“estudio epidemiolÓgico de fasciolosis en el valle de
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ISBN 978-987-661-270-8
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COacuteRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS MEacuteDICAS
Secretariacutea de Graduados en Ciencias de la Salud
ldquoESTUDIO EPIDEMIOLOacuteGICO DE FASCIOLOSIS EN EL VALLE DE FIAMBALAacute CATAMARCArdquo
Jorge Bruno MALANDRINI
Coacuterdoba Argentina
Junio 2016
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Es faacutecil quedarse en casa y tejer muchas hipoacutetesis pero intentar verificarlas
generalmente demanda un trabajo interminable gastos sacrificio o incluso peligro y a
menudo se falla o aun teniendo eacutexito se gana poca recompensa Habiacutea muchos antes
que Coloacuten que imaginaron Ameacuterica pero entre el suentildeo y la realidad un oceacuteano tuvo que
ser atravesado
Sir Ronald Ross KCB
DPH FRCS MD DSc LLD FRS
Nobel Laureate London 1911
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A Claudia Leandro y Pilar apoyos espirituales en mi trabajo diario
fuentes permanentes de mi superacioacuten
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AGRADECIMIENTOS No hay tesis doctoral que pueda escribirse sin el apoyo de muchas personas -amigos
fuentes de informacioacuten y numerosos expertos externos- que pacientemente ofrecieron
tanto sus profundos conocimientos como cuantas aclaraciones fueron precisas Mi primer
agradecimiento lo expreso a las Doctoras Paula Budini Ana Litvik y al Doctor Walter
Almiroacuten por su guiacutea aportes conceptuales y de organizacioacuten ademaacutes de su inagotable
paciencia y predisposicioacuten por el proyecto permitiendo que me tomara el tiempo para
hacer la mejor presentacioacuten posible Aprecio mucho su apoyo y espero que ahora se vea
recompensado
Me es a todas luces imposible expresar individualmente mi agradecimiento a todos los
que me han ayudado Sin embargo la Dra Silvana Carnevale y el Dr Jorge Velaacutesquez
quienes figuran ciertamente entre los mejores y maacutes prestigiosos investigadores en la
temaacutetica por haberse tomado la molestia de leer todo el manuscrito y ofrecerme sus
respectivas criacuteticas y consejos
El autor cumple con el deber de agradecer al profesor Santiago Mas-Coma por sus
importantes aportes sus criacuteticas igualmente detalladas -pero mucho maacutes incisivas y
provocativas- durante la investigacioacuten En mis viajes ademaacutes de los estudios he visitado
sus laboratorios aulas universitarias y se ha mostrado generoso con el tiempo y sus
ideas
Tengo la satisfaccioacuten de dar las gracias a la Dra Dolores Bargues en la que concurren
las cualidades propias de una excelente docente e investigadora con las de una cientiacutefica
abierta que centra su intereacutes en Fasciolosis y su estrecha relacioacuten entre la sanidad animal
y la salud humana
A la Dra Rosacircngela Rodriacutegues-Silva y su equipo del Laboratorio de Helmintos Paraacutesitos
de Vertebrados del Fiocruz quieacuten llevoacute a cabo una minuciosa comparacioacuten de los
especiacutemenes observados
Un voto de agradecimiento similar tiene por destinatario a otro de mis colegas el Dr Hugo
Solana quien me abrioacute las puertas de su caacutetedra para el desarrollo de estudios sobre
resistencia antiparasitaria que permitieron resultados de difiacutecil logro en mi provincia
No puedo dejar de mencionar a la Dra Viviana Molina directora del ANLIS-Malbraacuten por
permitir mi participacioacuten docente en los cursos anuales de Enteroparaacutesitos dictados en el
Instituto asiacute como al Dr Sixto R Costamagna por su invitacioacuten para redactar un capiacutetulo
en su libro ldquoParasitosis Regionalesrdquo los que hicieron posible organizar los conocimientos
sobre fasciolosis y se generaran y precisen las ideas que se exponen
Mis palabras de reconocimiento especial a las principales autoridades de la Universidad
Nacional de Catamarca que resultan ser la mejor garantiacutea para que la investigacioacuten
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cientiacutefica sea el ingrediente especial en el claustro catamarquentildeo ademaacutes del aporte por
la beca doctoral otorgada y permitir el uso de equipos y materiales
El autor jamaacutes hubiese podido acceder a la realizacioacuten de esta Tesis Doctoral sin haber
tenido la ocasioacuten de contar con el apoyo econoacutemico de la Fundacioacuten Mundo Sano que
me permitioacute solventar viajes al extranjero
Tanto los trabajos de campo efectuados formando parte de expediciones a la zona del
trabajo como los estudios y anaacutelisis realizados en laboratorios fueron llevados a cabo
con financiamiento obtenido por parte de diferentes proyectos de investigacioacuten
acreditados por la SECyT-UNCa y Focanlis 2011
Las palabras no pueden expresar los sentimientos hacia los integrantes de mi equipo de
investigacioacuten quienes trabajaron sometidos a gran presioacuten durante varias etapas clave
del proceso
Finalmente esta lista no estariacutea completa sin un agradecimiento especial a todos los
integrantes del personal de salud -funcionarios meacutedicos bioquiacutemicos bioacutelogos
enfermeras y agentes sanitarios- participantes de tantos diacuteas de trabajos conjuntos que
permitieron la investigacioacuten
Debo igualmente una mencioacuten especial de gratitud a la Dra Diana T Masih por sus
consejos advertencias y estiacutemulos desde el comienzo de esta investigacioacuten
Ademaacutes tambieacuten debo expresar un especial reconocimiento a la Dra Gladys I Ponte y al
Dr Ernesto J Jacob sin los cuales esta tesis no hubiera podido llegar a buen fin
Huelga decir que soacutelo yo soy responsable de cualquier error que haya podido deslizarse
en esta tesis pese a mis mejores esfuerzos por evitarlo
J B M
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RESUMEN Con el objetivo de contribuir al conocimiento de la epidemiologiacutea de la fasciolosis en el valle
de Fiambalaacute Catamarca Argentina se realizoacute un estudio descriptivo prospectivo con disentildeo
no experimental transeccional durante el periacuteodo 2008-2012
En 305 individuos con seguimiento de la cohorte en humanos se estudioacute la presencia de
anticuerpos anti-rproCL1 de Fasciola hepatica (Fh) eosinofilia proteiacutenas totales aacutecidos
biliares enzimas hepaacuteticas y bilirrubina seacuterica Se analizoacute la presencia de Fasciola hepatica
en la materia fecal y utilizoacute el diagnoacutestico por imagen en los individuos estudiados
La interpretacioacuten de las manifestaciones cliacutenicas (n=174) la deteccioacuten de anticuerpos
antifasciola por ensayo de inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (ELISA) las imaacutegenes (n=57) y
la aplicacioacuten de meacutetodos de diagnoacutestico etioloacutegico por microscopiacutea en materiales de heces
(n=96) mediante su utilizacioacuten sistemaacutetica e integrada permitieron realizar el diagnoacutestico de
fasciolosis
Se estudiaron 1077 muestras de heces de las distintas especies animales domeacutesticas
presentes en la zona como ovinos asnos llamas caprinos bovinos equinos y porcinos
Se obtuvieron 398 ejemplares de Fh de 11 animales faenados y se sometieron a estudios
morfoloacutegicos moleculares por amplificacioacuten del gen mitocondrial de la subunidad 1 de la
citocromo oxidasa y de resistencia antiparasitaria a Triclabendazol por amplificacioacuten aleatoria
de ADN polimoacuterfico
En 2354 limneidos se identificoacute la especie por secuenciacioacuten del aacutecido desoxirribonucleico
(ADN) y se demostroacute la infeccioacuten natural
Se estimoacute una prevalencia en el hombre de 3442 con aumento de eosinoacutefilos (p=0000) de
proteiacutenas seacutericas (p=0000) y una edad promedio menor a 19 antildeos en los individuos positivos
en relacioacuten a los negativos En animales la prevalencia obtenida fue 2674 con mayor
infeccioacuten en ovinos Se encontraron ejemplares adultos de Fh con identidad de secuencias
(994) a ejemplares de San Luis y otros resistentes a TCBZ Se identificoacute a los limneidos
Lymnaea neotropica y Lymnaea viator como los hospedadores intermediarios
Los resultados indican que las poblaciones humanas y animales estudiadas tienen una alta
prevalencia de Fh en el valle de Fiambalaacute Catamarca desde 2008 al 2012 El agente
parasitario es ideacutentico geneacuteticamente a los ya encontrados en otras regiones de Argentina
pero algunos presentan resistencia a TCBZ que compromete el futuro del tratamiento
humano El hospedador intermediario L neotropica constituye la descripcioacuten de una nueva
especie de limneidos en el Noroeste argentino
PALABRAS CLAVE fasciolosis infeccioacuten humana ELISA resistencia antiparasitaria L
neotropica
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SUMMARY In order to contribute to the knowledge of fascioliasisacute epidemiology in the valley of
Fiambalaacute Catamarca Argentina a prospective descriptive study with no experimental
cross-sectional design was done during the period 2008-2012
Within 305 individuals with cohort tracing in human the presence of antibodies anti-
rproCL1 of Fasciola hepatica eosinophilia total proteins bile acids liver enzymes and
serum bilirubin was studied The presence of Fasciola hepatica (Fh) in the stool was
analyzed and diagnostic imaging was used in individuals studied
The interpretation of clinical manifestations (n=174) the use of serological diagnosis
techniques by immunosorbent assay for enzyme-linked (ELISA) images (n=57) and the
application of methods of etiological diagnosis by microscopy in materials feces (n=96)
through its systematic and integrated use allowed the fascioliasis diagnosis
1077 stool samples from different domestic animals species present in the area as sheep
donkeys llamas goats cattle horses and pigs were studied
398 copies of Fasciola hepatica from 11 slaughtered animals were obtained and
subjected to morphological studies molecular by amplification of mitochondrial gene of
subunit 1 of cytochrome oxidase and Triclabendazole antiparasitic resistance by Random
Amplification of Polymorphic DNA (RAPD-PCR)
In 2354 lymnaeid the species was identified by deoxyribonucleic acid (DNA) sequencing
and natural infection was demonstrated
Prevalence of 3442 was estimated in men with increased eosinophilia (p=0000) serum
proteins (p=0000) and a difference in age of 19 years younger in positive individuals in
relation to negative In animal the obtained prevalence was 2674 with more infection in
sheep Fasciola hepatica adult specimens were found with sequence identity (994) in
individuals of San Luis and other resistant to TCBZ The lymnaeid Lymnaea neotropica
and Lymnaea viator and were identified as intermediate hosts
The results indicate that the studied human and animal populations have a high
prevalence of Fasciola hepatica in the valley of Fiambalaacute Catamarca from 2008 to 2012
The parasitic agent is genetically identical to those already found in other regions of
Argentina but some are resistant to TCBZ compromising the future of treatment in human
The intermediate host L neotropica establish the description of a new lymnaeid species in
the Northwest of Argentina
KEYWORDS fascioliosis human infection ELISA antiparasitic resistance L neotropica
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ldquoLA FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS NO SE HACE SOLIDARIA CON LAS
OPINIONES DE ESTA TESISrdquo
Art 43deg Reglamento de la Carrera de Doctorado en Ciencias de la Salud (RHCD Res Ndeg 7222010)
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INDICE GENERAL Contenido
Paacutegina
Portadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Frasehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Dedicatoriahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Agradecimientohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Resumenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Summaryhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Paacutegina de advertenciahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Iacutendice de contenidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Iacutendice de tablas y figurashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I II III IV VI
VII VIII
IX XIII
INTRODUCCIOacuteN Y OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
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1 Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
20 11 Breve resentildea histoacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20
111 Sinonimiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22 112 Clasificacioacuten taxonoacutemicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22
12 Ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22 121 Aspectos epidemioloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 25
13 Viacuteas de difusioacuten geograacutefica de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 26 131 Distribucioacuten de F hepatica en Ameacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 27
14 Hospedador intermediariohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31 15 Fasciola hepatica en humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 34 16 La infeccioacuten a nivel mundialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 36
161 Ameacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 37 1611 Peruacute Bolivia y Chilehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 38 1612 Repuacuteblica Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 39
17 Factores de riesgo en la infeccioacuten de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphellip 40 18 Sintomatologiacutea cliacutenica y patologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 42 19 Diagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 44
191 Directohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 44 1911 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 45 1912 Teacutecnicas quiruacutergicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 46
192 Indirectohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 46 110 Planteamiento del problemahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 49
1101 Justificacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 51 1102 Viabilidad del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1103 Evaluacioacuten de las deficienciashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52
111 Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1111 Objetivo generalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1112 Objetivos especiacuteficoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52
112 Hipoacutetesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 53 DISENtildeO DEL ESTUDIO Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 54 2 Datos secundarios y caracteriacutesticas del ambientehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55
21 Seleccioacuten del tipo de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 22 Lugar de la poblacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 23 Seleccioacuten de la poblacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 24 Periodo de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 25 Descripcioacuten regional del haacutebitat del valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphellip 56
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17
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31 Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
311 Criterios de inclusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
312 Criterios de exclusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 59 32 Obtencioacuten de las muestrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 60
321 Recoleccioacuten de sangrehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 60
322 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 61
3221 Expresioacuten y purificacioacuten de la proteiacutena recombinante procatepsina L1 (rproCL1)helliphellip 61
3222 Ensayo inmunoenzimaacuteticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3223 Foacutermula leucocitariahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3224 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3225 Proteiacutenas Totaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3226 Aacutecidos biliareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3227 Bilirrubina seacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3228 Enzimashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63 323 Anaacutelisis de los datoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63 324 Materia fecalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 64
3241 Teacutecnica de Sedimentacioacuten Raacutepida (TSR)helliphellip 65
3242 Teacutecnicas de concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 65
32421 Meacutetodo de Telemann modificadohellip 65
32422 Meacutetodo de flotacioacuten de Willishelliphelliphellip 65
32423 Meacutetodo cuantitativo para huevoshelliphellip 65 33 Diagnoacutestico por imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 34 Datos cliacutenicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66
Animales como hospedador definitivo de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 4 - Especies animales estudiadashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66
41 Exaacutemenes coproparasitoloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 411 Identificacioacuten de otros paraacutesitos gastrointestinaleshelliphelliphellip 67
42 Necropsias y obtencioacuten de especiacutemenes de F hepaticahelliphelliphelliphellip 68 421 Estudios morfoloacutegicos de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 69 422 Estudios de haplotipos de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 69 423 Estudios de resistencia a antiparasitarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70
Identificacioacuten del hospedador intermediario de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70 5 Epidemiologiacutea de los caracoleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70
51 Recoleccioacuten de limneidos en la zona del valle de Fiambalaacutehelliphelliphellip 70 511 Transporte de limneidos al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71
52 Tareas en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71 521 Adaptacioacuten y cultivo de limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71 522 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 72 523 Infeccioacuten natural por F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 72 524 Infeccioacuten inducida del hospedador intermediariohelliphelliphelliphellip 73
53 Identificacioacuten de la especie mediante determinacioacuten de haplotipos 73 531 Marcadores de ADN seleccionadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 74 532 Extraccioacuten de ADNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 74 533 Secuenciacioacuten de los marcadores de ADNr y ADNmthelliphellip 74 534 Anaacutelisis de la secuenciahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 75 535 Nomenclatura de los haplotipos de ADNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 75
54 Determinacioacuten molecular de la infeccioacuten natural de limneidos con F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 76
251 Orografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 252 Climahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 253 Hidrografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58 254 Flora y Faunahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
3 Seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58 Epidemiologiacutea en seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
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541 Electroforesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 76 RESULTADOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 78
6 Datos secundarios y caracteriacutesticas del ambientehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 79 61 Caracteriacutesticas de las viviendas del valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphellip 79 62 Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 80 63 Caracteriacutesticas climaacuteticas y haacutebitathelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 80
7 Resultados en seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81 71 Serologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81
711 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81 712 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 713 Proteiacutenas totales enzimas bilirrubina y colesterolhellip 87
72 Geacutenerohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 87 73 Grupos etarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 88 74 Anaacutelisis estadiacutesticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 90 75 Anaacutelisis coproparasitoloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 76 Siacutentomas y signoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 77 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 78 Teacutecnicas invasivashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 79 Descripcioacuten de casos con Fasciolosishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 92
8 Resultados en animaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 98 81 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 98
811 Prevalencia por exaacutemenes coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphellip 98 812 Hallazgos de huevos de otros paraacutesitos
gastrointestinaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 99 82 Recuperacioacuten de ejemplares de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 99 83 Morfologiacutea microscoacutepica de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 100
831 Microscopiacutea de contraste por interferencia diferencial 102 84 Variabilidad geneacutetica intraespeciacuteficahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 102 85 Resistencia al triclabendazolhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 102
9 Resultados en el hospedador intermediario de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 91 Identificacioacuten de los caracoles helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 92 Medicioacuten de moluscoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 93 Mantenimiento en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105
931 Identificacioacuten de gasteroacutepodos infectadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105
9311 Infeccioacuten del hospedador intermediariohelliphelliphelliphelliphellip 105
932 Identificacioacuten molecular de la infeccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9321 PCR de infeccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106 94 Caracterizacioacuten molecular de limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
941 L neotropicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9411 Marcadores moleculareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9412 Marcadores mitocondrialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 107
942 L viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 108
9421 Marcadores ribosomaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 108
9422 Marcadores mitocondriales 109
943 Anaacutelisis comparativo de L neotropica vs L viatorhelliphelliphelliphellip 109 DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 111
101 En los seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 112
1011 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 113
1012 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 114
1013 Proteiacutenas totales y enzimas hepaacuteticashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 115
1014 Geacutenerohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 116
1015 Grupos etarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 117
1016 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 118
1017 Siacutentomas y signoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 119
1018 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 120
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1019 Teacutecnicas invasivashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121 102 En los animaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121
1021 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121
1022 Necropsiashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 124
1023 Morfologiacutea microscoacutepicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 124
1024 Variabilidad geneacutetica intraespeciacuteficahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 125
1025 Resistencia antiparasitariahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 126 103 En los limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 127
1031 Caracteriacutesticas fenotiacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 127
1032 Importancia de las influencias ambientaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 128
1033 Estudios en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 128
1034 Identificacioacuten microscoacutepica y molecularhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 129
1035 Caracteriacutesticas moleculareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 131
1036 Lymnaea neotropicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 132
1037 Lymnaea viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 132 Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 134 Recomendacioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 137 BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 139 ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 171
111 Tablas y figurashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 172 112 Trabajos cientiacuteficos a partir de la informacioacuten generada en esta
tesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 192 1121 Trabajos publicadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 192 1122 Presentacioacuten en Congresos y Jornadashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 203 1123 Premios y Distincioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 217
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hepatogramas datos cliacutenicos imaacutegenes y cirugiacuteas sobre casos positivos con diagnoacutestico documentado Valle de Fiambalaacute Antildeos 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
82 Tabla 3 Resultados comparativos entre la presencia de eosinoacutefilia y ensayos de ELISA seropositivos Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 Tabla 4 Resultados comparativos entre los valores de proteiacutenas totales y anaacutelisis de ELISA positivos Valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphellip 87 Tabla 5 Frecuencia absoluta de casos positivos y negativos al ensayo de ELISA recombinante para Fasciola hepatica en pacientes agrupados por geacutenero en los diferentes grupos etarios Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 88 Tabla 6 Frecuencia y porcentaje acumulado por grupo etario con el ensayo de ELISA para Fasciola hepatica Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- Tabla 7
2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Clasificacioacutena de los casos observados en el Valle de Fiambalaacute 2009-
89
2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 90 Tabla 8 Variables de la ecuacioacuten Valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphellip 90 Tabla 9 Prevalencia de F hepatica en diferentes especies de animales domeacutesticos Valle de Fiambalaacute Catamarca Antildeos 2009-2011helliphelliphelliphellip 99 Tabla 10 Comparacioacuten de las mediciones de conchillas de limneidos entre las poblaciones naturales de L viator y L neotropica colectadas en el valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 104 Tabla 11 Caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina de acuerdo con los diferentes sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 172 Tabla 12 Datos comparativos de los tamantildeos obtenidos en ejemplares de F hepatica del valle de Fiambalaacute con las de diferentes lugares estudiadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 173 Tabla 13 ADN ribosomal nuclear y haplotipo de ADN mitocondrial para la identificacioacuten de coacutedigo L neotropica y L viator del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 174 Tabla 14 Diferencias de nucleoacutetidos encontradas en el fragmento de la secuencia del gen 16S ADNmt de las poblaciones de L neotropica estudiadas y otros haplotipos 16S aislados de la misma especie disponibles en GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 175 Tabla 15 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontradas en la secuencia de fragmento ADNmt del gen cox1 de las poblaciones de L neotropica estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos cox1 y aislamientos de la misma especie disponibles en GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 176 Tabla 16 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia ADNr ITS-2 de L viator en el valle de Fiambalaacute y otros de Argentina y haplotipos ITS- 2 aislados en la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphellip 177 Tabla 17 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia del ADNr ITS-1 de L viator colectados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y otros haplotipos ITS-1 y aislamientos disponibles en
LISTA DE TABLAS Y FIGURAS
Tablas Paacutegina Tabla 1 Hitos en el descubrimiento del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahellip 21
Tabla 2 Resultados de anaacutelisis comparativos seguacuten sexo y edad de la absorbancia de ELISA estudios coproloacutegicos eosinoacutefilia
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GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 178 Tabla 18 Diferencias de nucleoacutetidos que se encuentran en la secuencia del gen ADNr 16S y fragmentos del gen mitocondrial de L neotropica y L viator estudiados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y haplotipos 16S aislados en la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 179 Tabla 19 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontrados en la secuencia del fragmento de ADNmt del gen cox1 de L viator estudiado y otros haplotipos cox1 aislados de la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 180 Tabla 20 Distancias por pares entre secuencias de haplotipos ITS-2 e ITS-1 aislados de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 181 Tabla 21 Distancias por pares entre 16S y secuencias en haplotipos cox1 en aislamientos de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60helliphelliphelliphelliphellip 182 Tabla 22 Promedio de las distancias geneacuteticas entre y dentro de L neotropica y L viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 183 Figura 1 Especiacutemenes adultos de F hepatica sobre la caacutepsula de Glisson obtenidos a partir de una infeccioacuten natural en Lama glama en el valle de Fiambalaacute y esquema de Fasciola hepatica adultahelliphelliphelliphelliphelliphellip 23 Figura 2 Huevos de F hepatica presentes en materia fecal de ovinos infectados naturalmente en el valle de Fiambalaacute obtenidos por el meacutetodo de sedimentacioacuten de Dennis Stone y Swanson donde se aprecian los embriones en su interior y el detalle del opeacuterculo abierto y esquema de un huevo embrionadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 24 Figura 3 Esquema del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 24 Figura 4 Geografiacutea de la probable dispersioacuten de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 27 Figura 5 Imagen y fotografiacutea del aspecto externo de Lymnaea neotropica proveniente del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphellip 31 Figura 6 Ubicacioacuten geograacutefica del Valle de Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia de Catamarca Repuacuteblica Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 Figura 7 Distribucioacuten de personas (n=305) seropositivas y seronegativas en frecuencias relativas () al inmunodiagnoacutestico del ensayo de ELISA analizadas en el Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 Figura 8 Imagen microscoacutepica de huevo de Fasciola hepatica obtenido con la teacutecnica de Lumbreras en la materia fecal de una paciente de 3 antildeos del valle de Fiambalaacute Catamarcahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 93 Figura 9 Ejemplar de F hepatica extraiacutedo del coleacutedoco con CRTE en una paciente de 22 antildeos en el Hospital San Juan Bautista Catamarca 2012helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 94 Figura 10 Imagen ecograacutefica hepaacutetica con hepatomegalia Se observa aumento de la ecogenicidad y una estructura de aspecto filiformehellip 97 Figura 11 Imaacutegenes microscoacutepicas de estructura morfoloacutegica del cono cefaacutelico de Fasciola hepatica obtenidas de un animal bovino faenado en el Valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 100 Figura 12 Estructuras morfoloacutegicas de Fasciola hepatica halladas en un animal bovino del Valle de Fiambalaacute Argentina observadas al microscopio 101 Figura 13 Uacutetero con huevos de un espeacutecimen de Fasciola hepatica obtenido de la necropsia de un animal bovino en el Valle de Fiambalaacute Aumento 10xhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 101 Figura 14 Detalle del tegumento de una F hepatica mostrando las espinashelliphellip 102 Figura 15 Microfotografiacuteas tomadas de estructuras morfoloacutegicas de una F hepatica de ganado bovino del valle de Fiambalaacute observadas con microscopio de contraste por interferencia diferencial helliphelliphelliphelliphelliphellip 102
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Figura 16 Patrones de amplificacioacuten por RAPD PCR de Fasciola hepatica
aisladas de hiacutegados obtenidos para la deteccioacuten de cepas
resistentes a Triclabendazol (TCBZ) comparados con otras zonashellip 103 Figura 17 Conchillas de L viator A) vista ventral B) vista dorsal escala 5 mm y conchillas de L neotropica C) vista ventral D) vista dorsal escala 4 mm Especiacutemenes colectados en vegas del valle de Fiambalaacute 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105 Figura 18 Liacutemite de deteccioacuten del ensayo de PCR por electroforesis en gel de agarosa de los productos de amplificacioacuten utilizado como plantilla de ADN para la deteccioacuten de F hepatica en muestras de limneidos del Valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106 Figura 19 Consentimiento informadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 184 Figura 20 Planilla de recoleccioacuten de datos de las viviendas Valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 185 Figura 21 Planilla de recoleccioacuten de datos de las personas Valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 186 Figura 22 Graacuteficas de comparacioacuten de temperaturas promedio mensual en grados centiacutegrados y precipitacioacuten-aridez entre las localidades de Rio Grande y Tatoacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 187 Figura 23 Diseccioacuten de conductos biliares de un hiacutegado de Lama glama donde se observan ejemplares de Fasciola hepatica intracanaliculares Valle de Fiambalaacute Catamarca 2010helliphelliphelliphelliphellip 188 Figura 24 Apertura de un conducto biliar intrahepaacutetico en un hiacutegado de Ovis orientalis aries Se observa un ejemplar de F hepatica colangitis croacutenica con lesiones de la mucosa biliar hipertrofiada estrecheces inflamatorias fibrosas y piedras Valle de Fiambalaacute Catamarca 2010helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 188 Figura 25 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino de la provincia de Salta observadas al microscopiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 189 Figura 26 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino del municipio de Cordeiro RJ Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 189 Figura 27 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de bovinos de la provincia de Salta Argentina observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 190 Figura 28 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado del municipio de Lavras MG Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 190 Figura 29 Anaacutelisis filogeneacutetico de F hepatica basado en las secuencias de CO1 FhC01-CAT-adulthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 191
INTRODUCCIOacuteN y OBJETIVOS
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Generalidades
La Fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonoacutetica transmitida por
alimentos causada por Fasciola hepatica Linneaus 1758 (Trematoda Fasciolidae) que
utiliza como hospedadores intermediarios caracoles de agua dulce de la familia
Lymnaeidae Los hospedadores definitivos son mamiacuteferos silvestres y el ganado
principalmente ovino y bovino siendo el hombre un hospedador accidental Aunque este
paraacutesito es prevalente y produce severas peacuterdidas econoacutemicas en animales (Espinosa et
al 2010) actualmente emerge como causa de enfermedad en humanos (Chen y Mott
1990)
Fasciolosis era una enfermedad de los animales que en condiciones particulares podriacutea
infectar al hombre No se puede olvidar que se considera actualmente una zoonosis
emergente una de las 17 enfermedades tropicales desatendidas siendo una afeccioacuten
parasitaria ampliamente difundida en el todo el mundo (Organizacioacuten Mundial de la Salud
1995)
La Fasciolosis se caracteriza por estar relacionada con una problemaacutetica muy compleja
que involucra un contexto socio-cultural y socio-econoacutemico que debe ser atendido
sanitariamente en forma simultaacutenea La decisioacuten de prevenir controlar o eliminar la
aparicioacuten de esta enfermedad como muchos otros problemas del sector salud estaacute
relacionada con los estudios realizados
Fasciola hepatica se situacutea en un lugar preferente dentro del campo de conocimiento de la
Parasitologiacutea contribuyendo a ello la publicacioacuten de libros y trabajos dedicados a este
trematodo en los que se analizan aspectos muy distintos y desde puntos de vista
diferentes
Los apoyos recibidos desde la bioquiacutemica biologiacutea molecular geneacutetica epidemiologiacutea
farmacologiacutea e inmunologiacutea han demostrado ser pilares imprescindibles para impulsar
nuevos planteamientos de las investigaciones y han permitido avanzar en el
conocimiento de esta parasitosis
Los puntos de vista desde los que se investiga sobre F hepatica y Fasciolosis son muy
distintos y profundizan todo lo referente a su conocimiento desde los estudios iniciales
puramente bioloacutegicos o ecoloacutegicos hasta los maacutes modernos y actuales que tienen su
maacuteximo apoyo en la aplicacioacuten de avanzadas teacutecnicas de biologiacutea molecular bioquiacutemica
e inmunologiacutea
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Probablemente no sea ajena esta realidad al hecho importante de que la Fasciolosis
tambieacuten afecta al hombre y de hecho existen regiones en el sur de Latinoameacuterica donde
se diagnostican prevalencias muy elevadas de personas parasitadas por F hepatica
(Bargues et al 1996 a)(Bargues et al 1996 b)
En este sentido en zonas de Latinoameacuterica se reconoce el gran impacto en la salud
puacuteblica y en la economiacutea de los productores ganaderos donde los iacutendices de
parasitacioacuten animal son muy altos (Marcos et al 2007) lo que tambieacuten se traduce en la
presentacioacuten de prevalencias de Fasciolosis humana en esa poblacioacuten estando
afectados de manera especial nintildeos y joacutevenes (Valencia et al 2005)
Los sistemas de informacioacuten y de vigilancia de enfermedades transmisibles no incluyen
en muchos casos los indicadores de morbilidad por zoonosis por lo que la casuiacutestica de
esta enfermedad estaacute muy dispersa Dado que el subregistro es importante que la
informacioacuten proporcionada con relacioacuten a los casos es variable de acuerdo a la fuente o a
la persona que la suministra los datos tienen que ser obtenidos en un nuevo contexto
para que den respuestas a los interrogantes planteados sobre el tema
En la Repuacuteblica Argentina la prevalencia de esta parasitosis en el hombre estaacute reducida
por un fuerte subregistro al que se agregan problemas relativos al diagnoacutestico realizado
rutinariamente mediante el anaacutelisis coproparasitoloacutegico que presenta las desventajas de
una baja sensibilidad y no detectar la fase aguda de la enfermedad (Knoblock 1985)
Numerosas teacutecnicas de inmunodiagnoacutestico de esta parasitosis han sido descriptas y
aplicadas en diversos paiacuteses pero las mismas no se llevan a cabo en los laboratorios de
las aacutereas de mayor casuiacutestica de nuestro paiacutes (Carnevale y Velaacutesquez 2011)
En el paiacutes la importancia de esta enfermedad en los humanos no ha sido suficientemente
evaluada habieacutendose detectado esporaacutedicamente casos en pobladores rurales que
habitan en zonas serranas y turistas que visitaron tales aacutereas durante la eacutepoca estival
(Siciliano et al 1989)(Nieto Sosa et al 2008) Es una patologiacutea de intereacutes regional su
notificacioacuten no es obligatoria siendo una infeccioacuten secundaria a la ingesta de berros
comunes del geacutenero Nasturtium officinale (Barcat 2005) achicoria amarga (Toraxacum
officinale) (Siciliano 1982) u otros vegetales silvestres comestibles Por otra parte el
agua se ha citado como fuente de infeccioacuten humana puesto que se demostroacute la
presencia de metacercarias flotantes lo que se relacionoacute con casos de infeccioacuten humana
en zonas de Ameacuterica donde no es habitual el consumo de berros (Vareille et al 1993)
En los animales el diagnoacutestico se basa en la observacioacuten de paraacutesitos mediante
necropsia (Boero 1976) Tambieacuten se utiliza el estudio con teacutecnicas coproparasitoloacutegicas
y se han desarrollado test inmunoloacutegicos para la deteccioacuten de anticuerpos contra el
trematode (Olaechea 2007)
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La infeccioacuten por F hepatica fue siempre considerada una enfermedad de importancia
animal En los uacuteltimos antildeos la prevalencia de infecciones en rumiantes domeacutesticos ha
sido reportada en Europa con valores de 5 en Italia 10 en Gran Bretantildea 295 a
59 en Espantildea 188 en Noruega 119 en Polonia 107 en Alemania 45 en
Irlanda 293 en Turquiacutea y osciloacute entre el 112 al 252 en el centro de Francia
(Martiacutenez-Valladares et al 2013)(Kozłowska-loj y Loj-Maczulska 2013) Sin embargo a
partir de 1990 se planteoacute como un problema de Salud Puacuteblica debido a la aparicioacuten de
publicaciones que demostraban para el periacuteodo 1970-1990 la existencia de personas
infectadas de 42 paiacuteses diferentes de todos los continentes (Chen y Mott 1990)
En nuestro paiacutes aunque los anaacutelisis en cuanto a fisiografiacutea clima prevalencias animales
y limneidos son auacuten escasos (Mera y Sierra et al 2011) la situacioacuten no tiene porqueacute
diferenciarse de lo que ocurre en Bolivia Peruacute y Chile donde Fasciolosis humana es
endeacutemica Debido a esta nueva situacioacuten la Fasciolosis ya no puede considerarse
simplemente como una enfermedad zoonoacutetica secundaria sino maacutes bien como una
importante enfermedad parasitaria del hombre
Hoy se estima que si bien son los animales los que padecen las infecciones con maacutes
frecuencia respecto de las personas y que si en el pasado la Fasciolosis humana estaba
circunscripta a aacutereas y poblaciones maacutes o menos delimitadas recientemente los cambios
climatoloacutegicos y ambientales y sobre todo los cambios de las costumbres y haacutebitos
humanos estaacuten definiendo nuevos liacutemites geograacuteficos para la distribucioacuten de esta
parasitosis y hacen que aumente el riesgo de muchas poblaciones humanas ante esta
zoonosis (OMS 2006) como en otras enfermedades emergentes
La infeccioacuten humana por F hepatica siempre se habiacutea considerado como una
enfermedad de poca importancia ante lo que se veiacutea como una infeccioacuten rara o
escasamente prevalente sin embargo desde la revisioacuten de la situacioacuten (Chen y Mott
1990) se llamoacute la atencioacuten sobre la importancia de la Fasciolosis como un verdadero
problema de Salud Puacuteblica
Estas y otras circunstancias han hecho cambiar de forma radical la idea que hasta
entonces se teniacutea sobre Fasciolosis humana sobre todo teniendo en cuenta las
numerosas regiones que maacutes recientemente se han demostrado como endeacutemicas y por
tanto con elevadas prevalencias e intensidades de parasitacioacuten La Fasciolosis se
reconoce ahora como una enfermedad humana emergente Sea como fuere es indudable
que el nuacutemero real de casos humanos supera ampliamente los que se denuncian y a
pesar de que la situacioacuten ha cambiado desde ese periodo sigue siendo muy aceptada la
idea de que se trata de una enfermedad propia de ovejas y vacas lo que impide
convencer a los responsables regionales de Salud Puacuteblica de la importancia de estudiar
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en detalle las circunstancias que llevan a la infeccioacuten humana en algunos paiacuteses y la
necesidad imperiosa de adoptar medidas de diagnoacutestico y control
Las caracteriacutesticas de la epidemiologiacutea y transmisioacuten de la Fasciolosis conllevan a que su
distribucioacuten se disponga en las tiacutepicas manchas lo que hace que sea maacutes correcto
mencionar la distribucioacuten en aacutereas geograacuteficas o zonas con determinadas condiciones
maacutes que en el territorio completo de los paiacuteses
En el capiacutetulo de la Salud Puacuteblica referente a Fasciolosis se puede afirmar que hay
determinadas regiones con elevada prevalencia y con muchas personas afectadas En
alguno de los paiacuteses avanzados hay un determinado nuacutemero de casos humanos muchos
de los cuales se informan detalladamente en las publicaciones pero en otros lo que
sucede hace pensar que haya mayor nuacutemero de infecciones por el trematodo y que
pasen inadvertidos para la consulta meacutedica o que incluso se presenten casos de
Fasciolosis que cliacutenicamente se diagnostiquen equivocadamente como otros procesos
de ahiacute que sea de la mayor importancia mejorar o precisar el diagnoacutestico tanto a nivel de
semiologiacutea como del laboratorio
Es evidente que muchos de los estudios sobre prevalencias de fasciolosis humana no
son realmente muestras epidemioloacutegicas sino solamente estimaciones del nuacutemero de
casos detectados en una determinada zona La infeccioacuten humana estaacute citada en
numerosos paiacuteses de los cinco continentes lo que viene a demostrar la gran capacidad
de adaptacioacuten a muy distintos haacutebitats y climas
1 - Antecedentes
11 - Breve Resentildea Histoacuterica
La Fasciolosis en el sentido amplio del teacutermino estaacute causada por paraacutesitos trematodos
digeneos que pertenecen al geacutenero Fasciola cuya distribucioacuten geograacutefica entra sin duda
en la categoriacutea de paraacutesito cosmopolita ya que su difusioacuten es mundial (OMS 2006) Se
han descrito varias especies dentro del geacutenero Fasciola pero soacutelo dos se reconocen
como vaacutelidas desde el punto de vista taxonoacutemico como paraacutesitas del hombre y de
animales Esencialmente las especies que intervienen en esta parasitosis son F hepatica
y F gigantica Cobbold 1855 la primera predomina en zonas de climas maacutes templados
sin excluir su presencia en otras regiones y reconociendo que ambas se superponen con
frecuencia en zonas subtropicales (Andrews 1999)
En una investigacioacuten paleo-parasitoloacutegica realizada en el Valle Saale-Unistrut en
Alemania (Teegen 2003) se evidencioacute la presencia de huevos de F hepatica en un
esqueleto humano prehistoacuterico y tambieacuten en los restos de un bovino de unos 3000 antildeos
a C hallazgos que denotan la presencia de Fasciola spp en Europa hace miles de
antildeos La primera descripcioacuten de Fasciolosis en la literatura estaacute contenida en el libro
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titulado ldquoBlack Book of Chirkrdquo publicado cerca de 1200 (Froyd 1969) donde hace
referencia a paraacutesitos en el hiacutegado de las ovejas
Tabla 1 Hitos en el descubrimiento del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
De Brie 1379 Primero en observar al trematodo F hepatica
Redi 1688 Refuta la teoriacutea de la generacioacuten espontaacutenea
Swammerdam
1737 Primero en observar cercarias en un caracol
Muumlller 1773 Observa cercarias nadando en el agua Zeder 1803 Describe el miracidio eclosionando del huevo Nitzsch 1807 Observa cercarias enquistaacutendose
Bojanus 1818 Describe las redias y el desarrollo de cercariacuteas La Valette St
George 1855 Observa la infeccioacuten del caracol por el miracidio
Weinland 1875 Sugiere que las fases larvarias de F hepatica
transcurren en L truncatula
Leuckart Thomas 1882
Confirma que L truncatula es el hospedador intermediario y se comprende el ciclo bioloacutegico del trematodo
Lutz1892 1893 Confirma que los herbiacutevoros adquieren la infeccioacuten mediante la ingestioacuten de metacercarias
Sinitsin 1914 Confirma la ruta de migracioacuten de F hepatica hacia el hiacutegado
Fuente Andrews Stuart J 1999
Seguacuten la historia maacutes cercana de F hepatica se trata del primer trematodo que describioacute
en 1250 Pietro d‟Abano y maacutes tarde en 1379 Jean de Brie vio los paraacutesitos en un hiacutegado
ovino y relacionoacute su presencia con el consumo de una hierba que llama dauve (acaso un
ranuacutenculo) de donde derivoacute el nombre de duela del hiacutegado (Cordero 1999) Gesner
(1551) demostroacute que el distoma del hiacutegado se encontraba alliacute donde el ganado vacuno se
alimentaba con hierba en las proximidades del agua (Piekarski 1959)
De acuerdo a Cole (1944) una descripcioacuten del gusano aplanado del hiacutegado aparece en el
libro titulado ldquoA new Tracte or Treatyse moost profytable for all Husbandemenrdquo publicado
en 1523 por Sir Anthony Fitzherbert Poco despueacutes en 1539 en el libro ldquoDe lumbricis
alvum occupantibusrdquo se hace referencia a una observacioacuten realizada por el meacutedico
Fanensi Gabucinus quien describe gusanos que pareciacutean semillas de calabaza en los
vasos sanguiacuteneos del hiacutegado de ovejas y cabras Durante la segunda mitad del siglo XVI
se reportaron observaciones adicionales sobre la enfermedad del gusano hepaacutetico
aplanado principalmente las de Cornel Gemma (1575) En ese momento todaviacutea era
comuacuten pensar que la alimentacioacuten de las ovejas con determinadas plantas era
responsable de la enfermedad Recieacuten en 1688 esta teoriacutea fue cambiada por Francesco
Redi un meacutedico italiano autor de la primera helmintologiacutea comparada quien mostrando
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que los paraacutesitos liberaban huevos y asiacute destrozoacute la falsa doctrina de la generacioacuten
espontaacutenea Se desconoce el paraacutesito en el cual esta observacioacuten fue realizada por
primera vez pero Redi fue el primero en publicar un cuadro del paraacutesito un esquema de
un espeacutecimen sacado del hiacutegado de un carnero castrado y antildeos maacutes tarde tambieacuten las
recogioacute incluso de una liebre fue eacutel quien realizoacute los primeros dibujos de los que se tiene
constancia de este trematode
Aparentemente John Faber en 1670 afirmoacute que el gusano aplanado del hiacutegado viviacutea en
los conductos biliares y no en los vasos sanguiacuteneos (Reinhard 1957) Pollas en el siglo
XIX descubre el paraacutesito en el hombre mencionaacutendolo por primera vez en 1818 Otro de
los que describioacute el hallazgo de F hepatica en humanos fue Petridge en 1852 en viacuteas
biliares extrahepaacuteticas en Inglaterra (Blancas et al 2004)
En 1883 Leukhart de Alemania (Taylor 1937) y Thomas de Inglaterra investigando por
separado describieron el ciclo de vida completo (Jensen y Mackey 1973) Asiacute pues en
2014 se cumplioacute el primer centenario del descubrimiento del ciclo completo de F hepatica
en el que participaron numerosos investigadores de diversos paiacuteses entre los que se
citan soacutelo los logros maacutes destacados de alguno de ellos Thomas y Leuckart finalmente
concluidos por Sinitsin (Sinitsin 1914)
111 - Sinonimia
La palabra trematodo (derivada del griego) significa abertura o ventosa F hepatica ha
recibido tambieacuten nombres corrientes como ldquoduelardquo ldquodistomardquo o ldquoliver fluke diseaserdquo y
entre su sinonimia ldquojallo jallordquo ldquocallutacardquo ldquohojuelardquo y ldquomariposardquo El nombre vernaacuteculo en
Meacutexico es ldquocazahuaterdquo popularmente conocida como ldquoalicuyardquo o ldquocolerinardquo en la sierra
peruana ldquoTacutealpha laqacuteordquo en Bolivia ldquopirihuiacutenrdquo en Chile o ldquosaguaipeacuterdquo en Uruguay y
Argentina En nuestro paiacutes ldquoPalomilla del hiacutegadordquo en la pampa huacutemeda ldquocorrochordquo en la
provincia de San Juan ldquochonchacordquo en San Luis y ldquouncardquo o ldquouncacardquo en el noroeste
argentino
112 - Clasificacioacuten taxonoacutemica
Seguacuten los trabajos de Yamaguti et al (1958) Pantelouris (1965) Taylor (1937) Schell
(1985) Borchet (1981) Boray (1982) Boch y Supperer (1982) Euzeby (1971) y Urquhart
et al (1987) la clasificacioacuten taxonoacutemica de las especies del geacutenero F hepatica es la
siguiente
Phylum Platyhelminthes (vermes que poseen un cuerpo aplanado y que en su mayoriacutea
son hermafroditas) clase Trematoda (cuerpo no segmentado forma foliaacutecea con aparato
digestivo incompleto y ventosas como oacuterganos de fijacioacuten) subclase Digenea (evolucioacuten
indirecta con uno o maacutes hospedadores intermediarios) orden Echinostomatida suborden
Prosomata Odhner 1905 superfamilia Fascioloidea familia Fasciolidae Railliet 1985
geacutenero Fasciola Linnaeus 1758 especie F hepatica (Belding 1965)
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12 - Ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
El adulto del paraacutesito presenta aspecto foliaacuteceo lanceolado y aplanado Mide de 5 a 13
mm de ancho por 2 a 3 cm de largo (Noble y Noble 1965) es hermafrodita Su aparato
digestivo es incompleto sin ano El de fijacioacuten estaacute constituido por dos ventosas la
posterior o acetaacutebulo estaacute sobre la cara ventral y es de forma triangular la ventosa
anterior es redondeada y maacutes pequentildea Carece de aparato circulatorio y respiratorio
(Belding 1965)
FuenteBIODIDACR Livingstone
Figura 1 Especiacutemenes adultos de F hepatica sobre la caacutepsula de Glisson obtenidos a
partir de una infeccioacuten natural en Lama glama en el valle de Fiambalaacute y esquema de F
hepatica adulta
El uacutetero presenta una forma tubular enrollada dilataacutendose por la acumulacioacuten de los
huevos y desembocando finalmente en el poro genital junto al cirro (Rey Millares
1960)(Belding 1965)(Pezzi Guimaratildees 2002)
Los huevos del paraacutesito (50 x 150 micro de color parduzco) inmaduros son descargados por
los conductos biliares en las heces Pasan a cursos de agua desarrollan el embrioacuten
liberan la primera forma larval el miracidio el cual penetra un hospedador intermediario
que incluye muchas especies del geacutenero Lymnaea en el que se desarrolla a otros
estadios larvales -esporoquistes redias- hasta emerger como cercarias moacuteviles Las
cercarias se liberan del molusco y se enquistan como metacercarias en la superficie de
las plantas acuaacuteticas donde se mantienen intactas e infectivas por largos periacuteodos
El hospedador (mamiacutefero) definitivo se infecta por el consumo de vegetales crudos En eacutel
la metacercaria se desenquista y desarrolla a formas juveniles y adultas que finalmente
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se alojan en los conductos biliares El paraacutesito produce huevos (a partir de los 3 meses)
que pasan con la bilis a las heces del hospedador completando el ciclo (Belding
1965)(Kean et al 1978)
Fuente Centro para el control y prevencioacuten de enfermedades
(CDC)
Figura 2 Huevos de F hepatica presentes en materia fecal de ovinos infectados
naturalmente en el valle de Fiambalaacute obtenidos por el meacutetodo de sedimentacioacuten de
Dennis Stone y Swanson donde se aprecian los embriones en su interior y el detalle del
opeacuterculo abierto y esquema de huevo embrionado
Los paraacutesitos del Phylum Platyhelminthes Clase Trematoda Subclase Digenea se
hallan dentro del grupo de los que se transmiten entre varios hospedadores El ciclo de
vida de los digeneos involucra un hospedador definitivo en general un vertebrado donde
el paraacutesito alcanza la madurez sexual por lo menos un hospedador intermediario donde
se produce la multiplicacioacuten larval (esporoquistes redias y cercarias) y estadios de vida
libre (miracidios y cercarias) (Hasseeb y Fried 1997) El primer hospedador intermediario
es un caracol con respecto al cual los digeneos poseen una gran especificidad El estadio
infectivo para el hospedador definitivo es la metacercaria y para el primer hospedador
intermediario el miracidio
Figura 3 Esquema del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
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Nota Los huevos inmaduros de F hepatica se descargan en los conductos biliares y en
las heces Los huevos embrionados maduran en el agua huevos liberando
miracidios que invaden un hueacutesped intermediario adecuado caracol del geacutenero
GalbaFossaria En el caracol los paraacutesitos pasan por varias etapas de desarrollo
(esporoquistes redias y cercarias ) Las cercarias se liberan del caracol y se
enquistan como metacercarias en la vegetacioacuten acuaacutetica u otras superficies Los
mamiacuteferos adquieren la infeccioacuten por comer la vegetacioacuten que contiene metacercarias
Los seres humanos pueden infectarse al ingerir vegetales que contiene metacercarias
especialmente berros Despueacutes de la ingestioacuten las metacercarias se desenquistan en
el duodeno y migran a traveacutes de la pared intestinal la cavidad peritoneal y el
pareacutenquima hepaacutetico a los conductos biliares donde se desarrollan como trematodos
adultos
Fuente Centro para el Control y Prevencioacuten de Enfermedades (CDC)
121 - Aspectos epidemioloacutegicos
El estudio de la epidemiologiacutea de la Fasciolosis involucra los factores que afectan la
prevalencia y la intensidad de la infeccioacuten y como esto impacta en los animales
(Torgerson y Claxton 1999) La epidemiologiacutea de la enfermedad depende de la
susceptibilidad de las especies de hospedadores definitivos dada por la resistencia
natural o adquirida y por el estado nutricional la edad y otros factores que condicionan la
fisiologiacutea de cada especie y tambieacuten de la presioacuten de infeccioacuten en el ambiente La presioacuten
de infeccioacuten a su vez estaacute fuertemente influenciada por factores abioacuteticos en particular
por la temperatura y la humedad que modulan la presencia y el desarrollo de los
hospedadores intermediarios y el desarrollo del paraacutesito dentro y fuera de eacutestos
(Torgerson y Claxton 1999) La epidemiologiacutea de la Fasciolosis tambieacuten depende de una
gran variedad de factores topograacuteficos bioloacutegicos y de manejo ganadero (Boray et al
1969)
La distribucioacuten de la Fasciolosis es irregular ya que la infeccioacuten estaacute determinada por la
presencia del molusco que actuacutea como hospedador intermediario en el agua dulce de la
presencia de animales herbiacutevoros de las condiciones fisiograacuteficas y climaacuteticas y de los
haacutebitos dietarios humanos (Mas-Coma 2005)
Respecto a las caracteriacutesticas ecoloacutegicas del caracol bajo especiales circunstancias los
limneidos son capaces de adaptarse a las condiciones maacutes extremas Los caracoles
limneidos son maacutes resistentes a las bajas temperaturas que a las altas Las
metacercarias son susceptibles a la desecacioacuten a temperaturas por encima de los 25 ordmC
pero pueden sobrevivir a las bajas temperaturas durante tiempo con suficiente nivel de
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humedad Una alta humedad asociada con abundantes lluvias suelen ser precursoras de
endemias en animales herbiacutevoros (Ripert et al 1988)
Los principales animales que actuacutean como reservorios hospedadores en relacioacuten al
hombre son las ovejas las cabras y los bovinos La oveja es el mamiacutefero reservorio que
juega un papel maacutes importante en la contaminacioacuten de los pastos y por tanto en la
transmisioacuten humana En la oveja la puesta de huevos diaria es relativamente alta (4000-
5000 huevos por paraacutesito adulto y 8800-25100 por hospedador) (Boray 1969)
Los haacutebitos alimenticios del ser humano son muy importantes en la Fasciolosis Comer
berro ademaacutes de otras verduras acuaacuteticas con metacercarias adheridas puede ser
vehiacuteculo de la transmisioacuten asiacute como beber agua contaminada con metacercarias
flotantes (Bargues et al 1996 b)
Los trabajos de Fasciolosis publicados en la literatura permiten distinguir varias
categoriacuteas (I) la mayoriacutea de artiacuteculos se refieren a notificaciones de casos individuales
(II) otros informan de varios miembros de grupos familiares que compartieron alimentos
contaminados (III) artiacuteculos que comunican brotes que no necesariamente afectan a
miembros de la misma familia y (IV) artiacuteculos de estudios epidemioloacutegicos que se
refieren a un gran nuacutemero de personas (Chen y Mott 1990)(Esteban et al 1998)
Cabe destacar la gran capacidad de colonizacioacuten y expansioacuten de esta enfermedad a
partir de los oriacutegenes euroasiaacuteticos de F hepatica relacionada con la gran adaptabilidad
tanto de los trematodes como de los limneidos a medios muy diversos En el caso de F
hepatica resalta su capacidad de adaptarse y dar lugar a grandes endemias en lugares
extremos e inhoacutespitos
13 - Viacuteas de difusioacuten geograacutefica de F hepatica
Los animales domesticados alcanzaron grandes densidades poblacionales y se
concentraron en la proximidad de la vivienda humana aumentando la probabilidad de
transmisioacuten intraespeciacutefica de las infecciones y el contagio a la poblacioacuten humana
(Wisnivesky 2003) Los animales domeacutesticos se originaron en la medialuna feacutertil del
Sudeste asiaacutetico o Mesopotamia y se dispersaron luego alrededor del mundo (Haviland
1997)
El punto inicial de difusioacuten de F hepatica durante el periacuteodo posterior a la adaptacioacuten
peri-domiciliaria mediante pequentildeos rumiantes ovinos y caprinos salvajes hacia el Viejo
Mundo procedioacute del Medio Oriente aproximadamente 6000 a C La dispersioacuten hacia el
oeste centro y norte de Europa tuvo lugar a traveacutes de los Balcanes Turquiacutea y Grecia
entre los milenios 4-3 a C Hacia el oeste la ruta seguida probablemente fue por el
Mediterraacuteneo con los fenicios y maacutes tarde con los romanos llegando al noroeste de
Aacutefrica e Iberia sobre el siglo VIII a C Los ochocientos antildeos de ocupacioacuten aacuterabe de la
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peniacutensula ibeacuterica ciertamente habriacutean contribuido a la difusioacuten de F hepatica hacia el
norte de Aacutefrica a traveacutes de Gibraltar (Mas-Coma et al 2009 a)
La expansioacuten hacia el este en Asia sentildeala dos posibles rutas principales una maacutes
limitada hacia el sur a traveacutes de las montantildeas de Afganistaacuten y hasta Pakistaacuten
probablemente en los milenios IV y III a C y otra viacutea maacutes larga a traveacutes de Mongolia
hasta China y el Lejano Oriente al parecer maacutes reciente
Figura 4 Geografiacutea de la probable dispersioacuten de Fasciola hepatica
Fuente Mas-Coma et al 2009 a
131 - Distribucioacuten de F hepatica en Ameacuterica
Fueron las rutas transoceaacutenicas hacia el Nuevo Mundo y Oceaniacutea las que continuaron la
propagacioacuten de F hepatica durante los uacuteltimos 500 antildeos Otras rutas secundarias
completaron la dispersioacuten en las diferentes zonas de Ameacuterica Esto viene a significar que
la amplia difusioacuten de la Fasciolosis en Espantildea Portugal Francia el Reino Unido y Paiacuteses
Bajos entre los siglos XV y XIX constituyoacute probablemente la viacutea de introduccioacuten del
paraacutesito en tierras americanas
Luego de la llegada de los europeos a Ameacuterica comienza la introduccioacuten de animales
domeacutesticos El ganado espantildeol adquirioacute importante representacioacuten puesto que se habriacutea
extendido inicialmente en el aacuterea del Caribe y despueacutes hacia el resto de Ameacuterica Central
y del Sur En Argentina F hepatica se describe por primera vez como problema en
ovinos en 1888 (Bacigalupo et al 1943)
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El ganado de origen espantildeol introducido en el continente fue inicialmente ovino y
despueacutes se amplioacute al vacuno mientras que el ganado de origen portugueacutes que llegoacute
hacia Brasil fueron bovinos criados principalmente en el noroeste de la peniacutensula Ibeacuterica
(Mirol et al 2003)
La gran uniformidad geneacutetica de las Fasciolas halladas en puntos geograacuteficamente
alejados como Valdivia en Chile o Leoacuten en Espantildea demuestra el origen comuacuten de la
difusioacuten de paraacutesito y de hospedadores en toda Ameacuterica Otro tanto sucede entre los
aislamientos geneacuteticos del Reino Unido en relacioacuten con los hallados en Australia
La Fasciolosis endeacutemica que hoy se extiende por amplias zonas de los paiacuteses del sur de
Latinoameacuterica es producto de la historia En Ameacuterica precolombina no se conociacutean las
ovejas ni las vacas pero los europeos al llegar a las nuevas tierras las importaron desde
Europa presumiblemente ya infectadas con trematodes y no soacutelo eso tambieacuten se
trajeron sin tener conocimiento de ello los caracoles (Lymnaeas)
Tal acarreo ha llegado a generar un verdadero problema ecoloacutegico que con el paso del
tiempo ha alcanzado cotas tan importantes que por ejemplo solamente en la VII Regioacuten
de Chile se ha registrado un porcentaje de animales infectados del 90 con importantes
decomisos hepaacuteticos en las faenas de los mataderos (Apt et al 1992) La invasioacuten
parasitaria fue tan efectiva que afectoacute a otras muchas especies incluso a las vicuntildeas
llamas (Mariacuten 2009) alpacas guanacos liebres (Kleiman et al 2004) conejos silvestres
etceacutetera Otro tanto puede decirse de amplias regiones de Peruacute Bolivia Ecuador y de
paiacuteses centroamericanos como es el caso de Cuba (Acha y Szyfres 1997)
El empleo de especies animales para el transporte de personas bienes y mercanciacuteas que
se produce en todas las civilizaciones humanas proporcionoacute la posibilidad de que F
hepatica se extendiera de modo progresivo a amplias aacutereas geograacuteficas dentro de un
continente o una regioacuten intracontinental Muchos de estos animales entre ellos las mulas
y llamas todaviacutea se emplean hoy para el transporte aunque sea a escala local y en ese
sentido representan un medio importante que posibilita la difusioacuten de la infeccioacuten
La trashumancia es un sistema de explotacioacuten ganadera basado en el pastoreo y
aprovechamiento de pastos en periodos adecuados y se orienta a evitar los efectos
negativos de factores climaacuteticos excesivamente rigurosos por las temperaturas friacuteas o
caacutelidas acompantildeadas de escasas precipitaciones o de excesiva sequiacutea en particular en
ciertas estaciones y regiones determinadas La migracioacuten estacional de la ganaderiacutea
entre tierras bajas y de montantildea ha sido una tradicioacuten importante durante muchos antildeos y
aun todaviacutea se practica en muchas regiones cordilleranas de nuestro paiacutes
Es evidente que los transportes por viacutea terrestre mariacutetima o aeacuterea utilizados
asiduamente para movimientos de importacioacutenexportacioacuten de ganado pueden tener
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repercusiones sanitarias y muy probablemente han sido el origen de introduccioacuten de
Fasciolosis hasta otras zonas lejanas tal como sucedioacute en Ameacuterica
Los problemas relacionados con estos movimientos comerciales ademaacutes de implicar el
riesgo de extender la infeccioacuten por F hepatica hacia otras aacutereas tambieacuten dificultan la
realizacioacuten y obtencioacuten de buenos resultados en estudios geneacuteticos que esteacuten basados
en algunos marcadores moleculares En efecto si las poblaciones de F hepatica
proceden de mezclas anteriores y de distintos oriacutegenes es muy difiacutecil que a traveacutes de los
estudios geneacuteticos se puedan hacer interpretaciones correctas sobre su origen y las viacuteas
seguidas por los paraacutesitos (Semynova et al 2006)(Walker et al 2007) y por tanto habraacute
mucha dificultad para obtener resultados reveladores sobre las rutas seguidas por
Fasciola spp sobre todo si se tiene en cuenta la escasa disponibilidad de marcadores
moleculares fiables
Tales movimientos de ganaderiacutea realmente no soacutelo facilitan la extensioacuten de F hepatica
sino tambieacuten de las especies de caracoles que actuacutean como hueacutespedes intermediarios
como es el caso de los limneidos que se encuentran en contacto directo con los animales
porque ambos comparten haacutebitats similares Esto es lo que sucede con respecto a Galba
truncatula que puede ser arrastrado entre las pezuntildeas de los animales y dispersados a
otros lugares introducieacutendose asiacute de manera accidental donde no es habitual Es lo que
muy probablemente ha sucedido y se ha analizado en zonas de Bolivia (Mas-Coma et al
2001) Las evidencias sugieren que ejemplares de G truncatula pueden permanecer
activos en el seno de trozos de barro adherido a las pezuntildeas de los rumiantes que
pisotean esas zonas y pueden ser trasladados a otras donde tras un periodo de
hibernacioacuten o estivacioacuten se reactivan cuando nuevamente se sumergen en agua
Si se observan los datos sobre la evolucioacuten de la Fasciolosis animal de los uacuteltimos antildeos
en muchas regiones los resultados no dejan de sorprender porque se comproboacute algo
muy llamativo y es que lejos de disminuir la prevalencia ha aumentado
Diversos estudios han puesto de manifiesto diferencias en la resistencia o sensibilidad a
esta parasitosis dependiendo de la especie animal los bovinos ovinos equinos y el
hombre reaccionan en forma tardiacutea permitiendo su desarrollo Asiacute pues la infeccioacuten por
F hepatica no afecta por igual a todas las especies animales el ganado ovino y bovino
son los maacutes receptivos lo que implica considerables peacuterdidas econoacutemicas tanto directas
(son conocidas las mortandades en bovinos debidas a Hemoglobinuria Bacilar por
Clostridium haemolyticum como la Hepatitis Infecciosa Necrosante por C novyi B en
ovinos asociadas a Fasciolosis aguda) como indirectas (decomiso de hiacutegados
disminucioacuten de las producciones gastos en tratamientos etceacutetera) (Olaechea 1994)
Dentro de los animales susceptibles de ser hospedadores reservorios de F hepatica se
diferencia I) animales domeacutesticos principales reservorios ganado vacuno y ovino
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cerdos buacutefalos y monos II) animales domeacutesticos reservorios secundarios caballos
cabras dromedarios camellos y llamas III) animales silvestres liebres conejos y
roedores entre otros (Mas-Coma et al 1997)
Es curioso como en animales de laboratorio como ratas ratones conejos asiacute como en
humanos unos pocos ejemplares de F hepatica producen reacciones muy intensas e
incluso muertes Otros en cambio como el cerdo poseen una resistencia natural a la
migracioacuten de las formas juveniles probablemente por la gran cantidad de tejido
conjuntivo perilobulillar que tienen (Getty 1974) sin embargo tambieacuten hay descritas
Fasciolosis graves En eacutequidos que son hospedadores receptivos a F hepatica las
lesiones son casi inaparentes incluso en caso de parasitacioacuten abundante Se mencionan
casos de muerte relacionados con F hepatica en los que curiosamente se encontraron
nuacutemeros variables de especiacutemenes desde uno a 14 e incluso hasta 40 ejemplares (Rojo
y Ferreacute 1999)
En la Repuacuteblica Argentina los registros de decomiso de hiacutegados indican que la
Fasciolosis es la cuarta enfermedad de importancia veterinaria del ganado bovino de
acuerdo a los datos de la Oficina de Estadiacutestica del Servicio Nacional de Sanidad y
Calidad Agroalimentaria Direccioacuten de Fiscalizacioacuten de Productos de Origen Animal Es
considerada una enfermedad endeacutemica en el paiacutes y su distribucioacuten abarca las provincias
de Buenos Aires Catamarca Coacuterdoba Corrientes Chaco Chubut Entre Riacuteos Jujuy La
Pampa Mendoza Misiones Neuqueacuten Riacuteo Negro Salta San Luiacutes Santa Cruz Santa Fe
y Tierra del Fuego En los uacuteltimos antildeos las mayores prevalencias en animales se
registraron en la Regioacuten Patagoacutenica (68) seguida de la Regioacuten Noreste (41)
Noroeste (25) Cuyo (14) y Pampeana (09) (Prepelitich y Wisnivesky-Colli 2013)
En Catamarca no existen registros oficiales del porcentaje de infeccioacuten en el ganado
vacuno u otras especies animales por este trematodo hepaacutetico aunque los ganaderos
refieren peacuterdidas econoacutemicas importantes La Fasciolosis animal estaacute ampliamente
distribuida en todos los departamentos de la provincia seguacuten se desprende de la
informacioacuten de los decomisos de viacutesceras infectadas en los mataderos
La Fasciolosis se ha considerado una enfermedad que afecta a la ganaderiacutea desde
tiempo inmemorial Debido a su importancia econoacutemica a su particular ciclo bioloacutegico y
forma de transmisioacuten su peculiar especificidad de hospedadores etc se han planteado
a lo largo de muchos antildeos multitud de estudios no soacutelo desde la perspectiva veterinaria
sino tambieacuten de otras muchas aacutereas de conocimiento en lo que se ha convenido en
llamar acercamientos multidisciplinares que van siendo habituales en las investigaciones
parasitoloacutegicas
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14 - Hospedador intermediario
El paraacutesito no se encuentra en regiones donde las condiciones no son las adecuadas
para el desarrollo de los caracoles que sirven de hospedador intermediario Pertenecen al
Phylum Mollusca y a la clase Gasteropoda y las especies de intereacutes se encuentran en la
subclase Euthyneura o Pulmonata dependiendo del sistema de clasificacioacuten (Cuezzo
2009)
Los caracoles pertenecientes al geacutenero Lymnaea se encuentran involucrados en la
transmisioacuten de F hepatica Son anfibios y viven en el barro en ambientes de aguas poco
profundas sujetos a las inundaciones y desecaciones Se los encuentra normalmente en
haacutebitats que se presentan huacutemedos intermitentemente y en aguas ligeramente aacutecidas y
es raro encontrarlos en ambientes permanentemente huacutemedos Su distribucioacuten no es
uniforme porque dentro de cada haacutebitat pueden concentrarse en aacutereas pequentildeas con
canales de drenaje y filtraciones Viajan largas distancias arrastrados por la corriente y en
ciertos paiacuteses del mundo como Australia las grandes regiones con aguas permanentes y
que contienen pocos caracoles son consideradas importantes en la recolonizacioacuten de
cursos de agua temporarios El 30 de los moluscos sobrevive meses de sequiacutea
mediante la estivacioacuten y auacuten los recieacuten eclosionados pueden sobrevivir dos meses de
estivacioacuten Sin embargo una vez que el agua regresa los caracoles son capaces de
procrearse raacutepidamente (Torgerson y Claxton 1999)
Figura 5 Imagen y fotografiacutea del aspecto externo de Lymnaea neotropica proveniente del
valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina
La ecologiacutea de la Fasciolosis estaacute estrechamente relacionada con la de los moluscos que
sirven de hospedadores intermediarios Los caracteres fisiograacuteficos la composicioacuten del
suelo y los factores climaacuteticos determinan el ritmo de la reproduccioacuten de los limneidos y
por consiguiente la dinaacutemica epidemioloacutegica
F hepatica posee una gran especificidad hacia su hospedador intermediario ya que soacutelo
se desarrolla en caracoles de la familia Lymnaeidae Estos caracoles estaacuten distribuidos
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en todo el mundo aunque son maacutes abundantes en las zonas templadas del hemisferio
norte (Malek 1962) Son caracoles pulmonados en su mayoriacutea anfibios capaces de vivir
sobre el fango aunque existen algunas especies maacutes acuaacuteticas que se desarrollan a
varios centiacutemetros de profundidad Habitan una gran variedad de ambientes
dulceacuiacutecolas temporarios y permanentes poco profundos de aguas claras con poca
corriente (Malek 1962)
No todas las especies de limneidos son igualmente susceptibles a F hepatica y tanto los
factores extriacutensecos (condiciones ambientales de cada regioacuten) como los intriacutensecos
(estado nutricional tamantildeo madurez sexual etceacutetera) influyen en el rol de cada especie
como hospedador intermediario (Ollerenshaw 1971)(Mattos y Ueno 1986)(Minchela et
al 1985)
En la mayoriacutea de los paiacuteses de Ameacuterica del Sur L viator L cubensis y L truncatula
estaacuten identificadas como los principales hospedadores de F hepatica (Samadi et al
2000)(Pointer et al 2006)(Kleiman et al 2007) en Brasil la especie introducida L
columella es el principal hospedador intermediario (Amato et al 1986)
Las especies descriptas en nuestro paiacutes son L viator L diaphana L peculiaris L
pictonica y L plicata (Hubendick 1951)(Paraense 1975)(Castellano y Landoni 1981)
(Paraense 1982)(Paraense 1983)(Paraense 1984)(Malek 1985) L columella
(Hubendick 1951)(Prepelich et al 2003) L patagonica L neotropica (Bargues y Mas-
Coma 2005)(Bargues et al 2007 a b) y L truncatula (Issia et al 2008)
En Argentina la relevancia epidemioloacutegica y la distribucioacuten geograacutefica de estos caracoles
no se conocen con precisioacuten y existe poca certeza taxonoacutemica entre las especies del
geacutenero Las especies L plicata Hylton Scott 1953 y L diaphana King 1830 han sido
escasamente citadas (Hubendick 1951)(Hylton 1953) La distribucioacuten de L diaphana se
encuentra asociada a zonas friacuteas abarca la Patagonia Tierra del Fuego e Islas Malvinas
(Castellanos y Landoni 1981) aunque en Salta tambieacuten se ha observado la presencia de
esta especie (Rossanigo et al 1983) La especie L viatrix Orbigny 1835 ha sido
descripta en las siguientes provincias Buenos Aires Catamarca Chubut Coacuterdoba
Corrientes Entre Riacuteos Jujuy Mendoza Neuqueacuten Riacuteo Negro Salta y San Luis
(Paraense 1976 1982)(Lombardero et al 1979)(Castellanos y Landoni
1981)(Rossagnino et al 1983)(Venturini y Fonrouge 1985)(Kleiman et al 2004) La
distribucioacuten de L columella (Say 1817) estaacute restringida al Noreste (Prepelitch et al
2003) mientras L truncaluta es reportada en el paiacutes como el maacutes importante limneido en
la transmisioacuten de Fasciolosis (Bargues et al 2006 b) En la provincia de Catamarca L
viator es la especie reconocida (Bacigalupo 1930)(Morton 1986)(Ubaid 1989)
En la revisioacuten general maacutes reciente sobre limneidos sudamericanos Malek (1985)
catalogoacute la misma especie mencionada por Hubendick (1951) pero aceptando L
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patagonica como vaacutelida y no incluyoacute a L peculiaris Mientras que para Lombardero et al
(1979) el informe en Argentina de la especie europea Stagnicola como L palustris por
NJ Evans del Museo Britaacutenico de Historia Natural es sorprendente ya que seriacutea el uacutenico
Stagnicola reconocido en la Regioacuten Neotropical Asimismo se deberiacutea confirmar la cita
de la especie L cousini (Olaechea 1994) ya que puede haber un malentendido sobre
esta especie porque contrariamente a lo que se sentildeala no se incluye la presencia de L
cousini en Argentina en la uacuteltima revisioacuten de Castellanos y Landoni (1981)
Recientemente los hallazgos de L neotropica por Mera y Sierra (2009) en la provincia de
Mendoza y el de Pujadas et al (2014) en la provincia de Entre Riacuteos representan tanto
una nueva especie de limneido para la fauna argentina como un intereacutes adicional del
punto de vista de la enfermedad
Cuando la temperatura ambiente oscila entre los 10-30 ordmC y hay suficiente humedad en el
suelo se generan condiciones favorables para el establecimiento y desarrollo de los
caracoles de la familia Lymnaeidae (Torgerson y Claxton 1999) Estas condiciones
permiten que los moluscos desarrollen poblaciones abundantes y persistentes en el
tiempo A su vez los huevos de F hepatica eliminados por el ganado infectado se
desarrollan satisfactoriamente bajo estas mismas condiciones ambientales liberaacutendose al
ambiente gran cantidad de miracidios Estos se ponen en contacto con los caracoles
susceptibles y aumenta el nuacutemero de ejemplares infectados que luego emitiraacuten cercarias
que se enquistaraacuten en la vegetacioacuten Una gran cantidad de hospedadores definitivos
susceptibles ya sea porque tienen una resistencia innata pobre o una respuesta inmune
deficiente estaraacute en condiciones de infectarse y desarrollar exitosamente la infeccioacuten
Si bien el hospedador intermediario juega un rol fundamental en el ciclo de transmisioacuten
porque el paraacutesito se multiplica asexualmente en eacutel y aumenta en forma exponencial el
nuacutemero de larvas el hospedador definitivo es importante en la diseminacioacuten de la
infeccioacuten debido a su mayor capacidad para trasladarse (Haseeb y Fried 1997) Para
entender el modo de transmisioacuten en este tipo de ciclos es esencial conocer la biologiacutea de
los hospedadores intermediarios y definitivos Maacutes auacuten la dinaacutemica de transmisioacuten de las
infecciones por digeneos soacutelo puede ser comprendida teniendo en cuenta los factores
abioacuteticos que regulan las poblaciones de hospedadores intermediarios y aquellos que
influyen en el desarrollo de los estadios de vida libre del paraacutesito (Haseeb y Fried 1997)
Las pequentildeas especies de limneidos incluidas en el grupo GalbaFossaria son muy
importantes debido a su gran capacidad para transmitir F hepatica Hay sin embargo
especies incluidas en este grupo que muestran una alta capacidad de transmisioacuten y en el
extremo opuesto hay otras que han demostrado no ser susceptibles a la infeccioacuten por
etapas larvales de F hepatica como L schirazensis (Bargues et al 2011 a) Por otra
parte hay especies de este grupo que estaacuten claramente relacionadas con las aacutereas
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endeacutemicas de Fasciolosis humana debido a su ecologiacutea antropofiacutelica y comportamiento
mientras que otras especies por lo general habitan biotopos frecuentados por el ganado
pero alejados de los lugares donde los humanos viven o desarrollan sus actividades
(Artigas et al 2011)(Bargues et al 2012)
Debido a este aspecto estar maacutes relacionado con la infeccioacuten humana o la infeccioacuten
animal presenta un intereacutes aplicado a la diferenciacioacuten entre las especies que
pertenecen a este grupo cuando se trata de los hospedadores intermediarios presentes
en una zona endeacutemica (Bargues et al 2011 c)
La susceptibilidad de las especies de limneidos en Fasciolosis representa un factor
crucial en el establecimiento no soacutelo de la distribucioacuten geograacutefica de la enfermedad en los
animales y los seres humanos sino tambieacuten en las prevalencias e intensidades debido a
caracteriacutesticas ecoloacutegicas (dinaacutemica de la poblacioacuten caracteriacutestica antropofiacutelica tipo de
cuerpos de agua etceacutetera) de las distintas especies de limneidos Es por ello que los
limneidos aparecen vinculados a los diferentes patrones de transmisioacuten (Mas-Coma
2005) y escenarios epidemioloacutegicos (Mas-Coma et al 1999 a) de esta enfermedad muy
heterogeacutenea en los seres humanos (Mas-Coma et al 2009 a) Las diferencias en faunas
de limneidos continentales tambieacuten explican porque la Fasciolosis en Ameacuterica solamente
es causada por F hepatica debido a la ausencia de limneidos del geacutenero Radix que
actuacutean como intermediarios de F gigantica (Bargues et al 2001)
A nivel de especies de limneidos los problemas se encuentran principalmente en la
uniformidad morfoloacutegica y anatoacutemica interespeciacutefica que por lo general da serias
dificultades en la clasificacioacuten de una muestra (Bargues y Mas-Coma 2005)(Bargues et
al 2007 a 2011 a) Por otra parte la variacioacuten intraespeciacutefica de la forma de la conchilla
es particularmente marcada en limneidos dependiendo de las condiciones ambientales
Por lo tanto hay muchos problemas de clasificacioacuten de muestras principalmente
relacionados con las especies del grupo GalbaFossaria (Bargues et al 2011 a)
Afortunadamente hay marcadores de secuencia tanto en el ADNr nuclear y el ADN
mitocondrial que permiten una apropiada clasificacioacuten de muestras en estos
invertebrados (Mas-Coma y Bargues 2009)
15 - Fasciola hepatica en humanos
En lo que hace referencia a la Fasciolosis humana durante muchos antildeos se encuadroacute
como una enfermedad que se presentaba en situaciones muy particulares de modo que
se habiacutean citado relativamente pocos casos y de forma esporaacutedica lo que condujo a que
esta parasitosis haya estado clasificada como ldquoenfermedad secundariardquo
Esta situacioacuten ha cambiado apreciablemente en los uacuteltimos antildeos cuando la OMS
comenzoacute a sospechar que habiacutea aspectos nuevos que atender puesto que al disponer
de informes serios de varios paiacuteses se confirmaba la existencia de la infeccioacuten humana
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por F hepatica con mucha maacutes frecuencia de lo que se suponiacutea Fue en ese periodo
cuando la OMS decidioacute apoyar las investigaciones sobre Fasciolosis humana a nivel
mundial con una iniciativa que incluyoacute diversos campos de investigacioacuten dentro de lo que
se denomina colaboracioacuten de equipos multidisciplinares y con la aplicacioacuten avanzada de
procedimientos de estudio que por ejemplo incluiacutean la geneacutetica molecular
Desde la deacutecada de 1990 la Fasciolosis humana tiene una mayor relevancia debido no
solo al aumento en el diagnoacutestico del nuacutemero de casos y la alta tasa de morbilidad que
causa entre la poblacioacuten afectada sino tambieacuten por el elevado nuacutemero de personas en
riesgo de infeccioacuten (Chen y Mott 1990) Este hecho refleja un serio problema de Salud
Puacuteblica con una importante repercusioacuten en la economiacutea de las sociedades traducido
como ausencias escolares y laborales por parte de la poblacioacuten parasitada Esto respalda
que la Fasciolosis no siga siendo considerada una mera zoonosis secundaria
Se estimaba que la poblacioacuten humana afectada por Fasciolosis podriacutea situarse entre los
24 (Rim et al 1996) y 17 millones de personas (Hopkins 1992) con un total de 180
millones en riesgo de contraer la enfermedad (OMS 1995) Ademaacutes si se tiene en
cuenta la falta de conocimiento sobre la enfermedad en humanos en muchas regiones de
Aacutefrica y Asia el nuacutemero de personas afectadas podriacutea ser mucho mayor que el notificado
(Mas-Coma 2004 a b)
La Fasciolosis humana ha sido descrita en 51 paiacuteses diferentes de los 5 continentes
(Esteban et al 1998) Los anaacutelisis de distribucioacuten de la enfermedad han mostrado que es
la parasitosis que presenta una distribucioacuten geograacutefica con la mayor amplitud latitudinal
longitudinal y altitudinal conocidas (Mas-Coma et al 2003) En la Fasciolosis humana se
han descrito situaciones de hipoendeacutemia mesoendeacutemia e hiperendeacutemia (Mas-Coma et
al 1999 a 2008 2009 a)
La Fasciolosis es una enfermedad parasitaria cosmopolita En todo el mundo se
presentan casos humanos esporaacutedicos (Soulsby 1987) habieacutendose incrementado su
incidencia desde fines del siglo pasado (Loja et al 2003) Es asiacute como en la deacutecada del
noventa se empezaba a considerar como una parasitosis de mayor importancia en salud
humana Los brotes que se registraban con anterioridad eran localizados y afectaban un
nuacutemero reducido de personas Para esa eacutepoca la OMS reconoce el intereacutes meacutedico a
escala mundial
Hasta hace pocos antildeos la Fasciolosis se circunscribiacutea a poblaciones de cuencas
hidrograacuteficas bien delimitadas pero los recientes cambios ambientales y del
comportamiento humano estaacuten definiendo nuevos liacutemites geograacuteficos y aumentando las
poblaciones en riesgo (Savioli et al 1999) por ende la enfermedad posee una
distribucioacuten irregular Las caracteriacutesticas corresponden no a un paiacutes determinado sino a
una determinada zona fisiograacutefica y climaacuteticamente homogeacutenea (Mas-Coma et al 1999
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b) Tiacutepicamente ocurre en regiones templadas a excepcioacuten de Oceaniacutea distribuyeacutendose
ademaacutes en zonas tropicales y subtropicales La Fasciolosis humana es una enfermedad
tropical re-emergente que en los uacuteltimos antildeos se reporta con mayor incidencia aun
donde anteriormente se habiacutea asociado a casos surgidos entre el ganado de la zona
afectada (Mas-Coma et al 1999 b)
Despueacutes de antildeos de estudio en las zonas donde la infeccioacuten humana por F hepatica es
comuacuten se propuso una clasificacioacuten en base a supuestos epidemioloacutegicos (Mas-Coma et
al 2009 c) Asiacute se indican casos humanos ldquoimportadosrdquo que aparecen en zonas sin
Fasciolosis pero que se han adquirido en otros lugares endeacutemicos Hay tambieacuten casos
ldquoautoacutectonosrdquo que se presentan generalmente donde hay una casuiacutestica animal
importante y que aparecen de manera esporaacutedica o muy irregular Finalmente se
entiende que hay zonas ldquoendeacutemicasrdquo detectadas mediante pruebas directas y por
serologiacutea Entre ellas hay diferencias importantes en cuanto a la prevalencias desde las
que tienen porcentajes inferiores al 1 hasta otras zonas en las que se puede definir un
estadio de hiperendemismo con prevalencias que superan el 10
En esos lugares endeacutemicos pueden distinguirse tres tipos de situaciones atendiendo a la
prevalencia en la poblacioacuten total Hipoendeacutemico la prevalencia es menor al 1
Mesoendeacutemico con porcentajes de infeccioacuten del 1 al 10 donde puede presentarse una
alta prevalencia en nintildeos de 5 a 15 antildeos e Hiperendeacutemico porcentajes de infeccioacuten
superiores al 10 (Mas-Coma 2005) y donde los casos humanos participan
significativamente en la transmisioacuten a traveacutes de la eliminacioacuten de huevos generalmente
se presenta asociada a condiciones sanitarias muy deficientes (Mas-Coma et al 1999 a)
Ademaacutes hay diferentes tipos de brotes de acuerdo a la situacioacuten endeacutemicano endeacutemica
de la zona
a)Epidemia en aacutereas donde la Fasciolosis es endeacutemica en los animales pero no en los
humanos zonas donde los reportes previos de casos humanos han sido siempre aislados
y esporaacutedicos esos brotes usualmente involucran a pocos individuos que resultan
infectados desde el mismo foco de contaminacioacuten (familia o pequentildeo grupo berros u
hortalizas silvestres de cultivo domeacutestico o comercial portadoras de metacercarias)
b)Epidemia en aacutereas humanas endeacutemicas brotes en zonas donde la enfermedad es
endeacutemica en los humanos pueden involucrar a un gran nuacutemero de individuos
usualmente estaacute relacionado a condiciones climaacuteticas favorables para el desarrollo del
ciclo bioloacutegico tanto del paraacutesito como del caracol La epidemia puede tener lugar en
aacutereas hipoendeacutemicas mesoendeacutemicas o hiperendeacutemicas (Mas Coma et al 1999 a)
16 - La infeccioacuten a nivel mundial
La infeccioacuten ha sido reportada en Unioacuten Sovieacutetica China Europa Aacutefrica Ameacuterica del
Norte Sudameacuterica Centro Ameacuterica y Australia (OMS 1995) Las epidemias maacutes
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extensas ocurrieron en Francia con maacutes de 500 casos (Courde y Triozon 1957) y en
Cuba con 799 casos (Peacuterez et al 1983)
Ejemplos de prevalencia muy reducida se dan en Francia Niveles intermedios se hallan
en Iraacuten Yemen (Farag 1998) Portugal (Mas-Coma 2005) Vietnam (Tran et al 2001) y
