frecuentemente no son patógenos primarios para el hombre, aunque hay algunas especies virulentas e importantes en patología humana

Bacillus Bacilos Gram positivos esporulados, largos, gruesos y delgados con bordes recortados y pueden agruparse en cadena; aerobios estrictos, con excepción de algunas especies facultativas. Se encuentran distribuidos en suelo, aguas y vegetales y que porsus esporas logran mantenerse muchos años, aún en condiciones adversas.

Listeria Cocobacilos, Gram positivos, que se presentan aislados o agrupados en cadenas cortas; móviles a 22ºC mostrando un aspecto de “sombrilla”, pero inmóviles a 37ºC. Crecen bien sobre placas de agar sangre, produciendo colonias pequeñas, translúcidas, beta hemolíticas, similares a Streptococcus sp, pero el halo de hemólisis es pequeño en comparación con el tamaño de su colonia y a veces es necesario remover la colonia para visualizar la hemólisis. Se desarrollan a 30-37ºC pero crece a bajas temperaturas (4ºC), característica que le permite desarrollarse en alimentos refrigerados y producir infección por su consumo, convirtiéndose en el agente más importante por contaminación alimentaria. Son catalasa positiva y utilizan hidratos de carbono, como la glucosa, manosa y ramnosa, pero no el manitol. Hidrolizan la esculina. Son aerobios facultativos y crecen mejor con una atmósfera de CO2.

Erysipelothrix rusiopathiae Bacilos gram positivos, microarefílicos y exigentes. Carecen de la enzima catalasa negativos y producen H2S. Son inmóviles y no sintetizan cápsula ni esporos. Esta especie se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza; En humanos produce una celulitis “erisipeloide” caracterizada por una lesión eritematosa púrpura, dolorosa, no supurada y bastante pruriginosa. En general el proceso es autolimitado y rara vez causa enfermedad sistémica la enfermedad humana es poco frecuente y se limita a trabajadores de la pesca, de mataderos, carniceros, etc., configurando una enfermedad laboral. Presenta hialuronidasa y neuraminidasa como mecanismos de patogenicidad.

Corynebacterium Bacilos Gram positivos pleomórficos, la mayoría de las veces en forma de mazo y agrupados en empalizada o formando letras en V, Y, L o caracteres chinos; por su morfología típica se conocen como difteroides. Son facultativos pero hay algunas especies aerobias estrictas. Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza (suelo, agua, superficie de plantas) y forman parte de la microbiota normal de humanos y algunos animales

Los cocos gram positivos excluyendo las enterobacterias, son los microorganismos más frecuentemente aislados de muestras de pacientes y se han involucrado como agentes importantes en procesos de enfermedades infecciosas desde el año 1836. Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y forman parte de la flora microbiana normal de la piel y las mucosas del hombre y de animales. Las infecciones en el hombre se producen por contacto directo con individuos infectados o portadores sanos, o por penetración a través de piel y mucosas mediante objetos corto punzantes por heridas, trauma o procedimientos quirúrgicos o por la acción de toxinas producidas por cepas de algunas especies.

COCOS

Staphylococcus Los estafilococos son células esféricas gram positivas dispuestas en grupos semejantes a racimos de uvas en medios sólidos o en pares, cadenas o tétradas, en medios líquidos. Crecen bien en medios simples y de acuerdo a la especie producen diferentes pigmentos: blanco, amarillo y dorado y algunas de ellas producen beta hemólisis. Son catalasa positiva, inmóviles, no esporulados, con raras excepciones, no encapsulados y son aerobios o anaerobios facultativos.

Sthaphylococcus.Los estafilococos son cocos gram positivos que se agrupan en racimos. La especie S. aureus es la de mayor patogenicidad reconocida por su capacidad de producir enzimas extracelulares y toxinas. La enzima coagulasa permite diferenciar esta especie del resto de estafilococos de interés médico, como S. epidermidis y S. saprophyticus.

Especies: Existen 30 especies, las tres de más importancia clínica son S.aureus, S. epidermidis y S. saprophyticus.Clasificación:Staphylococcus coagulasa positiva: Staphylococcus aureusStaphylococcus coagulasa negativos (SCN):

• Staphylococcus epidermidis•Staphylococcus saprophyticus•Staphylococcus haemolyticus•Staphylococcus lugdunensis•Staphylococcus schleiferi•Staphylococcus intermedius•Staphylococcus hycus•Staphylococcus capitis

Características generales.Son células esféricas (cocos) grampositivas, que se agrupan de forma irregular, formando racimos de uva. También pueden observarse aislados, en cadenascortas y en pares. No son móviles, ni forman esporas. Son anaerobiosfacultativos y catalasa positiva.Cultivo: Crecen bien en los medios no selectivos como agar sangre de carneroagar soya-tripticasa con sangre de carnero 5% a temperatura de 37 ºC, en 18 a 24 horas, formando colonias redondas, lisas, elevadas, algunas son betahemolíticas y otras son pigmentadas, con variaciones desde color gris, blancohasta amarillo intenso

IdentificaciónSe utilizan diferentes técnicas y observación de los cultivoscomo: morfología de las colonias, pruebas fisiológicas o reacciones bioquímicasque incluyen la prueba de catalasa, coagulasa en tubo, prueba de novobiocina y otras.

