evaluaciÓn de enfermedad mÍnima residual (emr) …evaluaciÓn de enfermedad mÍnima residual (emr)...
TRANSCRIPT
![Page 1: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/1.jpg)
EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE
FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA:
EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda
Elisa Sajaroff
72° Congreso Argentino de Bioquímica,
Ciudad Autónoma de Buenos Aires, 2017
![Page 2: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/2.jpg)
• Identificación y cuantificación de células
patológicas en mínimas cantidades.
• Métodos disponibles: Técnicas de biología
molecular y por Citometría de flujo (en base al
inmunofenotipo aberrante de las células)
Enfermedad Mínima Residual (EMR)
![Page 3: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/3.jpg)
En LLA, el sólo hallazgo de células con inmunofenotipo inmaduro, es suficiente para
calificar una muestra de M.O. con EMR positiva?
NO Dependerá del linaje de LLA y del momento de
tratamiento en que se encuentre el paciente.
![Page 4: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/4.jpg)
• LLA-T
• La ontogenia T ocurre exclusivamente en timo, no hay células T inmaduras normales en médula ósea en ningún momento del tratamiento.
• LLA-B
• Día 15: Sin hematogonias (precursores normales linaje B).
• Día 33 (fin inducción): Aún sin regeneración normal B. Sólo linfocitos B maduros con o sin células plasmáticas.
• Semana 12 (fin consolidación): Proporción variable de
hematogonias en los 3 estadíos con o sin LB maduros y/o células plasmáticas.
• Pre Tx: generalmente % muy bajo de CD19+, con cantidad
variable de hematogonias, LB maduros y células plasmáticas.
Reconstitución linfoide durante el tratamiento ALL IC-BFM
![Page 5: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/5.jpg)
Las células patológicas se identifican en base a su inmunofenotipo
anormal
es indispensable conocer el perfil antigénico normal en médula ósea en pacientes con y
sin tratamiento, así como en distintos estadíos del mismo.
![Page 6: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/6.jpg)
Perfil antigénico normal en M.O. Linaje B Gate en SSC-CD19
![Page 7: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/7.jpg)
Más perfiles normales B Gate en CD19+
![Page 8: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/8.jpg)
![Page 9: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/10.jpg)
Estandarización en la determinación de EMR para LLA-B • Panel anticuerpos • Método marcación y lisis • Cantidad de eventos a adquirir • Mínima cantidad de eventos identificados para cuantificar
![Page 11: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/11.jpg)
![Page 12: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/13.jpg)
CAMBIOS INMUNOFENOTÍPICOS:
Casi el 50% de las LLA-B- al día 15 los presentan
IMF: <CD10 pérdida CD34 >CD20 >CD45
No buscar células con el mismo inmunofenotipo del diagnóstico sino células aberrantes!!!
![Page 14: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/14.jpg)
• Directamente proporcional Cantidad de
eventos adquiridos y tamaño cluster
• Considerar la > cantidad posible de aberrancias
Modulación antigénica
• Indispensable conocer el bkgd celular en cada estadío de tto.
Background celular
Factores que afectan la sensibilidad para la detección de EMR en LLA
![Page 15: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/15.jpg)
Por qué es importante la determinación de EMR en LLA pediátrica?
![Page 16: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/16.jpg)
• Es el factor pronóstico independiente más importante
disponible al día 15.
• EMR día 15≥10% factor independiente de riesgo de recaída.
EMR por CF en el I-BFM
![Page 17: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/17.jpg)
ALL IC-BFM 2009 Standard Operating Procedure
4 color Flow MRD detection in ALL
![Page 18: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/18.jpg)
Amendment to ALL IC-BFM 2009 Standard Operating Procedure
≥6 color Flow MRD detection in ALL
Version June 2014 M.N. Dworzak / J. Kappelmayer
![Page 19: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/19.jpg)
Asignación de grupo de riesgo en LLA pediátrica según el protocolo ALL IC-BFM 2009
![Page 20: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/20.jpg)
Asignación de grupo de riesgo en ALL IC-BFM 2009
• Edad
• WBC en sangre periférica • Anormalidades citogenéticas
y/o moleculares.
Diagnóstico
• Respuesta a la prednisona: Mala respuesta si ≥1000 blastos/ul en sangre periférica por observación morfológica.