Egipto (Curtale et al 2000)(Amer et al 2011) La maacutes alta prevalencia e intensidad de la
infeccioacuten en humanos se presenta en Bolivia con 72 realizando diagnoacutesticos por
meacutetodos coproloacutegicos y 96 por serologiacutea (Esteban et al 1997 b 1999)
161 - Ameacuterica
La infeccioacuten humana por F hepatica se ha denunciado en muchos paiacuteses del mundo
pero es en Ameacuterica donde ocurren maacutes casos (Acha y Syfres 1997) demostraacutendose que
las maacutes importantes regiones endeacutemicas de Fasciolosis humana estaacuten localizadas en
Ameacuterica del Sur (Marcos et al 2004) La frecuencia de la infeccioacuten humana en Ameacuterica
Latina se ha subestimado en la bibliografiacutea parasitoloacutegica
En diversos lugares de Latinoameacuterica la prevalencia e incidencia de las enteroparasitosis
son un indicador del nivel socio econoacutemico y de vida de la poblacioacuten Los factores de
riesgo asociados a deficientes condiciones sanitarias hacinamiento promiscuidad
analfabetismo ruralidad y pobreza continuacutean estando presentes en estas infecciones
Aun hoy las enfermedades tropicales olvidadas (NTDs) (OMS 2008) siguen siendo las
infecciones maacutes comunes de las personas pobres que habitan en Ameacuterica Latina
(Caacuteceres 1989)
Dentro de las diversas regiones de mayor concentracioacuten de Fasciolosis humana
conocidas (Mas-Coma et al 2005 2009 a) Ameacuterica del Sur se destaca por las zonas
endeacutemicas humanas descritas en muchos paiacuteses Altas prevalencias e intensidades en
los seres humanos se han reportado en los paiacuteses andinos como Bolivia (Hillyer et al
1992)(Esteban et al 1997a b 1999)(Mas-Coma et al 1999 b) Peruacute (Esteban et al
2002)(Espinoza et al 2007)(Gonzaacutelez et al 2011) y Chile (Apt et al 1993)(Artigas et al
2011) Zonas endeacutemicas humanas tambieacuten se han descripto aunque con prevalencias e
intensidades maacutes bajas en Centroameacuterica (Arroyo et al 1981) y recientemente tambieacuten
en Ameacuterica del Norte (Zumaquero et al 2013) Se denuncia soacutelo en forma esporaacutedica en
Estados Unidos (Graham et al 2001) o en Canadaacute (Fullerton et al 2006) y con mayor
incidencia en zonas de Meacutexico (Cruz Loacutepez et al 2006) Varios casos humanos tambieacuten
se han registrado en zonas de altitud de Ecuador (Trueba et al 2000) Colombia
(Bargues et al 2011 b) y Venezuela (Bargues et al 2011 c) En Uruguay (Binkley y
Sinniah 1997) y Brasil los informes humanos soacutelo se refieren a casos esporaacutedicos y
aislados En la regioacuten del Caribe la Fasciolosis humana plantea principalmente
problemas en Cuba donde los pacientes son diagnosticados de forma continua (Millaacuten et
al 2000)(Diacuteaz Fernaacutendez et al 2011) incluso con alta incidencia (Gonzaacuteles Santana et
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al 2013) al igual que en Haitiacute (Agnamey et al 2012) Puerto Rico todaviacutea se puede
considerar una zona riesgosa de infeccioacuten humana despueacutes de la situacioacuten
epidemioloacutegica en el pasado (Hillyer 1981) En Ameacuterica casi todas las especies de
limneidos involucradas en la transmisioacuten de F hepatica pertenecen al grupo
GalbaFossaria hecho que demuestra que la clasificacioacuten por simples herramientas
malacoloacutegicas es pronunciadamente difiacutecil pero que es de suma importancia ya que hay
especies de caracoles de este grupo que no participan en la transmisioacuten aunque por lo
general estaacuten presente en zonas de alta transmisioacuten (Bargues et al 2011 a)
1611 - Peruacute Bolivia y Chile
Las prevalencias e intensidades de infeccioacuten encontradas en Peruacute son muy altas donde
el nuacutemero de personas infectadas es de 742000 (Marcos et al 2007) Concretamente se
denunciaron prevalencias ligeramente superiores al 30 de la poblacioacuten estudiada en
Santa Ana (Stork et al 2003) y Juniacuten (Marcos et al 2004) clasificaacutendose como zona
hiperendeacutemica para la Fasciolosis humana Estudios efectuados en Huertas localidad
perteneciente al valle de Mantaro realizados mediante pruebas seroloacutegicas y exaacutemenes
parasitoloacutegicos de heces revelan una prevalencia de Fasciolosis del 283 por teacutecnicas
coproloacutegicas alcanzando 363 por meacutetodos seroloacutegicos realizados con Fas2-ELISA
(Marcos et al 2004)
En Asillo departamento Puno la prevalencia general de Fasciolosis por exaacutemenes de
heces fue 333 y por serologiacutea 519 (Marcos et al 2005) siendo analizadas tambieacuten
por el ensayo Fas2-ELISA (Maco et al 2002) Posteriormente se recopiloacute el nuacutemero de
casos humanos de infeccioacuten por F hepatica en cuatro deacutecadas llegando a la conclusioacuten
de que la Fasciolosis humana es una enfermedad emergente en el Peruacute y de mayor
importancia en Salud Puacuteblica (Marcos et al 2007) Los estudios realizados determinan
que no hay diferencias significativas entre el geacutenero masculino y el femenino (Marcos et
al 2004) Son susceptibles las personas de cualquier edad y en las zonas de alta
prevalencia las tasas maacutes elevadas suelen aparecer entre los nintildeos menores de 15
antildeos a diferencia de lo que ocurre en zonas no endeacutemicas (Blancas et al 2004)
Se distinguen aacutereas de baja prevalencia como 87 en Cajamarca (Knobloch 1985) en
tanto que ejemplos de alta prevalencia se encuentran en la regioacuten de Puno (156)(Mas-
Coma et al 1999 a) y del valle de Mantaro (342) (Marcos et al 2007 a)
En Bolivia el aacuterea endeacutemica para ldquotalpacutea laqordquo (lengua Aymaraacute) estaacute limitada a una
relativa pequentildea regioacuten (60 x 60 Km) en el noroeste del altiplano boliviano entre el lago
Titicaca y la ciudad de La Paz donde se presenta una prevalencia de la infeccioacuten en
nintildeos en edad escolar con un rango entre 312 y 382 (Mas-Coma et al 2001)
Aunque no se pensaba antes ahora se sabe que hay lugares con prevalencias altas de
infeccioacuten por F hepatica en personas que viven en aacutereas endeacutemicas Ademaacutes se ha
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constatado que frecuentemente afecta de manera preferente a nintildeos y mujeres y
asimismo se ha comprobado que no es excepcional que en aacutereas humanas
hiperendeacutemicas como en Bolivia y Peruacute se detecten cifras de maacutes de 400 huevos por
gramo de heces (Esteban et al 1997) en algunos casos como el de nintildeos bolivianos se
han superado los 5000 hpg de heces lo que revela la existencia de un grave problema
de salud en esas zonas
En Chile las infecciones por F hepatica son frecuentes en todo el paiacutes extendieacutendose la
enfermedad desde la Primera hasta la Undeacutecima Regioacuten siendo las zonas de mayor
prevalencia las comprendidas entre la VI y la IX Es poco frecuente en la poblacioacuten
humana pero en ninguacuten caso es una enfermedad rara (Sapunar et al 2001) En un
estudio realizado a 5861 individuos en la VII regioacuten se registroacute un 07 de prevalencia
(41 casos) encontrando un 06 en los sectores rurales de la provincia de Curicoacute 075
por ciento en Talca y 071 en Linares (Apt et al 1992)
1612 - Repuacuteblica Argentina
En Argentina se hallan identificados 58 reportes registrando 555 casos que involucran 13
provincias la mayoriacutea de ellas (977) en zonas altas en aacutereas montantildeosas centrales y
valles andinos concentrados en Coacuterdoba (430) San Luis (29) y Mendoza (28) mientras
que el resto de las provincias son raramente afectadas La mayor prevalencia se observa
en mujeres La edad variacutea de 3-95 antildeos con una media aritmeacutetica de 371 En general
las infecciones ocurren de enero a abril al aumentar las precipitaciones y las
temperaturas y los diagnoacutesticos se realizaron por anaacutelisis coproparasitoacutegicos (288)
intradermoreaccioacuten (63) cirugiacutea (43) serologiacutea (13) y seis presentaciones erraacuteticas (Mera
y Sierra et al 2011)
Varios brotes que presentan caracteriacutesticas tiacutepicas de transmisioacuten alimentaria aparecen
relacionados con la ingestioacuten de berros que crecen naturalmente a lo largo de los lechos
de riacuteos y arroyos recogidos durante fines de semana o actividades vacacionales en aacutereas
serranas de Coacuterdoba (Siciliano et al 1989) y San Luis (Carnevale et al 2012) donde la
Fasciolosis ha sido diagnosticada como un problema de Salud Puacuteblica a tener en cuenta
Un anaacutelisis retrospectivo permite destacar los informes de publicaciones (Roffo
1913)(Greenway 1924)(Bengolea et al 1927)(Del Valle y Donovan 1928)(Bacilalupo
et al 1930)(Mascheroni 1933)(Castex y Greenway 1937)(Paladino y Galarce
1938)(Boto1939)(Cames1940)(Bacigalupo 1942)(Solari y Canepa 1943)(Bacigalupo
et al 1943)(Cuenya 1944)(Cid 1947)(Cames et al 1947)(Rodriacuteguez 1952)(Longo y
Daraio 1953)(Petraglia 1954)(Rodriacuteguez 1954)(Caacuteceres 1955)(Logaldo 1955)
(Rodriacuteguez 1961)(Strada 1961)(Ahualli y Arias 1961)(Urrutia y Ferraris 1962)(Cantildeas
et al 1964)(Cornejo y Castillo 1964)(Simoacuten et al 1964)(Ruggieri et al 1967)(Sosa y
Romero 1967)(Correa et al 1969)(Peiretti 1969)(Trosero y Nocetti 1969)(Padilla et al
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1970)(Carena et al 1972)(Ossola et al 1972)(Peiretti y Morales 1973)(Sonzini et al
1973)(Alaggia 1981)(Majul et al 1981)(Siciliano 1982)(Gifoniello et al 1983)(Miguel
et al 1985)(Siciliano et al 1989)(Melero et al 1991)(Siciliano et al 1992)(Minoprio et
al 1995)(Ale et al 2000)(Barcat 2005)(Lloret et al 2005)(Rubel et al 2005)(Corti et al
2006)(Nieto Sosa et al 2006)(Salomoacuten et al 2006)(Nieto Sosa et al 2008)(Riacuteos et al
2008) (Nieto Sosa et al 2012)(Carnevale et al 2012) referidos a casos esporaacutedicos y
aislados
En la provincia de Catamarca la presencia de F hepatica se registra en la deacutecada de
1980 cuando se hallaron ejemplares adultos en actos quiruacutergicos realizados a cinco
pacientes del geacutenero femenino (Andrada et al 1983)
17 - Factores de riesgo en la infeccioacuten de F hepatica
La epidemiologiacutea y transmisioacuten de la Fasciolosis humana estaacute determinada por la
presencia de caracoles dulceacuiacutecolas como hospedadores intermediarios animales
domeacutesticos infectados condiciones climaacuteticas y por algunos haacutebitos de consumo No
obstante algunos autores han demostrado que en las aacutereas endeacutemicas los factores
epidemioloacutegicos y de transmisioacuten no son tan simples como pudiera parecer a priori y que
se deben tener en cuenta otros factores adicionales para proponer una clasificacioacuten
epidemioloacutegica respecto de las aacutereas de presentacioacuten de Fasciolosis humana (Esteban et
al 1999)
El hombre es un hueacutesped accidental La infeccioacuten es de relativa baja frecuencia en el ser
humano debido a que su principal mecanismo de transmisioacuten estaacute ligado a los haacutebitos
alimentarios de los individuos La mayor frecuencia de casos se presenta despueacutes de
veranos huacutemedos cuando las aguas de drenaje de los pastos irrigados y encharcados de
los animales cubren completamente a los berros (Nasturtium spp) (Soulsby 1987) en
los que se encuentran enquistadas las metacercarias (Faust 1949) la ingesta de berros
contaminados por el paraacutesito es un antecedente que ocurre en la mayoriacutea de los casos
Tambieacuten se infectan por el haacutebito que tienen muchas personas de llevarse a la boca
tallos de plantas acederas briznas de hierba etc y de esta manera enferman los
agricultores y ganaderos (Piekarsky 1959) Ademaacutes en la infeccioacuten humana intervienen
especies vegetales como las hojas de Taraxacum dens leonis (diente de leoacuten) Mentha
spp (menta) Medicago sativa (alfalfa) Cichorium intybus (achicoria) Juncus andicola y
Juncus ebracteactus (juncos) Nostoc sp (Cianofitas) (Bjorland et al 1995) Tambieacuten se
suele asociar a la ingestioacuten de plantas acuaacuteticas tales como el mastuerzo (Radostits et
al 2002) y a los emolientes que son consumidos como plantas medicinales existiendo la
creencia que los berros y la alfalfa son buenos para el hiacutegado son otra viacutea de infeccioacuten
(Marcos et al 2004)
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El agua es una fuente de infeccioacuten sea por beberla sin hervir o por contaminacioacuten de
hortalizas o utensilios de cocina (Mas-Coma et al 2007) Se ha demostrado que los seres
humanos participan en la transmisioacuten de la enfermedad en aquellos lugares donde se
practica la defecacioacuten al aire libre (Mas-Coma et al 1999)
En aacutereas epideacutemicas hay diferentes tipos de brotes en relacioacuten con las caracteriacutesticas de
la zona Generalmente coinciden las zonas epideacutemicas con las de Fasciolosis animal y en
tales casos normalmente concuerdan con un grupo de personas que consumen la misma
fuente de contaminacioacuten generalmente verduras Lactuca sativa (lechuga) Spinacea
oleracea (espinaca) u otros vegetales frescos y contaminados con metacercarias de F
hepatica Estos casos habitualmente se presentan en miembros de una familia o en
comunidades de una misma zona
George A Alleyne en el proacutelogo de la publicacioacuten ldquoEnfermedades transmisibles geacutenero y
equidad en la saludrdquo (Hartigan 2001) cita a Levins cuando comparte que la complejidad
de los factores determinantes (geacutenero raza y clase social) de las enfermedades
emergentes constituye un serio problema cientiacutefico de nuestra eacutepoca (Levins 1995) En
las distintas infecciones humanas es importante profundizar en los factores que afectan a
la distribucioacuten de la enfermedad como analizar la influencia del geacutenero del hospedador
definitivo sobre la Fasciolosis
Hasta 2003 en la mayoriacutea de estudios sobre la Fasciolosis humana y su incidencia en las
diferentes zonas de endemicidad los aspectos referidos a la epidemiologia de la
enfermedad en funcioacuten del geacutenero del hospedador definitivo arrojaban resultados
contradictorios obtenieacutendose zonas donde las prevalencias e intensidades de infeccioacuten
eran diferentes De ese modo los estudios referidos anteriormente muestran que tanto en
Bolivia como en Peruacute (Esteban et al 1999) las diferencias relativas a la prevalencia de
infeccioacuten por F hepatica en funcioacuten del geacutenero no eran significativas Por el contrario en
Egipto al igual que en Chile (Apt et al 1992) existiacutean diferencias significativas en la
prevalencia de infeccioacuten dependiendo de si afectaba a hombres o mujeres
Las investigaciones continuaron y no es hasta la deacutecada pasada cuando se llega a
recopilar (Curtale et al 2007) maacutes de 21000 casos con casi 1000 positivos Ambos
paraacutemetros analizados prevalencia e intensidad de infeccioacuten resultaron
significativamente mayores en mujeres que en hombres en Egipto poniendo de
manifiesto lo que la tendencia ya reflejaba y es que siuml existen diferencias en cuanto a las
intensidades de infeccioacuten en funcioacuten del geacutenero afectando en mayor medida a las
mujeres
Mientras que el predominio de Fasciolosis humana puede ser insignificante en aacutereas
donde la forma veterinaria de la enfermedad ocurre las tasas variacutean extensamente en
aacutereas donde la enfermedad es endeacutemica en la gente
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La relacioacuten entre el predominio de Fasciolosis y la edad del hueacutesped se diferencia en
aacutereas humanas endeacutemicas y humanas no endeacutemicas El alto predominio en nintildeos
menores de 15 antildeos se presenta por lo general en aacutereas endeacutemicas con las tasas maacutes
elevadas en contraste con la situacioacuten corriente en aacutereas humanas no endeacutemicas
(Esteban et al 2002)
18 - Sintomatologiacutea cliacutenica y patologiacutea
El primer caso de Fasciolosis humana en el mundo fue reportado en 1600 (Naacutequira et al
1975) mientras que en 1852 se describe por primera vez el hallazgo de especiacutemenes
adultos de F hepatica en las viacuteas biliares intrahepaacuteticas del hombre
El diagnoacutestico de Fasciolosis humana se presenta ante un enfermo con un cuadro cliacutenico
caracterizado por trastornos digestivos especialmente hepatobiliares y fiebre
Presentando o no urticaria de evolucioacuten aguda o croacutenica que puede estar acompantildeada
de eosinofilia elevada y en el que puede haber antecedentes de ingestioacuten de berros
Aunque tambieacuten es posible que la parasitosis curse en forma subcliacutenica si la infeccioacuten
es por pocos ejemplares La importancia de la cliacutenica estaacute condicionada por el nuacutemero de
metacercarias ingeridas
Las manifestaciones cliacutenicas por F hepatica se agrupan en las fases agudas o croacutenicas
(Behm y Sangster 1999) La forma aguda se clasifica en tres subtipos diferentes tiacutepica
(Chen y Mott 1990)(Vilches et al 1993) atiacutepica (Ibaacutentildeez et al 1994) y ectoacutepica
(Catchpole y Snow 1952)(Mas-Coma et al 2014) mientras que la forma croacutenica se
diferencia con dos subtipos sintomaacutetica (Jimeacutenez et al 2001) y asintomaacutetica (Arjona et
al 1995) El siacutendrome agudo corresponde al periodo de migracioacuten de las formas
inmaduras se caracteriza por fiebre de intensidad variable eosinofilia (Behm y Sangster
1999) ictericia (Kianman et al 1996) dolor del hipocondrio derecho con signo de Murphy
y dolor abdominal (Naacutequira 1995) mialgias artralgias cefalea naacuteuseas voacutemitos
(Picoaga 1980) flatulencia alergia (prurito o urticaria) (Ortiz et al 2000) hepatomegalia
fatiga decaimiento perdida de peso anorexia y alteracioacuten de las pruebas funcionales
hepaacuteticas (Espinosa et al 2010) Puede durar 3 meses pero muchos infectados cursan
asintomaacuteticamente aunque fiebre hepatomegalia y eosinofilia sugieren Fasciolosis en
aacutereas endeacutemicas (Marcos et al 2007 b) Esta fase aguda se debe a los tuacuteneles que las
formas inmaduras del paraacutesito al migrar cavan en el pareacutenquima hepaacutetico durante las
primeras semanas los que se llenan con sangre (Loja et al 2003) y ceacutelulas de una
respuesta inmunitaria mediada por linfocitos con reclutamiento masivo de eosinoacutefilos
El cuadro puede llegar a cinco meses y presenta las complicaciones maacutes severas de la
enfermedad entre las que se destacan hematoma subcapsular granuloma muacuteltiples
abscesos hepaacuteticos anemia severa colecistitis pancreatitis colangitis derrames
pleurales y eventualmente fibrosis hepaacutetica (Dalton 1999)
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El estadio o fase croacutenica (Maclean y Graeme-Cook 2002) aparece cuando los paraacutesitos
adultos ya se ubican en la luz de los conductos biliares y empiezan a emitir los huevos
Presenta siacutentomas inespeciacuteficos o vagos en la mayoriacutea de los casos aunque algunos de
ellos se complican principalmente por obstruccioacuten biliar (Umac et al 2006) y terminan en
intervenciones quiruacutergicas momento en el que se hace el diagnoacutestico encontraacutendose los
paraacutesitos adultos en los conductos biliares o causando disfuncioacuten hepaacutetica Muchos
casos se diagnostican como colecistitis aguda Los siacutentomas son causados por la
inflamacioacuten del conducto e incluyen dispepsia diarrea ictericia colecistitis coacutelico biliar y
litiasis del coleacutedoco Dentro del conducto biliar se observa inflamacioacuten perivascular que
el proceso de resolucioacuten transforma en fibrosis
La fase aguda puede superponerse a la fase croacutenica si se estaacute en permanente exposicioacuten
a la fuente de contaminacioacuten y podriacutea adquirirse la infeccioacuten aguda sobre la croacutenica
previamente presente por lo tanto se pueden observar casos de Fasciolosis croacutenica con
cifras altas de eosinofilia
La migracioacuten de las formas inmaduras a traveacutes del pareacutenquima hepaacutetico puede producir
lesiones traumaacuteticas y necroacuteticas Destruccioacuten considerable del hiacutegado caracterizada por
necrosis coagulativa (Dalton 1999) abscesos hemorraacutegicos (Loja et al 2003) y hepatitis
con infiltracioacuten de neutroacutefilos linfocitos y eritrocitos (Bryan y Michelson 1995) La
patogeacutenesis de la Fasciolosis depende de la carga parasitaria y del tamantildeo de los
trematodos adultos que provocan reacciones granulomatosas con agrupaciones de
histiocitos ceacutelulas epiteliales y gigantes En la etapa croacutenica se observa que en la pared
de los conductos biliares el paraacutesito adulto produce alteraciones inflamatorias
adenomatosas y fibroacuteticas (Saacutenchez et al 2000) existiendo hiperplasia del epitelio que
puede llegar a la obliteracioacuten total provocando ictericia obstructiva infeccioacuten bacteriana
secundaria atrofia del hiacutegado cirrosis periportal colecistitis y colelitiasis (Atias 2001)
En los conductos biliares en infecciones graves con gran nuacutemero de paraacutesitos puede
haber litiasis biliar y cirrosis que ocurren con cierta frecuencia en los casos croacutenicos
(Bryan y Michelson 1995)
Se distinguen ademaacutes los siguientes periodos cliacutenicos
Fase de incubacioacuten desde la ingestioacuten de las metacercarias hasta la aparicioacuten del primer
siacutentoma variacutea dependiendo del nuacutemero de metacercarias consumidas y de la repuesta
del hospedador Su duracioacuten es variable
Fase aguda o invasiva comienza cuando ocurre la migracioacuten parasitaria hasta el
conducto biliar la sintomatologiacutea se debe principalmente a la destruccioacuten mecaacutenica del
tejido hepaacutetico y del peritoneo abdominal debida a la migracioacuten de las larvas Dura 2 a
cuatro meses y sus principales signos son Fiebre dolor abdominal desde leve a severo
generalmente localizado en el hipocondrio derecho o bajo el xifoides trastornos
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gastrointestinales como peacuterdida de apetito flatulencia nausea y diarrea urticaria
Ocasionalmente ocurren siacutentomas respiratorios tos disnea hemoptisis y dolor toraacutecico
Al examen fiacutesico pueden aparecer ademaacutes hepato y esplenomegalia ascitis la que se
caracteriza por ser un liacutequido amarillo con un alto contenido de leucocitos y con
predominio de eosinofilos una anemia leve a moderada signos toraacutecicos por
auscultacioacuten o radiografiacutea e ictericia la cual es poco frecuente
Fase latente incluye la etapa de maduracioacuten hasta el inicio de la ovoposicioacuten
Puede durar meses o antildeos los pacientes frecuentemente son descubiertos durante un
screening familiar tras detectar a uno de sus integrantes infectado Pueden tener
dolores gastrointestinales o una o maacutes recaiacutedas de los siacutentomas agudos
Fase obstructiva o croacutenica cuando el paraacutesito se establece en el conducto biliar
Puede desarrollarse durante meses o antildeos despueacutes de la infeccioacuten inicial El paraacutesito
adulto en el conducto biliar causa inflamacioacuten e hiperplasia del epitelio La resultante
colangitis y colecistitis combinada con el gran tamantildeo del paraacutesito son suficientes para
producir una obstruccioacuten mecaacutenica del conducto biliar
Existen tambieacuten Fasciolosis de tipo ectoacutepicas por parte de estados inmaduros del
paraacutesito que pueden desviarse durante la migracioacuten En el hombre los sitios maacutes
frecuentes para esta presentacioacuten estaacuten en el tracto gastrointestinal Otros lugares
pueden ser el tejido subcutaacuteneo corazoacuten vasos sanguiacuteneos pulmoacuten y cavidad pleural
cerebro pared abdominal apeacutendice paacutencreas glaacutendula mamaria articulaciones y bazo
Aquellos paraacutesitos ectoacutepicos nunca logran madurar y sus efectos patoloacutegicos son debido
a los surcos de migracioacuten que causan dantildeo tisular con inflamacioacuten y fibrosis Este
paraacutesito puede ser calcificado o incorporado en un granuloma (Mas-Coma et al 1999 b)
La duracioacuten de la infeccioacuten humana es desconocida pero algunos investigadores han
estimado que el paraacutesito podriacutea sobrevivir por 5 a 12 antildeos (Karnaukhov 1978) y desde 9
a 135 antildeos (Dan et al 1981)
19 - Diagnoacutestico
191 - Directo
El diagnoacutestico de certeza en humanos se establece de forma directa cuando se
encuentran huevos del paraacutesito en las heces o bilis obtenida por sondeo duodenal Los
exaacutemenes coproloacutegicos de rutina desde el examen directo hasta los meacutetodos de
sedimentacioacuten se utilizan en la fase croacutenica pero el meacutetodo coproparasitoloacutegico presenta
baja sensibilidad (Levine et al 1980) soacutelo permite detectar la infeccioacuten cuando el paraacutesito
adulto ya estaacute instalado en los conductos biliares y requiere la recoleccioacuten de muestras
seriadas resultando poco confiable y complicado (Chen y Mott 1990)
Asimismo hay que considerar la dinaacutemica en la produccioacuten de huevos que en el hombre
se conoce menos aunque se sabe que el nuacutemero de huevos y su liberacioacuten pueden ser
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reducida o intermitente (Maco et al 2002) El hombre no se considera un hospedador
muy receptivo para F hepatica y la mayor parte de los ejemplares juveniles quedan
atrapados en el pareacutenquima hepaacutetico durante su migracioacuten aunque algunos siacute alcanzan
los conductos biliares y maduran
Debido a la ovoposicioacuten intermitente del paraacutesito en muchos casos nunca se llega a
detectarlos de esta manera resultan negativos los exaacutemenes coproloacutegicos de hasta tres
diacuteas de recoleccioacuten consecutiva La manifestacioacuten microscoacutepica de huevos es
sumamente especiacutefica pero tiene limitaciones en la sensibilidad debido al tiempo de
maduracioacuten sexual y posterior produccioacuten de huevos El examen coproloacutegico meacutetodo
sencillo y de bajo costo no detecta infecciones tempranas (los ejemplares joacutevenes no
producen huevos) ni cargas parasitarias bajas En el hombre el nuacutemero de huevos
producidos y su dinaacutemica son poco conocidos
Una buena teacutecnica para el diagnoacutestico coproparasitoloacutegico de Fasciolosis humana es la
sedimentacioacuten en copa o teacutecnica de sedimentacioacuten raacutepida (TSR) (Lumbreras et al 1962)
Tambieacuten hay que considerar en queacute fase de la infeccioacuten se encuentran puesto que el
periodo de prepatencia es de 3 a 4 meses post-infeccioacuten y los siacutentomas cliacutenicos pueden
aparecer mucho antes de que se observen los huevos en las heces (Marcos et al 2007
a)
Se debe considerar que el anaacutelisis cuantitativo (Kato y Miura 1954) no refleja cuaacutentos
ejemplares de especiacutemenes adultos albergan esos individuos y tampoco las pruebas de
diagnoacutestico indirecto o seroloacutegico si bien es faacutecil suponer que son procedimientos muy
uacutetiles de diagnoacutestico Un segundo problema se plantea a la hora del tratamiento de modo
que la aplicacioacuten de un faacutermaco eficaz puede provocar concentracioacuten de paraacutesitos
adultos muertos y por su tamantildeo llegar a obstruir los canales biliares y el coleacutedoco
Tambieacuten hay que tener muy en cuenta la resistencia parasitaria a las drogas
antihelmiacutenticas (Villegas et al 2012)
1911 - Imaacutegenes
Existen otros meacutetodos directos de diagnoacutestico como son las imaacutegenes obtenidas por
radiografiacutea ecografiacutea (Van Beers et al 1990) scanner tomografiacutea axial computada
(TAC) colangiopancreotomiacutea retroacutegrada endoscoacutepica (Martiacutenez et al 2000) o resonancia
magneacutetica nuclear Estas teacutecnicas se utilizan ante la sospecha de infeccioacuten y para
confirmar el diagnoacutestico y posterior seguimiento durante y despueacutes del tratamiento
(Gonzaacutelez et al 2001)(Corti et al 2006)
Las imaacutegenes ayudan al diagnoacutestico y a la evaluacioacuten de complicaciones Los hallazgos
dependeraacuten de la fase cliacutenica en la cual se encuentre el paciente En fase aguda la
ecografiacutea puede mostrar heterogeneidad del pareacutenquima hepaacutetico lesiones nodulares
hipoecogeacutenicas muacuteltiples o uacutenicas y linfonoacutedulos periportales (Castro 2010) Durante la
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fase croacutenica es posible visualizar partiacuteculas orogeacutenicas intravesiculares edema de la
pared vesicular y engrosamiento parietal del coleacutedoco con dilatacioacuten moderada (Castro
2010)
Sin embargo de los exaacutemenes de imagenologiacutea usados para estudiar el hiacutegado y las viacuteas
biliares ninguno confiere certeza diagnoacutestica La forma de los paraacutesitos puede
confundirse con los caacutelculos del coleacutedoco o los coaacutegulos de hemoglobina (Arjona 1995)
aunque la ecografiacutea resulta de valor y puede mostrar (10 semanas despueacutes de la
infeccioacuten) lesiones hepaacuteticas nodulares hipodensas o quiacutesticas dilatacioacuten de los
conductos biliares y formas moacuteviles ecogeacutenicas dentro de la viacutea biliar (Gonzaacutelez Llorente
et al 2002)
Dentro del estudio por imaacutegenes la Fasciolosis se deberiacutea encontrar entre los
diagnoacutesticos diferenciales de granuloma hepaacutetico Esta lesioacuten aunque no cuente con
biopsia debe sugerir que en todo paciente que proceda de zona endeacutemica y que
presente lesiones en el hiacutegado ecograacuteficamente compatibles con granuloma hepaacutetico
debe incluirse a esta parasitosis dentro de los principales diagnoacutesticos diferenciales y no
tomarse meramente como de exclusioacuten (Sezgin et al 2004)
1912 - Teacutecnicas quiruacutergicas
La primera publicacioacuten sobre una cirugiacutea realizada en Argentina que permitioacute el hallazgo
de ejemplares de F hepatica data de principio del siglo pasado (Del Valle y Donovan
1923) Mientras que en una litiasis biliar (Cantildeas et al 1964) por coledocotomiacutea extraen
paraacutesitos sin encontrar huevos en la bilis reportando que en la praacutectica se sacan 2
ejemplares y diacuteas posteriores por el tubo de Kehr salen huevos de F hepatica La mayor
casuiacutestica es reportada por Alaggia (1981) que presenta 16 pacientes positivos operados
En Catamarca se registra la presencia de especiacutemenes adultos en actos quiruacutergicos de
las viacuteas biliares practicados en 5 oportunidades (Andrada et al 1983)
192 - Indirecto
Numerosas pruebas seroloacutegicas han sido evaluadas para el diagnoacutestico de infecciones
por F hepatica La deteccioacuten de anticuerpos en suero es claramente el meacutetodo de
preferencia para el inmunodiagnoacutestico (Hillyer 1999) de la Fasciolosis humana
Los niveles de inmunoglobulinas (Ig) IgG IgM e IgE estaacuten generalmente aumentados en
Fasciolosis incluso los niveles de IgE se correlacionan positivamente con la carga de
huevos la edad las caracteriacutesticas cliacutenicas y el grado de eosinofilia En lo que a la clase
IgG se refiere las subclases predominantes son IgG1 y el isotipo IgG4 (Mas-Coma et al
1999 b)
La Fasciolosis humana es de difiacutecil diagnoacutestico principalmente en la fase aguda o
invasiva porque no puede ser diagnosticada por el examen de huevos en heces y
depende de pruebas seroloacutegicas (Maco et al 2002) por lo cual numerosas teacutecnicas de
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inmunodiagnoacutestico de esta parasitosis han sido descriptas y aplicadas en diversos paiacuteses
(Espino et al 1987)(Coacuterdova et al 1999)(Carnevale et al 2001 a)
Se ha comprobado la respuesta inmunoloacutegica en el hombre ante antiacutegenos metaboacutelicos
y tambieacuten ante las cistein-proteasas procatepsina L1 (Cornejo et al 2003)(Carnevale et
al 2001 b)
El inmunodiagnoacutestico se ha planteado como una interesante alternativa en la buacutesqueda
de meacutetodos diagnoacutesticos maacutes sensibles y especiacuteficos tal es el caso del ensayo por
inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (ELISA) Sin embargo generalmente se han usado
antiacutegenos constituidos por complejos antigeacutenicos que frecuentemente conducen a
problemas de sensibilidad o especificidad El preparado antigeacutenico utilizado
primariamente fue un extracto del gusano adulto luego fueron productos de excrecioacuten-
secrecioacuten y fracciones parcialmente purificadas El anaacutelisis mediante
inmunoelectroforesis en geles de agarosa (inmunoprecipitacioacuten simple y cruzada) ha
permitido determinar que los extractos parasitarios crudos de F hepatica muestran una
composicioacuten antigeacutenica variada siendo maacutes complejos los antiacutegenos somaacuteticos y de E-S
provenientes de paraacutesitos adultos (Gorman et al 1992) Maacutes recientemente han sido
usados antiacutegenos nativos purificados y antiacutegenos recombinantes (Hillyer 1999) Los
antiacutegenos E-S han sido considerados importantes inductores de la respuesta inmune
humoral en la Fasciolosis y tanto su especificidad como su utilidad diagnoacutestica han sido
demostradas en numerosos estudios de Fasciolosis humana y animal (Diacuteaz et al 1998)
Otros estudios tambieacuten se han enfocado sobre la deteccioacuten directa de antiacutegenos
parasitarios ya sea en suero plasma o heces (Hillyer 1999) En 1990 se desarrolloacute un
ELISA para detectar antiacutegeno parasitario circulante en personas con Fasciolosis el cual
al aplicarlo sobre 25 pacientes resultoacute que el 100 de ellos fue reconocido como positivo
a Fasciolosis ademaacutes no se presentaron reacciones cruzadas con otras parasitosis
(Espino et al 1990)
Actualmente el diagnoacutestico de rutina de Fasciolosis humana se basa en la deteccioacuten de
anticuerpos contra el paraacutesito en suero principalmente por el meacutetodo de ELISA
considerada una de las pruebas maacutes ampliamente usadas pero su sensibilidad y
especificidad dependen de la calidad de los antiacutegenos (Espino et al 1991) del paraacutesito
empleados para evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti- F hepatica en humanos
(OacuteNeill et al 1998) La proteasa usada como antiacutegeno cisteiacuten-proteasa procatepsina L1
de F hepatica purificada o como proteiacutena recombinante se expresa en levaduras o
bacterias resultando una prueba con buena sensibilidad y especificidad (OacuteNeill et al
1999)
Asimismo hay evidencia de un fenoacutemeno de variacioacuten de antiacutegenos del tegumento de F
hepatica como mecanismo de evasioacuten y se ha puesto de relieve la existencia de cierta
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similitud antigeacutenica con el propio hospedador hasta el punto que el paraacutesito no sea
reconocido tan faacutecilmente por el sistema inmunitario (Espino et al 1997) aunque la
deteccioacuten de anticuerpos contra F hepatica en suero con ELISA es considerado un
meacutetodo sensible para infecciones agudas y croacutenicas (Hillyer 1999)
La teacutecnica inmunoenzimaacutetica de ELISA emplea el principio de la deteccioacuten del complejo
antiacutegeno anticuerpo (IgG) mediante conjugados anti inmunoglobulinas especiacuteficas
marcadas con una enzima la cual es revelada por la adicioacuten de su sustrato Esto permite
determinar la concentracioacuten de antiacutegeno o de anticuerpos mediante el uso de uno de
ellos unido a una fase soacutelida y el otro en solucioacuten Es una teacutecnica relativamente sencilla
que permite procesar una gran cantidad de muestras en un corto periacuteodo de tiempo tanto
para estudios cliacutenicos como seroepidemioloacutegicos Los antiacutegenos mayormente empleados
en ELISA corresponden a preparados somaacuteticos o productos de excrecioacuten-secrecioacuten
provenientes de tremaacutetodos adultos El primero de ellos corresponde a un macerado total
del paraacutesito adulto y el otro a un derivado metaboacutelico in vitro o productos de E-S de
estados adultos de F hepatica (Espino et al 1987)(Pfister 1990)
En Japoacuten se realizoacute el primer estudio que identificoacute y caracterizoacute la enzima cisteiacuten-
proteasa purificada a partir de ejemplares adultos del paraacutesito (Yamasaky et al 1989)
Esta proteiacutena luego fue usada como antiacutegeno en una prueba de ELISA demostrando ser
reconocida por el 100 de los pacientes con Fasciolosis que fueron estudiados Esta
proteasa estariacutea involucrada en la alimentacioacuten migracioacuten y evasioacuten de la respuesta
inmune del paraacutesito (Smooker 2000)
La procatepsina L1 (CL1) una cisteiacuten-proteasa secretada por estadios adultos y juveniles
de F hepatica tiene potencial como agente diagnoacutestico de la Fasciolosis humana Para
demostrarlo se realizoacute un ELISA dentro de una poblacioacuten de 95 pacientes en el altiplano
boliviano usando tres tipos de antiacutegenos crudo E-S y CL1 en el caso del antiacutegeno
crudo la diferencia entre individuos seronegativos y seropositivos fue pobremente
definida en tanto con los antiacutegenos E-S y CL1 hubo una gran discriminacioacuten entre ambos
grupos (Espino et al 1991) Esta diferencia fue mejorada al usar un segundo ELISA pero
sobre IgG4 (isotipo predominante en la infeccioacuten) CL1 identificoacute menos individuos
seropositivos al compararlo con E-S pero mejoroacute mucho la discriminacioacuten entre
individuos seropositivos y seronegativos En tanto al aplicar esta prueba sobre sueros con
otras parasitosis todos dieron resultados negativos por lo que se demostroacute que ademaacutes
este IgG4 ELISA es especifica en el diagnoacutestico de Fasciolosis (O Neill et al 1998)
El mismo grupo de trabajo un antildeo despueacutes utilizoacute dos ELISA basados en la deteccioacuten de
IgG4 (en suero de pacientes con Fasciolosis) producida por una procatepsina L1
recombinante (CL1) (en ADN de Saccharomyces cerevisiae) y una procatepsina L1
nativa Los resultados mostraron una significativa correlacioacuten estadiacutestica entre los
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resultados de los valores de absorbancia obtenidos con los dos antiacutegenos Ademaacutes no
se presentaron reacciones cruzadas con otras parasitosis en ninguno de los casos Por
esta razoacuten CL1 recombinante presenta un excelente potencial para el desarrollo del
primer ensayo estandarizado para un diagnoacutestico sensible y especiacutefico de la Fasciolosis
humana (ONeill et al 1999)
Las alteraciones del hemograma dan eosinofilia marcada (Blancas et al 2004)
leucocitosis con desviacioacuten a la izquierda (Atias 1991) hiperbilirubinemia (Carrada y
Escamilla 2005) y anemia la cual es comuacuten pero generalmente no es tan severa
(Vilchez et al 1993)
No obstante se describen casos que pueden evolucionar con eosinofilia fluctuante (Atias
2001) La fluctuacioacuten de la eosinofilia y lo polimorfo del cuadro cliacutenico orientan el
diagnoacutestico hacia otras patologiacuteas (Apt et al 2002)
Las pruebas de funcionalidad hepaacutetica en la fase aguda pueden detectar un aumento de
enzimas como alaninoaminotransferasa o transaminasa glutaacutemica piruacutevica (ALT o GPT) y
aspartato-aminotransferasa o transaminasa glutaacutemica oxalaceacutetica (AST o GOT) (Gianini
et al 2005) ademaacutes de globulina y bilirrubina seacuterica debiendo ser consideradas un
marcador de valor diagnoacutestico y de control terapeacuteutico en casos de Fasciolosis (Atias
2001) Asimismo se puede observar una tendencia a tener maacutes alto el nivel de
transaminasas seacutericas en los casos croacutenicos mientras que el patroacuten colestaacutesico soacutelo estaacute
presente en pacientes de la fase croacutenica y levemente elevado en la fase aguda
Cuando el paraacutesito pasa a los canaliacuteculos biliares provoca el aumento de la fosfatasa
alcalina (FA) que estaacute elevada en patologiacuteas del hiacutegado asociadas con enfermedad de
las viacuteas biliares y colestasis (Pratt y Kaplan 2000) Durante la fase obstructiva la ictericia
es caracteriacutestica y se observa aumento en los procesos obstructivos a nivel de viacuteas
biliares Son indicadoras del dantildeo del hiacutegado asociado con la prevalencia de F hepatica
(Marcos et al 2008) Las bilirrubinas conjugadas se hallan incrementadas en la etapa
aguda y la actividad del citocromo p450 hepaacutetico estaacute reducida (Honkakoski y Negishi
2000)
110 - Planteamiento del problema
La dinaacutemica de transmisioacuten de Fasciolosis tiene fuertes determinantes ambientales que
modelan y generan patrones de transmisioacuten particulares en cada regioacuten En Argentina
por su gran amplitud longitudinal y latitudinal es de esperar que la dinaacutemica de
transmisioacuten de F hepatica en las distintas zonas endeacutemicas del paiacutes sea diferente y se
vea afectada por distintos factores
En nuestro paiacutes son pocos los trabajos relacionados con el estudio de la Fasciolosis y
en general eacutestos abordan el tema desde una perspectiva veterinaria analizando soacutelo lo
que ocurre en los hospedadores definitivos de importancia econoacutemica (Lombardero et al
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1979 b)(Dwinger et al 1982)(Olaechea 2007)(Moreira et al 2009) Los trabajos que
emprenden el estudio de eacutesta parasitosis desde una perspectiva epidemioloacutegica
analizando los factores involucrados en la dinaacutemica de transmisioacuten (hospedadores
definitivos hospedadores intermediarios paraacutesito ambiente clima etceacutetera) son escasos
(Rubel et al 2005)(Kleiman et al 2007) Entre ellos se destaca la investigacioacuten sobre los
factores involucrados en el ciclo de transmisioacuten de F hepatica realizado en los valles
cordilleranos patagoacutenicos de la provincia de Chubut por ser el maacutes actual y completo del
paiacutes (Kleiman et al 2007) Los resultados obtenidos en dicho trabajo reforzaron la
necesidad de estudiar la dinaacutemica de F hepatica en otra zona endeacutemica con
caracteriacutesticas climaacuteticas y topograacuteficas contrastantes para identificar los factores que la
determinan comparar los patrones de transmisioacuten y obtener una visioacuten global e integrada
de esta zoonosis a nivel nacional
La regioacuten Noroeste se presenta interesante para delimitar un estudio epidemioloacutegico de
Fasciolosis ya que es un aacuterea endeacutemica para la enfermedad animal una zona de
importancia a nivel de prevalencias de infeccioacuten y presenta caracteriacutesticas climaacuteticas y
fisonoacutemicas distintas a la patagoacutenica
Las caracteriacutesticas fisiograacuteficas justifican en gran medida la situacioacuten de la mayor parte
de la regioacuten con existencia de baja densidad poblacional y la imposibilidad de desarrollo
de actividades agropecuarias de importancia Se localizan asentamientos poblacionales
de distintas magnitudes en estrecha dependencia con los riacuteos Estos pobladores utilizan
el agua proveniente de cursos temporarios para consumo familiar y riego Se encuentran
algunos puestos de pocas personas en varios casos grupos de individuos emparentados
que permanecen en viviendas sumamente precarias construidas con material de la zona
llevados por la necesidad de alimentar el ganado seguacuten la estacioacuten del antildeo
La proteccioacuten del agua contra la contaminacioacuten fecal constituye un elemento de relevante
importancia Sin embargo las caracteriacutesticas de los suelos y la altura no permiten la
obtencioacuten de agua subterraacutenea a un costo accesible para el poblador quien opta por la
utilizacioacuten de las aguas superficiales que poseen una alta contaminacioacuten fecal tanto de
humanos como animales de criacutea y silvestres Una alternativa medianamente posible
incluiriacutea someter el agua a hervor o filtrado adecuado Con respecto al hervor no se
presenta en algunos casos como un meacutetodo simple de descontaminacioacuten ya que el uso
de lentildea como combustible claacutesico induce a la gente a su utilizacioacuten restringida Con
respecto a la filtracioacuten los equipamientos adecuados suelen ser costosos y si bien
pueden ser uacutetiles en la reduccioacuten de la carga pueden no ser totalmente efectivos en la
eliminacioacuten dependiendo de la porosidad
Las praacutecticas sanitarias habituales para la evacuacioacuten de desechos humanos y animales
pueden interrumpir el ciclo de vida de algunos de estos paraacutesitos pero el mal
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saneamiento y la falta de higiene personal pueden introducir propagar y mantener la
transmisioacuten en la comunidad revistiendo gran importancia la disponibilidad y uso de
letrinas
Ademaacutes entre las fuentes de riesgo de contraer enfermedades zoonoacuteticas se encuentra
el comportamiento alimentario por lo tanto es indispensable entender estos haacutebitos para
prevenir y controlar estas infecciones La educacioacuten sanitaria en la comunidad sobre la
preparacioacuten higieacutenica de alimentos limpieza lavado coccioacuten ayuda tambieacuten a reducir el
riesgo
La situacioacuten descripta muestra la necesidad de efectuar estudios epidemioloacutegicos en
aacutereas donde una prueba piloto ha detectado casos humanos de la enfermedad y que
permitan la identificacioacuten de especies que mantienen el ciclo bioloacutegico como reservorios y
hospedadores intermediarios
Ademaacutes es necesario aplicar meacutetodos de diagnoacutesticos directos e indirectos para la
deteccioacuten sensible y especiacutefica de esta parasitosis En el capiacutetulo de la Salud Puacuteblica
referente a Fasciolosis hay determinadas regiones en el mundo con elevada prevalencia
y con muchas personas afectadas Lo que sucede hace pensar que haya mayor nuacutemero
de casos de trematodosis y que pasen inadvertidos para la consulta meacutedica o que incluso
se presenten casos de Fasciolosis que cliacutenicamente se diagnostiquen equivocadamente
como otros procesos de ahiacute que sea de la mayor importancia mejorar o precisar el
diagnoacutestico tanto a nivel de semiologiacutea como de laboratorio Todos estos antecedentes
llevan a la necesidad de revisar los conocimientos actuales sobre la epidemiologiacutea de la
enfermedad
A partir de ello se formula la siguiente pregunta de investigacioacuten iquestCuaacutel es la probabilidad
de que la Fasciolosis endeacutemica en el valle de Fiambalaacute se transmita a los seres humanos
en forma epideacutemica
1101 - Justificacioacuten
Los informes de la OMS sentildealan que la Fasciolosis incrementa permanentemente el
nuacutemero de personas infectadas en el mundo se propaga en forma alarmante entre la
poblacioacuten y va adquiriendo mayor importancia con el transcurso del tiempo Ante la
evidencia de que no es un hecho aislado ni localizado surge la necesidad de conocer la
situacioacuten epidemioloacutegica de manera eficaz y medir sus alcances
La investigacioacuten planteada contribuiraacute a generar estrategias para entender y resolver
para que los resultados ayuden a crear un mayor conocimiento sobre la enfermedad Se
cuenta con indicadores que prometen resultados efectivos los que mediraacuten las variables
de estudio en el contexto catamarquentildeo y se desea aportar informacioacuten con aplicaciones
a otros ambientes provinciales
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1102 - Viabilidad del estudio
El estudio fue factible porque se ha tenido en cuenta la disponibilidad de recursos
financieros humanos y materiales que determinaron el alcance de la investigacioacuten Para
que el estudio fuera viable y no se dispersara se circunscribioacute la poblacioacuten a la localidad
de Tatoacuten y su zona de influencia dentro del valle de Fiambalaacute
Se contoacute con el aval de las autoridades sanitarias provinciales y asimismo se obtuvo el
apoyo de instituciones interesadas en conocer no solo la situacioacuten sino participar en la
toma y el procesamiento de las muestras lo que facilitoacute el desarrollo del trabajo
1103 - Evaluacioacuten de las deficiencias
Como deficiencia en el desarrollo hay que tener en cuenta el acceso al contexto y lugar
donde se realizoacute el trabajo de campo La investigacioacuten fue muy respetuosa con las
personas que participaron en el estudio No se anticipa ninguacuten efecto negativo en cambio
se pretende proporcionar informacioacuten valiosa a personas que conviven con factores de
riesgo Desde luego fue necesario obtener el consentimiento informado de los
pobladores
111 - Objetivos
1111 - Objetivo general
Contribuir al conocimiento de la epidemiologiacutea de la Fasciolosis describiendo la
ocurrencia de la infeccioacuten por Fasciola hepatica en la poblacioacuten humana animales
y hospedadores intermediarios utilizando diferentes meacutetodos de diagnoacutestico en el
valle de Fiambalaacute Catamarca
1112 - Objetivos especiacuteficos
Reconocer los principales factores que determinan la presencia de Fasciolosis
Estimar la prevalencia seroloacutegica de Fasciolosis en personas que habitan el valle
de Fiambalaacute
Analizar diferentes metodologiacuteas de diagnoacutestico (directo e indirecto) signos y
siacutentomas de la enfermedad en humanos
Determinar la prevalencia de Fasciolosis en especies de ganado que se criacutean en
la zona (asnos rumiantes menores y cameacutelidos sudamericanos) mediante
meacutetodos coproparasitoloacutegicos
Realizar estudios anatomorfoloacutegicos de ejemplares de F hepatica que permitan
caracterizar el fenotipo de los especiacutemenes en el valle de Fiambalaacute
Observar si las caracteriacutesticas microscoacutepicas de los paraacutesitos presentan
variaciones con las de otras localizaciones de origen del hospedador definitivo
Analizar la variabilidad geneacutetica para la identificacioacuten de ADN de F hepatica en la
regioacuten
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Comprobar con teacutecnicas moleculares la posible presencia de cepas de F hepatica
resistentes a faacutermacos antiparasitarios en ejemplares recogidos en las necropsias
Reproducir el ciclo bioloacutegico de moluscos intermediarios en el laboratorio para
probar infeccioacuten inducida
Demostrar la infeccioacuten natural de los limneidos y la prevalencia de caracoles
infectados
Caracterizar el fenotipo de los limneidos por la morfometriacutea de su conchilla
Identificar la especie de Lymnaea spp en el ciclo de F hepatica involucrada en
el valle de Fiambalaacute mediante herramientas moleculares
112 - Hipoacutetesis
El nuacutemero de casos de Fasciolosis humana diagnosticados en el valle de Fiambalaacute
presenta importantes variaciones con otras regiones del paiacutes transformaacutendola en una
zona endeacutemica que manifiesta nuevas caracteriacutesticas tanto en los ejemplares de F
hepatica como a nivel de los hospedadores intermedios
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DISENtildeO DEL ESTUDIO Y MEacuteTODOS
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2 - DATOS SECUNDARIOS Y CARACTERIacuteSTICAS DEL AMBIENTE
21 - Seleccioacuten del tipo de estudio
Se realizoacute un estudio de alcance descriptivo prospectivo con disentildeo no experimental
transeccional con seguimiento de la cohorte en humanos durante el periacuteodo 2008-2012
en el Valle de Fiambalaacute provincia de Catamarca Repuacuteblica Argentina
22 - Lugar de la poblacioacuten
Los trabajos de campo se llevaron a cabo en Tatoacuten aacuterea perteneciente al noreste del
valle o bolsoacuten (Niz et al 2004) de Fiambalaacute (El topoacutenimo Fiambalaacute proviene de la
voz cacaacuten fiambalao que significa casa del viento o paiacutes del viento) (Lafone Quevedo
1999) departamento Tinogasta provincia de Catamarca Argentina (Figura 6) Unos 40
kiloacutemetros al norte de la ciudad de Fiambalaacute surgen oasis como Tatoacuten (1874 msnm)
27ordm20acute2033rdquoS y 67ordm31acute2837rdquoO y haciacutea el este Riacuteo Grande (2834 msnm)
27deg13acute3421umlS y 67deg22acute2825umlO Estas poblaciones viven de la explotacioacuten en pequentildea
escala de la ganaderiacutea ovina caprina y cameacutelidos sudamericanos de las plantaciones de
frutales vid del cultivo de maiacutez y alfalfa (Machado Araacuteoz 2007)(Orgaz et al 2007)
b
a
c
Figura 6 Ubicacioacuten geograacutefica del Valle de Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia
de Catamarca Repuacuteblica Argentina
Nota a Mapa poliacutetico de la Repuacuteblica Argentina b Mapa de la provincia de Catamarca c Vista
satelital del Valle de Fiambalaacute
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23 - Seleccioacuten de la poblacioacuten
La poblacioacuten humana estudiada reunioacute las siguientes condiciones a) compartir su haacutebitat
con animales domeacutesticos infectados con F hepatica y b) que esos animales fueran
nacidos y criados en la zona para garantizar que el foco de transmisioacuten fuese local
24 - Periacuteodo de estudio
El estudio se desarrolloacute entre septiembre de 2008 y noviembre de 2012
25 - Descripcioacuten regional del haacutebitat del valle de Fiambalaacute
El liacutemite fiacutesico al norte del valle es la ladera sur de la cordillera de San Buena Ventura
que la separa de la puna Al este gira hacia el sur por la divisoria de aguas que separa la
cuenca del riacuteo Grande El oeste se halla delimitado por la Sierra de Famatina (Montero
Loacutepez et al 2009)
La existencia de vegetacioacuten achaparrada muerta y meacutedanos indican los aspectos tiacutepicos
del paisaje resultante del tipo climaacutetico y que son denominador comuacuten del centro de los
bolsones ocupado por salares o barreales rodeados de meacutedanos (Quiroga 1986)
Las caracteriacutesticas del haacutebitat natural el medio ambiente y los factores climaacuteticos locales
son cruciales para entender el aacuterea endeacutemica humana en cuestioacuten en relacioacuten con el
patroacuten de transmisioacuten (Mas-Coma 2005 Mas-Coma et al 2009 a) el escenario
epidemioloacutegico (Mas-Coma et al 1999 a 2009 a) y las mejores estrategias para el
diagnoacutestico y encuestas (Mas-Coma et al 2014 a)
251 - Orografiacutea
La zona posee en su formacioacuten materiales que pertenecen a los primeros tiempos de la
tierra los que discordan con rocas modernas Orograacuteficamente se destaca el flanco
occidental de la Sierra de Fiambalaacute (Paleozoico) que se dispone de norte a sur (Cabrera
1958)
La regioacuten estaacute cubierta de tipos erosivos cuyas caracteriacutesticas responden al resultado de
la accioacuten del termoclastismo que produce desintegracioacuten mecaacutenica resquebrajamiento y
disgregacioacuten que son acumuladas por el viento (Navarro 1994)
En las zonas maacutes bajas se observa material que comprende extensos abanicos aluviales
y la presencia de innumerables dunas en forma de medialunas y meacutedanos que hacen
tiacutepico el aacuterido paisaje
252 - Clima
La zona de estudio se encuentra dentro del dominio de lo que se denomina Clima
Templado correspondiente a la categoriacutea Aacuterido de Sierras y Bolsones (Argerich 2004)
Se producen heladas todo el antildeo existiendo friacuteo seco de altura inviernos friacuteos y veranos
templados La presencia de sierras da lugar a la formacioacuten de microclimas lo que
acondiciona el marco topograacutefico para la existencia de oasis que se localizan en los
conoides de deyeccioacuten en la falda occidental de los valles
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El relieve es un factor decisivo ya que produce un efecto barrera o de aislamiento que
convierte a los valles en compartimientos separados y define el clima El valle por el que
corre el riacuteo Abaucaacuten presenta un clima mesoteacutermico con amplitudes teacutermicas
estacionales y diacuteanoche tanto en verano como en invierno se producen grandes
amplitudes diurnas
Los determinantes maacutes importantes del clima son la temperatura el reacutegimen de lluvias y
el balance hiacutedrico El clima es ventoso seco conocido como ldquoviento zondardquo Se alcanza un
nivel de presioacuten atmosfeacuterica media de aproximadamente 620 hPa (Castantildeeda y Ratto
2005)
Las lluvias son escasas y torrenciales se dan principalmente en verano la precipitacioacuten
anual no supera los 50 mm El reacutegimen hiacutedrico del suelo resulta importante para el
desarrollo de los caracoles y para la transmisioacuten de F hepatica (Malone 1994) porque
produce encharcamientos donde se reproducen los moluscos En el valle de Fiambalaacute la
altura de la sierra homoacutenima de 3000 m snm aproximadamente resulta insuficiente
para producir lluvias importantes
La evolucioacuten anual de los factores climaacuteticos se obtuvo por interpolacioacuten proporcionada
por las estaciones meteoroloacutegicas circundantes maacutes cercanas a partir de una base de
datos seriada de 50 antildeos (1950-2000) Los valores fueron obtenidos de la base de datos
agroclimaacuteticos de Agromet Grupo FAO (FAOCLIM) El meacutetodo de interpolacioacuten utilizado
para evaluar las caracteriacutesticas climaacuteticas del aacuterea local es el Nuevo LocClim 110
descargado de la Organizacioacuten de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentacioacuten (FAO) con una resolucioacuten temporal de diacuteas
Entre la variedad de iacutendices existentes para cuantificar la aridezhumedad y
continentalidad se seleccionaron el iacutendice de aridez de De Martonne y el iacutendice de
continentalidad de Gorczynski Los iacutendices de aridez proporcionan una manera sencilla
de expresar la relacioacuten de precipitacioacutenevaporacioacuten El iacutendice de aridez de De Martonne
se define como la relacioacuten de la suma anual de la precipitacioacuten en mm y la temperatura
media anual de 10 degC El iacutendice de continentalidad de Gorczynski es una manera simple
pero eficiente para estimar la influencia del oceacuteano en el clima local El iacutendice depende
linealmente de la amplitud teacutermica anual (diferencia de temperatura media mensual entre
el mes maacutes caacutelido y el maacutes friacuteo) (Grieser et al 2006)
Para evaluar las caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute se utilizaron las
clasificaciones de Koeppen y Budyko La clasificacioacuten climaacutetica de Koeppen es uno de los
sistemas maacutes utilizados para la clasificacioacuten del clima y se basa en el concepto de que la
vegetacioacuten nativa es la mejor expresioacuten del clima Por lo tanto los liacutemites de la zona
climaacutetica se seleccionan de acuerdo con la distribucioacuten de la vegetacioacuten Combina las
temperaturas medias anuales y mensuales y la precipitacioacuten y la estacionalidad de la
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precipitacioacuten El sistema de clasificacioacuten climaacutetica Budyko es un meacutetodo de
categorizacioacuten de los climas basado en la relacioacuten de energiacutea recibida a la energiacutea
requerida para evaporar la precipitacioacuten local Los principios de la clasificacioacuten de Budyko
tienen en cuenta las caracteriacutesticas de radiacioacuten que se estrecha y los correlaciona
directamente con la temperatura en la estacioacuten caacutelida y los factores de circulacioacuten que
correlacionan indirectamente las caracteriacutesticas cuantitativas de la precipitacioacuten y el
reacutegimen de humectacioacuten (Oliver y Wilson 1987)
Este software permite precisar la altitud y las correcciones horizontales Los factores
climaacuteticos analizados incluyeron las temperaturas maacuteximas medias y miacutenimas la
precipitacioacuten la evapotranspiracioacuten potencial (ETP) periodo huacutemedo (estacioacuten de
crecimiento de vegetacioacuten) y el periacuteodo seco En relacioacuten con la vegetacioacuten la estacioacuten
de crecimiento es el periodo durante un antildeo cuando la precipitacioacuten es superior a la
mitad de la evapotranspiracioacuten potencial y se define por PrecETP gt 05 (FAO 1978)
aunque para este foco se analizaron ETP gt 05 y EPT gt 045 debido a sus condiciones de
aridez extrema
253 - Hidrografiacutea
La cuenca se alimenta con aguas provenientes de deshielos y vertientes temporarias las
cuales llegan al valle de Fiambalaacute formadas por efluentes y cursos secundarios en
donde el sistema vuelca sus aguas al riacuteo Abaucaacuten (Sempeacute 1983) Las vegas de
superficie poco definida son ambientes lenticos permanentes su agua es transparente
neutra a ligeramente aacutecida
254 - Flora y Fauna
La mayor cantidad de pastos se producen en las vegas predominando las siguientes
especies forrajeras Hydrocotyle sp Halerpestes cimbalaria (Pursh) Greene Ludwigia
sp Mulhembergia aperifolia Deyeuxia haeckeli y Sinzyrinchium chilense (Navarro
1994)
Dentro de los herbiacutevoros de la fauna silvestre cabe mencionar vicuntildea (Vicugna vicugna)
y guanaco (Lama guanicoe)
SERES HUMANOS
3 - Epidemiologia en seres humanos
31 - Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiada
A partir de estudios previos se estimoacute en base a los registros de los agentes sanitarios
del Aacuterea Programaacutetica Ndeg 10 una poblacioacuten de 350 habitantes en la localidad de Tatoacuten y
sus alrededores
311 - Criterios de inclusioacuten En el inicio de la investigacioacuten se incluyoacute a toda la
poblacioacuten de la localidad elegida
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312 - Criterios de exclusioacuten Se excluyeron a aquellas personas que no desearon
participar pacientes con antecedentes siacutentomas o signos de enfermedades
hematoloacutegicas que suponiacutean un riesgo para la extraccioacuten de sangre recieacuten nacidos o
nintildeos de un antildeo o menos
Como consecuencia de ello la poblacioacuten estudiada comprendioacute 305 personas de ambos
sexos quienes concurrieron voluntariamente a las postas sanitarias donde se realizaron
los estudios El rango de edad de los pacientes fue de 2 a 86 antildeos
El trabajo se inicioacute en 2008 y finalizoacute en 2012 con la colaboracioacuten de los Hospitales ldquoSan
Juan Bautistardquo y ldquoEva Peroacutenrdquo de la ciudad de Catamarca el Hospital Municipal de
Enfermedades Infecciosas ldquoDr Francisco Javier Muntildeizrdquo de la ciudad autoacutenoma de
Buenos Aires del Ministerio de Salud de Catamarca el Hospital Zonal ldquoSan Juan
Bautistardquo de Tinogasta el Hospital Zonal ldquoLuis Agoterdquo de Fiambalaacute y el Minihospital ldquoReneacute
Favalorordquo de Medanitos Tambieacuten participaron el Centro de Estudios de Alta Complejidad
(CEAC) de la ciudad autoacutenoma de Buenos Aires el laboratorio de Parasitologiacutea de la
Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca en forma conjunta
con el ex Instituto Nacional de Microbiologiacutea ldquoDr Carlos Gregorio Malbraacutenrdquo actual
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas de la Administracioacuten Nacional de
Laboratorios e Institutos de Salud ubicado en la ciudad de Buenos Aires Repuacuteblica
Argentina
Para estudiar a las personas durante toda la investigacioacuten se solicitoacute una declaracioacuten en
la que los interesados dieron su consentimiento verbal y escrito (Veacutease anexo Figura 19
pp 184) y se obtuvo la correspondiente autorizacioacuten de las autoridades de la Divisioacuten de
Docencia e Investigacioacuten del Hospital San Juan Bautista de la Provincia de Catamarca
para realizar la investigacioacuten De cada paciente se recolectaron los datos personales se
describieron siacutentomas signos y se realizaron exaacutemenes de laboratorio
Para el estudio se seleccionoacute un grupo de pacientes que reuniacutean los siguientes criterios
- Pacientes con serologiacutea positiva para F hepatica especialmente aquellos con
maacutes de una prueba positiva en antildeos sucesivos
- Pacientes con sintomatologiacutea cliacutenica naacuteuseas voacutemitos y dolor en hipocondrio
derecho
- Patroacuten humoral de colangitis aumento de fosfatasa alcalina transaminasas y
fundamentalmente de eosinofilia
- Anormalidades de las viacuteas biliares en la ecografiacutea dilatacioacuten de las viacuteas biliares
intrahepaacuteticas dilatacioacuten del coleacutedoco mayor o igual a 7 miliacutemetros
engrosamiento de las paredes del coleacutedoco y bandas ecogeacutenicas periportales
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32 - Obtencioacuten de las muestras
Se trabajoacute con un cuestionario para la recoleccioacuten de datos El mismo presentoacute dos
partes una correspondiente a personas y la otra a hogares Se emplearon para la
recoleccioacuten de datos personales que incluiacutean la identificacioacuten edad sexo ocupacioacuten y
domicilio datos de haacutebitos alimenticios y contactos con animales Datos de la vivienda
referidos al tipo materiales de construccioacuten servicios fuentes de provisioacuten de agua y
energiacutea El cuestionario se completoacute durante la visita a los pobladores mediante
interrogacioacuten a adultos y nintildeos (en este caso en presencia de un familiar a cargo) y
observacioacuten del encuestador (Veacutease anexo Figura 20-21 pp 185-186)
321 - Recoleccioacuten de sangre
Las muestras de sangre obtenidas por venopuncioacuten fueron empleadas (previa a su
colocacioacuten en los tubos) para realizar extendidos hemaacuteticos Para ello se colocoacute una gota
sobre un portaobjetos y se distribuyoacute con el uso de un extensor
Los extendidos se dejaron secar a temperatura ambiente se fijaron con alcohol metiacutelico y
colorearon con la tincioacuten de Giemsa se rotularon con laacutepiz indicando nombre apellido y
nuacutemero de frotis en uno de los extremos del vidrio Estos materiales se transportaron a
temperatura ambiente en cajas para almacenamiento de portaobjetos hasta los
laboratorios bioquiacutemicos
Durante los antildeos 2009 2010 y 2011 se obtuvieron muestras de 10 ml de sangre de las
personas (n=305) por venopuntura (Lavery e Ingram 2005) colocaacutendolas en dos tubos
uno con anticoagulante EDTA (3 ml de sangre) y otro tubo seco (7 ml de sangre) para
separacioacuten del suero rotulados con nombre apellido y nuacutemero de envase En estas
condiciones fueron transportados hasta el Laboratorio del Hospital Zonal ldquoLuis Agoterdquo de
Fiambalaacute Alliacute se mantuvieron 8 horas a temperatura ambiente para su exudacioacuten
posteriormente se centrifugaron a 3000 rpm y despueacutes fueron separados por aspiracioacuten
con pipetas y transferidos a 2 tubos con los mismos roacutetulos En aquellas muestras donde
se observoacute hemoacutelisis se realizoacute centrifugacioacuten a baja velocidad y transferencia a tubos
limpios
Las muestras obtenidas fueron mantenidas en heladera y transportadas a 4 ordmC a la
ciudad de Catamarca donde se congelaron a -20 degC para conservarlas hasta llevar a
cabo los anaacutelisis correspondientes El suero contenido en un tubo se utilizoacute para los
diagnoacutesticos inmunoloacutegicos y el del otro para la determinacioacuten de enzimas proteiacutenas y
bilirrubina
A una de las muestras de suero en el departamento de Parasitologiacutea del Instituto
Malbraacuten se les realizoacute el ensayo por inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (Enzyme-Linked
InmunoSorbent Assay ELISA) para la identificacioacuten de los anticuerpos anti-F hepatica
presentes en los sueros de los pacientes (utilizando proteiacutena recombinante procatepsina
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L1)
El segundo tubo con suero para las demaacutes determinaciones se analizoacute en los
laboratorios bioquiacutemicos con los cuales se trabajoacute
322 - Inmunodiagnoacutestico
El ensayo inmunoenzimaacutetico es una prueba ampliamente usada para el diagnoacutestico de
fasciolosis Su sensibilidad y especificidad dependen de la calidad de los antiacutegenos del
paraacutesito empleados para evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti-F hepatica (Binkley y
Sinniah 1997) La procatepsina L1 (cisteiacuten-proteasa) obtenida como recombinante se
usoacute como antiacutegeno en ELISA por ser una prueba con buenos resultados previos
(Carnevale et al 2001 a)
3221 - Expresioacuten y purificacioacuten de la proteiacutena recombinante procatepsina L1 (rproCL1)
El protocolo de expresioacuten del antiacutegeno E-S fue realizado previamente en el Instituto
Malbran (Carnevale et al 2001 a) en bacterias Escherichia coli M15 recombinantes
conteniendo el plaacutesmido pQE-proCL1 que se multiplicaron en medio Luria (LB)
suplementado con los antibioacuteticos ampicilina (100 microgml) y kanamicina (10 microgml) toda la
noche y en agitacioacuten a 37 degC El cultivo se diluyoacute 20 veces en 100 ml del mismo medio
se incuboacute en agitacioacuten durante 4 hs a 37 degC con la adicioacuten de isopropil-szlig-
Dtiogalactopiranosido (IPTG) a concentracioacuten final de 2 microM para inducir la expresioacuten de
rproCL1
El lisado de bacterias se obtuvo en presencia de agentes desnaturalizantes y se sometioacute
a diaacutelisis La preparacioacuten proteica obtenida se purificoacute por cromatografiacutea quelante a
traveacutes de una resina de Ni2+-aacutecido nitrilotriaceacutetico en condiciones desnaturalizantes
(Carnevale et al 2001 a) Las fracciones de elucioacuten se analizaron por SDS-PAGE
(Wiltfang et al 1991) y la proteiacutena purificada se cuantificoacute por el meacutetodo de Bradford
(Bradford 1976) y se guardoacute a -70 degC en aliacutecuotas de 40 microg
Las bacterias se cosecharon por centrifugacioacuten y el pellet fue resuspendido en 2 ml de
solucioacuten de resuspensioacuten (20 mM Tris-HCl pH 80 1 mM EDTA pH 80 5 -
mercaptoetanol 25 SDS) para posteriormente hervirlo durante 5 min La muestra asiacute
tratada se centrifugoacute 30 min a 4 degC a 15000 x g recuperaacutendose el sobrenadante El SDS
presente en la preparacioacuten se precipitoacute por adicioacuten de un volumen de KCl 100 mM
incubado por 10 min a temperatura ambiente y centrifugacioacuten a 15000 x g durante 3 min
El sobrenadante fue equilibrado en solucioacuten de lisis por diaacutelisis con 10 voluacutemenes de
buffer de lisis (dos recambios) durante 48 horas a 4 degC
La preparacioacuten proteica obtenida se pasoacute a traveacutes de una resina de Ni2+-aacutecido
nitrilotriaceacutetico (Qiagen) La proteiacutena rproCL1 se unioacute por afinidad al Ni2+ y el remanente
de proteiacutenas de la bacteria se eluyoacute por sucesivos lavados con solucioacuten de lavado (buffer
de lisis a pH 63) Finalmente la proteiacutena rproCL1 se eluyoacute de la columna con solucioacuten de
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elucioacuten (buffer de lisis a pH 45) (Carnevale et al 2001 a) Las fracciones de elucioacuten se
analizaron por electroforesis en geles desnaturalizantes de poliacrilamida coloreados con
azul de Coomassie
3222 - Ensayo inmumoenzimaacutetico
El ensayo de ELISA para la deteccioacuten de anticuerpos anti-rproCL1 de F hepatica se
desarrolloacute en base al protocolo previamente descripto (Carnevale et al 2001 b) Se utilizoacute
en el desarrollo de la prueba el antiacutegeno rproCL1 a concentracioacuten 4 microgml y como
cromoacutegeno ABTS Para el ensayo se utilizaron placas de ELISA de 96 pocillos ldquoPolySorprdquo
(Nunc) sensibilizadas con el antiacutegeno rproCL1 a concentracioacuten 4 microgml en buffer
carbonato 005 M pH 96 (100 microlpocillo) mediante incubacioacuten por 3 horas a 37 degC y 18
horas a 4 ordmC en caacutemara huacutemeda
Despueacutes de la sensibilizacioacuten con el antiacutegeno los pocillos se lavaron 3 veces con 200
microlpocillo de PBS005 Tween antes de la adicioacuten de 200 microlpocillo de la solucioacuten de
bloqueo (PBS005 Tween3 seroalbuacutemina bovina) Despueacutes de 30 min de
incubacioacuten a 37 degC en una caacutemara huacutemeda los pocillos se lavaron como se describioacute
anteriormente Los sueros humanos en dilucioacuten 1250 (100 microlpocillo) en solucioacuten de
bloqueo fueron antildeadidos por duplicado a la placa e incubados durante 30 min a 37 degC
Luego de nuevos lavados la placa fue incubada por otros 30 min a 37 degC en presencia de
100 microl de un segundo anticuerpo anti-IgG humana preparado en cabra y marcado con
peroxidasa (Sigma) diluido 14000 en solucioacuten de bloqueo
Finalmente se procedioacute a detectar el anticuerpo unido al antiacutegeno despueacutes de nuevos
lavados mediante la reaccioacuten enzimaacutetica de la peroxidasa en presencia del sustrato
peroacutexido de hidroacutegeno y del cromoacutegeno 22-azino-bis 3-etilbenzotiazolin-6-aacutecido sulfoacutenico
(Sigma) Las placas se leyeron a los 10 min en el lector de ELISA iMarktrade BioRad La
densidad oacuteptica expresoacute el valor de corte de la teacutecnica diferenciando sueros positivos y
negativos (el caacutelculo se realizoacute en base a las densidades oacutepticas de los controles
negativos) El punto de corte fue de ge0410 nM aplicando el criterio de +3 desviacuteos
estaacutendar por sobre el cual se consideroacute todo suero analizado como positivo
Para validar el ensayo fueron llevadas 12 muestras positivas al Centro Colaborador de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud Departamento de Parasitologiacutea de la Universitat de
Valencia Espantildea
3223 - Foacutermula leucocitaria
Se procedioacute en primer lugar a la determinacioacuten en los extendidos hemaacuteticos de la
foacutermula leucocitaria
3224 - Eosinofilia
El nivel de eosinofilia fue calculado (foacutermula absoluta y relativa) mediante recuento
diferencial de eosinoacutefilos respecto al caacutelculo de leucocitos totales en los extendidos
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hemaacuteticos coloreados Considerando como normales hasta 350mm3 se efectuoacute la
determinacioacuten en campos no superpuestos (Louis et al 1962)
3225 - Proteinas Totales
Este examen se realizoacute con reactivos comerciales utilizando el meacutetodo colorimeacutetrico para
determinar proteiacutenas totales en suero por ser uacutetil para el seguimiento de cambios
ocasionados por diversos estados de enfermedad hepaacutetica (McPherson 2011) mediante
la lectura de la absorvancia Se mezcloacute con varilla se incuboacute 15 min a 37 degC y se leyoacute en
espectrofotoacutemetro a 540 nM o en fotocoloriacutemetro con filtro verde (520-560 nM) llevando a
cero con el blanco de reactivo Longitud de onda 625 nM en espectrofotoacutemetro o en
fotocoloriacutemetro con filtro rojo (620-650 nM) con una temperatura de reaccioacuten de 15 a 28
degC y un tiempo de reaccioacuten de 10 min Tomando como valores normales el rango de 60 a
83 gmdL (gramos por decilitro)
3226 - Aacutecidos biliares
Reabsorbidos en el intestino grueso y transportados por la albuacutemina hacia el hiacutegado
como parte de su ciclo enterohepaacutetico En plasma el 88 de las sales biliares se
encuentran unidas a la albuacutemina Se consideraron los valores normales inferiores a 10
nMml
3227 - Bilirrubina seacuterica
Es el ligando maacutes estudiado En plasma la bilirrubina es insoluble y su unioacuten a la
albuacutemina la vuelve soluble La unioacuten a la albuacutemina determina su detoxificacioacuten en cuanto
a su rol antimitocondrial promueve su efecto antioxidante y colabora en su destruccioacuten
por parte de la luz in vivo El nivel normal considerado de bilirrubina directa es 0 a 03
mgdL y el de bilirrubina total 03 a 19 mgdL
3228 - Enzimas
Se realizaron pruebas de funcionalidad hepaacutetica para detectar un aumento de las
enzimas alanina amino transferasa o transaminasa glutaacutemico-piruacutevica (ALT o GPT)
aceptando los valores normales de 6 a 35 UIL y aspartato amino transferasa o
transaminasa glutaacutemica oxalaceacutetica (AST o GOT) con valores normales entre 6 a 30 UIL
(Gianini et al 2005)
Para conocer el pasaje del paraacutesito a los canaliacuteculos biliares y una posible fase croacutenica
de la enfermedad se analizoacute el aumento de fosfatasa alcalina (FAL) que se encuentra
elevada en patologiacuteas del hiacutegado asociadas con enfermedad de las viacuteas biliares y
colestasis Se tomaron como valores normales en adultos desde 25 a 100 UIL y en nintildeos
menos de 350 UIL (Pratt y Kaplan 2000)
323 - Anaacutelisis de los datos
Se utilizoacute la regresioacuten logiacutestica por ser una de las herramientas estadiacutesticas con mejor
capacidad para el anaacutelisis de datos en investigacioacuten cliacutenica y epidemiologiacutea Esta teacutecnica
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modeloacute coacutemo influyoacute en la probabilidad de aparicioacuten de un suceso habitualmente
dicotoacutemico la presencia o no de diversos factores y el valor o nivel de los mismos En
este caso con el objeto de identificar aquellos factores significativos en la explicacioacuten de
la probabilidad de que un paciente presente fasciolosis se aplicoacute un modelo de regresioacuten
logiacutestica muacuteltiple con el programa SPSSreg versioacuten 115 para Windows El modelo
matemaacutetico permitioacute ademaacutes evaluar la contribucioacuten de cada variable sobre las chances
(odds) que tiene un paciente de presentar un resultado positivo
Se clasificoacute el valor de la variable respuesta como 0 cuando no se presentoacute el suceso
(caso negativo) y con el valor 1 cuando siacute estuvo presente (paciente con resultado
positivo) Se consideraron como variables independientes o explicativas en el modelo
edad sexo resultado de los exaacutemenes y siacutentomas
Todos los datos se registraron seguacuten el nuacutemero de identificacioacuten utilizado durante la
recoleccioacuten correspondiente al integrante de la poblacioacuten y el nuacutemero de la muestra para
el resto de los materiales analizados
Las prevalencias de infeccioacuten por diferentes meacutetodos se compararon usando el test de
Chi2 y se calcularon los valores predictivos con intervalos de confianza de 95 El valor
obtenido para el estadiacutestico de contraste de hipoacutetesis H0 β=0 llamado test de Wald se
halloacute mediante el cociente entre el coeficiente y su error estaacutendar Este estadiacutestico siguioacute
una distribucioacuten Chi2 con 1 grado de libertad
324 - Materia fecal
Antes del inicio de la toma de muestras para coproparasitologiacutea se realizoacute una
explicacioacuten oral respecto a la metodologiacutea de recoleccioacuten con solicitud de repeticioacuten de
las indicaciones por parte de los participantes Se entregoacute un instructivo impreso por
persona los envases con la solucioacuten y una cucharita descartable para la recoleccioacuten de
cada muestra
El procedimiento consistioacute en recolectar muestras de materia fecal (n=96) emitida durante
3 diacuteas consecutivos y colocarla en recipientes (rotulados con el nombre apellido y
nuacutemero de envase) con solucioacuten salina formolada 5 como conservante Los frascos
conteniendo las muestras fueron retirados por los agentes sanitarios a partir del cuarto
diacutea posterior a su entrega las mismas se conservaron a temperatura ambiente y se
transportaron hasta el Laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la
Salud Universidad Nacional de Catamarca en cajas destinadas para tal fin
Las personas participantes de ambos sexos y distintos grupos etarios no fueron
discriminadas por familias por que se analizaron individualmente Se destaca que en
general la poblacioacuten fue reacia a proporcionar las muestras
La eleccioacuten del conservante fue realizada por las ventajas de su faacutecil preparacioacuten bajo
costo fijador multipropoacutesito larga duracioacuten y apropiada para procedimientos de
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sedimentacioacuten
3231 - Teacutecnica de Sedimentacioacuten Raacutepida (TSR)
De cada muestra de materia fecal (n=96) se tomaron de 4-8 gr de heces que fueron
homogenizadas en un vaso coacutenico con una varilla de vidrio en 30 ml agua corriente
filtrada y calentada a 50 degC Obtenida una buena homogenizacioacuten se agregoacute agua hasta
completar 150 ml La mezcla se trasvasoacute a un recipiente coacutenico de vidrio de 250 ml de
capacidad tamizaacutendola con un colador de malla Se completoacute el volumen con agua
filtrada y se dejoacute reposar por 3 a 4 min no maacutes (la sedimentacioacuten se basoacute en que el
tiempo de caiacuteda de los huevos de F hepatica en el agua es 100 mmmin maacutes raacutepido que
el de la caiacuteda de detritos de las materias fecales) Luego se decantoacute dos terceras partes
del sobrenadante y se volvioacute a agregar agua friacutea hasta completar la capacidad de la copa
Se repitieron los mismos pasos 2 o 3 veces o hasta que el sobrenadante quedara limpio
Finalmente se removioacute el sedimento se aspiroacute parte con una pipeta Pasteur el que fue
vertido en un portaobjeto con concavidades y se observoacute al microscopio con lentes de
menor aumento
3232 - Teacutecnicas de concentracioacuten
32321 - Meacutetodo de Telemann modificado
Las heces fijadas (n=96) en solucioacuten salina formolada fueron homogeneizadas con varilla
de vidrio y filtradas a traveacutes de un embudo con una doble gasa en tubo de centriacutefuga Se
agregaron aproximadamente 2 ml de eacuteter y los tubos se centrifugaron a 1000-1500 rpm
de 3 a 5 min Se eliminoacute con golpe seco el sobrenadante Se tomoacute con pipeta Pasteur
una pequentildea cantidad del sedimento y se colocoacute en portaobjetos Se agregoacute una gota de
lugol y se selloacute con un cubreobjetos para su observacioacuten al microscopio oacuteptico
32322 - Meacutetodo de flotacioacuten de Willis
Se cubrioacute el fondo de un vaso de 50 ml (sin pico vertedor) con un volumen de muestra de
heces previamente homogeneizada (n=96) Se llenoacute hasta la cuarta parte del frasco con
solucioacuten salina sobresaturada y se mezcloacute con varilla de vidrio hasta obtener una
suspensioacuten muy fina Se dejoacute la solucioacuten en estas condiciones 20 min Se aspiroacute el
volumen superior de la solucioacuten y se recuperoacute con pipeta una muestra del fondo que fue
colocada entre portaobjeto y cubreobjetos y se observoacute al microscopio Este uacuteltimo
procedimiento fue adicionado para la buacutesqueda de huevos operculados de F hepatica
que presentan la caracteriacutestica de no flotar
32323 - Meacutetodo cuantitativo para huevos
La teacutecnica de Kato-Katz o frotis grueso (solicitada para la entrega gratuita de Egatenreg
triclabendazol para uso humano donacioacuten de Novartis Pharma AG) (Savioli et al
1999)(OMS 2006)(Keiser et al 2007) se preparoacute por recomendacioacuten de la OMS para la
buacutesqueda hallazgo y recuento de huevos de F hepatica en heces (n=15)
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33 - Diagnoacutestico por imaacutegenes
A los casos seleccionados por nivel elevado de eosinofilia fosfatasa alcalina o
resultados seroloacutegicos de F hepatica positivos se efectuoacute ecografiacutea abdominal con un
equipo portaacutetil Aloka 500 con transductor Coacutenvex 35 MHz
En dos oportunidades meacutedicos especialistas del Hospital Muntildeiz y del Ministerio de Salud
de la provincia de Catamarca efectuaron las ecografiacuteas (n=57) de aquellas personas a las
que previamente se habiacutea seleccionado
En el caso de pacientes sintomaacuteticas (n=2) meacutedicos gastroenteroacutelogos practicaron una
exploracioacuten con el meacutetodo invasivo Colangiopancreotografiacutea Endoscoacutepica Retrograda
(CPRE) con el uso de coledocoscopio flexible Olympus CHF P20 de 49 mm con canal
de trabajo de 22 mm y visioacuten lateral realizando una papilotomiacutea retrograda endoscoacutepica
y barrido instrumental con cateacuteteres de Dormia (Mazzariello 2009) en cliacutenicas privadas
de las ciudades de San Fernando del Valle de Catamarca y Coacuterdoba
34 - Datos cliacutenicos
Meacutedicos de los distintos nosocomios efectuaron los exaacutemenes cliacutenicos a personas
sospechosas de fasciolosis o que lo solicitaron donde se evaluaron siacutentomas y signos
tales como fiebre dispepsia diarrea ictericia dolor abdominal voacutemitos hepatomegalia
etceacutetera Los datos fueron anotados en la planilla de registro de observaciones disentildeada
para este fin que corresponde a una fraccioacuten del cuestionario (Veacutease anexo Figura 21
pp 186)
ANIMALES COMO HOSPEDADOR DEFINITIVO DE F hepatica
4 - Especies animales estudiadas
El componente animal incluyoacute para su estudio ejemplares (n=1088) de las especies
domeacutesticas Bos primigenius taurus (bovinos) Capra aegagrus hircus (caprinos) Equus
africanus asinus (asnos) Equus ferus caballus (caballos) Lama glama (llamas) Ovis
orientalis aries (ovinos) y Sus scrofa domestica (cerdos) de diferentes razas categoriacuteas y
sexos
41 - Exaacutemenes coproparasitoloacutegicos
Para conocer la prevalencia de infeccioacuten por F hepatica y la contaminacioacuten del ambiente
por el aporte de huevos al medio se recolectaron muestras de materia fecal en 36 viajes
a campo realizados en primavera y otontildeo Las muestras (n=1077) se obtuvieron de las
distintas especies animales domesticas presentes en la zona ovinos (n=322) asnos
(n=192) llamas (n=210) caprinos (n=197) bovinos (n=72) equinos (n=46) y porcinos
(n= 38) durante los antildeos 2008-2011
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Las muestras de heces fueron recogidas en el momento de la defecacioacuten de cada
ejemplar o con el uso de guantes descartables de pared delgada que permitieron la
penetracioacuten completa de la mano o de un dedo seguacuten la especie animal a evaluar Se
humedecioacute la proteccioacuten con agua corriente al igual que la regioacuten anal para no maltratar
al animal en el momento de extraccioacuten de las bontildeigas del recto
La materia fecal obtenida fue colocada en recipientes plaacutesticos individuales que
conteniacutean solucioacuten salina formolada al 5 y se transportaron al laboratorio de
Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de
Catamarca para su anaacutelisis En el diagnoacutestico de infeccioacuten por F hepatica se utilizoacute la
teacutecnica de sedimentacioacuten para la deteccioacuten de huevos en materia fecal (Dennis et al
1954) fundamentada en repetidos lavados y filtrados de la muestra coproloacutegica y la
observacioacuten posterior Se preparoacute una solucioacuten detergente con 95 ml de agua destilada y
5 ml de detergente liacutequido maacutes unas gotas de solucioacuten al 1 de sulfato de aluminio y
potasio
Se pesoacute 5 gr de heces de cada muestra se colocaron en un mortero se agregoacute 25 ml de
solucioacuten detergente y se mezcloacute cuidadosamente con varilla sin formar espuma En un
embudo colador se colocoacute una doble gasa y se filtroacute la suspensioacuten a un tubo de 50 ml de
capacidad se lavoacute con solucioacuten detergente el recipiente que conteniacutea las muestras
filtrando este liacutequido y agregaacutendolo al tubo adicionando maacutes solucioacuten detergente al
sedimento de la malla hasta llenar el tubo Se dejoacute el tubo en reposo entre 5 y 10 min
eliminando 34 parte del sobrenadante se lavoacute el embudo con solucioacuten detergente y
agregoacute al tubo Se volvioacute a llenar el tubo hasta el reborde con solucioacuten detergente
dejando reposar aproximadamente 10 min Se eliminoacute el sobrenadante del tubo dejando
2 a 3 ml de sedimento Se tintildeoacute con gotas de azul de metileno al 1 o 2 gotas de tintura
de yodo y se dejoacute en reposo de 2 a 5 min vertiendo este contenido en una caja de Petri
Se lavoacute el tubo con 5 ml de agua corriente agregaacutendolo a la placa y se observoacute al
microscopio de 4x a 10x Finalmente se reportoacute la presencia o ausencia de huevos de F
hepatica La identificacioacuten de los huevos se realizoacute a partir de sus caracteriacutesticas
morfoloacutegicas forma ovalada u ovoide con una envoltura lisa de color amarillento o
marroacuten claro que en una de sus extremidades posee un pequentildeo opeacuterculo cuyas
medidas variacutean entre 130-140 μm de largo por 70-90 μm de ancho (Boero 1976) Las
prevalencias de infeccioacuten de las diferentes especies se compararon usando el test de
Chi2
411 - Identificacioacuten de otros paraacutesitos gastrointestinales
Muestras de materia fecal ovina fueron estudiadas con el meacutetodo de Willis para
comprobar presenciaausencia de especies paraacutesitas que pudieran cohabitar con F
hepatica
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42 - Necropsias y obtencioacuten de especiacutemenes de F hepatica
Se participoacute durante 2008 2009 y 2010 en las faenas domiciliarias y peridomiciliarias de
11 animales domeacutesticos [Lama glama (n=4) Ovis orientalis aries (n=4) Capra aegagrus
hircus (n=2) y Bos primigenius taurus (n=1)] de ambos sexos y distintas edades
sacrificados por los pobladores que de esa forma se proveiacutean de carne para la
alimentacioacuten familiar Se obtuvo autorizacioacuten verbal para realizar la inspeccioacuten sanitaria
de los cadaacuteveres que permitiera la buacutesqueda de ejemplares adultos de F hepatica y
otros signos de enfermedad El estudio se realizoacute con el material recogido del ganado
sacrificado por sus propietarios por lo que no se necesitoacute la autorizacioacuten del Comiteacute de
Eacutetica del Colegio Meacutedico Veterinario de la Provincia de Catamarca
En la cavidad abdominal se examinaron los oacuterganos in situ observando esencialmente la
relacioacuten entre ellos y las anormalidades en el peritoneo y contenido del abdomen El
hiacutegado se inspeccionoacute mediante palpacioacuten en toda la superficie para posteriormente
realizar cortes paralelos a traveacutes del pareacutenquima
De manera especial se procedioacute in situ a la inspeccioacuten visual del hiacutegado cuando se
trataba de fasciolosis aguda (n=2) para observar inflamacioacuten presencia de hemorragias
en el pareacutenquima producidas por la migracioacuten de los paraacutesitos inmaduros durante las
primeras semanas post-infeccioacuten o trayectos con sangre coagulada hematomas debajo
de la caacutepsula de Glisson (subcapsulares) congestioacuten venosa y peritonitis fibrosa
adyacente La buacutesqueda de formas joacutevenes de F hepatica se realizoacute mediante incisiones
paralelas del pareacutenquima hepaacutetico con cortes en laacutemina cada dos centiacutemetros y medio
de espesor
En los animales revisados que presentaban fasciolosis croacutenica (n=5) los hallazgos
dependieron de la presencia y nuacutemero de paraacutesitos Se buscoacute especialmente en las
carcasas edemas en ldquocuello de botellardquo edemas generalizados y signos de caquexia En
los hiacutegados se examinoacute todo dato objetivo observado de colangitis fibrosis hepaacutetica y
ganglios linfaacuteticos agrandados En los cortes practicados a los canales biliares se observoacute
la presencia de engrosamientos en las paredes de los ductos y depoacutesitos calcaacutereos en su
lumen
En las necropsias se recolectoacute bilis para la buacutesqueda de huevos de F hepatica los que
a posteriori seriacutean utilizados con los caracoles en la reproduccioacuten in vitro del ciclo La
bilis se colectoacute en tubos coacutenicos de 50 ml de capacidad recubiertos en papel de aluminio
se refrigeroacute y se transportoacute hasta el laboratorio de la Facultad de Ciencias de la Salud
donde se conservaron en heladera a 4-8 degC
Los ejemplares de paraacutesitos hallados durante las faenas se lavaron durante 30 min en
solucioacuten fisioloacutegica fueron dispuestos en 3 grupos de envases uno con solucioacuten AFA
(etanol 95ordm 85 ml formaldehiacutedo comercial 10 ml y aacutecido aceacutetico glacial 5 ml) para realizar
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estudios anatomorfoloacutegicos un segundo al que se agregoacute etanol 70deg para el anaacutelisis de la
variabilidad geneacutetica y un tercero conteniendo ARNlaterR para estudios de resistencia
antiparasitaria Todos los tubos fueron numerados para identificar lugar especie sexo
edad aproximada o categoriacutea de los animales y datos del propietario del animal faenado
421 - Estudios morfoloacutegicos de F hepatica
Ejemplares de F hepatica obtenidos en la faena de un bovino infectado naturalmente en
el valle de Fiambalaacute (n=20) se compararon con las medidas de especiacutemenes procedentes
de Rosario de la Frontera Salta Argentina (n=15) de Cordeiro Riacuteo de Janeiro (n=23)
Lavras Minas Gerais Brasil (n=18) y Galicia Espantildea
El meacutetodo de estudio aplicado se basoacute en el protocolo propuesto por Valero et al (2005)
y se llevoacute a cabo en el Laboratoacuterio de Helmintos Paraacutesitos de Vertebrados Fiocruz Riacuteo
de Janeiro Brasil Se realizaron estudios morfoloacutegicos de F hepatica con microscopia de
campo claro y usando microscopia de contraste por interferencia diferencial o teacutecnica DIC
(Differential-Interference Contrast) Normarski Los especiacutemenes fueron mantenidos en
solucioacuten AFA hasta el laboratorio del Fiocruz donde se fijaron en etanol 70deg se
presionaron entre vidrios transparentes para facilitar la visualizacioacuten de las estructuras e
inmediatamente despueacutes se realizoacute la deshidratacioacuten de las muestras con una serie
ascendente de alcoholes y luego se tintildeeron con carmiacuten alcohoacutelico de Langeron (1949)
seguido de una aclaracioacuten con solucioacuten de salicilato de metilo y baacutelsamo de Canadaacute en
la proporcioacuten 11 El material fue montado entre portaobjetos Se midieron los ejemplares
para su registro y comparacioacuten de tamantildeo con especiacutemenes de las otras regiones Las
microfotografiacuteas se obtuvieron usando un microscopio de campo claro (Olympus BX51)
