experimento de pulso caza de meselson y stahl. guía para 4º medio, biología plan común

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www.BioInteractive.org Published May 2014;Revised June 2016; Traducido por GAToledo, Depto de Cs. SFC, 2017 Page 1 of 4 EL EXPERIMENTO DE MESELSON-STAHL http://www.bionova.org.es/animbio/anim/meselson/intromeselson.swf INTRODUCCIÓN En la década de 1950, James Watson y Francis Crick sugirieron un mecanismo para la replicación del DNA al cual denominaron "Modelo de replicación Semiconservativo". Durante la replicación semiconservativa, cada una de las dos hebras de DNA actuaría como una plantilla para la síntesis de una hebra nueva. Las dos nuevas moléculas de DNA consistirían de una hebra de la molécula original y una hebra recién sintetizada. En aquellos tiempos, los científicos estaban considerando tres posibles modelos de replicación. Estos eran: Tipo de Replicación Composición de Moléculas de DNA antes y después (a) Replicación Conservativa – la molécula de DNA original permanece intacta y se sintetiza una nueva molécula de DNA que no contiene ninguna parte de la original. Es una molécula completamente nueva. (b) Replicación Semiconservativa – cada una de las dos moléculas de DNA está compuesta por una hebra de la molécula original y una hebra recién sintetizada. (c) Replicación Dispersiva – cada una de las dos moléculas de DNA está compuesta de secciones del DNA original y del DNA recién sintetizado intercaladas aleatoriamente a lo largo de cada hebra. Nótese que, aunque en las ilustraciones pareciera que hay un patrón, en la replicación dispersiva los nucleótidos originales y recién sintetizados se mezclarían aleatoriamente. En 1958, Matthew Meselson y Franklin Stahl condujeron su famoso y elegante experimento de pulso-caza para determinar cuál de estos tres modelos era el correcto. La clave del experimento de Meselson-Stahl fue el uso de los isótopos no radioactivos del nitrógeno, 14 Ny 15 N, en los medios para el cultivo de bacterias de E. coli. A medida que se reproduce E. coli, se sintetizan nuevas moléculas de DNA que incorporan a estos isótopos. Aquellas E. coli cultivadas en presencia de 15 N crearon DNA "pesado". Después de muchas generaciones, todo el DNA en las células de E. coli era pesado. Las células cultivadas en presencia de 14 N produjeron DNA "liviano" y, después de muchas generaciones, todo el DNA en las células de E. coli era liviano. La ventaja de tener DNA de diferentes densidades es que pueden separarse por centrifugación. Para este proceso, las células de E coli primero fueron abiertas para sacar su DNA; después de eso, el contenido celular con los DNA pesado y liviano (llamado el "extracto crudo") fue mezclado con una solución que contenía la sal cloruro de cesio y, luego, fue puesto en un tubo de centrífuga con cuarzo transparente que permitió que la solución fuese fotografiada mientras daba vueltas. El DNA liviano y pesado se separaron. Las moléculas de diferente densidad se acumularon a distintas profundidades. El DNA pesado formó una banda en un punto más abajo de la mezcla, mientras que el DNA liviano formó una banda más arriba. La diferencia en la densidad del DNA fue suficiente para la separación. (Fig. 1.) La Doble Hélice MATERIAL DEL ESTUDIANTE

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ELEXPERIMENTODEMESELSON-STAHLhttp://www.bionova.org.es/animbio/anim/meselson/intromeselson.swf

INTRODUCCIÓN Enladécadade1950,JamesWatsonyFrancisCricksugirieronunmecanismoparalareplicacióndelDNAalcualdenominaron"ModelodereplicaciónSemiconservativo".Durantelareplicaciónsemiconservativa,cadaunadelasdoshebrasdeDNAactuaríacomounaplantillaparalasíntesisdeunahebranueva.LasdosnuevasmoléculasdeDNAconsistiríandeunahebradelamoléculaoriginalyunahebrareciénsintetizada.Enaquellostiempos,loscientíficosestabanconsiderandotresposiblesmodelosdereplicación.Estoseran:

TipodeReplicación ComposicióndeMoléculasdeDNAantesydespués

(a)ReplicaciónConservativa–lamoléculadeDNAoriginalpermaneceintactaysesintetizaunanuevamoléculadeDNAquenocontieneningunapartedelaoriginal.Esunamoléculacompletamentenueva.

(b)ReplicaciónSemiconservativa–cadaunadelasdosmoléculasdeDNAestácompuestaporunahebradelamoléculaoriginalyunahebrareciénsintetizada.

(c)ReplicaciónDispersiva–cadaunadelasdosmoléculasdeDNAestácompuestadeseccionesdelDNAoriginalydelDNAreciénsintetizadointercaladasaleatoriamentealolargodecadahebra.Nóteseque,aunqueenlasilustracionesparecieraquehayunpatrón,enlareplicacióndispersivalosnucleótidosoriginalesyreciénsintetizadossemezclaríanaleatoriamente.

En1958,MatthewMeselsonyFranklinStahlcondujeronsufamosoyeleganteexperimentodepulso-cazaparadeterminarcuáldeestostresmodeloseraelcorrecto.