Día 8
![Page 21: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/21.jpg)
Risk group stratification in ALL IC-BFM 2009
Diagnóstico y día 8
Edad 1 - 5 años y WBC < 20000/ul y
Blastos D8 1000/ul
Edad <1 y 6 años y WBC 20000/ul y
Blastos D8 1000/ul
Blasts D8 1000/ul
t (9;22) ó t(4;11) o hipodiploidía < 44Cr
EMR por CF al día 15 <0.1% 0.1 y <10% 10%
RIESGO ESTANDAR
<10% 10%
RIESGO INTERMEDIO
RIESGO ALTO
Cualquier valor
Dist. Estimada ptes 13% 66% 21% Dist estimada recaídas 5% 22% 45%
![Page 22: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/22.jpg)
• ≥2% de las cél nucleadas (syto+) Eritroblastos
• Cél nucleadas ≥ 30% del total o adquirir solo células syto+
• Mínimo 300000 cél nucleadas para sensibilidad 0.01% (1x10-4)
Celularidad
• Mínimo 30 eventos Tamaño de
cluster
Criterios evaluabilidad ALLIC-BFM
![Page 23: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/23.jpg)
Impacto de la EMR por CR al día 15 Resultados de SAHOP
RE % RI % RA %
pre day 15 25,7 53,2 21,2
post day15 9,5 59,8 30,7
0 10 20 30 40 50 60 70
pre day 15
post day15
ALL-IC BFM 2009 Julio 2011- aún abierto 651 pts ingresados, 556 elegibles
![Page 24: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/24.jpg)
24% de los pacientes fueron reasignados a un grupo de mayor riesgo.
Impacto de la EMR por CR al día 15 Resultados de SAHOP
Intensificación de la quimio para evitar una posible recaída
Personalización del tratamiento según la respuesta individual del pte al tto.
![Page 25: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/25.jpg)
P-value: <0.00001
LFS (SE) (SR: n= 39): 94 (6)%
LFS (SE) (IR: n= 289): 83 (3)%
EFS (SE) (HR: n= 124): 58 (5)%
pSLL según los grupos de riesgo ALL IC-BFM 2009 (n= 452, SAHOP)
![Page 26: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/26.jpg)
Impacto de la EMR por CF al día 33 y 78
EMR Grupo1
EMR Grupo 2
EMR Grupo 3
EMR Día 33
<0.1%
1 punto ≥0.1%
≥0.1%
EMR Día 78
<0.1% ≥0.1%
![Page 27: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/27.jpg)
P-value: <0.00001
LFS (SE) (Grupo 1 n= 352): 83(3)%
LFS (SE) (Grupo 2 n= 74): 69 (6)%
LFS (SE) (Grupo 3 n= 25): 33 (11)%
pSLL según los grupos de EMR: 77 (3)% (n= 451)
![Page 28: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/28.jpg)
Conclusiones I
1. Es indispensable la estricta estandarización de Ac,
método de marcación, lisis y análisis para la correcta
interpretación y comparación de resultados.
2. Se necesita un alto nivel de entrenamiento y
conocimiento sobre el inmunofenotipo de las células
presentes en cada etapa del tto.
3. La incorporación de EMR por CF al día 15 permitió que ¼
de los pacientes recibieran adecuación del tratamiento
según su respuesta.
![Page 29: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/29.jpg)
Conclusiones
4. La EMR del día 33 y 78 permitió la identificación de
subgrupos de pacientes con mayor riesgo de recaída aún
en los grupos de riesgo intermedio y alto.
5. La EMR también se utiliza como parámetro de decisión
clínica así como de seguimiento en pacientes con
trasplante de células precursoras hematopoyéticas.
![Page 30: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/30.jpg)
Servicio de Inmunología y Reumatología Laboratorio Inmunología Celular Jorge Rossi Andrea Bernasconi Elisa Sajaroff Raquel Mitchell Georgina Roffé Marianela Sanz
Servicio de Hematología y Oncología Maria Sara Felice Myriam Guitter Elizabeth Alfaro Cristian Sanchez LaRosa Cristina Alonso Patricia Rubio Adriana Medina
![Page 31: EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) …EVALUACIÓN DE ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR) POR CITOMETRÍA DE FLUJO EN ONCOHEMATOLOGÍA: EMR en Leucemia Linfoblástica Aguda](https://reader030.vdocuments.mx/reader030/viewer/2022040401/5e75860716f97313e478adbe/html5/thumbnails/31.jpg)
Muchas gracias por su atención