Ademaacutes se obtuvieron microfotografiacuteas utilizando contraste de interferencia diferencial
(Normarski) para estudiar especiacutemenes un tanto gruesos que no permiten el uso de
contraste de fases La imagen proyectada al ser seudo tridimensional facilitoacute observar las
espinas del tegumento para diferenciarlos Esta teacutecnica se aplicoacute a 23 especiacutemenes
Ocho muestras del valle de Fiambalaacute 7 de Salta 4 especiacutemenes de Cordeiro y 4
ejemplares de Lavras
422 - Estudios de haplotipos de F hepatica
Para analizar los haplotipos de F hepatica circulantes paraacutesitos obtenidos (n=30) en la
necropsia de un bovino naturalmente infectado se conservaron hasta su transporte al
Instituto Malbraacuten en etanol 70ordm y se procesaron para la extraccioacuten de ADN empleando un
kit comercial Se llevaron a cabo reacciones de PCR para la amplificacioacuten del marcador
molecular correspondiente al gen mitocondrial de la subunidad 1 de la citocromo c
oxidasa (COI) Los amplicones obtenidos se secuenciaron automaacuteticamente Las
filogenias fueron reconstruidas utilizando el algoritmo de maacutexima parsimonia
implementado en el programa PAUP (Swoffod 2001) Los aacuterboles se obtuvieron
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mediante 1000 reacuteplicas bootstrap La adicioacuten de secuencias fue al azar con 5
repeticiones Se compararon con ejemplares de fasciolas de otras regiones del paiacutes
423 - Estudios de resistencia a antiparasitarios
Para conocer la posible resistencia a drogas antiparasitarias (Triclabendazol TCBZ) se
utilizoacute la teacutecnica RAPD PCR para la que se seleccionoacute ejemplares procedentes de un
bovino (n=9) y 2 ovinos (n=18) obtenidas en las faenas realizadas en septiembre de 2009
y noviembre de 2010 En cada tubo de microcentrifuga de 2 ml de capacidad se
colocaron 3 ejemplares de F hepatica con el medio ARNlaterR y se enviaron a la Caacutetedra
de Farmacologiacutea de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad del Centro
de la Provincia de Buenos Aires para realizar el ensayo que involucroacute el anaacutelisis de los
fragmentos amplificados mediante electroforesis en geles de
poliacrilamida desnaturalizantes El iniciador empleado se marcoacute con un compuesto
fluorescente y se resolvioacute empleando un secuenciador automaacutetico Se emplearon como
testigos muestras de F hepatica procedentes de la provincia de Chubut y otras de
Cajamarca Peruacute En cada tubo se preparoacute BSA 1mgml 25 microl dNTPs 20 mM 2 microl Taq
directa sin diluir 025 microl DNA 10 ngmicrol 1 microl MgCl 25 mM 2 microl primer mezcla F y R 1 microl y
H2O csp 1625 microl La secuencia del cebador utilizado fue M-13 GAG GGT GGC GGT
TCT y el Programa 7 Di 94 degC 2 min 94 degC 30 seg 37 degC 1 min 72 degC 2 min (45 ciclos)
Ef 72 degC 5 min Los tubos y orden de siembra fueron 1) PM 10 microL 2) ADN Fh Sensible
(cepa pura Cullompton) 3) ADN Fh Resistente (cepa pura Sligo) 4) ADN Fh Peruacute ovino
(Pedro Ortiz de Cajamarca) 5) ADN Fh Quebrada Grande (Vega) 6) ADN Fh Puerta de
Tatoacuten (Bayoacuten) 7) ADN Fh Casa Grande (Loacutepez) 8) ADN Fh Chubut ovino (Jensen)
IDENTIFICACIOacuteN DEL HOSPEDADOR INTERMEDIARIO DE Fasciola hepatica
5 - Epidemiologiacutea de los caracoles
51 - Recoleccioacuten de limneidos en la zona del valle de Fiambalaacute
Los meacutetodos malacoloacutegicos correspondieron a los baacutesicos utilizados en malacologiacutea y
comprendieron la recoleccioacuten de los limneidos (n=2354) en la naturaleza su transporte y
la posterior aclimatacioacuten de los mismos en condiciones de laboratorio para su estudio
(Roberts 1950)(Malek 1962)(Prasertphon 1990)
Se seleccionaron 4 biotopos donde se colectaron caracoles mediante la buacutesqueda visual
sobre la vegetacioacuten o de los ejemplares que se desplazaban libremente en la superficie
del agua Tambieacuten se buscaron moluscos en restos del sustrato seco troncos hojas
tallos etceacutetera
El aacuterea de trabajo fue determinada con el fin de recolectar el mayor nuacutemero de
ejemplares posibles en total se realizaron 24 muestreos de 3 horas cada uno desde
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septiembre a mayo de cada antildeo colectando moluscos en sus diferentes haacutebitats
mediante las manos enguantadas para no dantildear al caracol y reduciendo el impacto sobre
el biotopo En los diferentes muestreos y en cada sitio se recolectaron todas las especies
de caracoles presentes utilizando igual meacutetodo de captura (Rabinovich 1980)
El material malacoloacutegico colectado proveniacutea de poblaciones naturales del valle de
Fiambalaacute Las expediciones para la recoleccioacuten de los moluscos se realizaron en
poblaciones de caracoles del riacuteo Abaucaacuten (27ordm29acute2871S y 67ordm360612O) en la vega
ubicada en las afueras de Tatoacuten (27ordm202935S y 67ordm315824O) gasteroacutepodos
presentes de la vega ldquoLa Primavera de Isatacordquo (27ordm292871S y 67ordm360612O) entre
las localidades de Tatoacuten y Medanitos y en Riacuteo Grande (27ordm133794S y 67ordm224317O)
Estos lugares fueron escogidos teniendo en cuenta los casos registrados en el marco
veterinario (Curtale et al 2000) y las primeras estimaciones sobre fasciolosis en seres
humanos detectadas en la zona
De cada una de las aacutereas de recoleccioacuten se tuvieron en cuenta una serie de
caracteriacutesticas bioacuteticas tales como la presencia de otras especies de moluscos
(Paraense 2005) presenciaausencia de vertebrados como potenciales hospedadores
definitivos y tipo de vegetacioacuten de la zona
511 - Transporte de limneidos al laboratorio
La recoleccioacuten de moluscos en el terreno se realizoacute siguiendo las instrucciones generales
que cabe encontrar en cualquier libro de malacologiacutea que se refiera a gasteroacutepodos de
agua dulce Siempre se tratoacute de hacer colectas lo maacutes numerosas posibles dada la
mortalidad de estos caracoles en situaciones experimentales
Para el transporte de los ejemplares vivos se utilizoacute recipientes de plaacutestico conteniendo
agua del lugar Durante los viajes se hizo especial hincapieacute en la temperatura (menor a
20 degC) para evitar la contaminacioacuten del agua que podiacutea llevar a la mortalidad de los
caracoles recolectados A su vez se colectaron especiacutemenes que fueron colocados en
tubos con alcohol etiacutelico Se trasladaron al laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de
Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de Catamarca para estudios apropiados
52 - Tareas en el laboratorio
521 - Adaptacioacuten y cultivo de limneidos
El primer paso que se realizoacute en el laboratorio fue la aclimatacioacuten de los moluscos
recolectados tratando de simular las condiciones que encontraban en la naturaleza Esta
fase duroacute aproximadamente 48 horas (Rondelaud y Barthe 1987)(Audousset et al
1989) Durante este periacuteodo los ejemplares se colocaron en recipientes de vidrio con
agua y un suministro de lechuga a temperaturas entre 20 y 25 ordmC
Se consiguioacute un correcto mantenimiento para la reproduccioacuten del ciclo bioloacutegico al
disponer en el fondo de los recipientes una capa fina de sedimentos de grava
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(Rondelaud y Barthe 1978)(Audousset et al 1989) cubierta con agua ambos elementos
previamente esterilizados mediante el empleo del autoclave Cada 3 a 4 diacuteas se antildeadiacutean
hojas de lechuga (Venturini et al 1981) y se procediacutea al cambio de agua del recipiente
(Bouix-Busson et al 1985 a)(Bouix-Busson et al 1985 b)
522 - Taxonomiacutea
De los primeros ejemplares (n=1236) colectados en diciembre de 2009 un grupo (n=298)
de los moluscos se llevaron al Laboratorio de Parasitologiacutea General Unidad de Ecologiacutea
de Reservorios y Vectores de Paraacutesitos Departamento de Ecologiacutea Geneacutetica y
Evolucioacuten Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires donde
se confirmoacute por las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla (Paraense 1982) y
oacuterganos internos que se trataba de limneidos
El material colectado y conservado en etanol (n=236) en septiembre de 2010 se
comparoacute con las descripciones y los dibujos de las especies de limneidos detalladas para
la Regioacuten Neotropical (Paraense 1982)(Paraense 1984)
La caracterizacioacuten morfomeacutetrica comparativa de la conchilla de los limneidos es una
caracteriacutestica adicional de intereacutes sobre todo cuando se trata de especies de
hospedadores intermediarios del grupo GalbaFossaria ampliamente distribuido en zonas
endeacutemicas de fasciolosis de Ameacuterica del Sur (Samadi et al 2000)(Bargues et al 2007 a
2011 a)
Las conchillas de limneidos se midieron de acuerdo con los meacutetodos tradicionales
malacoloacutegicos (Oviedo et al 1995)(Samadi et al 2000) Para estudiar la estructura
anatoacutemica de la poblacioacuten se midioacute el largo de la conchilla desde el aacutepex hasta el margen
anterior y el ancho en la seccioacuten maacutes amplia (Hubendick 1951) de los caracoles
recolectados en cada ambiente y por fecha de muestreo utilizando un calibre de Vernier
Otros moluscos recolectados simultaacuteneamente con los de la familia Lymnaeidae fueron
identificados a nivel de geacutenero siguiendo las claves y descripciones de los gasteroacutepodos
de agua dulce de Argentina (Castellanos y Landoni 1981)(Rumi et al 2008)
523 - Infeccioacuten natural por F hepatica
Teniendo en cuenta que los moluscos fueron recolectados en zonas de endemia animal
se consideroacute necesaria la comprobacioacuten de una posible parasitacioacuten Despueacutes de su
aclimatacioacuten 70 ejemplares recolectados en 2011 fueron aislados en cajas de Petri
individuales para comprobar en eacutestos la emisioacuten de cercarias durante 60 diacuteas Las cajas
de cultivo fueron revisadas una vez a la semana en busca de la posible presencia de
metacercarias enquistadas en las paredes del recipiente o en la lechuga que serviacutea de
alimento
Un grupo de cuerpos de caracoles (n=453) se examinaron para la identificacioacuten de
estadios intermediarios de F hepatica Se sacrificaron y relajaron los ejemplares y luego
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al llevar a cabo la diseccioacuten de los cuerpos en fresco separando las partes duras de las
blandas con agujas de diseccioacuten se comprimieron entre dos portaobjetos y se
observaron al microscopio oacuteptico (4x) para reconocer las estructuras de los diferentes
estadios intermedios del parasito
524 - Infeccioacuten inducida del hospedador intermediario
En el laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la Salud se realizoacute la
infeccioacuten experimental del hospedador intermediario la que se consiguioacute forzando el
contacto miracidio-molusco (n=60) y manteniendo los caracoles infectados bajo
condiciones controladas de temperatura humedad e iluminacioacuten (Mas-Coma et al 1997
a)(Valero y Mas-Coma 2000)
Los miracidios utilizados se obtuvieron de forma experimental mediante la eclosioacuten de los
huevos previamente embrionados (recogidos en las necropsias lavados con solucioacuten
isotoacutenica y filtrados) Se mantuvieron en estufa a temperatura de 25 degC durante 8 diacuteas
observaacutendolos cada 24 horas para comprobar la maduracioacuten de los mismos Los huevos
embrionados se sometieron a la accioacuten de la luz durante 30 min promoviendo la apertura
del opeacuterculo y salida del estadio larvario (Ubaid 1989) La infeccioacuten se logroacute poniendo en
contacto los moluscos con varios miracidios -infeccioacuten plurimiracidial- en una caja de Petri
durante un tiempo que osciloacute entre 2 y 6 horas Pasado este periodo se observoacute el
recipiente bajo la lupa en busca de miracidios y en caso de no estar presentes se
consideroacute un signo inequiacutevoco de que habiacutean penetrado en el caracol (Krull
1941)(Kendall 1950)(Roberts 1950)
53 - Identificacioacuten de la especie mediante determinacioacuten de haplotipos
Se transportaron caracoles de una misma poblacioacuten de limneidos (n=38) colectados
durante 2012 en los biotopos de la zona y fijados con alcohol etiacutelico 70 al Centro
Colaborador de la OMS Departamento de Parasitologiacutea de la Universitat de Valencia
Espantildea para realizar los anaacutelisis moleculares mediante procedimientos de extraccioacuten de
ADN Su mantenimiento durante el viaje se llevoacute a cabo mediante cambios del alcohol en
forma perioacutedica
En la presente investigacioacuten entre los marcadores moleculares utilizados en la
identificacioacuten de los limneidos y para demostrar a que especie perteneciacutean se
seleccionaron ADN nuclear ribosomal (ADNr) marcador de ADN mitocondrial (ADNmt)
primer espaciador transcrito interno (ITS-1) segundo espaciador transcrito (ITS-2) ARN
ribosomal codificacioacuten de gen de la subunidad grande del gen mitocondrial (16S)
citocromo c oxidasa subunidad I de secuencia de nucleoacutetidos y la secuencia de
aminoaacutecidos (Cox1)
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531 - Marcadores de ADN seleccionados
Los marcadores se utilizaron para demostrar la clasificacioacuten de las especies de limneidos
y evaluar comparativamente la variabilidad intraespeciacutefica de sus poblaciones en muchos
paiacuteses de Ameacuterica Latina (Bargues y Mas-Coma 2005)(Bargues et al 2001 2007 a
2011 a b c) que tambieacuten incluye Argentina (Bargues et al 2006 2007 b)(Mera y Sierra
et al 2009)
532 - Extraccioacuten de ADN
El total de ADN fue aislado con fenol-cloroformo y se precipitoacute en etanol (Sambrook et al
1989) La extraccioacuten se realizoacute individualmente de una pequentildea porcioacuten del tejido de la
cabeza-pie de cada caracol (Manlatis et al 1989) Las muestras de los especiacutemenes de
limneidos se suspendieron en un tubo eppendorf con 400 μL de tampoacuten de lisis 10 μL
Tris-HCl pH 80 100 μL EDTA 100 μL NaCl 1 SDS conteniendo 500 microgml de
proteinasa K (Promega Madison WI USA) y digeridos durante 2 horas a 55 degC con
agitacioacuten alterna cada 15 min Los pasos del procedimiento se realizaron de acuerdo con
meacutetodos descriptos previamente (Bargues y Mas-Coma 1997)(Bargues et al 2001 2007
a) El sedimento (pellet) se secoacute y se resuspendioacute de nuevo en 30 μL de buffer TE esteacuteril
(pH 80) esta suspensioacuten fue almacenada a -20 ordmC hasta su empleo
533 - Secuenciacioacuten de los marcadores de ADNr y ADNmt
Las secuencias de ADN fueron amplificadas mediante la reaccioacuten en cadena de
polimerasa (PCR) con la utilizacioacuten de 4-6 μL de ADN genoacutemico cada 50 μL de reaccioacuten
de PCR seguacuten meacutetodos descritos en la bibliografiacutea (Bargues y Mas-Coma 1997
2005)(Bargues et al 1997 2001 2006 a c 2007 2011 a b c 2012 a b)(Mas-Coma et
al 2001) El programa utilizado para los espaciadores fue 1) 30 seg a 94 ordmC 2) 30 seg a
94 ordmC 3) 30 seg a 50 ordmC 4) 1 min a 72 ordmC 30 ciclos repetitivos de los pasos 2 a 4 5) 7
min a 72 ordmC 6) descenso y mantenimiento a 4 ordmC Diez μL de cada producto de PCR se
chequeoacute mediante electroforesis en gel de agarosa coloreadas con bromuro de etidio 1
(NuSievereg GTGreg agarosa) Para poder extrapolar el peso de los fragmentos de ADN se
utilizoacute el marcador de peso molecular VI (Boehringer Mannheim)
La purificacioacuten de los productos amplificados por PCR tuvo la finalidad de obtener una
solucioacuten concentrada y de alta pureza del fragmento eliminando los restos de cebadores
nucleoacutetidos sales etceacutetera La concentracioacuten de ADN asiacute como su pureza fueron
calculadas por espectrofotometriacutea en una dilucioacuten de la muestra al 5 en tampoacuten Tris 10
μL
Cada uno de los cuatro marcadores de ADN (ADNr ITS-2 y ITS-1 y de ADNmt genes
16S y cox1) se amplificaron por PCR en forma independiente para cada muestra y cada
producto de PCR se secuencioacute para la caracterizacioacuten del haplotipo Los espaciadores
ITS-2 y ITS-1 se amplificaron utilizando los cebadores descritos anteriormente (Bargues
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et al 2001 2006 2007 a b)(Mas-Coma et al 2009 a) Los fragmentos diana de los
genes 16S y cox1 fueron amplificados por PCR usando un conjunto de cebadores
universales (Simoacuten et al 1991)(Folmer et al 1994) Los procedimientos de amplificacioacuten
y las condiciones del ciclador teacutermico para cada uno de los marcadores de ADN se
llevaron a cabo en un Mastercycle Epgradient (Eppendorf Hamburgo Alemania) como
se describioacute previamente (Mas-Coma et al 2009 a)(Bargues et al 2011 a)
Los productos de PCR fueron purificados utilizando el Ultra Clean Systemtrade Purificacioacuten
de ADN PCR Clean-up (MoBio Solana Beach CA USA) de acuerdo con el protocolo del
fabricante y se resuspendieron en 50 μL de 10 mM de tampoacuten TE (pH 76) La
concentracioacuten final de ADN se determinoacute midiendo la absorbancia a 260 y 280 nM en un
Eppendorf BioPhotometer (Hamburgo Alemania)
La secuenciacioacuten de cada marcador molecular se realizoacute en ambas hebras por el meacutetodo
didesoxinucleoacutetidos (ddNTPs) de terminacioacuten de cadena Se llevoacute a cabo con el kit que
contiene tinte de color de enzima termoestable Taq en un Applied Biosystems 3730 DNA
Analyzer (Applied Biosystems Foster City CA USA) usando cebadores de PCR
534 - Anaacutelisis de la secuencia
Las secuencias fueron alineadas utilizando CLUSTALW2 (Larkin et al 2007) en versioacuten
606 MEGA (Tamura et al 2013) y el conjunto se trabajoacute con el paquete Staden (Staden
et al 2001) Las correcciones menores para el mejor ajuste de nucleoacutetidos se hicieron en
los casos de los espaciadores ITS Las homologiacuteas se realizaron utilizando el programa
BLASTN (Camacho et al 2008) del Centro Nacional para el sitio web de informacioacuten
sobre Biotecnologiacutea (httpwwwncbinlmnihgovBLAST) Las distancias geneacuteticas se
midieron usando paraacutemetros proporcionados por PAUP v40b10 (Swofford 2001)
Como la sistemaacutetica de limneidos sudamericanos pertenecientes al grupo GalbaFossaria
es controversial y no se puede hacer solo con criterios morfoloacutegicos (Bargues et al 2007
a)(Mera y Sierra et al 2009) para identificar queacute individuos pertenecen a L neotropica o
L viator la comparacioacuten de las secuencias se realizaron utilizando todos los datos de
secuencias ribosomales y mitocondriales de moluscos descargados de GenBank
535 - Nomenclatura de los haplotipos de ADN
En lo referente a la nomenclatura los coacutedigos de las secuencias obtenidas utilizados para
la definicioacuten de los haplotipos siguen la propuesta estaacutendar para limneidos (Bargues y
Mas-Coma 2005)(Bargues et al 2006 a)(Mas-Coma et al 2009 a) Es importante
puntualizar que los coacutedigos de haplotipos son definitivos soacutelo cuando se trata de
secuencias completas del marcador utilizado para haplotipar Sin embargo se consideran
coacutedigos preliminares cuando la secuencias utilizadas corresponden a fragmentos o
secuencias incompletas
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54 - Determinacioacuten molecular de la infeccioacuten natural de limneidos con F hepatica
Se seleccionaron al azar caracoles (n=120) recolectados a fines del verano de 2011 y
conservados individualmente en alcohol 70 Los ejemplares fueron llevados al
Departamento de Parasitologiacutea del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas
ANLIS bdquobdquoDr Carlos G Malbranrdquo donde se sometieron a la teacutecnica de amplificacioacuten en
cadena de la polimerasa (Cucher et al 2006) La secuencia completa del ADN
mitocondrial de F hepatica disponible en la base de datos GenBank (Nuacutemero de acceso
AF216697) se empleoacute para adquirir el par de cebadores utilizados en el meacutetodo
La identidad de F hepatica se corroboroacute mediante la determinacioacuten molecular en los
caracoles limneidos Esta teacutecnica se empleoacute a fin de determinar la infeccioacuten de moluscos
del geacutenero Lymnaea con F hepatica A 10 μL de material geneacutetico obtenido se le
adicionaron 40 μL de mezcla de reaccioacuten compuesta de 025 microL de cebadores FhCO1F
025 microL de cebadores FhCO1R 020 microL de ddNTPs 020 microL de enzima Taq polimerasa
5 microL de MgCl 5 microL de buffer de reaccioacuten 040 microL de BSA y 2870 microL de agua bidestilada
esteacuteril Este proceso se realizoacute en tandas de 75 muestras a modo de trabajar con mayor
practicidad El protocolo empleado fue el mismo usado para determinar si existioacute
amplificacioacuten en la secuencia de ADN en las muestras de limneidos colectados a campo
De estas muestras se tomaron 5 μL para ser sembrados en un gel de electroforesis de
concentracioacuten 15 para verificar si hubo amplificacioacuten de la muestra a su vez se
sembroacute la mezcla de reaccioacuten (sin ADN) y una muestra de control positivo que permitioacute
verificar si las muestras analizadas estaban infectadas Se procedioacute a realizar la
electroforesis en las mismas condiciones anteriores
La teacutecnica de PCR se empleoacute para amplificar la secuencia de ADN de las muestras
limneidos A 10 microl de material geneacutetico se les adicionoacute 40 microl de mezcla de reaccioacuten 05 microl
de primer 213 10 mM 05 microl de primer 297 10 mM 02 microl de dNTPs 02 microl enzima Taq
polimerasa 5 microl MgCl 5 microl de buffer de reaccioacuten B10x ClK 04 microl de BSA y 282 microl de
agua bidestilada esteacuteril
Los tubos de ADN y uno que conteniacutea agua (a modo de control) fueron llevados a un
termociclador empleando el programa ldquosil Lymnaea 18srdquo previamente cargado en el
equipo Se llevoacute a una temperatura de 95 degC durante 5 min luego a temperaturas de 94
degC 55 degC y 72 degC durante 10 seg repitiendo este ciclo 35 veces para despueacutes llevarlos
durante 10 min a 72 degC para finalmente bajar la temperatura hasta 4 degC
541 - Electroforesis
De las muestras se tomaron 5 microl para ser sembrados en un gel de electroforesis de
concentracioacuten 25 que permitioacute la separacioacuten de las macromoleacuteculas en base a su
carga y masa al colocarlo en una cuba de electroforesis que poseiacutea un tampoacuten y donde
se aplicoacute corriente eleacutectrica Esto se realizoacute mezclando 6 g de agarosa en 400 ml de
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buffer TAE (tris-acetato) calentando para disolver la agarosa luego se dejoacute enfriar la
mezcla hasta 50-60 degC y se antildeadieron 24 microl de bromuro de etidio que actuoacute como
colorante Se vertioacute en un molde y colocando un peine se formaron pocillos donde fueron
sembradas las muestras y colocadas en la cubeta de electroforesis que presentaba
solucioacuten tampoacuten de TAE 1x el gel quedoacute completamente cubierto
Una vez realizado esto se colocoacute en el primer pocillo el ADN marcador adecuado (100
bp) en el uacuteltimo la mezcla de reaccioacuten con agua y en los pocillos restantes las muestras
que se analizaron por duplicado El ADN migroacute hacia el aacutenodo aplicando tensioacuten eleacutectrica
hasta que el bromuro de etidio recorrioacute la distancia a traveacutes del gel (30 min) Finalmente
se introdujo el gel en un transiluminador UV y se fotografioacute Se eliminoacute el gel en el
recipiente aparte para residuos soacutelidos destinado al bromuro de etidio
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RESULTADOS
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6 - DATOS SECUNDARIOS Y CARACTERISTICAS DEL AMBIENTE
61 - Caracteriacutesticas de las viviendas del valle de Fiambalaacute
El nuacutemero de familias estudiadas (n=52) habitaban en viviendas ubicadas en Tatoacuten
(n=34) (271 personas) (7742) y en puestos aledantildeos a Riacuteo Grande (n=18) (79
personas) (2257) Las viviendas se clasificaron seguacuten su tipo en ranchos 36 (6923)
viviendas precarias 12 (2307) y casas 4 (769)
Los hogares se agruparon en funcioacuten de la calidad de los materiales de construccioacuten
correspondiendo maacutes de la mitad de ellos a viviendas construidas con materiales no
resistentes ni soacutelidos En cuanto a los materiales utilizados en los pisos de las viviendas
predominaba la tierra (9230) seguida por el cemento (576) y el ceraacutemico (194)
Las paredes estaban construidas principalmente de piedra o bloques de cemento
(5683) y adobe (4317) y en general no contaban con revoque exterior (9522)
Los techos presentaron como elementos constitutivos principales la paja con adobe
(4348) y la chapa (5652) sin cielorraso (9891)
En las viviendas estudiadas el principal combustible utilizado correspondioacute a la lentildea
(7652) mientras que el gas envasado en garrafas se encontroacute en segundo teacutermino
(2348)
La fuente de agua para consumo correspondioacute en su mayoriacutea a la extraiacuteda del Riacuteo
Grande por medio de acequias dirigidas hacia cisternas de decantacioacuten y desde alliacute en
precaria red de cantildeeriacuteas plaacutesticas hasta los domicilios Las viviendas rurales se
abasteciacutean con agua de vertiente utilizando bidones para el almacenamiento Todas las
familias utilizaban para su consumo el agua de vertiente o de red sin proceso de filtracioacuten
o cloracioacuten Cuando se recolectoacute informacioacuten acerca de la utilizacioacuten de agua hervida
soacutelo 2 familias (384) indicaron que la empleaban para consumo mientras que ninguna
familia la usaba para el lavado de alimentos ni la higiene personal
En cuanto a la eliminacioacuten de excretas la forma principal correspondioacute a la eliminacioacuten a
cielo abierto 33 familias (6346) El bantildeo interior se encontroacute solo en el 193 de las
viviendas visitadas y 3461 utilizaba letrinas con descarga a pozo encontraacutendose todas
a menos de 50 metros de la casa
Las caracteriacutesticas generales de precariedad de las viviendas se relacionan con el hecho
de que en soacutelo 15 (2884) de los hogares visitados el ingreso familiar era fijo El ingreso
variable era reflejo de la actividad laboral del jefe de familia que se desempentildeaba en las
tareas rurales
La presencia de animales se registroacute en 48 casas (9230) En estas viviendas los
animales de compantildeiacutea (perros y gatos) constituiacutean el mayor porcentaje (9615) seguida
por la criacutea de ganado (ovinos y porcinos) (7076) y las aves de corral (6190)
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62 - Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiada
La poblacioacuten estudiada (n=305) comprendioacute 124 personas de sexo masculino (4065) y
181 de sexo femenino (5934) Entre los varones 71 (5725) perteneciacutean a los grupos
etarios menores de 19 antildeos mientras que entre las mujeres las menores fueron 101
(5580) Los pacientes menores de 14 antildeos fueron 130 (4263) y los mayores de 14
antildeos 175 (5737)
Las personas que residiacutean en el aacuterea de estudio desde su nacimiento fueron 263
(8652) por un periacuteodo de entre 5 y 33 antildeos 30 personas (964) y por un periodo
menor de un antildeo al momento del estudio 12 (384)
La informacioacuten recolectada acerca de los haacutebitos de las personas (considerando un total
de 300 ya que 5 teniacutean 3 antildeos o menos y no podiacutean responder las preguntas incluidas
en el cuestionario) indicoacute que 187 (6233) reconociacutean vegetales silvestres comestibles
en los riacuteos y vegas identificaacutendolos como plantas de berro Entre las personas que
reconocieron el berro 54 (2887) refirioacute que lo comiacutea
La actividad de faena era realizada por 31 familias (5961) Entre las encuestadas 14
(2692) reconociacutean el paraacutesito (ldquouncardquo) y 11 (2115) comentoacute haber visto estas
estructuras parasitarias Este porcentaje se considera sobreestimado debido a que
algunos pobladores dedicados a la criacutea del ganado confunden F hepatica con otros
paraacutesitos hecho observado al momento de las visitas a los corrales de encierro Por otro
lado se confirma el desconocimiento de la parasitosis al comparar los hallazgos
obtenidos en los muestreos donde solo 9 criadores sabiacutean de la presencia del paraacutesito
en los animales de sus corrales siendo 21 los rebantildeos positivos Es de destacar que en
algunos casos se observaron registros de mortandad atribuidos a la fasciolosis en
animales sin tratamientos fasciolicidas
El contacto con animales fue referido por 290 de las personas encuestadas (9508)
siendo 215 en el peridomicilio y 87 en la actividad laboral El contacto de las personas
con ovinos fue indicado por 212 individuos (6950) mientras que con caprinos 174
(5704) con bovinos 122 (40) con mulares 190 (6229) con equinos 55 (1803)
con cameacutelidos 115 (3770) con porcinos 46 (1508) y con aves domeacutesticas 188
(6163) Con animales de compantildeiacutea el contacto fue de 291 encuestados con perros
(9540) y 174 con gatos (5704)
Las ocupaciones maacutes frecuentes en pacientes mayores de 15 antildeos eran la agricultura y
la ganaderiacutea (36) empleados en la administracioacuten puacuteblica (2414) completaacutendose
con estudiantes (685) y amas de casa (6285)
63 - Caracteriacutesticas climaacuteticas y haacutebitat
Las caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute de acuerdo con los diferentes
sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizados se indican
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en la Tabla 11 (Veacutease anexo pp 172) Los resultados de los anaacutelisis de las
clasificaciones climaacuteticas de Koeppen y Budyko asiacute como por el iacutendice de aridez de De
Martonne permiten destacar las caracteriacutesticas ambientales aacuteridas (extremas deseacuterticas)
que rodean el valle La influencia del oceacuteano en el clima local estimada por el iacutendice de
continentalidad de Gorczynski indica pequentildeas diferencias entre Tatoacuten y Rio Grande
situadas a diferentes altitudes al este y al oeste de la cadena montantildeosa
Las temperaturas maacuteximas medias y miacutenimas diarias muestran una estacionalidad
marcada con un pico en enero y un descenso hasta los valores miacutenimos en junio-julio
(Veacutease anexo Figura 22 A y C pp 187) La media de los valores de temperatura son
inferiores al umbral de temperatura miacutenima de 10 ordmC reconocido para el desarrollo de F
hepatica en el periacuteodo de junio a julio
El anaacutelisis de la evolucioacuten anual de la precipitacioacuten y la evapotranspiracioacuten potencial
muestra la muy baja disponibilidad de lluvias con un pico pequentildeo en enero-febrero y
precipitacioacuten casi inexistente durante el periacuteodo comprendido desde abril-mayo a octubre-
noviembre (Veacutease anexo Figura 22 B y D pp187) Se presenta aridez durante todo el
antildeo (cuando se utiliza ETP gt 05) (Veacutease anexo Figura 22 D pp 187)
Los resultados indican que los focos de transmisioacuten de fasciolosis en el valle de Fiambalaacute
se presentan en ambientes de hecho aislados que presentan disponibilidad de agua
dependiente solo de los riacuteos que bajan de las sierras vecinas
Las caracteriacutesticas ambientales extremadamente aacuteridas que rodean el valle de Fiambalaacute
asiacute como la muy baja precipitacioacuten anual son sorprendentes y muy diferentes de las
caracteriacutesticas ambientales tiacutepicas que rodean focos de transmisioacuten de la fasciolosis
En la zona de estudio los datos indican una concentracioacuten de todos los factores de
transmisioacuten de la enfermedad en aacutereas pequentildeas donde los humanos y los animales
comparten el suministro de agua Esta situacioacuten de transmisioacuten concentrada recuerda las
caracteriacutesticas epidemioloacutegicas de los focos de transmisioacuten de esquistosomiosis en los
oasis del desierto del Sahara en los paiacuteses africanos (Doumenge et al 1987)
Una transmisioacuten estacional se puede esperar en funcioacuten de la coincidencia puntual de la
temperatura apropiada y la disponibilidad de agua de los riacuteos Dicha estacionalidad es
conocida en las zonas endeacutemicas siguiendo el modelo valle de la transmisioacuten de la
fasciolosis conocida en otros paiacuteses andinos (Mas-Coma 2005)(Valero et al 2012)
7 - RESULTADOS EN SERES HUMANOS
71 - Serologiacutea
711 - Inmunodiagnoacutestico
En la poblacioacuten de personas estudiadas (n=305) se identificaron los casos seroloacutegicos
positivos (n=105) al inmunodiagnoacutestico realizado con el ensayo de ELISA (Tabla 2)
3 M
77
M
Paciente
Edad
Sexo
ELISA 1 (nM)
2009
ELISA 2 (nM)
2010
ELISA 3 (nM)
2011
Coproparasitoloacutegico
Eosinofilia
()
Enzimas y
Bilirrubina
Cliacutenica
Imaacutegenes
Cirugiacutea
(Elevadas) 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
37 F 0490 DAD
0479
0444 8 BD GOTFAL
BD
UH
43
F
0529
0466
Negativo
9
GOTFALB TBD
D
38 F 0377 0503 0440 Negativo BTPT 44 F 0498 0482 Negativo 7 FAL FDAV Colecist
40 M 0479 57 M 0607 64 F 0469 0461 FALPT IDADVH Negativa Positivo 16 F 0456 0433 Positivo 8 PT DDA 39 F 0185 0471 FAL 20 M 0250 0443 FALBD 48 F 0550 0464 Negativo FUDAD 20 F 0438 0448 Negativo 38 F 0459 0450 8 FALBD 77 M 0587 0487 5 FALBD 51 M 0532 0443 5 FDAV 45 F 0481 0633 7 BTBD DAV 63 F 0478 8 BD DA
20
21
22
23
24
46 F 0488 0464 Negativo 10 PT IDAD 46 M 0470 8 GOTGTPF
ALBTD 43 F 0453 DDAV 27 F 0445 Negativo 5 FAL 3 M 0479 Negativo
82
Tabla 2 Resultados de anaacutelisis comparativos seguacuten sexo y edad de la absorbancia de ELISA estudios coproloacutegicos eosinofilia
hepatogramas datos cliacutenicos imaacutegenes y cirugiacuteas sobre casos positivos con diagnoacutestico documentado Valle de Fiambalaacute Antildeos 2009-2011
9 F
11 M
M M M M
8 M 18 M 14 M 63 M
6 M 18 M 9
14
25 0448 Positivo GOTGTPF ALPT 26 0491 Negativo 27 40 F 0555 0435 Negativo 28 84 0486 0485 FAL D 29 24 0574 5 30 65 0445 31 31 0451 32 43 F 0547 0531 Negativo 8 FAL DVH Negativa 33 63 F 0528 0344 Negativo 34 31 F 0431 U 35 24 F 0452 IDAUV 36 0487 Positivo 6 FAL DDAVD Negativa 37 0465 Negativo 5 FAL DAD 38 0166 0454 39 0468 5 GOTGTP DV 40 0204 0483 Negativo 41 0222 0483 DDAUV 42 F 0457 DADV 43 F 0406 0531 44 23 F 0604 0485 FAL V 45 38 F 0492 Negativo DAUVH 46 31 F 0413 Negativo DA 47 12 F 0259 0516 V 48 10 M 0508 Negativo 49 16 F 0151 0489 FAL FDAV 50 16 F 0207 0442 Negativo 5 U 51 22 M 0426 0169 IDAV 52 20 M 0414 53 59 F 0279 0438 U
54 15 F 0152 0437 DAV
55 58 F 0502 0441 Negativo 8 FALPT DFDAUDV H
Positivo
83
M
9 F
F
F
9 7
86 M
8 M 15 M
56 14 M 0464 0428 Negativo FAL 57 19 F 0488 0419 Negativo DAUDV 58 10 F 0496 0444 Negativo FALPT VD 59 25 F 0443 Negativo FAL V 60 82 F 0440 61 16 F 0374 0468 Negativo 5 I 62 36 F 0488 0132 UD Litiasis 63
29
F
0648
0477 GOTGTPF
ALP
DAVD
64 62 F 0464 65 54 F 0451 0364 Negativo 7 FALBT DAVD Positiva 66 54 F 0592 0545 5 VDH 67 32 0566 0445 6 FALPT DAUV Negativa 68 0498 0524 Negativo 8 V 69 0547 FALBDPT DV 70 0490 Negativo 5 DA 71 0530 5 PT H 72 59 F 0543 0485 Negativo FALPT FDAV 73 27 F 0471 FALPT DAV 74 47 F 0491 5 BD FDAV 75 GOTFALB 7 F 0481 6 TPT 76 5 F 0471 F 77 20 F 0442 FALPT DAV 78 21 F 0418 PT UV 79 27 F 0567 Negativo D 80 0430 V 81 0236 0454 0550 8 FAL DAVD 82 30 F 0431 PT DA 83 57 F 0485 0168 Negativo FALPT DAVD 84 79 M 0559 0499 Negativo FAL FH Negativa 85 26 F 0331 0415 Negativo DAUD 86 65 F 0537 FALPT DDAV 87 51 M 0558 0419 Negativo 6 Negativa Colicistec
84
M M
7 F
M M M
15 F 56 M
88 20 0460 DAV
89 46 0426 BT DAU 90 0498 FDAV Negativa 91 49 F 0446 DAV 92 68 F 0441 FAL VD Negativa 93 35 M 0404 0480 PT DAV Negativa 94 85 F 0548 FALPT DAV 95 43 0501 H 96 68 0478 DAD 97 58 0466 VH 98 0445 FALPT DV 99 0430 0482 8 FALPT DH 100 26 F 0441 101 30 M 0407 0480 PT V 102 32 F 0456 0484 0597 Positivo 5 BDPT Negativa 103 9 M 0461 Negativo FALBD DV Negativa 104 65 F 0457 DAUDV 105 19 F 0445 8
85
Color Amarillo grupos etarios menores de 19 antildeos Azul sexo masculino Rojo coproparasitoloacutegico positivo GOT=transaminasa glutaacutemico oxalaceacutetica
GTP=transaminasa glutaacutemico-piruacutevica FAL=fosfatasa alcalina BT=bilirrubina total BD=bilirrubina directa PT=proteiacutenas DA=dolor abdominal D=diarrea
U=urticaria H=hepatalgia F=fiebre V=vomito I=ictericia Colicistec=colecistectomiacutea Naranja imagen compatible Verde cirugiacutea con hallazgos
Valores de referencia eosinoacutefilos 0 a 4 GOT 6-30 UIL GTP 6-35 UIL FAL˃ 200 UIL BD 0 a 03 mgdL BT 03 a 13 mgdL PT 60 a 83 gmdL
Eosinofilos
Normales
Nuacutemero de casos
Seronegativo 174
Seropositivo 71
Total 245
(lt350mm3) Resultado () 870 676a 803
Elevados
Nuacutemero de casos
26
34
60 (˃350mm3) Resultado () 130 324b 197
Total
Nuacutemero de casos
200
105
305
Resultado () 100 100 100
Resultaron a la prueba de ELISA con valor de corte 0410nm 105 sueros positivos
(3442) y 200 seronegativos (6558) (Figura 7) Una persona resultoacute seropositiva en
ensayos realizados en extracciones de 3 antildeos consecutivos 27 personas resultaron
seropositivas en extracciones realizados en 2 antildeos seguidos y 55 en una sola
oportunidad de testeo Quince pasaron de una primera prueba seronegativa a
seropositivo en un segundo estudio Dos partiendo de un primer anaacutelisis seronegativo
resultaron seropositivas en los 2 antildeos subsiguientes y 5 personas pasaron a ser
seronegativas en la tercera extraccioacuten
3442 Negativos
Positivos 6548
Figura 7 Distribucioacuten de personas (n=305) seropositivas y seronegativas en frecuencias
relativas () al inmunodiagnoacutestico del ensayo de ELISA analizadas en el Valle de
Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
712 - Eosinofilia
De los pacientes estudiados se detectaron diferencias estadiacutesticamente significativas en
la proporcioacuten de casos con eosinofilos elevados entre seropositivos y seronegativos
Dentro del grupo de pacientes con serodiagnoacutestico positivo es superior el porcentual con
eosinofilos elevados (Tabla 3)
Tabla 3 Resultados comparativos entre la presencia de eosinofilia y ensayos de ELISA
seropositivos Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Serologiacutea
a y b presentan diferencias estadiacutesticamente significativas
(χ2 = 1636 Gl = 1 p= 0000)
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713 - Proteiacutenas totales enzimas bilirrubina y colesterol
En el grupo de casos positivos al test de ELISA el porcentual con valores elevados de
proteiacutenas totales es significativamente superior (Tabla 4)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas en la proporcioacuten de casos
con bilirrubina total elevada y en la proporcioacuten de casos con colesterol elevado entre
positivos y negativos Tampoco se encontraron diferencias estadiacutesticamente
significativas en la proporcioacuten de casos con valores de GOT y GPT elevados
En el grupo de casos positivos al test de ELISA el porcentual con valores elevados de
FAL es superior pero esta diferencia no es estadiacutesticamente significativa
Tabla 4 Resultados comparativos entre los valores de proteiacutenas totales y anaacutelisis de
ELISA positivos Valle de Fiambalaacute 2009-2011
Serologiacutea
Proteiacutenas
Normales
Nuacutemero de casos Negativo
77 Positivo
28 Total 105
Totales Resultado 566 326a 473
Elevados
Nuacutemero de casos
59
58
117
Resultado 434 674b 527
Total
Nuacutemero de casos
136
86
222
Resultado 1000 1000 1000
a y b presentan diferencias estadiacutesticamente significativas
(χ2 = 1223 Gl = 1 p= 0000)
72 - Geacutenero
Con respecto al geacutenero tanto dentro del grupo de casos seroloacutegicamente positivos como
dentro del grupo de negativos los mayores porcentuales corresponden a mujeres en
general (Tabla 5) El test Chi2 no arrojoacute asociacioacuten estadiacutesticamente significativa entre
geacutenero en relacioacuten a la enfermedad
Se realizoacute un Chi2 para la franja etaria y casos seropositivos y seronegativos que muestra
diferencias significativas Al ser un test no parameacutetrico no se pudo determinar entre que
grupos etarios estaacuten
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Tabla 5 Frecuencia absoluta de casos positivos y negativos al ensayo de ELISA
recombinante para Fasciola hepatica en pacientes agrupados por geacutenero en los
diferentes grupos etarios Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Grupo
Etario Ambos sexos
Hombres Mujeres
+ - + - + -
0-4
2
15
2
6
-
9
5-9 12 39 4 11 8 28
10-14 7 55 4 27 3 28
15-19 10 32 3 14 7 18
20-24 10 12 5 3 5 9
25-29 7 6 - 2 7 4
30-34 7 8 3 5 4 3
35-39 7 9 2 5 5 4
40-44 7 6 2 5 5 1
45-49 7 3 2 - 5 3
50-54 4 3 2 1 2 2
55-59 7 2 3 - 4 2
60-64 5 - 1 - 4 -
65-69 6 4 2 2 4 2
70-74 - 1 - - - 1
75-79 3 2 3 1 - 1
80 y + 4 3 2 - 2 3
TOTAL
105
200
40
82
65
118
(χ2 = 0316 Gl = 1 p˃= 005)
73 - Grupo etarios Considerando en conjunto ambos sexos el grupo etario de 5-9 antildeos fue el que presentoacute
el mayor valor de infeccioacuten (114) como se observa en la Tabla 6 Tambieacuten muestra que
el 305 de los casos positivos tienen 19 antildeos o menos
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Tabla 6 Frecuencia y porcentaje acumulado por grupo etario con el ensayo de ELISA
para Fasciola hepatica Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Grupo Etario Frecuencia Frecuencia Porcentaje
absoluta Relativa () Acumulado
0-4 2 19 19 5-9 12 114 133
10-14 7 67 200 15-19 11 105 305 20-24 10 95 400 25-29 7 67 467 30-34 7 67 533 35-39 7 67 600 40-44 7 67 667 45-49 7 67 733 50-54 4 38 771 55-59 7 67 835 60-64 5 48 886 65-69 5 48 933 75-79 3 29 962
80 o maacutes 4 38 1000
Total 105 1000
En siacutentesis considerando como variables independientes o explicativas en el modelo
edad sexo resultado de los exaacutemenes cliacutenicos y siacutentomas resultaron significativas
edad nivel de proteiacutenas totales y recuento de eosinofilos
Las diferencias en la proporcioacuten de casos con valores de enzimas elevados entre
positivos y negativos no resultaron estadiacutesticamente significativas GOT (χ2 = 0259 Gl =
1 p˃ 005) GPT (χ2 = 0181 Gl = 1 p˃ 005) y FAL (χ2 = 0577 Gl = 1 p˃ 005)
La proporcioacuten de casos con bilirrubina elevada presentaron ausencia de significacioacuten (χ2
= 0681 Gl = 1 p˃ 005) al igual que el colesterol elevado entre positivos y negativos (χ2
= 0100 Gl = 1 p˃ 005)
Se presenta la clasificacioacuten de los casos seguacuten su ocurrencia y seguacuten la prediccioacuten
realizada en funcioacuten del modelo nulo Se indica queacute porcentaje de veces el modelo
predice correctamente el grupo (positivonegativo) en el cual se encuentra la persona Se
muestra que el 694 de las veces la prediccioacuten del modelo es correcta es decir dada
una persona el modelo predice adecuadamente en queacute grupo va a estar
(Tabla 7)
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Tabla 7 Clasificacioacutena de los casos observados en el Valle de Fiambalaacute 2009-2011
Pronosticado Resultado
Porcentaje
Negativo Positivo correcto Paso Resultado Negativo 96 40 706
Positivo 28 58 674 Porcentaje
global 694
a El valor de corte para determinar el grupo es 0350
Se presentan los estimadores de los paraacutemetros (coeficientes B) sus errores estaacutendar el
estadiacutestico W de Wald (Chi2) sus grados de libertad y su probabilidad asociada las
estimaciones de las odds ratio (Exp B) para las variables predictoras y la constante para
cada modelo (Tabla 8)
Tabla 8 Variables de la ecuacioacuten Valle de Fiambalaacute 2009-2011
B
ET
Wald
gl
Sig
Exp(B)
Paso 1 Edad de extraccioacuten
0035
0008
19324
1
0000
1035
Proteiacutenas
0736
0312
5560
1
0018
2088
Eosinofilos
0945
0379
6224
1
0013
2572
Constante -1945 0305 40570 1 0000 0143
a Variable (s) introducida (s) en el paso 1 Edad Proteiacutenas totales Eosinoacutefilos
74 - Anaacutelisis estadiacutesticos
El odds asociado a la presencia de la enfermedad es el cociente entre la probabilidad de
que ocurra frente a la probabilidad de que no ocurra Odds = p (1-p) siendo p la
probabilidad del suceso
El odds de la edad asociado a la presencia de fasciolosis fue 1035
El odds de la presencia de valores elevados de proteiacutenas es 2088 e indica que las
chances de que un paciente presente la enfermedad se incrementan maacutes de dos veces si
los valores del examen son altos
El odds de la presencia de valores elevados de eosinofilos es de 2752 indicando que las
chances de que el paciente tenga presente la enfermedad aumentan casi tres veces si
existen valores del examen altos
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75 - Anaacutelisis coproparasitoloacutegicos
Con respecto a la materia fecal se identificoacute la presencia de huevos de F hepatica en las
heces de 4 personas siendo negativas las 92 muestras restantes obtenidas La teacutecnica
de sedimentacioacuten raacutepida de Lumbreras (TSR) fue la uacutenica que permitioacute los diagnoacutesticos
positivos
Las otras teacutecnicas coproparasitoloacutegicas utilizadas demostraron la existencia de huevos y
quistes de otros paraacutesitos presentes tanto en nintildeos como en adultos el maacutes frecuente fue
Blastocystis hominis (2934) y en menor proporcioacuten se observoacute la presencia de
Entamoeba coli (869) Giardia lamblia (760) Hymenolepis nana (760)
Microsporidios (543) Entamoeba nana (543) Iodamoeba buumltschlii (326)
Chilomastix mesnili (324) Enterobius vermicularis (217) Isospora belli (108)
Endolimax nana (108) y aacutecaros Se presentaron 8 casos de triparasitismo
76 - Siacutentomas y signos
Se presentan los siacutentomas principales observados tanto en los adultos (n=141) como en
los casos pediaacutetricos (n=33) Se evidencia que los siacutentomas maacutes frecuentes fueron dolor
abdominal (2553) naacuteuseas y voacutemitos (2411) diarrea (1702) fiebre (992)
hepatomegalia (851) ictericia (425) dispepsia (141) En pacientes pediaacutetricos los
maacutes frecuentes fueron voacutemitos (303) dolor abdominal (2424) y diarrea (2121)
El dolor abdominal (n=44) fue el siacutentoma maacutes frecuente en todos los grupos mostrados
anteriormente presentaacutendose sus caracteriacutesticas principales como localizacioacuten maacutes
frecuente en epigastrio (5454) y en hipocondrio derecho (4545) tipo de dolor (el
coacutelico representa el de mayor frecuencia en epigastrio (3636) e hipocondrio derecho
(2838) y otras como la relacioacuten con la ingesta de alimentos (2727) y el nuacutemero de
casos con diferente irradiacioacuten (maacutes frecuente a espalda en el 1590)
77 - Imaacutegenes
Las ecografiacuteas realizadas en terreno permitieron un diagnostico positivo ademaacutes se
observaron 10 hiacutegados y 32 vesiacuteculas normales 3 litiasis 18 pacientes con
hepatomegalia 1 absceso hepaacutetico una paciente embarazada y otra con litiasis renal
78 - Teacutecnicas invasivas
A raiacutez de los estudios realizados durante esta investigacioacuten fueron hallados al momento
de llevar a cabo intervenciones quiruacutergicas ejemplares vivos de F hepatica en dos
pacientes de sexo femenino La primera presentaba el coleacutedoco muy dilatado y de
paredes sumamente engrosadas sin evidencia de litiasis El segundo caso se refiere a la
coexistencia de litiasis y fasciolosis en el coleacutedoco del que se extrajeron estructuras
adultas del paraacutesito mediante una colecistectomiacutea que permitioacute la confirmacioacuten del
ensayo de ELISA realizado A una tercera paciente del valle de Fiambalaacute le fue extraiacutedo
un ejemplar por CPRE con cesta de Dormia
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79 - Descripcioacuten de casos con fasciolosis
Se seleccionoacute un grupo de ocho pacientes que reuniacutean los siguientes criterios de
inclusioacuten
a) Pacientes con coproparasitoloacutegico positivo a F hepatica
b) Pacientes con serologiacutea positiva para F hepatica
c) Pacientes con diagnoacutestico por imaacutegenes positivo
d) Pacientes que en la colecistectomiacutea presentaron ejemplares de F hepatica
Caso 1
Paciente de 64 antildeos sexo femenino soltera de ocupacioacuten ama de casa natural y
procedente de la zona que se presenta con ictericia fugaz dolor abdominal en
hipocondrio derecho de varias semanas de evolucioacuten diarrea y voacutemitos En el
interrogatorio refiere haber comido berro muchos antildeos atraacutes Los exaacutemenes de
laboratorio demostraron gloacutebulos rojos 4380000mm3 hemoglobina 1220 g
hematocrito 355 gloacutebulos blancos 6300mm3 con neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 62 eosinofilos 567mm3 (9) basoacutefilos 0 linfocitos 24
monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 plaquetas 456000mm3 GOT 35 UIL
(VN 12 a 40) GTP 20 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 572 UIL (VN hasta 280 UIL)
bilirrubina total 120 mg bilirrubina directa 039 mg bilirrubina Indirecta 081mg
proteiacutenas 72 gl colesterol 196 mg albuacutemina 41 gl No se realizoacute examen
coproparasitoloacutegico por falta de colaboracioacuten de la paciente El diagnoacutestico se efectuoacute por
medio del test de ELISA para anticuerpos contra F hepatica en el Departamento de
Parasitologiacutea INEI ANLIS Carlos G Malbraacuten en Buenos Aires La serologiacutea de ELISA
presentaba valores de absorbancia ˃0410 nM (valor de corte) (1) 0661 nM (2) 0457
nM (3) 0559 nM (4) 0529 nM absorbancia promedio 0529 nM con resultado positivo
en 2009 y valores de absorbancia (1) 0436 nM (2) 0495 nM absorbancia promedio
0466 nM con resultado positivo en 2010 Se solicitoacute ecografiacutea abdominal que mostroacute
estructura hepaacutetica conservada viacuteas biliares intrahepaacuteticas no dilatadas se informoacute leve
dilatacioacuten del coleacutedoco sin demostrar alteraciones el resto del estudio paacutencreas y bazo
normales Ante la persistencia de la sintomatologiacutea se indicoacute internacioacuten con diagnoacutestico
presuntivo de litiasis vesicular por el estudio que evidenciaba dilatacioacuten de viacuteas biliares
sin evidencia de caacutelculos La paciente fue intervenida quiruacutergicamente encontraacutendose en
viacuteas biliares especiacutemenes adultos de F hepatica (sin litiasis) Tiempo de internacioacuten 14
diacuteas No se efectuoacute tratamiento por no conseguir TCBZ
Caso 2
Mujer 16 antildeos estudios primarios completos sin ocupacioacuten con sintomatologiacutea desde
maacutes de un antildeo caracterizada por dolor abdominal tipo coacutelico naacuteuseas voacutemitos siacutendrome
febril y peacuterdida de peso Los exaacutemenes de laboratorio demostraron formula leucocitaria
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9100mm3 neutroacutefilos en cayado 2 neutroacutefilos segmentados 60 eosinofilos 364mm3
(4) basoacutefilos 0 linfocitos 30 monocitos 4 GOT 18 UIL GTP 21 UIL fosfatasa
alcalina 267 UIL bilirrubina total 096 mgdL bilirrubina directa 023 mgdL bilirrubina
indirecta 073 mgdL proteiacutenas 76 mgdL colesterol 267 mgdL albuacutemina 51mgdL Las
teacutecnicas coproloacutegicas demostraron la presencia de Blastocystis hominis larvas sin
identificar y estructuras compatibles con esporos y la prueba de TSR demostroacute la
presencia de huevos de F hepatica El estudio ecograacutefico fue normal La serologiacutea de
ELISA presentaba siguientes valores de absorbancia 0448 nM (1) 0391 nM (2) 0492
nM (3) 0413 nM (4) 0418 nM (5) 0573 nM (6) 0456 nM (7) absorbancia promedio
0529 nM con resultado positivo en 2009 y valores de absorbancia 0492nM (1) 0466nM
(2) absorbancia promedio 0484nM con resultado positivo en 2010 No se efectuoacute
tratamiento por no conseguir TCBZ
Caso 3
Nintildea de nueve antildeos de edad siacutendrome doloroso abdominal asociado a emesis Foacutermula
leucocitaria 7100mm3 neutroacutefilos en cayado 1 neutroacutefilos segmentados 64
eosinofilos 284mm3 (4) basoacutefilos 0 linfocitos 26 monocitos 4 ceacutelulas de
irritacioacuten linfaacutetica 1 GOT 39 UIL GTP 47 UIL fosfatasa alcalina 330 UIL bilirrubina
total 125 mgdL bilirrubina directa 015 mgdL bilirrubina indirecta 110 mgdL proteiacutenas
totales 72 mgdL colesterol 181 mgdL albuacutemina 47 mgdL Con Telemann se
evidencian huevos de Blastocystis hominis y con la prueba de TSR escasos huevos de
F hepatica El ensayo de Elisa resultoacute en 2010 0596 nM (1) 0441 nM (2) 0359 nM (3)
0402 nM (4) 0420 nM (5) con valores promedios positivos de 0444 nM No se efectuoacute
tratamiento por no conseguirse TCBZ
Figura 8 Imagen microscoacutepica de un huevo de Fasciola hepatica obtenido con la teacutecnica
de Lumbreras en la materia fecal de una paciente de 3 antildeos del valle de Fiambalaacute
Catamarca
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Caso 4
Paciente mujer de 22 antildeos de edad natural y procedente del aacuterea serrana quien acude a
emergencia del Hospital San Juan Bautista San Fernando del Valle de Catamarca
Catamarca con un tiempo de enfermedad de 25 diacuteas caracterizado por cefalea dolor
abdominal agudo voacutemitos y urticaria Refiere que antes de su ingreso inicia un cuadro de
dolor abdominal tipo coacutelico de intensidad moderada desencadenado por la ingesta de
grasas el cual se acompantildea de hiporexia y voacutemitos de contenido alimentario en varias
oportunidades y bilioso en dos oportunidades Acude a la primer consulta en una cliacutenica
privada de la capital provincial presentando coacutelicos biliares recurrentes y fiebre
intermitente Durante el examen fiacutesico se detectoacute hepatomegalia Su vesiacutecula biliar
estaba ausente por colecistectomiacutea practicada a los 15 antildeos aunque presentaba
episodios de coacutelicos biliares por litiasis residual En los frotis y hepatogramas se
observaron 24000 leucocitosmm3 con neutroacutefilos segmentados 71 eosinofilos
2640mm3 (11) linfocitos 13 monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 1 GTP 100
UIL (IR hasta 40 UIL) TGO 64 UIL (IR hasta 42 UIL) fosfatasa alcalina 265 UIL (IR
100-400 UIL) bilirrubina total 092 mgdL bilirrubina directa 017 mgdL bilirrubina
indirecta 075 mgdL proteiacutenas 7 mgdL colesterol 166 mgdL albuacutemina 44 mgdL Las
muestras de materia fecal para realizar los exaacutemenes parasitoloacutegicos resultaron
Telemann positivo a E nana Willis Kato y la prueba de TSR negativas para F hepatica
todas realizadas en 3 oportunidades El ensayo de ELISA para anticuerpos efectuado en
el Departamento de Parasitologiacutea INEI ANLIS Carlos G Malbraacuten en Buenos Aires dio
resultado negativo en dos oportunidades
Por persistencia de la sintomatologiacutea se presentoacute en el Hospital San Juan Bautista Al
examen fiacutesico se encontroacute una paciente en mal estado general en regular estado de
nutricioacuten deshidratada con ictericia moderada de piel El examen del abdomen mostroacute
distensioacuten leve y palpacioacuten hepaacutetica dolorosa e irradiacioacuten a la zona lumbar Resto del
examen fiacutesico sin alteraciones
Los exaacutemenes hematoloacutegicos del ingreso mostraron hemoglobina 10 mgdL hematocrito
31 leucocitos 11000mm3 con desviacioacuten izquierda (11 de abastonados) y eosinofilos
770mm3 (7) Presentoacute elevacioacuten de bilirrubina total en 427 mgdL a predominio directo
(278) fosfatasa alcalina 595 UIL (VN 65-306) y elevacioacuten moderada de enzimas
hepaacuteticas TGO 267 UIL y TGP 482 UIL El tiempo de protrombina estuvo prolongado al
doble del control 266rdquo136rdquo (valor referidovalor control) (INR=226) al igual que el tiempo
de tromboplastina 336rdquo276rdquo Los resultados de glucosa creatinina electrolitos seacutericos
proteiacutenas totales albuacutemina globulinas y amilasa fueron normales
Se realizoacute colangiopancreatografiacutea retroacutegrada endoscoacutepica (CPRE) observando viacuteas
biliares extrahepaacuteticas dilatadas con imaacutegenes filiformes en coleacutedoco distal Se procedioacute
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a efectuar una papilotomiacutea retroacutegrada endoscoacutepica con barrido instrumental en canastilla
de Dormia extrayendo 3 paraacutesitos adultos vivos de F hepatica No se efectuoacute
tratamiento por no conseguir TCBZ
Figura 9 Ejemplar de F hepatica extraiacutedo del coleacutedoco utilizando CRTE en una
paciente de 22 antildeos en el Hospital San Juan Bautista Catamarca 2012
Caso 5
Paciente pediaacutetrico de ocho antildeos de edad sexo masculino Alumno de escuela primaria
Sin presencia de siacutentomas Foacutermula leucocitaria 4900 mm3 neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 64 eosinofilos 196mm3 (4) basoacutefilos 0 linfocitos 26
monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 1 GTP 47 UIL (IR hasta 40 UIL) TGO 39
UIL (IR hasta 42 UIL) fosfatasa alcalina 330 UIL (IR 100-400 UIL) bilirrubina total 125
mgdL bilirrubina directa 015 mgdL bilirrubina indirecta 110 mgdL proteiacutenas 72
mgdL colesterol 181 mgdL albuacutemina 47 mgdL La serologiacutea de ELISA presentaba
valores de absorbancia ˃410 nM (1) 0495 nM (2) 0447 nM (3) 0551 nM (4) 0627 nM
(5) 0383 nM (6) 0421 nM Absorbancia promedio 0487 nM con resultado positivo en
2010 La materia fecal examinada con la prueba de TSR confirmoacute la presencia de 14
huevos de F hepatica Sin tratamiento
Caso 6
Paciente mujer de 58 antildeos de edad casada de procedencia rural de profesioacuten
enfermera Dispepsia desde la nintildeez Consumiacutea berro cosechado a orillas del rio del lugar
y tambieacuten bebiacutea del agua del rio Prurito aleacutergico a repeticioacuten (tratado por dermatoacutelogo
quien antildeos atraacutes habiacutea diagnosticado Parasitosis Intestinal)
Por sus molestias de dolor abdominal en hipocondrio derecho tipo coacutelico acompantildeado de
naacuteuseas se automedicaba con antiespasmoacutedicos Meses antes de su consulta se
despertoacute de madrugada presentando voacutemitos de contenido alimentario y bilioso
concomitantemente tuvo escalofriacuteos y fiebre que cedieron momentaacuteneamente con
paracetamol Horas maacutes tarde persisten los siacutentomas y se adicionan ictericia hiporexia
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coluria prurito y paacutepulas que se presentaron primero en el cuero cabelludo y luego se
generalizaron a tronco y extremidades Fue atendida por 3 facultativos los cuales
indicaron varios exaacutemenes auxiliares una ecografiacutea que reportoacute la presencia de una
colecistopatiacutea no calculosa y un examen de orina que mostroacute leucocituria y geacutermenes
gramnegativos abundantes por lo que le prescribieron norfloxacina ademaacutes de ranitidina
y clorfeniramina Con este tratamiento se evidencioacute disminucioacuten de la intensidad del
prurito y desaparicioacuten de las paacutepulas la fiebre cedioacute aproximadamente a los 7 diacuteas la
condralgia disminuyoacute de intensidad pero persistiacutea al igual que el resto de los siacutentomas
por cuya razoacuten y relaciones familiares acudioacute a la emergencia del Hospital Regional de La
Rioja ldquoEnrique Vera Barrosrdquo presentaacutendose a consulta en octubre de 2012 con
sintomatologiacutea digestiva similar a la que padeciacutea previamente (epigastralgiacutea distensioacuten
abdominal posprandial coluria marcada y acolia)
Los hallazgos maacutes importantes del examen fiacutesico fueron fiebre precedida de escalofriacuteos
ictericia dolor a la palpacioacuten del hipocondrio derecho y puntildeopercusioacuten lumbar positiva
bilateral
Se realizaron exaacutemenes de laboratorio cuyos resultados fueron hemograma 11800mm3
gloacutebulos blancos 6300mm3 neutroacutefilos en cayado 2 neutroacutefilos segmentados 55
eosinofilos 708mm3 (6) basoacutefilos 0 linfocitos 34 monocitos 3 ceacutelulas de
irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT 17 UIL (VN 12 a 40) GTP 24 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa
alcalina 386 UIL (VN hasta 280 UIL) bilirrubina total 125 mgdL bilirrubina directa 099
mgdL bilirrubina indirecta 026 mgdL proteiacutenas totales 61 mgdL colesterol 226 mgdL
albuacutemina 33 mgdL
Una ecografiacutea de las viacuteas biliares sugirioacute la existencia de un caacutelculo enclavado en el
tercio distal del coleacutedoco Se plantearon las siguientes posibilidades diagnoacutesticas
infeccioacuten del tracto urinario y litiasis coledociana complicada con colangitis Recibioacute
gentamicina 80 mg Ev tid clindamicina 600 mg EV tid
La serologiacutea de ELISA presentoacute valores de absorbancia (1) 0596 nM (2) 0586 nM (3)
0404 nM (4) 0425 nM absorbancia promedio 0503 nM con resultado positivo en 2010 y
valores de absorbancia (1) 0338 nM (2) 0541 nM (3) 0440 nM absorbancia promedio
0441 nM en 2011 El estudio parasitoloacutegico seriado con la prueba de TSR no reportoacute la
presencia de huevos de F hepatica
Despueacutes de hospitalizada fue intervenida quiruacutergicamente con el diagnoacutestico
preoperatorio de coledocolitiasis Se realizoacute una colecistectomiacutea mixta exploracioacuten de
viacuteas biliares con litiasis residual y se dejoacute drenaje de Kehr Los hallazgos histopatoloacutegicos
macroscoacutepicos de la vesiacutecula biliar mostraron una pared edematosa congestiva
conservando espesor y elasticidad mucosa presentando aspecto atroacutefico con superficie
reticulada color verde paacutelida revestida por exudado fibrinoide espeso Se constata la
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presencia de una estructura lanceolada plana elaacutestica de superficie lisa que mide 13 x
1 cm con pequentildea ventosa en uno de sus polos Microscoacutepicamente se observa la pared
de vesiacutecula biliar con grados variables de reaccioacuten inflamatoria croacutenica representados por
focos de supuracioacuten y acuacutemulos de plasmocitos linfocitos y eosinofilos en la mucosa
discreta proliferacioacuten fibrinosa acompantildeada por infiltracioacuten de ceacutelulas polimorfonucleares
Diagnoacutestico histopatoloacutegico Fascioliasis hepaacutetica Colecistitis croacutenica supurada
(habilitada por paraacutesitos en su luz) Durante los 45 diacuteas posteriores al alta fue medicada
con Praziquantel
Caso 7
Mujer de 54 antildeos de edad que a la consulta refiere haber tenido episodios febriles de
375 a 38 degC anorexia y dolor en hipocondrio derecho de pocos diacuteas de evolucioacuten
Voacutemitos y hepatalgia Los exaacutemenes de laboratorio maacutes significativos mostraron gloacutebulos
rojos 4410000mm3 hemoglobina 1230 g hematocrito 43 Foacutermula leucocitaria
6700 mm3 neutroacutefilos en cayado 1 neutroacutefilos segmentados 52 eosinofilos 469mm3
(7) basoacutefilos 0 linfocitos 37 monocitos 3 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT
20 UIL (VN 12 a 40) GTP 17 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 252 UIL (VN hasta 280
UL) bilirrubina total 141mgdL bilirrubina directa 025mgdL bilirrubina indirecta 116
mgdL proteiacutenas 81 mgdL colesterol 262 mgdL albuacutemina 47 mgdL
Reiterados exaacutemenes parasitoloacutegicos de materia fecal en fresco y seriados fueron
negativos La serologiacutea para F hepatica con el ensayo de ELISA resultoacute positiva en el
antildeo 2010 con los siguientes valores 0539 nM (1) 0377 nM (2) 0427 nM (3) 0334 nM
(4) 0432 nM (5) 0594 nM (6) y un resultado promedio 0451 nM
Fue seleccionada para practicarle una ecografiacutea abdominal que mostroacute una estructura
hepaacutetica conservada viacuteas biliares intrahepaacuteticas no dilatadas vesiacutecula ausente por
colecistectomiacutea y leve dilatacioacuten del coleacutedoco sin demostrar alteraciones el resto del
estudio paacutencreas y bazo normales Se observoacute pequentildea imagen de aspecto filiforme de
aproximadamente 1 cm de largo y se diagnosticoacute estructura compatible con F hepatica
Figura 10 Imagen ecograacutefica hepaacutetica con hepatomegalia Se observa aumento de la
ecogenicidad y una estructura de aspecto filiforme
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Caso 8
Sexo femenino 32 antildeos de edad ama de casa En el interrogatorio comenta haber
comido berro de los riachos en la zona casi todos los antildeos Al ser un caso con tres
estudios seroloacutegicos previos positivos y materia fecal negativa a la presencia de huevos
de F hepatica se le practica una ecografiacutea abdominal con resultado negativo
El coproloacutegico con la teacutecnica de Telemann demostroacute la presencia de Blastocystis hominis
y luego de varias repeticiones la teacutecnica de Lumbreras permitioacute el hallazgo de huevos de
F hepatica en el antildeo 2011 Los frotis y hemogramas presentaron los siguientes
resultados hematocrito 44 foacutermula leucocitaria 7700mm3 neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 47 eosinofilos 385mm3 (5) basoacutefilos 0 linfocitos 40
monocitos 7 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT 23 UIL (VN 12 a 40) GTP 11 UIL
(VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 290 UIL (VN hasta 280 UIL) bilirrubina total 106 mgdL
bilirrubina directa 038 mgdL bilirrubina indirecta 01 mgdL proteiacutenas totales 71 mgdL
colesterol 163 mgdL albuacutemina 42 mgdL
El empleo de procatepsina L1 durante tres antildeos consecutivos arrojoacute para la serologiacutea de
ELISA los siguientes resultados valores de absorbancia (1) 0476 nM (2) 0366 nM (3)
0551 nM (4) 0431 nM absorbancia promedio 0456 nM con resultado positivo en 2009
Valores de absorbancia (1) 0517 nM (2) 0580 nM (3) 0405 nM (4) 0457 nM (5) 0462
nM absorbancia promedio 0484 nM con resultado positivo en 2010 y (1) 0623 nM (2)
0570 nM absorbancia promedio 0597 nM con resultado positivo en 2011
8 RESULTADOS EN ANIMALES
81 - Estudios coproloacutegicos
811 - Prevalencia por exaacutemenes coproloacutegicos
La cantidad de muestras de materia fecal de distintas especies animales analizadas
permitioacute conocer que la prevalencia promedio de fasciolosis animal es 2674
(2881077) (Tabla 9)
Tabla 9 Prevalencia de F hepatica en diferentes especies de animales domeacutesticos Valle
de Fiambalaacute Catamarca Antildeos 2009-2011
Especie Positivos Total de animales Prevalencia Ovinos 114 322 3958 Asnos 56 192 1954 Llamas 53 210 1840 Caprinos 38 197 1319 Bovinos 18 72 625 Equinos 6 46 208 Porcinos 3 38 104
TOTAL 288 1077 10000 (χ2 = 21643 gl = 6 significancialt= 0000)
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Las diferencias estadiacutesticamente significativas se presentan entre ovinos-llamas
(p=0016741) ovinos-caprinos (p=0000099) ovinos-equinos (p=0002185) ovinos-
porcinos (p=0000782) asnos-equinos (p=0038298) y asnos-caprinos (p=0024745)
812 - Hallazgos de huevos de otros paraacutesitos gastrointestinales
Los resultados obtenidos indican ademaacutes la presencia en el ganado ovino del valle de
Fiambalaacute de coccidios y nematodes gastrointestinales Eimeria sp Haemonchus
contortus Trichostrongylus sp Nematodirus sp y Trichuris ovis
82 - Recuperacioacuten de ejemplares de F hepatica
De los hiacutegados de animales inspeccionados durante el proceso de faena (n=11) se
recuperaron en total 398 trematodos adultos Todos los paraacutesitos colectados se
encontraban sobre los 100 diacuteas post-infeccioacuten El nuacutemero de paraacutesitos recobrados en las
diferentes especies fueron 206 en ovinos 128 en cameacutelidos y 64 en bovinos
Al revisar los hiacutegados que presentaban fasciolosis croacutenica se observoacute una reaccioacuten
orgaacutenica con lesiones visibles de fibrosis hepaacutetica como consecuencia de la fase
migratoria y colangitis hiperplaacutesica por la presencia de los vermes adultos en los
conductos biliares (Veacutease anexo Figura 23 pp188) Tambieacuten se encontraron
agrandados los noacutedulos linfaacuteticos engrosamiento de los conductos y la superficie
presentaba consistencia dura al tacto en gran parte del oacutergano y sus bordes En el hiacutegado
del ejemplar bovino se observoacute una reaccioacuten orgaacutenica que produjo una intensa reaccioacuten
tisular mucho maacutes manifiesta que en los ovinos llamas y caprinos
La erosioacuten de la mucosa ocasionada por la actividad de los ejemplares adultos de F
hepatica en los conductos biliares provocoacute una reaccioacuten inflamatoria organizada en una
fibrosis peribiliar (Veacutease anexo Figura 24 pp188) El movimiento de los vermes extendioacute
la fibrosis a casi todo el aacuterbol biliar La colangitis hiperplaacutesica se presentoacute como resultado
del traumatismo originado por los trematodos adultos en la mucosa de los conductos
biliares Ante la extensa erosioacuten y necrosis de la mucosa biliar se desarrolloacute una intensa
reaccioacuten inflamatoria que interesoacute a la laacutemina propia adyacente La compresioacuten
extriacutenseca del canal biliar principal por las venas colaterales dilatadas junto con la
fibrosis pericoledocal causada por el proceso inflamatorio provocoacute trombosis portal
conduciendo a la dilatacioacuten de los conductos biliares intrahepaacuteticos hecho que permitioacute
observar en 3 ocasiones la formacioacuten de piedras biliares secundarias y en 2 la presencia
de liacutequido en el peritoneo de las ovejas
83 - Morfologiacutea microscoacutepica de F hepatica
Las mediciones realizadas dieron los siguiente datos promedios longitud del cuerpo
2438 plusmn 223 (mm) ancho del cuerpo 1044 plusmn 129 (mm) razoacuten LCAC 237 plusmn 034
longitud del cono 261 plusmn 030 ancho del cono 343 plusmn 046 (mm) aacuterea de la ventosa oral
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041 plusmn 007 (mm) aacuterea de la ventosa ventral 110 plusmn 036 (mm) aacuterea de distancia VO-VV
214 plusmn 022 (mm) Todas presentaban un cuerpo con forma de hoja aplanado de dorsal a
ventral con el cono cefaacutelico (Figura 11) muy visible situado en la parte anterior del cuerpo
del paraacutesito Datos comparativos se presentan en la Tabla 12 (Veacutease anexo pp 173)
A B
Figura 11 A y B Imaacutegenes microscoacutepicas de la estructura morfoloacutegica del cono cefaacutelico
de Fasciola hepatica obtenidas de un animal bovino faenado en el Valle de Fiambalaacute
Nota A Cono cefaacutelico VO ventosa oral I ciego intestinal F faringe VV cara ventral Detalle del
cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) aumento 4x B ventosa oral (297x)
Ademaacutes de estas caracteriacutesticas la ventosa oral redondeada se observoacute en el veacutertice del
cono seguido por la faringe muscular el estoacutemago y el esoacutefago bifurcado en dos ciegos
intestinales entre los que surgen las ramas secundarias el ciego intestinal se presenta
extendido hasta el extremo anterior del cuerpo (Figura 12 A) La ventosa ventral se
encuentra en la regioacuten media del cuerpo cerca de los aparatos reproductores y su
tamantildeo era maacutes grande que la ventosa oral En la Figura 12 B se observan niacutetidamente
las espinas ubicadas en el cono cefaacutelico
A B
Figura 12 A y 12 B Estructuras morfoloacutegicas de Fasciola hepatica halladas en un animal
bovino del Valle de Fiambalaacute Argentina observadas al microscopio
Nota (A) Cono cefaacutelico VO ventosa oral F faringe C cirro VV cara ventral I ciego intestinal
se extiende en la parte anterior y terminal del cuerpo Aumento 4x (B) Detalle del cono cefaacutelico
mostrando las espinas magnitud 120x
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En las muestras analizadas el sistema reproductor femenino estaba formado por un
ovario ramificado oviducto y el uacutetero lleno de huevos (Figuras 13 A B C) Las glaacutendulas
vitelinas muy ramificadas se ubicaban en posicioacuten lateral del cuerpo y extendidas desde
la regioacuten de la ventosa ventral al extremo posterior del cuerpo La glaacutendula de Mehlis que
se encuentra cerca del ovario en la parte media del cuerpo fue faacutecilmente observable El
sistema reproductor masculino presenta los testiacuteculos ramificados situados uno debajo
del otro sin llegar a la regioacuten posterior o a los lados del cuerpo teniendo las glaacutendulas
vitelinas como liacutemites Se observoacute cerca de la ventosa ventral la bolsa del cirro bien
formada (Figura 14 B)
A B C
Figura 13 A B y C Uacutetero con huevos de un espeacutecimen de Fasciola hepatica obtenido de
la necropsia de un animal bovino en el Valle de Fiambalaacute Aumento 10x
Nota (A) Ovario ramificado y oviducto (B) uacutetero lleno de huevos (C) Uacutetero lleno de huevos
(flechas)
Todos los ejemplares presentaron el tegumento cubierto de espinas (Figuras 14 A)
dirigidas hacia la parte posterior del cuerpo y se pueden comparar con las de otras
regioacutenes observadas (Veacutease anexo Figuras 25 26 27 y 28 pp189-190)
A B
Figura 14 Detalle del tegumento de una Fasciola hepatica mostrando las espinas
Nota (A) Las flechas indican las espinas aumento 10x (B) bolsa de cirro aumento 20x
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831 - Microscopiacutea de contraste por interferencia diferencial
Esta teacutecnica permitioacute visualizar las espinas en el tegumento de los todos especiacutemenes
recolectados (Figuras 15 A B y C) Los ejemplares del Valle de Fiambalaacute presentaban el
cuerpo cubierto con espinas pero en menos nuacutemero que los otros ejemplares
observados
A B C
Figura 15 Microfotografiacuteas tomadas de estructuras morfoloacutegicas de una F hepatica de
ganado bovino del valle de Fiambalaacute observadas con microscopio de contraste por
interferencia diferencial
Nota A y B Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) aumentos 10x y 20x
C Espinas con mayor resolucioacuten Noacutetese el aspecto tridimensional
84 - Variabilidad geneacutetica intraespeciacutefica
El anaacutelisis de 16 secuencias del gen CO1 de 309 bases de longitud cada una totalizando
4944 bases mostroacute una topografiacutea de agrupamiento que indica que la secuencia
proveniente de la muestra de paraacutesito adulto de la zona denominada FhCO1-CAT-adult
corresponde al grupo FhAJ6280346 FhJF82467124 FhAJ628035 FhGQ231551
Fh628039 (Veacutease anexo Figura 29 pp 191) Este resultado se encuentra en
concordancia con el hecho de que la identidad de las secuencias proveniente del adulto
de F hepatica posee una identidad alta con dichos haplotipos (994 a 990 de identidad
nucleotiacutedica)
85 - Resistencia al triclabendazol
Se observa que las muestras expusieron patrones diferentes de amplificacioacuten al azar de
ADN polimoacuterfico por lo que fue posible evaluar la presencia de variaciones geneacuteticas
entre las cepas de una misma especie y distinguir entre cepas de trematodos TCBZ-
susceptibles calle 2 (cepa Cullompton) y TCBZ-resistentes calle 3 (cepa Sligo) (Figura
16) donde no se detectaron estos cambios geneacuteticos en la moleacutecula de tubulina
revelando una significativa divergencia geneacutetica entre especies demostrado por las
diferencias entre las bandas generadas por las especies de la poblacioacuten de Cajamarca
Peruacute Chubut Argentina y las procedentes de la Puerta de Tatoacuten en el valle de Fiambalaacute
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1 2 3 4 5 6 7 8
Figura 16 Patrones de amplificacioacuten por RAPD PCR de Fasciola hepatica aisladas de
hiacutegados obtenidos para la deteccioacuten de cepas resistentes a Triclabendazol (TCBZ)
comparados con las de otras zonas
Nota Obseacutervese que el patroacuten de bandeo en la calle 2 (cepa Cullompton sensible) y en la calle 3
(cepa Sligo resistente) son diferentes Desde la calle 4 en adelante son ejemplares procedentes
de Cajamarca Peruacute (4) Quebrada Grande (5) Casa Grande (7) y provincia de Chubut (8) La
mayoriacutea corre igual a las sensibles (2) pero la muestra de La Puerta (6) corre como la cepa
resistente (3)
9 RESULTADOS EN EL HOSPEDADOR INTERMEDIARIO DE F hepatica
91 Identificacioacuten de los caracoles
Las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla de los ejemplares recolectados en las
diferentes oportunidades coinciden con las descripciones de las familias Lymnaeidae
(n=2354 8686) Physidae (n=240 885) Chilinidae (n=81 298) y Planorbidae
(n=35 129) Los resultados moleculares revelaron la presencia de dos especies de
limneidos L neotropica y L viator De las muestras analizadas 26 (6842) fueron
identificadas molecularmente como L neotropica y 12 (3158) como L viator Se
comproboacute que ambas especies comparten las mismas vegas siendo el primer registro
para el NOA de L neotropica
92 Medicioacuten de moluscos
La coexistencia de las dos especies L neotropica y L viator en las vegas del valle de
Fiambalaacute proporcionoacute la posibilidad de un estudio de morfometriacutea comparativo para
evaluar si estas especies de vectores se pueden diferenciar anatoacutemicamente (Tabla 10)
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Tabla 10 Comparacioacuten de las mediciones de conchillas de limneidos entre las
poblaciones naturales de L viator y L neotropica colectadas en el valle de Fiambalaacute
2009-2011
Especie de limneido L viator L neotropica
Lugar y nuacutemero de especiacutemenes estudiados
Valle de Fiambalaacute (n = 12) Valle de Fiambalaacute (n = 26)
Valores extremos
miacutenimo y
Media (plusmn
desviacuteo estaacutendar SD)
Valores extremos
miacutenimo y
Media (plusmn
desviacuteo estaacutendar SD)
Caracteriacutestica de la conchilla maacuteximo maacuteximo
Largo (SL) 562-1085 921 (plusmn 152) 552-918 749 (plusmn 089) Ancho maacuteximo (SW) 311-579 488 (plusmn 084) 313-501 410 (plusmn 047) Largo de la apertura (AL) 297-605 473 (plusmn 083) 314-664 385 (plusmn 040) Ancho de la apertura (AW) 190-331 273(plusmn 042) 188-274 228 (plusmn 023) Longitud de la uacuteltima espira (LSL) 452-831 699 (plusmn 106) 442-893 576 (plusmn 060) Aacutengulo de la espira (SSA) 4130deg-5491deg 4704deg (plusmn 435) 3302deg-5468deg 4509deg (plusmn 592) SLSW ratio 167-202 189 (plusmn 010) 169-198 183 (plusmn 008) SLAL ratio 178-211 195 (plusmn 010) 175-210 194 (plusmn 010) SLLSL ratio 124-137 131 (plusmn 004) 123-138 130 (plusmn 004)
Nota Se incluye el rango con los extremos miacutenimo y maacuteximo y la media (plusmn desviacioacuten estaacutendar
entre pareacutentesis) Las mediciones se presentan en miliacutemetros (excepto el aacutengulo del espiral que es
en grados) n = Nuacutemero de especiacutemenes medidos
La conchilla de ambas especies es de color marroacuten a marroacuten claro coacutenica alargada de
paredes delgadas por lo general con 4 verticilos regulares convexos y hasta 55 verticilos
en los especiacutemenes maacutes largos La aguja es maacutes o menos acentuada o corta con un
aacutepice maacutes obtuso Las liacuteneas de crecimiento y el ombligo son poco pronunciadas La
escultura espiral es muy deacutebil y no se ve faacutecilmente La abertura es oval y casi toda
circular con peristoma delgado La forma de la conchilla de L viator y L neotropica es
muy similar tanto como el nuacutemero de espiras aunque los ejemplares de L viator a veces
pueden aparecer algo maacutes delgados (Figura 17)
La comparacioacuten de las mediciones de la conchilla y ratios (Tabla 10) muestra que la
relacioacuten del ancho y la maacutexima longitud de la conchilla se superpone en las dos especies
y por lo tanto la variabilidad de este paraacutemetro no se pudo utilizar para la diferenciacioacuten
de estas especies Un problema similar aparece en todos los demaacutes paraacutemetros de la
conchilla con excepcioacuten de la longitud media que no soacutelo alcanza un mayor largo
maacuteximo evidente sino tambieacuten una longitud maacutes grande de la conchilla en L viator en
comparacioacuten con L neotropica (1085 y 921 vs 918 y 749 mm)
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C D
Figura 17 Conchillas de L viator A) vista ventral B) vista dorsal escala 5 mm y
conchillas de L neotropica C) vista ventral D) vista dorsal escala 4 mm Especiacutemenes
colectados en vegas del valle de Fiambalaacute 2011
93 - Mantenimiento en el laboratorio
Se observoacute que los moluscos respondieron favorablemente a la alimentacioacuten con lechuga
y al cambio cada tres diacuteas del agua donde se encontraban lograacutendose el mantenimiento
de 180 caracoles del geacutenero Lymnaea criados en el laboratorio de los que se obtuvo el
desarrollo de 60 ejemplares que realizaron la puesta de masas de ovisaco dando lugar a
la eclosioacuten de 250 limneidos vivos
931 - Identificacioacuten de gasteroacutepodos infectados
Mediante el aplastamiento de los cuerpos de moluscos entre dos portaobjetos y la
posterior observacioacuten microscoacutepica de las formas intermedias de F hepatica se logroacute la
identificacioacuten de moluscos infectados 286 (13453) en su haacutebitat natural
9311 - Infeccioacuten del hospedador intermediario
La infeccioacuten plumiracidial de los caracoles en el laboratorio permitioacute observar la presencia
de los distintos estadios larvarios De los 70 limneidos infectados se sacrificaron 14
ejemplares obteniendo formas de esporocistos en 2 moluscos redias en otros 2 y
cercariacuteas en 2 ejemplares maacutes obteniendo una eclosioacuten de larvas del 4285 (614) Se
logroacute la visualizacioacuten de la emisioacuten de metacercarias de los moluscos mantenidos vivos
en las hojas de la vegetacioacuten con la que se alimentaban y en las paredes de los
recipientes donde se los dispuso
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932 - Identificacioacuten molecular de la infeccioacuten
9321 - PCR de Infeccioacuten
De las muestras obtenidas en la vega de Tatoacuten (n=120) y analizadas para verificar su
infeccioacuten con F hepatica en el Instituto Malbraacuten se diagnosticaron 3 moluscos
infectados (25) mostrando amplificacioacuten en el gel de electroforesis (Figura 18)
Figura 18 Liacutemite de deteccioacuten del ensayo de PCR por electroforesis en gel de agarosa
de los productos de amplificacioacuten utilizado como plantilla de ADN para la deteccioacuten de F
hepatica en muestras de limneidos del Valle de Fiambalaacute
Nota Calle M marcador de tamantildeo molecular (100 escalera pb) calles 1 25 ng de ADN de F
hepatica calle 2 mezcla de reaccioacuten calles 3-12 plantilla de ADN a partir de 10 especiacutemenes de
muestra de 1 evidenciando en la calle 3 amplificacioacuten calles 13-19 ejemplares de muestra 2 de la
mezcla de reaccioacuten
94 - Caracterizacioacuten molecular de limneidos
Los ADNr nucleares ITS-2 y ITS-1 el ADNmt 16S y los datos de la secuencia de
nucleoacutetidos cox1 reportados en esta tesis estaacuten disponibles en las bases de datos
GenBanktrade EMBL y DDBJ bajo los nuacutemeros de acceso indicados en la Tabla 13 (Veacutease
anexo pp 174)
941 - L neotropica
9411 - Marcadores moleculares
- ADNr ITS-2 Todas las muestras del valle de Fiambalaacute presentan la misma secuencia
con una longitud de 417 pb y 5683 de contenido de GC Cuando se compara con las
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ITS-2 de L neotropica haplotipo Lneo-H1 (AM412225) de la localidad tipo en el Peruacute no
se pudo encontrar diferencia en un nucleoacutetido El haplotipo Lneo-H2 de Venezuela
(JF514089) difiere de la secuencia de Argentina en la falta de una repeticioacuten de
microsateacutelites (AT) en las posiciones 402 a 403 y en una mutacioacuten en la posicioacuten 350 de
la secuencia de alineacioacuten de ambos haplotipos ITS-2 Otras cepas argentinas de L
neotropica disponibles en las bases de datos (KJ425597 = 415 pb KJ425598 = 415 pb
KJ425596 = 414 pb) soacutelo muestran algunas diferencias (deleciones) en el extremo 3 de
los ITS-2 aunque estas secuencias parecen incompletas en comparacioacuten con los
haplotipos completos descritos anteriormente para esta especie y por lo tanto deberaacute ser
revisada
- ADNr ITS-1 Un nuevo haplotipo para L neotropica se ha detectado en las vegas del
valle de Fiambalaacute Todas las muestras estudiadas presentaron los mismos ITS-1 con
secuencia de 535 pb y un contenido de GC 5645 Este nuevo haplotipo estaacute descrito
aquiacute como Lneo-HB Diferencias con el haplotipo Lneo-HA estaacuten a soacutelo dos inserciones
en la regioacuten poli-A en el extremo 3 (posiciones 512-529) siendo esta regioacuten de 16 o 18
consecutivo A en Lneo-HA y Lneo-HB respectivamente Los resultados BLASTN
muestran homologiacuteas del 98 con otras secuencias de L neotropica obtenidas en
Argentina (KJ425594 = 528 pb KJ425590 = 528 pb KJ425591 = 527 pb KJ425595 =
525 pb KJ425593 = 523 pb) y curiosamente con una de L viator (JF960165 = 533 pb)
las diferencias (indeles) aparecen de nuevo en el extremo 3 del espaciador ITS-1 Estas
otras secuencias parecen ser incompletas en comparacioacuten con los haplotipos completos
descritos anteriormente para esta especie y por lo tanto deberaacute ser revisada
9412 - Marcadores mitocondriales
- ADNmt 16S Soacutelo se detectoacute un haplotipo en las muestras estudiadas de las
poblaciones identificadas como L neotropica Esta secuencia parcial fue 435 pb de
longitud presenta un sesgo AT contenido de 6965 y resultoacute ser ideacutentica a la ya
encontrada en esta especie de limneido Lneo-16SA y que tambieacuten se informoacute en el
aacuterea endeacutemica de fasciolosis humana de Cajamarca Peruacute (HE610433) Con una
secuencia de 439 pb de largo de alineacioacuten de este haplotipo (Lneo-16SA) con otra L
neotropica aislada (de 429 a 431 pb) disponibles en GenBank aparecen 12 posiciones
variables la mayoriacutea de ellas se generan por el NtS1 aislado de Argentina (JN872471)
cuyas mutaciones (la mayoriacutea de ellos siempre A) deberaacute ser revisada (Veacutease anexo
Tabla 14 pp 175)
- ADNmt cox1 Todos los especiacutemenes colectados identificados como L neotropica
mostraron ideacutentica secuencia del fragmento de 672 pb cox1 y sesgada AT contenido de
6979 Esta secuencia se comparoacute con los 4 haplotipos cox1 descritos hasta hoy para
L neotropica y ha demostrado ser diferente en soacutelo una mutacioacuten en la posicioacuten 9 de la
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alineacioacuten con el haplotipo descrito previamente Lneo-cox1a de la localidad tipo de esta
especie (AM494008) Del mismo modo una mutacioacuten en la posicioacuten 375 es la uacutenica
diferencia con el haplotipo Lneo-cox1b informado de Mendoza Argentina Las
diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos con todos los haplotipos L neotropica (672 pb
de longitud) y otros aislamientos (655 pb de largo) que muestran secuencias muy
similares de acuerdo a los resultados de BLASTN se detallan en la Tabla 15 (Veacutease
anexo pp 176)
942 - L viator
9421 - Marcadores ribosomales
- ADNr ITS-2 Todos los ejemplares presentan los mismos ITS-2 de secuencia de 436 pb
y 5367 de contenido de GC Cuando se compara con los haplotipos ITS-2 de L viator
disponibles en GenBank la maacutes parecida a este haplotipo es Lvia-H2 (JN051366 de
Chile) siendo solamente maacutes corta en longitud debido a sitios polimoacuterficos
correspondientes a 8 indeles relacionados a un nuacutemero diferente de repeticiones en los
microsateacutelites GCTT y GCTC Estos microsateacutelites son (GCTT)2 (GCTC)1 en el valle de
Fiambalaacute mientras que (GCTT)4 y (GCTC)1 en Casa Blanca Chile El coacutedigo H3 se ha
atribuido a este nuevo haplotipo (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) Otras secuencias con
el haplotipo Lvia-H1 y otros aislamientos de L viator se muestran incompletos en el
extremo 3 del espaciador ITS-2 y se presentan en la Tabla 16 (Veacutease anexo pp 177)
- ADNr ITS-1 Todos los limneidos mostraron ideacutentica secuencia de ITS-1 de 570 pb y
5403 de contenido de GC Esta secuencia fue muy similar al haplotipo de L viator de
Chile (Lvia-HB JN051368) que difiere en soacutelo 5 sitios polimoacuterficos correspondiente a
una mutacioacuten y una repeticioacuten tetranucleotide (ATTG) El coacutedigo de HC se ha atribuido a
este nuevo haplotipo Diferencias detalladas con haplotipos de L viator HA de Argentina
y de Chile HB asiacute como con otros secuencias de L viator se muestran incompletas en el
extremo 5 del ITS-1 Se enumeran en la Tabla 17 (Veacutease anexo pp 178)
9422 - Marcadores mitocondriales
- ADNmt 16S Un nuevo haplotipo se ha detectado en las muestras estudiadas en el valle
de Fiambalaacute por lo cual se le asigna el nuevo coacutedigo Lvia-16SB Esta secuencia parcial
es de 436 pb de longitud y presenta un sesgo AT contenido de 6949 Este haplotipo es
muy similar al que se encuentra en esta especie de limneido Lvia-16SA (HE610434) que
difiere en soacutelo 2 de insercioacutensupresioacuten (indeles) Es importante sentildealar que se
detectaron muy pocas diferencias en este fragmento del 16S entre L neotropica y
especiacutemenes L viator ya estudiados en Argentina (soacutelo 5 posiciones variables 4
mutaciones y 1 indel) Por lo tanto se realizoacute un anaacutelisis comparativo de secuencias
incluyendo L neotropica y haplotipos L viator y otros haplotipos 16S aislados de la
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misma especie disponibles en el GenBank que muestran secuencias muy similares de
acuerdo con BLASTN (Veacutease anexo Tabla 18 pp 179)
- ADNmt cox1 Soacutelo una secuencia de nucleoacutetidos se encontroacute igual en todas las
muestras analizadas de 672 pb y un sesgo AT con contenido de 7004 Esta secuencia
resulta ser nueva y el nuevo coacutedigo haplotipo Lvia-cox1d fue exigido Cuando se
compara con los haplotipos descritos anteriormente en nucleoacutetidos de L viator cox1a
cox1b y cox1c las diferencias oscilan entre 6 y 11 el haplotipo Lvia-cox1a de Riacuteo Negro
Argentina (AM494010) aparece como el maacutes parecido Los resultados BLASTN
proporcionan una semejanza del 100 solamente con un fragmento cox1 maacutes corto de L
viatrix (VxC2 de 654 pb) de Mendoza (JN872450) Las diferencias de nucleoacutetidos y
aminoaacutecidos con haplotipos L viator y otros aislados se detallan en la Tabla 19 (Veacutease
anexo pp 180)
943 - Anaacutelisis comparativo de L neotropica vs L viator
A nivel de ADNr nuclear ITS-1 muestra ser un buen marcador en la distincioacuten entre estas
dos especies de limneidos El ITS-2 ofrece 60 posiciones variables (incluidas 29
mutaciones y 31 indeles) en una larga alineacioacuten de 464 pb en ambas especies y
respectivos haplotipos aislados Ademaacutes este marcador ofrece interesantes
microsateacutelites para la caracterizacioacuten de la poblacioacuten (Veacutease Anexo Tabla 16 pp 177)
El ITS-1 ofrece 119 posiciones variables incluyendo 93 mutaciones y 26 indeles en una
larga alineacioacuten de 580 pb El total de diferencias de caraacutecter entre especies son muy
claras y coexisten mostrando una gama de 57 a 59 (promedio de 5790) con un
promedio de p-distancia de 01163 (un total de 80 parsimonias en su respectiva
alineacioacuten) para distinguir las especies Una matriz de distancias por pares entre
secuencias de haplotipos ITS-2 y ITS-1 y aislamientos de L neotropica y L viator se
enumeran en la Tabla 20 (Veacutease anexo pp 181)
El nivel de los marcadores mitocondriales cox1 es excelente para distinguir las especies
y poblaciones cuando se utiliza como secuencia de nucleoacutetidos pero no cuando se
traduce a la proteiacutena que muestra identidad de secuencia de aminoaacutecidos en algunos
aislamientos de L neotropica y L viator A diferencia de los otros tres marcadores
utilizados 16S es el uacutenico que puede crear confusioacuten si se utiliza solo para lograr
diferenciacioacuten molecular entre ambas especies Las causas de esta afirmacioacuten son la
corta longitud del fragmento utilizado y el muy bajo nuacutemero de posiciones variables
obtenidas (25 de las cuales 19 son mutaciones y 6 indeles en una alineacioacuten de largo
442 pb 565) que logran generar una separacioacuten coherente entre ambas especies y
haplotipos (Veacutease anexo Tabla 18 pp179) El total de las diferencias de caracteres se
han utilizado para construir una matriz de distancia comparable entre 16S y secuencias
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de cox1 aisladas de haplotipos de L neotropica y L viator (Veacutease anexo Tabla 21 pp
182)
La informacioacuten proporcionada por los 4 marcadores moleculares utilizados y aplicados
para distinguir L neotropica y L viator se detalla en la Tabla 22 (Veacutease anexo pp 183)
Para la diferenciacioacuten entre estas dos especies ITS-1 aparece como el marcador con
mayor resolucioacuten y 16S como el de menor Para los anaacutelisis intraespeciacuteficos cox1
aparece como el mejor marcador y ITS-1 el peor La baja resolucioacuten del fragmento del
gen 16S para la distincioacuten de especies es digna de tenerse en cuenta Por ejemplo la
estimacioacuten de distancia media de 16S utilizando como modelo de sustitucioacuten de
nucleoacutetidos las diferencias totales (ts + tv) entre L neotropica y L viator es solo 856
siendo de 433 y 431 en las secuencias de L neotroacutepica y L viator respectivamente
(Veacutease anexo Tabla 22 pp 183)
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DISCUSIOacuteN
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101 - EN LOS SERES HUMANOS
La regioacuten endeacutemica en el valle de Fiambalaacute presenta las prevalencias maacutes altas e
intensidades registradas en el paiacutes demostrando ser un problema de Salud Puacuteblica con
singulares caracteriacutesticas epidemioloacutegicas En el presente estudio la prevalencia
obtenida por meacutetodos seroloacutegicos (3442) en Tatoacuten y aacutereas de influencia incluyendo
Riacuteo Grande es la maacutes alta reportada en la Repuacuteblica Argentina Esta prevalencia es
comparable a la encontrada por Marcos et al (2002) en pruebas seroloacutegicas (363) en
Mantaro asiacute como en el valle de Cajamarca tambieacuten en Peruacute por Gonzaacutelez et al (2011)
El estudio epidemioloacutegico realizado demuestra que esta zona puede ser clasificada como
una situacioacuten hiperendeacutemica humana en base a los criterios propuestos a la OMS por