LaclavedelexperimentodeMeselson-Stahlfueelusodelosisótoposnoradioactivosdelnitrógeno,14Ny15N,enlosmediosparaelcultivodebacteriasdeE.coli.AmedidaquesereproduceE.coli,sesintetizannuevasmoléculasdeDNAqueincorporanaestosisótopos.AquellasE.colicultivadasenpresenciade15NcrearonDNA"pesado".Despuésdemuchasgeneraciones,todoelDNAenlascélulasdeE.colierapesado.Lascélulascultivadasenpresenciade14NprodujeronDNA"liviano"y,despuésdemuchasgeneraciones,todoelDNAenlascélulasdeE.colieraliviano.LaventajadetenerDNAdediferentesdensidadesesquepuedensepararseporcentrifugación.Paraesteproceso,lascélulasdeEcoliprimerofueronabiertasparasacarsuDNA;despuésdeeso,elcontenidocelularconlosDNApesadoyliviano(llamadoel"extractocrudo")fuemezcladoconunasoluciónqueconteníalasalclorurodecesioy,luego,fuepuestoenuntubodecentrífugaconcuarzotransparentequepermitióquelasoluciónfuesefotografiadamientrasdabavueltas.ElDNAlivianoypesadosesepararon.Lasmoléculasdediferentedensidadseacumularonadistintasprofundidades.ElDNApesadoformóunabandaenunpuntomásabajodelamezcla,mientrasqueelDNAlivianoformóunabandamásarriba.LadiferenciaenladensidaddelDNAfuesuficienteparalaseparación.(Fig.1.)

LaDobleHéliceMATERIALDELESTUDIANTE

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LA FASE DE PULSO Usandoestatécnica,MeselsonyStahlcultivaron,durantemuchasgeneracionesacepasdeE.colienunmedioquecontenía15N.ConestoseaseguraronquetodoelDNAdelasbacteriasseríamarcadocon15N.Amedidaquelasbacteriascrecíanysereproducían,incorporabanelisótopo15N.Aestosedenominafasedepulsodelexperimento(esdecir,elpulsoestáexponiendoalascélulasaunaversiónparticulardeuncompuesto).Luego,MeselsonyStahltomaronalgunasdeestasbacterias,prepararonelDNAcomolohabíanhechoantesylocentrifugaron.DebidoaquetodoelDNAsemarcócon15N,seformóunasolabanda.Estaesla"GeneraciónCero".

1. Elijeunlápizdecolor.Utilizandolafigura1comoreferencia,indicalalocalizacióndelabanda

paraelDNApesado(15N)enlageneracióncero,eneltubodecentrífugarepresentadoaladerecha.

LA FASE DE CAZA Acontinuación,lasbacteriasconDNApesadosemovieronaunmediodecultivoquecontenía14N.Estepasomarcaelcomienzodelafasedecazadelexperimento(esdecir,exponiendolascélulasaunaversióndiferentedelmismocompuesto).Despuésde20minutos(eltiempoquetardaE.coliencreceryproducirlasiguientegeneración),sepreparóunamuestraparacentrifugación.Estafueidentificadacomo"GeneraciónUno".Otramuestrafuetomadadespuésdequepasaronotros20minutos.Estafuela"GeneraciónDos",yasísucesivamente.

PREGUNTAS 2. SilareplicacióndelDNAessemiconservativa,usalaclavedadaala

derechaparailustrarladisposicióndelosisótoposligerosypesadosdelnitrógenoenlasmoléculasdeDNAformadasenlaGeneraciónUnoyDos.Supónquecadabacteriasedividióexactamenteunavezporgeneración.Aplicaelmismocolorqueusasteantesparaelisótopopesado(15N)yelijeunnuevocolorparaelisótopoliviano(14N).

a. Ilustración:

Generacióncero

Generaciónuno

Generacióndos

b. Explicación:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

La doble Hélice MATERIALDELESTUDIANTEestudiantil

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3. Usandolaclaveproporcionadaenlapregunta2,ilustralalocalizacióndelosisótoposligerosypesadosdelNenlascadenasdeDNAdelaGeneracionesCero,UnoyDossilareplicacióndelDNAfueseconservativa.

a. Ilustración:

Generacióncero

Generaciónuno

Generacióndos

b. Explicación:__________________________________

_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

c. Enlostubosdibujadosaladerecha,ilustralospatronesdebandasqueMeselsonyStahlhabríanobservadosilosresultadosdesuexperimentohubiesenapoyadoelmodeloconservativodelareplicacióndelDNA.

La Doble Hélice MATERIALDELESTUDIANTE

c. Utilizandolafigura1comoestándar,dibujabandasqueilustreneláreadondeseconcentraráelDNAenlostubosparalasGeneracionesCero,UnoyDossilareplicacióndelDNAesSemiconservativa.

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4. Usandolaclaveproporcionadaenlapregunta2,ilustralalocalizacióndelosisótoposdelNligerosypesadosenlascadenasdeDNAdelaGeneracionesCero,UnoyDossilareplicacióndelDNAfuesedispersiva.

a. Ilustración Generacióncero

Generaciónuno

Generacióndos

b. Explicación:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

c. Enlostubosdibujadosaladerecha,ilustralospatronesdebandasqueMeselsonyStahlhabríanobservadosilosresultadosdesuexperimentohubiesenapoyadoelmodelodispersivodelareplicacióndelDNA.

RESULTADOS DEL EXPERIMENTO DE MESELSON Y STAHL Ahora que conoces los resultados de los diversosmodelos de replicación, evalúa los datos deMeselson yStahl.Suprimerareplicaciónenelmediode14NprodujounabandadeDNAhíbridodepesomedio(14Ny15N).Lasegundareplicaciónenelmedio14NprodujotantoDNAligero(14N)comoDNAhíbrido(14Ny15N).

5. ¿CuálmodelodereplicaciónapoyaronlosresultadosobtenidosporelexperimentodeMeselson-Stahl?Explicaturespuesta.____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________https://www.youtube.com/watch?v=cvU4kEMvbm4(Videosobresuexperimento,explicadoporelmismísimoMeselson)

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