Streptococcus Los estreptococos son células esféricas u ovaladas gram positivas dispuestas en pares o cadenas cortas o largas. Son más exigentes que los estafilococos, no crecen en medios simples, por el contrario requieren de factores de crecimiento como la sangre y sus derivados. Producen diferentes tipos de hemólisis, característica que permite clasificarlos en beta hemolíticos, alfa hemolíticos o no hemolíticos. No forman pigmentos, son catalasa negativa, inmóviles, no esporulados, con formación de cápsula variable. Son aerobios y anaerobios facultativos.

Clasificación:• Streptococcus pyogenes (Estreptococo β hemolítico del grupo A). Son βhemolíticos y susceptibles a la Bacitracina y producen hidrólisisdel1Lpirrolidonil- β -naftilamida (PYR positivos).• Streptococcus agalactiae (Estreptococo β hemolítico del grupo B). Son β hemolíticos y susceptibles a la optoquina, hidrolizan el hipurato de sodio,factor CAMP positivos y la mayoría Bacitracina negativos.• Streptococcus equisimilis (Estreptococo β hemolítico del grupo C).• Estreptococo β hemolítico del grupo C y G. Son β hemolíticos, sensibles aldisco de trimethoprim-sulfametoxazol (SXT), resistentes a Bacitracina,CAMP negativos.• Streptococcus pneumoniae (Neumococo). Son α hemolíticos, sensibles ala optoquina, solubles en bilis y en sales biliares.• Streptococcus viridans.son α hemolíticos.

Cultivo Crecen bien en los medios no selectivos como agar sangre de carnero, agar soya-tripticasa con sangre de carnero 5% a temperatura de 37 ºC, en 18 a 24 horas, formando colonias discoidales, grises, opalescentes, de bordes lisos oarrugados, pueden ser, α, β o γ hemolíticas lo que permite su identificación. En los estreptococos del grupo A las colonias suelen ser mucoides, mates o brillantes. Algunas especies requieren de un 5 a un 10% de CO2.Los estreptococos pueden producir enfermedades por su capacidad de multiplicarse en los tejidos e invadirlos o por la producción de sustancias extracelulares, como enzimas o toxinas. En los del grupo A se encuentran las enzimas como hialuronidasa, estreptocinasa, estreptodornasa y otras. Entre lastoxinas está la toxina eritrogénica, estreptolisina O y S.

Identificaciónse realiza por pruebas presuntivas o fisiológicas y por pruebas serológicas. Para ello se utilizan diferentes técnicas y observación de los cultivos como: morfología de las colonias, las pruebas fisiológicas o reaccionesbioquímicas incluyen la prueba de catalasa, Bacitracina, Optoquina, SXT,solubilidad en Bilis, test de CAMP, Hidrólisis del Hipurato de Sodio, prueba dePYR y otras.La identificación definitiva se realiza mediante la serología (para determinargrupos de Lancefield , B, C, F, G )

Enterococcus Los enterococos clasificados anteriormente como una especie de estreptococos, son células esféricas gram positivas dispuestas en pares o cadenas cortas. Al igual que los estreptococos, requieren de factores de crecimiento como la sangre y sus derivados. Son capaces de desarrollarse en medios que contienen altas concentraciones de NaCl (6.5%) y de bilis (40%). Pueden producir hemólisis de tipo alfa, beta o ser no hemolíticos. No forman pigmentos, son catalasa negativa, inmóviles, no esporulados, con formación de cápsula variable. Son aerobios y anaerobios facultativos.

CLASIFICACIÓN Enterococcus faecalis. Es la especie tipo. Enterococcus faecium. E. Avium E. Gallinarum y otros

Características generales. Son cocos grampositivos que se disponen de forma irregular, sueltos, encadenas o parejas, en medios líquidos. No poseen cápsulas ni forman esporas.Son inmóviles, anaerobios facultativos y catalasa negativa.

CultivoCrecen bien en medios como agar sangre de carnero 5%, agar soyatripticasa con sangre de carnero 5% a temperatura de 37 ºC en 18 a 24 horas, forman colonias más grandes que las de estreptococos del grupo A, menos opacas y a veces blanca brillantes como las de estafilococos, pueden ser, α o γ hemolíticos con excepción de algunas especies que pueden ser β hemolíticos. Pueden crecer a temperaturas entre 10 y 45 ºC y tolerar hasta 60 ºC, y a un pH 9,6. Además crecen en presencia de 6,5% de cloruro de sodio e hidrolizanla Bilis-Esculina y producen hidrólisis del L-pirrolidonil- β -naftilamida (PYR positivos). (ver flujograma para clasificar en género y especie).

INTEGRANTES : IRVING JAFETH ALOR HERNANDEZ

ANDY WILIAM ALVAREZ ANTONIO

MOISES UZIEL ANTONIO HERNANDEZ

AROLD ANTONIO MOGUEL

ALDAIR GOLPE QUEVEDO

JOSE EDUARDO MORALES CRUZ

ALEXIS DANIEL PAVON CORDERO

GERMIAN RUFINO BLAS