Mas-Coma et al (1999 a) Los resultados obtenidos en esta investigacioacuten permiten la
descripcioacuten epidemioloacutegica del aacuterea y muestran factores que intervienen en el
mantenimiento del ciclo de la Fasciolosis a pesar que el subregistro y la falta de
denuncias epidemioloacutegicas contribuye a que la enfermedad sea subestimada La falta de
teacutecnicas de diagnoacutestico raacutepidas sensibles y econoacutemicas que esteacuten al alcance de todos
los centros de salud y sean uacutetiles tanto en la fase aguda como croacutenica de la enfermedad
seriacutea uno de los principales factores en la subestimacioacuten
Desde las aproximadamente 2500 personas infectadas registradas por Chen y Mott
(1990) en 42 paiacuteses de Asia Europa Ameacuterica Latina Aacutefrica del Norte y el Paciacutefico Oeste
entre 1970 y 1990 y el reporte global de la OMS (1995) en alrededor de 24 millones de
afectados hasta la estimacioacuten actual de Mas-Coma et al (2005) de 17 millones de
infectados a nivel mundial los casos reportados de Fasciolosis han ido aumentando en
los uacuteltimos 25 antildeos Tambieacuten para Mas-Coma (2009 a) es muy probable la
subestimacioacuten de la situacioacuten real debido al desconocimiento del estado de la
enfermedad en muchos paiacuteses
En Argentina no hay datos suficientes para conocer cabalmente la epidemiologiacutea y la
epizootiologiacutea de esta zoonosis parasitaria aunque sabemos que el problema existe (58
trabajos publicados con 555 casos) Sin embargo se presentan estudios como el de Pizzi
et al (1982) cuestionado por Barcat (2005) referido a 54 pacientes atendidos durante un
lapso de 5 antildeos en la provincia de Coacuterdoba
Las teacutecnicas disponibles para diagnoacutestico en los laboratorios cliacutenicos no son optimas
(Carnevale y Velaacutesquez 2011) ya que no se dispone faacutecilmente de antiacutegenos
estandarizados para realizar pruebas seroloacutegicas y seguramente muchos de los casos
observados no se notifican ni se publican por lo que se conoce soacutelo la punta del iceberg
La importancia de la infeccioacuten humana por F hepatica ha sido reconocida en antildeos
recientes por Mas-Coma et al (1999 c) Lo que maacutes sorprende es la capacidad de esta
enfermedad de llegar a causar situaciones epidemioloacutegicas problemaacuteticas en Salud
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Puacuteblica en medios tan diferentes y extremos como en la aridez del valle de Fiambalaacute a
nivel del mar en el delta del Nilo (Esteban et al 2003) y a 4000 m de altitud en el
Altiplano Boliviano (Mas-Coma et al 1999 a) y Peruano (Esteban et al 2002) en lugares
con alta pluviometriacutea y en lugares extremadamente secos en lugares de temperaturas
constantes a lo largo del antildeo y en otros con variacioacuten de temperatura pronunciada seguacuten
las estaciones en focos relacionados con aguas permanentes y en focos con aguas
temporales como observaron en sus estudios Mas-Coma et al (2008 b)
1011 - Inmunodiagnoacutestico
Al igual que los obtenidos en Fiambalaacute todos los diagnoacutesticos realizados en el paiacutes a
partir de 2001 exceptuando los efectuados en Coacuterdoba por Nieto Sosa (2008 2012)
fueron confirmados mediante el ensayo de ELISA (Lloret et al 2005)(Rubel et al
2005)(Salomoacuten et al 2006)(Corti et al 2006)(Riacuteos et al 2008)(Carnevale et al 2012)
El nuacutemero de reportes de casos humanos se sigue incrementando en el mundo y los
trabajos publicados por Arjona et al (1995) demuestran en esta serie de casos que esta
enfermedad afecta a las personas con una prevalencia de hasta 72 por coprologiacutea y
100 por serologiacutea donde ELISA tiene una sensibilidad del 100 y una especificidad
superior al 90 para la deteccioacuten de anticuerpos
Los resultados obtenidos permiten sostener que a pesar de su uso extendido las pruebas
coproloacutegicas comunes son poco sensibles e inferiores a las pruebas seroloacutegicas que
muestran mayores valores de sensibilidad en la deteccioacuten de la fase aguda y croacutenica de
la infeccioacuten por F hepatica En Peruacute Coacuterdova et al (1997 1999) y OacuteNeill et al (1999)
realizaron estudios para el diagnoacutestico precoz y oportuno por medio de meacutetodos
seroloacutegicos que muestran una mayor especificidad y sensibilidad en la determinacioacuten de
esta helmintiasis Cornejo (2003) y Espinosa (2010) reconocen como limitacioacuten de las
pruebas seroloacutegicas que no distinguen entre infeccioacuten actual o pasada y por lo tanto un
resultado positivo en un paciente proveniente de una zona endeacutemica con un cuadro
cliacutenico no compatible con Fasciolosis puede resultar de una respuesta inmune a la
infeccioacuten en el pasado
La deteccioacuten de anticuerpos fue el meacutetodo empleado para el inmunodiagnoacutestico de
Fasciolosis en el valle de Fiambalaacute debido a su relativa simplicidad y la temprana
seroconversioacuten (usualmente 1-2 semanas) durante la infeccioacuten primaria comparada con
el periacuteodo de patencia tardiacutea (2-3 meses) hallada por Hillyer (1999) Sin embargo se tuvo
en cuenta que su positividad no puede ser de modo alguno considerada como un criterio
de infeccioacuten activa ya que Espino (1997) ha demostrado que muchos pacientes ya
curados mantienen elevados niveles de anticuerpos contra el paraacutesito por periacuteodos que
pueden llegar hasta 2 o 3 antildeos
Shaker (1994) en estudios epidemioloacutegicos realizados en Egipto empleoacute ELISA para
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detectar anticuerpos circulantes contra F hepatica en suero de pacientes infectados
enfrentados a un antiacutegeno purificado por inmunoafinidad desde homogeneizados del
paraacutesito adulto ELISA resultoacute ser 100 sensible y tuvo una especificidad de 93
Entonces planteoacute que ELISA puede ser usada como una buena prueba de screening
mientras que el ensayo inmunoenzimaacutetico de electrotransferencia (EITB) serviriacutea como
un test confirmatorio en el inmunodiagnoacutestico de Fasciolosis
En Chile Apt (1992) sostiene que el meacutetodo ELISA posee una sensibilidad de 976 y
especificidad de 938 mientras para Castro (2010) la teacutecnica de ELISA utilizando los
productos de E-S del paraacutesito tiene una sensibilidad de 100 y una especificidad de
978 aunque Zulantay (1992) utilizando un IgG ELISA y un antiacutegeno somaacutetico soluble
de F hepatica obtuvo una sensibilidad de 923 y una especificidad de 994 en tanto
los valores predictivos positivo y negativo fueron de 916 y 994 respectivamente
Para el desarrollo de esta investigacioacuten se utilizoacute antiacutegeno E-S del paraacutesito y para
evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti-F hepatica en los sueros humanos se aplicoacute un
ELISA con una sensibilidad y especificidad en la prueba de 100
1012 - Eosinofilia
En lo que respecta a los exaacutemenes auxiliares llevados a cabo el dato maacutes importante del
hemocitoloacutegico es la eosinofilia elevada registrada en el 3238 de los casos estudiados
en esta tesis sin que se encontraran elementos inmaduros en las muestras como reporta
Siciliano (1982)
En Fasciolosis como en otras parasitosis la eosinofilia es el hallazgo de laboratorio maacutes
frecuentemente encontrado seguacuten su porcentual y valor absoluto en sangre perifeacuterica
(Arjona et al 1995) Las alteraciones del hemograma demuestran eosinofilia marcada
(47) para Blancas et al (2004) y leucocitosis con desviacioacuten a la izquierda como lo
manifiesta Atias (1991)
Asiacute para el total de pacientes estudiados la eosinofilia elevada es el hallazgo maacutes
frecuente (n= 60) lo que concuerda con los trabajos de Rubel et al (2005) y Nieto Sosa
(2008) siendo uno de los datos que orienta el diagnoacutestico haciacutea la Fasciolosis Para
Lloret et al (2005) la leucocitosis con hipereosinofilia creciente fue una anomaliacutea
universal con valores del 38 al 62 y estuvo presente en todos sus pacientes mientras
que Giffoniello (1983) la reporta del 30-50 seguacuten Miguel (1985) en 80 y para Siciliano
(1989) en 93
En Peruacute Cosme et al (2001) reportan 37 casos de Fasciolosis en los que el 918 de los
pacientes presentoacute eosinofilia El porcentaje de pacientes con eosinofilia en determinado
grupo de estudio depende mucho del porcentaje de pacientes agudos en cada caso
Vera (1989) hace notar que en 83 de 134 pacientes (619) en etapa croacutenica no se
presentoacute eosinofilia por lo que su ausencia en un paciente dado no descarta la
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posibilidad de la enfermedad y esto podriacutea explicar el escaso nuacutemero de individuos con
diagnoacutestico de Fasciolosis que al no sospechar su diagnoacutestico como lo afirman Marcos
et al (2002) no se solicitoacute el anaacutelisis parasitoloacutegico respectivo Cabe destacar que algunos
pacientes clasificados en fase croacutenica son realmente casos en transicioacuten (final de la fase
aguda y comienzo del periodo de ovoposicioacuten)
Seguacuten Arjona et al (1995) la eosinofilia se presenta en el 95 de los pacientes siendo la
mayoriacutea agudos Mientras Marcos et al (2007 a) refiere haberla encontrado en el 46 de
los pacientes (todos en fase croacutenica) De esto se deduce que con respecto a la
eosinofilia y la Fasciolosis cabe mencionar que las maacutes altas tasas de eosinofilia se
observan en la fase aguda o invasiva y estadios tempranos de la fase croacutenica llegando
incluso a cifras muy altas (70-80) como se menciona anteriormente Para Blancas et al
(2004) la eosinofilia no siempre estaacute presente en la fase croacutenica Solo 47 de los 277
casos implicados en un interesante estudio hospitalario de maacutes de 30 antildeos teniacutea
eosinofilia (Blancas et al 2004) mientras que el 50 de los sujetos con Fasciolosis
croacutenica teniacutea eosinofilia en aacutereas endeacutemicas (Marcos et al 2002)
Tambieacuten en Peruacute donde la eosinofilia estuvo presente en el 47 de los casos croacutenicos
se demuestra que en esta fase puede encontrarse y seriacutea importante para poder
sospechar el diagnoacutestico de esta parasitosis Sin embargo muchos individuos con
Fasciolosis croacutenica no presentan eosinofilia y esto seriacutea otro punto importante al igual
que las caracteriacutesticas cliacutenicas lo que explicariacutea la falta de personas diagnosticadas
previamente con Fasciolosis en los hospitales del valle de Fiambalaacute ya que no se
investigoacute este diagnoacutestico
La eosinofilia puede ser el primer signo a sospechar sobre Fasciolosis en las zonas
endeacutemicas pero tambieacuten estos sujetos pueden tener muacuteltiples paraacutesitos intestinales que
pueden aumentar el conteo de eosinofilos especialmente helmintos o pueden tener otra
patologiacutea como asma Se deberaacute tener presentes estas asociaciones que requieren un
enfoque integral de diagnoacutestico En resumen si un paciente proviene de un aacuterea
endeacutemica se sospecha de cualquier anomaliacutea del tracto biliar y presenta eosinofilia
puede ser Fasciolosis y se deberaacute incluir para el diagnoacutestico diferencial
1013 - Proteiacutenas totales y enzimas hepaacuteticas
Otro rasgo de la infeccioacuten por F hepatica fue la presentacioacuten de hiperproteinemiacutea quizaacutes
debido a cambios de volumen del agua plasmaacutetica por deshidratacioacuten (aporte insuficiente
de agua voacutemitos o diarreas severas) La hiperproteinemiacutea puede ser debida a
deshidratacioacuten o a un aumento en la concentracioacuten de proteiacutenas especiacuteficas
(inmunoglobulinas policlonales en infecciones) pero estas no fueron analizadas
Para analizar el impacto del valor del laboratorio se diferenciaron los datos aportados por
aquellas determinaciones como el hemograma de las especiacuteficas en patologiacutea
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hepatobiliar Las determinaciones especiacuteficas en patologiacutea hepatobiliar incluyen las
enzimas de citoacutelisis (GOT o AST y GPT o ALT) para que reflejen alteraciones del
pareacutenquima hepaacutetico y la elevacioacuten de FAL (3619) la bilirrubina (BT) directa (BD) e
indirecta (BI) La fosfatasa alcalina se halla elevada como enzima de colestasis aunque
los valores registrados son inferiores al reporte de Siciliano et al (1989) donde el
laboratorio reveloacute fosfatasa alcalina aumentada en el 43 de los casos Nieto Sosa et al
(2012) encontraron GOT GPT y FAL elevadas en todos los pacientes de un grupo
familiar estudiado
1014 - Geacutenero
En la mayoriacutea de los estudios sobre la Fasciolosis humana y su incidencia en las
diferentes zonas de endemicidad los aspectos referidos a la epidemiologiacutea de la
enfermedad en funcioacuten del sexo del hospedador definitivo accidental arrojan resultados
contradictorios obtenieacutendose zonas donde las prevalencias e intensidades de infeccioacuten
eran diferentes si bien en la mayoriacutea de las veces de forma no significativa
De acuerdo con esta afirmacioacuten en los resultados obtenidos en el valle Fiambalaacute tanto
dentro de los casos positivos como en el grupo de negativos los mayores porcentuales
corresponden al sexo femenino (mujeres 60 40 en hombres) sin embargo la
prevalencia no presenta asociacioacuten estadiacutesticamente significativa
La diferencia no significativa entre prevalencia y sexo puede ser explicada por la similitud
de roles por geacutenero y por la ingesta de varios tipos de vegetales crudos o agua como
factores de riesgo para la infeccioacuten por F hepatica Estos resultados concuerdan con las
investigaciones realizadas en zonas tan distantes como Satipo Peruacute llevadas a cabo por
Delgado (1995) y las de Brooker (1999) quien trabajoacute en Kenia
Del mismo modo como ocurre con casi todas las enfermedades infecciosas las tasas de
prevalencia e intensidad entre los sexos variacutean en funcioacuten de los papeles y
responsabilidades de cada uno Sin embargo si tanto hombres como mujeres comparten
condiciones econoacutemicas y sociales similares sus estructuras fisioloacutegicas pueden
responder de forma diferente a un mismo riesgo
De ese modo Apt et al (1992) ha realizado numerosos estudios en las distintas zonas
endeacutemicas de Fasciolosis en Chile donde la prevalencia de parasitacioacuten animal es
elevada En aacutereas rurales hiperendeacutemicas para Fasciolosis animal los resultados de
Fasciolosis humana obtenidos en relacioacuten al geacutenero mostraban que las mujeres eran
parasitadas de forma maacutes frecuente que los hombres 732 frente al 268
respectivamente
Estudios epidemioloacutegicos muy interesantes llevados a cabo en Bolivia por Esteban et al
(1999 2002) en regiones de alta endemicidad de Fasciolosis humana encontraron
prevalencia de hasta un 682 (media 154) aunque no existiacutean diferencias en cuanto
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al geacutenero de individuos analizados Farag et al (1979) en trabajos anteriores en Egipto
mostraban diferencias significativas en cuanto a la prevalencia de infeccioacuten por
Fasciolosis en funcioacuten del geacutenero afectando maacutes a las mujeres con un 103 frente a un
44 en hombres
De ese modo los estudios referidos muestran que tanto en Bolivia como en Peruacute
(Esteban et al 1999 2002) las diferencias relativas a la prevalencia de infeccioacuten por F
hepatica en funcioacuten del geacutenero no eran significativas al igual de lo encontrado en el
presente trabajo Por el contrario en Egipto (Curtale et al 2007)(Esteban et al 2003) al
igual que en Chile (Apt et al 1992 1993) si existiacutean diferencias significativas en la
prevalencia de infeccioacuten dependiendo de si afectaba a hombres o mujeres
1015 - Grupos etarios
El estudio demuestra que la infeccioacuten es maacutes frecuente en los pacientes de los grupos
etarios menores de 19 antildeos a diferencia del estudio reportado por Biagi (1957) en la
poblacioacuten de Atlixto (zona endeacutemica mexicana) que mostroacute como la frecuencia de
reacciones positivas aumentaba de manera rectiliacutenea en los adultos
Datos similares a los obtenidos en esta investigacioacuten se observan en la casuiacutestica
estudiada por Alban (2002) sobre casos de Fasciolosis en el Hospital de Cajamarca
Peruacute donde su mayor poblacioacuten correspondioacute a los grupos etarios menores de 20 antildeos
Tambieacuten en Peruacute Marcos (2002 2005) observa en zonas endeacutemicas que la mayoriacutea de
casos son nintildeos en edad escolar (5-15 antildeos) siendo maacutes propensos que los adultos a
convertirse en infectados como lo ejemplifica en los niveles maacutes altos de prevalencia de
infeccioacuten y para desarrollar eventos mecaacutenicos adversos despueacutes del tratamiento
debido al tamantildeo maacutes pequentildeo de sus conductos biliares y por lo tanto a una mayor
probabilidad de bloqueo (Marcos et al 2007 b)(Cornejo et al 2003)(Valencia et al
2005)(Gabrielli et al 2011)
Los resultados tambieacuten coinciden con estudios de campo reportados en el valle de
Mantaro (zona endeacutemica peruana) donde Naacutequira (2000) obtiene 93 de muestras
positivas en los menores de 20 antildeos Valero et al (2003 2006 2008) y Girones et al
(2007) sostienen el gran impacto de esta enfermedad en la morbilidad de nintildeos con
infecciones croacutenicas
Sin embargo los resultados del valle de Fiambalaacute difieren de la casuiacutestica hospitalaria
encontrada en Coacuterdoba por Siciliano (1980) donde la edad promedio en que se
presenta la enfermedad es de 355 antildeos ( a pesar de tener en cuenta que en el Hospital
Rawson de la ciudad de Coacuterdoba se atienden personas adultas) y en Peruacute donde
Blancas (2004) sostiene que las poblaciones maacutes importantes correspondieron a los
grupos comprendidos entre los 20 y 39 antildeos y Peacuterez (1986) que observa la mayor
proporcioacuten de enfermos entre 15 a 49 antildeos
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Los adultos suelen ser los maacutes afectados en aquellos lugares en los que la Fasciolosis
humana es poco frecuente como lo describen Carrada y Escamilla (2005) en Francia o
los casos de turistas que veranean en zonas serranas de Coacuterdoba Argentina
diagnosticados por Siciliano (1980) y Nieto Sosa (2006) Tambieacuten los observados por
Maco et al (2002) en profesiones ligadas al campo relacionadas al pastoreo o cuidado
del ganado constituyeacutendose en grupos de riesgo y donde la enfermedad se muestra
seguacuten Mas-Coma y Bargues (1997 a) en agregados familiares
1016 - Estudios coproloacutegicos
Uno de los aspectos investigados para el diagnoacutestico definitivo de Fasciolosis fue el
hallazgo de huevos en materia fecal aun reconociendo que el estudio
coproparasitoloacutegico presenta baja sensibilidad y requiere la recoleccioacuten de muestras
seriadas En este sentido la teacutecnica coproloacutegica maacutes rentable eficaz y sensible resultoacute la
TSR descrita por Lumbreras et al (1962)
A pesar de los bajos resultados obtenidos (4 casos) la TSR al compararla con las otras
teacutecnicas maacutes complejas y de mayor costo como la teacutecnica de Kato-Katz o el meacutetodo de
concentracioacuten eacuteter-formol permitioacute la identificacioacuten de los casos positivos A diferencia de
los reportes de otros autores donde los estudios coproparasitoloacutegicos dieron excelentes
resultados como en Mendoza donde Salomoacuten et al (2006) utilizando las teacutecnicas de
Faust Sheather y Lumbreras comprobaron positivos a dos pacientes o los casos
reportados por Nieto Sosa (2008) de Coacuterdoba y San Luis donde hallaron huevos de F
hepatica en 15 pacientes
En un estudio muy interesante Lumbreras et al (1962) comparando el anaacutelisis directo de
heces y el procedimiento de sedimentacioacuten raacutepida para investigar huevos de F hepatica
en materia fecal obtienen un resultado significativo de 919 a 9081 de positividad
Villegas et al (2012) en el Altiplano Boliviano regioacuten de alta endemicidad de Fasciolosis
humana encontraron prevalencias de hasta 217 a diferencia del presente trabajo
donde solo fue posible confirmar por anaacutelisis de materia fecal 416 de los casos
estudiados correspondientes a pacientes sintomaacuteticos en su fase croacutenica entre ellos dos
nintildeos
Cabe destacar que por razones logiacutesticas la toma de muestras seriadas para el examen
de heces fue soacutelo de 3 diacuteas consecutivos lo que pudo reducir el hallazgo de huevos
debido a la ovoposicioacuten intermitente del paraacutesito Es importante sentildealar ademaacutes que las
personas no cooperaron con la toma de muestras
De los casos positivos encontrados llama la atencioacuten el de la paciente a la que se extrajo
especiacutemenes de F hepatica con CPRE quien previamente resultoacute negativa a los
distintos coproparasitoloacutegicos que se le realizaron y a los ELISA practicados Lo mismo
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ocurrioacute con la paciente en la que se halloacute un ejemplar durante una intervencioacuten quiruacutergica
y tambieacuten dio negativo al anaacutelisis de materia fecal aunque eacutesta fue positiva al ELISA
A pesar de no formar parte de los objetivos del presente estudio las demaacutes teacutecnicas
coproparasitoloacutegicas utilizadas permitieron demostrar la existencia de huevos de varios
paraacutesitos presentes tanto en nintildeos como en adultos presentaacutendose casos donde
conviviacutean hasta 3 paraacutesitos distintos al igual que el trabajo de Esteban (1999) quien
diagnostica parasitosis coexistentes con Fasciolosis mencionando la presencia de
Blastocystis hominis tal como lo observado en el valle de Fiambalaacute
1017 - Siacutentomas y signos
La presentacioacuten cliacutenica patogeniacutea situacioacuten epidemioloacutegica y patrones de transmisioacuten de
Fasciolosis humana es ampliacutesima no soacutelo por las dificultades diagnoacutesticas en la fase
aguda de la enfermedad sino por el hecho de que estudios de Valero et al (2003 2006
2008) en los uacuteltimos antildeos han venido a demostrar serios problemas cliacutenicos y
patogeacutenicos durante la muy prolongada fase de cronicidad que en humanos se estima
del orden de 135 antildeos
Queda demostrado en este estudio que lamentablemente la casuiacutestica en sucesos
cliacutenicos no refleja su frecuencia quizaacutes porque la mayoriacutea de los casos que llegan a los
centros hospitalarios lo hacen por complicaciones de la fase croacutenica (cuadros
obstructivos biliares colangitis colecistitis etceacutetera) y los siacutentomas de la Fasciolosis de
la viacutea biliar son tan semejantes a los que produce la litiasis biliar que los pacientes llegan
a la cirugiacutea con este uacuteltimo diagnoacutestico siendo el hallazgo del paraacutesito un hecho
inesperado durante la intervencioacuten como lo revelan los trabajos de Del Valle y Donovan
(1923) Cuenya (1944) Longo y Dariacuteo (1953) Logaldo (1955) Ahualli y Arias (1961)
Cantildeas et al (1964) Padilla et al (1970) Carena et al (1972) y Andrada et al (1983) igual
que lo ocurrido con dos pacientes de Fiambalaacute
En esta investigacioacuten al analizar la sintomatologiacutea se observa que el dolor abdominal es
el maacutes frecuente presente en el 2553 de los casos Estos datos contrastantes con
otros estudios hospitalarios como los obtenidos en Peruacute por Picoaga (1980) 88 y
Alban (2002) que hablan de 88 y 84 respectivamente o en Chile donde el dolor
abdominal para Faiguenbaum (1962) fue el maacutes habitual en 70 de los casos
Los siacutentomas que siguieron en frecuencia en este estudio fueron naacuteuseas y voacutemitos
(2411) diarrea (1702) fiebre (992) valores muy proacuteximos a los obtenidos en
Peruacute donde Picoaga (1980) reporta naacuteuseas y voacutemitos en 30 anorexia en 27 y
diarrea soacutelo en 16 en tanto para Alban (2002) voacutemitos en 28 la hiporexia en el 26
las naacuteuseas en 17 la diarrea en 12 y la peacuterdida de peso en el 13 En Chile
Faiguenbaum (1962) encuentra maacutes frecuente la diarrea (36) y la peacuterdida de peso
(36) Faacutebregas et al (1976) en Cuba presenta porcentajes maacutes bajos diarrea 26
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voacutemitos 22 anorexia 19 peacuterdida de peso y naacuteuseas 15 A pesar de estos
porcentajes es de destacar que los siacutentomas son inespeciacuteficos y ayudan poco a precisar
el diagnoacutestico
Respecto a la semiologiacutea del dolor abdominal se observa que en cuanto a localizacioacuten
es maacutes frecuente en epigastrio (5454) e hipocondrio derecho (4545) lo que
concuerda con estudios de Cornejo (1951) en Peruacute Faacutebregas et al (1976) observa el
dolor epigaacutestrico presente en el 59 y en hipocondrio derecho en el 37 de sus
pacientes El mismo orden se mantiene en Chile (Faiguenbaum 1962) pero con
porcentajes menores (26 y 19 respectivamente) Al igual que en Peruacute (Picoaga
1980)(Cornejo 1951) el dolor tipo coacutelico ha sido el que maacutes frecuentemente se ha
observado en este estudio
En la Repuacuteblica Argentina de acuerdo al examen fiacutesico para el total de pacientes
atendidos en los grupos agudo croacutenico y pediaacutetrico los hallazgos maacutes frecuentes fueron
dolor a la palpacioacuten en hipocondrio derecho y signo de Murphy (Longo y Daraiacuteo 1953)
(Ahualli y Arias 1961)(Cantildeas et al 1964)(Padilla et al 1970)(Andrada et al 1983)
(Giffoniello et al 1983) (Lloret et al 2005) hepatomegalia (Padilla et al 1970) palidez y
fiebre (Andrada et al 1983) aunque en los datos de los pacientes del valle de Fiambalaacute
es de destacar en algunos casos la hepatomegalia y la ictericia presente en adultos
Por lo tanto es correcto afirmar que el escaso nuacutemero de individuos diagnosticados
cliacutenicamente de Fasciolosis no presentan sintomatologiacutea biliar claacutesica como coacutelico biliar
observado por Andrada et al (1983) o signo de Murphy (Longo y Daraiacuteo 1953) y esto
pudiera ser una de las causas que explicariacutea el escaso nuacutemero de individuos
diagnosticados cliacutenicamente de Fasciolosis
1018 - Imaacutegenes
En la presente tesis doctoral soacutelo 3 observaciones (75) coexistieron con litiasis 5
(125) con colecistectomiacutea y 29 (725) con vesiacutecula normal Se encontroacute un caso
ecograacutefico que mostraba una imagen factible del paraacutesito El estudio realizado mostroacute
una imagen clara aplanada y alargada perfectamente compatible con F hepatica con
estructura hepaacutetica conservada viacuteas biliares intra y extrahepaacutetica no dilatadas Se
informoacute tambieacuten ausencia de vesiacutecula biliar por colecistectomiacutea y leve dilatacioacuten del
coleacutedoco sin demostrar alteraciones en el resto del estudio Descripciones semejantes
son reportadas en Peruacute por Gonzaacutelez-Carbajal et al (2001) y Meacutexico por Vaacutezquez et al
(2007)
Blancas et al (2004) describioacute los hallazgos principales de 27 ecografiacuteas abdominales
(desde 1989 al 2002) realizadas en el Hospital Cayetano Heredia de Lima Estas fueron
hepatomegalia en el 37 imaacutegenes sospechosas de F hepaacutetica en 30 colecistitis en
26 y litiasis en 15 y Alban (2002) en el hospital de Cajamarca reportoacute 8 ecografiacuteas
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(de 101 casos de Fasciolosis) de los cuales cinco (63) tuvieron caacutelculos y dos (25)
pared vesicular engrosada
La tomografiacutea axial computada es utilizada por Arjona et al (1995) mencionando su
utilidad especialmente en el reporte de 1520 pacientes con Fasciolosis y Van Beers et al
(1994) con presencia de ejemplares en viacuteas biliares El presente estudio no contoacute con la
posibilidad de emplear TAC en los pacientes
1019 - Teacutecnicas invasivas
A raiacutez de los estudios realizados para esta tesis fueron hallados como se expresoacute antes
en el momento de llevar a cabo intervenciones quiruacutergicas ejemplares vivos de F
hepatica en dos pacientes femeninos La primera presentaba el coleacutedoco muy dilatado y
de paredes sumamente engrosadas sin evidencia de litiasis El segundo reporte se
refiere a la coexistencia de litiasis y Fasciolosis en el coleacutedoco de las que se extrajo
estructuras adultas del paraacutesito En Peruacute Alban (2002) refiere situaciones similares al
haber encontrado especiacutemenes en 2162 (12) colecistectomiacuteas practicadas en el
hospital de Cajamarca durante 5 antildeos
En una de las pacientes del valle de Fiambalaacute fue extraiacutedo un ejemplar por CPRE con
cesta de Dormia convirtieacutendose en una muy buena alternativa para evitar cirugiacuteas
mayores como ya habiacutea publicado Veerappan (1991) o en Cuba donde Martiacutenez et al
(2000) reportan resultados satisfactorios comprobando la presencia del paraacutesito en las
viacuteas biliares por CPRE y procediendo a la extraccioacuten de especiacutemenes bajo visioacuten directa
con canastillas helicoidales
Durante esta investigacioacuten uno de los casos citados al que se le practicoacute una
colecistectomiacutea permitioacute la confirmacioacuten por ELISA realizado al extraerse un ejemplar de
F hepatica
102 - EN LOS ANIMALES
1021 - Estudios coproloacutegicos
Seguacuten Boray (1969) y Mas-Coma et al (1999) los hospedadores definitivos maacutes
importantes de F hepatica son los ovinos y los bovinos mientras para Acha y Szyfres
(1986) muchos animales de especies domeacutesticas o silvestres pueden infectarse Este
estudio muestra que entre ellas herbiacutevoros poligaacutestricos -cameacutelidos- o monogaacutestricos -
equinos y mulares- actuacutean como importantes hospedadores alternativos existiendo
diferencias en el desarrollo de la infeccioacuten en las distintas especies estudiadas
determinadas entre otros factores por su diferente susceptibilidad a la infeccioacuten tal como
lo sostienen Dixon (1964) o Reddington et al (1986) Esto se manifiesta durante el curso
de la investigacioacuten por los porcentajes de hospedadores infectados y los niveles de
excrecioacuten de huevos de F hepatica en materia fecal obtenidos
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En el valle de Fiambalaacute los mayores porcentajes de muestras positivas corresponden a
los ovinos y asnos-mulares (3958 al 1954) siendo tambieacuten alto el porcentaje en
llamas y caprinos El anaacutelisis de estos porcentajes considera el sistema de alimentacioacuten
utilizado ya que es determinante de la epidemiologiacutea de la enfermedad como lo
demuestran Cordero del Campillo et al (2002) Las muestras analizadas proveniacutean de
animales sometidos a los manejos tradicionales de produccioacuten en la zona lo que limita
sus preferencias de haacutebitat y sus haacutebitos forrajeros independientemente de la especie
raza o categoriacutea etaria
En contraste a lo observado por Olaechea (1994) en el caso de los ovinos y los caprinos
ambas especies deben pastorear en las vegas (ambientes pantanosos) incluso los
caprinos incorporan una proporcioacuten considerable de especies arbustivas en su dieta
(Mintildeoacuten et al 1991)(Aguirre et al 2005) Estos animales al verse obligados a consumir
forrajes contaminados de la zona ademaacutes de infectarse tambieacuten se transforman en
contaminadores continuos del aacuterea Cafrune et al (1996) sostienen que los cameacutelidos
sudamericanos se infectan de los ovinos aunque los altos porcentajes de llamas
positivas (184) hallados en Tatoacuten y Riacuteo Grande deben relacionarse a la susceptibilidad
que manifiestan a la infeccioacuten por trematodes y a ser poblaciones que habitaban antes de
la introduccioacuten de los ovinos a la zona
Pereyra y Leiras (1991) estudiaron que los rumiantes invierten maacutes de un tercio del diacutea
pastando y como las ovejas cabras y cameacutelidos se alimentan en los mismos lugares y
tienen acceso a los mismos ambientes las probabilidades de consumir metacercarias al
alimentarse seriacutean las mismas
Frente a la prevalencia (2674) obtenida en esta tesis el meacutetodo de diagnoacutestico
coproparasitoloacutegico utilizado presentoacute porcentajes maacutes elevados que los datos de Aguirre
et al (2005) 2367 Rossanigo et al (1983) 99 Moreira et al (2004) 2353 y Mariacuten
(2009) 216
Resultados similares a los mostrados fueron observados en la regioacuten norte del Altiplano
boliviano zona altamente endeacutemica (2586) por Ueno et al (1975) La prevalencia por
F hepatica en el estado de Santa Catarina Brasil donde Da Serra-Freire y Nuernberg
(1992) luego de analizados 12 antildeos de muestreos presentan un 2786 en promedio La
distribucioacuten geograacutefica de establecimientos agropecuarios en Uruguay muestran tropas
con porcentajes mayores a 20 de animales infectados en cualquier aacuterea del territorio
como lo registran Loacutepez y Hernaacutendez (1961) y Nari y Cardozo (1976) Chile presenta una
tasa promedio (3012) tanto en bovinos como en la infeccioacuten caprina (Alcaiacuteno y Apt
1989) Seguacuten Pascal y Goacutemez (1986) tambieacuten se encuentran presentes en Venezuela
con 215
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Boray (1969) sostiene que los huevos de F hepatica eliminados en la materia fecal
dependen de factores relacionados con el hospedador (edad estado inmune y
nutricional) y con el trematode (intensidad del parasitismo y duracioacuten de la infeccioacuten)
factores que explican el amplio rango de resultados encontrados en esta tesis (desde
104 en porcinos 184 en llamas hasta 3958 en ovinos) Las diferencias
estadiacutesticamente significativas de prevalencia en ovinos supera ampliamente las
encontradas en las demaacutes especies esto se relaciona con su alta susceptibilidad y pone
en evidencia su potencial como contaminador de las pasturas
En la zona de estudio existen algunos factores particulares a tener en cuenta la
ganaderiacutea normalmente es mixta con lo cual las diferentes especies de animales ademaacutes
de pastorear en ambientes compartidos consumen las mismas metacercarias los
hospedadores tienen similitud en el tracto digestivo y estaacuten muy relacionados
filogeneacuteticamente (ungulados)
Por la dispersioacuten del alimento en grandes extensiones del terreno y consecuente baja
infestacioacuten de los pastos no era esperable encontrar infecciones altas Los lugares con
una gran contaminacioacuten de los pastos presentan los pocos eventos de pastoreo que los
animales pueden utilizar y de ese modo ingerir metacercarias e infectarse En el valle de
Fiambalaacute F hepatica se halla concentrada en los sitios huacutemedos conocidos como vegas
aunque la trashumancia y largas distancias logran que se disperse ampliamente
La explicacioacuten es que esta prevalencia alcanza para mantener el ciclo de transmisioacuten a lo
largo del tiempo ademaacutes recordemos que el paraacutesito posee una gran capacidad de
multiplicacioacuten asexual en el hospedador intermediario seguacuten Ollerenshaw (1971 a) por
cada miracidio que penetra al caracol pueden emerger entre 800 y 4000 cercarias Otra
explicacioacuten razonable es pensar que existen en los campos compartidos por varios
propietarios -comuneros- otros hospedadores definitivos domeacutesticos o silvestres que
tambieacuten aportan huevos al ambiente tal como lo propone Olaechea (2004)
Los herbiacutevoros como hospederos definitivos desempentildean dentro de la cadena
epidemioloacutegica un papel importante en la diseminacioacuten de la Fasciolosis y ello podriacutea
estar influyendo en los altos iacutendices que se encuentran en humanos sin embargo Mas-
Coma (2005) presenta zonas donde los casos humanos podriacutean ser independientes de la
infeccioacuten animal
1022 - Necropsias
La necropsia como teacutecnica tambieacuten permitioacute establecer un diagnoacutestico de certeza No
necesitoacute de la confirmacioacuten mediante estudios histopatoloacutegicos y seroloacutegicos
complementarios como los planteados por Robles y Uzal (1991) porque las lesiones y los
paraacutesitos hallados confirman el agente etioloacutegico causante de la enfermedad
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Los cambios de tamantildeo en la viacutescera pudieron ser debidos a un estado de caquexia
apareciendo un hiacutegado maacutes pequentildeo del normal y con una falsa imagen de distensioacuten de
la vesiacutecula biliar No se encontraron depresiones de color rojo oscuro correspondientes a
telangiectasias ni procesos degenerativos acompantildeados de coloracioacuten amarillenta
(esteatosis) o congestioacuten croacutenica que diera lugar a una coloracioacuten rojo oscura
entremezclada con aacutereas amarillentas (hiacutegado de nuez moscada) como sostiene Ruager
(1969)
A diferencia de los hallazgos de Morales y Pino (1977) la apertura de la vesiacutecula biliar no
presentoacute alteraciones del contenido ni en la superficie mucosa Los canaliacuteculos biliares
presentaron engrosamiento manifiesto y en el interior de estos se observoacute la presencia de
ejemplares de F hepatica material semisoacutelido color negro fibrosis y calcificacioacuten de los
conductos biliares que podriacutea actuar como una barrera mecaacutenica confiriendo una
significativa resistencia frente a futuras reinfecciones tal como lo plantean en su trabajo
Rojo Vaacutezquez y Ferre-Peacuterez (1999)
En el tubo digestivo el intestino delgado no presentoacute intususcepcioacuten o necrosis tampoco
reaccioacuten fibrino-purulenta alrededor de la lesioacuten o adherencia a la pared abdominal ni el
abomaso con formaciones nodulares muacuteltiples de miliacutemetros de diaacutemetro distribuidas en
toda la mucosa como describieron Dimattia et al (2013)
En los animales con paraacutesitos la extraccioacuten de las formas juveniles a nivel del
pareacutenquima hepaacutetico y de las adultas en los canales biliares se vio favorecida por la
necropsia siendo importante que las mismas se realizaran a nivel de campo al ser maacutes
faacutecil praacutectica y econoacutemica su ejecucioacuten
1023 - Morfologiacutea microscoacutepica
Los trabajos de Rosa (1969) utilizando la microscopiacutea con fines taxonoacutemicos favorecieron
la profundizacioacuten en el conocimiento de la estructuras de F hepatica A posteriori la
microscopiacutea de campo claro ha sido utilizada en el estudio morfoloacutegico de las diferentes
etapas de desarrollo de los trematodos (Jamjoom y Shalaby 2006) En la uacuteltima deacutecada
esta teacutecnica ha traiacutedo importantes contribuciones en paraacutesitos adultos y huevos de F
hepatica como lo muestran Valero et al (2005 2012) y Periago et al (2008)
En el presente estudio se observaron similitudes morfoloacutegicas entre ejemplares adultos
originarios del valle de Fiambalaacute que no difieren de los especiacutemenes de las otras zonas
de Latinoameacuterica estudiados En lugares separados por grandes distancias geograacuteficas
los trabajos de Arauacutejo et al (1995) en Goiacuteas Brasil o los de Periago et al (2006) en
Espantildea y Valero et al (1999) en Bolivia tienen diferencias alomeacutetricas ontogeacutenicas El
aspecto de los huevos uterinos no difiere de los detallados previamente en la literatura
por Hussein et al (2010)
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Fue importante la observacioacuten de tubeacuterculos y espinas en el tegumento porque su
presencia contribuye a la creacioacuten del haacutebitat de los helmintos Por otra parte el
tegumento es la regioacuten de la interaccioacuten del paraacutesito con el hueacutesped por eacutel no solo entran
nutrientes al paraacutesito sino que tambieacuten como lo sentildealaron Moreau y Chauvin (2010)
desarrolla estrategias para la evasioacuten de la respuesta inmune del hueacutesped
A pesar de las numerosas ventajas ofrecidas por estudios de microscopiacutea de campo
brillante en Helmintologiacutea como demostraron Szmygiel et al (2014) la caracterizacioacuten de
ciertos detalles morfoloacutegicos observados en este estudio como afirman Singh et al (2014)
requiere el uso de otras teacutecnicas tales como el contraste de interferencia diferencial que
permitioacute la observacioacuten tridimensional de las estructuras Los resultados obtenidos
muestran por primera vez que el uso integrado de las dos teacutecnicas en F hepatica
permiten observar la presencia de espinas con resultados fiables Los ejemplares de F
hepatica presentan similitud morfoloacutegica cuando se analizan por microscopiacutea de campo
claro siendo necesario el uso integrado de diversas teacutecnicas microscoacutepicas para una
mejor comprensioacuten de la morfologiacutea del paraacutesito
102 4 - Variabilidad geneacutetica intraespeciacutefica
La Fasciolosis se encuentra distribuida por Ameacuterica Latina Europa Aacutefrica y Asia (Mas-
Coma 2004 a b 2005 2007) con una enorme capacidad de adaptacioacuten y expansioacuten
incluso a medios inhoacutespitos (Mas-Coma et al 2003) relacionada tanto con el cambio
global (Mas-Coma 2007 a) como con el cambio climaacutetico (Mas-Coma et al 2008) por lo
que el marcador CO1 utilizado permitioacute diferenciar ejemplares adultos de F hepatica y
conocer si los polimorfismos son poblacionales o individuales Para ello se procedioacute a
estudiar los paraacutesitos mediante meacutetodos moleculares optando por la secuenciacioacuten de
genes y espaciadores del ADN como dianas maacutes adecuadas y aportando el maacuteximo de
informacioacuten para el estudio epidemioloacutegico Por la manera de manifestarse la
enfermedad se sugiere la conveniencia de ofrecer una base de genes sobre la cual las
regiones puedan proceder a describir sus situaciones epidemioloacutegicas incluyendo los
estudios sobre transmisioacuten para caracterizar el paraacutesito en los distintos lugares y
comprender el polimorfismo de los trematodes involucrados en cada lugar permitiendo
constituir un marcador de gran utilidad para los estudios epidemioloacutegicos y las estrategias
de control (Mas-Coma 2005) Las secuencias de ADN constituyen el uacutenico meacutetodo capaz
de diferenciar especies y tambieacuten diferenciar poblaciones y cepas (Bargues y Mas-Coma
2005) de modo que sean vaacutelidos para la distincioacuten de la variabilidad intraespeciacutefica con
caraacutecter sistemaacutetico (subespecies) pero tambieacuten de cepas geograacuteficas razas
susceptibles o resistentes a la transmisioacuten etceacutetera
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1025 - Resistencia antiparasitaria
Si bien se recuperaron ejemplares procedentes de animales sacrificados en el valle de
Fiambalaacute no habiacutea datos sobre la susceptibilidad o resistencia a antihelmiacutenticos en las F
hepaticas obtenidas sin embargo ya que ninguacuten tipo de tratamiento antihelmiacutentico se
lleva a cabo en los campos donde los animales fueron criados era poco probable aislar
susceptibles a los compuestos fasciolicidas incluyendo albendazoles (ABZ) por lo que
es importante la identificacioacuten de la sensibilidad y de los ejemplares resistentes de La
Puerta de Tatoacuten
En aislamientos de F hepatica ABZ-susceptibles en la cuenca del Salado tales como la
cepa Cullompton ABZ mostroacute excelente actividad y alta eficacia ovicida (Aacutelvarez et al
2009) incluso a concentraciones tan bajas como 005 nmolml No obstante en los
aislamientos del Centro de Diagnoacutestico Veterinario Facultad de Ciencias Veterinarias
Universidad Nacional de La Plata para Sanabria et al (2013) no fue inhibida incluso en
la maacutes alta concentracioacuten probada (5 nmolml)
Entre los paraacutesitos obtenidos se ha aislado una cepa del trematode resistente al
triclabendazol la cual seraacute utilizada en futuras investigaciones Los resultados
preliminares utilizando RAPD-PCR con ADN de cepas de F hepatica sensibles o
resistentes al triclabendazol en el valle de Fiambalaacute presentaron diferencias significativas
entre ellas las cuales podriacutean ser uacutetiles en la deteccioacuten de cepas de campo de F
hepatica resistentes al triclabendazol (Scarcella et al 2011) Los resultados obtenidos
son altamente indicativos de la presencia de F hepatica TCBZ-resistente en animales del
valle de Fiambalaacute
Tal como lo proponen Olaechea et al (2011) las estrategias para minimizar el desarrollo
de resistencia antiparasitaria necesitan incluir el uso de combinaciones sineacutergicas de
drogas junto con el disentildeo de programas integrados de manejo y la buacutesqueda de
alternativas a los faacutermacos en particular las vacunas (Fairweather y Boray 1999)
Melero et al (1991) por primera vez en el paiacutes utilizaron triclabendazol para un
tratamiento humano en la ciudad de Coacuterdoba y a partir de ese caso se indica como
droga de eleccioacuten en las personas enfermas de Fasciolosis Se cuenta con una amplia
revisioacuten sobre el uso de TCBZ en el control de la Fasciolosis (OMS 2006) donde se
alerta sobre la gravedad que la resistencia al faacutermaco demostrada en animales se
presente en humanos especialmente en nintildeos (Hillyer et al 2001)(Esteban et al 2002)
A pesar que en diciembre de 1997 el Comiteacute de Expertos de la Organizacioacuten de las
Naciones Unidas (ONU) recomendoacute incluir al triclabendazol en la lista de drogas
esenciales (Savioli et al 1999) el triclabendazol de uso veterinario ha sido utilizado en
Argentina para el tratamiento de la Fasciolosis humana mostrando una buena eficacia y
tolerabilidad con escasos efectos adversos (Jave et al 1999)
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103 - EN LOS LIMNEIDOS
Lymnaea viator era la uacutenica especie involucrada en la transmisioacuten de F hepatica en la
provincia de Catamarca Bacigalupo la citoacute por primera vez en 1939 al encontrarla en los
alrededores de la ciudad de San Fernando del Valle En la deacutecada de 1980 fue
reconocida en trabajos arqueoloacutegicos realizados por Morton (1986) en el departamento
Santa Mariacutea mientras Ubaid (1989) la halloacute en el departamento Pacliacuten y en este estudio
en el valle de Fiambalaacute En los restantes departamentos donde se presenta la infeccioacuten
por F hepatica se desconoce queacute especie de limneido actuacutea como hospedador
intermediario ya que no se han llevado a cabo estudios epidemioloacutegicos integrales y la
prevalencia de Fasciolosis en el ganado bovino es estimada sin corroborar los datos en
los decomisos de hiacutegados en mataderos municipales
Desafortunadamente la mayoriacutea de las especies de limneidos presentan un fenotipo
similar con caracteriacutesticas morfoloacutegicas y morfomeacutetricas que hacen muy difiacutecil su
diferenciacioacuten lo que a veces incluso impide su clasificacioacuten La similitud morfoloacutegica
puede ser consecuencia para Bargues et al (2012) de una evolucioacuten convergente hacia
la adaptacioacuten a un comportamiento anfibio
1031 - Caracteriacutesticas fenotiacutepicas
El estudio fenotiacutepico realizado en el valle de Fiambalaacute ha demostrado que en la
variabilidad intraespeciacutefica de L neotropica y L viator existe superposicioacuten en todas las
caracteriacutesticas de la conchilla con excepcioacuten de la longitud maacutexima que puede ser maacutes
larga en L viator Desafortunadamente no hay ninguna conclusioacuten definitiva sobre esta
caracteriacutestica potencialmente diferente dependiendo del crecimiento de la conchilla
Ademaacutes las dos especies coexisten en las mismas colecciones de agua recordando una
situacioacuten similar que Mera y Sierra (2010) encuentra en muchos lugares de la provincia
de Mendoza donde hay superposicioacuten de especies Tambieacuten para Bargues et al (2011 a)
un fenoacutemeno que lleva a la confusioacuten entre los limneidos se debe a la imposibilidad de
distinguir entre especies y a las repercusiones para la transmisioacuten de la enfermedad
atribuidas a L truncatula y L schirazensis
Se presentan en Catamarca varias zonas endeacutemicas de Fasciolosis animal en las que no
se conoce la especie de limneido involucrada En algunos departamentos o regiones
donde pueden coexistir varios caracoles intermediarios no se sabe cuaacutel es el principal y
cuaacutel el potencial tal como Iturbe y Muntildeiz (2012) demuestran que ocurre en Cuzco Peruacute
En el valle de Fiambalaacute como biotopo de colecta se halloacute ademaacutes L neotropica que
adquiere importancia en la dispersioacuten geograacutefica y colonizacioacuten de nuevas poblaciones
de limneidos introducidos en Argentina
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1032 Importancia de las influencias ambientales
A diferencia de lo que sostienen Pino et al (1995) las condiciones climaacuteticas de la zona
de estudio que podriacutean parecer desfavorables a la presencia de limneidos (escasos diacuteas
de lluvia y temperatura maacutexima elevada) es relevante sentildealar la importancia de las
condiciones micro climaacuteticas para el desarrollo del ciclo bioloacutegico del trematodo
Para Malone et al (1998) la asociacioacuten entre la proporcioacuten de casos de Fasciolosis y la
zona de estudio estaacute relacionada con la temperatura del lugar En la mayoriacutea de las
regiones donde la enfermedad se presenta el ciclo de vida se completa maacutes raacutepidamente
porque las temperaturas pueden ser ideales para el raacutepido desarrollo del paraacutesito en su
hospedador intermedio mientras que en otras regiones pueden tardar hasta maacutes de un
antildeo para completarlo
Como consecuencia la expresioacuten de la enfermedad y la proliferacioacuten se pueden retrasar
o incluso verse minimizada Conforme a Mas-Coma (2001) las mayores altitudes no son
consideradas negativas y se atribuye a que el terreno montantildeoso presenta depresiones
con acumulacioacuten de agua especialmente en eacutepocas de alta precipitacioacuten que se tornan
las ideales para el haacutebitat del caracol hecho que no pudo demostrarse en este estudio
por sobre los 2800 msnm
La precipitacioacuten como variable es abordada en sus estudios de Fasciolosis por Malone
et al (1998) al sostener que proporciona una condicioacuten adecuada para el haacutebitat de
caracoles Aunque el mayor riesgo de ocurrencia de la enfermedad se produce en
lugares donde el valor de la precipitacioacuten anual es alto asociada con la consiguiente
humedad del suelo en la zona de estudio de esta tesis no se ha visto disminuido el
desarrollo de los caracoles a pesar de un menor volumen de precipitacioacuten
1033 - Estudios en el laboratorio
En el laboratorio las teacutecnicas de criacutea e infeccioacuten experimental de caracoles se mostraron
aptas para el mantenimiento de los moluscos y para la confirmacioacuten como hospedador
intermediario de F hepatica en la regioacuten Son teacutecnicas sencillas simples y que no
requieren muchos cuidados salvo el inconveniente de la contaminacioacuten del medio donde
se los conserva En cuanto a las incubaciones de huevos para la obtencioacuten de miracidios
utilizados en la infeccioacuten de los limneidos se obtuvieron resultados de infeccioacuten
relativamente bajos (no maacutes del 4285)
Para el diagnoacutestico de infecciones de F hepatica en su hospedador intermediario Pointer
et al (2006) utilizan la observacioacuten mediante el examen microscoacutepico de los estadios en
desarrollo dentro del molusco con o sin el aplastamiento del caracol En la tesis se
comprueba que estos procedimientos son tediosos y requieren largas horas de trabajo
ademaacutes de un ojo entrenado en la identificacioacuten parasitaria debido a que las infecciones
en el periacuteodo prepatente (sin emisioacuten de cercarias) son difiacuteciles de identificar Por otra
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parte el miracidio que ingresoacute recientemente soacutelo puede visualizarse mediante cortes
histoloacutegicos La emisioacuten de cercarias utilizada en este trabajo puede ofrecer baja
sensibilidad de deteccioacuten de los estadios tempranos del paraacutesito pero ha demostrado
resultados positivos
Otra dificultad en la deteccioacuten e identificacioacuten del trematode se produce cuando los
caracoles colectados en el campo mueren antes de llegar al laboratorio o durante el
periacuteodo de observacioacuten para la emisioacuten de cercarias La muerte del hospedador
intermediario con la consiguiente lisis tisular hace imposible la observacioacuten de las larvas
que pudieran estar presentes hecho no ocurrido en este estudio ya que el porcentaje de
limneidos muertos fue bajo
1034 - Identificacioacuten microscoacutepica y molecular
Si se considera a la microscopiacutea como la prueba de referencia que arroja los resultados
absolutos (prueba ldquogold standardrdquo) la especificidad para la teacutecnica de PCR utilizada en
esta investigacioacuten resultariacutea baja Seguacuten Cucher et al (2005) esto podriacutea interpretarse
como que la teacutecnica molecular es altamente inespeciacutefica dado el mayor nuacutemero de
positivos obtenidas por la misma Sin embargo la PCR se fundamenta en la identificacioacuten
genoacutemica del paraacutesito dentro del caracol realizando estudios detallados de la secuencia
del amplicoacuten generado y deberiacutea ser considerada tan especiacutefica como la microscopiacutea En
cuanto a la sensibilidad empleando a la microscopiacutea como prueba ldquogold standardrdquo la
PCR detecta la totalidad de los individuos infectados y un mayor nuacutemero de ejemplares
infectados imperceptibles por anaacutelisis directo De acuerdo con Hamburger et al (2004) al
considerar como verdaderos positivos a aquellos caracoles que fueron detectados por
PCR la sensibilidad del anaacutelisis parasitoloacutegico directo seraacute baja debido a que los
estadios larvales dentro del molusco pueden no detectarse Esto demuestra la menor
sensibilidad del anaacutelisis directo frente a la teacutecnica molecular la cual presentoacute un miacutenimo
de deteccioacuten comparable a una porcioacuten de un miracidio mientras que el anaacutelisis directo
se limita a detectar solamente cercarias y en algunos casos redias
Los resultados obtenidos por microscopiacutea oacuteptica son un reflejo del balance entre las
condiciones abioacuteticas que deben enfrentar el paraacutesito y su hospedador intermediario y la
iacutentima relacioacuten que se establece entre ambos una vez que el miracidio logra ingresar al
caracol Esto es asiacute porque ambos organismos son absolutamente dependientes de las
condiciones de humedad y temperatura del medio para poder sobrevivir y cumplir su ciclo
de vida y porque los valores de prevalencia obtenidos por el anaacutelisis directo
corresponden a las infecciones exitosas en las que el paraacutesito logroacute sobrevivir al sistema
de defensa interno del molusco Por lo tanto se infiere que la regioacuten del valle de
Fiambalaacute es apta para el desarrollo de ambos organismos por los factores mencionados
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anteriormente o porque la susceptibilidad del hospedador a la infeccioacuten la infectividad
del trematode o la oferta de paraacutesito son elevadas
En este trabajo se utilizoacute la teacutecnica de microscopiacutea para detectar infeccioacuten en limneidos y
se identificoacute a F hepatica a partir de la morfologiacutea de las redias y cercarias por
considerar que estas teacutecnicas son maacutes econoacutemicas para detectar infeccioacuten en caracoles
provenientes del campo En un todo de acuerdo con Fried (1997) se observoacute que las
cercarias identificadas morfoloacutegicamente como de F hepatica se enquistaron sobre
distintas superficies lo que permitioacute ratificar su identidad ya que las pocas especies de
trematodos que presentan metacercarias con este comportamiento poseen una
morfologiacutea muy distinta a la de F hepatica
El meacutetodo molecular debe ser empleado para detectar infecciones naturales aplicarse en
estudios epidemioloacutegicos a gran escala y para establecer la distribucioacuten geograacutefica del
paraacutesito estudiando nuevas zonas sin reportes de enfermedad Tambieacuten puede aplicarse
a determinar la prevalencia de infeccioacuten El liacutemite de deteccioacuten obtenido puede ser
considerado satisfactorio desde el punto de vista bioloacutegico ya que seguacuten la teacutecnica
desarrollada por Kaplan et al (1995) un umbral de deteccioacuten miacutenimo de 1ng es suficiente
para detectar la presencia de un miracidio a las 4 horas post-infeccioacuten Por lo tanto la
teacutecnica utilizada en esta tesis posee la sensibilidad necesaria para detectar al paraacutesito de
forma temprana en su hospedador intermediario
Aunque la determinacioacuten de la infeccioacuten por microscopiacutea y morfologiacutea posee ciertas
ventajas frente a otras teacutecnicas maacutes modernas como las de PCR ya que permiten
identificar distintos estadios larvales y tambieacuten se pueden reconocer infecciones exitosas
a partir del hallazgo de formas infectivas como lo demostraron Caron et al (2008) la
identidad de las formas inmaduras tambieacuten pudo ser confirmada por PCR
A pesar que Rognlie et al (1996) observaron con respecto al hospedador intermediario
que F hepatica es capaz de propagarse infectando unos pocos caracoles dentro de una
poblacioacuten seguramente debido a su gran capacidad de multiplicacioacuten asexual dentro del
hospedador intermediario los limneidos observados en el laboratorio no presentaron
numerosas formas intermedias que permitieran reconocerlas faacutecilmente
La prevalencia de infeccioacuten natural por F hepatica registrada en limneidos durante el
estudio fue de 25 considerando soacutelo a los caracoles estudiados en el Instituto Malbraacuten
Este nivel de infeccioacuten es similar al 2 registrado en L truncatula en la provincia de
Neuqueacuten por Rubel et al (2005) y en L viatrix en la provincia de Mendoza por Issia et al
(2008) y superior al 07 registrado en L viatrix en los valles Andino-Patagoacutenicos de la
provincia de Chubut por Kleiman et al (2007) o a los 014 y 122 presentados por
Ueta (1980) en Brasil Estos valores estaacuten dentro del rango de variabilidad que presenta
la prevalencia de infeccioacuten natural por F hepatica en su hospedador intermediario que
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para Malone et al (1984) y Rognlie et al (1996) oscila entre 001 y 883 no soacutelo
entre especies de caracoles sino para una misma especie entre regiones como afirma
Gutieacuterrez et al (2005) Esta variabilidad tambieacuten refleja la dificultad para comparar el rol o
la importancia de las distintas especies de limneidos en la transmisioacuten de F hepatica Lo
que siacute es posible afirmar es que con bajas prevalencias en el caracol se observan
prevalencias mayores a 25 en el hospedador definitivo como tambieacuten lo demuestran
Kleiman et al (2007) Rubel et al (2005) y esta tesis lo cual refleja la eficiencia en la
transmisioacuten de F hepatica
Esta comparacioacuten permite concluir que en la zona de estudio Lymnaea spp es un
hospedador intermediario capaz de multiplicar al paraacutesito exitosamente y asegurar la
endemicidad de la infeccioacuten Las caracteriacutesticas que le ayudan a F hepatica a adaptarse
y establecerse exitosamente en ambientes con distintas condiciones son como afirman
DeKock et al (1989) su capacidad para reproducirse por autofecundacioacuten su alto
potencial reproductivo y su tolerancia a un amplio rango de temperaturas como
demostraron Harris y Charleston (1977 c)
1035 - Caracteriacutesticas moleculares
Las secuencias obtenidas demuestran la presencia de L neotropica en el valle de
Fiambalaacute lo que confirma el primer hallazgo de esta especie en Catamarca y en las
provincias del noroeste El hallazgo antildeade complejidad a la transmisioacuten y a la
epidemiologiacutea de Fasciolosis Las caracteriacutesticas ecoloacutegicas de este limneido que vive
en colecciones pequentildeas y superficiales de agua frecuentadas por el ganado sugieren
que puede ser llevado de un lugar al otro permaneciendo en el barro seco de las pezuntildeas
de los animales que las transportan de modo similar a como plantea Mas-Coma et al
(2009) ocurre con L truncatula
L viatrix L truncatula y L neotropica son limneidos muy similares desde el punto de
vista fenotiacutepico incluyendo para Samadi et al (2000) y Pointier et al (2006) las
caracteriacutesticas de la conchilla y la anatomiacutea del caracol o caracteriacutesticas ecoloacutegicas
seguacuten Euzeby (1971) Mera y Sierra (2001) y Ciocco y Scheibler (2008) Esta semejanza
planteoacute un gran problema en el trabajo de campo al no poder tener manera de
diferenciarlos por lo que se recurrioacute a obtener secuencias del marcador de ADN para
poder distinguir entre una y otra especie
Por otra parte el problema de la diferenciacioacuten tambieacuten se refiere a varias teacutecnicas
moleculares que no muestran suficiente precisioacuten Por ejemplo las teacutecnicas moleculares
que se basan en el gen 18S ARNr o partes de eacutel como la heacutelice E10-1 de la regioacuten
variable V2 que es uacutetil para la diferenciacioacuten de limneidos europeos utilizada por
Bargues y Mas-Coma (1997) evidentemente no son uacutetiles en la Argentina debido a la
existencia de especies como L viator y L neotropica que presentan ideacutentica secuencia
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18S En consecuencia la teacutecnica recientemente propuesta por Duffy et al (2009) basada
en la secuencia 18S en estrategia de PCR en tiempo real para la discriminacioacuten raacutepida
entre las principales especies de limneidos de Argentina no se puede aplicar porque no
distingue entre estas dos especies
Todo sugiere que probablemente errores de clasificacioacuten de limneidos se pueden incluir
en varios de los estudios sobre Fasciolosis realizados en Argentina en la que L viator
participa especialmente en la transmisioacuten de la enfermedad Muchos de estos trabajos
probablemente incluiacutean L neotropica o incluso L truncatula Por lo tanto se necesitan
anaacutelisis moleculares apropiados para evaluar la distribucioacuten geograacutefica de cada una de
estas tres especies de limneidos en Argentina para las que aparecen ITS-2 ITS-1 y cox1
como los marcadores maacutes uacutetiles
1036 - Lymnaea neotropica
Las poblaciones de L neotropica del valle de Fiambalaacute presentan secuencias ideacutenticas
para los cuatro marcadores de ADN utilizados incluyendo dos nuevos haplotipos de ITS-
1 y cox1 (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) El nuevo haplotipo ITS-1 (Lneo-HB) no es de
utilidad dada la uniformidad hasta ahora detectada en el nivel de los separadores de
ADNr nuclear Del ITS-1 soacutelo se conoce el haplotipo (Lneo-HA) previamente informado
de Lima (localidad tipo) (Bargues et al 2007 a) y Cajabamba (Bargues et al 2012) en el
Peruacute y tambieacuten en Perdriel Departamento de Lujaacuten de Cuyo Mendoza Argentina (Mera
y Sierra et al 2009) El nuevo haplotipo del marcador de ADN mitocondrial (Lneo-cox1e)
se diferencia de otros haplotipos cox1 descritos para la especie en paiacuteses como Peruacute
Venezuela y Argentina Este uacuteltimo nuevo haplotipo Lneo-cox1e soacutelo muestra identidad
con la secuencia cox1 del NTC2 aislada (JN872453) e informada anteriormente para la
misma especie de limneidos en Mendoza (Standley et al 2013) aunque el fragmento
disponible a partir de ese aislamiento es maacutes corto (655 pb vs 672 pb)
Los haplotipos encontrados en los otros dos marcadores en L neotropica uno en ADNr
ITS-2 (Lneo-H1) y el otro en el ADNmt 16S (Lneo-16SA) fueron informados en Perdriel
(Mera y Sierra et al 2009) Tambieacuten se detectaron estos dos haplotipos ITS-2 y 16S en el
Peruacute en la localidad de Lima (Bargues et al 2007 a) y tambieacuten en Cajamarca (Bargues
et al 2012)
1037 - Lymnaea viator
De L viator se han encontrado en esta investigacioacuten 4 nuevos haplotipos ADNr ITS-2 y
ITS-1 y ADNmt 16S y cox1 (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) La deteccioacuten en la
poblacioacuten de limneidos de un nuevo haplotipo en todos los marcadores estudiados es
realmente sorprendente Previamente en diferentes localidades de Chile Argentina y
Uruguay fueron descritos haplotipos y se aislaron secuencias de los mismos marcadores
de ADN (Veacutease anexo Tablas 16-19 pp 177-180)
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El anaacutelisis de secuencias de los 4 marcadores de ADN de L neotropica y L viator
disponibles en las bases de datos de secuencias muestra que varias secuencias fueron
depositadas sin verificar antes si la misma ya estaba alliacute Por ejemplo en el nivel ITS-2
los nuacutemeros de secuencia de adhesioacuten HQ283265 y JN614465 correspondientes a L
viator de Riacuteo Negro Argentina son ideacutenticos a la secuencia AM412224 de L viator
ventricosa H1 de la localidad tipo que es tambieacuten de Riacuteo Negro (Bargues et al 2007 a)
Del mismo modo el nuacutemero de ITS-1 secuencia de adhesioacuten HQ283254 es ideacutentica a la
secuencia AM412227 de L viator ventricosa HA de la localidad tipo de Riacuteo Negro
(Bargues et al 2007 a) Situaciones similares se encuentran en secuencias de ADNmt tal
como la secuencia de L neotropica 16S JN872473 que es ideacutentica a HE610433 y que es
el haplotipo Lneo-16SA de la localidad tipo de la especie (Bargues et al 2012) Tambieacuten
la secuencia cox1 de L viator nuacutemero JN614397 de Riacuteo Negro es ideacutentica a AM494010
de Lvia-cox1a de la localidad de Riacuteo Negro (Bargues et al 2007 a) Ademaacutes las
secuencias depositadas en las bases de datos como pertenecientes a L Viator ITS-1
(JF960165 y JF960166) en realidad pertenecen a L neotropica aunque la adscripcioacuten de
las especies fue corregida en la publicacioacuten (Sanabria et al 2013)
Desde el punto de vista taxonoacutemico-sistemaacutetico hay que sentildealar que estas 2 especies de
limneidos han sido re-atribuidas al geacutenero Galba en la literatura reciente (Standley et al
2013) Este cambio parece ser precipitado dadas las diferencias en los acuerdos de rama
que aparecen en diferentes aacuterboles filogeneacuteticos en funcioacuten de las especies incluidas en
los anaacutelisis (ver Bargues et al 2011 a) Por lo tanto ambas especies se mantienen aquiacute
en el geacutenero Lymnaea sensu lato conforme a artiacuteculos anteriores sobre el mismo tema
(Bargues et al 2007 a 2011 a b c 2012)
El hallazgo de un alto nuacutemero inusual de haplotipos de ADN en ambas especies de
limneidos y los factores climaacuteticos extremos (casi total falta de precipitaciones y de
humedad) impropio de F hepatica y del desarrollo de los caracoles de agua dulce
demuestran que los focos de transmisioacuten son completamente aislados A su vez se
puede concluir que tanto los limneidos como F hepatica llegaron al valle a traveacutes de la
introduccioacuten de ganado Por otra parte las diferencias de ADN en relacioacuten con otras
poblaciones de L neotropica y de L viator estudiadas previamente en Argentina
sugieren que este fenoacutemeno de introduccioacuten fue independiente de los movimientos de
extensioacuten que permitieron que estas dos especies de limneidos se expandan por el paiacutes
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CONCLUSIONES
Los hallazgos del estudio sobre la epidemiologiacutea de la Fasciolosis realizado en el valle de
Fiambalaacute y los correspondientes anaacutelisis en seres humanos animales y hospedadores
intermedios han permitido establecer ciertos hechos y alcanzar una serie de conclusiones
que a continuacioacuten se enumeran
La endemia poblacional de Fasciolosis estariacutea determinada por los siguientes
factores a) la presencia de reservorios en animales infectados b) los caracoles
limneidos susceptibles (hospedadores intermediarios) que amplifican la
produccioacuten de cercarias
El nuacutemero de casos de Fasciolosis humana diagnosticados en el valle de
Fiambalaacute es mucho mayor que los encontrados en otras regiones del paiacutes
transformaacutendola en una zona endeacutemica donde los ejemplares de F hepatica y los
hospedadores intermedios presentan caracteriacutesticas morfoloacutegicas y moleculares
particulares
Debido a la importancia cliacutenica y patogenicidad de la Fasciolosis los anaacutelisis de
prevalencia obtenidos permiten concluir que la presencia de Fasciolosis humana
debe ser considerada como una patologiacutea infecciosa de gran importancia en
Salud Puacuteblica
La prevalencia en seres humanos obtenida mediante estudios inmunoloacutegicos
convierten a la regioacuten estudiada en la de prevalencia maacutes elevada de la Repuacuteblica
Argentina y debe ser considerada como hiperendeacutemica
La comparacioacuten de diferentes metodologiacuteas de diagnoacutestico permite afirmar que
con la teacutecnica de ELISA se logroacute el mayor nuacutemero de diagnoacutesticos demostrando
relaciones estadisticamente significativas con la edad y la eosinofilia
El presente estudio sobre la epidemiologiacutea de la Fasciolosis humana abarcoacute 305
pacientes siendo la mayor casuiacutestica estudiada en Argentina y reveloacute una mayor
predominancia en la edad comprendida entre 5 y 19 antildeos
El dolor abdominal tipo coacutelico en epigastrio e hipocondrio derecho es el siacutentoma
maacutes frecuente en Fasciolosis ya sea en la fase aguda o croacutenica de la
enfermedad tanto en nintildeos como en adultos
La hepatomegalia y la eosinofilia caracteriacutesticas de la fase aguda no estaacuten
presentes necesariamente en todos los pacientes croacutenicos por lo que su ausencia
no descarta la posibilidad de esta parasitosis en estos casos
La interpretacioacuten de las manifestaciones cliacutenicas el uso de teacutecnicas de
diagnoacutestico por imaacutegenes la aplicacioacuten de meacutetodos de diagnoacutestico etioloacutegico
mediante microscopiacutea en materiales de heces y el uso de herramientas aplicadas
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a diferentes especiacutemenes bioloacutegicos permitieron mediante su utilizacioacuten
sistemaacutetica e integrada realizar el diagnoacutestico e identificacioacuten de Fasciolosis
El estudio ha estimado por primera vez en la provincia de Catamarca una alta
prevalencia de Fasciolosis en la poblacioacuten animal -cameacutelidos sudamericanos
mulares y rumiantes menores- con la teacutecnica de SDSS que permitioacute una faacutecil
identificacioacuten de huevos en heces
El uso integrado de diversas teacutecnicas microscoacutepicas permitioacute una mejor
comprensioacuten de la morfologiacutea de F hepatica Los resultados demostraron
diferencias en las muestras de cada localidad principalmente en la distribucioacuten y
cantidad de espinas en el tegumento
El marcador CO1 muestra que los ejemplares adultos extraiacutedos de hiacutegados de los
animales no se diferencian de otros en las comparaciones efectuadas en distintas
localizaciones
El uso de faacutermacos antihelmiacutenticos es la uacutenica herramienta que se dispone en el
presente frente a Fasciolosis aunque el fenoacutemeno de resistencia encontrado es
un hecho altamente preocupante y es necesario definir nuevas estrategias de
tratamiento
Por los resultados obtenidos se concluye que las condiciones ambientales a
pesar de sus caracteriacutesticas extremas en el valle de Fiambalaacute son favorables
para la mantencioacuten y desarrollo de los caracoles en las zonas donde se localizan
fuentes permanentes de agua
Las teacutecnicas de criacutea e infeccioacuten experimental se mostraron aptas para el
mantenimiento del molusco en el laboratorio y para la confirmacioacuten de la infeccioacuten
natural y experimental de los limneidos con formas larvarias de F hepatica
La prevalencia general de limneidos naturalmente infectados en colectas
realizadas en las vegas estudiadas denota la expansioacuten de F hepatica en el valle
de Fiambalaacute a niveles preocupantes
Las especies de limneidos halladas no se diferencian por su aspecto externo
(morfologiacutea de la conchilla) y fueron necesarios estudios moleculares para
diferenciarlos
Se demostroacute que los caracoles recolectados en la zona de estudio hospedadores
intermediarios de F hepatica son de las especies L viator y L neotropica las
que cohabitan en los mismos biotopos
El hallazgo de L neotropica constituye el primer registro en Catamarca y la
Regioacuten Noroeste Argentina
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La infeccioacuten natural por F hepatica en L neotropica constituye el primer
reconocimiento para la Argentina
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RECOMENDACIONES
Las soluciones para los problemas mencionados no pueden ser pensadas desde una
perspectiva uacutenica ni desvinculada del aacutembito regional La situacioacuten hallada en el aacuterea
indica que para el estudio de Fasciolosis es imperioso el trabajo en equipos
multidisciplinarios que aborden el tema desde un enfoque integral
Es necesario contar en los Centros de Salud con teacutecnicas de diagnoacutestico de mayor
sensibilidad y especificidad tanto para la cliacutenica para determinar casos agudos o como
prueba de tamizaje La ausencia de implementacioacuten de meacutetodos diagnoacutesticos confiables
en el Aacuterea Programaacutetica es el principal factor que lleva a subestimar esta zoonosis
Los enfermos infectados por F hepatica muchas veces pasan por los servicios cliacutenicos
sin ser jamaacutes diagnosticados resultando preciso corregir tan grave deficiencia Los
pacientes que presentan dolor abdominal y una alta eosinofilia deben ser
cuidadosamente estudiados con el fin de descartar esta parasitosis
Se comproboacute que Fasciolosis es endeacutemica en la regioacuten y la situacioacuten debe ser
reconocida como una emergencia de Salud Puacuteblica para la aplicacioacuten de las teacutecnicas
diagnoacutesticas de sedimentacioacuten raacutepida y ELISA y agilizar la implementacioacuten de la terapia
farmacoloacutegica con triclabendazol (Egatenreg) o el uso de futuras drogas en casos de
resistencia
Por otro lado aunque no es propoacutesito de esta tesis es difiacutecil estimar el impacto
econoacutemico de la Fasciolosis humana -que se demostroacute afecta principalmente a los nintildeos-
pero los efectos de la infeccioacuten y las secuelas no solo tienen un impacto econoacutemico en el
Sistema de Salud sino tienen un impacto negativo considerable en el desarrollo y la
salud de los pacientes infectados especialmente en los grupos etarios maacutes joacutevenes
La informacioacuten obtenida contribuye a identificar el riesgo en la regioacuten y deberiacutea permitir
en adelante dirigir las actividades de prevencioacuten y control asiacute como estimular al personal
de salud en la buacutesqueda de este diagnoacutestico durante su actividad asistencial
La infeccioacuten por F hepatica afecta significativamente tanto a los animales como al ser
humano en esta regioacuten y se requiere que las autoridades de los Ministerios
correspondientes tengan una mayor participacioacuten en el control de esta parasitosis tanto
desde el punto de vista educativo como para controlar el efecto que tienen los animales
como hospedadores definitivos en la diseminacioacuten de la Fasciolosis puesto que estaacuten
expuestos a constante reinfeccioacuten
Para tratar de interrumpir la transmisioacuten de la Fasciolosis en los seres humanos se
requieren dos medidas paralelas La primera consiste en establecer programas eficaces
de Salud Puacuteblica Veterinaria para contener las fuentes de infeccioacuten en los animales La
segunda consiste en educar a las personas que viven en las aacutereas endeacutemicas sobre los
riesgos de consumir las plantas acuaacuteticas no cocidas agua y sobre la importancia de la
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eliminacioacuten segura de los desechos humanos Ademaacutes se propone gestionar
calentadores solares individuales que permitan en cada vivienda obtener agua hervida
para consumo e higiene de vajillas y verduras
Se precisa el control de la Fasciolosis animal que concurrentemente incluya el
tratamiento masivo del ganado para evitar la infeccioacuten humana Los resultados sugieren
que de no contar con planeamientos estrateacutegicos teacutecnicamente bien estructurados la
probabilidad de emergencia de paraacutesitos resistentes a triclabendazol es alta y deberiacutea
tratarse a los animales con fasciolicidas alternativos como clorsulon o closantel que han
mostrado alta efectividad de cura de la infeccioacuten La gran dependencia de un uacutenico
faacutermaco pone liacutemites y torna necesarias estrategias de tratamiento de la Fasciolosis En
caso que la resistencia se desarrolle auacuten maacutes la perspectiva seraacute alarmante
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171
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Tabla 11 Caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina de acuerdo con los diferentes sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizados
Foco de transmisioacuten Valle de Fiambalaacute
Coordenadas 27deg29acute52acuteS 67deg35acute 535uml W
Altitud en metros 1630
Clase Koeppen BWk B = Clima aacuterido
D = Deseacutertico
k = Friacuteo
Clima Budyko Deseacutertico Iacutendice de sequiacutea por radiacioacuten 9236 Budyko evaporacioacuten en mmantildeo 151 Budyko escorrentiacutea en mmantildeo 0 Budyko evaporacioacuten en 100 Budyko escorrentiacutea en 0
Aridez Aacuterido Iacutendice de aridez 009 Iacutendice de humedad en -91 Iacutendice De Martonne 6 Deacuteficit de precipitacioacuten en mmantildeo 1547
Iacutendice continental de Gorczynski 385
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Tabla 12 Datos comparativos de los tamantildeos obtenidos en ejemplares de F hepatica
del valle de Fiambalaacute con las de diferentes lugares estudiados
Paraacutemetros Catamarca Salta Cordeiro Larvas Galicia
Largo del cuerpo (mm) Ancho del cuerpo (mm)
2438 plusmn 223
1044 plusmn 129
1492 plusmn 182
878 plusmn 080
2068 plusmn 268
1073 plusmn 186
3447 plusmn 337
1233 plusmn 206
1625 plusmn 20
971 plusmn 125
Razoacuten LCAC Largo del cono(mm) Ancho del cono (mm) Aacuterea de la ventosa oral(mm) Aacuterea de la ventosa ventral(mm) Distancia VO- VV (mm)
237 plusmn 034
261 plusmn 030
343 plusmn 046
041 plusmn 007
110 plusmn 036
214 plusmn 022
171 plusmn 022
180 plusmn 023
285 plusmn 032
042 plusmn 004
120 plusmn 015
139 plusmn 018
196 plusmn 031
314 plusmn 085
250 plusmn 063
039 plusmn 006
090 plusmn 037
144 plusmn 021
286 plusmn 048
365 plusmn 060
481 plusmn 035
046 plusmn 016
120 plusmn 018
258 plusmn 020
------------------
174 plusmn 025
317 plusmn 032
041 plusmn 012
098 plusmn 028
------------------
L viator
17
4
Tabla 13 ADN ribosomal nuclear y haplotipo de ADN mitocondrial para la identificacioacuten de coacutedigo L neotropica y L viator colectados en el
valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina
Especies de limneidos
Poblaciones ADNr ITS-2 ADNr ITS-1 ADNmt 16S ADNmt cox1
Lugar H Acc No H Acc No H Acc No H Acc No
Valle de Fiambalaacute Tinogasta
Nomenclatura de la combinacioacuten H
L neotropica Provincia de Catamarca 1 AM412225 B KT215347 16S-
A HE610433 e KT215350 Lneo-1B16SAcox1e
Valle de Fiambalaacute Tinogasta
Provincia de Catamarca 3 KT215348 C KT215349
16S-
B KT215352 d KT215351 Lvia-3C16SBcox1d
Nota H = haplotipo = Nuevos haplotipos para las correspondientes especies de limneidos = Haplotipos solamente preliminares debido a la secuencia
del gen incompleto
175
17
5
Tabla 14 Diferencias de nucleoacutetidos encontradas en el fragmento de la secuencia del gen 16S ADNmt de las poblaciones de L neotropica
estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos 16S aislados de la misma especie disponibles en GenBank
L neotropica haplotipos y aislamientos Paiacuteslugar Posicioacuten del Nucleoacutetido Largo GenBank (pb)
33 3333 1667777767 7777 4690124990 1348
L neo-16SA L neo-16SA
L neo-16S Aislada NtS1 L neo-16S Aislada NtS2 L neo-16S Aislada NtS3
L neo-16S Aislada NtS4
Peruacute Lima Cajamarca Argentina Tatoacuten Catamarca
Argentina Mendoza Argentina Mendoza
Argentina Mendoza Chivilcoy
Argentina Chivilcoy
TTCTTGCCCG A--G --
AAAAAAAT T-- Ghellip-- --
CTT TTGT
425 435 429 429 429
431
HE610433 HE610433 JN872471 JN872472 JN872473
JN872474
Nota Posicioacuten = nuacutemeros referidos a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con M EGA 60 = Ideacutenticas - =
Indeles = Trabajo propio Coacutedigos de haplotipos solamente provisionales debido a secuencias incompletas del gen
176
17
6
Tabla 15 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontradas en la secuencia de fragmento ADNmt del gen cox1 de las poblaciones de L
neotropica estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos cox1 y aislamientos de la misma especie disponibles en
GenBank
L neotropica haplotipos
and aislamientos
Paislocalidad Nucleoacutetido posicioacuten Largo (bp)
Amino acido posicioacuten
GenBank
11 1111122222 2222233333 3333333333 4444444444 5555555555 55666666 1122
233334455 5667788912 4788912244 4777701233 4566777899 0222567889 0122335778 88333456 12722
9401392814 7076827676 4469865803 9136968139 5703358113 5369984032 1623132032 68039210 12315823
L neo-cox1a Peru Lima Peru
Cajamarca L neo-cox1b Argentina
Mendoza L neo-cox1c Venezuela
Carabobo L neo-cox1d Venezuela
Falcon L neo-cox1e Argentina
TatonCatamarca
TCAACCGAGT AGTCTTATTT ATTACAAATT ATAAAATTAA CTTAGAGACT ATGATTTTAG GGTCTCGAGA TAATTTTG 672 DIGIGAW F AM494008
helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphellipAhelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 672 S FN356741
helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphellipGhelliphellip TCGhelliphelliphellip hellipGhelliphelliphelliphelliphellip hellipThelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 672 JF461485 TGGTTTTTC TACTACTACA TAAGTGTTCA GCCTTAATC AAThellipTACTA TCTGCATA AAGTAhellipTTTG CTTACACA 672 V JF461486 Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 672 XXXXXXXX
L neo-cox1
aislada NtC3 Argentina Mza
B Aires Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 ---- JN872454
L neo-cox1 aislada NtC2
L neo-cox1
Argentina Mza Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphellipChelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 ---- JN872453 Argentina Mza Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphellipThelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 --V-- JN872452
aislada NtC1
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizadas con MEGA 60 =
Ideacutenticas iquest= Aminoaacutecido indeterminado - = No secuenciado = Trabajo actual Coacutedigos soacutelo provisionales debidos a secuencias incompletas del Haplotipo
del gen
177
L via aislada VxI3 Argentina Lima Mendoza GCTTGC------- ------------------- --------C helliphelliphellip-- -------------- ----------------
L viaventricosa H1 Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT------------- CTCGC helliphellip--
L via aislada LVX3 Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT-------------- CTCGC helliphelliphellip-- GCTTGCTTGC TT-------------- CTCGC hellip hellip helliphellip-------
L viatrix Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT-------------- -------- helliphelliphelliphelliphelliphellip hellip--- ----------------
423 JX536272 451 AM412224 451 JN614465 445 HQ283265
L via aislada VxI1 Argentina Agua Escondido Mza GCTTGCTTGC TT--------------- GCC--- ------------------ ------------------- --------------- 435 JX536268 L via aislada VxI2 Argentina Azufre Mendoza GCTTGCTTGC TTGCTTGCTT -------- --- ----------------- ------------------- ---------------- 416 JX536269 L via aisalda VxI4 Argentina Linero Mendoza - 436 JX536273
17
7
Tabla 16 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia ADNr ITS-2 de L viator en el valle de Fiambalaacute y otros de Argentina
y haplotipos ITS-2 aislados en la misma especie disponibles en el GenBank
L viator haplotipos Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank
y aislamientos (pb)
134444 4444444444 4444444444 4444444444 5555666666 6666777777 8888690223 3333333334 4444444445 5555555556
6789012345 6789012345 1234241130 1234567890 1234567890 1234567890
L via-H3
L via-H2 Argentina Tatoacuten Catamarca
Chile Casa Blanca Valparaiacuteso
-------------------- -------------------- ---- --GTGTTT TATATTATTA TCTTCTTTCT TTTTTTTCTC GCTTGCTT--- ----------------- ------- helliphellip-
436
443 KT215348
JN051366
Nota Posicioacuten = nuacutemeros referidos a posiciones variables obtenidos en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con MEGA 60 =
Ideacutenticas El sombreado corresponde a las posiciones de microsateacutelites - = Supresiones (en el aacuterea de microsateacutelites) = Trabajo actual =
secuencias ITS-2 incompletas en el 3
178
17
8
Tabla 17 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia del ADNr ITS-1 de L viator colectados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de
Argentina y haplotipos ITS-1 y aislamientos disponibles en GenBank
L viator haplotipos y Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank aislamientos
111111222234 1 1111111112 2222222223 3333333334 444446000034277729
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 123451345683278988
(pb)
L via-HA L via-HB L via-HC L viatrix L via Aislada LVX3 L via Aislada Paysandu L via Aislada VxI1 L via Aislada VxI2 L via Aislada VxI3 L via Aislada VxI4
Argentina Rio Negro Chile Casa Blanca Valparaiacuteso
Argentina Tatoacuten Catamarca Argentina Rio Negro Argentina Rio Negro
Uruguay Paysanduacute Argentina Agua Escondido Mendoza Argentina
Azufre Mendoza Argentina Lima Mendoza
Argentina Linero Mendoza
ATCATTAACG AGTAGCAACA CAACATAACC TTACACTCGC ACAAGG----GCC----A
A ATTGTTGA--
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipA ----TTTGA--
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip--------------
A hellip----T---------
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip----TGAC
---------- GAGTAGC A ----TTGA-- ---------- ---------- ---------- ---------------------------------------------------------- -----C----TTGA-- ---------- ---------- - Ahelliphellip ----TTGA--
---------- --------- Ahelliphellip-----ATTGA-
-
568
574 570 568
567 572
560 525 549
550
AM412227
JN051368 KT215349 HQ283254
JN614428 JF960167
JX536268 JX536269 JX536272 JX536273
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con MEGA 60 =
Ideacutenticas El sombreado corresponde a la posicioacuten de microsateacutelites - = Supresiones = Trabajo actual = ITS-2 secuencias incompletas 5 final
179
17
9
Tabla 18 Diferencias de nucleoacutetidos que se encuentran en la secuencia del gen ADNr 16S y fragmentos del gen
mitocondrial de L neotropica y L viator estudiados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y haplotipos 16S
aislados en la misma especie disponibles en el GenBank
L neotropica y Viator haplotipos y Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank aislamientos (pb)
11112 233333333 116667 77777823394 607777778
346890 12345096982 122345681
L neotropica haplotipo L neo-16SA L neotropica haplotipo L neo-16SA
G neotropica aislado NtS1 G neotropica aislado NtS2 G neotropica aislado NtS3 G neotropica aislado NtS4
Peruacute Lima Peruacute Cajamarca Argentina Tatoacuten Argentina
Mendoza Argentina Mendoza
Argentina Mendoza Chivilcoy
Argentina Chivilcoy
CTTCCTT-GA CCAAG-C-TC GA-T-G -hellip helliphellip--hellip hellip-- hellipAAAAmdashA AA--hellip TT--- G--- --hellip ---- --- helliphellip-- hellip----
C--- helliphellip--T TTTGT
425 437 429 429 429
431
HE610433 HE610433 JN872471 JN872472 JN872473
JN872474
L viator haplotipo Lvia-16SA Chile Casa Blanca Valparaiacuteso --- helliphellipGGATT-C ---- 426 HE610434 L viator haplotipo Lvia-16SB Argentina Tatoacuten Catamarca --- helliphellipGGA-TTC ---- 438 KT215352 G viatrix aislado VxS2 Argentina Agua Escondido amp Azufre Mendoza --- helliphellipGGA-T-C ---- 429 JN872460 G viatrix aislado VxS9 Argentina Cholila Chubut Ghelliphellip--- helliphellipGGA-T-C hellip---- 429 JN872467 G viatrix aislado VxS8 Argentina Linero Mendoza --- GhellipA--T-C ---- 429 JN872466 G viatrix aislado VxS10 Argentina Lima Mendoza hellipChellip--- GhellipA--T-C ---- 429 JN872468 G viatrix aislado VxS4 Argentina Azufre Mendoza AA--- hellipGGA----T-C ---- 429 JN872462 G viatrix aislado VxS12 Argentina Linero Mendoza --- GAGA----T-C hellip---- 429 JN872470 G viatrix aislado VxS6 Argentina Azufre Mendoza GGAC --hellipGGA--T-C TT----- 429 JN872464 G viatrix aislado VxS5 Argentina Azufre Mendoza AAAA GGA--T-C hellip---- 430 JN872463 G viatrix aislado VxS11 Argentina Linero Mendoza GAC --hellipGA--T-C T TT--- 429 JN872469 G viatrix aislado VxS3 Argentina Azufre Mendoza GGhelliphellipGAC --helliphellipGGA-T-C TT---- 429 JN872461 G viatrix aislado VxS7 Argentina Azufre Mendoza hellipCAAAA GGA-T-C -- 430 JN872465 G viatrix aislado VxS1 Argentina Agua Escondido Mendoza GA AhellipGGA-T-CT TTA--- 431 JN872459
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizadas con
MEGA 60 = Ideacutenticas - = Indel = Trabajo actual Coacutedigos de Haplotipos soacutelo provisionales debido a secuencias incompletas del gen
180
1
1234567890 122222 2333334444 45556
1111111112 2222222125 7789212233 4447991678 84882 66666 6666 66666 6677
1234567890 1234567232 2568438905 3464259792 70230 34567 8901 1234567890 693523
18
0
Tabla 19 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontrados en la secuencia del fragmento de ADNmt del gen cox1 de L viator
estudiado en el valle de Fiambalaacute de otros sitios de Argentina y haplotipos cox1 aislados de la misma especie disponibles en el
GenBank
L viator haplotipos y aislamientos
Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Larg o
(pb)
Posicioacuten del aminoaacutecido
1122
1 276922
GenBank
L via-cox1a Argentina Riacuteo Negro ATATTGGTAC TCTATATATA ATCTTTGCCC CCGCTCGATG CCCGTTTCTA CTCTTTGATT TTTT 672 DIGTLYMIFG LSTLWF AM494010 L via-cox1b Chile Casa Blanca Valparaiacuteso T T helliphellipTThelliphellipA helliphelliphellipCCTC CTGChelliphellip hellip 672 helliphelliphellip KC JN051373 L via-cox1c Chile Casa Blanca Valparaiacuteso hellipT helliphelliphelliphellipT helliphellipTThelliphellipA helliphelliphellipCCTC TCTGChelliphellip hellip 672 helliphelliphellip KIC JN051374 L via-cox1d Argentina Tatoacuten Catamarca T T hellipTT TAhelliphelliphelliphellipC 672 hellip F KT215351 L via aislado VxC1 Argentina-Mendoza ---------------- hellipT T TAT helliphelliphellip TAhelliphelliphellipCG ---------- ------- 654 ------helliphellip F-- JN872449 L via aislado VxC2 Argentina-Mendoza ---------------- T helliphelliphelliphellipT TT TAhelliphelliphellipC ---------- ------- 654 ------ F-- JN872450 L via aislado VxC3 Argentina Chubut ---------------- helliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip hellipC hellip ---------- -------- 654 ------ -- JN872451 L via aisladio LVX2 Argentina Rio Negro ------------------ ------------------ -------------------- helliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphellip 644 ------------------ JN614397
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten hecha con MEGA 60 = Ideacutenticas = Am inoaacutecido
indeterminado - = No secuenciado = Trabajo actual El sombreado corresponde a fragmentos maacutes cortos Coacutedigos soacutelo provisionales Haplotipo
debido a secuencias incompletas del gen
181
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Cod Haplotipos y aislamientos paraITS-1 000 000 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 1 KJ425594 L neotropica aislada Zavaliacutea 000 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 2 KJ425590 L neotropica aislada General Loacutepez 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 3 AM412228 L neotropica Lneo-HA 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 4 KJ425591 L neotropica aislada Caseros
1 AM412225 L neotropica Lneo-H1 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 5 J5F960165 L viator aislada San Pedro1 2 KJ425597 L neotropica aislada Zavaliacutea 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 6 KJ425595 L neotropica aislada Caseros 3 KJ425598 L neotropica aislada Caseros 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 7 KJ425593 L neotropica aislada Constitucioacuten 4 KJ425596 L neotropica aislada Constitucioacuten 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 8 KT215347 L neotropica Lneo-HB 5 JF514089 L neotropica Lneo-H2 400 400 400 400 000 100 100 100 000 100 200 100 200 9 AM412227 L viator ventricosa Lvia-HA 6 JN051366 L viator Lvia-H2 1300 1300 1300 1300 1600 100 100 100 000 100 200 100 200 10 HQ283254 L viator 7 JX536268 L viator aislado VxI1 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 000 100 000 100 000 100 11 JN614428 L viator aislada LVX3 8 JX536272 L viator aislado VxI3 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 000 100 000 100 000 100 12 JN051368 L viator Lvia-HB 9 JN614465 L viator aislado LVX3 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 100 000 100 000 100 13 JX536268 L viator aislada VxI1 10 HQ283265 L viator 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 000 100 200 100 200 14 JF960167 L viator aislada Paysanduacute 11 AM412224 L viator Lvia-H1 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 000 000 100 000 100 15 JX536272 L viator aislada VxI3 12 JX536269 L viator aislado VxI2 1400 1400 1400 1400 1700 300 300 400 400 400 400 100 200 16 JX536273 L viator aislada VxI4 13 JX536273 L viator aislado VxI4 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 100 100 100 100 300 100 17 JX536269 L viator aislada VxI2 14KT215348 L viator Lvia-H3 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 100 100 100 100 300 000 18 KT215349 L viator Lvia-HC
Cod Haplotipos y aislamientos para ITS-2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
18
1
Tabla 20 Distancias por pares entre secuencias de haplotipos ITS-2 e ITS-1 aislados de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60
Nota Por abajo de la diagonal = diferencias de caracteres totales a las ITS-2 por encima de la diagonal = diferencias de caracteres totales a las ITS-1 Las
correspondencias del coacutedigo de Haplotipo se enumeran en la Tabla 13
182
18
2
Tabla 21 Distancias por pares entre 16S y secuencias en haplotipos cox1 en aislamientos de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Cod Haplotipo y aislamiento para 16S 000 800 100 000 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 1 HE610433 L neotropica Lneo-16SA 800 100 000 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 2 KT215347 L neotropica Lneo-16SB 900 800 900 1300 1300 1300 1400 1200 1200 1100 1100 1200 1000 1100 1300 1200 1100 3 JN872471 L neotropica aislado NtS1
1 AM494008 L neotropica Lneo-cox1a 100 500 600 600 600 700 500 600 800 600 1100 900 1000 1000 1000 1000 4 JN872472 L neotropica aislado NtS2 2 FN356741 L neotropica Lneo-cox1b 100 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 5 JN872473 L neotropica aislado NtS3 3 JF461485 L neotropica Lneo-cox1c 600 700 1000 1000 1000 1100 900 1000 1200 1000 1100 1300 800 1100 1400 800 6 JN872474 L neotropica aislado NtS4 4 JF461486 L neotropica Lneo-cox1d 7000 7100 7200 000 000 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 7 HE610434 L viator Lvia-16SA 5 KT215350 L neotropica Lneo-cox1e 000 100 600 7000 000 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 8 KT215352 L viator Lvia-16SB 6 JN872452 L neotropica aislado NtC1 100 200 700 7100 100 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 9 JN872460 L viator aisladoVxS2 7 JN872453 L neotropica aislado NtC2 000 100 600 7000 000 100 200 300 300 300 400 400 700 500 500 500 10 JN872467 L viator aislado VxS9 8 JN872454 L neotropica aislado NtC3 100 200 700 7100 100 200 100 100 300 100 600 400 500 700 500 500 11 JN872466 L viator aislado VxS8 9 AM494010 L viatrix ventr Lvia-cox1a 2800 2900 3300 6600 2800 2900 2800 2700 400 200 700 500 600 800 400 600 12 JN872468 L viator aislado VxS10 10 JN051373 L viator Lvia-cox1b 3300 3400 3800 7000 3300 3400 3300 3400 1100 400 700 100 800 800 200 600 13JN872462 L viator aislado VxS4 11 JN051374 L viator Lvia-cox1c 3400 3500 3900 7100 3400 3500 3400 3500 1200 100 700 500 600 800 600 600 14JN872470 L viator aislado VxS12 12 KT215351 L viator Lvia-cox1d 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 500 1200 1300 800 300 100 900 300 15JN872464 L viator aislado VxS6 13 JN872449 L viator aislado VxC1 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 700 1400 1500 200 900 900 300 700 16JN872463 L viator aislado VxS5 14 JN872450 L viator aislado VxC2 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 500 1200 1300 000 200 400 1000 200 17JN872469 L viator aislado VxS11 15 JN872451 L viator aislado VxC3 2900 3000 3400 6600 2900 3000 2900 2800 100 1200 1300 600 800 600 1000 400 18 JN872461 L viator aislado VxS3 16 JN614397 L viator aislado LVX2 2800 2900 3300 6600 2800 2900 2800 2700 000 1100 1200 500 700 500 100 800 19 JN872465 L viator aisladoVxS7
20 JN872459 L viator aisladoVxS1 Cod Haplotipo y aislamiento para cox1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Nota Debajo de la diagonal = diferencias de caracteres totales cox1 por encima de la diagonal = diferencias de caracteres totale s 16S Las
correspondencias del coacutedigo de Haplotipo se enumeran en la Tabla 13
Tabla 22 Promedio de las distancias geneacuteticas entre y dentro de L neotropica y L viator
Grupos
ITS-2
ITS-1
16S
cox1
analizados
L neotropica vs
1515
5790
856
3520
L viator (00354) (01163) (00202) (00554) L neotropica 160 000 (000) 433 1961 (solo) (00040) (00102) (0031) L viator (solo) 139 087 431 753 (0012)
(00035) (00017) (00102)
Nota Se utiliza como modelo de sustitucioacuten de nucleoacutetidos las diferencias totales (ts + tv) y los
meacutetodos p-distancias (entre pareacutentesis) Se muestra la serie de diferencias de base por sitio desde
un promedio de todos los pares de secuencias entre y dentro de grupos Menos del 5 de las
brechas de alineacioacuten los datos que faltan y las bases ambiguas se les permitioacute cualquier
posicioacuten (todas las posiciones con menos del 95 de cobertura de sitio han sido eliminadas)
183
Figura 19 Consentimiento Informado
184
Figura 20 Recoleccioacuten de datos de las viviendas Valle de Fiambalaacute Catamarca
185
186
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Figura 21 Planilla de recoleccioacuten de datos de las personas Valle de Fiambalaacute
Catamarca Argentina
187
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Figura 22 Graacuteficas de comparacioacuten de temperaturas promedio mensual en grados
centiacutegrados y precipitacioacuten-aridez entre las localidades de Rio Grande y Tatoacuten
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Figura 23 Diseccioacuten de conductos biliares de un hiacutegado de Lama glama donde se
observan ejemplares de Fasciola hepatica intracanaliculares Valle de Fiambalaacute
Catamarca 2010
Figura 24 Apertura de un conducto biliar intrahepaacutetico en un hiacutegado de Ovis orientalis
aries Se observa un ejemplar de F hepatica colangitis croacutenica con lesiones de la
mucosa biliar hipertrofiada estrecheces inflamatorias fibrosas y piedras Valle de
Fiambalaacute Catamarca 2010
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Figura 25 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino de la provincia de
Salta observadas al microscopio
Nota (A) Cono cefaacutelico VO ventosa oral I ciego intestinal F faringe E esoacutefago C cirro
Ampliacioacuten de 4x (B) Uacutetero lleno de huevos (flechas) C Cirro I ciego intestinal VV ventosa
ventral Aumento 10x
Figura 26 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino del municipio de
Cordeiro RJ Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota Porcioacuten final del cono cefaacutelico que muestra las espinas (flechas) e I ciego intestinal
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Figura 27 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de bovinos de la provincia de Salta
Argentina observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) VO ventosa oral
Figura 28 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado del municipio de Lavras
MG Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota (A B) Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) e I ciego intestinal
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Figura 29 Anaacutelisis filogeneacutetico de F hepatica basado en las secuencias de CO1 FhC01-
CAT-adult
Nota corresponde a la muestra analizada de la zona Las letras y nuacutemeros detraacutes de Fh indican el
nuacutemero de acceso de GenBank de las correspondientes secuencias PwAF219379 corresponde
a Paragonimus westermani CO1 (AF219379) usado como grupo externo El aacuterbol filogeneacutetico se
construyoacute mediante el anaacutelisis de maacutexima verosimilitud utilizando el paquete de
programas PHYLIP
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TRABAJOS CIENTIacuteFICOS A PARTIR DE LA INFORMACIOacuteN GENERADA EN
ESTA TESIS
ANEXO 1121 - TRABAJOS PUBLICADOS
Capiacutetulo de Libro
ldquoFasciolosis o Distomatosisrdquo en ldquoParasitosis Regionalesrdquo Costamagna SR (Compilador)
Editorial de la Universidad Nacional del Sur Red de Editoriales de Universidades
Nacionales Cap 36 419-434
193
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Buacutesqueda Bibliograacutefica de Casos Humanos con
Fasciola Hepatica en Argentina Malandrini J B Carnevale S Soria C C Velaacutesquez J N Molina V E
UNCa Anlis Malbraacuten Hospital Muntildeiz Maestro Quiroga (primera cuadra) 4700-Catamarca brunomalandriniyahoocomar
Bibliographical Search Fasciola hepatica Cases in Humans in Argentina
Summary The case series published in Argentina referred to human cases that presented fasciolosis is scarce As a cause of not being a notificable disease only isolated cases are reported and epidemiological and ecosystem details are not investigated Who detected a case is not required to inform it and on the other hand not all cases diagnosed are published Besides the lack of diagnostic techniques in most health networks complicates the detection of infection and promotes the understated The aim of this study was to report the number of published human cases with fascioliasis in Argentina from 1950 to 2010 It was performed a bibliographical search in the databases of the Science and Technology Secretary in libraries of universities and major scientific institutes of the country There were found presentations of 218 infected people since the first description made in Resistencia Chaco until the publication of cases in Catamarca In discrimination cases female gender (5466) was significantly more frequent than among men Of the total found six patient (4) had an acute process and 144 correspond to chronic illness Six provinces reported sick Catamarca is that with greater number of cases In the bibliographic tonnage carried with exception of some imprecise data in the province of Cordoba the number of diagnosed patients is low Despite the number of total cases reported in the country confirm that it is a secondary or occasional zoonosis and that it does not exist a close relationship between animal and human high incidence the substantial increase in the number of infected warrants a change in category transforming it in a serious public health problem in some regions
Keywords Research Bibliography Humans Fasciola hepatica Argentina
mdash Ciencia Vol 6 Nordm 21 Agosto 2011 Paacutegina 59 mdash
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Colecta e Identificacioacuten de Moluscos en la Cuenca
del Riacuteo Abaucaacuten Malandrini J B Soria C C Saldantildeo M B Mozo G M Camantildeo M C Covarrubia N
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa Maestro Quiroga primera cuadra 4700 SFVde Catamarca brunomalandriniyahoocomar
Collection and Identification of Mollusks in Abaucan River
Basin Summary Fasciola hepatica (unca or uncaca) has a digenetic life cycle which means an obligatory intermediate host belonging to the family of freshwater snails Lymnaeidae (Pulmonata Lymnaeidae) at which they develop and multiply the asexual forms This host predominantly in our country is Limnaea viatrix gastropod mollusk amphibian so it prefers soils with humidity The ecology of fasciolosis is closely linked with that of the snails that serve as intermediaries When the miracidia penetrate the foot they head for the liverpaacutencreas where they transform into esporocitos then rediae (first and second generation) and leave as cercariae Physiographic characteristics soil composition and climatic factors determine the rate of reproduction and epidemiological dynamics The aim of this study was to identify snails found in the river Abaucaacuten basin province of Catamarca The study was carried out with mollusks collected in backwaters and wetlands along the river at the height of the ford the road (Medanitos- Taton) where there was a lot of these specimens and domestic animals infected with fluke The specimens were collected by hand and transported to the laboratory in containers with water and mud of the place where they were studied She gathered a sample of 1236 shells The 9150 (n=1131) were identified as the genus Lymnaea spp and 849 (n=105) belonging to the genus Physae spp In those identified as Lymnaea viatrix there were not found infection of intermediate forms of Fasciola hepatica The identification shows the presence of snails involved in the cycle of F hepatica in the study area The spread of the parasite and the increase of fasciolosis in human beings who inhabit the valley make studies needed to relate epidemiological findings
Keywords Mollusks Limnaea Collection Identification Abaucaacuten river
mdash Ciencia Vol 6 Nordm 22 Septiembre 2011 Paacutegina 39 mdash
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BIOLOGIacuteA EN AGRONOMIacuteA
Volumen 4 No 1 Marzo de 2014 ISSN 1853-5216 Universidad Nacional de Catamarca Secretariacutea de Ciencia y Tecnologiacutea ‐Editorial Cientiacutefica Universitaria ISSN 1853-5216
FASCIOLOSIS EVALUACIOacuteN DE TEacuteCNICAS PARASITARIAS EN HECES DE ANIMALES CON HIacuteGADOS
DECOMISADOS EN MATADEROS
Martiacutenez M Constanza Malandrini J Bruno Soria Claudia
Caacutetedra de Parasitologiacutea Facultad de Ciencias de la Salud - Universidad Nacional de Catamarca
Avda Belgrano y Maestro Quiroga C P 4700 San Fernando del Valle de Catamarca Argentina
E-mails conimartinez48hotmailcom
Recibido 04072013 Aceptado 07112013
RESUMEN
En la provincia de Catamarca fasciolosis es una enfermedad endeacutemica produciendo un gran dantildeo
econoacutemico de importancia en salud puacuteblica Afecta principalmente a los bovinos presentaacutendose
en sus formas aguda y croacutenica La demostracioacuten microscoacutepica de huevos de Fasciola hepatica en
materia fecal es el principal procedimiento de diagnoacutestico econoacutemico faacutecil de realizar y
sumamente especiacutefico El objetivo del trabajo es determinar las diferencias existentes entre la
presencia del paraacutesito en hiacutegados de animales positivos en las faenas y el valor diagnoacutestico de dos
teacutecnicas coproparasitoloacutegicas utilizadas para demostrar la infeccioacuten en los mismos bovinos Se
estudiaron en los mataderos de los municipios de Andalgalaacute Capital Fiambalaacute El Alto e Icantildeo 13
animales que desde tres meses previos al estudio no recibieron tratamiento fasciolicida Los
hiacutegados fueron decomisados en la inspeccioacuten sanitaria y la materia fecal de esos ejemplares se
recogioacute en frascos con solucioacuten salina formolada al 10 Se identificoacute y transportoacute al laboratorio
Paralelamente se analizaron preparados de 88 muestras de heces por meacutetodo directo y con la
teacutecnica de sedimentacioacuten indicando positividad la deteccioacuten de un solo huevo
En hiacutegados analizados se encontraron formas adultas del paraacutesito y lesiones fibroacuteticas en el
pareacutenquima de las muestras de materia fecal cuatro submuestras resultaron positivas al meacutetodo
directo y 78 al de sedimentacioacuten De los resultados obtenidos se observan limitaciones en la
sensibilidad Para optimizar el diagnoacutestico y evitar los falsos negativos se deberaacuten recoger
muestras fecales en forma seriadas y aumentar el nuacutemero de pruebas cuando presentan
resultados negativos
PALABRAS CLAVE Fasciola hepatica Fasciolosis Diagnoacutestico Coproloacutegico
79
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Elsevier Editorial System(tm) for Acta Tropica Manuscript Draft (En prensa Recibido 30062015)
Title Human fascioliasis endemic areas in Argentina Multigenic phenotypic and environmental characterisation of the snail vectors Lymnaea neotropica and L viator
Article Type Research Paper Keywords Fascioliasis human infection Lymnaea neotropica L viator Lymnaeidae vectors rDNA mtDNA phenotype environment Argentina
Corresponding Author Dra MD Bargues PhD Corresponding Authors Institution University of Valencia First Author MD Bargues PhD Order of Authors MD Bargues PhD J Bruno Malandrini PhD Patricio Artigas PhD Claudia C Soria PhD Jorge N Velasquez PhD Silvana Carnevale PhD Lucia Mateo Master Messaoud Khoubbane PhD Santiago Mas-Coma Prof Dr
Abstract In South America fascioliasis stands out due to the human endemic areas in many countries In Argentina human endemic areas have recently been detected A study was performed in two localities of Catamarca province where lymnaeids were collected in areas described as human endemic (i) locality A beside Taton and Rio Grande villages (ii) locality B close to Recreo town The presence of Lymnaea neotropica and L viator in locality A and of L neotropica in locality B was proved by sequencing of rDNA ITS-2 and ITS-1 and mtDNA 16S and cox1 For the differentiation between these two species ITS-1 shows the highest resolution whereas 16S the less For intraspecific analyses cox1 is the best marker and ITS-1 the worst The intraspecific variability of L neotropica and L viator overlap in all shell features except maximum shell length which may be longer in L viator The desertic-arid conditions surrounding locality A the semiaridity-aridity surrounding locality B and the very low yearly precipitation in both localities are very different from the typical environmental characteristics of fascioliasis transmission foci In these localities lymnaeids are confined to lateral river side floodings and small man-made irrigation systems The two and four new haplotypes in L neotropica and L viator respectively and the extreme climatic factors demonstrate that these transmission foci are isolated environments presenting water availability depending only on the rivers flowing from neighbouring mountains
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ANEXO 1122 - PRESENTACIONES EN CONGRESOS y JORNADAS
4tas Jornadas Universitarias de Ciencias Exactas y Naturales Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca 2009 Presentacioacuten oral
PRESENCIA DE HUEVOS DE PARAacuteSITOS ZOONOTICOS EN VARIAS ESPECIES ANIMALES DE LA LOCALIDAD DE TATOacuteN
Malandrini Jorge Soria Claudia Cecilia Molina Viviana
Mozo Matilde Camantildeo Cecilia Saldantildeo Belen
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa Maestro Quiroga SN 4700- Catamarca brunomalandriniyahoocomar Aacuterea Vinculacioacuten Ciencia Tecnologiacutea y Sociedad
RESUMEN
Casos de parasitosis son observados frecuentemente en las faenas provinciales y en los registros de decomisos en mataderos a su vez el empleo de estudios coproloacutegicos ha mejorado la capacidad de diagnosticar los cuadros El objetivo del presente trabajo fue examinar muestras de materia fecal de distintos animales para reconocer las especies presentes El estudio se llevoacute a cabo en la localidad de Tatoacuten Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia de Catamarca durante los meses de marzo a julio de 2009 Se tomaron muestras de materia fecal (n=78) de animales poli y monogaacutestricos ubicados cerca de las viviendas Las heces se conservaron en recipientes cerrados con solucioacuten salina formolada 5 Para la deteccioacuten se utilizoacute un meacutetodo de sedimentacioacuten en buacutesqueda de Fasciola hepatica con cinco gramos de materia fecal de cada muestra Para el reconocimiento de los huevos se observoacute al microscopio (100x y 400x) La variable fue la presencia de huevos en heces considerando positividad la deteccioacuten de un solo ejemplar con la teacutecnica empleada Se confirmoacute la presencia de distintas especies parasitarias Fasciola hepatica Ascaris suum Oxiuris equi Ostertagia spp Trichuris ovis Haemonchus contortus Trichostrongylus spp Uncinaria stenocephala Toxocara canis y tenias Se hallaron infectadas todas las muestras de materia fecal observadas No se efectuaron recuentos de huevos por gramo
Debates Reflexiones e Interrogantes en la Educacioacuten en Ciencias Antildeo 2009
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- 160-
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1er Congreso Nacional de Medicina Tropical Ministerio de Salud Presentacioacuten en
Poster Jujuy 2010
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JORNADAS DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE PARASITOLOGIA VETERINARIA
XIX ENCUENTRO RIOPLATENSE DE VETERINARIOS ENDOPARASITOacuteLOGOS ldquoHacia la conferencia mundial de la WAAVP Buenos Aires 2011rdquo
18 al 20 de mayo de 2010
Descripcioacuten de los grupos de Investigacioacuten y Ensentildeanza dependientes de Universidades de Argentina
FASCIOLOSIS UNA ZOONOSIS TRANSMITIDA POR ALIMENTOS DESDE UN ENFOQUE MULTIDISCIPLINARIO DEL EQUIPO DE SALUD
Red de Helmintos Caacutetedra de Anatomiacutea y Fisiologiacutea Animal Comparada Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca Servicio de Inmunologiacutea Parasitaria Departamento de Parasitologiacutea ANLIS ldquoCarlos G Malbraacutenrdquo Hospital de Enfermedades Infecciosas ldquoFrancisco J Muntildeizrdquo MALANDRINI Jorge Bruno CARNEVALE1 Silvana VELASQUEZ2 Jorge Neacutestor SORIA Claudia Cecilia MOLINA1 Viviana Edith MARTINEZ Constanza COVARRUBIA Neacutelida Noemiacute PIZARRO Mariacutea del Carmen Magister en Ciencias de la Salud Meacutedico Veterinario Investigador III Doctora en Ciencias Bioloacutegicas Magister en Epidemiologiacutea Gestioacuten y Poliacuteticas de Salud Bioacuteloga Investigadora Adjunta Conicet Magister en Administracioacuten Sanitaria Meacutedico infectoacutelogo y microbioacutelogo Magister en Tecnologiacutea de Alimentos Licenciada en Bromatologiacutea Bioquiacutemica Meacutedica Veterinaria Licenciada en Bromatologiacutea Bromatoacuteloga Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca Maestro Quiroga sn 4700 - San Fernando del Valle de Catamarca Catamarca Argentina TeFax (54-3833) 441831 e-mail brunomalandriniyahoocomar 1Servicio de Inmunologiacutea Parasitaria Departamento de Parasitologiacutea ANLIS ldquoCarlos G Malbraacutenrdquo Veacutelez Sarsfield 563 Ciudad Autoacutenoma de Buenos Aires Argentina TeFax (54-11) 4301-7437 e- mail silvanaanlisgovcomar 2Hospital de Enfermedades Infecciosas ldquoDr Francisco J Muntildeizrdquo Sala de Hepatopatiacuteas Infecciosas Av Uspallata 2272 Ciudad Autoacutenoma de Buenos Aires (1282) Argentina Te (54-11) 4304-2180 e-mail jorsilspeedycom Aacuterea temaacutetica Ciencias Meacutedicas y Salud
Disciplina Cientiacutefica Parasitologiacutea (Coacutedigo Nordm 1212) Campo de aplicacioacuten Salud Puacuteblica (Coacutedigo Nordm 3237) Categoriacutea Proyecto Orientado Tipo de Actividades Investigacioacuten Aplicada con desarrollo tecnoloacutegico El equipo se conformoacute en 1994 Las necesidades profesionales hicieron necesario integrar un grupo con investigadores provenientes de distintas disciplinas que fue desarrollando estudios epidemioloacutegicos de fasciolosis en Regioacuten del arroyo El Juncal La Toma San Luis 2003
Estudio de foco a partir de un caso humano de fasciolosis en la localidad de Lonco pueacute Neuqueacuten Argentina 2003 Estudio de foco para un caso de fasciolosis humana en Neuqueacuten Argentina 2005 Confirmacioacuten etioloacutegica de un brote de distomatosis hepaacutetica en Mendoza 2006 Diagnoacutestico de Fasciola hepatica con la teacutecnica de ELISA en el Departamento de Tinogasta Catamarca 2006-2009 Actualmente se lleva a cabo un estudio observacional transversal y cuantitativo utilizando datos primarios Para el anaacutelisis de fasciolosis hepaacutetica en las distintas especies se emplean meacutetodos de diagnoacutestico inmunoloacutegicos parasitoloacutegicos y cliacutenicos El trabajo se decidioacute continuarlo en la provincia de Catamarca debido a la previa aparicioacuten de casos humanos y la alta prevalencia de fasciolosis detectada no soacutelo por la inspeccioacuten veterinaria en la faena de ganado bovino en mataderos y frigoriacuteficos que trabajan con control profesional sino tambieacuten en situaciones de campoEl universo de estudio comprende a) Poblacioacuten humana que habita el valle de Fiambalaacute b) Ganado bovino ovino caprino equino porcino y cameacutelidos sudamericanos
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JORNADAS DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE PARASITOLOGIA VETERINARIA
XIX ENCUENTRO RIOPLATENSE DE VETERINARIOS ENDOPARASITOacuteLOGOS ldquoHacia la conferencia mundial de la WAAVP Buenos Aires 2011rdquo
18 al 20 de mayo de 2010
c) Plantas acuaacuteticas de consumo humano presentes en los cursos de agua para la buacutesqueda de metacercarias d) Caracoles compatibles con el geacutenero Lymnaea para su determinacioacuten taxonoacutemica estudio de la emisioacuten de cercariacuteas y verificacioacuten de la infeccioacuten e) Agua de riacuteos arroyos Agua de consumo en las viviendas El ensayo de ELISA y micro-ELISA para la deteccioacuten de anticuerpos anti-rproCL1 de F hepatica
en humanos se desarrolloacute y fue puesto en praacutectica desde 2001 La teacutecnica de ampliacioacuten en cadena de la polimerasa fue desarrollada para determinar la infeccioacuten por Fasciola hepatica en caracoles del geacutenero Lymnaea con infeccioacuten natural utilizada posteriormente para comparar el anaacutelisis directo con el molecular y diagnoacutesticos por PCR en caracoles Lymnaea columella y Lymnaea viatrix colectados
Los avances del grupo de trabajo incluyen
- Clonado expresioacuten y produccioacuten de antiacutegeno recombinante procatepsina L1 de Fasciola hepatica en vector procarionte Resp Carnevale S Participan Malandrini J Soria C - Desarrollo del ensayo inmunoenzimaacutetico empleando el antiacutegeno recombinante para la deteccioacuten
de fasciolosis en hospedadores definitivos (humanos y ganado) Resp Carnevale S Participan Velaacutesquez J Martiacutenez C Malandrini J - Desarrollo de un meacutetodo molecular basado en la amplificacioacuten geacutenica utilizando como blanco el gen de la subunidad 1 de la citocromo c oxidada de F hepatica para la identificacioacuten en hospedadores intermediarios Carnevale S Participan Soria C Covarubia N Pizarro MC - Aplicacioacuten de las metodologiacuteas desarrolladas y de meacutetodos de deteccioacuten directa en aacutereas endeacutemicas mediante estudios transversales Malandrini J Participan Velaacutesquez J Soria C - Desarrollo de reactivos parasitarios Resp Carnevale S Participan Molina V Pizarro MC - Estudios epidemioloacutegicos Resp Malandrini J Participan Soria C Velaacutesquez J Covarrubia N
Martiacutenez C
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65
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23rd International Conference of the World Association Advancement Veterinary
Parasitology (waapv) Presentacion en poster Buenos Aires 2011
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23rd International Conference of the World Association Advancement Veterinary
Parasitology (waapv) Presentacion en poster Buenos Aires 2011
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VII Jornadas Universitarias de Ciencias Exactas y Naturales VII Jucen - Educacioacuten en
Ciencias y Tecnologiacutea 2012 Modalidad oral
Buacutesqueda de caracoles intermediarios del ciclo de Fasciola hepatica en
Tinogasta
Tomassi Carla A Soria Claudia C Malandrini Jorge B Facultad de Ciencias de la Salud-UNCa Maestro Quiroga sn 4700-Catamarca carla_cat1991hotmailcom
Los moluscos constituyen el segundo de los Phyla maacutes numerosos en especies luego de los artroacutepodos
Desde el mar colonizaron ambientes salobres y dulceacuiacutecolas soacutelo los caracoles (gasteroacutepodos) invadieron
el medio terrestre Le han brindado al hombre una serie de beneficios tales como alimento herramientas
medicina Contrariamente la malacofauna acarrea tambieacuten efectos perjudiciales a la Salud Puacuteblica (hombre
y ganado) enfermedades zoonoticas y especies invasoras
Caracoles de la familia Lymnaeidae son hospedadores intermediarios de Fasciola hepatica Linneo
(Trematoda Digenea Fasciolidae) por ello el objetivo del trabajo fue identificar las especies de moluscos
encontrados en el valle de Fiambalaacute
El estudio se lleva a cabo con ejemplares recolectados en remansos y vegas a orillas de riacuteos los lugares
escogidos para la buacutesqueda se escogieron de aquellos donde previamente se diagnosticaron animales con
infecciones naturales de Fasciola hepatica
Los especiacutemenes colectados (N 256) en forma manual en los causes de agua del Riacuteo Abaucaacuten y afluentes
(27ordm30acuteS 67ordf35acuteO) entre los meses de octubre y noviembre se transportan en envases plaacutesticos rotulados
con un algodoacuten huacutemedo hasta el laboratorio El material se fijoacute en alcohol 70 y la identificacioacuten de la
especie se realiza en base a las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla y oacuterganos internos
El reconocimiento de conchillas pequentildeas alargadas lisas con estriacuteas longitudinales muy apretadas dextro
compuestas por cinco anfractos muy convexos separados por una sutura profunda permitieron la
identificacioacuten de los gasteroacutepodos como pertenecientes a los limneidos
Palabras clave Buacutesqueda Limneidos Fasciola hepatica Tinogasta
Eje temaacutetico Desarrollo del pensamiento cientiacutefico
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
211
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
VARIABILIDAD GENEacuteTICA INTRAESPECIacuteFICA DE FASCIOLA HEPATICA
EN ARGENTINA
Silvana Carnevale1 Laura Kamenetzky2 Jorge Bruno Malandrini3 Mariacutea Laura
Pantano1 Marcela Larroza4 Claudia Cecilia Soria3 Olga Edith Feres Escaacutendar1
Jorge Neacutestor Velaacutesquez5
1ANLIS ldquoDr Carlos G Malbraacutenrdquo 2IMPaM UBA-CONICET 3Universidad Nacional de Catamarca 4INTA Bariloche 5Hospital de Infecciosas ldquoDr F J Muntildeizrdquo Argentina
e-mail jorgeysilvanaspeedycomar
Fasciola hepatica es un trematode que presenta variabilidad intraespeciacutefica en aislamientos de diferentes regiones del mundo Objetivo Analizar los haplotipos de F hepatica
circulantes en distintas regiones de Argentina Materiales y meacutetodos Se obtuvieron adultos
del paraacutesito de hiacutegados bovinos naturalmente infectados de las provincias de Salta
Catamarca y Riacuteo Negro Se conservaron en etanol 70ordm y se procesaron para la extraccioacuten de
ADN empleando kit comercial Se llevaron a cabo reacciones de PCR para la
amplificacioacuten del marcador molecular correspondiente al gen
mitocondrial de la subunidad 1 de la citocromo c oxidasa (COI) Los amplicones obtenidos
se secuenciaron automaacuteticamente Las filogenias fueron reconstruiacutedas utilizando el
algoritmo de maacutexima parsimonia implementado en el programa PAUP los aacuterboles se
obtuvieron mediante 1000 reacuteplicas bootstrap La adicioacuten de secuencias fue al azar con 5
repeticiones Resultados El anaacutelisis de las secuencias de CO1 mostroacute diferencias en las
muestras de las tres provincias analizadas La muestra de Salta resultoacute ideacutentica a otras
analizadas previamente de las provincias de Catamarca y San Luis correspondiendo al
grupo FhAJ6280346 FhJF82467124 FhAJ628035 FhGQ231551 Fh628039 Para la
muestra de Riacuteo Negro se observoacute un polimorfismo propio no descripto en las secuencias
actualmente disponibles en el GenBank La muestra de Catamarca fue ideacutentica a las
secuencias descriptas FhAJ628035 FhJF824674 Conclusiones El marcador CO1 permitioacute
diferenciar adultos de las tres localizaciones Se analizaraacuten maacutes ejemplares para verificar si
los polimorfismos son poblacionales o individuales
Palabras clave Fasciola hepatica anaacutelisis filogeneacutetico haplotipo
Financiamiento ANLIS Mundo Sano
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
DESARROLLO DE UN MEacuteTODO DE AMPLIFICACIOacuteN GEacuteNICA PARA EL
DIAGNOacuteSTICO DE FASCIOLOSIS EN HOSPEDADORES DEFINITIVOS
Mariacutea Laura Pantano1 Silvana Carnevale1 Laura Kamenetzky2 Jorge Bruno
Malandrini3 Claudia Cecilia Soria 3 Vanesa Raquel Bastin1 Jorge Neacutestor Velaacutesquez4
1ANLIS ldquoDr Carlos G Malbraacutenrdquo 2IMPaM UBA-CONICET 3Universidad Nacional de
Catamarca 4Hospital de Infecciosas ldquoDr F J Muntildeizrdquo Argentina
e-mail jorgeysilvanaspeedycomar La fasciolosis es una zoonosis parasitaria distribuida mundialmente que causa severas
peacuterdidas econoacutemicas en el ganado Objetivo Desarrollar un meacutetodo de PCR para la
identificacioacuten de Fasciola hepatica en muestras de heces de ovinos Materiales y meacutetodos
Se emplearon 19 muestras de ovinos infectados (examen coproparasitoloacutegico positivo) y
11 muestras negativas para F hepatica 6 de ellas con coccidios yo nematodes
gastrointestinales recolectadas en solucioacuten salina formolada 5 Se emplearon 2 g de
muestra lavados con solucioacuten fisioloacutegica y concentrados por centrifugacioacuten con eacuteter para la
purificacioacuten de ADN Se ensayaron protocolos manuales y empleando kits comerciales
seleccionando procedimientos estaacutendar de lisis proteoliacutetica extraccioacuten con fenol-
cloroformo y precipitacioacuten etanoacutelica La teacutecnica de PCR se llevoacute a cabo utilizando primers
con el fin de amplificar un fragmento del gen mitocondrial de la subunidad 1 de la
citocromo c oxidasa (CO1) con tamantildeo esperado de amplicoacuten de 405 pares de bases Se
determinoacute el liacutemite de deteccioacuten empleando cantidades conocidas de ADN de adultos
Resultados La teacutecnica de PCR permitioacute la deteccioacuten de todas las muestras positivas y no
se obtuvieron productos de amplificacioacuten con muestras negativas ni parasitadas con otros
organismos Los primers fueron analizados tambieacuten con las secuencias disponibles en
banco de otros trematodes de ovinos mostrando especificidad El liacutemite de deteccioacuten
resultoacute de 5 pg de ADN de F hepatica Conclusiones El meacutetodo de PCR resulta una
herramienta sensible y especiacutefica para la deteccioacuten de ADN de F hepatica en heces de
hospedadores definitivos Palabras clave Fasciola hepatica PCR ADN
Financiamiento ANLIS Mundo Sano UNCa
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III Congreso Internacional de Educacioacuten en Ciencia y Tecnologiacutea 5deg Congreso de Educacioacuten en Ciencia y Tecnologiacutea Facen - UNCA 2013
Estudio comparativo de teacutecnicas para la obtencioacuten de cuerpos de
caracoles de la Familia Lymnaidae (Gasteropoda Pulmonata) para su
identificacioacuten taxonoacutemica en la provincia de Catamarca
Tomassi CA Soria CC Malandrini JB Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
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Fasciolosis es una zoonosis parasitaria con un ciclo de vida donde participa como
hospedero intermedio un caracol de agua dulce Los moluscos de la Familia Lymnaeidae
(Gasteroacutepoda Pulmonata) modelan la transmisioacuten de Fasciola hepatica de acuerdo a la
especie de caracol involucrado L viator fue considerado durante antildeos como el uacutenico
hospedero involucrado en la epidemiologiacutea de la enfermedad en Argentina Estudios
recientes demuestran la presencia de otras especies y que los caracoles intervinientes en
los casos humanos y animales inclusive de la misma zona seriacutean de distintas especies
El objetivo del presente trabajo fue reportar los resultados comparativos obtenidos con
distintas teacutecnicas utilizadas para la observacioacuten morfoloacutegica de caracoles que permitan
identificar los principales hospederos intermediarios que intervienen en la parasitosis
Se colectaron a mano caracoles (n = 673) de una vega ubicada a la vera del riacuteo Abaucaacuten
(27deg29acute52rdquo S - 67deg35acute535 O) a 1650 m nm y se trasladaron vivos al laboratorio Los
moluscos se separaron en lotes iguales y se enfrentaron para estudio con tres teacutecnicas
directa de Railliet seguacuten Paranaense (1994) y la propuesta de Pointier para poder obtener
la separacioacuten de su cuerpo conchilla aparato reproductor masculino y una porcioacuten de su
pie permitiendo una mejor observacioacuten de los oacuterganos internos de los caracoles para su
reconocimiento taxonoacutemico e identificacioacuten por morfologiacutea Paralelamente se sacoacute la parte
blanda del limneido en busca de formas intermedias de F hepatica en el hepatopaacutencreas
del molusco
Los resultados permiten afirmar que la teacutecnica recomendada por Pointier es de muy faacutecil
aplicacioacuten ademaacutes de ser maacutes econoacutemica y permiten acercar nuevos conocimientos sobre
la enfermedad y los actores involucrados en el mantenimiento y difusioacuten de la parasitosis
Palabras clave Teacutecnicas Lymneidos Identificacioacuten Taxonomiacutea Catamarca
Eje temaacutetico Desarrollo de propuestas de ensentildeanza que contribuyan a la
transversalizacioacuten de contenidos cientiacuteficos
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7mo Encuentro de Docentes Investigadores 2do Encuentro de Joacutevenes Investigadores
Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca 2013 Modalidad
poster
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El reto del desarrollo sostenible Estrategias y Acciones Diaacutelogos y Propuestas Edicioacuten
2014 Liacutenea Cientiacutefica 1ordf Ed Catamarca Universidad Nacional de Catamarca E-Book
ISBN 978-950-746-227-6 1 Medio Ambiente CDD 577
Infeccioacuten Experimental de Hospedadores Intermediarios de
Fasciola hepatica
Tomassi Carla A Malandrini Jorge B Soria Claudia C
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
Maestro Quiroga sn 4700 Catamarca
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RESUMEN
Fasciolosis es una enfermedad que cada vez con mayor frecuencia afecta al ser humano se
presenta en el hombre Siendo Catamarca una zona endeacutemica tanto para los animales como para
las personas se hace necesario conocer detalladamente el ciclo de vida en el hueacutesped
intermediario un caracol del geacutenero Lymnea para poder actuar en su control La diseccioacuten de
caracoles permite visualizar la produccioacuten de cercariacuteas y detectar la infeccioacuten en caracoles
provenientes de campo El objetivo del trabajo fue desarrollar la infeccioacuten de moluscos Lymnea
para observar su ciclo bioloacutegico in vitro y comprobar su capacidad de actuar como hospedadores
intermediarios La infeccioacuten se logroacute mediante la eclosioacuten de huevos de F hepatica previamente
embrionados estos proveniacutean de bilis de animales infectados lavados con solucioacuten fisioloacutegica
isotoacutenica decantados en un vaso de precipitado y mantenidos a 25 degC durante ocho diacuteas Por
accioacuten a la luz artificial (30 minutos) se consiguioacute la apertura del opeacuterculo y posterior salida del
miracidio Se pusieron en contacto 50 miracidios por molusco durante dos horas Se observoacute bajo
la lupa la presencia de miracidios de no estar se consideroacute que penetraron en el caracol (n=74)
Se verificoacute a los tres diacuteas sacrificando los moluscos (n=14) separando las partes blandas de la
conchilla y colocaacutendolas entre dos portaobjetos para visualizarlos al microscopio Se obtuvieron
esporocistos en dos moluscos redias en otros dos y cercarias en dos ejemplares maacutes El ensayo
permitioacute comprobar su intervencioacuten en el ciclo de Fasciola hepatica como hospedadores
intermediarios y demostrar la presencia de los distintos estadios larvarios en el interior del cuerpo
de los caracoles
ndash 149 ndash
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XI Jornadas Cientiacuteficas Regionales en Ciencias de la Salud XI Jornadas Estudiantiles
Regionales Instituto Universitario de Ciencias de las Salud Fundacioacuten Barceloacute La Rioja
2014 Modalidad oral
HALLAZGO E IDENTIFICACIOacuteN DE MOLUCOS INTERMEDIARIOS DEL CICLO DE
Fasciola hepatica EN LAGUNA BLANCA CATAMARCA
Tomassi Carla A (1) - Soria Claudia C(1) - Malandrini Jorge B (1)
Fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonoacutetica transmitida por alimentos causada por
Fasciola hepatica Linneaus 1758 (Trematoda Fasciolidae) que utiliza como hospedadores
intermediarios caracoles de agua dulce de la familia Lymnaeidae El paraacutesito no se encuentra en
regiones donde las condiciones no son las adecuadas para el desarrollo de los caracoles
Pertenecen al phylum Mollusca y a la clase Gasteropoda y las especies de intereacutes se encuentran
en la subclase Euthyneura o Pulmonata Son anfibios y viven en el barro en ambientes de aguas
poco profundas sujetos a las inundaciones y desecaciones Su distribucioacuten no es uniforme porque
dentro de cada haacutebitat pueden concentrarse en aacutereas pequentildeas con canales de drenaje y
filtraciones En la provincia de Catamarca se demostroacute la presencia de lymneidos en casi todos los
departamentos y en diferentes ecosistemas
El objetivo del presente trabajo fue hallar ejemplares de lymeneidos en la localidad de Laguna
Blanca y relacionar su presencia con diagnoacutesticos efectuados en muestras de materia fecal
animales de distintas especies
Los caracoles se colectaron en forma manual (n=490) en tres vegas de la localidad ldquoLas Lomitasrdquo
(26deg3acute21rdquoS-66deg56acute334 O) (706) ldquoCasa Paredrdquo (26deg35acute04rdquoS-66deg56acute47 O) (218) y ldquoHuasi
Cieacutenagardquo (26deg34acute50rdquoS-66deg56acute333 O) (76) y 17 muestras de materia fecal de ovejas (13) llamas
(2) y cabras (2) que pastaban en las vegas
Los moluscos fueron transportados vivos en frascos hermeacuteticos con agua del mismo curso al
laboratorio malacoloacutegico de la facultad de Ciencias de la Salud donde se realizoacute la identificacioacuten
de los geacuteneros en base a la morfologiacutea de su conchilla Las determinaciones parasitoloacutegicas se
llevaron a cabo seguacuten teacutecnica de Dennis Stone y Swason
Se comproboacute la presencia de caracoles del geacutenero Lymnea en las tres vegas En ldquoCasa Paredrdquo
(3452) en ldquoHuasi Cieacutenagardquo (1194) y en la vega ldquoLas Lomitasrdquo (5354) se determinoacute
ademaacutes presencia de moluscos del geacutenero Physa (5205) Los anaacutelisis coproparasitologicos
resultaron positivos confirmando la presencia del parasito en animales (7647)
Los hallazgos realizados y los antecedentes humanos de la enfermedad en otras zonas de la
provincia ameritan estudios epidemioloacutegicos que los involucren
1 Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
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ANEXO 1123 ndash PREMIOS Y DISTINCIONES
217
XXVIII Jornadas de Actualizacioacuten en Ciencias Veterniarias Colegio Medico
Veterinario de la Provincia de Coacuterdoba 2009 Distinguido con Mencioacuten Especial
218
219
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Segunda mencioacuten Premio Anual AAPAVET Rioplatense 2012 ldquoDr Rauacutel Martiacuten Mendyrdquo
OCTUBRE de 2012
Volumen XXIX Ndeg 294 ISSN 1852-317X
Se otorgoacute el Premio Anual AAPAVET Rioplatense 2012 ldquoDr Rauacutel Martiacuten Mendyrdquo
El H Jurado integrado por los Drs Ricardo A Moriena (FCV UNNE) Oscar S Anziani (INTA Rafaela) y Cristian Lucas (Actividad privada) dictaminoacute en forma unaacutenime otorgar los siguientes premios
Categoriacutea Investigacioacuten Original
Primer Premio
ldquoIntroduccioacuten de la vacuna EG95 contra la Equinococcosis Ovina en un Programa de Control Obtencioacuten de informacioacuten baacutesica anaacutelisis espacial y primer estudio de impactordquo
Edmundo Larrieu Eduardo Herrero Guillermo Mujica Joseacute L Labanchi Daniel Araya Claudio
Grizmado Arnoldo Calabroacute Gabriel Taimoacuten Guillermo Ruesta Alicia Peacuterez Antonio Gati Graciela
Santillaacuten Marta Cabrera Marcos Arezzo Marcos Seleiman Laura Cagioacuten Mariela Garciacutea Cachau Cristian A Alvarez Rojas Charles G Gauci David D Heath Roberto Lamberti y Marshall W
Lightowlers
1ordf Mencioacuten
ldquoEquinococcosis Neotropical presencia del ciclo silvestre de Echinococcus vogeli en la Provincia de Misiones Argentinardquo
Katherina Alicia Vizcaychipi
Consultores Antonio DrsquoAlessandro Federico Camiccia Marcela A Cucher Karen E DeMatteo Eduardo Guarnera Ariana Gutieacuterrez Marcia Helou Natalia Maccharoli Laura C Prada Miguel A
Rinas Mara Rosenzvit y Graciela Ineacutes Santillaacuten
2ordf Mencioacuten
ldquoEstudio epidemioloacutegico de Fasciolasis en el aacuterea del Departamento Tinogasta Catamarca (Argentina)rdquo
Jorge Bruno Malandrini Jorge N Velaacutesquez Claudia C Soria Mordf Laura Pantano Laura Kamentzky y Silvana Carnevale
Categoriacutea Monografiacutea Original
Primer Premio ldquoParaacutesitos y enfermedades emergentes y re-emergentes calentamiento global cambio climaacutetico
transmisioacuten y migracioacuten de especies Evaluacioacuten de la participacioacuten del hombrerdquo G Mauricio Bulman y Jorge C Lamberti
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Primer premio I Congreso Internacional e Zoonosis y Enfermades Emergentes VII
Congreso Argentino de Zoonosis Asociacion Argentina de Zoonosis Buenos Aires 2011
Modalidad Poster
II
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Es faacutecil quedarse en casa y tejer muchas hipoacutetesis pero intentar verificarlas
generalmente demanda un trabajo interminable gastos sacrificio o incluso peligro y a
menudo se falla o aun teniendo eacutexito se gana poca recompensa Habiacutea muchos antes
que Coloacuten que imaginaron Ameacuterica pero entre el suentildeo y la realidad un oceacuteano tuvo que
ser atravesado
Sir Ronald Ross KCB
DPH FRCS MD DSc LLD FRS
Nobel Laureate London 1911
III
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A Claudia Leandro y Pilar apoyos espirituales en mi trabajo diario
fuentes permanentes de mi superacioacuten
IV
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AGRADECIMIENTOS No hay tesis doctoral que pueda escribirse sin el apoyo de muchas personas -amigos
fuentes de informacioacuten y numerosos expertos externos- que pacientemente ofrecieron
tanto sus profundos conocimientos como cuantas aclaraciones fueron precisas Mi primer
agradecimiento lo expreso a las Doctoras Paula Budini Ana Litvik y al Doctor Walter
Almiroacuten por su guiacutea aportes conceptuales y de organizacioacuten ademaacutes de su inagotable
paciencia y predisposicioacuten por el proyecto permitiendo que me tomara el tiempo para
hacer la mejor presentacioacuten posible Aprecio mucho su apoyo y espero que ahora se vea
recompensado
Me es a todas luces imposible expresar individualmente mi agradecimiento a todos los
que me han ayudado Sin embargo la Dra Silvana Carnevale y el Dr Jorge Velaacutesquez
quienes figuran ciertamente entre los mejores y maacutes prestigiosos investigadores en la
temaacutetica por haberse tomado la molestia de leer todo el manuscrito y ofrecerme sus
respectivas criacuteticas y consejos
El autor cumple con el deber de agradecer al profesor Santiago Mas-Coma por sus
importantes aportes sus criacuteticas igualmente detalladas -pero mucho maacutes incisivas y
provocativas- durante la investigacioacuten En mis viajes ademaacutes de los estudios he visitado
sus laboratorios aulas universitarias y se ha mostrado generoso con el tiempo y sus
ideas
Tengo la satisfaccioacuten de dar las gracias a la Dra Dolores Bargues en la que concurren
las cualidades propias de una excelente docente e investigadora con las de una cientiacutefica
abierta que centra su intereacutes en Fasciolosis y su estrecha relacioacuten entre la sanidad animal
y la salud humana
A la Dra Rosacircngela Rodriacutegues-Silva y su equipo del Laboratorio de Helmintos Paraacutesitos
de Vertebrados del Fiocruz quieacuten llevoacute a cabo una minuciosa comparacioacuten de los
especiacutemenes observados
Un voto de agradecimiento similar tiene por destinatario a otro de mis colegas el Dr Hugo
Solana quien me abrioacute las puertas de su caacutetedra para el desarrollo de estudios sobre
resistencia antiparasitaria que permitieron resultados de difiacutecil logro en mi provincia
No puedo dejar de mencionar a la Dra Viviana Molina directora del ANLIS-Malbraacuten por
permitir mi participacioacuten docente en los cursos anuales de Enteroparaacutesitos dictados en el
Instituto asiacute como al Dr Sixto R Costamagna por su invitacioacuten para redactar un capiacutetulo
en su libro ldquoParasitosis Regionalesrdquo los que hicieron posible organizar los conocimientos
sobre fasciolosis y se generaran y precisen las ideas que se exponen
Mis palabras de reconocimiento especial a las principales autoridades de la Universidad
Nacional de Catamarca que resultan ser la mejor garantiacutea para que la investigacioacuten
V
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cientiacutefica sea el ingrediente especial en el claustro catamarquentildeo ademaacutes del aporte por
la beca doctoral otorgada y permitir el uso de equipos y materiales
El autor jamaacutes hubiese podido acceder a la realizacioacuten de esta Tesis Doctoral sin haber
tenido la ocasioacuten de contar con el apoyo econoacutemico de la Fundacioacuten Mundo Sano que
me permitioacute solventar viajes al extranjero
Tanto los trabajos de campo efectuados formando parte de expediciones a la zona del
trabajo como los estudios y anaacutelisis realizados en laboratorios fueron llevados a cabo
con financiamiento obtenido por parte de diferentes proyectos de investigacioacuten
acreditados por la SECyT-UNCa y Focanlis 2011
Las palabras no pueden expresar los sentimientos hacia los integrantes de mi equipo de
investigacioacuten quienes trabajaron sometidos a gran presioacuten durante varias etapas clave
del proceso
Finalmente esta lista no estariacutea completa sin un agradecimiento especial a todos los
integrantes del personal de salud -funcionarios meacutedicos bioquiacutemicos bioacutelogos
enfermeras y agentes sanitarios- participantes de tantos diacuteas de trabajos conjuntos que
permitieron la investigacioacuten
Debo igualmente una mencioacuten especial de gratitud a la Dra Diana T Masih por sus
consejos advertencias y estiacutemulos desde el comienzo de esta investigacioacuten
Ademaacutes tambieacuten debo expresar un especial reconocimiento a la Dra Gladys I Ponte y al
Dr Ernesto J Jacob sin los cuales esta tesis no hubiera podido llegar a buen fin
Huelga decir que soacutelo yo soy responsable de cualquier error que haya podido deslizarse
en esta tesis pese a mis mejores esfuerzos por evitarlo
J B M
VI
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RESUMEN Con el objetivo de contribuir al conocimiento de la epidemiologiacutea de la fasciolosis en el valle
de Fiambalaacute Catamarca Argentina se realizoacute un estudio descriptivo prospectivo con disentildeo
no experimental transeccional durante el periacuteodo 2008-2012
En 305 individuos con seguimiento de la cohorte en humanos se estudioacute la presencia de
anticuerpos anti-rproCL1 de Fasciola hepatica (Fh) eosinofilia proteiacutenas totales aacutecidos
biliares enzimas hepaacuteticas y bilirrubina seacuterica Se analizoacute la presencia de Fasciola hepatica
en la materia fecal y utilizoacute el diagnoacutestico por imagen en los individuos estudiados
La interpretacioacuten de las manifestaciones cliacutenicas (n=174) la deteccioacuten de anticuerpos
antifasciola por ensayo de inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (ELISA) las imaacutegenes (n=57) y
la aplicacioacuten de meacutetodos de diagnoacutestico etioloacutegico por microscopiacutea en materiales de heces
(n=96) mediante su utilizacioacuten sistemaacutetica e integrada permitieron realizar el diagnoacutestico de
fasciolosis
Se estudiaron 1077 muestras de heces de las distintas especies animales domeacutesticas
presentes en la zona como ovinos asnos llamas caprinos bovinos equinos y porcinos
Se obtuvieron 398 ejemplares de Fh de 11 animales faenados y se sometieron a estudios
morfoloacutegicos moleculares por amplificacioacuten del gen mitocondrial de la subunidad 1 de la
citocromo oxidasa y de resistencia antiparasitaria a Triclabendazol por amplificacioacuten aleatoria
de ADN polimoacuterfico
En 2354 limneidos se identificoacute la especie por secuenciacioacuten del aacutecido desoxirribonucleico
(ADN) y se demostroacute la infeccioacuten natural
Se estimoacute una prevalencia en el hombre de 3442 con aumento de eosinoacutefilos (p=0000) de
proteiacutenas seacutericas (p=0000) y una edad promedio menor a 19 antildeos en los individuos positivos
en relacioacuten a los negativos En animales la prevalencia obtenida fue 2674 con mayor
infeccioacuten en ovinos Se encontraron ejemplares adultos de Fh con identidad de secuencias
(994) a ejemplares de San Luis y otros resistentes a TCBZ Se identificoacute a los limneidos
Lymnaea neotropica y Lymnaea viator como los hospedadores intermediarios
Los resultados indican que las poblaciones humanas y animales estudiadas tienen una alta
prevalencia de Fh en el valle de Fiambalaacute Catamarca desde 2008 al 2012 El agente
parasitario es ideacutentico geneacuteticamente a los ya encontrados en otras regiones de Argentina
pero algunos presentan resistencia a TCBZ que compromete el futuro del tratamiento
humano El hospedador intermediario L neotropica constituye la descripcioacuten de una nueva
especie de limneidos en el Noroeste argentino
PALABRAS CLAVE fasciolosis infeccioacuten humana ELISA resistencia antiparasitaria L
neotropica
VII
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SUMMARY In order to contribute to the knowledge of fascioliasisacute epidemiology in the valley of
Fiambalaacute Catamarca Argentina a prospective descriptive study with no experimental
cross-sectional design was done during the period 2008-2012
Within 305 individuals with cohort tracing in human the presence of antibodies anti-
rproCL1 of Fasciola hepatica eosinophilia total proteins bile acids liver enzymes and
serum bilirubin was studied The presence of Fasciola hepatica (Fh) in the stool was
analyzed and diagnostic imaging was used in individuals studied
The interpretation of clinical manifestations (n=174) the use of serological diagnosis
techniques by immunosorbent assay for enzyme-linked (ELISA) images (n=57) and the
application of methods of etiological diagnosis by microscopy in materials feces (n=96)
through its systematic and integrated use allowed the fascioliasis diagnosis
1077 stool samples from different domestic animals species present in the area as sheep
donkeys llamas goats cattle horses and pigs were studied
398 copies of Fasciola hepatica from 11 slaughtered animals were obtained and
subjected to morphological studies molecular by amplification of mitochondrial gene of
subunit 1 of cytochrome oxidase and Triclabendazole antiparasitic resistance by Random
Amplification of Polymorphic DNA (RAPD-PCR)
In 2354 lymnaeid the species was identified by deoxyribonucleic acid (DNA) sequencing
and natural infection was demonstrated
Prevalence of 3442 was estimated in men with increased eosinophilia (p=0000) serum
proteins (p=0000) and a difference in age of 19 years younger in positive individuals in
relation to negative In animal the obtained prevalence was 2674 with more infection in
sheep Fasciola hepatica adult specimens were found with sequence identity (994) in
individuals of San Luis and other resistant to TCBZ The lymnaeid Lymnaea neotropica
and Lymnaea viator and were identified as intermediate hosts
The results indicate that the studied human and animal populations have a high
prevalence of Fasciola hepatica in the valley of Fiambalaacute Catamarca from 2008 to 2012
The parasitic agent is genetically identical to those already found in other regions of
Argentina but some are resistant to TCBZ compromising the future of treatment in human
The intermediate host L neotropica establish the description of a new lymnaeid species in
the Northwest of Argentina
KEYWORDS fascioliosis human infection ELISA antiparasitic resistance L neotropica
VIIIVIIIVIII
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ldquoLA FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS NO SE HACE SOLIDARIA CON LAS
OPINIONES DE ESTA TESISrdquo
Art 43deg Reglamento de la Carrera de Doctorado en Ciencias de la Salud (RHCD Res Ndeg 7222010)
IX
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INDICE GENERAL Contenido
Paacutegina
Portadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Frasehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Dedicatoriahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Agradecimientohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Resumenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Summaryhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Paacutegina de advertenciahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Iacutendice de contenidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Iacutendice de tablas y figurashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I II III IV VI
VII VIII
IX XIII
INTRODUCCIOacuteN Y OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
16
1 Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
20 11 Breve resentildea histoacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20
111 Sinonimiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22 112 Clasificacioacuten taxonoacutemicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22
12 Ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22 121 Aspectos epidemioloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 25
13 Viacuteas de difusioacuten geograacutefica de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 26 131 Distribucioacuten de F hepatica en Ameacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 27
14 Hospedador intermediariohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31 15 Fasciola hepatica en humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 34 16 La infeccioacuten a nivel mundialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 36
161 Ameacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 37 1611 Peruacute Bolivia y Chilehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 38 1612 Repuacuteblica Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 39
17 Factores de riesgo en la infeccioacuten de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphellip 40 18 Sintomatologiacutea cliacutenica y patologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 42 19 Diagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 44
191 Directohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 44 1911 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 45 1912 Teacutecnicas quiruacutergicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 46
192 Indirectohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 46 110 Planteamiento del problemahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 49
1101 Justificacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 51 1102 Viabilidad del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1103 Evaluacioacuten de las deficienciashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52
111 Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1111 Objetivo generalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1112 Objetivos especiacuteficoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52
112 Hipoacutetesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 53 DISENtildeO DEL ESTUDIO Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 54 2 Datos secundarios y caracteriacutesticas del ambientehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55
21 Seleccioacuten del tipo de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 22 Lugar de la poblacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 23 Seleccioacuten de la poblacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 24 Periodo de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 25 Descripcioacuten regional del haacutebitat del valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphellip 56
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17
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ISBN 978-987-661-270-8
31 Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
311 Criterios de inclusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
312 Criterios de exclusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 59 32 Obtencioacuten de las muestrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 60
321 Recoleccioacuten de sangrehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 60
322 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 61
3221 Expresioacuten y purificacioacuten de la proteiacutena recombinante procatepsina L1 (rproCL1)helliphellip 61
3222 Ensayo inmunoenzimaacuteticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3223 Foacutermula leucocitariahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3224 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3225 Proteiacutenas Totaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3226 Aacutecidos biliareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3227 Bilirrubina seacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3228 Enzimashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63 323 Anaacutelisis de los datoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63 324 Materia fecalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 64
3241 Teacutecnica de Sedimentacioacuten Raacutepida (TSR)helliphellip 65
3242 Teacutecnicas de concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 65
32421 Meacutetodo de Telemann modificadohellip 65
32422 Meacutetodo de flotacioacuten de Willishelliphelliphellip 65
32423 Meacutetodo cuantitativo para huevoshelliphellip 65 33 Diagnoacutestico por imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 34 Datos cliacutenicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66
Animales como hospedador definitivo de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 4 - Especies animales estudiadashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66
41 Exaacutemenes coproparasitoloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 411 Identificacioacuten de otros paraacutesitos gastrointestinaleshelliphelliphellip 67
42 Necropsias y obtencioacuten de especiacutemenes de F hepaticahelliphelliphelliphellip 68 421 Estudios morfoloacutegicos de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 69 422 Estudios de haplotipos de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 69 423 Estudios de resistencia a antiparasitarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70
Identificacioacuten del hospedador intermediario de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70 5 Epidemiologiacutea de los caracoleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70
51 Recoleccioacuten de limneidos en la zona del valle de Fiambalaacutehelliphelliphellip 70 511 Transporte de limneidos al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71
52 Tareas en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71 521 Adaptacioacuten y cultivo de limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71 522 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 72 523 Infeccioacuten natural por F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 72 524 Infeccioacuten inducida del hospedador intermediariohelliphelliphelliphellip 73
53 Identificacioacuten de la especie mediante determinacioacuten de haplotipos 73 531 Marcadores de ADN seleccionadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 74 532 Extraccioacuten de ADNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 74 533 Secuenciacioacuten de los marcadores de ADNr y ADNmthelliphellip 74 534 Anaacutelisis de la secuenciahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 75 535 Nomenclatura de los haplotipos de ADNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 75
54 Determinacioacuten molecular de la infeccioacuten natural de limneidos con F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 76
251 Orografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 252 Climahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 253 Hidrografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58 254 Flora y Faunahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
3 Seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58 Epidemiologiacutea en seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
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541 Electroforesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 76 RESULTADOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 78
6 Datos secundarios y caracteriacutesticas del ambientehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 79 61 Caracteriacutesticas de las viviendas del valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphellip 79 62 Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 80 63 Caracteriacutesticas climaacuteticas y haacutebitathelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 80
7 Resultados en seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81 71 Serologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81
711 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81 712 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 713 Proteiacutenas totales enzimas bilirrubina y colesterolhellip 87
72 Geacutenerohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 87 73 Grupos etarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 88 74 Anaacutelisis estadiacutesticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 90 75 Anaacutelisis coproparasitoloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 76 Siacutentomas y signoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 77 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 78 Teacutecnicas invasivashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 79 Descripcioacuten de casos con Fasciolosishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 92
8 Resultados en animaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 98 81 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 98
811 Prevalencia por exaacutemenes coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphellip 98 812 Hallazgos de huevos de otros paraacutesitos
gastrointestinaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 99 82 Recuperacioacuten de ejemplares de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 99 83 Morfologiacutea microscoacutepica de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 100
831 Microscopiacutea de contraste por interferencia diferencial 102 84 Variabilidad geneacutetica intraespeciacuteficahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 102 85 Resistencia al triclabendazolhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 102
9 Resultados en el hospedador intermediario de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 91 Identificacioacuten de los caracoles helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 92 Medicioacuten de moluscoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 93 Mantenimiento en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105
931 Identificacioacuten de gasteroacutepodos infectadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105
9311 Infeccioacuten del hospedador intermediariohelliphelliphelliphelliphellip 105
932 Identificacioacuten molecular de la infeccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9321 PCR de infeccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106 94 Caracterizacioacuten molecular de limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
941 L neotropicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9411 Marcadores moleculareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9412 Marcadores mitocondrialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 107
942 L viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 108
9421 Marcadores ribosomaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 108
9422 Marcadores mitocondriales 109
943 Anaacutelisis comparativo de L neotropica vs L viatorhelliphelliphelliphellip 109 DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 111
101 En los seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 112
1011 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 113
1012 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 114
1013 Proteiacutenas totales y enzimas hepaacuteticashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 115
1014 Geacutenerohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 116
1015 Grupos etarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 117
1016 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 118
1017 Siacutentomas y signoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 119
1018 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 120
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1019 Teacutecnicas invasivashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121 102 En los animaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121
1021 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121
1022 Necropsiashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 124
1023 Morfologiacutea microscoacutepicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 124
1024 Variabilidad geneacutetica intraespeciacuteficahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 125
1025 Resistencia antiparasitariahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 126 103 En los limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 127
1031 Caracteriacutesticas fenotiacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 127
1032 Importancia de las influencias ambientaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 128
1033 Estudios en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 128
1034 Identificacioacuten microscoacutepica y molecularhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 129
1035 Caracteriacutesticas moleculareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 131
1036 Lymnaea neotropicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 132
1037 Lymnaea viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 132 Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 134 Recomendacioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 137 BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 139 ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 171
111 Tablas y figurashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 172 112 Trabajos cientiacuteficos a partir de la informacioacuten generada en esta
tesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 192 1121 Trabajos publicadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 192 1122 Presentacioacuten en Congresos y Jornadashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 203 1123 Premios y Distincioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 217
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hepatogramas datos cliacutenicos imaacutegenes y cirugiacuteas sobre casos positivos con diagnoacutestico documentado Valle de Fiambalaacute Antildeos 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
82 Tabla 3 Resultados comparativos entre la presencia de eosinoacutefilia y ensayos de ELISA seropositivos Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 Tabla 4 Resultados comparativos entre los valores de proteiacutenas totales y anaacutelisis de ELISA positivos Valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphellip 87 Tabla 5 Frecuencia absoluta de casos positivos y negativos al ensayo de ELISA recombinante para Fasciola hepatica en pacientes agrupados por geacutenero en los diferentes grupos etarios Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 88 Tabla 6 Frecuencia y porcentaje acumulado por grupo etario con el ensayo de ELISA para Fasciola hepatica Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- Tabla 7
2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Clasificacioacutena de los casos observados en el Valle de Fiambalaacute 2009-
89
2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 90 Tabla 8 Variables de la ecuacioacuten Valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphellip 90 Tabla 9 Prevalencia de F hepatica en diferentes especies de animales domeacutesticos Valle de Fiambalaacute Catamarca Antildeos 2009-2011helliphelliphelliphellip 99 Tabla 10 Comparacioacuten de las mediciones de conchillas de limneidos entre las poblaciones naturales de L viator y L neotropica colectadas en el valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 104 Tabla 11 Caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina de acuerdo con los diferentes sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 172 Tabla 12 Datos comparativos de los tamantildeos obtenidos en ejemplares de F hepatica del valle de Fiambalaacute con las de diferentes lugares estudiadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 173 Tabla 13 ADN ribosomal nuclear y haplotipo de ADN mitocondrial para la identificacioacuten de coacutedigo L neotropica y L viator del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 174 Tabla 14 Diferencias de nucleoacutetidos encontradas en el fragmento de la secuencia del gen 16S ADNmt de las poblaciones de L neotropica estudiadas y otros haplotipos 16S aislados de la misma especie disponibles en GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 175 Tabla 15 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontradas en la secuencia de fragmento ADNmt del gen cox1 de las poblaciones de L neotropica estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos cox1 y aislamientos de la misma especie disponibles en GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 176 Tabla 16 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia ADNr ITS-2 de L viator en el valle de Fiambalaacute y otros de Argentina y haplotipos ITS- 2 aislados en la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphellip 177 Tabla 17 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia del ADNr ITS-1 de L viator colectados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y otros haplotipos ITS-1 y aislamientos disponibles en
LISTA DE TABLAS Y FIGURAS
Tablas Paacutegina Tabla 1 Hitos en el descubrimiento del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahellip 21
Tabla 2 Resultados de anaacutelisis comparativos seguacuten sexo y edad de la absorbancia de ELISA estudios coproloacutegicos eosinoacutefilia
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GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 178 Tabla 18 Diferencias de nucleoacutetidos que se encuentran en la secuencia del gen ADNr 16S y fragmentos del gen mitocondrial de L neotropica y L viator estudiados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y haplotipos 16S aislados en la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 179 Tabla 19 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontrados en la secuencia del fragmento de ADNmt del gen cox1 de L viator estudiado y otros haplotipos cox1 aislados de la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 180 Tabla 20 Distancias por pares entre secuencias de haplotipos ITS-2 e ITS-1 aislados de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 181 Tabla 21 Distancias por pares entre 16S y secuencias en haplotipos cox1 en aislamientos de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60helliphelliphelliphelliphellip 182 Tabla 22 Promedio de las distancias geneacuteticas entre y dentro de L neotropica y L viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 183 Figura 1 Especiacutemenes adultos de F hepatica sobre la caacutepsula de Glisson obtenidos a partir de una infeccioacuten natural en Lama glama en el valle de Fiambalaacute y esquema de Fasciola hepatica adultahelliphelliphelliphelliphelliphellip 23 Figura 2 Huevos de F hepatica presentes en materia fecal de ovinos infectados naturalmente en el valle de Fiambalaacute obtenidos por el meacutetodo de sedimentacioacuten de Dennis Stone y Swanson donde se aprecian los embriones en su interior y el detalle del opeacuterculo abierto y esquema de un huevo embrionadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 24 Figura 3 Esquema del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 24 Figura 4 Geografiacutea de la probable dispersioacuten de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 27 Figura 5 Imagen y fotografiacutea del aspecto externo de Lymnaea neotropica proveniente del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphellip 31 Figura 6 Ubicacioacuten geograacutefica del Valle de Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia de Catamarca Repuacuteblica Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 Figura 7 Distribucioacuten de personas (n=305) seropositivas y seronegativas en frecuencias relativas () al inmunodiagnoacutestico del ensayo de ELISA analizadas en el Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 Figura 8 Imagen microscoacutepica de huevo de Fasciola hepatica obtenido con la teacutecnica de Lumbreras en la materia fecal de una paciente de 3 antildeos del valle de Fiambalaacute Catamarcahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 93 Figura 9 Ejemplar de F hepatica extraiacutedo del coleacutedoco con CRTE en una paciente de 22 antildeos en el Hospital San Juan Bautista Catamarca 2012helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 94 Figura 10 Imagen ecograacutefica hepaacutetica con hepatomegalia Se observa aumento de la ecogenicidad y una estructura de aspecto filiformehellip 97 Figura 11 Imaacutegenes microscoacutepicas de estructura morfoloacutegica del cono cefaacutelico de Fasciola hepatica obtenidas de un animal bovino faenado en el Valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 100 Figura 12 Estructuras morfoloacutegicas de Fasciola hepatica halladas en un animal bovino del Valle de Fiambalaacute Argentina observadas al microscopio 101 Figura 13 Uacutetero con huevos de un espeacutecimen de Fasciola hepatica obtenido de la necropsia de un animal bovino en el Valle de Fiambalaacute Aumento 10xhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 101 Figura 14 Detalle del tegumento de una F hepatica mostrando las espinashelliphellip 102 Figura 15 Microfotografiacuteas tomadas de estructuras morfoloacutegicas de una F hepatica de ganado bovino del valle de Fiambalaacute observadas con microscopio de contraste por interferencia diferencial helliphelliphelliphelliphelliphellip 102
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Figura 16 Patrones de amplificacioacuten por RAPD PCR de Fasciola hepatica
aisladas de hiacutegados obtenidos para la deteccioacuten de cepas
resistentes a Triclabendazol (TCBZ) comparados con otras zonashellip 103 Figura 17 Conchillas de L viator A) vista ventral B) vista dorsal escala 5 mm y conchillas de L neotropica C) vista ventral D) vista dorsal escala 4 mm Especiacutemenes colectados en vegas del valle de Fiambalaacute 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105 Figura 18 Liacutemite de deteccioacuten del ensayo de PCR por electroforesis en gel de agarosa de los productos de amplificacioacuten utilizado como plantilla de ADN para la deteccioacuten de F hepatica en muestras de limneidos del Valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106 Figura 19 Consentimiento informadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 184 Figura 20 Planilla de recoleccioacuten de datos de las viviendas Valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 185 Figura 21 Planilla de recoleccioacuten de datos de las personas Valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 186 Figura 22 Graacuteficas de comparacioacuten de temperaturas promedio mensual en grados centiacutegrados y precipitacioacuten-aridez entre las localidades de Rio Grande y Tatoacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 187 Figura 23 Diseccioacuten de conductos biliares de un hiacutegado de Lama glama donde se observan ejemplares de Fasciola hepatica intracanaliculares Valle de Fiambalaacute Catamarca 2010helliphelliphelliphelliphellip 188 Figura 24 Apertura de un conducto biliar intrahepaacutetico en un hiacutegado de Ovis orientalis aries Se observa un ejemplar de F hepatica colangitis croacutenica con lesiones de la mucosa biliar hipertrofiada estrecheces inflamatorias fibrosas y piedras Valle de Fiambalaacute Catamarca 2010helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 188 Figura 25 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino de la provincia de Salta observadas al microscopiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 189 Figura 26 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino del municipio de Cordeiro RJ Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 189 Figura 27 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de bovinos de la provincia de Salta Argentina observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 190 Figura 28 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado del municipio de Lavras MG Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 190 Figura 29 Anaacutelisis filogeneacutetico de F hepatica basado en las secuencias de CO1 FhC01-CAT-adulthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 191
INTRODUCCIOacuteN y OBJETIVOS
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Generalidades
La Fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonoacutetica transmitida por
alimentos causada por Fasciola hepatica Linneaus 1758 (Trematoda Fasciolidae) que
utiliza como hospedadores intermediarios caracoles de agua dulce de la familia
Lymnaeidae Los hospedadores definitivos son mamiacuteferos silvestres y el ganado
principalmente ovino y bovino siendo el hombre un hospedador accidental Aunque este
paraacutesito es prevalente y produce severas peacuterdidas econoacutemicas en animales (Espinosa et
al 2010) actualmente emerge como causa de enfermedad en humanos (Chen y Mott
1990)
Fasciolosis era una enfermedad de los animales que en condiciones particulares podriacutea
infectar al hombre No se puede olvidar que se considera actualmente una zoonosis
emergente una de las 17 enfermedades tropicales desatendidas siendo una afeccioacuten
parasitaria ampliamente difundida en el todo el mundo (Organizacioacuten Mundial de la Salud
1995)
La Fasciolosis se caracteriza por estar relacionada con una problemaacutetica muy compleja
que involucra un contexto socio-cultural y socio-econoacutemico que debe ser atendido
sanitariamente en forma simultaacutenea La decisioacuten de prevenir controlar o eliminar la
aparicioacuten de esta enfermedad como muchos otros problemas del sector salud estaacute
relacionada con los estudios realizados
Fasciola hepatica se situacutea en un lugar preferente dentro del campo de conocimiento de la
Parasitologiacutea contribuyendo a ello la publicacioacuten de libros y trabajos dedicados a este
trematodo en los que se analizan aspectos muy distintos y desde puntos de vista
diferentes
Los apoyos recibidos desde la bioquiacutemica biologiacutea molecular geneacutetica epidemiologiacutea
farmacologiacutea e inmunologiacutea han demostrado ser pilares imprescindibles para impulsar
nuevos planteamientos de las investigaciones y han permitido avanzar en el
conocimiento de esta parasitosis
Los puntos de vista desde los que se investiga sobre F hepatica y Fasciolosis son muy
distintos y profundizan todo lo referente a su conocimiento desde los estudios iniciales
puramente bioloacutegicos o ecoloacutegicos hasta los maacutes modernos y actuales que tienen su
maacuteximo apoyo en la aplicacioacuten de avanzadas teacutecnicas de biologiacutea molecular bioquiacutemica
e inmunologiacutea
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Probablemente no sea ajena esta realidad al hecho importante de que la Fasciolosis
tambieacuten afecta al hombre y de hecho existen regiones en el sur de Latinoameacuterica donde
se diagnostican prevalencias muy elevadas de personas parasitadas por F hepatica
(Bargues et al 1996 a)(Bargues et al 1996 b)
En este sentido en zonas de Latinoameacuterica se reconoce el gran impacto en la salud
puacuteblica y en la economiacutea de los productores ganaderos donde los iacutendices de
parasitacioacuten animal son muy altos (Marcos et al 2007) lo que tambieacuten se traduce en la
presentacioacuten de prevalencias de Fasciolosis humana en esa poblacioacuten estando
afectados de manera especial nintildeos y joacutevenes (Valencia et al 2005)
Los sistemas de informacioacuten y de vigilancia de enfermedades transmisibles no incluyen
en muchos casos los indicadores de morbilidad por zoonosis por lo que la casuiacutestica de
esta enfermedad estaacute muy dispersa Dado que el subregistro es importante que la
informacioacuten proporcionada con relacioacuten a los casos es variable de acuerdo a la fuente o a
la persona que la suministra los datos tienen que ser obtenidos en un nuevo contexto
para que den respuestas a los interrogantes planteados sobre el tema
En la Repuacuteblica Argentina la prevalencia de esta parasitosis en el hombre estaacute reducida
por un fuerte subregistro al que se agregan problemas relativos al diagnoacutestico realizado
rutinariamente mediante el anaacutelisis coproparasitoloacutegico que presenta las desventajas de
una baja sensibilidad y no detectar la fase aguda de la enfermedad (Knoblock 1985)
Numerosas teacutecnicas de inmunodiagnoacutestico de esta parasitosis han sido descriptas y
aplicadas en diversos paiacuteses pero las mismas no se llevan a cabo en los laboratorios de
las aacutereas de mayor casuiacutestica de nuestro paiacutes (Carnevale y Velaacutesquez 2011)
En el paiacutes la importancia de esta enfermedad en los humanos no ha sido suficientemente
evaluada habieacutendose detectado esporaacutedicamente casos en pobladores rurales que
habitan en zonas serranas y turistas que visitaron tales aacutereas durante la eacutepoca estival
(Siciliano et al 1989)(Nieto Sosa et al 2008) Es una patologiacutea de intereacutes regional su
notificacioacuten no es obligatoria siendo una infeccioacuten secundaria a la ingesta de berros
comunes del geacutenero Nasturtium officinale (Barcat 2005) achicoria amarga (Toraxacum
officinale) (Siciliano 1982) u otros vegetales silvestres comestibles Por otra parte el
agua se ha citado como fuente de infeccioacuten humana puesto que se demostroacute la
presencia de metacercarias flotantes lo que se relacionoacute con casos de infeccioacuten humana
en zonas de Ameacuterica donde no es habitual el consumo de berros (Vareille et al 1993)
En los animales el diagnoacutestico se basa en la observacioacuten de paraacutesitos mediante
necropsia (Boero 1976) Tambieacuten se utiliza el estudio con teacutecnicas coproparasitoloacutegicas
y se han desarrollado test inmunoloacutegicos para la deteccioacuten de anticuerpos contra el
trematode (Olaechea 2007)
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La infeccioacuten por F hepatica fue siempre considerada una enfermedad de importancia
animal En los uacuteltimos antildeos la prevalencia de infecciones en rumiantes domeacutesticos ha
sido reportada en Europa con valores de 5 en Italia 10 en Gran Bretantildea 295 a
59 en Espantildea 188 en Noruega 119 en Polonia 107 en Alemania 45 en
Irlanda 293 en Turquiacutea y osciloacute entre el 112 al 252 en el centro de Francia
(Martiacutenez-Valladares et al 2013)(Kozłowska-loj y Loj-Maczulska 2013) Sin embargo a
partir de 1990 se planteoacute como un problema de Salud Puacuteblica debido a la aparicioacuten de
publicaciones que demostraban para el periacuteodo 1970-1990 la existencia de personas
infectadas de 42 paiacuteses diferentes de todos los continentes (Chen y Mott 1990)
En nuestro paiacutes aunque los anaacutelisis en cuanto a fisiografiacutea clima prevalencias animales
y limneidos son auacuten escasos (Mera y Sierra et al 2011) la situacioacuten no tiene porqueacute
diferenciarse de lo que ocurre en Bolivia Peruacute y Chile donde Fasciolosis humana es
endeacutemica Debido a esta nueva situacioacuten la Fasciolosis ya no puede considerarse
simplemente como una enfermedad zoonoacutetica secundaria sino maacutes bien como una
importante enfermedad parasitaria del hombre
Hoy se estima que si bien son los animales los que padecen las infecciones con maacutes
frecuencia respecto de las personas y que si en el pasado la Fasciolosis humana estaba
circunscripta a aacutereas y poblaciones maacutes o menos delimitadas recientemente los cambios
climatoloacutegicos y ambientales y sobre todo los cambios de las costumbres y haacutebitos
humanos estaacuten definiendo nuevos liacutemites geograacuteficos para la distribucioacuten de esta
parasitosis y hacen que aumente el riesgo de muchas poblaciones humanas ante esta
zoonosis (OMS 2006) como en otras enfermedades emergentes
La infeccioacuten humana por F hepatica siempre se habiacutea considerado como una
enfermedad de poca importancia ante lo que se veiacutea como una infeccioacuten rara o
escasamente prevalente sin embargo desde la revisioacuten de la situacioacuten (Chen y Mott
1990) se llamoacute la atencioacuten sobre la importancia de la Fasciolosis como un verdadero
problema de Salud Puacuteblica
Estas y otras circunstancias han hecho cambiar de forma radical la idea que hasta
entonces se teniacutea sobre Fasciolosis humana sobre todo teniendo en cuenta las
numerosas regiones que maacutes recientemente se han demostrado como endeacutemicas y por
tanto con elevadas prevalencias e intensidades de parasitacioacuten La Fasciolosis se
reconoce ahora como una enfermedad humana emergente Sea como fuere es indudable
que el nuacutemero real de casos humanos supera ampliamente los que se denuncian y a
pesar de que la situacioacuten ha cambiado desde ese periodo sigue siendo muy aceptada la
idea de que se trata de una enfermedad propia de ovejas y vacas lo que impide
convencer a los responsables regionales de Salud Puacuteblica de la importancia de estudiar
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en detalle las circunstancias que llevan a la infeccioacuten humana en algunos paiacuteses y la
necesidad imperiosa de adoptar medidas de diagnoacutestico y control
Las caracteriacutesticas de la epidemiologiacutea y transmisioacuten de la Fasciolosis conllevan a que su
distribucioacuten se disponga en las tiacutepicas manchas lo que hace que sea maacutes correcto
mencionar la distribucioacuten en aacutereas geograacuteficas o zonas con determinadas condiciones
maacutes que en el territorio completo de los paiacuteses
En el capiacutetulo de la Salud Puacuteblica referente a Fasciolosis se puede afirmar que hay
determinadas regiones con elevada prevalencia y con muchas personas afectadas En
alguno de los paiacuteses avanzados hay un determinado nuacutemero de casos humanos muchos
de los cuales se informan detalladamente en las publicaciones pero en otros lo que
sucede hace pensar que haya mayor nuacutemero de infecciones por el trematodo y que
pasen inadvertidos para la consulta meacutedica o que incluso se presenten casos de
Fasciolosis que cliacutenicamente se diagnostiquen equivocadamente como otros procesos
de ahiacute que sea de la mayor importancia mejorar o precisar el diagnoacutestico tanto a nivel de
semiologiacutea como del laboratorio
Es evidente que muchos de los estudios sobre prevalencias de fasciolosis humana no
son realmente muestras epidemioloacutegicas sino solamente estimaciones del nuacutemero de
casos detectados en una determinada zona La infeccioacuten humana estaacute citada en
numerosos paiacuteses de los cinco continentes lo que viene a demostrar la gran capacidad
de adaptacioacuten a muy distintos haacutebitats y climas
1 - Antecedentes
11 - Breve Resentildea Histoacuterica
La Fasciolosis en el sentido amplio del teacutermino estaacute causada por paraacutesitos trematodos
digeneos que pertenecen al geacutenero Fasciola cuya distribucioacuten geograacutefica entra sin duda
en la categoriacutea de paraacutesito cosmopolita ya que su difusioacuten es mundial (OMS 2006) Se
han descrito varias especies dentro del geacutenero Fasciola pero soacutelo dos se reconocen
como vaacutelidas desde el punto de vista taxonoacutemico como paraacutesitas del hombre y de
animales Esencialmente las especies que intervienen en esta parasitosis son F hepatica
y F gigantica Cobbold 1855 la primera predomina en zonas de climas maacutes templados
sin excluir su presencia en otras regiones y reconociendo que ambas se superponen con
frecuencia en zonas subtropicales (Andrews 1999)
En una investigacioacuten paleo-parasitoloacutegica realizada en el Valle Saale-Unistrut en
Alemania (Teegen 2003) se evidencioacute la presencia de huevos de F hepatica en un
esqueleto humano prehistoacuterico y tambieacuten en los restos de un bovino de unos 3000 antildeos
a C hallazgos que denotan la presencia de Fasciola spp en Europa hace miles de
antildeos La primera descripcioacuten de Fasciolosis en la literatura estaacute contenida en el libro
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titulado ldquoBlack Book of Chirkrdquo publicado cerca de 1200 (Froyd 1969) donde hace
referencia a paraacutesitos en el hiacutegado de las ovejas
Tabla 1 Hitos en el descubrimiento del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
De Brie 1379 Primero en observar al trematodo F hepatica
Redi 1688 Refuta la teoriacutea de la generacioacuten espontaacutenea
Swammerdam
1737 Primero en observar cercarias en un caracol
Muumlller 1773 Observa cercarias nadando en el agua Zeder 1803 Describe el miracidio eclosionando del huevo Nitzsch 1807 Observa cercarias enquistaacutendose
Bojanus 1818 Describe las redias y el desarrollo de cercariacuteas La Valette St
George 1855 Observa la infeccioacuten del caracol por el miracidio
Weinland 1875 Sugiere que las fases larvarias de F hepatica
transcurren en L truncatula
Leuckart Thomas 1882
Confirma que L truncatula es el hospedador intermediario y se comprende el ciclo bioloacutegico del trematodo
Lutz1892 1893 Confirma que los herbiacutevoros adquieren la infeccioacuten mediante la ingestioacuten de metacercarias
Sinitsin 1914 Confirma la ruta de migracioacuten de F hepatica hacia el hiacutegado
Fuente Andrews Stuart J 1999
Seguacuten la historia maacutes cercana de F hepatica se trata del primer trematodo que describioacute
en 1250 Pietro d‟Abano y maacutes tarde en 1379 Jean de Brie vio los paraacutesitos en un hiacutegado
ovino y relacionoacute su presencia con el consumo de una hierba que llama dauve (acaso un
ranuacutenculo) de donde derivoacute el nombre de duela del hiacutegado (Cordero 1999) Gesner
(1551) demostroacute que el distoma del hiacutegado se encontraba alliacute donde el ganado vacuno se
alimentaba con hierba en las proximidades del agua (Piekarski 1959)
De acuerdo a Cole (1944) una descripcioacuten del gusano aplanado del hiacutegado aparece en el
libro titulado ldquoA new Tracte or Treatyse moost profytable for all Husbandemenrdquo publicado
en 1523 por Sir Anthony Fitzherbert Poco despueacutes en 1539 en el libro ldquoDe lumbricis
alvum occupantibusrdquo se hace referencia a una observacioacuten realizada por el meacutedico
Fanensi Gabucinus quien describe gusanos que pareciacutean semillas de calabaza en los
vasos sanguiacuteneos del hiacutegado de ovejas y cabras Durante la segunda mitad del siglo XVI
se reportaron observaciones adicionales sobre la enfermedad del gusano hepaacutetico
aplanado principalmente las de Cornel Gemma (1575) En ese momento todaviacutea era
comuacuten pensar que la alimentacioacuten de las ovejas con determinadas plantas era
responsable de la enfermedad Recieacuten en 1688 esta teoriacutea fue cambiada por Francesco
Redi un meacutedico italiano autor de la primera helmintologiacutea comparada quien mostrando
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que los paraacutesitos liberaban huevos y asiacute destrozoacute la falsa doctrina de la generacioacuten
espontaacutenea Se desconoce el paraacutesito en el cual esta observacioacuten fue realizada por
primera vez pero Redi fue el primero en publicar un cuadro del paraacutesito un esquema de
un espeacutecimen sacado del hiacutegado de un carnero castrado y antildeos maacutes tarde tambieacuten las
recogioacute incluso de una liebre fue eacutel quien realizoacute los primeros dibujos de los que se tiene
constancia de este trematode
Aparentemente John Faber en 1670 afirmoacute que el gusano aplanado del hiacutegado viviacutea en
los conductos biliares y no en los vasos sanguiacuteneos (Reinhard 1957) Pollas en el siglo
XIX descubre el paraacutesito en el hombre mencionaacutendolo por primera vez en 1818 Otro de
los que describioacute el hallazgo de F hepatica en humanos fue Petridge en 1852 en viacuteas
biliares extrahepaacuteticas en Inglaterra (Blancas et al 2004)
En 1883 Leukhart de Alemania (Taylor 1937) y Thomas de Inglaterra investigando por
separado describieron el ciclo de vida completo (Jensen y Mackey 1973) Asiacute pues en
2014 se cumplioacute el primer centenario del descubrimiento del ciclo completo de F hepatica
en el que participaron numerosos investigadores de diversos paiacuteses entre los que se
citan soacutelo los logros maacutes destacados de alguno de ellos Thomas y Leuckart finalmente
concluidos por Sinitsin (Sinitsin 1914)
111 - Sinonimia
La palabra trematodo (derivada del griego) significa abertura o ventosa F hepatica ha
recibido tambieacuten nombres corrientes como ldquoduelardquo ldquodistomardquo o ldquoliver fluke diseaserdquo y
entre su sinonimia ldquojallo jallordquo ldquocallutacardquo ldquohojuelardquo y ldquomariposardquo El nombre vernaacuteculo en
Meacutexico es ldquocazahuaterdquo popularmente conocida como ldquoalicuyardquo o ldquocolerinardquo en la sierra
peruana ldquoTacutealpha laqacuteordquo en Bolivia ldquopirihuiacutenrdquo en Chile o ldquosaguaipeacuterdquo en Uruguay y
Argentina En nuestro paiacutes ldquoPalomilla del hiacutegadordquo en la pampa huacutemeda ldquocorrochordquo en la
provincia de San Juan ldquochonchacordquo en San Luis y ldquouncardquo o ldquouncacardquo en el noroeste
argentino
112 - Clasificacioacuten taxonoacutemica
Seguacuten los trabajos de Yamaguti et al (1958) Pantelouris (1965) Taylor (1937) Schell
(1985) Borchet (1981) Boray (1982) Boch y Supperer (1982) Euzeby (1971) y Urquhart
et al (1987) la clasificacioacuten taxonoacutemica de las especies del geacutenero F hepatica es la
siguiente
Phylum Platyhelminthes (vermes que poseen un cuerpo aplanado y que en su mayoriacutea
son hermafroditas) clase Trematoda (cuerpo no segmentado forma foliaacutecea con aparato
digestivo incompleto y ventosas como oacuterganos de fijacioacuten) subclase Digenea (evolucioacuten
indirecta con uno o maacutes hospedadores intermediarios) orden Echinostomatida suborden
Prosomata Odhner 1905 superfamilia Fascioloidea familia Fasciolidae Railliet 1985
geacutenero Fasciola Linnaeus 1758 especie F hepatica (Belding 1965)
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12 - Ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
El adulto del paraacutesito presenta aspecto foliaacuteceo lanceolado y aplanado Mide de 5 a 13
mm de ancho por 2 a 3 cm de largo (Noble y Noble 1965) es hermafrodita Su aparato
digestivo es incompleto sin ano El de fijacioacuten estaacute constituido por dos ventosas la
posterior o acetaacutebulo estaacute sobre la cara ventral y es de forma triangular la ventosa
anterior es redondeada y maacutes pequentildea Carece de aparato circulatorio y respiratorio
(Belding 1965)
FuenteBIODIDACR Livingstone
Figura 1 Especiacutemenes adultos de F hepatica sobre la caacutepsula de Glisson obtenidos a
partir de una infeccioacuten natural en Lama glama en el valle de Fiambalaacute y esquema de F
hepatica adulta
El uacutetero presenta una forma tubular enrollada dilataacutendose por la acumulacioacuten de los
huevos y desembocando finalmente en el poro genital junto al cirro (Rey Millares
1960)(Belding 1965)(Pezzi Guimaratildees 2002)
Los huevos del paraacutesito (50 x 150 micro de color parduzco) inmaduros son descargados por
los conductos biliares en las heces Pasan a cursos de agua desarrollan el embrioacuten
liberan la primera forma larval el miracidio el cual penetra un hospedador intermediario
que incluye muchas especies del geacutenero Lymnaea en el que se desarrolla a otros
estadios larvales -esporoquistes redias- hasta emerger como cercarias moacuteviles Las
cercarias se liberan del molusco y se enquistan como metacercarias en la superficie de
las plantas acuaacuteticas donde se mantienen intactas e infectivas por largos periacuteodos
El hospedador (mamiacutefero) definitivo se infecta por el consumo de vegetales crudos En eacutel
la metacercaria se desenquista y desarrolla a formas juveniles y adultas que finalmente
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se alojan en los conductos biliares El paraacutesito produce huevos (a partir de los 3 meses)
que pasan con la bilis a las heces del hospedador completando el ciclo (Belding
1965)(Kean et al 1978)
Fuente Centro para el control y prevencioacuten de enfermedades
(CDC)
Figura 2 Huevos de F hepatica presentes en materia fecal de ovinos infectados
naturalmente en el valle de Fiambalaacute obtenidos por el meacutetodo de sedimentacioacuten de
Dennis Stone y Swanson donde se aprecian los embriones en su interior y el detalle del
opeacuterculo abierto y esquema de huevo embrionado
Los paraacutesitos del Phylum Platyhelminthes Clase Trematoda Subclase Digenea se
hallan dentro del grupo de los que se transmiten entre varios hospedadores El ciclo de
vida de los digeneos involucra un hospedador definitivo en general un vertebrado donde
el paraacutesito alcanza la madurez sexual por lo menos un hospedador intermediario donde
se produce la multiplicacioacuten larval (esporoquistes redias y cercarias) y estadios de vida
libre (miracidios y cercarias) (Hasseeb y Fried 1997) El primer hospedador intermediario
es un caracol con respecto al cual los digeneos poseen una gran especificidad El estadio
infectivo para el hospedador definitivo es la metacercaria y para el primer hospedador
intermediario el miracidio
Figura 3 Esquema del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
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Nota Los huevos inmaduros de F hepatica se descargan en los conductos biliares y en
las heces Los huevos embrionados maduran en el agua huevos liberando
miracidios que invaden un hueacutesped intermediario adecuado caracol del geacutenero
GalbaFossaria En el caracol los paraacutesitos pasan por varias etapas de desarrollo
(esporoquistes redias y cercarias ) Las cercarias se liberan del caracol y se
enquistan como metacercarias en la vegetacioacuten acuaacutetica u otras superficies Los
mamiacuteferos adquieren la infeccioacuten por comer la vegetacioacuten que contiene metacercarias
Los seres humanos pueden infectarse al ingerir vegetales que contiene metacercarias
especialmente berros Despueacutes de la ingestioacuten las metacercarias se desenquistan en
el duodeno y migran a traveacutes de la pared intestinal la cavidad peritoneal y el
pareacutenquima hepaacutetico a los conductos biliares donde se desarrollan como trematodos
adultos
Fuente Centro para el Control y Prevencioacuten de Enfermedades (CDC)
121 - Aspectos epidemioloacutegicos
El estudio de la epidemiologiacutea de la Fasciolosis involucra los factores que afectan la
prevalencia y la intensidad de la infeccioacuten y como esto impacta en los animales
(Torgerson y Claxton 1999) La epidemiologiacutea de la enfermedad depende de la
susceptibilidad de las especies de hospedadores definitivos dada por la resistencia
natural o adquirida y por el estado nutricional la edad y otros factores que condicionan la
fisiologiacutea de cada especie y tambieacuten de la presioacuten de infeccioacuten en el ambiente La presioacuten
de infeccioacuten a su vez estaacute fuertemente influenciada por factores abioacuteticos en particular
por la temperatura y la humedad que modulan la presencia y el desarrollo de los
hospedadores intermediarios y el desarrollo del paraacutesito dentro y fuera de eacutestos
(Torgerson y Claxton 1999) La epidemiologiacutea de la Fasciolosis tambieacuten depende de una
gran variedad de factores topograacuteficos bioloacutegicos y de manejo ganadero (Boray et al
1969)
La distribucioacuten de la Fasciolosis es irregular ya que la infeccioacuten estaacute determinada por la
presencia del molusco que actuacutea como hospedador intermediario en el agua dulce de la
presencia de animales herbiacutevoros de las condiciones fisiograacuteficas y climaacuteticas y de los
haacutebitos dietarios humanos (Mas-Coma 2005)
Respecto a las caracteriacutesticas ecoloacutegicas del caracol bajo especiales circunstancias los
limneidos son capaces de adaptarse a las condiciones maacutes extremas Los caracoles
limneidos son maacutes resistentes a las bajas temperaturas que a las altas Las
metacercarias son susceptibles a la desecacioacuten a temperaturas por encima de los 25 ordmC
pero pueden sobrevivir a las bajas temperaturas durante tiempo con suficiente nivel de
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humedad Una alta humedad asociada con abundantes lluvias suelen ser precursoras de
endemias en animales herbiacutevoros (Ripert et al 1988)
Los principales animales que actuacutean como reservorios hospedadores en relacioacuten al
hombre son las ovejas las cabras y los bovinos La oveja es el mamiacutefero reservorio que
juega un papel maacutes importante en la contaminacioacuten de los pastos y por tanto en la
transmisioacuten humana En la oveja la puesta de huevos diaria es relativamente alta (4000-
5000 huevos por paraacutesito adulto y 8800-25100 por hospedador) (Boray 1969)
Los haacutebitos alimenticios del ser humano son muy importantes en la Fasciolosis Comer
berro ademaacutes de otras verduras acuaacuteticas con metacercarias adheridas puede ser
vehiacuteculo de la transmisioacuten asiacute como beber agua contaminada con metacercarias
flotantes (Bargues et al 1996 b)
Los trabajos de Fasciolosis publicados en la literatura permiten distinguir varias
categoriacuteas (I) la mayoriacutea de artiacuteculos se refieren a notificaciones de casos individuales
(II) otros informan de varios miembros de grupos familiares que compartieron alimentos
contaminados (III) artiacuteculos que comunican brotes que no necesariamente afectan a
miembros de la misma familia y (IV) artiacuteculos de estudios epidemioloacutegicos que se
refieren a un gran nuacutemero de personas (Chen y Mott 1990)(Esteban et al 1998)
Cabe destacar la gran capacidad de colonizacioacuten y expansioacuten de esta enfermedad a
partir de los oriacutegenes euroasiaacuteticos de F hepatica relacionada con la gran adaptabilidad
tanto de los trematodes como de los limneidos a medios muy diversos En el caso de F
hepatica resalta su capacidad de adaptarse y dar lugar a grandes endemias en lugares
extremos e inhoacutespitos
13 - Viacuteas de difusioacuten geograacutefica de F hepatica
Los animales domesticados alcanzaron grandes densidades poblacionales y se
concentraron en la proximidad de la vivienda humana aumentando la probabilidad de
transmisioacuten intraespeciacutefica de las infecciones y el contagio a la poblacioacuten humana
(Wisnivesky 2003) Los animales domeacutesticos se originaron en la medialuna feacutertil del
Sudeste asiaacutetico o Mesopotamia y se dispersaron luego alrededor del mundo (Haviland
1997)
El punto inicial de difusioacuten de F hepatica durante el periacuteodo posterior a la adaptacioacuten
peri-domiciliaria mediante pequentildeos rumiantes ovinos y caprinos salvajes hacia el Viejo
Mundo procedioacute del Medio Oriente aproximadamente 6000 a C La dispersioacuten hacia el
oeste centro y norte de Europa tuvo lugar a traveacutes de los Balcanes Turquiacutea y Grecia
entre los milenios 4-3 a C Hacia el oeste la ruta seguida probablemente fue por el
Mediterraacuteneo con los fenicios y maacutes tarde con los romanos llegando al noroeste de
Aacutefrica e Iberia sobre el siglo VIII a C Los ochocientos antildeos de ocupacioacuten aacuterabe de la
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peniacutensula ibeacuterica ciertamente habriacutean contribuido a la difusioacuten de F hepatica hacia el
norte de Aacutefrica a traveacutes de Gibraltar (Mas-Coma et al 2009 a)
La expansioacuten hacia el este en Asia sentildeala dos posibles rutas principales una maacutes
limitada hacia el sur a traveacutes de las montantildeas de Afganistaacuten y hasta Pakistaacuten
probablemente en los milenios IV y III a C y otra viacutea maacutes larga a traveacutes de Mongolia
hasta China y el Lejano Oriente al parecer maacutes reciente
Figura 4 Geografiacutea de la probable dispersioacuten de Fasciola hepatica
Fuente Mas-Coma et al 2009 a
131 - Distribucioacuten de F hepatica en Ameacuterica
Fueron las rutas transoceaacutenicas hacia el Nuevo Mundo y Oceaniacutea las que continuaron la
propagacioacuten de F hepatica durante los uacuteltimos 500 antildeos Otras rutas secundarias
completaron la dispersioacuten en las diferentes zonas de Ameacuterica Esto viene a significar que
la amplia difusioacuten de la Fasciolosis en Espantildea Portugal Francia el Reino Unido y Paiacuteses
Bajos entre los siglos XV y XIX constituyoacute probablemente la viacutea de introduccioacuten del
paraacutesito en tierras americanas
Luego de la llegada de los europeos a Ameacuterica comienza la introduccioacuten de animales
domeacutesticos El ganado espantildeol adquirioacute importante representacioacuten puesto que se habriacutea
extendido inicialmente en el aacuterea del Caribe y despueacutes hacia el resto de Ameacuterica Central
y del Sur En Argentina F hepatica se describe por primera vez como problema en
ovinos en 1888 (Bacigalupo et al 1943)
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El ganado de origen espantildeol introducido en el continente fue inicialmente ovino y
despueacutes se amplioacute al vacuno mientras que el ganado de origen portugueacutes que llegoacute
hacia Brasil fueron bovinos criados principalmente en el noroeste de la peniacutensula Ibeacuterica
(Mirol et al 2003)
La gran uniformidad geneacutetica de las Fasciolas halladas en puntos geograacuteficamente
alejados como Valdivia en Chile o Leoacuten en Espantildea demuestra el origen comuacuten de la
difusioacuten de paraacutesito y de hospedadores en toda Ameacuterica Otro tanto sucede entre los
aislamientos geneacuteticos del Reino Unido en relacioacuten con los hallados en Australia
La Fasciolosis endeacutemica que hoy se extiende por amplias zonas de los paiacuteses del sur de
Latinoameacuterica es producto de la historia En Ameacuterica precolombina no se conociacutean las
ovejas ni las vacas pero los europeos al llegar a las nuevas tierras las importaron desde
Europa presumiblemente ya infectadas con trematodes y no soacutelo eso tambieacuten se
trajeron sin tener conocimiento de ello los caracoles (Lymnaeas)
Tal acarreo ha llegado a generar un verdadero problema ecoloacutegico que con el paso del
tiempo ha alcanzado cotas tan importantes que por ejemplo solamente en la VII Regioacuten
de Chile se ha registrado un porcentaje de animales infectados del 90 con importantes
decomisos hepaacuteticos en las faenas de los mataderos (Apt et al 1992) La invasioacuten
parasitaria fue tan efectiva que afectoacute a otras muchas especies incluso a las vicuntildeas
llamas (Mariacuten 2009) alpacas guanacos liebres (Kleiman et al 2004) conejos silvestres
etceacutetera Otro tanto puede decirse de amplias regiones de Peruacute Bolivia Ecuador y de
paiacuteses centroamericanos como es el caso de Cuba (Acha y Szyfres 1997)
El empleo de especies animales para el transporte de personas bienes y mercanciacuteas que
se produce en todas las civilizaciones humanas proporcionoacute la posibilidad de que F
hepatica se extendiera de modo progresivo a amplias aacutereas geograacuteficas dentro de un
continente o una regioacuten intracontinental Muchos de estos animales entre ellos las mulas
y llamas todaviacutea se emplean hoy para el transporte aunque sea a escala local y en ese
sentido representan un medio importante que posibilita la difusioacuten de la infeccioacuten
La trashumancia es un sistema de explotacioacuten ganadera basado en el pastoreo y
aprovechamiento de pastos en periodos adecuados y se orienta a evitar los efectos
negativos de factores climaacuteticos excesivamente rigurosos por las temperaturas friacuteas o
caacutelidas acompantildeadas de escasas precipitaciones o de excesiva sequiacutea en particular en
ciertas estaciones y regiones determinadas La migracioacuten estacional de la ganaderiacutea
entre tierras bajas y de montantildea ha sido una tradicioacuten importante durante muchos antildeos y
aun todaviacutea se practica en muchas regiones cordilleranas de nuestro paiacutes
Es evidente que los transportes por viacutea terrestre mariacutetima o aeacuterea utilizados
asiduamente para movimientos de importacioacutenexportacioacuten de ganado pueden tener
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repercusiones sanitarias y muy probablemente han sido el origen de introduccioacuten de
Fasciolosis hasta otras zonas lejanas tal como sucedioacute en Ameacuterica
Los problemas relacionados con estos movimientos comerciales ademaacutes de implicar el
riesgo de extender la infeccioacuten por F hepatica hacia otras aacutereas tambieacuten dificultan la
realizacioacuten y obtencioacuten de buenos resultados en estudios geneacuteticos que esteacuten basados
en algunos marcadores moleculares En efecto si las poblaciones de F hepatica
proceden de mezclas anteriores y de distintos oriacutegenes es muy difiacutecil que a traveacutes de los
estudios geneacuteticos se puedan hacer interpretaciones correctas sobre su origen y las viacuteas
seguidas por los paraacutesitos (Semynova et al 2006)(Walker et al 2007) y por tanto habraacute
mucha dificultad para obtener resultados reveladores sobre las rutas seguidas por
Fasciola spp sobre todo si se tiene en cuenta la escasa disponibilidad de marcadores
moleculares fiables
Tales movimientos de ganaderiacutea realmente no soacutelo facilitan la extensioacuten de F hepatica
sino tambieacuten de las especies de caracoles que actuacutean como hueacutespedes intermediarios
como es el caso de los limneidos que se encuentran en contacto directo con los animales
porque ambos comparten haacutebitats similares Esto es lo que sucede con respecto a Galba
truncatula que puede ser arrastrado entre las pezuntildeas de los animales y dispersados a
otros lugares introducieacutendose asiacute de manera accidental donde no es habitual Es lo que
muy probablemente ha sucedido y se ha analizado en zonas de Bolivia (Mas-Coma et al
2001) Las evidencias sugieren que ejemplares de G truncatula pueden permanecer
activos en el seno de trozos de barro adherido a las pezuntildeas de los rumiantes que
pisotean esas zonas y pueden ser trasladados a otras donde tras un periodo de
hibernacioacuten o estivacioacuten se reactivan cuando nuevamente se sumergen en agua
Si se observan los datos sobre la evolucioacuten de la Fasciolosis animal de los uacuteltimos antildeos
en muchas regiones los resultados no dejan de sorprender porque se comproboacute algo
muy llamativo y es que lejos de disminuir la prevalencia ha aumentado
Diversos estudios han puesto de manifiesto diferencias en la resistencia o sensibilidad a
esta parasitosis dependiendo de la especie animal los bovinos ovinos equinos y el
hombre reaccionan en forma tardiacutea permitiendo su desarrollo Asiacute pues la infeccioacuten por
F hepatica no afecta por igual a todas las especies animales el ganado ovino y bovino
son los maacutes receptivos lo que implica considerables peacuterdidas econoacutemicas tanto directas
(son conocidas las mortandades en bovinos debidas a Hemoglobinuria Bacilar por
Clostridium haemolyticum como la Hepatitis Infecciosa Necrosante por C novyi B en
ovinos asociadas a Fasciolosis aguda) como indirectas (decomiso de hiacutegados
disminucioacuten de las producciones gastos en tratamientos etceacutetera) (Olaechea 1994)
Dentro de los animales susceptibles de ser hospedadores reservorios de F hepatica se
diferencia I) animales domeacutesticos principales reservorios ganado vacuno y ovino
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cerdos buacutefalos y monos II) animales domeacutesticos reservorios secundarios caballos
cabras dromedarios camellos y llamas III) animales silvestres liebres conejos y
roedores entre otros (Mas-Coma et al 1997)
Es curioso como en animales de laboratorio como ratas ratones conejos asiacute como en
humanos unos pocos ejemplares de F hepatica producen reacciones muy intensas e
incluso muertes Otros en cambio como el cerdo poseen una resistencia natural a la
migracioacuten de las formas juveniles probablemente por la gran cantidad de tejido
conjuntivo perilobulillar que tienen (Getty 1974) sin embargo tambieacuten hay descritas
Fasciolosis graves En eacutequidos que son hospedadores receptivos a F hepatica las
lesiones son casi inaparentes incluso en caso de parasitacioacuten abundante Se mencionan
casos de muerte relacionados con F hepatica en los que curiosamente se encontraron
nuacutemeros variables de especiacutemenes desde uno a 14 e incluso hasta 40 ejemplares (Rojo
y Ferreacute 1999)
En la Repuacuteblica Argentina los registros de decomiso de hiacutegados indican que la
Fasciolosis es la cuarta enfermedad de importancia veterinaria del ganado bovino de
acuerdo a los datos de la Oficina de Estadiacutestica del Servicio Nacional de Sanidad y
Calidad Agroalimentaria Direccioacuten de Fiscalizacioacuten de Productos de Origen Animal Es
considerada una enfermedad endeacutemica en el paiacutes y su distribucioacuten abarca las provincias
de Buenos Aires Catamarca Coacuterdoba Corrientes Chaco Chubut Entre Riacuteos Jujuy La
Pampa Mendoza Misiones Neuqueacuten Riacuteo Negro Salta San Luiacutes Santa Cruz Santa Fe
y Tierra del Fuego En los uacuteltimos antildeos las mayores prevalencias en animales se
registraron en la Regioacuten Patagoacutenica (68) seguida de la Regioacuten Noreste (41)
Noroeste (25) Cuyo (14) y Pampeana (09) (Prepelitich y Wisnivesky-Colli 2013)
En Catamarca no existen registros oficiales del porcentaje de infeccioacuten en el ganado
vacuno u otras especies animales por este trematodo hepaacutetico aunque los ganaderos
refieren peacuterdidas econoacutemicas importantes La Fasciolosis animal estaacute ampliamente
distribuida en todos los departamentos de la provincia seguacuten se desprende de la
informacioacuten de los decomisos de viacutesceras infectadas en los mataderos
La Fasciolosis se ha considerado una enfermedad que afecta a la ganaderiacutea desde
tiempo inmemorial Debido a su importancia econoacutemica a su particular ciclo bioloacutegico y
forma de transmisioacuten su peculiar especificidad de hospedadores etc se han planteado
a lo largo de muchos antildeos multitud de estudios no soacutelo desde la perspectiva veterinaria
sino tambieacuten de otras muchas aacutereas de conocimiento en lo que se ha convenido en
llamar acercamientos multidisciplinares que van siendo habituales en las investigaciones
parasitoloacutegicas
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14 - Hospedador intermediario
El paraacutesito no se encuentra en regiones donde las condiciones no son las adecuadas
para el desarrollo de los caracoles que sirven de hospedador intermediario Pertenecen al
Phylum Mollusca y a la clase Gasteropoda y las especies de intereacutes se encuentran en la
subclase Euthyneura o Pulmonata dependiendo del sistema de clasificacioacuten (Cuezzo
2009)
Los caracoles pertenecientes al geacutenero Lymnaea se encuentran involucrados en la
transmisioacuten de F hepatica Son anfibios y viven en el barro en ambientes de aguas poco
profundas sujetos a las inundaciones y desecaciones Se los encuentra normalmente en
haacutebitats que se presentan huacutemedos intermitentemente y en aguas ligeramente aacutecidas y
es raro encontrarlos en ambientes permanentemente huacutemedos Su distribucioacuten no es
uniforme porque dentro de cada haacutebitat pueden concentrarse en aacutereas pequentildeas con
canales de drenaje y filtraciones Viajan largas distancias arrastrados por la corriente y en
ciertos paiacuteses del mundo como Australia las grandes regiones con aguas permanentes y
que contienen pocos caracoles son consideradas importantes en la recolonizacioacuten de
cursos de agua temporarios El 30 de los moluscos sobrevive meses de sequiacutea
mediante la estivacioacuten y auacuten los recieacuten eclosionados pueden sobrevivir dos meses de
estivacioacuten Sin embargo una vez que el agua regresa los caracoles son capaces de
procrearse raacutepidamente (Torgerson y Claxton 1999)
Figura 5 Imagen y fotografiacutea del aspecto externo de Lymnaea neotropica proveniente del
valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina
La ecologiacutea de la Fasciolosis estaacute estrechamente relacionada con la de los moluscos que
sirven de hospedadores intermediarios Los caracteres fisiograacuteficos la composicioacuten del
suelo y los factores climaacuteticos determinan el ritmo de la reproduccioacuten de los limneidos y
por consiguiente la dinaacutemica epidemioloacutegica
F hepatica posee una gran especificidad hacia su hospedador intermediario ya que soacutelo
se desarrolla en caracoles de la familia Lymnaeidae Estos caracoles estaacuten distribuidos
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en todo el mundo aunque son maacutes abundantes en las zonas templadas del hemisferio
norte (Malek 1962) Son caracoles pulmonados en su mayoriacutea anfibios capaces de vivir
sobre el fango aunque existen algunas especies maacutes acuaacuteticas que se desarrollan a
varios centiacutemetros de profundidad Habitan una gran variedad de ambientes
dulceacuiacutecolas temporarios y permanentes poco profundos de aguas claras con poca
corriente (Malek 1962)
No todas las especies de limneidos son igualmente susceptibles a F hepatica y tanto los
factores extriacutensecos (condiciones ambientales de cada regioacuten) como los intriacutensecos
(estado nutricional tamantildeo madurez sexual etceacutetera) influyen en el rol de cada especie
como hospedador intermediario (Ollerenshaw 1971)(Mattos y Ueno 1986)(Minchela et
al 1985)
En la mayoriacutea de los paiacuteses de Ameacuterica del Sur L viator L cubensis y L truncatula
estaacuten identificadas como los principales hospedadores de F hepatica (Samadi et al
2000)(Pointer et al 2006)(Kleiman et al 2007) en Brasil la especie introducida L
columella es el principal hospedador intermediario (Amato et al 1986)
Las especies descriptas en nuestro paiacutes son L viator L diaphana L peculiaris L
pictonica y L plicata (Hubendick 1951)(Paraense 1975)(Castellano y Landoni 1981)
(Paraense 1982)(Paraense 1983)(Paraense 1984)(Malek 1985) L columella
(Hubendick 1951)(Prepelich et al 2003) L patagonica L neotropica (Bargues y Mas-
Coma 2005)(Bargues et al 2007 a b) y L truncatula (Issia et al 2008)
En Argentina la relevancia epidemioloacutegica y la distribucioacuten geograacutefica de estos caracoles
no se conocen con precisioacuten y existe poca certeza taxonoacutemica entre las especies del
geacutenero Las especies L plicata Hylton Scott 1953 y L diaphana King 1830 han sido
escasamente citadas (Hubendick 1951)(Hylton 1953) La distribucioacuten de L diaphana se
encuentra asociada a zonas friacuteas abarca la Patagonia Tierra del Fuego e Islas Malvinas
(Castellanos y Landoni 1981) aunque en Salta tambieacuten se ha observado la presencia de
esta especie (Rossanigo et al 1983) La especie L viatrix Orbigny 1835 ha sido
descripta en las siguientes provincias Buenos Aires Catamarca Chubut Coacuterdoba
Corrientes Entre Riacuteos Jujuy Mendoza Neuqueacuten Riacuteo Negro Salta y San Luis
(Paraense 1976 1982)(Lombardero et al 1979)(Castellanos y Landoni
1981)(Rossagnino et al 1983)(Venturini y Fonrouge 1985)(Kleiman et al 2004) La
distribucioacuten de L columella (Say 1817) estaacute restringida al Noreste (Prepelitch et al
2003) mientras L truncaluta es reportada en el paiacutes como el maacutes importante limneido en
la transmisioacuten de Fasciolosis (Bargues et al 2006 b) En la provincia de Catamarca L
viator es la especie reconocida (Bacigalupo 1930)(Morton 1986)(Ubaid 1989)
En la revisioacuten general maacutes reciente sobre limneidos sudamericanos Malek (1985)
catalogoacute la misma especie mencionada por Hubendick (1951) pero aceptando L
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patagonica como vaacutelida y no incluyoacute a L peculiaris Mientras que para Lombardero et al
(1979) el informe en Argentina de la especie europea Stagnicola como L palustris por
NJ Evans del Museo Britaacutenico de Historia Natural es sorprendente ya que seriacutea el uacutenico
Stagnicola reconocido en la Regioacuten Neotropical Asimismo se deberiacutea confirmar la cita
de la especie L cousini (Olaechea 1994) ya que puede haber un malentendido sobre
esta especie porque contrariamente a lo que se sentildeala no se incluye la presencia de L
cousini en Argentina en la uacuteltima revisioacuten de Castellanos y Landoni (1981)
Recientemente los hallazgos de L neotropica por Mera y Sierra (2009) en la provincia de
Mendoza y el de Pujadas et al (2014) en la provincia de Entre Riacuteos representan tanto
una nueva especie de limneido para la fauna argentina como un intereacutes adicional del
punto de vista de la enfermedad
Cuando la temperatura ambiente oscila entre los 10-30 ordmC y hay suficiente humedad en el
suelo se generan condiciones favorables para el establecimiento y desarrollo de los
caracoles de la familia Lymnaeidae (Torgerson y Claxton 1999) Estas condiciones
permiten que los moluscos desarrollen poblaciones abundantes y persistentes en el
tiempo A su vez los huevos de F hepatica eliminados por el ganado infectado se
desarrollan satisfactoriamente bajo estas mismas condiciones ambientales liberaacutendose al
ambiente gran cantidad de miracidios Estos se ponen en contacto con los caracoles
susceptibles y aumenta el nuacutemero de ejemplares infectados que luego emitiraacuten cercarias
que se enquistaraacuten en la vegetacioacuten Una gran cantidad de hospedadores definitivos
susceptibles ya sea porque tienen una resistencia innata pobre o una respuesta inmune
deficiente estaraacute en condiciones de infectarse y desarrollar exitosamente la infeccioacuten
Si bien el hospedador intermediario juega un rol fundamental en el ciclo de transmisioacuten
porque el paraacutesito se multiplica asexualmente en eacutel y aumenta en forma exponencial el
nuacutemero de larvas el hospedador definitivo es importante en la diseminacioacuten de la
infeccioacuten debido a su mayor capacidad para trasladarse (Haseeb y Fried 1997) Para
entender el modo de transmisioacuten en este tipo de ciclos es esencial conocer la biologiacutea de
los hospedadores intermediarios y definitivos Maacutes auacuten la dinaacutemica de transmisioacuten de las
infecciones por digeneos soacutelo puede ser comprendida teniendo en cuenta los factores
abioacuteticos que regulan las poblaciones de hospedadores intermediarios y aquellos que
influyen en el desarrollo de los estadios de vida libre del paraacutesito (Haseeb y Fried 1997)
Las pequentildeas especies de limneidos incluidas en el grupo GalbaFossaria son muy
importantes debido a su gran capacidad para transmitir F hepatica Hay sin embargo
especies incluidas en este grupo que muestran una alta capacidad de transmisioacuten y en el
extremo opuesto hay otras que han demostrado no ser susceptibles a la infeccioacuten por
etapas larvales de F hepatica como L schirazensis (Bargues et al 2011 a) Por otra
parte hay especies de este grupo que estaacuten claramente relacionadas con las aacutereas
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endeacutemicas de Fasciolosis humana debido a su ecologiacutea antropofiacutelica y comportamiento
mientras que otras especies por lo general habitan biotopos frecuentados por el ganado
pero alejados de los lugares donde los humanos viven o desarrollan sus actividades
(Artigas et al 2011)(Bargues et al 2012)
Debido a este aspecto estar maacutes relacionado con la infeccioacuten humana o la infeccioacuten
animal presenta un intereacutes aplicado a la diferenciacioacuten entre las especies que
pertenecen a este grupo cuando se trata de los hospedadores intermediarios presentes
en una zona endeacutemica (Bargues et al 2011 c)
La susceptibilidad de las especies de limneidos en Fasciolosis representa un factor
crucial en el establecimiento no soacutelo de la distribucioacuten geograacutefica de la enfermedad en los
animales y los seres humanos sino tambieacuten en las prevalencias e intensidades debido a
caracteriacutesticas ecoloacutegicas (dinaacutemica de la poblacioacuten caracteriacutestica antropofiacutelica tipo de
cuerpos de agua etceacutetera) de las distintas especies de limneidos Es por ello que los
limneidos aparecen vinculados a los diferentes patrones de transmisioacuten (Mas-Coma
2005) y escenarios epidemioloacutegicos (Mas-Coma et al 1999 a) de esta enfermedad muy
heterogeacutenea en los seres humanos (Mas-Coma et al 2009 a) Las diferencias en faunas
de limneidos continentales tambieacuten explican porque la Fasciolosis en Ameacuterica solamente
es causada por F hepatica debido a la ausencia de limneidos del geacutenero Radix que
actuacutean como intermediarios de F gigantica (Bargues et al 2001)
A nivel de especies de limneidos los problemas se encuentran principalmente en la
uniformidad morfoloacutegica y anatoacutemica interespeciacutefica que por lo general da serias
dificultades en la clasificacioacuten de una muestra (Bargues y Mas-Coma 2005)(Bargues et
al 2007 a 2011 a) Por otra parte la variacioacuten intraespeciacutefica de la forma de la conchilla
es particularmente marcada en limneidos dependiendo de las condiciones ambientales
Por lo tanto hay muchos problemas de clasificacioacuten de muestras principalmente
relacionados con las especies del grupo GalbaFossaria (Bargues et al 2011 a)
Afortunadamente hay marcadores de secuencia tanto en el ADNr nuclear y el ADN
mitocondrial que permiten una apropiada clasificacioacuten de muestras en estos
invertebrados (Mas-Coma y Bargues 2009)
15 - Fasciola hepatica en humanos
En lo que hace referencia a la Fasciolosis humana durante muchos antildeos se encuadroacute
como una enfermedad que se presentaba en situaciones muy particulares de modo que
se habiacutean citado relativamente pocos casos y de forma esporaacutedica lo que condujo a que
esta parasitosis haya estado clasificada como ldquoenfermedad secundariardquo
Esta situacioacuten ha cambiado apreciablemente en los uacuteltimos antildeos cuando la OMS
comenzoacute a sospechar que habiacutea aspectos nuevos que atender puesto que al disponer
de informes serios de varios paiacuteses se confirmaba la existencia de la infeccioacuten humana
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por F hepatica con mucha maacutes frecuencia de lo que se suponiacutea Fue en ese periodo
cuando la OMS decidioacute apoyar las investigaciones sobre Fasciolosis humana a nivel
mundial con una iniciativa que incluyoacute diversos campos de investigacioacuten dentro de lo que
se denomina colaboracioacuten de equipos multidisciplinares y con la aplicacioacuten avanzada de
procedimientos de estudio que por ejemplo incluiacutean la geneacutetica molecular
Desde la deacutecada de 1990 la Fasciolosis humana tiene una mayor relevancia debido no
solo al aumento en el diagnoacutestico del nuacutemero de casos y la alta tasa de morbilidad que
causa entre la poblacioacuten afectada sino tambieacuten por el elevado nuacutemero de personas en
riesgo de infeccioacuten (Chen y Mott 1990) Este hecho refleja un serio problema de Salud
Puacuteblica con una importante repercusioacuten en la economiacutea de las sociedades traducido
como ausencias escolares y laborales por parte de la poblacioacuten parasitada Esto respalda
que la Fasciolosis no siga siendo considerada una mera zoonosis secundaria
Se estimaba que la poblacioacuten humana afectada por Fasciolosis podriacutea situarse entre los
24 (Rim et al 1996) y 17 millones de personas (Hopkins 1992) con un total de 180
millones en riesgo de contraer la enfermedad (OMS 1995) Ademaacutes si se tiene en
cuenta la falta de conocimiento sobre la enfermedad en humanos en muchas regiones de
Aacutefrica y Asia el nuacutemero de personas afectadas podriacutea ser mucho mayor que el notificado
(Mas-Coma 2004 a b)
La Fasciolosis humana ha sido descrita en 51 paiacuteses diferentes de los 5 continentes
(Esteban et al 1998) Los anaacutelisis de distribucioacuten de la enfermedad han mostrado que es
la parasitosis que presenta una distribucioacuten geograacutefica con la mayor amplitud latitudinal
longitudinal y altitudinal conocidas (Mas-Coma et al 2003) En la Fasciolosis humana se
han descrito situaciones de hipoendeacutemia mesoendeacutemia e hiperendeacutemia (Mas-Coma et
al 1999 a 2008 2009 a)
La Fasciolosis es una enfermedad parasitaria cosmopolita En todo el mundo se
presentan casos humanos esporaacutedicos (Soulsby 1987) habieacutendose incrementado su
incidencia desde fines del siglo pasado (Loja et al 2003) Es asiacute como en la deacutecada del
noventa se empezaba a considerar como una parasitosis de mayor importancia en salud
humana Los brotes que se registraban con anterioridad eran localizados y afectaban un
nuacutemero reducido de personas Para esa eacutepoca la OMS reconoce el intereacutes meacutedico a
escala mundial
Hasta hace pocos antildeos la Fasciolosis se circunscribiacutea a poblaciones de cuencas
hidrograacuteficas bien delimitadas pero los recientes cambios ambientales y del
comportamiento humano estaacuten definiendo nuevos liacutemites geograacuteficos y aumentando las
poblaciones en riesgo (Savioli et al 1999) por ende la enfermedad posee una
distribucioacuten irregular Las caracteriacutesticas corresponden no a un paiacutes determinado sino a
una determinada zona fisiograacutefica y climaacuteticamente homogeacutenea (Mas-Coma et al 1999
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b) Tiacutepicamente ocurre en regiones templadas a excepcioacuten de Oceaniacutea distribuyeacutendose
ademaacutes en zonas tropicales y subtropicales La Fasciolosis humana es una enfermedad
tropical re-emergente que en los uacuteltimos antildeos se reporta con mayor incidencia aun
donde anteriormente se habiacutea asociado a casos surgidos entre el ganado de la zona
afectada (Mas-Coma et al 1999 b)
Despueacutes de antildeos de estudio en las zonas donde la infeccioacuten humana por F hepatica es
comuacuten se propuso una clasificacioacuten en base a supuestos epidemioloacutegicos (Mas-Coma et
al 2009 c) Asiacute se indican casos humanos ldquoimportadosrdquo que aparecen en zonas sin
Fasciolosis pero que se han adquirido en otros lugares endeacutemicos Hay tambieacuten casos
ldquoautoacutectonosrdquo que se presentan generalmente donde hay una casuiacutestica animal
importante y que aparecen de manera esporaacutedica o muy irregular Finalmente se
entiende que hay zonas ldquoendeacutemicasrdquo detectadas mediante pruebas directas y por
serologiacutea Entre ellas hay diferencias importantes en cuanto a la prevalencias desde las
que tienen porcentajes inferiores al 1 hasta otras zonas en las que se puede definir un
estadio de hiperendemismo con prevalencias que superan el 10
En esos lugares endeacutemicos pueden distinguirse tres tipos de situaciones atendiendo a la
prevalencia en la poblacioacuten total Hipoendeacutemico la prevalencia es menor al 1
Mesoendeacutemico con porcentajes de infeccioacuten del 1 al 10 donde puede presentarse una
alta prevalencia en nintildeos de 5 a 15 antildeos e Hiperendeacutemico porcentajes de infeccioacuten
superiores al 10 (Mas-Coma 2005) y donde los casos humanos participan
significativamente en la transmisioacuten a traveacutes de la eliminacioacuten de huevos generalmente
se presenta asociada a condiciones sanitarias muy deficientes (Mas-Coma et al 1999 a)
Ademaacutes hay diferentes tipos de brotes de acuerdo a la situacioacuten endeacutemicano endeacutemica
de la zona
a)Epidemia en aacutereas donde la Fasciolosis es endeacutemica en los animales pero no en los
humanos zonas donde los reportes previos de casos humanos han sido siempre aislados
y esporaacutedicos esos brotes usualmente involucran a pocos individuos que resultan
infectados desde el mismo foco de contaminacioacuten (familia o pequentildeo grupo berros u
hortalizas silvestres de cultivo domeacutestico o comercial portadoras de metacercarias)
b)Epidemia en aacutereas humanas endeacutemicas brotes en zonas donde la enfermedad es
endeacutemica en los humanos pueden involucrar a un gran nuacutemero de individuos
usualmente estaacute relacionado a condiciones climaacuteticas favorables para el desarrollo del
ciclo bioloacutegico tanto del paraacutesito como del caracol La epidemia puede tener lugar en
aacutereas hipoendeacutemicas mesoendeacutemicas o hiperendeacutemicas (Mas Coma et al 1999 a)
16 - La infeccioacuten a nivel mundial
La infeccioacuten ha sido reportada en Unioacuten Sovieacutetica China Europa Aacutefrica Ameacuterica del
Norte Sudameacuterica Centro Ameacuterica y Australia (OMS 1995) Las epidemias maacutes
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extensas ocurrieron en Francia con maacutes de 500 casos (Courde y Triozon 1957) y en
Cuba con 799 casos (Peacuterez et al 1983)
Ejemplos de prevalencia muy reducida se dan en Francia Niveles intermedios se hallan
en Iraacuten Yemen (Farag 1998) Portugal (Mas-Coma 2005) Vietnam (Tran et al 2001) y
Egipto (Curtale et al 2000)(Amer et al 2011) La maacutes alta prevalencia e intensidad de la
infeccioacuten en humanos se presenta en Bolivia con 72 realizando diagnoacutesticos por
meacutetodos coproloacutegicos y 96 por serologiacutea (Esteban et al 1997 b 1999)
161 - Ameacuterica
La infeccioacuten humana por F hepatica se ha denunciado en muchos paiacuteses del mundo
pero es en Ameacuterica donde ocurren maacutes casos (Acha y Syfres 1997) demostraacutendose que
las maacutes importantes regiones endeacutemicas de Fasciolosis humana estaacuten localizadas en
Ameacuterica del Sur (Marcos et al 2004) La frecuencia de la infeccioacuten humana en Ameacuterica
Latina se ha subestimado en la bibliografiacutea parasitoloacutegica
En diversos lugares de Latinoameacuterica la prevalencia e incidencia de las enteroparasitosis
son un indicador del nivel socio econoacutemico y de vida de la poblacioacuten Los factores de
riesgo asociados a deficientes condiciones sanitarias hacinamiento promiscuidad
analfabetismo ruralidad y pobreza continuacutean estando presentes en estas infecciones
Aun hoy las enfermedades tropicales olvidadas (NTDs) (OMS 2008) siguen siendo las
infecciones maacutes comunes de las personas pobres que habitan en Ameacuterica Latina
(Caacuteceres 1989)
Dentro de las diversas regiones de mayor concentracioacuten de Fasciolosis humana
conocidas (Mas-Coma et al 2005 2009 a) Ameacuterica del Sur se destaca por las zonas
endeacutemicas humanas descritas en muchos paiacuteses Altas prevalencias e intensidades en
los seres humanos se han reportado en los paiacuteses andinos como Bolivia (Hillyer et al
1992)(Esteban et al 1997a b 1999)(Mas-Coma et al 1999 b) Peruacute (Esteban et al
2002)(Espinoza et al 2007)(Gonzaacutelez et al 2011) y Chile (Apt et al 1993)(Artigas et al
2011) Zonas endeacutemicas humanas tambieacuten se han descripto aunque con prevalencias e
intensidades maacutes bajas en Centroameacuterica (Arroyo et al 1981) y recientemente tambieacuten
en Ameacuterica del Norte (Zumaquero et al 2013) Se denuncia soacutelo en forma esporaacutedica en
Estados Unidos (Graham et al 2001) o en Canadaacute (Fullerton et al 2006) y con mayor
incidencia en zonas de Meacutexico (Cruz Loacutepez et al 2006) Varios casos humanos tambieacuten
se han registrado en zonas de altitud de Ecuador (Trueba et al 2000) Colombia
(Bargues et al 2011 b) y Venezuela (Bargues et al 2011 c) En Uruguay (Binkley y
Sinniah 1997) y Brasil los informes humanos soacutelo se refieren a casos esporaacutedicos y
aislados En la regioacuten del Caribe la Fasciolosis humana plantea principalmente
problemas en Cuba donde los pacientes son diagnosticados de forma continua (Millaacuten et
al 2000)(Diacuteaz Fernaacutendez et al 2011) incluso con alta incidencia (Gonzaacuteles Santana et
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al 2013) al igual que en Haitiacute (Agnamey et al 2012) Puerto Rico todaviacutea se puede
considerar una zona riesgosa de infeccioacuten humana despueacutes de la situacioacuten
epidemioloacutegica en el pasado (Hillyer 1981) En Ameacuterica casi todas las especies de
limneidos involucradas en la transmisioacuten de F hepatica pertenecen al grupo
GalbaFossaria hecho que demuestra que la clasificacioacuten por simples herramientas
malacoloacutegicas es pronunciadamente difiacutecil pero que es de suma importancia ya que hay
especies de caracoles de este grupo que no participan en la transmisioacuten aunque por lo
general estaacuten presente en zonas de alta transmisioacuten (Bargues et al 2011 a)
1611 - Peruacute Bolivia y Chile
Las prevalencias e intensidades de infeccioacuten encontradas en Peruacute son muy altas donde
el nuacutemero de personas infectadas es de 742000 (Marcos et al 2007) Concretamente se
denunciaron prevalencias ligeramente superiores al 30 de la poblacioacuten estudiada en
Santa Ana (Stork et al 2003) y Juniacuten (Marcos et al 2004) clasificaacutendose como zona
hiperendeacutemica para la Fasciolosis humana Estudios efectuados en Huertas localidad
perteneciente al valle de Mantaro realizados mediante pruebas seroloacutegicas y exaacutemenes
parasitoloacutegicos de heces revelan una prevalencia de Fasciolosis del 283 por teacutecnicas
coproloacutegicas alcanzando 363 por meacutetodos seroloacutegicos realizados con Fas2-ELISA
(Marcos et al 2004)
En Asillo departamento Puno la prevalencia general de Fasciolosis por exaacutemenes de
heces fue 333 y por serologiacutea 519 (Marcos et al 2005) siendo analizadas tambieacuten
por el ensayo Fas2-ELISA (Maco et al 2002) Posteriormente se recopiloacute el nuacutemero de
casos humanos de infeccioacuten por F hepatica en cuatro deacutecadas llegando a la conclusioacuten
de que la Fasciolosis humana es una enfermedad emergente en el Peruacute y de mayor
importancia en Salud Puacuteblica (Marcos et al 2007) Los estudios realizados determinan
que no hay diferencias significativas entre el geacutenero masculino y el femenino (Marcos et
al 2004) Son susceptibles las personas de cualquier edad y en las zonas de alta
prevalencia las tasas maacutes elevadas suelen aparecer entre los nintildeos menores de 15
antildeos a diferencia de lo que ocurre en zonas no endeacutemicas (Blancas et al 2004)
Se distinguen aacutereas de baja prevalencia como 87 en Cajamarca (Knobloch 1985) en
tanto que ejemplos de alta prevalencia se encuentran en la regioacuten de Puno (156)(Mas-
Coma et al 1999 a) y del valle de Mantaro (342) (Marcos et al 2007 a)
En Bolivia el aacuterea endeacutemica para ldquotalpacutea laqordquo (lengua Aymaraacute) estaacute limitada a una
relativa pequentildea regioacuten (60 x 60 Km) en el noroeste del altiplano boliviano entre el lago
Titicaca y la ciudad de La Paz donde se presenta una prevalencia de la infeccioacuten en
nintildeos en edad escolar con un rango entre 312 y 382 (Mas-Coma et al 2001)
Aunque no se pensaba antes ahora se sabe que hay lugares con prevalencias altas de
infeccioacuten por F hepatica en personas que viven en aacutereas endeacutemicas Ademaacutes se ha
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constatado que frecuentemente afecta de manera preferente a nintildeos y mujeres y
asimismo se ha comprobado que no es excepcional que en aacutereas humanas
hiperendeacutemicas como en Bolivia y Peruacute se detecten cifras de maacutes de 400 huevos por
gramo de heces (Esteban et al 1997) en algunos casos como el de nintildeos bolivianos se
han superado los 5000 hpg de heces lo que revela la existencia de un grave problema
de salud en esas zonas
En Chile las infecciones por F hepatica son frecuentes en todo el paiacutes extendieacutendose la
enfermedad desde la Primera hasta la Undeacutecima Regioacuten siendo las zonas de mayor
prevalencia las comprendidas entre la VI y la IX Es poco frecuente en la poblacioacuten
humana pero en ninguacuten caso es una enfermedad rara (Sapunar et al 2001) En un
estudio realizado a 5861 individuos en la VII regioacuten se registroacute un 07 de prevalencia
(41 casos) encontrando un 06 en los sectores rurales de la provincia de Curicoacute 075
por ciento en Talca y 071 en Linares (Apt et al 1992)
1612 - Repuacuteblica Argentina
En Argentina se hallan identificados 58 reportes registrando 555 casos que involucran 13
provincias la mayoriacutea de ellas (977) en zonas altas en aacutereas montantildeosas centrales y
valles andinos concentrados en Coacuterdoba (430) San Luis (29) y Mendoza (28) mientras
que el resto de las provincias son raramente afectadas La mayor prevalencia se observa
en mujeres La edad variacutea de 3-95 antildeos con una media aritmeacutetica de 371 En general
las infecciones ocurren de enero a abril al aumentar las precipitaciones y las
temperaturas y los diagnoacutesticos se realizaron por anaacutelisis coproparasitoacutegicos (288)
intradermoreaccioacuten (63) cirugiacutea (43) serologiacutea (13) y seis presentaciones erraacuteticas (Mera
y Sierra et al 2011)
Varios brotes que presentan caracteriacutesticas tiacutepicas de transmisioacuten alimentaria aparecen
relacionados con la ingestioacuten de berros que crecen naturalmente a lo largo de los lechos
de riacuteos y arroyos recogidos durante fines de semana o actividades vacacionales en aacutereas
serranas de Coacuterdoba (Siciliano et al 1989) y San Luis (Carnevale et al 2012) donde la
Fasciolosis ha sido diagnosticada como un problema de Salud Puacuteblica a tener en cuenta
Un anaacutelisis retrospectivo permite destacar los informes de publicaciones (Roffo
1913)(Greenway 1924)(Bengolea et al 1927)(Del Valle y Donovan 1928)(Bacilalupo
et al 1930)(Mascheroni 1933)(Castex y Greenway 1937)(Paladino y Galarce
1938)(Boto1939)(Cames1940)(Bacigalupo 1942)(Solari y Canepa 1943)(Bacigalupo
et al 1943)(Cuenya 1944)(Cid 1947)(Cames et al 1947)(Rodriacuteguez 1952)(Longo y
Daraio 1953)(Petraglia 1954)(Rodriacuteguez 1954)(Caacuteceres 1955)(Logaldo 1955)
(Rodriacuteguez 1961)(Strada 1961)(Ahualli y Arias 1961)(Urrutia y Ferraris 1962)(Cantildeas
et al 1964)(Cornejo y Castillo 1964)(Simoacuten et al 1964)(Ruggieri et al 1967)(Sosa y
Romero 1967)(Correa et al 1969)(Peiretti 1969)(Trosero y Nocetti 1969)(Padilla et al
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1970)(Carena et al 1972)(Ossola et al 1972)(Peiretti y Morales 1973)(Sonzini et al
1973)(Alaggia 1981)(Majul et al 1981)(Siciliano 1982)(Gifoniello et al 1983)(Miguel
et al 1985)(Siciliano et al 1989)(Melero et al 1991)(Siciliano et al 1992)(Minoprio et
al 1995)(Ale et al 2000)(Barcat 2005)(Lloret et al 2005)(Rubel et al 2005)(Corti et al
2006)(Nieto Sosa et al 2006)(Salomoacuten et al 2006)(Nieto Sosa et al 2008)(Riacuteos et al
2008) (Nieto Sosa et al 2012)(Carnevale et al 2012) referidos a casos esporaacutedicos y
aislados
En la provincia de Catamarca la presencia de F hepatica se registra en la deacutecada de
1980 cuando se hallaron ejemplares adultos en actos quiruacutergicos realizados a cinco
pacientes del geacutenero femenino (Andrada et al 1983)
17 - Factores de riesgo en la infeccioacuten de F hepatica
La epidemiologiacutea y transmisioacuten de la Fasciolosis humana estaacute determinada por la
presencia de caracoles dulceacuiacutecolas como hospedadores intermediarios animales
domeacutesticos infectados condiciones climaacuteticas y por algunos haacutebitos de consumo No
obstante algunos autores han demostrado que en las aacutereas endeacutemicas los factores
epidemioloacutegicos y de transmisioacuten no son tan simples como pudiera parecer a priori y que
se deben tener en cuenta otros factores adicionales para proponer una clasificacioacuten
epidemioloacutegica respecto de las aacutereas de presentacioacuten de Fasciolosis humana (Esteban et
al 1999)
El hombre es un hueacutesped accidental La infeccioacuten es de relativa baja frecuencia en el ser
humano debido a que su principal mecanismo de transmisioacuten estaacute ligado a los haacutebitos
alimentarios de los individuos La mayor frecuencia de casos se presenta despueacutes de
veranos huacutemedos cuando las aguas de drenaje de los pastos irrigados y encharcados de
los animales cubren completamente a los berros (Nasturtium spp) (Soulsby 1987) en
los que se encuentran enquistadas las metacercarias (Faust 1949) la ingesta de berros
contaminados por el paraacutesito es un antecedente que ocurre en la mayoriacutea de los casos
Tambieacuten se infectan por el haacutebito que tienen muchas personas de llevarse a la boca
tallos de plantas acederas briznas de hierba etc y de esta manera enferman los
agricultores y ganaderos (Piekarsky 1959) Ademaacutes en la infeccioacuten humana intervienen
especies vegetales como las hojas de Taraxacum dens leonis (diente de leoacuten) Mentha
spp (menta) Medicago sativa (alfalfa) Cichorium intybus (achicoria) Juncus andicola y
Juncus ebracteactus (juncos) Nostoc sp (Cianofitas) (Bjorland et al 1995) Tambieacuten se
suele asociar a la ingestioacuten de plantas acuaacuteticas tales como el mastuerzo (Radostits et
al 2002) y a los emolientes que son consumidos como plantas medicinales existiendo la
creencia que los berros y la alfalfa son buenos para el hiacutegado son otra viacutea de infeccioacuten
(Marcos et al 2004)
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El agua es una fuente de infeccioacuten sea por beberla sin hervir o por contaminacioacuten de
hortalizas o utensilios de cocina (Mas-Coma et al 2007) Se ha demostrado que los seres
humanos participan en la transmisioacuten de la enfermedad en aquellos lugares donde se
practica la defecacioacuten al aire libre (Mas-Coma et al 1999)
En aacutereas epideacutemicas hay diferentes tipos de brotes en relacioacuten con las caracteriacutesticas de
la zona Generalmente coinciden las zonas epideacutemicas con las de Fasciolosis animal y en
tales casos normalmente concuerdan con un grupo de personas que consumen la misma
fuente de contaminacioacuten generalmente verduras Lactuca sativa (lechuga) Spinacea
oleracea (espinaca) u otros vegetales frescos y contaminados con metacercarias de F
hepatica Estos casos habitualmente se presentan en miembros de una familia o en
comunidades de una misma zona
George A Alleyne en el proacutelogo de la publicacioacuten ldquoEnfermedades transmisibles geacutenero y
equidad en la saludrdquo (Hartigan 2001) cita a Levins cuando comparte que la complejidad
de los factores determinantes (geacutenero raza y clase social) de las enfermedades
emergentes constituye un serio problema cientiacutefico de nuestra eacutepoca (Levins 1995) En
las distintas infecciones humanas es importante profundizar en los factores que afectan a
la distribucioacuten de la enfermedad como analizar la influencia del geacutenero del hospedador
definitivo sobre la Fasciolosis
Hasta 2003 en la mayoriacutea de estudios sobre la Fasciolosis humana y su incidencia en las
diferentes zonas de endemicidad los aspectos referidos a la epidemiologia de la
enfermedad en funcioacuten del geacutenero del hospedador definitivo arrojaban resultados
contradictorios obtenieacutendose zonas donde las prevalencias e intensidades de infeccioacuten
eran diferentes De ese modo los estudios referidos anteriormente muestran que tanto en
Bolivia como en Peruacute (Esteban et al 1999) las diferencias relativas a la prevalencia de
infeccioacuten por F hepatica en funcioacuten del geacutenero no eran significativas Por el contrario en
Egipto al igual que en Chile (Apt et al 1992) existiacutean diferencias significativas en la
prevalencia de infeccioacuten dependiendo de si afectaba a hombres o mujeres
Las investigaciones continuaron y no es hasta la deacutecada pasada cuando se llega a
recopilar (Curtale et al 2007) maacutes de 21000 casos con casi 1000 positivos Ambos
paraacutemetros analizados prevalencia e intensidad de infeccioacuten resultaron
significativamente mayores en mujeres que en hombres en Egipto poniendo de
manifiesto lo que la tendencia ya reflejaba y es que siuml existen diferencias en cuanto a las
intensidades de infeccioacuten en funcioacuten del geacutenero afectando en mayor medida a las
mujeres
Mientras que el predominio de Fasciolosis humana puede ser insignificante en aacutereas
donde la forma veterinaria de la enfermedad ocurre las tasas variacutean extensamente en
aacutereas donde la enfermedad es endeacutemica en la gente
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La relacioacuten entre el predominio de Fasciolosis y la edad del hueacutesped se diferencia en
aacutereas humanas endeacutemicas y humanas no endeacutemicas El alto predominio en nintildeos
menores de 15 antildeos se presenta por lo general en aacutereas endeacutemicas con las tasas maacutes
elevadas en contraste con la situacioacuten corriente en aacutereas humanas no endeacutemicas
(Esteban et al 2002)
18 - Sintomatologiacutea cliacutenica y patologiacutea
El primer caso de Fasciolosis humana en el mundo fue reportado en 1600 (Naacutequira et al
1975) mientras que en 1852 se describe por primera vez el hallazgo de especiacutemenes
adultos de F hepatica en las viacuteas biliares intrahepaacuteticas del hombre
El diagnoacutestico de Fasciolosis humana se presenta ante un enfermo con un cuadro cliacutenico
caracterizado por trastornos digestivos especialmente hepatobiliares y fiebre
Presentando o no urticaria de evolucioacuten aguda o croacutenica que puede estar acompantildeada
de eosinofilia elevada y en el que puede haber antecedentes de ingestioacuten de berros
Aunque tambieacuten es posible que la parasitosis curse en forma subcliacutenica si la infeccioacuten
es por pocos ejemplares La importancia de la cliacutenica estaacute condicionada por el nuacutemero de
metacercarias ingeridas
Las manifestaciones cliacutenicas por F hepatica se agrupan en las fases agudas o croacutenicas
(Behm y Sangster 1999) La forma aguda se clasifica en tres subtipos diferentes tiacutepica
(Chen y Mott 1990)(Vilches et al 1993) atiacutepica (Ibaacutentildeez et al 1994) y ectoacutepica
(Catchpole y Snow 1952)(Mas-Coma et al 2014) mientras que la forma croacutenica se
diferencia con dos subtipos sintomaacutetica (Jimeacutenez et al 2001) y asintomaacutetica (Arjona et
al 1995) El siacutendrome agudo corresponde al periodo de migracioacuten de las formas
inmaduras se caracteriza por fiebre de intensidad variable eosinofilia (Behm y Sangster
1999) ictericia (Kianman et al 1996) dolor del hipocondrio derecho con signo de Murphy
y dolor abdominal (Naacutequira 1995) mialgias artralgias cefalea naacuteuseas voacutemitos
(Picoaga 1980) flatulencia alergia (prurito o urticaria) (Ortiz et al 2000) hepatomegalia
fatiga decaimiento perdida de peso anorexia y alteracioacuten de las pruebas funcionales
hepaacuteticas (Espinosa et al 2010) Puede durar 3 meses pero muchos infectados cursan
asintomaacuteticamente aunque fiebre hepatomegalia y eosinofilia sugieren Fasciolosis en
aacutereas endeacutemicas (Marcos et al 2007 b) Esta fase aguda se debe a los tuacuteneles que las
formas inmaduras del paraacutesito al migrar cavan en el pareacutenquima hepaacutetico durante las
primeras semanas los que se llenan con sangre (Loja et al 2003) y ceacutelulas de una
respuesta inmunitaria mediada por linfocitos con reclutamiento masivo de eosinoacutefilos
El cuadro puede llegar a cinco meses y presenta las complicaciones maacutes severas de la
enfermedad entre las que se destacan hematoma subcapsular granuloma muacuteltiples
abscesos hepaacuteticos anemia severa colecistitis pancreatitis colangitis derrames
pleurales y eventualmente fibrosis hepaacutetica (Dalton 1999)
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El estadio o fase croacutenica (Maclean y Graeme-Cook 2002) aparece cuando los paraacutesitos
adultos ya se ubican en la luz de los conductos biliares y empiezan a emitir los huevos
Presenta siacutentomas inespeciacuteficos o vagos en la mayoriacutea de los casos aunque algunos de
ellos se complican principalmente por obstruccioacuten biliar (Umac et al 2006) y terminan en
intervenciones quiruacutergicas momento en el que se hace el diagnoacutestico encontraacutendose los
paraacutesitos adultos en los conductos biliares o causando disfuncioacuten hepaacutetica Muchos
casos se diagnostican como colecistitis aguda Los siacutentomas son causados por la
inflamacioacuten del conducto e incluyen dispepsia diarrea ictericia colecistitis coacutelico biliar y
litiasis del coleacutedoco Dentro del conducto biliar se observa inflamacioacuten perivascular que
el proceso de resolucioacuten transforma en fibrosis
La fase aguda puede superponerse a la fase croacutenica si se estaacute en permanente exposicioacuten
a la fuente de contaminacioacuten y podriacutea adquirirse la infeccioacuten aguda sobre la croacutenica
previamente presente por lo tanto se pueden observar casos de Fasciolosis croacutenica con
cifras altas de eosinofilia
La migracioacuten de las formas inmaduras a traveacutes del pareacutenquima hepaacutetico puede producir
lesiones traumaacuteticas y necroacuteticas Destruccioacuten considerable del hiacutegado caracterizada por
necrosis coagulativa (Dalton 1999) abscesos hemorraacutegicos (Loja et al 2003) y hepatitis
con infiltracioacuten de neutroacutefilos linfocitos y eritrocitos (Bryan y Michelson 1995) La
patogeacutenesis de la Fasciolosis depende de la carga parasitaria y del tamantildeo de los
trematodos adultos que provocan reacciones granulomatosas con agrupaciones de
histiocitos ceacutelulas epiteliales y gigantes En la etapa croacutenica se observa que en la pared
de los conductos biliares el paraacutesito adulto produce alteraciones inflamatorias
adenomatosas y fibroacuteticas (Saacutenchez et al 2000) existiendo hiperplasia del epitelio que
puede llegar a la obliteracioacuten total provocando ictericia obstructiva infeccioacuten bacteriana
secundaria atrofia del hiacutegado cirrosis periportal colecistitis y colelitiasis (Atias 2001)
En los conductos biliares en infecciones graves con gran nuacutemero de paraacutesitos puede
haber litiasis biliar y cirrosis que ocurren con cierta frecuencia en los casos croacutenicos
(Bryan y Michelson 1995)
Se distinguen ademaacutes los siguientes periodos cliacutenicos
Fase de incubacioacuten desde la ingestioacuten de las metacercarias hasta la aparicioacuten del primer
siacutentoma variacutea dependiendo del nuacutemero de metacercarias consumidas y de la repuesta
del hospedador Su duracioacuten es variable
Fase aguda o invasiva comienza cuando ocurre la migracioacuten parasitaria hasta el
conducto biliar la sintomatologiacutea se debe principalmente a la destruccioacuten mecaacutenica del
tejido hepaacutetico y del peritoneo abdominal debida a la migracioacuten de las larvas Dura 2 a
cuatro meses y sus principales signos son Fiebre dolor abdominal desde leve a severo
generalmente localizado en el hipocondrio derecho o bajo el xifoides trastornos
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gastrointestinales como peacuterdida de apetito flatulencia nausea y diarrea urticaria
Ocasionalmente ocurren siacutentomas respiratorios tos disnea hemoptisis y dolor toraacutecico
Al examen fiacutesico pueden aparecer ademaacutes hepato y esplenomegalia ascitis la que se
caracteriza por ser un liacutequido amarillo con un alto contenido de leucocitos y con
predominio de eosinofilos una anemia leve a moderada signos toraacutecicos por
auscultacioacuten o radiografiacutea e ictericia la cual es poco frecuente
Fase latente incluye la etapa de maduracioacuten hasta el inicio de la ovoposicioacuten
Puede durar meses o antildeos los pacientes frecuentemente son descubiertos durante un
screening familiar tras detectar a uno de sus integrantes infectado Pueden tener
dolores gastrointestinales o una o maacutes recaiacutedas de los siacutentomas agudos
Fase obstructiva o croacutenica cuando el paraacutesito se establece en el conducto biliar
Puede desarrollarse durante meses o antildeos despueacutes de la infeccioacuten inicial El paraacutesito
adulto en el conducto biliar causa inflamacioacuten e hiperplasia del epitelio La resultante
colangitis y colecistitis combinada con el gran tamantildeo del paraacutesito son suficientes para
producir una obstruccioacuten mecaacutenica del conducto biliar
Existen tambieacuten Fasciolosis de tipo ectoacutepicas por parte de estados inmaduros del
paraacutesito que pueden desviarse durante la migracioacuten En el hombre los sitios maacutes
frecuentes para esta presentacioacuten estaacuten en el tracto gastrointestinal Otros lugares
pueden ser el tejido subcutaacuteneo corazoacuten vasos sanguiacuteneos pulmoacuten y cavidad pleural
cerebro pared abdominal apeacutendice paacutencreas glaacutendula mamaria articulaciones y bazo
Aquellos paraacutesitos ectoacutepicos nunca logran madurar y sus efectos patoloacutegicos son debido
a los surcos de migracioacuten que causan dantildeo tisular con inflamacioacuten y fibrosis Este
paraacutesito puede ser calcificado o incorporado en un granuloma (Mas-Coma et al 1999 b)
La duracioacuten de la infeccioacuten humana es desconocida pero algunos investigadores han
estimado que el paraacutesito podriacutea sobrevivir por 5 a 12 antildeos (Karnaukhov 1978) y desde 9
a 135 antildeos (Dan et al 1981)
19 - Diagnoacutestico
191 - Directo
El diagnoacutestico de certeza en humanos se establece de forma directa cuando se
encuentran huevos del paraacutesito en las heces o bilis obtenida por sondeo duodenal Los
exaacutemenes coproloacutegicos de rutina desde el examen directo hasta los meacutetodos de
sedimentacioacuten se utilizan en la fase croacutenica pero el meacutetodo coproparasitoloacutegico presenta
baja sensibilidad (Levine et al 1980) soacutelo permite detectar la infeccioacuten cuando el paraacutesito
adulto ya estaacute instalado en los conductos biliares y requiere la recoleccioacuten de muestras
seriadas resultando poco confiable y complicado (Chen y Mott 1990)
Asimismo hay que considerar la dinaacutemica en la produccioacuten de huevos que en el hombre
se conoce menos aunque se sabe que el nuacutemero de huevos y su liberacioacuten pueden ser
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reducida o intermitente (Maco et al 2002) El hombre no se considera un hospedador
muy receptivo para F hepatica y la mayor parte de los ejemplares juveniles quedan
atrapados en el pareacutenquima hepaacutetico durante su migracioacuten aunque algunos siacute alcanzan
los conductos biliares y maduran
Debido a la ovoposicioacuten intermitente del paraacutesito en muchos casos nunca se llega a
detectarlos de esta manera resultan negativos los exaacutemenes coproloacutegicos de hasta tres
diacuteas de recoleccioacuten consecutiva La manifestacioacuten microscoacutepica de huevos es
sumamente especiacutefica pero tiene limitaciones en la sensibilidad debido al tiempo de
maduracioacuten sexual y posterior produccioacuten de huevos El examen coproloacutegico meacutetodo
sencillo y de bajo costo no detecta infecciones tempranas (los ejemplares joacutevenes no
producen huevos) ni cargas parasitarias bajas En el hombre el nuacutemero de huevos
producidos y su dinaacutemica son poco conocidos
Una buena teacutecnica para el diagnoacutestico coproparasitoloacutegico de Fasciolosis humana es la
sedimentacioacuten en copa o teacutecnica de sedimentacioacuten raacutepida (TSR) (Lumbreras et al 1962)
Tambieacuten hay que considerar en queacute fase de la infeccioacuten se encuentran puesto que el
periodo de prepatencia es de 3 a 4 meses post-infeccioacuten y los siacutentomas cliacutenicos pueden
aparecer mucho antes de que se observen los huevos en las heces (Marcos et al 2007
a)
Se debe considerar que el anaacutelisis cuantitativo (Kato y Miura 1954) no refleja cuaacutentos
ejemplares de especiacutemenes adultos albergan esos individuos y tampoco las pruebas de
diagnoacutestico indirecto o seroloacutegico si bien es faacutecil suponer que son procedimientos muy
uacutetiles de diagnoacutestico Un segundo problema se plantea a la hora del tratamiento de modo
que la aplicacioacuten de un faacutermaco eficaz puede provocar concentracioacuten de paraacutesitos
adultos muertos y por su tamantildeo llegar a obstruir los canales biliares y el coleacutedoco
Tambieacuten hay que tener muy en cuenta la resistencia parasitaria a las drogas
antihelmiacutenticas (Villegas et al 2012)
1911 - Imaacutegenes
Existen otros meacutetodos directos de diagnoacutestico como son las imaacutegenes obtenidas por
radiografiacutea ecografiacutea (Van Beers et al 1990) scanner tomografiacutea axial computada
(TAC) colangiopancreotomiacutea retroacutegrada endoscoacutepica (Martiacutenez et al 2000) o resonancia
magneacutetica nuclear Estas teacutecnicas se utilizan ante la sospecha de infeccioacuten y para
confirmar el diagnoacutestico y posterior seguimiento durante y despueacutes del tratamiento
(Gonzaacutelez et al 2001)(Corti et al 2006)
Las imaacutegenes ayudan al diagnoacutestico y a la evaluacioacuten de complicaciones Los hallazgos
dependeraacuten de la fase cliacutenica en la cual se encuentre el paciente En fase aguda la
ecografiacutea puede mostrar heterogeneidad del pareacutenquima hepaacutetico lesiones nodulares
hipoecogeacutenicas muacuteltiples o uacutenicas y linfonoacutedulos periportales (Castro 2010) Durante la
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fase croacutenica es posible visualizar partiacuteculas orogeacutenicas intravesiculares edema de la
pared vesicular y engrosamiento parietal del coleacutedoco con dilatacioacuten moderada (Castro
2010)
Sin embargo de los exaacutemenes de imagenologiacutea usados para estudiar el hiacutegado y las viacuteas
biliares ninguno confiere certeza diagnoacutestica La forma de los paraacutesitos puede
confundirse con los caacutelculos del coleacutedoco o los coaacutegulos de hemoglobina (Arjona 1995)
aunque la ecografiacutea resulta de valor y puede mostrar (10 semanas despueacutes de la
infeccioacuten) lesiones hepaacuteticas nodulares hipodensas o quiacutesticas dilatacioacuten de los
conductos biliares y formas moacuteviles ecogeacutenicas dentro de la viacutea biliar (Gonzaacutelez Llorente
et al 2002)
Dentro del estudio por imaacutegenes la Fasciolosis se deberiacutea encontrar entre los
diagnoacutesticos diferenciales de granuloma hepaacutetico Esta lesioacuten aunque no cuente con
biopsia debe sugerir que en todo paciente que proceda de zona endeacutemica y que
presente lesiones en el hiacutegado ecograacuteficamente compatibles con granuloma hepaacutetico
debe incluirse a esta parasitosis dentro de los principales diagnoacutesticos diferenciales y no
tomarse meramente como de exclusioacuten (Sezgin et al 2004)
1912 - Teacutecnicas quiruacutergicas
La primera publicacioacuten sobre una cirugiacutea realizada en Argentina que permitioacute el hallazgo
de ejemplares de F hepatica data de principio del siglo pasado (Del Valle y Donovan
1923) Mientras que en una litiasis biliar (Cantildeas et al 1964) por coledocotomiacutea extraen
paraacutesitos sin encontrar huevos en la bilis reportando que en la praacutectica se sacan 2
ejemplares y diacuteas posteriores por el tubo de Kehr salen huevos de F hepatica La mayor
casuiacutestica es reportada por Alaggia (1981) que presenta 16 pacientes positivos operados
En Catamarca se registra la presencia de especiacutemenes adultos en actos quiruacutergicos de
las viacuteas biliares practicados en 5 oportunidades (Andrada et al 1983)
192 - Indirecto
Numerosas pruebas seroloacutegicas han sido evaluadas para el diagnoacutestico de infecciones
por F hepatica La deteccioacuten de anticuerpos en suero es claramente el meacutetodo de
preferencia para el inmunodiagnoacutestico (Hillyer 1999) de la Fasciolosis humana
Los niveles de inmunoglobulinas (Ig) IgG IgM e IgE estaacuten generalmente aumentados en
Fasciolosis incluso los niveles de IgE se correlacionan positivamente con la carga de
huevos la edad las caracteriacutesticas cliacutenicas y el grado de eosinofilia En lo que a la clase
IgG se refiere las subclases predominantes son IgG1 y el isotipo IgG4 (Mas-Coma et al
1999 b)
La Fasciolosis humana es de difiacutecil diagnoacutestico principalmente en la fase aguda o
invasiva porque no puede ser diagnosticada por el examen de huevos en heces y
depende de pruebas seroloacutegicas (Maco et al 2002) por lo cual numerosas teacutecnicas de
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inmunodiagnoacutestico de esta parasitosis han sido descriptas y aplicadas en diversos paiacuteses
(Espino et al 1987)(Coacuterdova et al 1999)(Carnevale et al 2001 a)
Se ha comprobado la respuesta inmunoloacutegica en el hombre ante antiacutegenos metaboacutelicos
y tambieacuten ante las cistein-proteasas procatepsina L1 (Cornejo et al 2003)(Carnevale et
al 2001 b)
El inmunodiagnoacutestico se ha planteado como una interesante alternativa en la buacutesqueda
de meacutetodos diagnoacutesticos maacutes sensibles y especiacuteficos tal es el caso del ensayo por
inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (ELISA) Sin embargo generalmente se han usado
antiacutegenos constituidos por complejos antigeacutenicos que frecuentemente conducen a
problemas de sensibilidad o especificidad El preparado antigeacutenico utilizado
primariamente fue un extracto del gusano adulto luego fueron productos de excrecioacuten-
secrecioacuten y fracciones parcialmente purificadas El anaacutelisis mediante
inmunoelectroforesis en geles de agarosa (inmunoprecipitacioacuten simple y cruzada) ha
permitido determinar que los extractos parasitarios crudos de F hepatica muestran una
composicioacuten antigeacutenica variada siendo maacutes complejos los antiacutegenos somaacuteticos y de E-S
provenientes de paraacutesitos adultos (Gorman et al 1992) Maacutes recientemente han sido
usados antiacutegenos nativos purificados y antiacutegenos recombinantes (Hillyer 1999) Los
antiacutegenos E-S han sido considerados importantes inductores de la respuesta inmune
humoral en la Fasciolosis y tanto su especificidad como su utilidad diagnoacutestica han sido
demostradas en numerosos estudios de Fasciolosis humana y animal (Diacuteaz et al 1998)
Otros estudios tambieacuten se han enfocado sobre la deteccioacuten directa de antiacutegenos
parasitarios ya sea en suero plasma o heces (Hillyer 1999) En 1990 se desarrolloacute un
ELISA para detectar antiacutegeno parasitario circulante en personas con Fasciolosis el cual
al aplicarlo sobre 25 pacientes resultoacute que el 100 de ellos fue reconocido como positivo
a Fasciolosis ademaacutes no se presentaron reacciones cruzadas con otras parasitosis
(Espino et al 1990)
Actualmente el diagnoacutestico de rutina de Fasciolosis humana se basa en la deteccioacuten de
anticuerpos contra el paraacutesito en suero principalmente por el meacutetodo de ELISA
considerada una de las pruebas maacutes ampliamente usadas pero su sensibilidad y
especificidad dependen de la calidad de los antiacutegenos (Espino et al 1991) del paraacutesito
empleados para evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti- F hepatica en humanos
(OacuteNeill et al 1998) La proteasa usada como antiacutegeno cisteiacuten-proteasa procatepsina L1
de F hepatica purificada o como proteiacutena recombinante se expresa en levaduras o
bacterias resultando una prueba con buena sensibilidad y especificidad (OacuteNeill et al
1999)
Asimismo hay evidencia de un fenoacutemeno de variacioacuten de antiacutegenos del tegumento de F
hepatica como mecanismo de evasioacuten y se ha puesto de relieve la existencia de cierta
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similitud antigeacutenica con el propio hospedador hasta el punto que el paraacutesito no sea
reconocido tan faacutecilmente por el sistema inmunitario (Espino et al 1997) aunque la
deteccioacuten de anticuerpos contra F hepatica en suero con ELISA es considerado un
meacutetodo sensible para infecciones agudas y croacutenicas (Hillyer 1999)
La teacutecnica inmunoenzimaacutetica de ELISA emplea el principio de la deteccioacuten del complejo
antiacutegeno anticuerpo (IgG) mediante conjugados anti inmunoglobulinas especiacuteficas
marcadas con una enzima la cual es revelada por la adicioacuten de su sustrato Esto permite
determinar la concentracioacuten de antiacutegeno o de anticuerpos mediante el uso de uno de
ellos unido a una fase soacutelida y el otro en solucioacuten Es una teacutecnica relativamente sencilla
que permite procesar una gran cantidad de muestras en un corto periacuteodo de tiempo tanto
para estudios cliacutenicos como seroepidemioloacutegicos Los antiacutegenos mayormente empleados
en ELISA corresponden a preparados somaacuteticos o productos de excrecioacuten-secrecioacuten
provenientes de tremaacutetodos adultos El primero de ellos corresponde a un macerado total
del paraacutesito adulto y el otro a un derivado metaboacutelico in vitro o productos de E-S de
estados adultos de F hepatica (Espino et al 1987)(Pfister 1990)
En Japoacuten se realizoacute el primer estudio que identificoacute y caracterizoacute la enzima cisteiacuten-
proteasa purificada a partir de ejemplares adultos del paraacutesito (Yamasaky et al 1989)
Esta proteiacutena luego fue usada como antiacutegeno en una prueba de ELISA demostrando ser
reconocida por el 100 de los pacientes con Fasciolosis que fueron estudiados Esta
proteasa estariacutea involucrada en la alimentacioacuten migracioacuten y evasioacuten de la respuesta
inmune del paraacutesito (Smooker 2000)
La procatepsina L1 (CL1) una cisteiacuten-proteasa secretada por estadios adultos y juveniles
de F hepatica tiene potencial como agente diagnoacutestico de la Fasciolosis humana Para
demostrarlo se realizoacute un ELISA dentro de una poblacioacuten de 95 pacientes en el altiplano
boliviano usando tres tipos de antiacutegenos crudo E-S y CL1 en el caso del antiacutegeno
crudo la diferencia entre individuos seronegativos y seropositivos fue pobremente
definida en tanto con los antiacutegenos E-S y CL1 hubo una gran discriminacioacuten entre ambos
grupos (Espino et al 1991) Esta diferencia fue mejorada al usar un segundo ELISA pero
sobre IgG4 (isotipo predominante en la infeccioacuten) CL1 identificoacute menos individuos
seropositivos al compararlo con E-S pero mejoroacute mucho la discriminacioacuten entre
individuos seropositivos y seronegativos En tanto al aplicar esta prueba sobre sueros con
otras parasitosis todos dieron resultados negativos por lo que se demostroacute que ademaacutes
este IgG4 ELISA es especifica en el diagnoacutestico de Fasciolosis (O Neill et al 1998)
El mismo grupo de trabajo un antildeo despueacutes utilizoacute dos ELISA basados en la deteccioacuten de
IgG4 (en suero de pacientes con Fasciolosis) producida por una procatepsina L1
recombinante (CL1) (en ADN de Saccharomyces cerevisiae) y una procatepsina L1
nativa Los resultados mostraron una significativa correlacioacuten estadiacutestica entre los
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resultados de los valores de absorbancia obtenidos con los dos antiacutegenos Ademaacutes no
se presentaron reacciones cruzadas con otras parasitosis en ninguno de los casos Por
esta razoacuten CL1 recombinante presenta un excelente potencial para el desarrollo del
primer ensayo estandarizado para un diagnoacutestico sensible y especiacutefico de la Fasciolosis
humana (ONeill et al 1999)
Las alteraciones del hemograma dan eosinofilia marcada (Blancas et al 2004)
leucocitosis con desviacioacuten a la izquierda (Atias 1991) hiperbilirubinemia (Carrada y
Escamilla 2005) y anemia la cual es comuacuten pero generalmente no es tan severa
(Vilchez et al 1993)
No obstante se describen casos que pueden evolucionar con eosinofilia fluctuante (Atias
2001) La fluctuacioacuten de la eosinofilia y lo polimorfo del cuadro cliacutenico orientan el
diagnoacutestico hacia otras patologiacuteas (Apt et al 2002)
Las pruebas de funcionalidad hepaacutetica en la fase aguda pueden detectar un aumento de
enzimas como alaninoaminotransferasa o transaminasa glutaacutemica piruacutevica (ALT o GPT) y
aspartato-aminotransferasa o transaminasa glutaacutemica oxalaceacutetica (AST o GOT) (Gianini
et al 2005) ademaacutes de globulina y bilirrubina seacuterica debiendo ser consideradas un
marcador de valor diagnoacutestico y de control terapeacuteutico en casos de Fasciolosis (Atias
2001) Asimismo se puede observar una tendencia a tener maacutes alto el nivel de
transaminasas seacutericas en los casos croacutenicos mientras que el patroacuten colestaacutesico soacutelo estaacute
presente en pacientes de la fase croacutenica y levemente elevado en la fase aguda
Cuando el paraacutesito pasa a los canaliacuteculos biliares provoca el aumento de la fosfatasa
alcalina (FA) que estaacute elevada en patologiacuteas del hiacutegado asociadas con enfermedad de
las viacuteas biliares y colestasis (Pratt y Kaplan 2000) Durante la fase obstructiva la ictericia
es caracteriacutestica y se observa aumento en los procesos obstructivos a nivel de viacuteas
biliares Son indicadoras del dantildeo del hiacutegado asociado con la prevalencia de F hepatica
(Marcos et al 2008) Las bilirrubinas conjugadas se hallan incrementadas en la etapa
aguda y la actividad del citocromo p450 hepaacutetico estaacute reducida (Honkakoski y Negishi
2000)
110 - Planteamiento del problema
La dinaacutemica de transmisioacuten de Fasciolosis tiene fuertes determinantes ambientales que
modelan y generan patrones de transmisioacuten particulares en cada regioacuten En Argentina
por su gran amplitud longitudinal y latitudinal es de esperar que la dinaacutemica de
transmisioacuten de F hepatica en las distintas zonas endeacutemicas del paiacutes sea diferente y se
vea afectada por distintos factores
En nuestro paiacutes son pocos los trabajos relacionados con el estudio de la Fasciolosis y
en general eacutestos abordan el tema desde una perspectiva veterinaria analizando soacutelo lo
que ocurre en los hospedadores definitivos de importancia econoacutemica (Lombardero et al
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1979 b)(Dwinger et al 1982)(Olaechea 2007)(Moreira et al 2009) Los trabajos que
emprenden el estudio de eacutesta parasitosis desde una perspectiva epidemioloacutegica
analizando los factores involucrados en la dinaacutemica de transmisioacuten (hospedadores
definitivos hospedadores intermediarios paraacutesito ambiente clima etceacutetera) son escasos
(Rubel et al 2005)(Kleiman et al 2007) Entre ellos se destaca la investigacioacuten sobre los
factores involucrados en el ciclo de transmisioacuten de F hepatica realizado en los valles
cordilleranos patagoacutenicos de la provincia de Chubut por ser el maacutes actual y completo del
paiacutes (Kleiman et al 2007) Los resultados obtenidos en dicho trabajo reforzaron la
necesidad de estudiar la dinaacutemica de F hepatica en otra zona endeacutemica con
caracteriacutesticas climaacuteticas y topograacuteficas contrastantes para identificar los factores que la
determinan comparar los patrones de transmisioacuten y obtener una visioacuten global e integrada
de esta zoonosis a nivel nacional
La regioacuten Noroeste se presenta interesante para delimitar un estudio epidemioloacutegico de
Fasciolosis ya que es un aacuterea endeacutemica para la enfermedad animal una zona de
importancia a nivel de prevalencias de infeccioacuten y presenta caracteriacutesticas climaacuteticas y
fisonoacutemicas distintas a la patagoacutenica
Las caracteriacutesticas fisiograacuteficas justifican en gran medida la situacioacuten de la mayor parte
de la regioacuten con existencia de baja densidad poblacional y la imposibilidad de desarrollo
de actividades agropecuarias de importancia Se localizan asentamientos poblacionales
de distintas magnitudes en estrecha dependencia con los riacuteos Estos pobladores utilizan
el agua proveniente de cursos temporarios para consumo familiar y riego Se encuentran
algunos puestos de pocas personas en varios casos grupos de individuos emparentados
que permanecen en viviendas sumamente precarias construidas con material de la zona
llevados por la necesidad de alimentar el ganado seguacuten la estacioacuten del antildeo
La proteccioacuten del agua contra la contaminacioacuten fecal constituye un elemento de relevante
importancia Sin embargo las caracteriacutesticas de los suelos y la altura no permiten la
obtencioacuten de agua subterraacutenea a un costo accesible para el poblador quien opta por la
utilizacioacuten de las aguas superficiales que poseen una alta contaminacioacuten fecal tanto de
humanos como animales de criacutea y silvestres Una alternativa medianamente posible
incluiriacutea someter el agua a hervor o filtrado adecuado Con respecto al hervor no se
presenta en algunos casos como un meacutetodo simple de descontaminacioacuten ya que el uso
de lentildea como combustible claacutesico induce a la gente a su utilizacioacuten restringida Con
respecto a la filtracioacuten los equipamientos adecuados suelen ser costosos y si bien
pueden ser uacutetiles en la reduccioacuten de la carga pueden no ser totalmente efectivos en la
eliminacioacuten dependiendo de la porosidad
Las praacutecticas sanitarias habituales para la evacuacioacuten de desechos humanos y animales
pueden interrumpir el ciclo de vida de algunos de estos paraacutesitos pero el mal
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saneamiento y la falta de higiene personal pueden introducir propagar y mantener la
transmisioacuten en la comunidad revistiendo gran importancia la disponibilidad y uso de
letrinas
Ademaacutes entre las fuentes de riesgo de contraer enfermedades zoonoacuteticas se encuentra
el comportamiento alimentario por lo tanto es indispensable entender estos haacutebitos para
prevenir y controlar estas infecciones La educacioacuten sanitaria en la comunidad sobre la
preparacioacuten higieacutenica de alimentos limpieza lavado coccioacuten ayuda tambieacuten a reducir el
riesgo
La situacioacuten descripta muestra la necesidad de efectuar estudios epidemioloacutegicos en
aacutereas donde una prueba piloto ha detectado casos humanos de la enfermedad y que
permitan la identificacioacuten de especies que mantienen el ciclo bioloacutegico como reservorios y
hospedadores intermediarios
Ademaacutes es necesario aplicar meacutetodos de diagnoacutesticos directos e indirectos para la
deteccioacuten sensible y especiacutefica de esta parasitosis En el capiacutetulo de la Salud Puacuteblica
referente a Fasciolosis hay determinadas regiones en el mundo con elevada prevalencia
y con muchas personas afectadas Lo que sucede hace pensar que haya mayor nuacutemero
de casos de trematodosis y que pasen inadvertidos para la consulta meacutedica o que incluso
se presenten casos de Fasciolosis que cliacutenicamente se diagnostiquen equivocadamente
como otros procesos de ahiacute que sea de la mayor importancia mejorar o precisar el
diagnoacutestico tanto a nivel de semiologiacutea como de laboratorio Todos estos antecedentes
llevan a la necesidad de revisar los conocimientos actuales sobre la epidemiologiacutea de la
enfermedad
A partir de ello se formula la siguiente pregunta de investigacioacuten iquestCuaacutel es la probabilidad
de que la Fasciolosis endeacutemica en el valle de Fiambalaacute se transmita a los seres humanos
en forma epideacutemica
1101 - Justificacioacuten
Los informes de la OMS sentildealan que la Fasciolosis incrementa permanentemente el
nuacutemero de personas infectadas en el mundo se propaga en forma alarmante entre la
poblacioacuten y va adquiriendo mayor importancia con el transcurso del tiempo Ante la
evidencia de que no es un hecho aislado ni localizado surge la necesidad de conocer la
situacioacuten epidemioloacutegica de manera eficaz y medir sus alcances
La investigacioacuten planteada contribuiraacute a generar estrategias para entender y resolver
para que los resultados ayuden a crear un mayor conocimiento sobre la enfermedad Se
cuenta con indicadores que prometen resultados efectivos los que mediraacuten las variables
de estudio en el contexto catamarquentildeo y se desea aportar informacioacuten con aplicaciones
a otros ambientes provinciales
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1102 - Viabilidad del estudio
El estudio fue factible porque se ha tenido en cuenta la disponibilidad de recursos
financieros humanos y materiales que determinaron el alcance de la investigacioacuten Para
que el estudio fuera viable y no se dispersara se circunscribioacute la poblacioacuten a la localidad
de Tatoacuten y su zona de influencia dentro del valle de Fiambalaacute
Se contoacute con el aval de las autoridades sanitarias provinciales y asimismo se obtuvo el
apoyo de instituciones interesadas en conocer no solo la situacioacuten sino participar en la
toma y el procesamiento de las muestras lo que facilitoacute el desarrollo del trabajo
1103 - Evaluacioacuten de las deficiencias
Como deficiencia en el desarrollo hay que tener en cuenta el acceso al contexto y lugar
donde se realizoacute el trabajo de campo La investigacioacuten fue muy respetuosa con las
personas que participaron en el estudio No se anticipa ninguacuten efecto negativo en cambio
se pretende proporcionar informacioacuten valiosa a personas que conviven con factores de
riesgo Desde luego fue necesario obtener el consentimiento informado de los
pobladores
111 - Objetivos
1111 - Objetivo general
Contribuir al conocimiento de la epidemiologiacutea de la Fasciolosis describiendo la
ocurrencia de la infeccioacuten por Fasciola hepatica en la poblacioacuten humana animales
y hospedadores intermediarios utilizando diferentes meacutetodos de diagnoacutestico en el
valle de Fiambalaacute Catamarca
1112 - Objetivos especiacuteficos
Reconocer los principales factores que determinan la presencia de Fasciolosis
Estimar la prevalencia seroloacutegica de Fasciolosis en personas que habitan el valle
de Fiambalaacute
Analizar diferentes metodologiacuteas de diagnoacutestico (directo e indirecto) signos y
siacutentomas de la enfermedad en humanos
Determinar la prevalencia de Fasciolosis en especies de ganado que se criacutean en
la zona (asnos rumiantes menores y cameacutelidos sudamericanos) mediante
meacutetodos coproparasitoloacutegicos
Realizar estudios anatomorfoloacutegicos de ejemplares de F hepatica que permitan
caracterizar el fenotipo de los especiacutemenes en el valle de Fiambalaacute
Observar si las caracteriacutesticas microscoacutepicas de los paraacutesitos presentan
variaciones con las de otras localizaciones de origen del hospedador definitivo
Analizar la variabilidad geneacutetica para la identificacioacuten de ADN de F hepatica en la
regioacuten
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Comprobar con teacutecnicas moleculares la posible presencia de cepas de F hepatica
resistentes a faacutermacos antiparasitarios en ejemplares recogidos en las necropsias
Reproducir el ciclo bioloacutegico de moluscos intermediarios en el laboratorio para
probar infeccioacuten inducida
Demostrar la infeccioacuten natural de los limneidos y la prevalencia de caracoles
infectados
Caracterizar el fenotipo de los limneidos por la morfometriacutea de su conchilla
Identificar la especie de Lymnaea spp en el ciclo de F hepatica involucrada en
el valle de Fiambalaacute mediante herramientas moleculares
112 - Hipoacutetesis
El nuacutemero de casos de Fasciolosis humana diagnosticados en el valle de Fiambalaacute
presenta importantes variaciones con otras regiones del paiacutes transformaacutendola en una
zona endeacutemica que manifiesta nuevas caracteriacutesticas tanto en los ejemplares de F
hepatica como a nivel de los hospedadores intermedios
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DISENtildeO DEL ESTUDIO Y MEacuteTODOS
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2 - DATOS SECUNDARIOS Y CARACTERIacuteSTICAS DEL AMBIENTE
21 - Seleccioacuten del tipo de estudio
Se realizoacute un estudio de alcance descriptivo prospectivo con disentildeo no experimental
transeccional con seguimiento de la cohorte en humanos durante el periacuteodo 2008-2012
en el Valle de Fiambalaacute provincia de Catamarca Repuacuteblica Argentina
22 - Lugar de la poblacioacuten
Los trabajos de campo se llevaron a cabo en Tatoacuten aacuterea perteneciente al noreste del
valle o bolsoacuten (Niz et al 2004) de Fiambalaacute (El topoacutenimo Fiambalaacute proviene de la
voz cacaacuten fiambalao que significa casa del viento o paiacutes del viento) (Lafone Quevedo
1999) departamento Tinogasta provincia de Catamarca Argentina (Figura 6) Unos 40
kiloacutemetros al norte de la ciudad de Fiambalaacute surgen oasis como Tatoacuten (1874 msnm)
27ordm20acute2033rdquoS y 67ordm31acute2837rdquoO y haciacutea el este Riacuteo Grande (2834 msnm)
27deg13acute3421umlS y 67deg22acute2825umlO Estas poblaciones viven de la explotacioacuten en pequentildea
escala de la ganaderiacutea ovina caprina y cameacutelidos sudamericanos de las plantaciones de
frutales vid del cultivo de maiacutez y alfalfa (Machado Araacuteoz 2007)(Orgaz et al 2007)
b
a
c
Figura 6 Ubicacioacuten geograacutefica del Valle de Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia
de Catamarca Repuacuteblica Argentina
Nota a Mapa poliacutetico de la Repuacuteblica Argentina b Mapa de la provincia de Catamarca c Vista
satelital del Valle de Fiambalaacute
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23 - Seleccioacuten de la poblacioacuten
La poblacioacuten humana estudiada reunioacute las siguientes condiciones a) compartir su haacutebitat
con animales domeacutesticos infectados con F hepatica y b) que esos animales fueran
nacidos y criados en la zona para garantizar que el foco de transmisioacuten fuese local
24 - Periacuteodo de estudio
El estudio se desarrolloacute entre septiembre de 2008 y noviembre de 2012
25 - Descripcioacuten regional del haacutebitat del valle de Fiambalaacute
El liacutemite fiacutesico al norte del valle es la ladera sur de la cordillera de San Buena Ventura
que la separa de la puna Al este gira hacia el sur por la divisoria de aguas que separa la
cuenca del riacuteo Grande El oeste se halla delimitado por la Sierra de Famatina (Montero
Loacutepez et al 2009)
La existencia de vegetacioacuten achaparrada muerta y meacutedanos indican los aspectos tiacutepicos
del paisaje resultante del tipo climaacutetico y que son denominador comuacuten del centro de los
bolsones ocupado por salares o barreales rodeados de meacutedanos (Quiroga 1986)
Las caracteriacutesticas del haacutebitat natural el medio ambiente y los factores climaacuteticos locales
son cruciales para entender el aacuterea endeacutemica humana en cuestioacuten en relacioacuten con el
patroacuten de transmisioacuten (Mas-Coma 2005 Mas-Coma et al 2009 a) el escenario
epidemioloacutegico (Mas-Coma et al 1999 a 2009 a) y las mejores estrategias para el
diagnoacutestico y encuestas (Mas-Coma et al 2014 a)
251 - Orografiacutea
La zona posee en su formacioacuten materiales que pertenecen a los primeros tiempos de la
tierra los que discordan con rocas modernas Orograacuteficamente se destaca el flanco
occidental de la Sierra de Fiambalaacute (Paleozoico) que se dispone de norte a sur (Cabrera
1958)
La regioacuten estaacute cubierta de tipos erosivos cuyas caracteriacutesticas responden al resultado de
la accioacuten del termoclastismo que produce desintegracioacuten mecaacutenica resquebrajamiento y
disgregacioacuten que son acumuladas por el viento (Navarro 1994)
En las zonas maacutes bajas se observa material que comprende extensos abanicos aluviales
y la presencia de innumerables dunas en forma de medialunas y meacutedanos que hacen
tiacutepico el aacuterido paisaje
252 - Clima
La zona de estudio se encuentra dentro del dominio de lo que se denomina Clima
Templado correspondiente a la categoriacutea Aacuterido de Sierras y Bolsones (Argerich 2004)
Se producen heladas todo el antildeo existiendo friacuteo seco de altura inviernos friacuteos y veranos
templados La presencia de sierras da lugar a la formacioacuten de microclimas lo que
acondiciona el marco topograacutefico para la existencia de oasis que se localizan en los
conoides de deyeccioacuten en la falda occidental de los valles
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El relieve es un factor decisivo ya que produce un efecto barrera o de aislamiento que
convierte a los valles en compartimientos separados y define el clima El valle por el que
corre el riacuteo Abaucaacuten presenta un clima mesoteacutermico con amplitudes teacutermicas
estacionales y diacuteanoche tanto en verano como en invierno se producen grandes
amplitudes diurnas
Los determinantes maacutes importantes del clima son la temperatura el reacutegimen de lluvias y
el balance hiacutedrico El clima es ventoso seco conocido como ldquoviento zondardquo Se alcanza un
nivel de presioacuten atmosfeacuterica media de aproximadamente 620 hPa (Castantildeeda y Ratto
2005)
Las lluvias son escasas y torrenciales se dan principalmente en verano la precipitacioacuten
anual no supera los 50 mm El reacutegimen hiacutedrico del suelo resulta importante para el
desarrollo de los caracoles y para la transmisioacuten de F hepatica (Malone 1994) porque
produce encharcamientos donde se reproducen los moluscos En el valle de Fiambalaacute la
altura de la sierra homoacutenima de 3000 m snm aproximadamente resulta insuficiente
para producir lluvias importantes
La evolucioacuten anual de los factores climaacuteticos se obtuvo por interpolacioacuten proporcionada
por las estaciones meteoroloacutegicas circundantes maacutes cercanas a partir de una base de
datos seriada de 50 antildeos (1950-2000) Los valores fueron obtenidos de la base de datos
agroclimaacuteticos de Agromet Grupo FAO (FAOCLIM) El meacutetodo de interpolacioacuten utilizado
para evaluar las caracteriacutesticas climaacuteticas del aacuterea local es el Nuevo LocClim 110
descargado de la Organizacioacuten de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentacioacuten (FAO) con una resolucioacuten temporal de diacuteas
Entre la variedad de iacutendices existentes para cuantificar la aridezhumedad y
continentalidad se seleccionaron el iacutendice de aridez de De Martonne y el iacutendice de
continentalidad de Gorczynski Los iacutendices de aridez proporcionan una manera sencilla
de expresar la relacioacuten de precipitacioacutenevaporacioacuten El iacutendice de aridez de De Martonne
se define como la relacioacuten de la suma anual de la precipitacioacuten en mm y la temperatura
media anual de 10 degC El iacutendice de continentalidad de Gorczynski es una manera simple
pero eficiente para estimar la influencia del oceacuteano en el clima local El iacutendice depende
linealmente de la amplitud teacutermica anual (diferencia de temperatura media mensual entre
el mes maacutes caacutelido y el maacutes friacuteo) (Grieser et al 2006)
Para evaluar las caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute se utilizaron las
clasificaciones de Koeppen y Budyko La clasificacioacuten climaacutetica de Koeppen es uno de los
sistemas maacutes utilizados para la clasificacioacuten del clima y se basa en el concepto de que la
vegetacioacuten nativa es la mejor expresioacuten del clima Por lo tanto los liacutemites de la zona
climaacutetica se seleccionan de acuerdo con la distribucioacuten de la vegetacioacuten Combina las
temperaturas medias anuales y mensuales y la precipitacioacuten y la estacionalidad de la
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precipitacioacuten El sistema de clasificacioacuten climaacutetica Budyko es un meacutetodo de
categorizacioacuten de los climas basado en la relacioacuten de energiacutea recibida a la energiacutea
requerida para evaporar la precipitacioacuten local Los principios de la clasificacioacuten de Budyko
tienen en cuenta las caracteriacutesticas de radiacioacuten que se estrecha y los correlaciona
directamente con la temperatura en la estacioacuten caacutelida y los factores de circulacioacuten que
correlacionan indirectamente las caracteriacutesticas cuantitativas de la precipitacioacuten y el
reacutegimen de humectacioacuten (Oliver y Wilson 1987)
Este software permite precisar la altitud y las correcciones horizontales Los factores
climaacuteticos analizados incluyeron las temperaturas maacuteximas medias y miacutenimas la
precipitacioacuten la evapotranspiracioacuten potencial (ETP) periodo huacutemedo (estacioacuten de
crecimiento de vegetacioacuten) y el periacuteodo seco En relacioacuten con la vegetacioacuten la estacioacuten
de crecimiento es el periodo durante un antildeo cuando la precipitacioacuten es superior a la
mitad de la evapotranspiracioacuten potencial y se define por PrecETP gt 05 (FAO 1978)
aunque para este foco se analizaron ETP gt 05 y EPT gt 045 debido a sus condiciones de
aridez extrema
253 - Hidrografiacutea
La cuenca se alimenta con aguas provenientes de deshielos y vertientes temporarias las
cuales llegan al valle de Fiambalaacute formadas por efluentes y cursos secundarios en
donde el sistema vuelca sus aguas al riacuteo Abaucaacuten (Sempeacute 1983) Las vegas de
superficie poco definida son ambientes lenticos permanentes su agua es transparente
neutra a ligeramente aacutecida
254 - Flora y Fauna
La mayor cantidad de pastos se producen en las vegas predominando las siguientes
especies forrajeras Hydrocotyle sp Halerpestes cimbalaria (Pursh) Greene Ludwigia
sp Mulhembergia aperifolia Deyeuxia haeckeli y Sinzyrinchium chilense (Navarro
1994)
Dentro de los herbiacutevoros de la fauna silvestre cabe mencionar vicuntildea (Vicugna vicugna)
y guanaco (Lama guanicoe)
SERES HUMANOS
3 - Epidemiologia en seres humanos
31 - Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiada
A partir de estudios previos se estimoacute en base a los registros de los agentes sanitarios
del Aacuterea Programaacutetica Ndeg 10 una poblacioacuten de 350 habitantes en la localidad de Tatoacuten y
sus alrededores
311 - Criterios de inclusioacuten En el inicio de la investigacioacuten se incluyoacute a toda la
poblacioacuten de la localidad elegida
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312 - Criterios de exclusioacuten Se excluyeron a aquellas personas que no desearon
participar pacientes con antecedentes siacutentomas o signos de enfermedades
hematoloacutegicas que suponiacutean un riesgo para la extraccioacuten de sangre recieacuten nacidos o
nintildeos de un antildeo o menos
Como consecuencia de ello la poblacioacuten estudiada comprendioacute 305 personas de ambos
sexos quienes concurrieron voluntariamente a las postas sanitarias donde se realizaron
los estudios El rango de edad de los pacientes fue de 2 a 86 antildeos
El trabajo se inicioacute en 2008 y finalizoacute en 2012 con la colaboracioacuten de los Hospitales ldquoSan
Juan Bautistardquo y ldquoEva Peroacutenrdquo de la ciudad de Catamarca el Hospital Municipal de
Enfermedades Infecciosas ldquoDr Francisco Javier Muntildeizrdquo de la ciudad autoacutenoma de
Buenos Aires del Ministerio de Salud de Catamarca el Hospital Zonal ldquoSan Juan
Bautistardquo de Tinogasta el Hospital Zonal ldquoLuis Agoterdquo de Fiambalaacute y el Minihospital ldquoReneacute
Favalorordquo de Medanitos Tambieacuten participaron el Centro de Estudios de Alta Complejidad
(CEAC) de la ciudad autoacutenoma de Buenos Aires el laboratorio de Parasitologiacutea de la
Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca en forma conjunta
con el ex Instituto Nacional de Microbiologiacutea ldquoDr Carlos Gregorio Malbraacutenrdquo actual
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas de la Administracioacuten Nacional de
Laboratorios e Institutos de Salud ubicado en la ciudad de Buenos Aires Repuacuteblica
Argentina
Para estudiar a las personas durante toda la investigacioacuten se solicitoacute una declaracioacuten en
la que los interesados dieron su consentimiento verbal y escrito (Veacutease anexo Figura 19
pp 184) y se obtuvo la correspondiente autorizacioacuten de las autoridades de la Divisioacuten de
Docencia e Investigacioacuten del Hospital San Juan Bautista de la Provincia de Catamarca
para realizar la investigacioacuten De cada paciente se recolectaron los datos personales se
describieron siacutentomas signos y se realizaron exaacutemenes de laboratorio
Para el estudio se seleccionoacute un grupo de pacientes que reuniacutean los siguientes criterios
- Pacientes con serologiacutea positiva para F hepatica especialmente aquellos con
maacutes de una prueba positiva en antildeos sucesivos
- Pacientes con sintomatologiacutea cliacutenica naacuteuseas voacutemitos y dolor en hipocondrio
derecho
- Patroacuten humoral de colangitis aumento de fosfatasa alcalina transaminasas y
fundamentalmente de eosinofilia
- Anormalidades de las viacuteas biliares en la ecografiacutea dilatacioacuten de las viacuteas biliares
intrahepaacuteticas dilatacioacuten del coleacutedoco mayor o igual a 7 miliacutemetros
engrosamiento de las paredes del coleacutedoco y bandas ecogeacutenicas periportales
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32 - Obtencioacuten de las muestras
Se trabajoacute con un cuestionario para la recoleccioacuten de datos El mismo presentoacute dos
partes una correspondiente a personas y la otra a hogares Se emplearon para la
recoleccioacuten de datos personales que incluiacutean la identificacioacuten edad sexo ocupacioacuten y
domicilio datos de haacutebitos alimenticios y contactos con animales Datos de la vivienda
referidos al tipo materiales de construccioacuten servicios fuentes de provisioacuten de agua y
energiacutea El cuestionario se completoacute durante la visita a los pobladores mediante
interrogacioacuten a adultos y nintildeos (en este caso en presencia de un familiar a cargo) y
observacioacuten del encuestador (Veacutease anexo Figura 20-21 pp 185-186)
321 - Recoleccioacuten de sangre
Las muestras de sangre obtenidas por venopuncioacuten fueron empleadas (previa a su
colocacioacuten en los tubos) para realizar extendidos hemaacuteticos Para ello se colocoacute una gota
sobre un portaobjetos y se distribuyoacute con el uso de un extensor
Los extendidos se dejaron secar a temperatura ambiente se fijaron con alcohol metiacutelico y
colorearon con la tincioacuten de Giemsa se rotularon con laacutepiz indicando nombre apellido y
nuacutemero de frotis en uno de los extremos del vidrio Estos materiales se transportaron a
temperatura ambiente en cajas para almacenamiento de portaobjetos hasta los
laboratorios bioquiacutemicos
Durante los antildeos 2009 2010 y 2011 se obtuvieron muestras de 10 ml de sangre de las
personas (n=305) por venopuntura (Lavery e Ingram 2005) colocaacutendolas en dos tubos
uno con anticoagulante EDTA (3 ml de sangre) y otro tubo seco (7 ml de sangre) para
separacioacuten del suero rotulados con nombre apellido y nuacutemero de envase En estas
condiciones fueron transportados hasta el Laboratorio del Hospital Zonal ldquoLuis Agoterdquo de
Fiambalaacute Alliacute se mantuvieron 8 horas a temperatura ambiente para su exudacioacuten
posteriormente se centrifugaron a 3000 rpm y despueacutes fueron separados por aspiracioacuten
con pipetas y transferidos a 2 tubos con los mismos roacutetulos En aquellas muestras donde
se observoacute hemoacutelisis se realizoacute centrifugacioacuten a baja velocidad y transferencia a tubos
limpios
Las muestras obtenidas fueron mantenidas en heladera y transportadas a 4 ordmC a la
ciudad de Catamarca donde se congelaron a -20 degC para conservarlas hasta llevar a
cabo los anaacutelisis correspondientes El suero contenido en un tubo se utilizoacute para los
diagnoacutesticos inmunoloacutegicos y el del otro para la determinacioacuten de enzimas proteiacutenas y
bilirrubina
A una de las muestras de suero en el departamento de Parasitologiacutea del Instituto
Malbraacuten se les realizoacute el ensayo por inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (Enzyme-Linked
InmunoSorbent Assay ELISA) para la identificacioacuten de los anticuerpos anti-F hepatica
presentes en los sueros de los pacientes (utilizando proteiacutena recombinante procatepsina
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L1)
El segundo tubo con suero para las demaacutes determinaciones se analizoacute en los
laboratorios bioquiacutemicos con los cuales se trabajoacute
322 - Inmunodiagnoacutestico
El ensayo inmunoenzimaacutetico es una prueba ampliamente usada para el diagnoacutestico de
fasciolosis Su sensibilidad y especificidad dependen de la calidad de los antiacutegenos del
paraacutesito empleados para evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti-F hepatica (Binkley y
Sinniah 1997) La procatepsina L1 (cisteiacuten-proteasa) obtenida como recombinante se
usoacute como antiacutegeno en ELISA por ser una prueba con buenos resultados previos
(Carnevale et al 2001 a)
3221 - Expresioacuten y purificacioacuten de la proteiacutena recombinante procatepsina L1 (rproCL1)
El protocolo de expresioacuten del antiacutegeno E-S fue realizado previamente en el Instituto
Malbran (Carnevale et al 2001 a) en bacterias Escherichia coli M15 recombinantes
conteniendo el plaacutesmido pQE-proCL1 que se multiplicaron en medio Luria (LB)
suplementado con los antibioacuteticos ampicilina (100 microgml) y kanamicina (10 microgml) toda la
noche y en agitacioacuten a 37 degC El cultivo se diluyoacute 20 veces en 100 ml del mismo medio
se incuboacute en agitacioacuten durante 4 hs a 37 degC con la adicioacuten de isopropil-szlig-
Dtiogalactopiranosido (IPTG) a concentracioacuten final de 2 microM para inducir la expresioacuten de
rproCL1
El lisado de bacterias se obtuvo en presencia de agentes desnaturalizantes y se sometioacute
a diaacutelisis La preparacioacuten proteica obtenida se purificoacute por cromatografiacutea quelante a
traveacutes de una resina de Ni2+-aacutecido nitrilotriaceacutetico en condiciones desnaturalizantes
(Carnevale et al 2001 a) Las fracciones de elucioacuten se analizaron por SDS-PAGE
(Wiltfang et al 1991) y la proteiacutena purificada se cuantificoacute por el meacutetodo de Bradford
(Bradford 1976) y se guardoacute a -70 degC en aliacutecuotas de 40 microg
Las bacterias se cosecharon por centrifugacioacuten y el pellet fue resuspendido en 2 ml de
solucioacuten de resuspensioacuten (20 mM Tris-HCl pH 80 1 mM EDTA pH 80 5 -
mercaptoetanol 25 SDS) para posteriormente hervirlo durante 5 min La muestra asiacute
tratada se centrifugoacute 30 min a 4 degC a 15000 x g recuperaacutendose el sobrenadante El SDS
presente en la preparacioacuten se precipitoacute por adicioacuten de un volumen de KCl 100 mM
incubado por 10 min a temperatura ambiente y centrifugacioacuten a 15000 x g durante 3 min
El sobrenadante fue equilibrado en solucioacuten de lisis por diaacutelisis con 10 voluacutemenes de
buffer de lisis (dos recambios) durante 48 horas a 4 degC
La preparacioacuten proteica obtenida se pasoacute a traveacutes de una resina de Ni2+-aacutecido
nitrilotriaceacutetico (Qiagen) La proteiacutena rproCL1 se unioacute por afinidad al Ni2+ y el remanente
de proteiacutenas de la bacteria se eluyoacute por sucesivos lavados con solucioacuten de lavado (buffer
de lisis a pH 63) Finalmente la proteiacutena rproCL1 se eluyoacute de la columna con solucioacuten de
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elucioacuten (buffer de lisis a pH 45) (Carnevale et al 2001 a) Las fracciones de elucioacuten se
analizaron por electroforesis en geles desnaturalizantes de poliacrilamida coloreados con
azul de Coomassie
3222 - Ensayo inmumoenzimaacutetico
El ensayo de ELISA para la deteccioacuten de anticuerpos anti-rproCL1 de F hepatica se
desarrolloacute en base al protocolo previamente descripto (Carnevale et al 2001 b) Se utilizoacute
en el desarrollo de la prueba el antiacutegeno rproCL1 a concentracioacuten 4 microgml y como
cromoacutegeno ABTS Para el ensayo se utilizaron placas de ELISA de 96 pocillos ldquoPolySorprdquo
(Nunc) sensibilizadas con el antiacutegeno rproCL1 a concentracioacuten 4 microgml en buffer
carbonato 005 M pH 96 (100 microlpocillo) mediante incubacioacuten por 3 horas a 37 degC y 18
horas a 4 ordmC en caacutemara huacutemeda
Despueacutes de la sensibilizacioacuten con el antiacutegeno los pocillos se lavaron 3 veces con 200
microlpocillo de PBS005 Tween antes de la adicioacuten de 200 microlpocillo de la solucioacuten de
bloqueo (PBS005 Tween3 seroalbuacutemina bovina) Despueacutes de 30 min de
incubacioacuten a 37 degC en una caacutemara huacutemeda los pocillos se lavaron como se describioacute
anteriormente Los sueros humanos en dilucioacuten 1250 (100 microlpocillo) en solucioacuten de
bloqueo fueron antildeadidos por duplicado a la placa e incubados durante 30 min a 37 degC
Luego de nuevos lavados la placa fue incubada por otros 30 min a 37 degC en presencia de
100 microl de un segundo anticuerpo anti-IgG humana preparado en cabra y marcado con
peroxidasa (Sigma) diluido 14000 en solucioacuten de bloqueo
Finalmente se procedioacute a detectar el anticuerpo unido al antiacutegeno despueacutes de nuevos
lavados mediante la reaccioacuten enzimaacutetica de la peroxidasa en presencia del sustrato
peroacutexido de hidroacutegeno y del cromoacutegeno 22-azino-bis 3-etilbenzotiazolin-6-aacutecido sulfoacutenico
(Sigma) Las placas se leyeron a los 10 min en el lector de ELISA iMarktrade BioRad La
densidad oacuteptica expresoacute el valor de corte de la teacutecnica diferenciando sueros positivos y
negativos (el caacutelculo se realizoacute en base a las densidades oacutepticas de los controles
negativos) El punto de corte fue de ge0410 nM aplicando el criterio de +3 desviacuteos
estaacutendar por sobre el cual se consideroacute todo suero analizado como positivo
Para validar el ensayo fueron llevadas 12 muestras positivas al Centro Colaborador de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud Departamento de Parasitologiacutea de la Universitat de
Valencia Espantildea
3223 - Foacutermula leucocitaria
Se procedioacute en primer lugar a la determinacioacuten en los extendidos hemaacuteticos de la
foacutermula leucocitaria
3224 - Eosinofilia
El nivel de eosinofilia fue calculado (foacutermula absoluta y relativa) mediante recuento
diferencial de eosinoacutefilos respecto al caacutelculo de leucocitos totales en los extendidos
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hemaacuteticos coloreados Considerando como normales hasta 350mm3 se efectuoacute la
determinacioacuten en campos no superpuestos (Louis et al 1962)
3225 - Proteinas Totales
Este examen se realizoacute con reactivos comerciales utilizando el meacutetodo colorimeacutetrico para
determinar proteiacutenas totales en suero por ser uacutetil para el seguimiento de cambios
ocasionados por diversos estados de enfermedad hepaacutetica (McPherson 2011) mediante
la lectura de la absorvancia Se mezcloacute con varilla se incuboacute 15 min a 37 degC y se leyoacute en
espectrofotoacutemetro a 540 nM o en fotocoloriacutemetro con filtro verde (520-560 nM) llevando a
cero con el blanco de reactivo Longitud de onda 625 nM en espectrofotoacutemetro o en
fotocoloriacutemetro con filtro rojo (620-650 nM) con una temperatura de reaccioacuten de 15 a 28
degC y un tiempo de reaccioacuten de 10 min Tomando como valores normales el rango de 60 a
83 gmdL (gramos por decilitro)
3226 - Aacutecidos biliares
Reabsorbidos en el intestino grueso y transportados por la albuacutemina hacia el hiacutegado
como parte de su ciclo enterohepaacutetico En plasma el 88 de las sales biliares se
encuentran unidas a la albuacutemina Se consideraron los valores normales inferiores a 10
nMml
3227 - Bilirrubina seacuterica
Es el ligando maacutes estudiado En plasma la bilirrubina es insoluble y su unioacuten a la
albuacutemina la vuelve soluble La unioacuten a la albuacutemina determina su detoxificacioacuten en cuanto
a su rol antimitocondrial promueve su efecto antioxidante y colabora en su destruccioacuten
por parte de la luz in vivo El nivel normal considerado de bilirrubina directa es 0 a 03
mgdL y el de bilirrubina total 03 a 19 mgdL
3228 - Enzimas
Se realizaron pruebas de funcionalidad hepaacutetica para detectar un aumento de las
enzimas alanina amino transferasa o transaminasa glutaacutemico-piruacutevica (ALT o GPT)
aceptando los valores normales de 6 a 35 UIL y aspartato amino transferasa o
transaminasa glutaacutemica oxalaceacutetica (AST o GOT) con valores normales entre 6 a 30 UIL
(Gianini et al 2005)
Para conocer el pasaje del paraacutesito a los canaliacuteculos biliares y una posible fase croacutenica
de la enfermedad se analizoacute el aumento de fosfatasa alcalina (FAL) que se encuentra
elevada en patologiacuteas del hiacutegado asociadas con enfermedad de las viacuteas biliares y
colestasis Se tomaron como valores normales en adultos desde 25 a 100 UIL y en nintildeos
menos de 350 UIL (Pratt y Kaplan 2000)
323 - Anaacutelisis de los datos
Se utilizoacute la regresioacuten logiacutestica por ser una de las herramientas estadiacutesticas con mejor
capacidad para el anaacutelisis de datos en investigacioacuten cliacutenica y epidemiologiacutea Esta teacutecnica
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modeloacute coacutemo influyoacute en la probabilidad de aparicioacuten de un suceso habitualmente
dicotoacutemico la presencia o no de diversos factores y el valor o nivel de los mismos En
este caso con el objeto de identificar aquellos factores significativos en la explicacioacuten de
la probabilidad de que un paciente presente fasciolosis se aplicoacute un modelo de regresioacuten
logiacutestica muacuteltiple con el programa SPSSreg versioacuten 115 para Windows El modelo
matemaacutetico permitioacute ademaacutes evaluar la contribucioacuten de cada variable sobre las chances
(odds) que tiene un paciente de presentar un resultado positivo
Se clasificoacute el valor de la variable respuesta como 0 cuando no se presentoacute el suceso
(caso negativo) y con el valor 1 cuando siacute estuvo presente (paciente con resultado
positivo) Se consideraron como variables independientes o explicativas en el modelo
edad sexo resultado de los exaacutemenes y siacutentomas
Todos los datos se registraron seguacuten el nuacutemero de identificacioacuten utilizado durante la
recoleccioacuten correspondiente al integrante de la poblacioacuten y el nuacutemero de la muestra para
el resto de los materiales analizados
Las prevalencias de infeccioacuten por diferentes meacutetodos se compararon usando el test de
Chi2 y se calcularon los valores predictivos con intervalos de confianza de 95 El valor
obtenido para el estadiacutestico de contraste de hipoacutetesis H0 β=0 llamado test de Wald se
halloacute mediante el cociente entre el coeficiente y su error estaacutendar Este estadiacutestico siguioacute
una distribucioacuten Chi2 con 1 grado de libertad
324 - Materia fecal
Antes del inicio de la toma de muestras para coproparasitologiacutea se realizoacute una
explicacioacuten oral respecto a la metodologiacutea de recoleccioacuten con solicitud de repeticioacuten de
las indicaciones por parte de los participantes Se entregoacute un instructivo impreso por
persona los envases con la solucioacuten y una cucharita descartable para la recoleccioacuten de
cada muestra
El procedimiento consistioacute en recolectar muestras de materia fecal (n=96) emitida durante
3 diacuteas consecutivos y colocarla en recipientes (rotulados con el nombre apellido y
nuacutemero de envase) con solucioacuten salina formolada 5 como conservante Los frascos
conteniendo las muestras fueron retirados por los agentes sanitarios a partir del cuarto
diacutea posterior a su entrega las mismas se conservaron a temperatura ambiente y se
transportaron hasta el Laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la
Salud Universidad Nacional de Catamarca en cajas destinadas para tal fin
Las personas participantes de ambos sexos y distintos grupos etarios no fueron
discriminadas por familias por que se analizaron individualmente Se destaca que en
general la poblacioacuten fue reacia a proporcionar las muestras
La eleccioacuten del conservante fue realizada por las ventajas de su faacutecil preparacioacuten bajo
costo fijador multipropoacutesito larga duracioacuten y apropiada para procedimientos de
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sedimentacioacuten
3231 - Teacutecnica de Sedimentacioacuten Raacutepida (TSR)
De cada muestra de materia fecal (n=96) se tomaron de 4-8 gr de heces que fueron
homogenizadas en un vaso coacutenico con una varilla de vidrio en 30 ml agua corriente
filtrada y calentada a 50 degC Obtenida una buena homogenizacioacuten se agregoacute agua hasta
completar 150 ml La mezcla se trasvasoacute a un recipiente coacutenico de vidrio de 250 ml de
capacidad tamizaacutendola con un colador de malla Se completoacute el volumen con agua
filtrada y se dejoacute reposar por 3 a 4 min no maacutes (la sedimentacioacuten se basoacute en que el
tiempo de caiacuteda de los huevos de F hepatica en el agua es 100 mmmin maacutes raacutepido que
el de la caiacuteda de detritos de las materias fecales) Luego se decantoacute dos terceras partes
del sobrenadante y se volvioacute a agregar agua friacutea hasta completar la capacidad de la copa
Se repitieron los mismos pasos 2 o 3 veces o hasta que el sobrenadante quedara limpio
Finalmente se removioacute el sedimento se aspiroacute parte con una pipeta Pasteur el que fue
vertido en un portaobjeto con concavidades y se observoacute al microscopio con lentes de
menor aumento
3232 - Teacutecnicas de concentracioacuten
32321 - Meacutetodo de Telemann modificado
Las heces fijadas (n=96) en solucioacuten salina formolada fueron homogeneizadas con varilla
de vidrio y filtradas a traveacutes de un embudo con una doble gasa en tubo de centriacutefuga Se
agregaron aproximadamente 2 ml de eacuteter y los tubos se centrifugaron a 1000-1500 rpm
de 3 a 5 min Se eliminoacute con golpe seco el sobrenadante Se tomoacute con pipeta Pasteur
una pequentildea cantidad del sedimento y se colocoacute en portaobjetos Se agregoacute una gota de
lugol y se selloacute con un cubreobjetos para su observacioacuten al microscopio oacuteptico
32322 - Meacutetodo de flotacioacuten de Willis
Se cubrioacute el fondo de un vaso de 50 ml (sin pico vertedor) con un volumen de muestra de
heces previamente homogeneizada (n=96) Se llenoacute hasta la cuarta parte del frasco con
solucioacuten salina sobresaturada y se mezcloacute con varilla de vidrio hasta obtener una
suspensioacuten muy fina Se dejoacute la solucioacuten en estas condiciones 20 min Se aspiroacute el
volumen superior de la solucioacuten y se recuperoacute con pipeta una muestra del fondo que fue
colocada entre portaobjeto y cubreobjetos y se observoacute al microscopio Este uacuteltimo
procedimiento fue adicionado para la buacutesqueda de huevos operculados de F hepatica
que presentan la caracteriacutestica de no flotar
32323 - Meacutetodo cuantitativo para huevos
La teacutecnica de Kato-Katz o frotis grueso (solicitada para la entrega gratuita de Egatenreg
triclabendazol para uso humano donacioacuten de Novartis Pharma AG) (Savioli et al
1999)(OMS 2006)(Keiser et al 2007) se preparoacute por recomendacioacuten de la OMS para la
buacutesqueda hallazgo y recuento de huevos de F hepatica en heces (n=15)
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33 - Diagnoacutestico por imaacutegenes
A los casos seleccionados por nivel elevado de eosinofilia fosfatasa alcalina o
resultados seroloacutegicos de F hepatica positivos se efectuoacute ecografiacutea abdominal con un
equipo portaacutetil Aloka 500 con transductor Coacutenvex 35 MHz
En dos oportunidades meacutedicos especialistas del Hospital Muntildeiz y del Ministerio de Salud
de la provincia de Catamarca efectuaron las ecografiacuteas (n=57) de aquellas personas a las
que previamente se habiacutea seleccionado
En el caso de pacientes sintomaacuteticas (n=2) meacutedicos gastroenteroacutelogos practicaron una
exploracioacuten con el meacutetodo invasivo Colangiopancreotografiacutea Endoscoacutepica Retrograda
(CPRE) con el uso de coledocoscopio flexible Olympus CHF P20 de 49 mm con canal
de trabajo de 22 mm y visioacuten lateral realizando una papilotomiacutea retrograda endoscoacutepica
y barrido instrumental con cateacuteteres de Dormia (Mazzariello 2009) en cliacutenicas privadas
de las ciudades de San Fernando del Valle de Catamarca y Coacuterdoba
34 - Datos cliacutenicos
Meacutedicos de los distintos nosocomios efectuaron los exaacutemenes cliacutenicos a personas
sospechosas de fasciolosis o que lo solicitaron donde se evaluaron siacutentomas y signos
tales como fiebre dispepsia diarrea ictericia dolor abdominal voacutemitos hepatomegalia
etceacutetera Los datos fueron anotados en la planilla de registro de observaciones disentildeada
para este fin que corresponde a una fraccioacuten del cuestionario (Veacutease anexo Figura 21
pp 186)
ANIMALES COMO HOSPEDADOR DEFINITIVO DE F hepatica
4 - Especies animales estudiadas
El componente animal incluyoacute para su estudio ejemplares (n=1088) de las especies
domeacutesticas Bos primigenius taurus (bovinos) Capra aegagrus hircus (caprinos) Equus
africanus asinus (asnos) Equus ferus caballus (caballos) Lama glama (llamas) Ovis
orientalis aries (ovinos) y Sus scrofa domestica (cerdos) de diferentes razas categoriacuteas y
sexos
41 - Exaacutemenes coproparasitoloacutegicos
Para conocer la prevalencia de infeccioacuten por F hepatica y la contaminacioacuten del ambiente
por el aporte de huevos al medio se recolectaron muestras de materia fecal en 36 viajes
a campo realizados en primavera y otontildeo Las muestras (n=1077) se obtuvieron de las
distintas especies animales domesticas presentes en la zona ovinos (n=322) asnos
(n=192) llamas (n=210) caprinos (n=197) bovinos (n=72) equinos (n=46) y porcinos
(n= 38) durante los antildeos 2008-2011
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Las muestras de heces fueron recogidas en el momento de la defecacioacuten de cada
ejemplar o con el uso de guantes descartables de pared delgada que permitieron la
penetracioacuten completa de la mano o de un dedo seguacuten la especie animal a evaluar Se
humedecioacute la proteccioacuten con agua corriente al igual que la regioacuten anal para no maltratar
al animal en el momento de extraccioacuten de las bontildeigas del recto
La materia fecal obtenida fue colocada en recipientes plaacutesticos individuales que
conteniacutean solucioacuten salina formolada al 5 y se transportaron al laboratorio de
Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de
Catamarca para su anaacutelisis En el diagnoacutestico de infeccioacuten por F hepatica se utilizoacute la
teacutecnica de sedimentacioacuten para la deteccioacuten de huevos en materia fecal (Dennis et al
1954) fundamentada en repetidos lavados y filtrados de la muestra coproloacutegica y la
observacioacuten posterior Se preparoacute una solucioacuten detergente con 95 ml de agua destilada y
5 ml de detergente liacutequido maacutes unas gotas de solucioacuten al 1 de sulfato de aluminio y
potasio
Se pesoacute 5 gr de heces de cada muestra se colocaron en un mortero se agregoacute 25 ml de
solucioacuten detergente y se mezcloacute cuidadosamente con varilla sin formar espuma En un
embudo colador se colocoacute una doble gasa y se filtroacute la suspensioacuten a un tubo de 50 ml de
capacidad se lavoacute con solucioacuten detergente el recipiente que conteniacutea las muestras
filtrando este liacutequido y agregaacutendolo al tubo adicionando maacutes solucioacuten detergente al
sedimento de la malla hasta llenar el tubo Se dejoacute el tubo en reposo entre 5 y 10 min
eliminando 34 parte del sobrenadante se lavoacute el embudo con solucioacuten detergente y
agregoacute al tubo Se volvioacute a llenar el tubo hasta el reborde con solucioacuten detergente
dejando reposar aproximadamente 10 min Se eliminoacute el sobrenadante del tubo dejando
2 a 3 ml de sedimento Se tintildeoacute con gotas de azul de metileno al 1 o 2 gotas de tintura
de yodo y se dejoacute en reposo de 2 a 5 min vertiendo este contenido en una caja de Petri
Se lavoacute el tubo con 5 ml de agua corriente agregaacutendolo a la placa y se observoacute al
microscopio de 4x a 10x Finalmente se reportoacute la presencia o ausencia de huevos de F
hepatica La identificacioacuten de los huevos se realizoacute a partir de sus caracteriacutesticas
morfoloacutegicas forma ovalada u ovoide con una envoltura lisa de color amarillento o
marroacuten claro que en una de sus extremidades posee un pequentildeo opeacuterculo cuyas
medidas variacutean entre 130-140 μm de largo por 70-90 μm de ancho (Boero 1976) Las
prevalencias de infeccioacuten de las diferentes especies se compararon usando el test de
Chi2
411 - Identificacioacuten de otros paraacutesitos gastrointestinales
Muestras de materia fecal ovina fueron estudiadas con el meacutetodo de Willis para
comprobar presenciaausencia de especies paraacutesitas que pudieran cohabitar con F
hepatica
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42 - Necropsias y obtencioacuten de especiacutemenes de F hepatica
Se participoacute durante 2008 2009 y 2010 en las faenas domiciliarias y peridomiciliarias de
11 animales domeacutesticos [Lama glama (n=4) Ovis orientalis aries (n=4) Capra aegagrus
hircus (n=2) y Bos primigenius taurus (n=1)] de ambos sexos y distintas edades
sacrificados por los pobladores que de esa forma se proveiacutean de carne para la
alimentacioacuten familiar Se obtuvo autorizacioacuten verbal para realizar la inspeccioacuten sanitaria
de los cadaacuteveres que permitiera la buacutesqueda de ejemplares adultos de F hepatica y
otros signos de enfermedad El estudio se realizoacute con el material recogido del ganado
sacrificado por sus propietarios por lo que no se necesitoacute la autorizacioacuten del Comiteacute de
Eacutetica del Colegio Meacutedico Veterinario de la Provincia de Catamarca
En la cavidad abdominal se examinaron los oacuterganos in situ observando esencialmente la
relacioacuten entre ellos y las anormalidades en el peritoneo y contenido del abdomen El
hiacutegado se inspeccionoacute mediante palpacioacuten en toda la superficie para posteriormente
realizar cortes paralelos a traveacutes del pareacutenquima
De manera especial se procedioacute in situ a la inspeccioacuten visual del hiacutegado cuando se
trataba de fasciolosis aguda (n=2) para observar inflamacioacuten presencia de hemorragias
en el pareacutenquima producidas por la migracioacuten de los paraacutesitos inmaduros durante las
primeras semanas post-infeccioacuten o trayectos con sangre coagulada hematomas debajo
de la caacutepsula de Glisson (subcapsulares) congestioacuten venosa y peritonitis fibrosa
adyacente La buacutesqueda de formas joacutevenes de F hepatica se realizoacute mediante incisiones
paralelas del pareacutenquima hepaacutetico con cortes en laacutemina cada dos centiacutemetros y medio
de espesor
En los animales revisados que presentaban fasciolosis croacutenica (n=5) los hallazgos
dependieron de la presencia y nuacutemero de paraacutesitos Se buscoacute especialmente en las
carcasas edemas en ldquocuello de botellardquo edemas generalizados y signos de caquexia En
los hiacutegados se examinoacute todo dato objetivo observado de colangitis fibrosis hepaacutetica y
ganglios linfaacuteticos agrandados En los cortes practicados a los canales biliares se observoacute
la presencia de engrosamientos en las paredes de los ductos y depoacutesitos calcaacutereos en su
lumen
En las necropsias se recolectoacute bilis para la buacutesqueda de huevos de F hepatica los que
a posteriori seriacutean utilizados con los caracoles en la reproduccioacuten in vitro del ciclo La
bilis se colectoacute en tubos coacutenicos de 50 ml de capacidad recubiertos en papel de aluminio
se refrigeroacute y se transportoacute hasta el laboratorio de la Facultad de Ciencias de la Salud
donde se conservaron en heladera a 4-8 degC
Los ejemplares de paraacutesitos hallados durante las faenas se lavaron durante 30 min en
solucioacuten fisioloacutegica fueron dispuestos en 3 grupos de envases uno con solucioacuten AFA
(etanol 95ordm 85 ml formaldehiacutedo comercial 10 ml y aacutecido aceacutetico glacial 5 ml) para realizar
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estudios anatomorfoloacutegicos un segundo al que se agregoacute etanol 70deg para el anaacutelisis de la
variabilidad geneacutetica y un tercero conteniendo ARNlaterR para estudios de resistencia
antiparasitaria Todos los tubos fueron numerados para identificar lugar especie sexo
edad aproximada o categoriacutea de los animales y datos del propietario del animal faenado
421 - Estudios morfoloacutegicos de F hepatica
Ejemplares de F hepatica obtenidos en la faena de un bovino infectado naturalmente en
el valle de Fiambalaacute (n=20) se compararon con las medidas de especiacutemenes procedentes
de Rosario de la Frontera Salta Argentina (n=15) de Cordeiro Riacuteo de Janeiro (n=23)
Lavras Minas Gerais Brasil (n=18) y Galicia Espantildea
El meacutetodo de estudio aplicado se basoacute en el protocolo propuesto por Valero et al (2005)
y se llevoacute a cabo en el Laboratoacuterio de Helmintos Paraacutesitos de Vertebrados Fiocruz Riacuteo
de Janeiro Brasil Se realizaron estudios morfoloacutegicos de F hepatica con microscopia de
campo claro y usando microscopia de contraste por interferencia diferencial o teacutecnica DIC
(Differential-Interference Contrast) Normarski Los especiacutemenes fueron mantenidos en
solucioacuten AFA hasta el laboratorio del Fiocruz donde se fijaron en etanol 70deg se
presionaron entre vidrios transparentes para facilitar la visualizacioacuten de las estructuras e
inmediatamente despueacutes se realizoacute la deshidratacioacuten de las muestras con una serie
ascendente de alcoholes y luego se tintildeeron con carmiacuten alcohoacutelico de Langeron (1949)
seguido de una aclaracioacuten con solucioacuten de salicilato de metilo y baacutelsamo de Canadaacute en
la proporcioacuten 11 El material fue montado entre portaobjetos Se midieron los ejemplares
para su registro y comparacioacuten de tamantildeo con especiacutemenes de las otras regiones Las
microfotografiacuteas se obtuvieron usando un microscopio de campo claro (Olympus BX51)
Ademaacutes se obtuvieron microfotografiacuteas utilizando contraste de interferencia diferencial
(Normarski) para estudiar especiacutemenes un tanto gruesos que no permiten el uso de
contraste de fases La imagen proyectada al ser seudo tridimensional facilitoacute observar las
espinas del tegumento para diferenciarlos Esta teacutecnica se aplicoacute a 23 especiacutemenes
Ocho muestras del valle de Fiambalaacute 7 de Salta 4 especiacutemenes de Cordeiro y 4
ejemplares de Lavras
422 - Estudios de haplotipos de F hepatica
Para analizar los haplotipos de F hepatica circulantes paraacutesitos obtenidos (n=30) en la
necropsia de un bovino naturalmente infectado se conservaron hasta su transporte al
Instituto Malbraacuten en etanol 70ordm y se procesaron para la extraccioacuten de ADN empleando un
kit comercial Se llevaron a cabo reacciones de PCR para la amplificacioacuten del marcador
molecular correspondiente al gen mitocondrial de la subunidad 1 de la citocromo c
oxidasa (COI) Los amplicones obtenidos se secuenciaron automaacuteticamente Las
filogenias fueron reconstruidas utilizando el algoritmo de maacutexima parsimonia
implementado en el programa PAUP (Swoffod 2001) Los aacuterboles se obtuvieron
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mediante 1000 reacuteplicas bootstrap La adicioacuten de secuencias fue al azar con 5
repeticiones Se compararon con ejemplares de fasciolas de otras regiones del paiacutes
423 - Estudios de resistencia a antiparasitarios
Para conocer la posible resistencia a drogas antiparasitarias (Triclabendazol TCBZ) se
utilizoacute la teacutecnica RAPD PCR para la que se seleccionoacute ejemplares procedentes de un
bovino (n=9) y 2 ovinos (n=18) obtenidas en las faenas realizadas en septiembre de 2009
y noviembre de 2010 En cada tubo de microcentrifuga de 2 ml de capacidad se
colocaron 3 ejemplares de F hepatica con el medio ARNlaterR y se enviaron a la Caacutetedra
de Farmacologiacutea de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad del Centro
de la Provincia de Buenos Aires para realizar el ensayo que involucroacute el anaacutelisis de los
fragmentos amplificados mediante electroforesis en geles de
poliacrilamida desnaturalizantes El iniciador empleado se marcoacute con un compuesto
fluorescente y se resolvioacute empleando un secuenciador automaacutetico Se emplearon como
testigos muestras de F hepatica procedentes de la provincia de Chubut y otras de
Cajamarca Peruacute En cada tubo se preparoacute BSA 1mgml 25 microl dNTPs 20 mM 2 microl Taq
directa sin diluir 025 microl DNA 10 ngmicrol 1 microl MgCl 25 mM 2 microl primer mezcla F y R 1 microl y
H2O csp 1625 microl La secuencia del cebador utilizado fue M-13 GAG GGT GGC GGT
TCT y el Programa 7 Di 94 degC 2 min 94 degC 30 seg 37 degC 1 min 72 degC 2 min (45 ciclos)
Ef 72 degC 5 min Los tubos y orden de siembra fueron 1) PM 10 microL 2) ADN Fh Sensible
(cepa pura Cullompton) 3) ADN Fh Resistente (cepa pura Sligo) 4) ADN Fh Peruacute ovino
(Pedro Ortiz de Cajamarca) 5) ADN Fh Quebrada Grande (Vega) 6) ADN Fh Puerta de
Tatoacuten (Bayoacuten) 7) ADN Fh Casa Grande (Loacutepez) 8) ADN Fh Chubut ovino (Jensen)
IDENTIFICACIOacuteN DEL HOSPEDADOR INTERMEDIARIO DE Fasciola hepatica
5 - Epidemiologiacutea de los caracoles
51 - Recoleccioacuten de limneidos en la zona del valle de Fiambalaacute
Los meacutetodos malacoloacutegicos correspondieron a los baacutesicos utilizados en malacologiacutea y
comprendieron la recoleccioacuten de los limneidos (n=2354) en la naturaleza su transporte y
la posterior aclimatacioacuten de los mismos en condiciones de laboratorio para su estudio
(Roberts 1950)(Malek 1962)(Prasertphon 1990)
Se seleccionaron 4 biotopos donde se colectaron caracoles mediante la buacutesqueda visual
sobre la vegetacioacuten o de los ejemplares que se desplazaban libremente en la superficie
del agua Tambieacuten se buscaron moluscos en restos del sustrato seco troncos hojas
tallos etceacutetera
El aacuterea de trabajo fue determinada con el fin de recolectar el mayor nuacutemero de
ejemplares posibles en total se realizaron 24 muestreos de 3 horas cada uno desde
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septiembre a mayo de cada antildeo colectando moluscos en sus diferentes haacutebitats
mediante las manos enguantadas para no dantildear al caracol y reduciendo el impacto sobre
el biotopo En los diferentes muestreos y en cada sitio se recolectaron todas las especies
de caracoles presentes utilizando igual meacutetodo de captura (Rabinovich 1980)
El material malacoloacutegico colectado proveniacutea de poblaciones naturales del valle de
Fiambalaacute Las expediciones para la recoleccioacuten de los moluscos se realizaron en
poblaciones de caracoles del riacuteo Abaucaacuten (27ordm29acute2871S y 67ordm360612O) en la vega
ubicada en las afueras de Tatoacuten (27ordm202935S y 67ordm315824O) gasteroacutepodos
presentes de la vega ldquoLa Primavera de Isatacordquo (27ordm292871S y 67ordm360612O) entre
las localidades de Tatoacuten y Medanitos y en Riacuteo Grande (27ordm133794S y 67ordm224317O)
Estos lugares fueron escogidos teniendo en cuenta los casos registrados en el marco
veterinario (Curtale et al 2000) y las primeras estimaciones sobre fasciolosis en seres
humanos detectadas en la zona
De cada una de las aacutereas de recoleccioacuten se tuvieron en cuenta una serie de
caracteriacutesticas bioacuteticas tales como la presencia de otras especies de moluscos
(Paraense 2005) presenciaausencia de vertebrados como potenciales hospedadores
definitivos y tipo de vegetacioacuten de la zona
511 - Transporte de limneidos al laboratorio
La recoleccioacuten de moluscos en el terreno se realizoacute siguiendo las instrucciones generales
que cabe encontrar en cualquier libro de malacologiacutea que se refiera a gasteroacutepodos de
agua dulce Siempre se tratoacute de hacer colectas lo maacutes numerosas posibles dada la
mortalidad de estos caracoles en situaciones experimentales
Para el transporte de los ejemplares vivos se utilizoacute recipientes de plaacutestico conteniendo
agua del lugar Durante los viajes se hizo especial hincapieacute en la temperatura (menor a
20 degC) para evitar la contaminacioacuten del agua que podiacutea llevar a la mortalidad de los
caracoles recolectados A su vez se colectaron especiacutemenes que fueron colocados en
tubos con alcohol etiacutelico Se trasladaron al laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de
Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de Catamarca para estudios apropiados
52 - Tareas en el laboratorio
521 - Adaptacioacuten y cultivo de limneidos
El primer paso que se realizoacute en el laboratorio fue la aclimatacioacuten de los moluscos
recolectados tratando de simular las condiciones que encontraban en la naturaleza Esta
fase duroacute aproximadamente 48 horas (Rondelaud y Barthe 1987)(Audousset et al
1989) Durante este periacuteodo los ejemplares se colocaron en recipientes de vidrio con
agua y un suministro de lechuga a temperaturas entre 20 y 25 ordmC
Se consiguioacute un correcto mantenimiento para la reproduccioacuten del ciclo bioloacutegico al
disponer en el fondo de los recipientes una capa fina de sedimentos de grava
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(Rondelaud y Barthe 1978)(Audousset et al 1989) cubierta con agua ambos elementos
previamente esterilizados mediante el empleo del autoclave Cada 3 a 4 diacuteas se antildeadiacutean
hojas de lechuga (Venturini et al 1981) y se procediacutea al cambio de agua del recipiente
(Bouix-Busson et al 1985 a)(Bouix-Busson et al 1985 b)
522 - Taxonomiacutea
De los primeros ejemplares (n=1236) colectados en diciembre de 2009 un grupo (n=298)
de los moluscos se llevaron al Laboratorio de Parasitologiacutea General Unidad de Ecologiacutea
de Reservorios y Vectores de Paraacutesitos Departamento de Ecologiacutea Geneacutetica y
Evolucioacuten Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires donde
se confirmoacute por las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla (Paraense 1982) y
oacuterganos internos que se trataba de limneidos
El material colectado y conservado en etanol (n=236) en septiembre de 2010 se
comparoacute con las descripciones y los dibujos de las especies de limneidos detalladas para
la Regioacuten Neotropical (Paraense 1982)(Paraense 1984)
La caracterizacioacuten morfomeacutetrica comparativa de la conchilla de los limneidos es una
caracteriacutestica adicional de intereacutes sobre todo cuando se trata de especies de
hospedadores intermediarios del grupo GalbaFossaria ampliamente distribuido en zonas
endeacutemicas de fasciolosis de Ameacuterica del Sur (Samadi et al 2000)(Bargues et al 2007 a
2011 a)
Las conchillas de limneidos se midieron de acuerdo con los meacutetodos tradicionales
malacoloacutegicos (Oviedo et al 1995)(Samadi et al 2000) Para estudiar la estructura
anatoacutemica de la poblacioacuten se midioacute el largo de la conchilla desde el aacutepex hasta el margen
anterior y el ancho en la seccioacuten maacutes amplia (Hubendick 1951) de los caracoles
recolectados en cada ambiente y por fecha de muestreo utilizando un calibre de Vernier
Otros moluscos recolectados simultaacuteneamente con los de la familia Lymnaeidae fueron
identificados a nivel de geacutenero siguiendo las claves y descripciones de los gasteroacutepodos
de agua dulce de Argentina (Castellanos y Landoni 1981)(Rumi et al 2008)
523 - Infeccioacuten natural por F hepatica
Teniendo en cuenta que los moluscos fueron recolectados en zonas de endemia animal
se consideroacute necesaria la comprobacioacuten de una posible parasitacioacuten Despueacutes de su
aclimatacioacuten 70 ejemplares recolectados en 2011 fueron aislados en cajas de Petri
individuales para comprobar en eacutestos la emisioacuten de cercarias durante 60 diacuteas Las cajas
de cultivo fueron revisadas una vez a la semana en busca de la posible presencia de
metacercarias enquistadas en las paredes del recipiente o en la lechuga que serviacutea de
alimento
Un grupo de cuerpos de caracoles (n=453) se examinaron para la identificacioacuten de
estadios intermediarios de F hepatica Se sacrificaron y relajaron los ejemplares y luego
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al llevar a cabo la diseccioacuten de los cuerpos en fresco separando las partes duras de las
blandas con agujas de diseccioacuten se comprimieron entre dos portaobjetos y se
observaron al microscopio oacuteptico (4x) para reconocer las estructuras de los diferentes
estadios intermedios del parasito
524 - Infeccioacuten inducida del hospedador intermediario
En el laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la Salud se realizoacute la
infeccioacuten experimental del hospedador intermediario la que se consiguioacute forzando el
contacto miracidio-molusco (n=60) y manteniendo los caracoles infectados bajo
condiciones controladas de temperatura humedad e iluminacioacuten (Mas-Coma et al 1997
a)(Valero y Mas-Coma 2000)
Los miracidios utilizados se obtuvieron de forma experimental mediante la eclosioacuten de los
huevos previamente embrionados (recogidos en las necropsias lavados con solucioacuten
isotoacutenica y filtrados) Se mantuvieron en estufa a temperatura de 25 degC durante 8 diacuteas
observaacutendolos cada 24 horas para comprobar la maduracioacuten de los mismos Los huevos
embrionados se sometieron a la accioacuten de la luz durante 30 min promoviendo la apertura
del opeacuterculo y salida del estadio larvario (Ubaid 1989) La infeccioacuten se logroacute poniendo en
contacto los moluscos con varios miracidios -infeccioacuten plurimiracidial- en una caja de Petri
durante un tiempo que osciloacute entre 2 y 6 horas Pasado este periodo se observoacute el
recipiente bajo la lupa en busca de miracidios y en caso de no estar presentes se
consideroacute un signo inequiacutevoco de que habiacutean penetrado en el caracol (Krull
1941)(Kendall 1950)(Roberts 1950)
53 - Identificacioacuten de la especie mediante determinacioacuten de haplotipos
Se transportaron caracoles de una misma poblacioacuten de limneidos (n=38) colectados
durante 2012 en los biotopos de la zona y fijados con alcohol etiacutelico 70 al Centro
Colaborador de la OMS Departamento de Parasitologiacutea de la Universitat de Valencia
Espantildea para realizar los anaacutelisis moleculares mediante procedimientos de extraccioacuten de
ADN Su mantenimiento durante el viaje se llevoacute a cabo mediante cambios del alcohol en
forma perioacutedica
En la presente investigacioacuten entre los marcadores moleculares utilizados en la
identificacioacuten de los limneidos y para demostrar a que especie perteneciacutean se
seleccionaron ADN nuclear ribosomal (ADNr) marcador de ADN mitocondrial (ADNmt)
primer espaciador transcrito interno (ITS-1) segundo espaciador transcrito (ITS-2) ARN
ribosomal codificacioacuten de gen de la subunidad grande del gen mitocondrial (16S)
citocromo c oxidasa subunidad I de secuencia de nucleoacutetidos y la secuencia de
aminoaacutecidos (Cox1)
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531 - Marcadores de ADN seleccionados
Los marcadores se utilizaron para demostrar la clasificacioacuten de las especies de limneidos
y evaluar comparativamente la variabilidad intraespeciacutefica de sus poblaciones en muchos
paiacuteses de Ameacuterica Latina (Bargues y Mas-Coma 2005)(Bargues et al 2001 2007 a
2011 a b c) que tambieacuten incluye Argentina (Bargues et al 2006 2007 b)(Mera y Sierra
et al 2009)
532 - Extraccioacuten de ADN
El total de ADN fue aislado con fenol-cloroformo y se precipitoacute en etanol (Sambrook et al
1989) La extraccioacuten se realizoacute individualmente de una pequentildea porcioacuten del tejido de la
cabeza-pie de cada caracol (Manlatis et al 1989) Las muestras de los especiacutemenes de
limneidos se suspendieron en un tubo eppendorf con 400 μL de tampoacuten de lisis 10 μL
Tris-HCl pH 80 100 μL EDTA 100 μL NaCl 1 SDS conteniendo 500 microgml de
proteinasa K (Promega Madison WI USA) y digeridos durante 2 horas a 55 degC con
agitacioacuten alterna cada 15 min Los pasos del procedimiento se realizaron de acuerdo con
meacutetodos descriptos previamente (Bargues y Mas-Coma 1997)(Bargues et al 2001 2007
a) El sedimento (pellet) se secoacute y se resuspendioacute de nuevo en 30 μL de buffer TE esteacuteril
(pH 80) esta suspensioacuten fue almacenada a -20 ordmC hasta su empleo
533 - Secuenciacioacuten de los marcadores de ADNr y ADNmt
Las secuencias de ADN fueron amplificadas mediante la reaccioacuten en cadena de
polimerasa (PCR) con la utilizacioacuten de 4-6 μL de ADN genoacutemico cada 50 μL de reaccioacuten
de PCR seguacuten meacutetodos descritos en la bibliografiacutea (Bargues y Mas-Coma 1997
2005)(Bargues et al 1997 2001 2006 a c 2007 2011 a b c 2012 a b)(Mas-Coma et
al 2001) El programa utilizado para los espaciadores fue 1) 30 seg a 94 ordmC 2) 30 seg a
94 ordmC 3) 30 seg a 50 ordmC 4) 1 min a 72 ordmC 30 ciclos repetitivos de los pasos 2 a 4 5) 7
min a 72 ordmC 6) descenso y mantenimiento a 4 ordmC Diez μL de cada producto de PCR se
chequeoacute mediante electroforesis en gel de agarosa coloreadas con bromuro de etidio 1
(NuSievereg GTGreg agarosa) Para poder extrapolar el peso de los fragmentos de ADN se
utilizoacute el marcador de peso molecular VI (Boehringer Mannheim)
La purificacioacuten de los productos amplificados por PCR tuvo la finalidad de obtener una
solucioacuten concentrada y de alta pureza del fragmento eliminando los restos de cebadores
nucleoacutetidos sales etceacutetera La concentracioacuten de ADN asiacute como su pureza fueron
calculadas por espectrofotometriacutea en una dilucioacuten de la muestra al 5 en tampoacuten Tris 10
μL
Cada uno de los cuatro marcadores de ADN (ADNr ITS-2 y ITS-1 y de ADNmt genes
16S y cox1) se amplificaron por PCR en forma independiente para cada muestra y cada
producto de PCR se secuencioacute para la caracterizacioacuten del haplotipo Los espaciadores
ITS-2 y ITS-1 se amplificaron utilizando los cebadores descritos anteriormente (Bargues
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et al 2001 2006 2007 a b)(Mas-Coma et al 2009 a) Los fragmentos diana de los
genes 16S y cox1 fueron amplificados por PCR usando un conjunto de cebadores
universales (Simoacuten et al 1991)(Folmer et al 1994) Los procedimientos de amplificacioacuten
y las condiciones del ciclador teacutermico para cada uno de los marcadores de ADN se
llevaron a cabo en un Mastercycle Epgradient (Eppendorf Hamburgo Alemania) como
se describioacute previamente (Mas-Coma et al 2009 a)(Bargues et al 2011 a)
Los productos de PCR fueron purificados utilizando el Ultra Clean Systemtrade Purificacioacuten
de ADN PCR Clean-up (MoBio Solana Beach CA USA) de acuerdo con el protocolo del
fabricante y se resuspendieron en 50 μL de 10 mM de tampoacuten TE (pH 76) La
concentracioacuten final de ADN se determinoacute midiendo la absorbancia a 260 y 280 nM en un
Eppendorf BioPhotometer (Hamburgo Alemania)
La secuenciacioacuten de cada marcador molecular se realizoacute en ambas hebras por el meacutetodo
didesoxinucleoacutetidos (ddNTPs) de terminacioacuten de cadena Se llevoacute a cabo con el kit que
contiene tinte de color de enzima termoestable Taq en un Applied Biosystems 3730 DNA
Analyzer (Applied Biosystems Foster City CA USA) usando cebadores de PCR
534 - Anaacutelisis de la secuencia
Las secuencias fueron alineadas utilizando CLUSTALW2 (Larkin et al 2007) en versioacuten
606 MEGA (Tamura et al 2013) y el conjunto se trabajoacute con el paquete Staden (Staden
et al 2001) Las correcciones menores para el mejor ajuste de nucleoacutetidos se hicieron en
los casos de los espaciadores ITS Las homologiacuteas se realizaron utilizando el programa
BLASTN (Camacho et al 2008) del Centro Nacional para el sitio web de informacioacuten
sobre Biotecnologiacutea (httpwwwncbinlmnihgovBLAST) Las distancias geneacuteticas se
midieron usando paraacutemetros proporcionados por PAUP v40b10 (Swofford 2001)
Como la sistemaacutetica de limneidos sudamericanos pertenecientes al grupo GalbaFossaria
es controversial y no se puede hacer solo con criterios morfoloacutegicos (Bargues et al 2007
a)(Mera y Sierra et al 2009) para identificar queacute individuos pertenecen a L neotropica o
L viator la comparacioacuten de las secuencias se realizaron utilizando todos los datos de
secuencias ribosomales y mitocondriales de moluscos descargados de GenBank
535 - Nomenclatura de los haplotipos de ADN
En lo referente a la nomenclatura los coacutedigos de las secuencias obtenidas utilizados para
la definicioacuten de los haplotipos siguen la propuesta estaacutendar para limneidos (Bargues y
Mas-Coma 2005)(Bargues et al 2006 a)(Mas-Coma et al 2009 a) Es importante
puntualizar que los coacutedigos de haplotipos son definitivos soacutelo cuando se trata de
secuencias completas del marcador utilizado para haplotipar Sin embargo se consideran
coacutedigos preliminares cuando la secuencias utilizadas corresponden a fragmentos o
secuencias incompletas
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54 - Determinacioacuten molecular de la infeccioacuten natural de limneidos con F hepatica
Se seleccionaron al azar caracoles (n=120) recolectados a fines del verano de 2011 y
conservados individualmente en alcohol 70 Los ejemplares fueron llevados al
Departamento de Parasitologiacutea del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas
ANLIS bdquobdquoDr Carlos G Malbranrdquo donde se sometieron a la teacutecnica de amplificacioacuten en
cadena de la polimerasa (Cucher et al 2006) La secuencia completa del ADN
mitocondrial de F hepatica disponible en la base de datos GenBank (Nuacutemero de acceso
AF216697) se empleoacute para adquirir el par de cebadores utilizados en el meacutetodo
La identidad de F hepatica se corroboroacute mediante la determinacioacuten molecular en los
caracoles limneidos Esta teacutecnica se empleoacute a fin de determinar la infeccioacuten de moluscos
del geacutenero Lymnaea con F hepatica A 10 μL de material geneacutetico obtenido se le
adicionaron 40 μL de mezcla de reaccioacuten compuesta de 025 microL de cebadores FhCO1F
025 microL de cebadores FhCO1R 020 microL de ddNTPs 020 microL de enzima Taq polimerasa
5 microL de MgCl 5 microL de buffer de reaccioacuten 040 microL de BSA y 2870 microL de agua bidestilada
esteacuteril Este proceso se realizoacute en tandas de 75 muestras a modo de trabajar con mayor
practicidad El protocolo empleado fue el mismo usado para determinar si existioacute
amplificacioacuten en la secuencia de ADN en las muestras de limneidos colectados a campo
De estas muestras se tomaron 5 μL para ser sembrados en un gel de electroforesis de
concentracioacuten 15 para verificar si hubo amplificacioacuten de la muestra a su vez se
sembroacute la mezcla de reaccioacuten (sin ADN) y una muestra de control positivo que permitioacute
verificar si las muestras analizadas estaban infectadas Se procedioacute a realizar la
electroforesis en las mismas condiciones anteriores
La teacutecnica de PCR se empleoacute para amplificar la secuencia de ADN de las muestras
limneidos A 10 microl de material geneacutetico se les adicionoacute 40 microl de mezcla de reaccioacuten 05 microl
de primer 213 10 mM 05 microl de primer 297 10 mM 02 microl de dNTPs 02 microl enzima Taq
polimerasa 5 microl MgCl 5 microl de buffer de reaccioacuten B10x ClK 04 microl de BSA y 282 microl de
agua bidestilada esteacuteril
Los tubos de ADN y uno que conteniacutea agua (a modo de control) fueron llevados a un
termociclador empleando el programa ldquosil Lymnaea 18srdquo previamente cargado en el
equipo Se llevoacute a una temperatura de 95 degC durante 5 min luego a temperaturas de 94
degC 55 degC y 72 degC durante 10 seg repitiendo este ciclo 35 veces para despueacutes llevarlos
durante 10 min a 72 degC para finalmente bajar la temperatura hasta 4 degC
541 - Electroforesis
De las muestras se tomaron 5 microl para ser sembrados en un gel de electroforesis de
concentracioacuten 25 que permitioacute la separacioacuten de las macromoleacuteculas en base a su
carga y masa al colocarlo en una cuba de electroforesis que poseiacutea un tampoacuten y donde
se aplicoacute corriente eleacutectrica Esto se realizoacute mezclando 6 g de agarosa en 400 ml de
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buffer TAE (tris-acetato) calentando para disolver la agarosa luego se dejoacute enfriar la
mezcla hasta 50-60 degC y se antildeadieron 24 microl de bromuro de etidio que actuoacute como
colorante Se vertioacute en un molde y colocando un peine se formaron pocillos donde fueron
sembradas las muestras y colocadas en la cubeta de electroforesis que presentaba
solucioacuten tampoacuten de TAE 1x el gel quedoacute completamente cubierto
Una vez realizado esto se colocoacute en el primer pocillo el ADN marcador adecuado (100
bp) en el uacuteltimo la mezcla de reaccioacuten con agua y en los pocillos restantes las muestras
que se analizaron por duplicado El ADN migroacute hacia el aacutenodo aplicando tensioacuten eleacutectrica
hasta que el bromuro de etidio recorrioacute la distancia a traveacutes del gel (30 min) Finalmente
se introdujo el gel en un transiluminador UV y se fotografioacute Se eliminoacute el gel en el
recipiente aparte para residuos soacutelidos destinado al bromuro de etidio
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RESULTADOS
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6 - DATOS SECUNDARIOS Y CARACTERISTICAS DEL AMBIENTE
61 - Caracteriacutesticas de las viviendas del valle de Fiambalaacute
El nuacutemero de familias estudiadas (n=52) habitaban en viviendas ubicadas en Tatoacuten
(n=34) (271 personas) (7742) y en puestos aledantildeos a Riacuteo Grande (n=18) (79
personas) (2257) Las viviendas se clasificaron seguacuten su tipo en ranchos 36 (6923)
viviendas precarias 12 (2307) y casas 4 (769)
Los hogares se agruparon en funcioacuten de la calidad de los materiales de construccioacuten
correspondiendo maacutes de la mitad de ellos a viviendas construidas con materiales no
resistentes ni soacutelidos En cuanto a los materiales utilizados en los pisos de las viviendas
predominaba la tierra (9230) seguida por el cemento (576) y el ceraacutemico (194)
Las paredes estaban construidas principalmente de piedra o bloques de cemento
(5683) y adobe (4317) y en general no contaban con revoque exterior (9522)
Los techos presentaron como elementos constitutivos principales la paja con adobe
(4348) y la chapa (5652) sin cielorraso (9891)
En las viviendas estudiadas el principal combustible utilizado correspondioacute a la lentildea
(7652) mientras que el gas envasado en garrafas se encontroacute en segundo teacutermino
(2348)
La fuente de agua para consumo correspondioacute en su mayoriacutea a la extraiacuteda del Riacuteo
Grande por medio de acequias dirigidas hacia cisternas de decantacioacuten y desde alliacute en
precaria red de cantildeeriacuteas plaacutesticas hasta los domicilios Las viviendas rurales se
abasteciacutean con agua de vertiente utilizando bidones para el almacenamiento Todas las
familias utilizaban para su consumo el agua de vertiente o de red sin proceso de filtracioacuten
o cloracioacuten Cuando se recolectoacute informacioacuten acerca de la utilizacioacuten de agua hervida
soacutelo 2 familias (384) indicaron que la empleaban para consumo mientras que ninguna
familia la usaba para el lavado de alimentos ni la higiene personal
En cuanto a la eliminacioacuten de excretas la forma principal correspondioacute a la eliminacioacuten a
cielo abierto 33 familias (6346) El bantildeo interior se encontroacute solo en el 193 de las
viviendas visitadas y 3461 utilizaba letrinas con descarga a pozo encontraacutendose todas
a menos de 50 metros de la casa
Las caracteriacutesticas generales de precariedad de las viviendas se relacionan con el hecho
de que en soacutelo 15 (2884) de los hogares visitados el ingreso familiar era fijo El ingreso
variable era reflejo de la actividad laboral del jefe de familia que se desempentildeaba en las
tareas rurales
La presencia de animales se registroacute en 48 casas (9230) En estas viviendas los
animales de compantildeiacutea (perros y gatos) constituiacutean el mayor porcentaje (9615) seguida
por la criacutea de ganado (ovinos y porcinos) (7076) y las aves de corral (6190)
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62 - Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiada
La poblacioacuten estudiada (n=305) comprendioacute 124 personas de sexo masculino (4065) y
181 de sexo femenino (5934) Entre los varones 71 (5725) perteneciacutean a los grupos
etarios menores de 19 antildeos mientras que entre las mujeres las menores fueron 101
(5580) Los pacientes menores de 14 antildeos fueron 130 (4263) y los mayores de 14
antildeos 175 (5737)
Las personas que residiacutean en el aacuterea de estudio desde su nacimiento fueron 263
(8652) por un periacuteodo de entre 5 y 33 antildeos 30 personas (964) y por un periodo
menor de un antildeo al momento del estudio 12 (384)
La informacioacuten recolectada acerca de los haacutebitos de las personas (considerando un total
de 300 ya que 5 teniacutean 3 antildeos o menos y no podiacutean responder las preguntas incluidas
en el cuestionario) indicoacute que 187 (6233) reconociacutean vegetales silvestres comestibles
en los riacuteos y vegas identificaacutendolos como plantas de berro Entre las personas que
reconocieron el berro 54 (2887) refirioacute que lo comiacutea
La actividad de faena era realizada por 31 familias (5961) Entre las encuestadas 14
(2692) reconociacutean el paraacutesito (ldquouncardquo) y 11 (2115) comentoacute haber visto estas
estructuras parasitarias Este porcentaje se considera sobreestimado debido a que
algunos pobladores dedicados a la criacutea del ganado confunden F hepatica con otros
paraacutesitos hecho observado al momento de las visitas a los corrales de encierro Por otro
lado se confirma el desconocimiento de la parasitosis al comparar los hallazgos
obtenidos en los muestreos donde solo 9 criadores sabiacutean de la presencia del paraacutesito
en los animales de sus corrales siendo 21 los rebantildeos positivos Es de destacar que en
algunos casos se observaron registros de mortandad atribuidos a la fasciolosis en
animales sin tratamientos fasciolicidas
El contacto con animales fue referido por 290 de las personas encuestadas (9508)
siendo 215 en el peridomicilio y 87 en la actividad laboral El contacto de las personas
con ovinos fue indicado por 212 individuos (6950) mientras que con caprinos 174
(5704) con bovinos 122 (40) con mulares 190 (6229) con equinos 55 (1803)
con cameacutelidos 115 (3770) con porcinos 46 (1508) y con aves domeacutesticas 188
(6163) Con animales de compantildeiacutea el contacto fue de 291 encuestados con perros
(9540) y 174 con gatos (5704)
Las ocupaciones maacutes frecuentes en pacientes mayores de 15 antildeos eran la agricultura y
la ganaderiacutea (36) empleados en la administracioacuten puacuteblica (2414) completaacutendose
con estudiantes (685) y amas de casa (6285)
63 - Caracteriacutesticas climaacuteticas y haacutebitat
Las caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute de acuerdo con los diferentes
sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizados se indican
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en la Tabla 11 (Veacutease anexo pp 172) Los resultados de los anaacutelisis de las
clasificaciones climaacuteticas de Koeppen y Budyko asiacute como por el iacutendice de aridez de De
Martonne permiten destacar las caracteriacutesticas ambientales aacuteridas (extremas deseacuterticas)
que rodean el valle La influencia del oceacuteano en el clima local estimada por el iacutendice de
continentalidad de Gorczynski indica pequentildeas diferencias entre Tatoacuten y Rio Grande
situadas a diferentes altitudes al este y al oeste de la cadena montantildeosa
Las temperaturas maacuteximas medias y miacutenimas diarias muestran una estacionalidad
marcada con un pico en enero y un descenso hasta los valores miacutenimos en junio-julio
(Veacutease anexo Figura 22 A y C pp 187) La media de los valores de temperatura son
inferiores al umbral de temperatura miacutenima de 10 ordmC reconocido para el desarrollo de F
hepatica en el periacuteodo de junio a julio
El anaacutelisis de la evolucioacuten anual de la precipitacioacuten y la evapotranspiracioacuten potencial
muestra la muy baja disponibilidad de lluvias con un pico pequentildeo en enero-febrero y
precipitacioacuten casi inexistente durante el periacuteodo comprendido desde abril-mayo a octubre-
noviembre (Veacutease anexo Figura 22 B y D pp187) Se presenta aridez durante todo el
antildeo (cuando se utiliza ETP gt 05) (Veacutease anexo Figura 22 D pp 187)
Los resultados indican que los focos de transmisioacuten de fasciolosis en el valle de Fiambalaacute
se presentan en ambientes de hecho aislados que presentan disponibilidad de agua
dependiente solo de los riacuteos que bajan de las sierras vecinas
Las caracteriacutesticas ambientales extremadamente aacuteridas que rodean el valle de Fiambalaacute
asiacute como la muy baja precipitacioacuten anual son sorprendentes y muy diferentes de las
caracteriacutesticas ambientales tiacutepicas que rodean focos de transmisioacuten de la fasciolosis
En la zona de estudio los datos indican una concentracioacuten de todos los factores de
transmisioacuten de la enfermedad en aacutereas pequentildeas donde los humanos y los animales
comparten el suministro de agua Esta situacioacuten de transmisioacuten concentrada recuerda las
caracteriacutesticas epidemioloacutegicas de los focos de transmisioacuten de esquistosomiosis en los
oasis del desierto del Sahara en los paiacuteses africanos (Doumenge et al 1987)
Una transmisioacuten estacional se puede esperar en funcioacuten de la coincidencia puntual de la
temperatura apropiada y la disponibilidad de agua de los riacuteos Dicha estacionalidad es
conocida en las zonas endeacutemicas siguiendo el modelo valle de la transmisioacuten de la
fasciolosis conocida en otros paiacuteses andinos (Mas-Coma 2005)(Valero et al 2012)
7 - RESULTADOS EN SERES HUMANOS
71 - Serologiacutea
711 - Inmunodiagnoacutestico
En la poblacioacuten de personas estudiadas (n=305) se identificaron los casos seroloacutegicos
positivos (n=105) al inmunodiagnoacutestico realizado con el ensayo de ELISA (Tabla 2)
3 M
77
M
Paciente
Edad
Sexo
ELISA 1 (nM)
2009
ELISA 2 (nM)
2010
ELISA 3 (nM)
2011
Coproparasitoloacutegico
Eosinofilia
()
Enzimas y
Bilirrubina
Cliacutenica
Imaacutegenes
Cirugiacutea
(Elevadas) 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
37 F 0490 DAD
0479
0444 8 BD GOTFAL
BD
UH
43
F
0529
0466
Negativo
9
GOTFALB TBD
D
38 F 0377 0503 0440 Negativo BTPT 44 F 0498 0482 Negativo 7 FAL FDAV Colecist
40 M 0479 57 M 0607 64 F 0469 0461 FALPT IDADVH Negativa Positivo 16 F 0456 0433 Positivo 8 PT DDA 39 F 0185 0471 FAL 20 M 0250 0443 FALBD 48 F 0550 0464 Negativo FUDAD 20 F 0438 0448 Negativo 38 F 0459 0450 8 FALBD 77 M 0587 0487 5 FALBD 51 M 0532 0443 5 FDAV 45 F 0481 0633 7 BTBD DAV 63 F 0478 8 BD DA
20
21
22
23
24
46 F 0488 0464 Negativo 10 PT IDAD 46 M 0470 8 GOTGTPF
ALBTD 43 F 0453 DDAV 27 F 0445 Negativo 5 FAL 3 M 0479 Negativo
82
Tabla 2 Resultados de anaacutelisis comparativos seguacuten sexo y edad de la absorbancia de ELISA estudios coproloacutegicos eosinofilia
hepatogramas datos cliacutenicos imaacutegenes y cirugiacuteas sobre casos positivos con diagnoacutestico documentado Valle de Fiambalaacute Antildeos 2009-2011
9 F
11 M
M M M M
8 M 18 M 14 M 63 M
6 M 18 M 9
14
25 0448 Positivo GOTGTPF ALPT 26 0491 Negativo 27 40 F 0555 0435 Negativo 28 84 0486 0485 FAL D 29 24 0574 5 30 65 0445 31 31 0451 32 43 F 0547 0531 Negativo 8 FAL DVH Negativa 33 63 F 0528 0344 Negativo 34 31 F 0431 U 35 24 F 0452 IDAUV 36 0487 Positivo 6 FAL DDAVD Negativa 37 0465 Negativo 5 FAL DAD 38 0166 0454 39 0468 5 GOTGTP DV 40 0204 0483 Negativo 41 0222 0483 DDAUV 42 F 0457 DADV 43 F 0406 0531 44 23 F 0604 0485 FAL V 45 38 F 0492 Negativo DAUVH 46 31 F 0413 Negativo DA 47 12 F 0259 0516 V 48 10 M 0508 Negativo 49 16 F 0151 0489 FAL FDAV 50 16 F 0207 0442 Negativo 5 U 51 22 M 0426 0169 IDAV 52 20 M 0414 53 59 F 0279 0438 U
54 15 F 0152 0437 DAV
55 58 F 0502 0441 Negativo 8 FALPT DFDAUDV H
Positivo
83
M
9 F
F
F
9 7
86 M
8 M 15 M
56 14 M 0464 0428 Negativo FAL 57 19 F 0488 0419 Negativo DAUDV 58 10 F 0496 0444 Negativo FALPT VD 59 25 F 0443 Negativo FAL V 60 82 F 0440 61 16 F 0374 0468 Negativo 5 I 62 36 F 0488 0132 UD Litiasis 63
29
F
0648
0477 GOTGTPF
ALP
DAVD
64 62 F 0464 65 54 F 0451 0364 Negativo 7 FALBT DAVD Positiva 66 54 F 0592 0545 5 VDH 67 32 0566 0445 6 FALPT DAUV Negativa 68 0498 0524 Negativo 8 V 69 0547 FALBDPT DV 70 0490 Negativo 5 DA 71 0530 5 PT H 72 59 F 0543 0485 Negativo FALPT FDAV 73 27 F 0471 FALPT DAV 74 47 F 0491 5 BD FDAV 75 GOTFALB 7 F 0481 6 TPT 76 5 F 0471 F 77 20 F 0442 FALPT DAV 78 21 F 0418 PT UV 79 27 F 0567 Negativo D 80 0430 V 81 0236 0454 0550 8 FAL DAVD 82 30 F 0431 PT DA 83 57 F 0485 0168 Negativo FALPT DAVD 84 79 M 0559 0499 Negativo FAL FH Negativa 85 26 F 0331 0415 Negativo DAUD 86 65 F 0537 FALPT DDAV 87 51 M 0558 0419 Negativo 6 Negativa Colicistec
84
M M
7 F
M M M
15 F 56 M
88 20 0460 DAV
89 46 0426 BT DAU 90 0498 FDAV Negativa 91 49 F 0446 DAV 92 68 F 0441 FAL VD Negativa 93 35 M 0404 0480 PT DAV Negativa 94 85 F 0548 FALPT DAV 95 43 0501 H 96 68 0478 DAD 97 58 0466 VH 98 0445 FALPT DV 99 0430 0482 8 FALPT DH 100 26 F 0441 101 30 M 0407 0480 PT V 102 32 F 0456 0484 0597 Positivo 5 BDPT Negativa 103 9 M 0461 Negativo FALBD DV Negativa 104 65 F 0457 DAUDV 105 19 F 0445 8
85
Color Amarillo grupos etarios menores de 19 antildeos Azul sexo masculino Rojo coproparasitoloacutegico positivo GOT=transaminasa glutaacutemico oxalaceacutetica
GTP=transaminasa glutaacutemico-piruacutevica FAL=fosfatasa alcalina BT=bilirrubina total BD=bilirrubina directa PT=proteiacutenas DA=dolor abdominal D=diarrea
U=urticaria H=hepatalgia F=fiebre V=vomito I=ictericia Colicistec=colecistectomiacutea Naranja imagen compatible Verde cirugiacutea con hallazgos
Valores de referencia eosinoacutefilos 0 a 4 GOT 6-30 UIL GTP 6-35 UIL FAL˃ 200 UIL BD 0 a 03 mgdL BT 03 a 13 mgdL PT 60 a 83 gmdL
Eosinofilos
Normales
Nuacutemero de casos
Seronegativo 174
Seropositivo 71
Total 245
(lt350mm3) Resultado () 870 676a 803
Elevados
Nuacutemero de casos
26
34
60 (˃350mm3) Resultado () 130 324b 197
Total
Nuacutemero de casos
200
105
305
Resultado () 100 100 100
Resultaron a la prueba de ELISA con valor de corte 0410nm 105 sueros positivos
(3442) y 200 seronegativos (6558) (Figura 7) Una persona resultoacute seropositiva en
ensayos realizados en extracciones de 3 antildeos consecutivos 27 personas resultaron
seropositivas en extracciones realizados en 2 antildeos seguidos y 55 en una sola
oportunidad de testeo Quince pasaron de una primera prueba seronegativa a
seropositivo en un segundo estudio Dos partiendo de un primer anaacutelisis seronegativo
resultaron seropositivas en los 2 antildeos subsiguientes y 5 personas pasaron a ser
seronegativas en la tercera extraccioacuten
3442 Negativos
Positivos 6548
Figura 7 Distribucioacuten de personas (n=305) seropositivas y seronegativas en frecuencias
relativas () al inmunodiagnoacutestico del ensayo de ELISA analizadas en el Valle de
Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
712 - Eosinofilia
De los pacientes estudiados se detectaron diferencias estadiacutesticamente significativas en
la proporcioacuten de casos con eosinofilos elevados entre seropositivos y seronegativos
Dentro del grupo de pacientes con serodiagnoacutestico positivo es superior el porcentual con
eosinofilos elevados (Tabla 3)
Tabla 3 Resultados comparativos entre la presencia de eosinofilia y ensayos de ELISA
seropositivos Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Serologiacutea
a y b presentan diferencias estadiacutesticamente significativas
(χ2 = 1636 Gl = 1 p= 0000)
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713 - Proteiacutenas totales enzimas bilirrubina y colesterol
En el grupo de casos positivos al test de ELISA el porcentual con valores elevados de
proteiacutenas totales es significativamente superior (Tabla 4)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas en la proporcioacuten de casos
con bilirrubina total elevada y en la proporcioacuten de casos con colesterol elevado entre
positivos y negativos Tampoco se encontraron diferencias estadiacutesticamente
significativas en la proporcioacuten de casos con valores de GOT y GPT elevados
En el grupo de casos positivos al test de ELISA el porcentual con valores elevados de
FAL es superior pero esta diferencia no es estadiacutesticamente significativa
Tabla 4 Resultados comparativos entre los valores de proteiacutenas totales y anaacutelisis de
ELISA positivos Valle de Fiambalaacute 2009-2011
Serologiacutea
Proteiacutenas
Normales
Nuacutemero de casos Negativo
77 Positivo
28 Total 105
Totales Resultado 566 326a 473
Elevados
Nuacutemero de casos
59
58
117
Resultado 434 674b 527
Total
Nuacutemero de casos
136
86
222
Resultado 1000 1000 1000
a y b presentan diferencias estadiacutesticamente significativas
(χ2 = 1223 Gl = 1 p= 0000)
72 - Geacutenero
Con respecto al geacutenero tanto dentro del grupo de casos seroloacutegicamente positivos como
dentro del grupo de negativos los mayores porcentuales corresponden a mujeres en
general (Tabla 5) El test Chi2 no arrojoacute asociacioacuten estadiacutesticamente significativa entre
geacutenero en relacioacuten a la enfermedad
Se realizoacute un Chi2 para la franja etaria y casos seropositivos y seronegativos que muestra
diferencias significativas Al ser un test no parameacutetrico no se pudo determinar entre que
grupos etarios estaacuten
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Tabla 5 Frecuencia absoluta de casos positivos y negativos al ensayo de ELISA
recombinante para Fasciola hepatica en pacientes agrupados por geacutenero en los
diferentes grupos etarios Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Grupo
Etario Ambos sexos
Hombres Mujeres
+ - + - + -
0-4
2
15
2
6
-
9
5-9 12 39 4 11 8 28
10-14 7 55 4 27 3 28
15-19 10 32 3 14 7 18
20-24 10 12 5 3 5 9
25-29 7 6 - 2 7 4
30-34 7 8 3 5 4 3
35-39 7 9 2 5 5 4
40-44 7 6 2 5 5 1
45-49 7 3 2 - 5 3
50-54 4 3 2 1 2 2
55-59 7 2 3 - 4 2
60-64 5 - 1 - 4 -
65-69 6 4 2 2 4 2
70-74 - 1 - - - 1
75-79 3 2 3 1 - 1
80 y + 4 3 2 - 2 3
TOTAL
105
200
40
82
65
118
(χ2 = 0316 Gl = 1 p˃= 005)
73 - Grupo etarios Considerando en conjunto ambos sexos el grupo etario de 5-9 antildeos fue el que presentoacute
el mayor valor de infeccioacuten (114) como se observa en la Tabla 6 Tambieacuten muestra que
el 305 de los casos positivos tienen 19 antildeos o menos
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Tabla 6 Frecuencia y porcentaje acumulado por grupo etario con el ensayo de ELISA
para Fasciola hepatica Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Grupo Etario Frecuencia Frecuencia Porcentaje
absoluta Relativa () Acumulado
0-4 2 19 19 5-9 12 114 133
10-14 7 67 200 15-19 11 105 305 20-24 10 95 400 25-29 7 67 467 30-34 7 67 533 35-39 7 67 600 40-44 7 67 667 45-49 7 67 733 50-54 4 38 771 55-59 7 67 835 60-64 5 48 886 65-69 5 48 933 75-79 3 29 962
80 o maacutes 4 38 1000
Total 105 1000
En siacutentesis considerando como variables independientes o explicativas en el modelo
edad sexo resultado de los exaacutemenes cliacutenicos y siacutentomas resultaron significativas
edad nivel de proteiacutenas totales y recuento de eosinofilos
Las diferencias en la proporcioacuten de casos con valores de enzimas elevados entre
positivos y negativos no resultaron estadiacutesticamente significativas GOT (χ2 = 0259 Gl =
1 p˃ 005) GPT (χ2 = 0181 Gl = 1 p˃ 005) y FAL (χ2 = 0577 Gl = 1 p˃ 005)
La proporcioacuten de casos con bilirrubina elevada presentaron ausencia de significacioacuten (χ2
= 0681 Gl = 1 p˃ 005) al igual que el colesterol elevado entre positivos y negativos (χ2
= 0100 Gl = 1 p˃ 005)
Se presenta la clasificacioacuten de los casos seguacuten su ocurrencia y seguacuten la prediccioacuten
realizada en funcioacuten del modelo nulo Se indica queacute porcentaje de veces el modelo
predice correctamente el grupo (positivonegativo) en el cual se encuentra la persona Se
muestra que el 694 de las veces la prediccioacuten del modelo es correcta es decir dada
una persona el modelo predice adecuadamente en queacute grupo va a estar
(Tabla 7)
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Tabla 7 Clasificacioacutena de los casos observados en el Valle de Fiambalaacute 2009-2011
Pronosticado Resultado
Porcentaje
Negativo Positivo correcto Paso Resultado Negativo 96 40 706
Positivo 28 58 674 Porcentaje
global 694
a El valor de corte para determinar el grupo es 0350
Se presentan los estimadores de los paraacutemetros (coeficientes B) sus errores estaacutendar el
estadiacutestico W de Wald (Chi2) sus grados de libertad y su probabilidad asociada las
estimaciones de las odds ratio (Exp B) para las variables predictoras y la constante para
cada modelo (Tabla 8)
Tabla 8 Variables de la ecuacioacuten Valle de Fiambalaacute 2009-2011
B
ET
Wald
gl
Sig
Exp(B)
Paso 1 Edad de extraccioacuten
0035
0008
19324
1
0000
1035
Proteiacutenas
0736
0312
5560
1
0018
2088
Eosinofilos
0945
0379
6224
1
0013
2572
Constante -1945 0305 40570 1 0000 0143
a Variable (s) introducida (s) en el paso 1 Edad Proteiacutenas totales Eosinoacutefilos
74 - Anaacutelisis estadiacutesticos
El odds asociado a la presencia de la enfermedad es el cociente entre la probabilidad de
que ocurra frente a la probabilidad de que no ocurra Odds = p (1-p) siendo p la
probabilidad del suceso
El odds de la edad asociado a la presencia de fasciolosis fue 1035
El odds de la presencia de valores elevados de proteiacutenas es 2088 e indica que las
chances de que un paciente presente la enfermedad se incrementan maacutes de dos veces si
los valores del examen son altos
El odds de la presencia de valores elevados de eosinofilos es de 2752 indicando que las
chances de que el paciente tenga presente la enfermedad aumentan casi tres veces si
existen valores del examen altos
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75 - Anaacutelisis coproparasitoloacutegicos
Con respecto a la materia fecal se identificoacute la presencia de huevos de F hepatica en las
heces de 4 personas siendo negativas las 92 muestras restantes obtenidas La teacutecnica
de sedimentacioacuten raacutepida de Lumbreras (TSR) fue la uacutenica que permitioacute los diagnoacutesticos
positivos
Las otras teacutecnicas coproparasitoloacutegicas utilizadas demostraron la existencia de huevos y
quistes de otros paraacutesitos presentes tanto en nintildeos como en adultos el maacutes frecuente fue
Blastocystis hominis (2934) y en menor proporcioacuten se observoacute la presencia de
Entamoeba coli (869) Giardia lamblia (760) Hymenolepis nana (760)
Microsporidios (543) Entamoeba nana (543) Iodamoeba buumltschlii (326)
Chilomastix mesnili (324) Enterobius vermicularis (217) Isospora belli (108)
Endolimax nana (108) y aacutecaros Se presentaron 8 casos de triparasitismo
76 - Siacutentomas y signos
Se presentan los siacutentomas principales observados tanto en los adultos (n=141) como en
los casos pediaacutetricos (n=33) Se evidencia que los siacutentomas maacutes frecuentes fueron dolor
abdominal (2553) naacuteuseas y voacutemitos (2411) diarrea (1702) fiebre (992)
hepatomegalia (851) ictericia (425) dispepsia (141) En pacientes pediaacutetricos los
maacutes frecuentes fueron voacutemitos (303) dolor abdominal (2424) y diarrea (2121)
El dolor abdominal (n=44) fue el siacutentoma maacutes frecuente en todos los grupos mostrados
anteriormente presentaacutendose sus caracteriacutesticas principales como localizacioacuten maacutes
frecuente en epigastrio (5454) y en hipocondrio derecho (4545) tipo de dolor (el
coacutelico representa el de mayor frecuencia en epigastrio (3636) e hipocondrio derecho
(2838) y otras como la relacioacuten con la ingesta de alimentos (2727) y el nuacutemero de
casos con diferente irradiacioacuten (maacutes frecuente a espalda en el 1590)
77 - Imaacutegenes
Las ecografiacuteas realizadas en terreno permitieron un diagnostico positivo ademaacutes se
observaron 10 hiacutegados y 32 vesiacuteculas normales 3 litiasis 18 pacientes con
hepatomegalia 1 absceso hepaacutetico una paciente embarazada y otra con litiasis renal
78 - Teacutecnicas invasivas
A raiacutez de los estudios realizados durante esta investigacioacuten fueron hallados al momento
de llevar a cabo intervenciones quiruacutergicas ejemplares vivos de F hepatica en dos
pacientes de sexo femenino La primera presentaba el coleacutedoco muy dilatado y de
paredes sumamente engrosadas sin evidencia de litiasis El segundo caso se refiere a la
coexistencia de litiasis y fasciolosis en el coleacutedoco del que se extrajeron estructuras
adultas del paraacutesito mediante una colecistectomiacutea que permitioacute la confirmacioacuten del
ensayo de ELISA realizado A una tercera paciente del valle de Fiambalaacute le fue extraiacutedo
un ejemplar por CPRE con cesta de Dormia
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79 - Descripcioacuten de casos con fasciolosis
Se seleccionoacute un grupo de ocho pacientes que reuniacutean los siguientes criterios de
inclusioacuten
a) Pacientes con coproparasitoloacutegico positivo a F hepatica
b) Pacientes con serologiacutea positiva para F hepatica
c) Pacientes con diagnoacutestico por imaacutegenes positivo
d) Pacientes que en la colecistectomiacutea presentaron ejemplares de F hepatica
Caso 1
Paciente de 64 antildeos sexo femenino soltera de ocupacioacuten ama de casa natural y
procedente de la zona que se presenta con ictericia fugaz dolor abdominal en
hipocondrio derecho de varias semanas de evolucioacuten diarrea y voacutemitos En el
interrogatorio refiere haber comido berro muchos antildeos atraacutes Los exaacutemenes de
laboratorio demostraron gloacutebulos rojos 4380000mm3 hemoglobina 1220 g
hematocrito 355 gloacutebulos blancos 6300mm3 con neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 62 eosinofilos 567mm3 (9) basoacutefilos 0 linfocitos 24
monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 plaquetas 456000mm3 GOT 35 UIL
(VN 12 a 40) GTP 20 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 572 UIL (VN hasta 280 UIL)
bilirrubina total 120 mg bilirrubina directa 039 mg bilirrubina Indirecta 081mg
proteiacutenas 72 gl colesterol 196 mg albuacutemina 41 gl No se realizoacute examen
coproparasitoloacutegico por falta de colaboracioacuten de la paciente El diagnoacutestico se efectuoacute por
medio del test de ELISA para anticuerpos contra F hepatica en el Departamento de
Parasitologiacutea INEI ANLIS Carlos G Malbraacuten en Buenos Aires La serologiacutea de ELISA
presentaba valores de absorbancia ˃0410 nM (valor de corte) (1) 0661 nM (2) 0457
nM (3) 0559 nM (4) 0529 nM absorbancia promedio 0529 nM con resultado positivo
en 2009 y valores de absorbancia (1) 0436 nM (2) 0495 nM absorbancia promedio
0466 nM con resultado positivo en 2010 Se solicitoacute ecografiacutea abdominal que mostroacute
estructura hepaacutetica conservada viacuteas biliares intrahepaacuteticas no dilatadas se informoacute leve
dilatacioacuten del coleacutedoco sin demostrar alteraciones el resto del estudio paacutencreas y bazo
normales Ante la persistencia de la sintomatologiacutea se indicoacute internacioacuten con diagnoacutestico
presuntivo de litiasis vesicular por el estudio que evidenciaba dilatacioacuten de viacuteas biliares
sin evidencia de caacutelculos La paciente fue intervenida quiruacutergicamente encontraacutendose en
viacuteas biliares especiacutemenes adultos de F hepatica (sin litiasis) Tiempo de internacioacuten 14
diacuteas No se efectuoacute tratamiento por no conseguir TCBZ
Caso 2
Mujer 16 antildeos estudios primarios completos sin ocupacioacuten con sintomatologiacutea desde
maacutes de un antildeo caracterizada por dolor abdominal tipo coacutelico naacuteuseas voacutemitos siacutendrome
febril y peacuterdida de peso Los exaacutemenes de laboratorio demostraron formula leucocitaria
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9100mm3 neutroacutefilos en cayado 2 neutroacutefilos segmentados 60 eosinofilos 364mm3
(4) basoacutefilos 0 linfocitos 30 monocitos 4 GOT 18 UIL GTP 21 UIL fosfatasa
alcalina 267 UIL bilirrubina total 096 mgdL bilirrubina directa 023 mgdL bilirrubina
indirecta 073 mgdL proteiacutenas 76 mgdL colesterol 267 mgdL albuacutemina 51mgdL Las
teacutecnicas coproloacutegicas demostraron la presencia de Blastocystis hominis larvas sin
identificar y estructuras compatibles con esporos y la prueba de TSR demostroacute la
presencia de huevos de F hepatica El estudio ecograacutefico fue normal La serologiacutea de
ELISA presentaba siguientes valores de absorbancia 0448 nM (1) 0391 nM (2) 0492
nM (3) 0413 nM (4) 0418 nM (5) 0573 nM (6) 0456 nM (7) absorbancia promedio
0529 nM con resultado positivo en 2009 y valores de absorbancia 0492nM (1) 0466nM
(2) absorbancia promedio 0484nM con resultado positivo en 2010 No se efectuoacute
tratamiento por no conseguir TCBZ
Caso 3
Nintildea de nueve antildeos de edad siacutendrome doloroso abdominal asociado a emesis Foacutermula
leucocitaria 7100mm3 neutroacutefilos en cayado 1 neutroacutefilos segmentados 64
eosinofilos 284mm3 (4) basoacutefilos 0 linfocitos 26 monocitos 4 ceacutelulas de
irritacioacuten linfaacutetica 1 GOT 39 UIL GTP 47 UIL fosfatasa alcalina 330 UIL bilirrubina
total 125 mgdL bilirrubina directa 015 mgdL bilirrubina indirecta 110 mgdL proteiacutenas
totales 72 mgdL colesterol 181 mgdL albuacutemina 47 mgdL Con Telemann se
evidencian huevos de Blastocystis hominis y con la prueba de TSR escasos huevos de
F hepatica El ensayo de Elisa resultoacute en 2010 0596 nM (1) 0441 nM (2) 0359 nM (3)
0402 nM (4) 0420 nM (5) con valores promedios positivos de 0444 nM No se efectuoacute
tratamiento por no conseguirse TCBZ
Figura 8 Imagen microscoacutepica de un huevo de Fasciola hepatica obtenido con la teacutecnica
de Lumbreras en la materia fecal de una paciente de 3 antildeos del valle de Fiambalaacute
Catamarca
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Caso 4
Paciente mujer de 22 antildeos de edad natural y procedente del aacuterea serrana quien acude a
emergencia del Hospital San Juan Bautista San Fernando del Valle de Catamarca
Catamarca con un tiempo de enfermedad de 25 diacuteas caracterizado por cefalea dolor
abdominal agudo voacutemitos y urticaria Refiere que antes de su ingreso inicia un cuadro de
dolor abdominal tipo coacutelico de intensidad moderada desencadenado por la ingesta de
grasas el cual se acompantildea de hiporexia y voacutemitos de contenido alimentario en varias
oportunidades y bilioso en dos oportunidades Acude a la primer consulta en una cliacutenica
privada de la capital provincial presentando coacutelicos biliares recurrentes y fiebre
intermitente Durante el examen fiacutesico se detectoacute hepatomegalia Su vesiacutecula biliar
estaba ausente por colecistectomiacutea practicada a los 15 antildeos aunque presentaba
episodios de coacutelicos biliares por litiasis residual En los frotis y hepatogramas se
observaron 24000 leucocitosmm3 con neutroacutefilos segmentados 71 eosinofilos
2640mm3 (11) linfocitos 13 monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 1 GTP 100
UIL (IR hasta 40 UIL) TGO 64 UIL (IR hasta 42 UIL) fosfatasa alcalina 265 UIL (IR
100-400 UIL) bilirrubina total 092 mgdL bilirrubina directa 017 mgdL bilirrubina
indirecta 075 mgdL proteiacutenas 7 mgdL colesterol 166 mgdL albuacutemina 44 mgdL Las
muestras de materia fecal para realizar los exaacutemenes parasitoloacutegicos resultaron
Telemann positivo a E nana Willis Kato y la prueba de TSR negativas para F hepatica
todas realizadas en 3 oportunidades El ensayo de ELISA para anticuerpos efectuado en
el Departamento de Parasitologiacutea INEI ANLIS Carlos G Malbraacuten en Buenos Aires dio
resultado negativo en dos oportunidades
Por persistencia de la sintomatologiacutea se presentoacute en el Hospital San Juan Bautista Al
examen fiacutesico se encontroacute una paciente en mal estado general en regular estado de
nutricioacuten deshidratada con ictericia moderada de piel El examen del abdomen mostroacute
distensioacuten leve y palpacioacuten hepaacutetica dolorosa e irradiacioacuten a la zona lumbar Resto del
examen fiacutesico sin alteraciones
Los exaacutemenes hematoloacutegicos del ingreso mostraron hemoglobina 10 mgdL hematocrito
31 leucocitos 11000mm3 con desviacioacuten izquierda (11 de abastonados) y eosinofilos
770mm3 (7) Presentoacute elevacioacuten de bilirrubina total en 427 mgdL a predominio directo
(278) fosfatasa alcalina 595 UIL (VN 65-306) y elevacioacuten moderada de enzimas
hepaacuteticas TGO 267 UIL y TGP 482 UIL El tiempo de protrombina estuvo prolongado al
doble del control 266rdquo136rdquo (valor referidovalor control) (INR=226) al igual que el tiempo
de tromboplastina 336rdquo276rdquo Los resultados de glucosa creatinina electrolitos seacutericos
proteiacutenas totales albuacutemina globulinas y amilasa fueron normales
Se realizoacute colangiopancreatografiacutea retroacutegrada endoscoacutepica (CPRE) observando viacuteas
biliares extrahepaacuteticas dilatadas con imaacutegenes filiformes en coleacutedoco distal Se procedioacute
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a efectuar una papilotomiacutea retroacutegrada endoscoacutepica con barrido instrumental en canastilla
de Dormia extrayendo 3 paraacutesitos adultos vivos de F hepatica No se efectuoacute
tratamiento por no conseguir TCBZ
Figura 9 Ejemplar de F hepatica extraiacutedo del coleacutedoco utilizando CRTE en una
paciente de 22 antildeos en el Hospital San Juan Bautista Catamarca 2012
Caso 5
Paciente pediaacutetrico de ocho antildeos de edad sexo masculino Alumno de escuela primaria
Sin presencia de siacutentomas Foacutermula leucocitaria 4900 mm3 neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 64 eosinofilos 196mm3 (4) basoacutefilos 0 linfocitos 26
monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 1 GTP 47 UIL (IR hasta 40 UIL) TGO 39
UIL (IR hasta 42 UIL) fosfatasa alcalina 330 UIL (IR 100-400 UIL) bilirrubina total 125
mgdL bilirrubina directa 015 mgdL bilirrubina indirecta 110 mgdL proteiacutenas 72
mgdL colesterol 181 mgdL albuacutemina 47 mgdL La serologiacutea de ELISA presentaba
valores de absorbancia ˃410 nM (1) 0495 nM (2) 0447 nM (3) 0551 nM (4) 0627 nM
(5) 0383 nM (6) 0421 nM Absorbancia promedio 0487 nM con resultado positivo en
2010 La materia fecal examinada con la prueba de TSR confirmoacute la presencia de 14
huevos de F hepatica Sin tratamiento
Caso 6
Paciente mujer de 58 antildeos de edad casada de procedencia rural de profesioacuten
enfermera Dispepsia desde la nintildeez Consumiacutea berro cosechado a orillas del rio del lugar
y tambieacuten bebiacutea del agua del rio Prurito aleacutergico a repeticioacuten (tratado por dermatoacutelogo
quien antildeos atraacutes habiacutea diagnosticado Parasitosis Intestinal)
Por sus molestias de dolor abdominal en hipocondrio derecho tipo coacutelico acompantildeado de
naacuteuseas se automedicaba con antiespasmoacutedicos Meses antes de su consulta se
despertoacute de madrugada presentando voacutemitos de contenido alimentario y bilioso
concomitantemente tuvo escalofriacuteos y fiebre que cedieron momentaacuteneamente con
paracetamol Horas maacutes tarde persisten los siacutentomas y se adicionan ictericia hiporexia
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coluria prurito y paacutepulas que se presentaron primero en el cuero cabelludo y luego se
generalizaron a tronco y extremidades Fue atendida por 3 facultativos los cuales
indicaron varios exaacutemenes auxiliares una ecografiacutea que reportoacute la presencia de una
colecistopatiacutea no calculosa y un examen de orina que mostroacute leucocituria y geacutermenes
gramnegativos abundantes por lo que le prescribieron norfloxacina ademaacutes de ranitidina
y clorfeniramina Con este tratamiento se evidencioacute disminucioacuten de la intensidad del
prurito y desaparicioacuten de las paacutepulas la fiebre cedioacute aproximadamente a los 7 diacuteas la
condralgia disminuyoacute de intensidad pero persistiacutea al igual que el resto de los siacutentomas
por cuya razoacuten y relaciones familiares acudioacute a la emergencia del Hospital Regional de La
Rioja ldquoEnrique Vera Barrosrdquo presentaacutendose a consulta en octubre de 2012 con
sintomatologiacutea digestiva similar a la que padeciacutea previamente (epigastralgiacutea distensioacuten
abdominal posprandial coluria marcada y acolia)
Los hallazgos maacutes importantes del examen fiacutesico fueron fiebre precedida de escalofriacuteos
ictericia dolor a la palpacioacuten del hipocondrio derecho y puntildeopercusioacuten lumbar positiva
bilateral
Se realizaron exaacutemenes de laboratorio cuyos resultados fueron hemograma 11800mm3
gloacutebulos blancos 6300mm3 neutroacutefilos en cayado 2 neutroacutefilos segmentados 55
eosinofilos 708mm3 (6) basoacutefilos 0 linfocitos 34 monocitos 3 ceacutelulas de
irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT 17 UIL (VN 12 a 40) GTP 24 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa
alcalina 386 UIL (VN hasta 280 UIL) bilirrubina total 125 mgdL bilirrubina directa 099
mgdL bilirrubina indirecta 026 mgdL proteiacutenas totales 61 mgdL colesterol 226 mgdL
albuacutemina 33 mgdL
Una ecografiacutea de las viacuteas biliares sugirioacute la existencia de un caacutelculo enclavado en el
tercio distal del coleacutedoco Se plantearon las siguientes posibilidades diagnoacutesticas
infeccioacuten del tracto urinario y litiasis coledociana complicada con colangitis Recibioacute
gentamicina 80 mg Ev tid clindamicina 600 mg EV tid
La serologiacutea de ELISA presentoacute valores de absorbancia (1) 0596 nM (2) 0586 nM (3)
0404 nM (4) 0425 nM absorbancia promedio 0503 nM con resultado positivo en 2010 y
valores de absorbancia (1) 0338 nM (2) 0541 nM (3) 0440 nM absorbancia promedio
0441 nM en 2011 El estudio parasitoloacutegico seriado con la prueba de TSR no reportoacute la
presencia de huevos de F hepatica
Despueacutes de hospitalizada fue intervenida quiruacutergicamente con el diagnoacutestico
preoperatorio de coledocolitiasis Se realizoacute una colecistectomiacutea mixta exploracioacuten de
viacuteas biliares con litiasis residual y se dejoacute drenaje de Kehr Los hallazgos histopatoloacutegicos
macroscoacutepicos de la vesiacutecula biliar mostraron una pared edematosa congestiva
conservando espesor y elasticidad mucosa presentando aspecto atroacutefico con superficie
reticulada color verde paacutelida revestida por exudado fibrinoide espeso Se constata la
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presencia de una estructura lanceolada plana elaacutestica de superficie lisa que mide 13 x
1 cm con pequentildea ventosa en uno de sus polos Microscoacutepicamente se observa la pared
de vesiacutecula biliar con grados variables de reaccioacuten inflamatoria croacutenica representados por
focos de supuracioacuten y acuacutemulos de plasmocitos linfocitos y eosinofilos en la mucosa
discreta proliferacioacuten fibrinosa acompantildeada por infiltracioacuten de ceacutelulas polimorfonucleares
Diagnoacutestico histopatoloacutegico Fascioliasis hepaacutetica Colecistitis croacutenica supurada
(habilitada por paraacutesitos en su luz) Durante los 45 diacuteas posteriores al alta fue medicada
con Praziquantel
Caso 7
Mujer de 54 antildeos de edad que a la consulta refiere haber tenido episodios febriles de
375 a 38 degC anorexia y dolor en hipocondrio derecho de pocos diacuteas de evolucioacuten
Voacutemitos y hepatalgia Los exaacutemenes de laboratorio maacutes significativos mostraron gloacutebulos
rojos 4410000mm3 hemoglobina 1230 g hematocrito 43 Foacutermula leucocitaria
6700 mm3 neutroacutefilos en cayado 1 neutroacutefilos segmentados 52 eosinofilos 469mm3
(7) basoacutefilos 0 linfocitos 37 monocitos 3 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT
20 UIL (VN 12 a 40) GTP 17 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 252 UIL (VN hasta 280
UL) bilirrubina total 141mgdL bilirrubina directa 025mgdL bilirrubina indirecta 116
mgdL proteiacutenas 81 mgdL colesterol 262 mgdL albuacutemina 47 mgdL
Reiterados exaacutemenes parasitoloacutegicos de materia fecal en fresco y seriados fueron
negativos La serologiacutea para F hepatica con el ensayo de ELISA resultoacute positiva en el
antildeo 2010 con los siguientes valores 0539 nM (1) 0377 nM (2) 0427 nM (3) 0334 nM
(4) 0432 nM (5) 0594 nM (6) y un resultado promedio 0451 nM
Fue seleccionada para practicarle una ecografiacutea abdominal que mostroacute una estructura
hepaacutetica conservada viacuteas biliares intrahepaacuteticas no dilatadas vesiacutecula ausente por
colecistectomiacutea y leve dilatacioacuten del coleacutedoco sin demostrar alteraciones el resto del
estudio paacutencreas y bazo normales Se observoacute pequentildea imagen de aspecto filiforme de
aproximadamente 1 cm de largo y se diagnosticoacute estructura compatible con F hepatica
Figura 10 Imagen ecograacutefica hepaacutetica con hepatomegalia Se observa aumento de la
ecogenicidad y una estructura de aspecto filiforme
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Caso 8
Sexo femenino 32 antildeos de edad ama de casa En el interrogatorio comenta haber
comido berro de los riachos en la zona casi todos los antildeos Al ser un caso con tres
estudios seroloacutegicos previos positivos y materia fecal negativa a la presencia de huevos
de F hepatica se le practica una ecografiacutea abdominal con resultado negativo
El coproloacutegico con la teacutecnica de Telemann demostroacute la presencia de Blastocystis hominis
y luego de varias repeticiones la teacutecnica de Lumbreras permitioacute el hallazgo de huevos de
F hepatica en el antildeo 2011 Los frotis y hemogramas presentaron los siguientes
resultados hematocrito 44 foacutermula leucocitaria 7700mm3 neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 47 eosinofilos 385mm3 (5) basoacutefilos 0 linfocitos 40
monocitos 7 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT 23 UIL (VN 12 a 40) GTP 11 UIL
(VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 290 UIL (VN hasta 280 UIL) bilirrubina total 106 mgdL
bilirrubina directa 038 mgdL bilirrubina indirecta 01 mgdL proteiacutenas totales 71 mgdL
colesterol 163 mgdL albuacutemina 42 mgdL
El empleo de procatepsina L1 durante tres antildeos consecutivos arrojoacute para la serologiacutea de
ELISA los siguientes resultados valores de absorbancia (1) 0476 nM (2) 0366 nM (3)
0551 nM (4) 0431 nM absorbancia promedio 0456 nM con resultado positivo en 2009
Valores de absorbancia (1) 0517 nM (2) 0580 nM (3) 0405 nM (4) 0457 nM (5) 0462
nM absorbancia promedio 0484 nM con resultado positivo en 2010 y (1) 0623 nM (2)
0570 nM absorbancia promedio 0597 nM con resultado positivo en 2011
8 RESULTADOS EN ANIMALES
81 - Estudios coproloacutegicos
811 - Prevalencia por exaacutemenes coproloacutegicos
La cantidad de muestras de materia fecal de distintas especies animales analizadas
permitioacute conocer que la prevalencia promedio de fasciolosis animal es 2674
(2881077) (Tabla 9)
Tabla 9 Prevalencia de F hepatica en diferentes especies de animales domeacutesticos Valle
de Fiambalaacute Catamarca Antildeos 2009-2011
Especie Positivos Total de animales Prevalencia Ovinos 114 322 3958 Asnos 56 192 1954 Llamas 53 210 1840 Caprinos 38 197 1319 Bovinos 18 72 625 Equinos 6 46 208 Porcinos 3 38 104
TOTAL 288 1077 10000 (χ2 = 21643 gl = 6 significancialt= 0000)
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Las diferencias estadiacutesticamente significativas se presentan entre ovinos-llamas
(p=0016741) ovinos-caprinos (p=0000099) ovinos-equinos (p=0002185) ovinos-
porcinos (p=0000782) asnos-equinos (p=0038298) y asnos-caprinos (p=0024745)
812 - Hallazgos de huevos de otros paraacutesitos gastrointestinales
Los resultados obtenidos indican ademaacutes la presencia en el ganado ovino del valle de
Fiambalaacute de coccidios y nematodes gastrointestinales Eimeria sp Haemonchus
contortus Trichostrongylus sp Nematodirus sp y Trichuris ovis
82 - Recuperacioacuten de ejemplares de F hepatica
De los hiacutegados de animales inspeccionados durante el proceso de faena (n=11) se
recuperaron en total 398 trematodos adultos Todos los paraacutesitos colectados se
encontraban sobre los 100 diacuteas post-infeccioacuten El nuacutemero de paraacutesitos recobrados en las
diferentes especies fueron 206 en ovinos 128 en cameacutelidos y 64 en bovinos
Al revisar los hiacutegados que presentaban fasciolosis croacutenica se observoacute una reaccioacuten
orgaacutenica con lesiones visibles de fibrosis hepaacutetica como consecuencia de la fase
migratoria y colangitis hiperplaacutesica por la presencia de los vermes adultos en los
conductos biliares (Veacutease anexo Figura 23 pp188) Tambieacuten se encontraron
agrandados los noacutedulos linfaacuteticos engrosamiento de los conductos y la superficie
presentaba consistencia dura al tacto en gran parte del oacutergano y sus bordes En el hiacutegado
del ejemplar bovino se observoacute una reaccioacuten orgaacutenica que produjo una intensa reaccioacuten
tisular mucho maacutes manifiesta que en los ovinos llamas y caprinos
La erosioacuten de la mucosa ocasionada por la actividad de los ejemplares adultos de F
hepatica en los conductos biliares provocoacute una reaccioacuten inflamatoria organizada en una
fibrosis peribiliar (Veacutease anexo Figura 24 pp188) El movimiento de los vermes extendioacute
la fibrosis a casi todo el aacuterbol biliar La colangitis hiperplaacutesica se presentoacute como resultado
del traumatismo originado por los trematodos adultos en la mucosa de los conductos
biliares Ante la extensa erosioacuten y necrosis de la mucosa biliar se desarrolloacute una intensa
reaccioacuten inflamatoria que interesoacute a la laacutemina propia adyacente La compresioacuten
extriacutenseca del canal biliar principal por las venas colaterales dilatadas junto con la
fibrosis pericoledocal causada por el proceso inflamatorio provocoacute trombosis portal
conduciendo a la dilatacioacuten de los conductos biliares intrahepaacuteticos hecho que permitioacute
observar en 3 ocasiones la formacioacuten de piedras biliares secundarias y en 2 la presencia
de liacutequido en el peritoneo de las ovejas
83 - Morfologiacutea microscoacutepica de F hepatica
Las mediciones realizadas dieron los siguiente datos promedios longitud del cuerpo
2438 plusmn 223 (mm) ancho del cuerpo 1044 plusmn 129 (mm) razoacuten LCAC 237 plusmn 034
longitud del cono 261 plusmn 030 ancho del cono 343 plusmn 046 (mm) aacuterea de la ventosa oral
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041 plusmn 007 (mm) aacuterea de la ventosa ventral 110 plusmn 036 (mm) aacuterea de distancia VO-VV
214 plusmn 022 (mm) Todas presentaban un cuerpo con forma de hoja aplanado de dorsal a
ventral con el cono cefaacutelico (Figura 11) muy visible situado en la parte anterior del cuerpo
del paraacutesito Datos comparativos se presentan en la Tabla 12 (Veacutease anexo pp 173)
A B
Figura 11 A y B Imaacutegenes microscoacutepicas de la estructura morfoloacutegica del cono cefaacutelico
de Fasciola hepatica obtenidas de un animal bovino faenado en el Valle de Fiambalaacute
Nota A Cono cefaacutelico VO ventosa oral I ciego intestinal F faringe VV cara ventral Detalle del
cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) aumento 4x B ventosa oral (297x)
Ademaacutes de estas caracteriacutesticas la ventosa oral redondeada se observoacute en el veacutertice del
cono seguido por la faringe muscular el estoacutemago y el esoacutefago bifurcado en dos ciegos
intestinales entre los que surgen las ramas secundarias el ciego intestinal se presenta
extendido hasta el extremo anterior del cuerpo (Figura 12 A) La ventosa ventral se
encuentra en la regioacuten media del cuerpo cerca de los aparatos reproductores y su
tamantildeo era maacutes grande que la ventosa oral En la Figura 12 B se observan niacutetidamente
las espinas ubicadas en el cono cefaacutelico
A B
Figura 12 A y 12 B Estructuras morfoloacutegicas de Fasciola hepatica halladas en un animal
bovino del Valle de Fiambalaacute Argentina observadas al microscopio
Nota (A) Cono cefaacutelico VO ventosa oral F faringe C cirro VV cara ventral I ciego intestinal
se extiende en la parte anterior y terminal del cuerpo Aumento 4x (B) Detalle del cono cefaacutelico
mostrando las espinas magnitud 120x
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En las muestras analizadas el sistema reproductor femenino estaba formado por un
ovario ramificado oviducto y el uacutetero lleno de huevos (Figuras 13 A B C) Las glaacutendulas
vitelinas muy ramificadas se ubicaban en posicioacuten lateral del cuerpo y extendidas desde
la regioacuten de la ventosa ventral al extremo posterior del cuerpo La glaacutendula de Mehlis que
se encuentra cerca del ovario en la parte media del cuerpo fue faacutecilmente observable El
sistema reproductor masculino presenta los testiacuteculos ramificados situados uno debajo
del otro sin llegar a la regioacuten posterior o a los lados del cuerpo teniendo las glaacutendulas
vitelinas como liacutemites Se observoacute cerca de la ventosa ventral la bolsa del cirro bien
formada (Figura 14 B)
A B C
Figura 13 A B y C Uacutetero con huevos de un espeacutecimen de Fasciola hepatica obtenido de
la necropsia de un animal bovino en el Valle de Fiambalaacute Aumento 10x
Nota (A) Ovario ramificado y oviducto (B) uacutetero lleno de huevos (C) Uacutetero lleno de huevos
(flechas)
Todos los ejemplares presentaron el tegumento cubierto de espinas (Figuras 14 A)
dirigidas hacia la parte posterior del cuerpo y se pueden comparar con las de otras
regioacutenes observadas (Veacutease anexo Figuras 25 26 27 y 28 pp189-190)
A B
Figura 14 Detalle del tegumento de una Fasciola hepatica mostrando las espinas
Nota (A) Las flechas indican las espinas aumento 10x (B) bolsa de cirro aumento 20x
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831 - Microscopiacutea de contraste por interferencia diferencial
Esta teacutecnica permitioacute visualizar las espinas en el tegumento de los todos especiacutemenes
recolectados (Figuras 15 A B y C) Los ejemplares del Valle de Fiambalaacute presentaban el
cuerpo cubierto con espinas pero en menos nuacutemero que los otros ejemplares
observados
A B C
Figura 15 Microfotografiacuteas tomadas de estructuras morfoloacutegicas de una F hepatica de
ganado bovino del valle de Fiambalaacute observadas con microscopio de contraste por
interferencia diferencial
Nota A y B Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) aumentos 10x y 20x
C Espinas con mayor resolucioacuten Noacutetese el aspecto tridimensional
84 - Variabilidad geneacutetica intraespeciacutefica
El anaacutelisis de 16 secuencias del gen CO1 de 309 bases de longitud cada una totalizando
4944 bases mostroacute una topografiacutea de agrupamiento que indica que la secuencia
proveniente de la muestra de paraacutesito adulto de la zona denominada FhCO1-CAT-adult
corresponde al grupo FhAJ6280346 FhJF82467124 FhAJ628035 FhGQ231551
Fh628039 (Veacutease anexo Figura 29 pp 191) Este resultado se encuentra en
concordancia con el hecho de que la identidad de las secuencias proveniente del adulto
de F hepatica posee una identidad alta con dichos haplotipos (994 a 990 de identidad
nucleotiacutedica)
85 - Resistencia al triclabendazol
Se observa que las muestras expusieron patrones diferentes de amplificacioacuten al azar de
ADN polimoacuterfico por lo que fue posible evaluar la presencia de variaciones geneacuteticas
entre las cepas de una misma especie y distinguir entre cepas de trematodos TCBZ-
susceptibles calle 2 (cepa Cullompton) y TCBZ-resistentes calle 3 (cepa Sligo) (Figura
16) donde no se detectaron estos cambios geneacuteticos en la moleacutecula de tubulina
revelando una significativa divergencia geneacutetica entre especies demostrado por las
diferencias entre las bandas generadas por las especies de la poblacioacuten de Cajamarca
Peruacute Chubut Argentina y las procedentes de la Puerta de Tatoacuten en el valle de Fiambalaacute
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1 2 3 4 5 6 7 8
Figura 16 Patrones de amplificacioacuten por RAPD PCR de Fasciola hepatica aisladas de
hiacutegados obtenidos para la deteccioacuten de cepas resistentes a Triclabendazol (TCBZ)
comparados con las de otras zonas
Nota Obseacutervese que el patroacuten de bandeo en la calle 2 (cepa Cullompton sensible) y en la calle 3
(cepa Sligo resistente) son diferentes Desde la calle 4 en adelante son ejemplares procedentes
de Cajamarca Peruacute (4) Quebrada Grande (5) Casa Grande (7) y provincia de Chubut (8) La
mayoriacutea corre igual a las sensibles (2) pero la muestra de La Puerta (6) corre como la cepa
resistente (3)
9 RESULTADOS EN EL HOSPEDADOR INTERMEDIARIO DE F hepatica
91 Identificacioacuten de los caracoles
Las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla de los ejemplares recolectados en las
diferentes oportunidades coinciden con las descripciones de las familias Lymnaeidae
(n=2354 8686) Physidae (n=240 885) Chilinidae (n=81 298) y Planorbidae
(n=35 129) Los resultados moleculares revelaron la presencia de dos especies de
limneidos L neotropica y L viator De las muestras analizadas 26 (6842) fueron
identificadas molecularmente como L neotropica y 12 (3158) como L viator Se
comproboacute que ambas especies comparten las mismas vegas siendo el primer registro
para el NOA de L neotropica
92 Medicioacuten de moluscos
La coexistencia de las dos especies L neotropica y L viator en las vegas del valle de
Fiambalaacute proporcionoacute la posibilidad de un estudio de morfometriacutea comparativo para
evaluar si estas especies de vectores se pueden diferenciar anatoacutemicamente (Tabla 10)
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Tabla 10 Comparacioacuten de las mediciones de conchillas de limneidos entre las
poblaciones naturales de L viator y L neotropica colectadas en el valle de Fiambalaacute
2009-2011
Especie de limneido L viator L neotropica
Lugar y nuacutemero de especiacutemenes estudiados
Valle de Fiambalaacute (n = 12) Valle de Fiambalaacute (n = 26)
Valores extremos
miacutenimo y
Media (plusmn
desviacuteo estaacutendar SD)
Valores extremos
miacutenimo y
Media (plusmn
desviacuteo estaacutendar SD)
Caracteriacutestica de la conchilla maacuteximo maacuteximo
Largo (SL) 562-1085 921 (plusmn 152) 552-918 749 (plusmn 089) Ancho maacuteximo (SW) 311-579 488 (plusmn 084) 313-501 410 (plusmn 047) Largo de la apertura (AL) 297-605 473 (plusmn 083) 314-664 385 (plusmn 040) Ancho de la apertura (AW) 190-331 273(plusmn 042) 188-274 228 (plusmn 023) Longitud de la uacuteltima espira (LSL) 452-831 699 (plusmn 106) 442-893 576 (plusmn 060) Aacutengulo de la espira (SSA) 4130deg-5491deg 4704deg (plusmn 435) 3302deg-5468deg 4509deg (plusmn 592) SLSW ratio 167-202 189 (plusmn 010) 169-198 183 (plusmn 008) SLAL ratio 178-211 195 (plusmn 010) 175-210 194 (plusmn 010) SLLSL ratio 124-137 131 (plusmn 004) 123-138 130 (plusmn 004)
Nota Se incluye el rango con los extremos miacutenimo y maacuteximo y la media (plusmn desviacioacuten estaacutendar
entre pareacutentesis) Las mediciones se presentan en miliacutemetros (excepto el aacutengulo del espiral que es
en grados) n = Nuacutemero de especiacutemenes medidos
La conchilla de ambas especies es de color marroacuten a marroacuten claro coacutenica alargada de
paredes delgadas por lo general con 4 verticilos regulares convexos y hasta 55 verticilos
en los especiacutemenes maacutes largos La aguja es maacutes o menos acentuada o corta con un
aacutepice maacutes obtuso Las liacuteneas de crecimiento y el ombligo son poco pronunciadas La
escultura espiral es muy deacutebil y no se ve faacutecilmente La abertura es oval y casi toda
circular con peristoma delgado La forma de la conchilla de L viator y L neotropica es
muy similar tanto como el nuacutemero de espiras aunque los ejemplares de L viator a veces
pueden aparecer algo maacutes delgados (Figura 17)
La comparacioacuten de las mediciones de la conchilla y ratios (Tabla 10) muestra que la
relacioacuten del ancho y la maacutexima longitud de la conchilla se superpone en las dos especies
y por lo tanto la variabilidad de este paraacutemetro no se pudo utilizar para la diferenciacioacuten
de estas especies Un problema similar aparece en todos los demaacutes paraacutemetros de la
conchilla con excepcioacuten de la longitud media que no soacutelo alcanza un mayor largo
maacuteximo evidente sino tambieacuten una longitud maacutes grande de la conchilla en L viator en
comparacioacuten con L neotropica (1085 y 921 vs 918 y 749 mm)
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C D
Figura 17 Conchillas de L viator A) vista ventral B) vista dorsal escala 5 mm y
conchillas de L neotropica C) vista ventral D) vista dorsal escala 4 mm Especiacutemenes
colectados en vegas del valle de Fiambalaacute 2011
93 - Mantenimiento en el laboratorio
Se observoacute que los moluscos respondieron favorablemente a la alimentacioacuten con lechuga
y al cambio cada tres diacuteas del agua donde se encontraban lograacutendose el mantenimiento
de 180 caracoles del geacutenero Lymnaea criados en el laboratorio de los que se obtuvo el
desarrollo de 60 ejemplares que realizaron la puesta de masas de ovisaco dando lugar a
la eclosioacuten de 250 limneidos vivos
931 - Identificacioacuten de gasteroacutepodos infectados
Mediante el aplastamiento de los cuerpos de moluscos entre dos portaobjetos y la
posterior observacioacuten microscoacutepica de las formas intermedias de F hepatica se logroacute la
identificacioacuten de moluscos infectados 286 (13453) en su haacutebitat natural
9311 - Infeccioacuten del hospedador intermediario
La infeccioacuten plumiracidial de los caracoles en el laboratorio permitioacute observar la presencia
de los distintos estadios larvarios De los 70 limneidos infectados se sacrificaron 14
ejemplares obteniendo formas de esporocistos en 2 moluscos redias en otros 2 y
cercariacuteas en 2 ejemplares maacutes obteniendo una eclosioacuten de larvas del 4285 (614) Se
logroacute la visualizacioacuten de la emisioacuten de metacercarias de los moluscos mantenidos vivos
en las hojas de la vegetacioacuten con la que se alimentaban y en las paredes de los
recipientes donde se los dispuso
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932 - Identificacioacuten molecular de la infeccioacuten
9321 - PCR de Infeccioacuten
De las muestras obtenidas en la vega de Tatoacuten (n=120) y analizadas para verificar su
infeccioacuten con F hepatica en el Instituto Malbraacuten se diagnosticaron 3 moluscos
infectados (25) mostrando amplificacioacuten en el gel de electroforesis (Figura 18)
Figura 18 Liacutemite de deteccioacuten del ensayo de PCR por electroforesis en gel de agarosa
de los productos de amplificacioacuten utilizado como plantilla de ADN para la deteccioacuten de F
hepatica en muestras de limneidos del Valle de Fiambalaacute
Nota Calle M marcador de tamantildeo molecular (100 escalera pb) calles 1 25 ng de ADN de F
hepatica calle 2 mezcla de reaccioacuten calles 3-12 plantilla de ADN a partir de 10 especiacutemenes de
muestra de 1 evidenciando en la calle 3 amplificacioacuten calles 13-19 ejemplares de muestra 2 de la
mezcla de reaccioacuten
94 - Caracterizacioacuten molecular de limneidos
Los ADNr nucleares ITS-2 y ITS-1 el ADNmt 16S y los datos de la secuencia de
nucleoacutetidos cox1 reportados en esta tesis estaacuten disponibles en las bases de datos
GenBanktrade EMBL y DDBJ bajo los nuacutemeros de acceso indicados en la Tabla 13 (Veacutease
anexo pp 174)
941 - L neotropica
9411 - Marcadores moleculares
- ADNr ITS-2 Todas las muestras del valle de Fiambalaacute presentan la misma secuencia
con una longitud de 417 pb y 5683 de contenido de GC Cuando se compara con las
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ITS-2 de L neotropica haplotipo Lneo-H1 (AM412225) de la localidad tipo en el Peruacute no
se pudo encontrar diferencia en un nucleoacutetido El haplotipo Lneo-H2 de Venezuela
(JF514089) difiere de la secuencia de Argentina en la falta de una repeticioacuten de
microsateacutelites (AT) en las posiciones 402 a 403 y en una mutacioacuten en la posicioacuten 350 de
la secuencia de alineacioacuten de ambos haplotipos ITS-2 Otras cepas argentinas de L
neotropica disponibles en las bases de datos (KJ425597 = 415 pb KJ425598 = 415 pb
KJ425596 = 414 pb) soacutelo muestran algunas diferencias (deleciones) en el extremo 3 de
los ITS-2 aunque estas secuencias parecen incompletas en comparacioacuten con los
haplotipos completos descritos anteriormente para esta especie y por lo tanto deberaacute ser
revisada
- ADNr ITS-1 Un nuevo haplotipo para L neotropica se ha detectado en las vegas del
valle de Fiambalaacute Todas las muestras estudiadas presentaron los mismos ITS-1 con
secuencia de 535 pb y un contenido de GC 5645 Este nuevo haplotipo estaacute descrito
aquiacute como Lneo-HB Diferencias con el haplotipo Lneo-HA estaacuten a soacutelo dos inserciones
en la regioacuten poli-A en el extremo 3 (posiciones 512-529) siendo esta regioacuten de 16 o 18
consecutivo A en Lneo-HA y Lneo-HB respectivamente Los resultados BLASTN
muestran homologiacuteas del 98 con otras secuencias de L neotropica obtenidas en
Argentina (KJ425594 = 528 pb KJ425590 = 528 pb KJ425591 = 527 pb KJ425595 =
525 pb KJ425593 = 523 pb) y curiosamente con una de L viator (JF960165 = 533 pb)
las diferencias (indeles) aparecen de nuevo en el extremo 3 del espaciador ITS-1 Estas
otras secuencias parecen ser incompletas en comparacioacuten con los haplotipos completos
descritos anteriormente para esta especie y por lo tanto deberaacute ser revisada
9412 - Marcadores mitocondriales
- ADNmt 16S Soacutelo se detectoacute un haplotipo en las muestras estudiadas de las
poblaciones identificadas como L neotropica Esta secuencia parcial fue 435 pb de
longitud presenta un sesgo AT contenido de 6965 y resultoacute ser ideacutentica a la ya
encontrada en esta especie de limneido Lneo-16SA y que tambieacuten se informoacute en el
aacuterea endeacutemica de fasciolosis humana de Cajamarca Peruacute (HE610433) Con una
secuencia de 439 pb de largo de alineacioacuten de este haplotipo (Lneo-16SA) con otra L
neotropica aislada (de 429 a 431 pb) disponibles en GenBank aparecen 12 posiciones
variables la mayoriacutea de ellas se generan por el NtS1 aislado de Argentina (JN872471)
cuyas mutaciones (la mayoriacutea de ellos siempre A) deberaacute ser revisada (Veacutease anexo
Tabla 14 pp 175)
- ADNmt cox1 Todos los especiacutemenes colectados identificados como L neotropica
mostraron ideacutentica secuencia del fragmento de 672 pb cox1 y sesgada AT contenido de
6979 Esta secuencia se comparoacute con los 4 haplotipos cox1 descritos hasta hoy para
L neotropica y ha demostrado ser diferente en soacutelo una mutacioacuten en la posicioacuten 9 de la
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alineacioacuten con el haplotipo descrito previamente Lneo-cox1a de la localidad tipo de esta
especie (AM494008) Del mismo modo una mutacioacuten en la posicioacuten 375 es la uacutenica
diferencia con el haplotipo Lneo-cox1b informado de Mendoza Argentina Las
diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos con todos los haplotipos L neotropica (672 pb
de longitud) y otros aislamientos (655 pb de largo) que muestran secuencias muy
similares de acuerdo a los resultados de BLASTN se detallan en la Tabla 15 (Veacutease
anexo pp 176)
942 - L viator
9421 - Marcadores ribosomales
- ADNr ITS-2 Todos los ejemplares presentan los mismos ITS-2 de secuencia de 436 pb
y 5367 de contenido de GC Cuando se compara con los haplotipos ITS-2 de L viator
disponibles en GenBank la maacutes parecida a este haplotipo es Lvia-H2 (JN051366 de
Chile) siendo solamente maacutes corta en longitud debido a sitios polimoacuterficos
correspondientes a 8 indeles relacionados a un nuacutemero diferente de repeticiones en los
microsateacutelites GCTT y GCTC Estos microsateacutelites son (GCTT)2 (GCTC)1 en el valle de
Fiambalaacute mientras que (GCTT)4 y (GCTC)1 en Casa Blanca Chile El coacutedigo H3 se ha
atribuido a este nuevo haplotipo (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) Otras secuencias con
el haplotipo Lvia-H1 y otros aislamientos de L viator se muestran incompletos en el
extremo 3 del espaciador ITS-2 y se presentan en la Tabla 16 (Veacutease anexo pp 177)
- ADNr ITS-1 Todos los limneidos mostraron ideacutentica secuencia de ITS-1 de 570 pb y
5403 de contenido de GC Esta secuencia fue muy similar al haplotipo de L viator de
Chile (Lvia-HB JN051368) que difiere en soacutelo 5 sitios polimoacuterficos correspondiente a
una mutacioacuten y una repeticioacuten tetranucleotide (ATTG) El coacutedigo de HC se ha atribuido a
este nuevo haplotipo Diferencias detalladas con haplotipos de L viator HA de Argentina
y de Chile HB asiacute como con otros secuencias de L viator se muestran incompletas en el
extremo 5 del ITS-1 Se enumeran en la Tabla 17 (Veacutease anexo pp 178)
9422 - Marcadores mitocondriales
- ADNmt 16S Un nuevo haplotipo se ha detectado en las muestras estudiadas en el valle
de Fiambalaacute por lo cual se le asigna el nuevo coacutedigo Lvia-16SB Esta secuencia parcial
es de 436 pb de longitud y presenta un sesgo AT contenido de 6949 Este haplotipo es
muy similar al que se encuentra en esta especie de limneido Lvia-16SA (HE610434) que
difiere en soacutelo 2 de insercioacutensupresioacuten (indeles) Es importante sentildealar que se
detectaron muy pocas diferencias en este fragmento del 16S entre L neotropica y
especiacutemenes L viator ya estudiados en Argentina (soacutelo 5 posiciones variables 4
mutaciones y 1 indel) Por lo tanto se realizoacute un anaacutelisis comparativo de secuencias
incluyendo L neotropica y haplotipos L viator y otros haplotipos 16S aislados de la
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misma especie disponibles en el GenBank que muestran secuencias muy similares de
acuerdo con BLASTN (Veacutease anexo Tabla 18 pp 179)
- ADNmt cox1 Soacutelo una secuencia de nucleoacutetidos se encontroacute igual en todas las
muestras analizadas de 672 pb y un sesgo AT con contenido de 7004 Esta secuencia
resulta ser nueva y el nuevo coacutedigo haplotipo Lvia-cox1d fue exigido Cuando se
compara con los haplotipos descritos anteriormente en nucleoacutetidos de L viator cox1a
cox1b y cox1c las diferencias oscilan entre 6 y 11 el haplotipo Lvia-cox1a de Riacuteo Negro
Argentina (AM494010) aparece como el maacutes parecido Los resultados BLASTN
proporcionan una semejanza del 100 solamente con un fragmento cox1 maacutes corto de L
viatrix (VxC2 de 654 pb) de Mendoza (JN872450) Las diferencias de nucleoacutetidos y
aminoaacutecidos con haplotipos L viator y otros aislados se detallan en la Tabla 19 (Veacutease
anexo pp 180)
943 - Anaacutelisis comparativo de L neotropica vs L viator
A nivel de ADNr nuclear ITS-1 muestra ser un buen marcador en la distincioacuten entre estas
dos especies de limneidos El ITS-2 ofrece 60 posiciones variables (incluidas 29
mutaciones y 31 indeles) en una larga alineacioacuten de 464 pb en ambas especies y
respectivos haplotipos aislados Ademaacutes este marcador ofrece interesantes
microsateacutelites para la caracterizacioacuten de la poblacioacuten (Veacutease Anexo Tabla 16 pp 177)
El ITS-1 ofrece 119 posiciones variables incluyendo 93 mutaciones y 26 indeles en una
larga alineacioacuten de 580 pb El total de diferencias de caraacutecter entre especies son muy
claras y coexisten mostrando una gama de 57 a 59 (promedio de 5790) con un
promedio de p-distancia de 01163 (un total de 80 parsimonias en su respectiva
alineacioacuten) para distinguir las especies Una matriz de distancias por pares entre
secuencias de haplotipos ITS-2 y ITS-1 y aislamientos de L neotropica y L viator se
enumeran en la Tabla 20 (Veacutease anexo pp 181)
El nivel de los marcadores mitocondriales cox1 es excelente para distinguir las especies
y poblaciones cuando se utiliza como secuencia de nucleoacutetidos pero no cuando se
traduce a la proteiacutena que muestra identidad de secuencia de aminoaacutecidos en algunos
aislamientos de L neotropica y L viator A diferencia de los otros tres marcadores
utilizados 16S es el uacutenico que puede crear confusioacuten si se utiliza solo para lograr
diferenciacioacuten molecular entre ambas especies Las causas de esta afirmacioacuten son la
corta longitud del fragmento utilizado y el muy bajo nuacutemero de posiciones variables
obtenidas (25 de las cuales 19 son mutaciones y 6 indeles en una alineacioacuten de largo
442 pb 565) que logran generar una separacioacuten coherente entre ambas especies y
haplotipos (Veacutease anexo Tabla 18 pp179) El total de las diferencias de caracteres se
han utilizado para construir una matriz de distancia comparable entre 16S y secuencias
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de cox1 aisladas de haplotipos de L neotropica y L viator (Veacutease anexo Tabla 21 pp
182)
La informacioacuten proporcionada por los 4 marcadores moleculares utilizados y aplicados
para distinguir L neotropica y L viator se detalla en la Tabla 22 (Veacutease anexo pp 183)
Para la diferenciacioacuten entre estas dos especies ITS-1 aparece como el marcador con
mayor resolucioacuten y 16S como el de menor Para los anaacutelisis intraespeciacuteficos cox1
aparece como el mejor marcador y ITS-1 el peor La baja resolucioacuten del fragmento del
gen 16S para la distincioacuten de especies es digna de tenerse en cuenta Por ejemplo la
estimacioacuten de distancia media de 16S utilizando como modelo de sustitucioacuten de
nucleoacutetidos las diferencias totales (ts + tv) entre L neotropica y L viator es solo 856
siendo de 433 y 431 en las secuencias de L neotroacutepica y L viator respectivamente
(Veacutease anexo Tabla 22 pp 183)
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DISCUSIOacuteN
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101 - EN LOS SERES HUMANOS
La regioacuten endeacutemica en el valle de Fiambalaacute presenta las prevalencias maacutes altas e
intensidades registradas en el paiacutes demostrando ser un problema de Salud Puacuteblica con
singulares caracteriacutesticas epidemioloacutegicas En el presente estudio la prevalencia
obtenida por meacutetodos seroloacutegicos (3442) en Tatoacuten y aacutereas de influencia incluyendo
Riacuteo Grande es la maacutes alta reportada en la Repuacuteblica Argentina Esta prevalencia es
comparable a la encontrada por Marcos et al (2002) en pruebas seroloacutegicas (363) en
Mantaro asiacute como en el valle de Cajamarca tambieacuten en Peruacute por Gonzaacutelez et al (2011)
El estudio epidemioloacutegico realizado demuestra que esta zona puede ser clasificada como
una situacioacuten hiperendeacutemica humana en base a los criterios propuestos a la OMS por
Mas-Coma et al (1999 a) Los resultados obtenidos en esta investigacioacuten permiten la
descripcioacuten epidemioloacutegica del aacuterea y muestran factores que intervienen en el
mantenimiento del ciclo de la Fasciolosis a pesar que el subregistro y la falta de
denuncias epidemioloacutegicas contribuye a que la enfermedad sea subestimada La falta de
teacutecnicas de diagnoacutestico raacutepidas sensibles y econoacutemicas que esteacuten al alcance de todos
los centros de salud y sean uacutetiles tanto en la fase aguda como croacutenica de la enfermedad
seriacutea uno de los principales factores en la subestimacioacuten
Desde las aproximadamente 2500 personas infectadas registradas por Chen y Mott
(1990) en 42 paiacuteses de Asia Europa Ameacuterica Latina Aacutefrica del Norte y el Paciacutefico Oeste
entre 1970 y 1990 y el reporte global de la OMS (1995) en alrededor de 24 millones de
afectados hasta la estimacioacuten actual de Mas-Coma et al (2005) de 17 millones de
infectados a nivel mundial los casos reportados de Fasciolosis han ido aumentando en
los uacuteltimos 25 antildeos Tambieacuten para Mas-Coma (2009 a) es muy probable la
subestimacioacuten de la situacioacuten real debido al desconocimiento del estado de la
enfermedad en muchos paiacuteses
En Argentina no hay datos suficientes para conocer cabalmente la epidemiologiacutea y la
epizootiologiacutea de esta zoonosis parasitaria aunque sabemos que el problema existe (58
trabajos publicados con 555 casos) Sin embargo se presentan estudios como el de Pizzi
et al (1982) cuestionado por Barcat (2005) referido a 54 pacientes atendidos durante un
lapso de 5 antildeos en la provincia de Coacuterdoba
Las teacutecnicas disponibles para diagnoacutestico en los laboratorios cliacutenicos no son optimas
(Carnevale y Velaacutesquez 2011) ya que no se dispone faacutecilmente de antiacutegenos
estandarizados para realizar pruebas seroloacutegicas y seguramente muchos de los casos
observados no se notifican ni se publican por lo que se conoce soacutelo la punta del iceberg
La importancia de la infeccioacuten humana por F hepatica ha sido reconocida en antildeos
recientes por Mas-Coma et al (1999 c) Lo que maacutes sorprende es la capacidad de esta
enfermedad de llegar a causar situaciones epidemioloacutegicas problemaacuteticas en Salud
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Puacuteblica en medios tan diferentes y extremos como en la aridez del valle de Fiambalaacute a
nivel del mar en el delta del Nilo (Esteban et al 2003) y a 4000 m de altitud en el
Altiplano Boliviano (Mas-Coma et al 1999 a) y Peruano (Esteban et al 2002) en lugares
con alta pluviometriacutea y en lugares extremadamente secos en lugares de temperaturas
constantes a lo largo del antildeo y en otros con variacioacuten de temperatura pronunciada seguacuten
las estaciones en focos relacionados con aguas permanentes y en focos con aguas
temporales como observaron en sus estudios Mas-Coma et al (2008 b)
1011 - Inmunodiagnoacutestico
Al igual que los obtenidos en Fiambalaacute todos los diagnoacutesticos realizados en el paiacutes a
partir de 2001 exceptuando los efectuados en Coacuterdoba por Nieto Sosa (2008 2012)
fueron confirmados mediante el ensayo de ELISA (Lloret et al 2005)(Rubel et al
2005)(Salomoacuten et al 2006)(Corti et al 2006)(Riacuteos et al 2008)(Carnevale et al 2012)
El nuacutemero de reportes de casos humanos se sigue incrementando en el mundo y los
trabajos publicados por Arjona et al (1995) demuestran en esta serie de casos que esta
enfermedad afecta a las personas con una prevalencia de hasta 72 por coprologiacutea y
100 por serologiacutea donde ELISA tiene una sensibilidad del 100 y una especificidad
superior al 90 para la deteccioacuten de anticuerpos
Los resultados obtenidos permiten sostener que a pesar de su uso extendido las pruebas
coproloacutegicas comunes son poco sensibles e inferiores a las pruebas seroloacutegicas que
muestran mayores valores de sensibilidad en la deteccioacuten de la fase aguda y croacutenica de
la infeccioacuten por F hepatica En Peruacute Coacuterdova et al (1997 1999) y OacuteNeill et al (1999)
realizaron estudios para el diagnoacutestico precoz y oportuno por medio de meacutetodos
seroloacutegicos que muestran una mayor especificidad y sensibilidad en la determinacioacuten de
esta helmintiasis Cornejo (2003) y Espinosa (2010) reconocen como limitacioacuten de las
pruebas seroloacutegicas que no distinguen entre infeccioacuten actual o pasada y por lo tanto un
resultado positivo en un paciente proveniente de una zona endeacutemica con un cuadro
cliacutenico no compatible con Fasciolosis puede resultar de una respuesta inmune a la
infeccioacuten en el pasado
La deteccioacuten de anticuerpos fue el meacutetodo empleado para el inmunodiagnoacutestico de
Fasciolosis en el valle de Fiambalaacute debido a su relativa simplicidad y la temprana
seroconversioacuten (usualmente 1-2 semanas) durante la infeccioacuten primaria comparada con
el periacuteodo de patencia tardiacutea (2-3 meses) hallada por Hillyer (1999) Sin embargo se tuvo
en cuenta que su positividad no puede ser de modo alguno considerada como un criterio
de infeccioacuten activa ya que Espino (1997) ha demostrado que muchos pacientes ya
curados mantienen elevados niveles de anticuerpos contra el paraacutesito por periacuteodos que
pueden llegar hasta 2 o 3 antildeos
Shaker (1994) en estudios epidemioloacutegicos realizados en Egipto empleoacute ELISA para
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detectar anticuerpos circulantes contra F hepatica en suero de pacientes infectados
enfrentados a un antiacutegeno purificado por inmunoafinidad desde homogeneizados del
paraacutesito adulto ELISA resultoacute ser 100 sensible y tuvo una especificidad de 93
Entonces planteoacute que ELISA puede ser usada como una buena prueba de screening
mientras que el ensayo inmunoenzimaacutetico de electrotransferencia (EITB) serviriacutea como
un test confirmatorio en el inmunodiagnoacutestico de Fasciolosis
En Chile Apt (1992) sostiene que el meacutetodo ELISA posee una sensibilidad de 976 y
especificidad de 938 mientras para Castro (2010) la teacutecnica de ELISA utilizando los
productos de E-S del paraacutesito tiene una sensibilidad de 100 y una especificidad de
978 aunque Zulantay (1992) utilizando un IgG ELISA y un antiacutegeno somaacutetico soluble
de F hepatica obtuvo una sensibilidad de 923 y una especificidad de 994 en tanto
los valores predictivos positivo y negativo fueron de 916 y 994 respectivamente
Para el desarrollo de esta investigacioacuten se utilizoacute antiacutegeno E-S del paraacutesito y para
evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti-F hepatica en los sueros humanos se aplicoacute un
ELISA con una sensibilidad y especificidad en la prueba de 100
1012 - Eosinofilia
En lo que respecta a los exaacutemenes auxiliares llevados a cabo el dato maacutes importante del
hemocitoloacutegico es la eosinofilia elevada registrada en el 3238 de los casos estudiados
en esta tesis sin que se encontraran elementos inmaduros en las muestras como reporta
Siciliano (1982)
En Fasciolosis como en otras parasitosis la eosinofilia es el hallazgo de laboratorio maacutes
frecuentemente encontrado seguacuten su porcentual y valor absoluto en sangre perifeacuterica
(Arjona et al 1995) Las alteraciones del hemograma demuestran eosinofilia marcada
(47) para Blancas et al (2004) y leucocitosis con desviacioacuten a la izquierda como lo
manifiesta Atias (1991)
Asiacute para el total de pacientes estudiados la eosinofilia elevada es el hallazgo maacutes
frecuente (n= 60) lo que concuerda con los trabajos de Rubel et al (2005) y Nieto Sosa
(2008) siendo uno de los datos que orienta el diagnoacutestico haciacutea la Fasciolosis Para
Lloret et al (2005) la leucocitosis con hipereosinofilia creciente fue una anomaliacutea
universal con valores del 38 al 62 y estuvo presente en todos sus pacientes mientras
que Giffoniello (1983) la reporta del 30-50 seguacuten Miguel (1985) en 80 y para Siciliano
(1989) en 93
En Peruacute Cosme et al (2001) reportan 37 casos de Fasciolosis en los que el 918 de los
pacientes presentoacute eosinofilia El porcentaje de pacientes con eosinofilia en determinado
grupo de estudio depende mucho del porcentaje de pacientes agudos en cada caso
Vera (1989) hace notar que en 83 de 134 pacientes (619) en etapa croacutenica no se
presentoacute eosinofilia por lo que su ausencia en un paciente dado no descarta la
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posibilidad de la enfermedad y esto podriacutea explicar el escaso nuacutemero de individuos con
diagnoacutestico de Fasciolosis que al no sospechar su diagnoacutestico como lo afirman Marcos
et al (2002) no se solicitoacute el anaacutelisis parasitoloacutegico respectivo Cabe destacar que algunos
pacientes clasificados en fase croacutenica son realmente casos en transicioacuten (final de la fase
aguda y comienzo del periodo de ovoposicioacuten)
Seguacuten Arjona et al (1995) la eosinofilia se presenta en el 95 de los pacientes siendo la
mayoriacutea agudos Mientras Marcos et al (2007 a) refiere haberla encontrado en el 46 de
los pacientes (todos en fase croacutenica) De esto se deduce que con respecto a la
eosinofilia y la Fasciolosis cabe mencionar que las maacutes altas tasas de eosinofilia se
observan en la fase aguda o invasiva y estadios tempranos de la fase croacutenica llegando
incluso a cifras muy altas (70-80) como se menciona anteriormente Para Blancas et al
(2004) la eosinofilia no siempre estaacute presente en la fase croacutenica Solo 47 de los 277
casos implicados en un interesante estudio hospitalario de maacutes de 30 antildeos teniacutea
eosinofilia (Blancas et al 2004) mientras que el 50 de los sujetos con Fasciolosis
croacutenica teniacutea eosinofilia en aacutereas endeacutemicas (Marcos et al 2002)
Tambieacuten en Peruacute donde la eosinofilia estuvo presente en el 47 de los casos croacutenicos
se demuestra que en esta fase puede encontrarse y seriacutea importante para poder
sospechar el diagnoacutestico de esta parasitosis Sin embargo muchos individuos con
Fasciolosis croacutenica no presentan eosinofilia y esto seriacutea otro punto importante al igual
que las caracteriacutesticas cliacutenicas lo que explicariacutea la falta de personas diagnosticadas
previamente con Fasciolosis en los hospitales del valle de Fiambalaacute ya que no se
investigoacute este diagnoacutestico
La eosinofilia puede ser el primer signo a sospechar sobre Fasciolosis en las zonas
endeacutemicas pero tambieacuten estos sujetos pueden tener muacuteltiples paraacutesitos intestinales que
pueden aumentar el conteo de eosinofilos especialmente helmintos o pueden tener otra
patologiacutea como asma Se deberaacute tener presentes estas asociaciones que requieren un
enfoque integral de diagnoacutestico En resumen si un paciente proviene de un aacuterea
endeacutemica se sospecha de cualquier anomaliacutea del tracto biliar y presenta eosinofilia
puede ser Fasciolosis y se deberaacute incluir para el diagnoacutestico diferencial
1013 - Proteiacutenas totales y enzimas hepaacuteticas
Otro rasgo de la infeccioacuten por F hepatica fue la presentacioacuten de hiperproteinemiacutea quizaacutes
debido a cambios de volumen del agua plasmaacutetica por deshidratacioacuten (aporte insuficiente
de agua voacutemitos o diarreas severas) La hiperproteinemiacutea puede ser debida a
deshidratacioacuten o a un aumento en la concentracioacuten de proteiacutenas especiacuteficas
(inmunoglobulinas policlonales en infecciones) pero estas no fueron analizadas
Para analizar el impacto del valor del laboratorio se diferenciaron los datos aportados por
aquellas determinaciones como el hemograma de las especiacuteficas en patologiacutea
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hepatobiliar Las determinaciones especiacuteficas en patologiacutea hepatobiliar incluyen las
enzimas de citoacutelisis (GOT o AST y GPT o ALT) para que reflejen alteraciones del
pareacutenquima hepaacutetico y la elevacioacuten de FAL (3619) la bilirrubina (BT) directa (BD) e
indirecta (BI) La fosfatasa alcalina se halla elevada como enzima de colestasis aunque
los valores registrados son inferiores al reporte de Siciliano et al (1989) donde el
laboratorio reveloacute fosfatasa alcalina aumentada en el 43 de los casos Nieto Sosa et al
(2012) encontraron GOT GPT y FAL elevadas en todos los pacientes de un grupo
familiar estudiado
1014 - Geacutenero
En la mayoriacutea de los estudios sobre la Fasciolosis humana y su incidencia en las
diferentes zonas de endemicidad los aspectos referidos a la epidemiologiacutea de la
enfermedad en funcioacuten del sexo del hospedador definitivo accidental arrojan resultados
contradictorios obtenieacutendose zonas donde las prevalencias e intensidades de infeccioacuten
eran diferentes si bien en la mayoriacutea de las veces de forma no significativa
De acuerdo con esta afirmacioacuten en los resultados obtenidos en el valle Fiambalaacute tanto
dentro de los casos positivos como en el grupo de negativos los mayores porcentuales
corresponden al sexo femenino (mujeres 60 40 en hombres) sin embargo la
prevalencia no presenta asociacioacuten estadiacutesticamente significativa
La diferencia no significativa entre prevalencia y sexo puede ser explicada por la similitud
de roles por geacutenero y por la ingesta de varios tipos de vegetales crudos o agua como
factores de riesgo para la infeccioacuten por F hepatica Estos resultados concuerdan con las
investigaciones realizadas en zonas tan distantes como Satipo Peruacute llevadas a cabo por
Delgado (1995) y las de Brooker (1999) quien trabajoacute en Kenia
Del mismo modo como ocurre con casi todas las enfermedades infecciosas las tasas de
prevalencia e intensidad entre los sexos variacutean en funcioacuten de los papeles y
responsabilidades de cada uno Sin embargo si tanto hombres como mujeres comparten
condiciones econoacutemicas y sociales similares sus estructuras fisioloacutegicas pueden
responder de forma diferente a un mismo riesgo
De ese modo Apt et al (1992) ha realizado numerosos estudios en las distintas zonas
endeacutemicas de Fasciolosis en Chile donde la prevalencia de parasitacioacuten animal es
elevada En aacutereas rurales hiperendeacutemicas para Fasciolosis animal los resultados de
Fasciolosis humana obtenidos en relacioacuten al geacutenero mostraban que las mujeres eran
parasitadas de forma maacutes frecuente que los hombres 732 frente al 268
respectivamente
Estudios epidemioloacutegicos muy interesantes llevados a cabo en Bolivia por Esteban et al
(1999 2002) en regiones de alta endemicidad de Fasciolosis humana encontraron
prevalencia de hasta un 682 (media 154) aunque no existiacutean diferencias en cuanto
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al geacutenero de individuos analizados Farag et al (1979) en trabajos anteriores en Egipto
mostraban diferencias significativas en cuanto a la prevalencia de infeccioacuten por
Fasciolosis en funcioacuten del geacutenero afectando maacutes a las mujeres con un 103 frente a un
44 en hombres
De ese modo los estudios referidos muestran que tanto en Bolivia como en Peruacute
(Esteban et al 1999 2002) las diferencias relativas a la prevalencia de infeccioacuten por F
hepatica en funcioacuten del geacutenero no eran significativas al igual de lo encontrado en el
presente trabajo Por el contrario en Egipto (Curtale et al 2007)(Esteban et al 2003) al
igual que en Chile (Apt et al 1992 1993) si existiacutean diferencias significativas en la
prevalencia de infeccioacuten dependiendo de si afectaba a hombres o mujeres
1015 - Grupos etarios
El estudio demuestra que la infeccioacuten es maacutes frecuente en los pacientes de los grupos
etarios menores de 19 antildeos a diferencia del estudio reportado por Biagi (1957) en la
poblacioacuten de Atlixto (zona endeacutemica mexicana) que mostroacute como la frecuencia de
reacciones positivas aumentaba de manera rectiliacutenea en los adultos
Datos similares a los obtenidos en esta investigacioacuten se observan en la casuiacutestica
estudiada por Alban (2002) sobre casos de Fasciolosis en el Hospital de Cajamarca
Peruacute donde su mayor poblacioacuten correspondioacute a los grupos etarios menores de 20 antildeos
Tambieacuten en Peruacute Marcos (2002 2005) observa en zonas endeacutemicas que la mayoriacutea de
casos son nintildeos en edad escolar (5-15 antildeos) siendo maacutes propensos que los adultos a
convertirse en infectados como lo ejemplifica en los niveles maacutes altos de prevalencia de
infeccioacuten y para desarrollar eventos mecaacutenicos adversos despueacutes del tratamiento
debido al tamantildeo maacutes pequentildeo de sus conductos biliares y por lo tanto a una mayor
probabilidad de bloqueo (Marcos et al 2007 b)(Cornejo et al 2003)(Valencia et al
2005)(Gabrielli et al 2011)
Los resultados tambieacuten coinciden con estudios de campo reportados en el valle de
Mantaro (zona endeacutemica peruana) donde Naacutequira (2000) obtiene 93 de muestras
positivas en los menores de 20 antildeos Valero et al (2003 2006 2008) y Girones et al
(2007) sostienen el gran impacto de esta enfermedad en la morbilidad de nintildeos con
infecciones croacutenicas
Sin embargo los resultados del valle de Fiambalaacute difieren de la casuiacutestica hospitalaria
encontrada en Coacuterdoba por Siciliano (1980) donde la edad promedio en que se
presenta la enfermedad es de 355 antildeos ( a pesar de tener en cuenta que en el Hospital
Rawson de la ciudad de Coacuterdoba se atienden personas adultas) y en Peruacute donde
Blancas (2004) sostiene que las poblaciones maacutes importantes correspondieron a los
grupos comprendidos entre los 20 y 39 antildeos y Peacuterez (1986) que observa la mayor
proporcioacuten de enfermos entre 15 a 49 antildeos
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Los adultos suelen ser los maacutes afectados en aquellos lugares en los que la Fasciolosis
humana es poco frecuente como lo describen Carrada y Escamilla (2005) en Francia o
los casos de turistas que veranean en zonas serranas de Coacuterdoba Argentina
diagnosticados por Siciliano (1980) y Nieto Sosa (2006) Tambieacuten los observados por
Maco et al (2002) en profesiones ligadas al campo relacionadas al pastoreo o cuidado
del ganado constituyeacutendose en grupos de riesgo y donde la enfermedad se muestra
seguacuten Mas-Coma y Bargues (1997 a) en agregados familiares
1016 - Estudios coproloacutegicos
Uno de los aspectos investigados para el diagnoacutestico definitivo de Fasciolosis fue el
hallazgo de huevos en materia fecal aun reconociendo que el estudio
coproparasitoloacutegico presenta baja sensibilidad y requiere la recoleccioacuten de muestras
seriadas En este sentido la teacutecnica coproloacutegica maacutes rentable eficaz y sensible resultoacute la
TSR descrita por Lumbreras et al (1962)
A pesar de los bajos resultados obtenidos (4 casos) la TSR al compararla con las otras
teacutecnicas maacutes complejas y de mayor costo como la teacutecnica de Kato-Katz o el meacutetodo de
concentracioacuten eacuteter-formol permitioacute la identificacioacuten de los casos positivos A diferencia de
los reportes de otros autores donde los estudios coproparasitoloacutegicos dieron excelentes
resultados como en Mendoza donde Salomoacuten et al (2006) utilizando las teacutecnicas de
Faust Sheather y Lumbreras comprobaron positivos a dos pacientes o los casos
reportados por Nieto Sosa (2008) de Coacuterdoba y San Luis donde hallaron huevos de F
hepatica en 15 pacientes
En un estudio muy interesante Lumbreras et al (1962) comparando el anaacutelisis directo de
heces y el procedimiento de sedimentacioacuten raacutepida para investigar huevos de F hepatica
en materia fecal obtienen un resultado significativo de 919 a 9081 de positividad
Villegas et al (2012) en el Altiplano Boliviano regioacuten de alta endemicidad de Fasciolosis
humana encontraron prevalencias de hasta 217 a diferencia del presente trabajo
donde solo fue posible confirmar por anaacutelisis de materia fecal 416 de los casos
estudiados correspondientes a pacientes sintomaacuteticos en su fase croacutenica entre ellos dos
nintildeos
Cabe destacar que por razones logiacutesticas la toma de muestras seriadas para el examen
de heces fue soacutelo de 3 diacuteas consecutivos lo que pudo reducir el hallazgo de huevos
debido a la ovoposicioacuten intermitente del paraacutesito Es importante sentildealar ademaacutes que las
personas no cooperaron con la toma de muestras
De los casos positivos encontrados llama la atencioacuten el de la paciente a la que se extrajo
especiacutemenes de F hepatica con CPRE quien previamente resultoacute negativa a los
distintos coproparasitoloacutegicos que se le realizaron y a los ELISA practicados Lo mismo
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ocurrioacute con la paciente en la que se halloacute un ejemplar durante una intervencioacuten quiruacutergica
y tambieacuten dio negativo al anaacutelisis de materia fecal aunque eacutesta fue positiva al ELISA
A pesar de no formar parte de los objetivos del presente estudio las demaacutes teacutecnicas
coproparasitoloacutegicas utilizadas permitieron demostrar la existencia de huevos de varios
paraacutesitos presentes tanto en nintildeos como en adultos presentaacutendose casos donde
conviviacutean hasta 3 paraacutesitos distintos al igual que el trabajo de Esteban (1999) quien
diagnostica parasitosis coexistentes con Fasciolosis mencionando la presencia de
Blastocystis hominis tal como lo observado en el valle de Fiambalaacute
1017 - Siacutentomas y signos
La presentacioacuten cliacutenica patogeniacutea situacioacuten epidemioloacutegica y patrones de transmisioacuten de
Fasciolosis humana es ampliacutesima no soacutelo por las dificultades diagnoacutesticas en la fase
aguda de la enfermedad sino por el hecho de que estudios de Valero et al (2003 2006
2008) en los uacuteltimos antildeos han venido a demostrar serios problemas cliacutenicos y
patogeacutenicos durante la muy prolongada fase de cronicidad que en humanos se estima
del orden de 135 antildeos
Queda demostrado en este estudio que lamentablemente la casuiacutestica en sucesos
cliacutenicos no refleja su frecuencia quizaacutes porque la mayoriacutea de los casos que llegan a los
centros hospitalarios lo hacen por complicaciones de la fase croacutenica (cuadros
obstructivos biliares colangitis colecistitis etceacutetera) y los siacutentomas de la Fasciolosis de
la viacutea biliar son tan semejantes a los que produce la litiasis biliar que los pacientes llegan
a la cirugiacutea con este uacuteltimo diagnoacutestico siendo el hallazgo del paraacutesito un hecho
inesperado durante la intervencioacuten como lo revelan los trabajos de Del Valle y Donovan
(1923) Cuenya (1944) Longo y Dariacuteo (1953) Logaldo (1955) Ahualli y Arias (1961)
Cantildeas et al (1964) Padilla et al (1970) Carena et al (1972) y Andrada et al (1983) igual
que lo ocurrido con dos pacientes de Fiambalaacute
En esta investigacioacuten al analizar la sintomatologiacutea se observa que el dolor abdominal es
el maacutes frecuente presente en el 2553 de los casos Estos datos contrastantes con
otros estudios hospitalarios como los obtenidos en Peruacute por Picoaga (1980) 88 y
Alban (2002) que hablan de 88 y 84 respectivamente o en Chile donde el dolor
abdominal para Faiguenbaum (1962) fue el maacutes habitual en 70 de los casos
Los siacutentomas que siguieron en frecuencia en este estudio fueron naacuteuseas y voacutemitos
(2411) diarrea (1702) fiebre (992) valores muy proacuteximos a los obtenidos en
Peruacute donde Picoaga (1980) reporta naacuteuseas y voacutemitos en 30 anorexia en 27 y
diarrea soacutelo en 16 en tanto para Alban (2002) voacutemitos en 28 la hiporexia en el 26
las naacuteuseas en 17 la diarrea en 12 y la peacuterdida de peso en el 13 En Chile
Faiguenbaum (1962) encuentra maacutes frecuente la diarrea (36) y la peacuterdida de peso
(36) Faacutebregas et al (1976) en Cuba presenta porcentajes maacutes bajos diarrea 26
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voacutemitos 22 anorexia 19 peacuterdida de peso y naacuteuseas 15 A pesar de estos
porcentajes es de destacar que los siacutentomas son inespeciacuteficos y ayudan poco a precisar
el diagnoacutestico
Respecto a la semiologiacutea del dolor abdominal se observa que en cuanto a localizacioacuten
es maacutes frecuente en epigastrio (5454) e hipocondrio derecho (4545) lo que
concuerda con estudios de Cornejo (1951) en Peruacute Faacutebregas et al (1976) observa el
dolor epigaacutestrico presente en el 59 y en hipocondrio derecho en el 37 de sus
pacientes El mismo orden se mantiene en Chile (Faiguenbaum 1962) pero con
porcentajes menores (26 y 19 respectivamente) Al igual que en Peruacute (Picoaga
1980)(Cornejo 1951) el dolor tipo coacutelico ha sido el que maacutes frecuentemente se ha
observado en este estudio
En la Repuacuteblica Argentina de acuerdo al examen fiacutesico para el total de pacientes
atendidos en los grupos agudo croacutenico y pediaacutetrico los hallazgos maacutes frecuentes fueron
dolor a la palpacioacuten en hipocondrio derecho y signo de Murphy (Longo y Daraiacuteo 1953)
(Ahualli y Arias 1961)(Cantildeas et al 1964)(Padilla et al 1970)(Andrada et al 1983)
(Giffoniello et al 1983) (Lloret et al 2005) hepatomegalia (Padilla et al 1970) palidez y
fiebre (Andrada et al 1983) aunque en los datos de los pacientes del valle de Fiambalaacute
es de destacar en algunos casos la hepatomegalia y la ictericia presente en adultos
Por lo tanto es correcto afirmar que el escaso nuacutemero de individuos diagnosticados
cliacutenicamente de Fasciolosis no presentan sintomatologiacutea biliar claacutesica como coacutelico biliar
observado por Andrada et al (1983) o signo de Murphy (Longo y Daraiacuteo 1953) y esto
pudiera ser una de las causas que explicariacutea el escaso nuacutemero de individuos
diagnosticados cliacutenicamente de Fasciolosis
1018 - Imaacutegenes
En la presente tesis doctoral soacutelo 3 observaciones (75) coexistieron con litiasis 5
(125) con colecistectomiacutea y 29 (725) con vesiacutecula normal Se encontroacute un caso
ecograacutefico que mostraba una imagen factible del paraacutesito El estudio realizado mostroacute
una imagen clara aplanada y alargada perfectamente compatible con F hepatica con
estructura hepaacutetica conservada viacuteas biliares intra y extrahepaacutetica no dilatadas Se
informoacute tambieacuten ausencia de vesiacutecula biliar por colecistectomiacutea y leve dilatacioacuten del
coleacutedoco sin demostrar alteraciones en el resto del estudio Descripciones semejantes
son reportadas en Peruacute por Gonzaacutelez-Carbajal et al (2001) y Meacutexico por Vaacutezquez et al
(2007)
Blancas et al (2004) describioacute los hallazgos principales de 27 ecografiacuteas abdominales
(desde 1989 al 2002) realizadas en el Hospital Cayetano Heredia de Lima Estas fueron
hepatomegalia en el 37 imaacutegenes sospechosas de F hepaacutetica en 30 colecistitis en
26 y litiasis en 15 y Alban (2002) en el hospital de Cajamarca reportoacute 8 ecografiacuteas
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(de 101 casos de Fasciolosis) de los cuales cinco (63) tuvieron caacutelculos y dos (25)
pared vesicular engrosada
La tomografiacutea axial computada es utilizada por Arjona et al (1995) mencionando su
utilidad especialmente en el reporte de 1520 pacientes con Fasciolosis y Van Beers et al
(1994) con presencia de ejemplares en viacuteas biliares El presente estudio no contoacute con la
posibilidad de emplear TAC en los pacientes
1019 - Teacutecnicas invasivas
A raiacutez de los estudios realizados para esta tesis fueron hallados como se expresoacute antes
en el momento de llevar a cabo intervenciones quiruacutergicas ejemplares vivos de F
hepatica en dos pacientes femeninos La primera presentaba el coleacutedoco muy dilatado y
de paredes sumamente engrosadas sin evidencia de litiasis El segundo reporte se
refiere a la coexistencia de litiasis y Fasciolosis en el coleacutedoco de las que se extrajo
estructuras adultas del paraacutesito En Peruacute Alban (2002) refiere situaciones similares al
haber encontrado especiacutemenes en 2162 (12) colecistectomiacuteas practicadas en el
hospital de Cajamarca durante 5 antildeos
En una de las pacientes del valle de Fiambalaacute fue extraiacutedo un ejemplar por CPRE con
cesta de Dormia convirtieacutendose en una muy buena alternativa para evitar cirugiacuteas
mayores como ya habiacutea publicado Veerappan (1991) o en Cuba donde Martiacutenez et al
(2000) reportan resultados satisfactorios comprobando la presencia del paraacutesito en las
viacuteas biliares por CPRE y procediendo a la extraccioacuten de especiacutemenes bajo visioacuten directa
con canastillas helicoidales
Durante esta investigacioacuten uno de los casos citados al que se le practicoacute una
colecistectomiacutea permitioacute la confirmacioacuten por ELISA realizado al extraerse un ejemplar de
F hepatica
102 - EN LOS ANIMALES
1021 - Estudios coproloacutegicos
Seguacuten Boray (1969) y Mas-Coma et al (1999) los hospedadores definitivos maacutes
importantes de F hepatica son los ovinos y los bovinos mientras para Acha y Szyfres
(1986) muchos animales de especies domeacutesticas o silvestres pueden infectarse Este
estudio muestra que entre ellas herbiacutevoros poligaacutestricos -cameacutelidos- o monogaacutestricos -
equinos y mulares- actuacutean como importantes hospedadores alternativos existiendo
diferencias en el desarrollo de la infeccioacuten en las distintas especies estudiadas
determinadas entre otros factores por su diferente susceptibilidad a la infeccioacuten tal como
lo sostienen Dixon (1964) o Reddington et al (1986) Esto se manifiesta durante el curso
de la investigacioacuten por los porcentajes de hospedadores infectados y los niveles de
excrecioacuten de huevos de F hepatica en materia fecal obtenidos
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En el valle de Fiambalaacute los mayores porcentajes de muestras positivas corresponden a
los ovinos y asnos-mulares (3958 al 1954) siendo tambieacuten alto el porcentaje en
llamas y caprinos El anaacutelisis de estos porcentajes considera el sistema de alimentacioacuten
utilizado ya que es determinante de la epidemiologiacutea de la enfermedad como lo
demuestran Cordero del Campillo et al (2002) Las muestras analizadas proveniacutean de
animales sometidos a los manejos tradicionales de produccioacuten en la zona lo que limita
sus preferencias de haacutebitat y sus haacutebitos forrajeros independientemente de la especie
raza o categoriacutea etaria
En contraste a lo observado por Olaechea (1994) en el caso de los ovinos y los caprinos
ambas especies deben pastorear en las vegas (ambientes pantanosos) incluso los
caprinos incorporan una proporcioacuten considerable de especies arbustivas en su dieta
(Mintildeoacuten et al 1991)(Aguirre et al 2005) Estos animales al verse obligados a consumir
forrajes contaminados de la zona ademaacutes de infectarse tambieacuten se transforman en
contaminadores continuos del aacuterea Cafrune et al (1996) sostienen que los cameacutelidos
sudamericanos se infectan de los ovinos aunque los altos porcentajes de llamas
positivas (184) hallados en Tatoacuten y Riacuteo Grande deben relacionarse a la susceptibilidad
que manifiestan a la infeccioacuten por trematodes y a ser poblaciones que habitaban antes de
la introduccioacuten de los ovinos a la zona
Pereyra y Leiras (1991) estudiaron que los rumiantes invierten maacutes de un tercio del diacutea
pastando y como las ovejas cabras y cameacutelidos se alimentan en los mismos lugares y
tienen acceso a los mismos ambientes las probabilidades de consumir metacercarias al
alimentarse seriacutean las mismas
Frente a la prevalencia (2674) obtenida en esta tesis el meacutetodo de diagnoacutestico
coproparasitoloacutegico utilizado presentoacute porcentajes maacutes elevados que los datos de Aguirre
et al (2005) 2367 Rossanigo et al (1983) 99 Moreira et al (2004) 2353 y Mariacuten
(2009) 216
Resultados similares a los mostrados fueron observados en la regioacuten norte del Altiplano
boliviano zona altamente endeacutemica (2586) por Ueno et al (1975) La prevalencia por
F hepatica en el estado de Santa Catarina Brasil donde Da Serra-Freire y Nuernberg
(1992) luego de analizados 12 antildeos de muestreos presentan un 2786 en promedio La
distribucioacuten geograacutefica de establecimientos agropecuarios en Uruguay muestran tropas
con porcentajes mayores a 20 de animales infectados en cualquier aacuterea del territorio
como lo registran Loacutepez y Hernaacutendez (1961) y Nari y Cardozo (1976) Chile presenta una
tasa promedio (3012) tanto en bovinos como en la infeccioacuten caprina (Alcaiacuteno y Apt
1989) Seguacuten Pascal y Goacutemez (1986) tambieacuten se encuentran presentes en Venezuela
con 215
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Boray (1969) sostiene que los huevos de F hepatica eliminados en la materia fecal
dependen de factores relacionados con el hospedador (edad estado inmune y
nutricional) y con el trematode (intensidad del parasitismo y duracioacuten de la infeccioacuten)
factores que explican el amplio rango de resultados encontrados en esta tesis (desde
104 en porcinos 184 en llamas hasta 3958 en ovinos) Las diferencias
estadiacutesticamente significativas de prevalencia en ovinos supera ampliamente las
encontradas en las demaacutes especies esto se relaciona con su alta susceptibilidad y pone
en evidencia su potencial como contaminador de las pasturas
En la zona de estudio existen algunos factores particulares a tener en cuenta la
ganaderiacutea normalmente es mixta con lo cual las diferentes especies de animales ademaacutes
de pastorear en ambientes compartidos consumen las mismas metacercarias los
hospedadores tienen similitud en el tracto digestivo y estaacuten muy relacionados
filogeneacuteticamente (ungulados)
Por la dispersioacuten del alimento en grandes extensiones del terreno y consecuente baja
infestacioacuten de los pastos no era esperable encontrar infecciones altas Los lugares con
una gran contaminacioacuten de los pastos presentan los pocos eventos de pastoreo que los
animales pueden utilizar y de ese modo ingerir metacercarias e infectarse En el valle de
Fiambalaacute F hepatica se halla concentrada en los sitios huacutemedos conocidos como vegas
aunque la trashumancia y largas distancias logran que se disperse ampliamente
La explicacioacuten es que esta prevalencia alcanza para mantener el ciclo de transmisioacuten a lo
largo del tiempo ademaacutes recordemos que el paraacutesito posee una gran capacidad de
multiplicacioacuten asexual en el hospedador intermediario seguacuten Ollerenshaw (1971 a) por
cada miracidio que penetra al caracol pueden emerger entre 800 y 4000 cercarias Otra
explicacioacuten razonable es pensar que existen en los campos compartidos por varios
propietarios -comuneros- otros hospedadores definitivos domeacutesticos o silvestres que
tambieacuten aportan huevos al ambiente tal como lo propone Olaechea (2004)
Los herbiacutevoros como hospederos definitivos desempentildean dentro de la cadena
epidemioloacutegica un papel importante en la diseminacioacuten de la Fasciolosis y ello podriacutea
estar influyendo en los altos iacutendices que se encuentran en humanos sin embargo Mas-
Coma (2005) presenta zonas donde los casos humanos podriacutean ser independientes de la
infeccioacuten animal
1022 - Necropsias
La necropsia como teacutecnica tambieacuten permitioacute establecer un diagnoacutestico de certeza No
necesitoacute de la confirmacioacuten mediante estudios histopatoloacutegicos y seroloacutegicos
complementarios como los planteados por Robles y Uzal (1991) porque las lesiones y los
paraacutesitos hallados confirman el agente etioloacutegico causante de la enfermedad
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Los cambios de tamantildeo en la viacutescera pudieron ser debidos a un estado de caquexia
apareciendo un hiacutegado maacutes pequentildeo del normal y con una falsa imagen de distensioacuten de
la vesiacutecula biliar No se encontraron depresiones de color rojo oscuro correspondientes a
telangiectasias ni procesos degenerativos acompantildeados de coloracioacuten amarillenta
(esteatosis) o congestioacuten croacutenica que diera lugar a una coloracioacuten rojo oscura
entremezclada con aacutereas amarillentas (hiacutegado de nuez moscada) como sostiene Ruager
(1969)
A diferencia de los hallazgos de Morales y Pino (1977) la apertura de la vesiacutecula biliar no
presentoacute alteraciones del contenido ni en la superficie mucosa Los canaliacuteculos biliares
presentaron engrosamiento manifiesto y en el interior de estos se observoacute la presencia de
ejemplares de F hepatica material semisoacutelido color negro fibrosis y calcificacioacuten de los
conductos biliares que podriacutea actuar como una barrera mecaacutenica confiriendo una
significativa resistencia frente a futuras reinfecciones tal como lo plantean en su trabajo
Rojo Vaacutezquez y Ferre-Peacuterez (1999)
En el tubo digestivo el intestino delgado no presentoacute intususcepcioacuten o necrosis tampoco
reaccioacuten fibrino-purulenta alrededor de la lesioacuten o adherencia a la pared abdominal ni el
abomaso con formaciones nodulares muacuteltiples de miliacutemetros de diaacutemetro distribuidas en
toda la mucosa como describieron Dimattia et al (2013)
En los animales con paraacutesitos la extraccioacuten de las formas juveniles a nivel del
pareacutenquima hepaacutetico y de las adultas en los canales biliares se vio favorecida por la
necropsia siendo importante que las mismas se realizaran a nivel de campo al ser maacutes
faacutecil praacutectica y econoacutemica su ejecucioacuten
1023 - Morfologiacutea microscoacutepica
Los trabajos de Rosa (1969) utilizando la microscopiacutea con fines taxonoacutemicos favorecieron
la profundizacioacuten en el conocimiento de la estructuras de F hepatica A posteriori la
microscopiacutea de campo claro ha sido utilizada en el estudio morfoloacutegico de las diferentes
etapas de desarrollo de los trematodos (Jamjoom y Shalaby 2006) En la uacuteltima deacutecada
esta teacutecnica ha traiacutedo importantes contribuciones en paraacutesitos adultos y huevos de F
hepatica como lo muestran Valero et al (2005 2012) y Periago et al (2008)
En el presente estudio se observaron similitudes morfoloacutegicas entre ejemplares adultos
originarios del valle de Fiambalaacute que no difieren de los especiacutemenes de las otras zonas
de Latinoameacuterica estudiados En lugares separados por grandes distancias geograacuteficas
los trabajos de Arauacutejo et al (1995) en Goiacuteas Brasil o los de Periago et al (2006) en
Espantildea y Valero et al (1999) en Bolivia tienen diferencias alomeacutetricas ontogeacutenicas El
aspecto de los huevos uterinos no difiere de los detallados previamente en la literatura
por Hussein et al (2010)
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Fue importante la observacioacuten de tubeacuterculos y espinas en el tegumento porque su
presencia contribuye a la creacioacuten del haacutebitat de los helmintos Por otra parte el
tegumento es la regioacuten de la interaccioacuten del paraacutesito con el hueacutesped por eacutel no solo entran
nutrientes al paraacutesito sino que tambieacuten como lo sentildealaron Moreau y Chauvin (2010)
desarrolla estrategias para la evasioacuten de la respuesta inmune del hueacutesped
A pesar de las numerosas ventajas ofrecidas por estudios de microscopiacutea de campo
brillante en Helmintologiacutea como demostraron Szmygiel et al (2014) la caracterizacioacuten de
ciertos detalles morfoloacutegicos observados en este estudio como afirman Singh et al (2014)
requiere el uso de otras teacutecnicas tales como el contraste de interferencia diferencial que
permitioacute la observacioacuten tridimensional de las estructuras Los resultados obtenidos
muestran por primera vez que el uso integrado de las dos teacutecnicas en F hepatica
permiten observar la presencia de espinas con resultados fiables Los ejemplares de F
hepatica presentan similitud morfoloacutegica cuando se analizan por microscopiacutea de campo
claro siendo necesario el uso integrado de diversas teacutecnicas microscoacutepicas para una
mejor comprensioacuten de la morfologiacutea del paraacutesito
102 4 - Variabilidad geneacutetica intraespeciacutefica
La Fasciolosis se encuentra distribuida por Ameacuterica Latina Europa Aacutefrica y Asia (Mas-
Coma 2004 a b 2005 2007) con una enorme capacidad de adaptacioacuten y expansioacuten
incluso a medios inhoacutespitos (Mas-Coma et al 2003) relacionada tanto con el cambio
global (Mas-Coma 2007 a) como con el cambio climaacutetico (Mas-Coma et al 2008) por lo
que el marcador CO1 utilizado permitioacute diferenciar ejemplares adultos de F hepatica y
conocer si los polimorfismos son poblacionales o individuales Para ello se procedioacute a
estudiar los paraacutesitos mediante meacutetodos moleculares optando por la secuenciacioacuten de
genes y espaciadores del ADN como dianas maacutes adecuadas y aportando el maacuteximo de
informacioacuten para el estudio epidemioloacutegico Por la manera de manifestarse la
enfermedad se sugiere la conveniencia de ofrecer una base de genes sobre la cual las
regiones puedan proceder a describir sus situaciones epidemioloacutegicas incluyendo los
estudios sobre transmisioacuten para caracterizar el paraacutesito en los distintos lugares y
comprender el polimorfismo de los trematodes involucrados en cada lugar permitiendo
constituir un marcador de gran utilidad para los estudios epidemioloacutegicos y las estrategias
de control (Mas-Coma 2005) Las secuencias de ADN constituyen el uacutenico meacutetodo capaz
de diferenciar especies y tambieacuten diferenciar poblaciones y cepas (Bargues y Mas-Coma
2005) de modo que sean vaacutelidos para la distincioacuten de la variabilidad intraespeciacutefica con
caraacutecter sistemaacutetico (subespecies) pero tambieacuten de cepas geograacuteficas razas
susceptibles o resistentes a la transmisioacuten etceacutetera
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1025 - Resistencia antiparasitaria
Si bien se recuperaron ejemplares procedentes de animales sacrificados en el valle de
Fiambalaacute no habiacutea datos sobre la susceptibilidad o resistencia a antihelmiacutenticos en las F
hepaticas obtenidas sin embargo ya que ninguacuten tipo de tratamiento antihelmiacutentico se
lleva a cabo en los campos donde los animales fueron criados era poco probable aislar
susceptibles a los compuestos fasciolicidas incluyendo albendazoles (ABZ) por lo que
es importante la identificacioacuten de la sensibilidad y de los ejemplares resistentes de La
Puerta de Tatoacuten
En aislamientos de F hepatica ABZ-susceptibles en la cuenca del Salado tales como la
cepa Cullompton ABZ mostroacute excelente actividad y alta eficacia ovicida (Aacutelvarez et al
2009) incluso a concentraciones tan bajas como 005 nmolml No obstante en los
aislamientos del Centro de Diagnoacutestico Veterinario Facultad de Ciencias Veterinarias
Universidad Nacional de La Plata para Sanabria et al (2013) no fue inhibida incluso en
la maacutes alta concentracioacuten probada (5 nmolml)
Entre los paraacutesitos obtenidos se ha aislado una cepa del trematode resistente al
triclabendazol la cual seraacute utilizada en futuras investigaciones Los resultados
preliminares utilizando RAPD-PCR con ADN de cepas de F hepatica sensibles o
resistentes al triclabendazol en el valle de Fiambalaacute presentaron diferencias significativas
entre ellas las cuales podriacutean ser uacutetiles en la deteccioacuten de cepas de campo de F
hepatica resistentes al triclabendazol (Scarcella et al 2011) Los resultados obtenidos
son altamente indicativos de la presencia de F hepatica TCBZ-resistente en animales del
valle de Fiambalaacute
Tal como lo proponen Olaechea et al (2011) las estrategias para minimizar el desarrollo
de resistencia antiparasitaria necesitan incluir el uso de combinaciones sineacutergicas de
drogas junto con el disentildeo de programas integrados de manejo y la buacutesqueda de
alternativas a los faacutermacos en particular las vacunas (Fairweather y Boray 1999)
Melero et al (1991) por primera vez en el paiacutes utilizaron triclabendazol para un
tratamiento humano en la ciudad de Coacuterdoba y a partir de ese caso se indica como
droga de eleccioacuten en las personas enfermas de Fasciolosis Se cuenta con una amplia
revisioacuten sobre el uso de TCBZ en el control de la Fasciolosis (OMS 2006) donde se
alerta sobre la gravedad que la resistencia al faacutermaco demostrada en animales se
presente en humanos especialmente en nintildeos (Hillyer et al 2001)(Esteban et al 2002)
A pesar que en diciembre de 1997 el Comiteacute de Expertos de la Organizacioacuten de las
Naciones Unidas (ONU) recomendoacute incluir al triclabendazol en la lista de drogas
esenciales (Savioli et al 1999) el triclabendazol de uso veterinario ha sido utilizado en
Argentina para el tratamiento de la Fasciolosis humana mostrando una buena eficacia y
tolerabilidad con escasos efectos adversos (Jave et al 1999)
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103 - EN LOS LIMNEIDOS
Lymnaea viator era la uacutenica especie involucrada en la transmisioacuten de F hepatica en la
provincia de Catamarca Bacigalupo la citoacute por primera vez en 1939 al encontrarla en los
alrededores de la ciudad de San Fernando del Valle En la deacutecada de 1980 fue
reconocida en trabajos arqueoloacutegicos realizados por Morton (1986) en el departamento
Santa Mariacutea mientras Ubaid (1989) la halloacute en el departamento Pacliacuten y en este estudio
en el valle de Fiambalaacute En los restantes departamentos donde se presenta la infeccioacuten
por F hepatica se desconoce queacute especie de limneido actuacutea como hospedador
intermediario ya que no se han llevado a cabo estudios epidemioloacutegicos integrales y la
prevalencia de Fasciolosis en el ganado bovino es estimada sin corroborar los datos en
los decomisos de hiacutegados en mataderos municipales
Desafortunadamente la mayoriacutea de las especies de limneidos presentan un fenotipo
similar con caracteriacutesticas morfoloacutegicas y morfomeacutetricas que hacen muy difiacutecil su
diferenciacioacuten lo que a veces incluso impide su clasificacioacuten La similitud morfoloacutegica
puede ser consecuencia para Bargues et al (2012) de una evolucioacuten convergente hacia
la adaptacioacuten a un comportamiento anfibio
1031 - Caracteriacutesticas fenotiacutepicas
El estudio fenotiacutepico realizado en el valle de Fiambalaacute ha demostrado que en la
variabilidad intraespeciacutefica de L neotropica y L viator existe superposicioacuten en todas las
caracteriacutesticas de la conchilla con excepcioacuten de la longitud maacutexima que puede ser maacutes
larga en L viator Desafortunadamente no hay ninguna conclusioacuten definitiva sobre esta
caracteriacutestica potencialmente diferente dependiendo del crecimiento de la conchilla
Ademaacutes las dos especies coexisten en las mismas colecciones de agua recordando una
situacioacuten similar que Mera y Sierra (2010) encuentra en muchos lugares de la provincia
de Mendoza donde hay superposicioacuten de especies Tambieacuten para Bargues et al (2011 a)
un fenoacutemeno que lleva a la confusioacuten entre los limneidos se debe a la imposibilidad de
distinguir entre especies y a las repercusiones para la transmisioacuten de la enfermedad
atribuidas a L truncatula y L schirazensis
Se presentan en Catamarca varias zonas endeacutemicas de Fasciolosis animal en las que no
se conoce la especie de limneido involucrada En algunos departamentos o regiones
donde pueden coexistir varios caracoles intermediarios no se sabe cuaacutel es el principal y
cuaacutel el potencial tal como Iturbe y Muntildeiz (2012) demuestran que ocurre en Cuzco Peruacute
En el valle de Fiambalaacute como biotopo de colecta se halloacute ademaacutes L neotropica que
adquiere importancia en la dispersioacuten geograacutefica y colonizacioacuten de nuevas poblaciones
de limneidos introducidos en Argentina
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1032 Importancia de las influencias ambientales
A diferencia de lo que sostienen Pino et al (1995) las condiciones climaacuteticas de la zona
de estudio que podriacutean parecer desfavorables a la presencia de limneidos (escasos diacuteas
de lluvia y temperatura maacutexima elevada) es relevante sentildealar la importancia de las
condiciones micro climaacuteticas para el desarrollo del ciclo bioloacutegico del trematodo
Para Malone et al (1998) la asociacioacuten entre la proporcioacuten de casos de Fasciolosis y la
zona de estudio estaacute relacionada con la temperatura del lugar En la mayoriacutea de las
regiones donde la enfermedad se presenta el ciclo de vida se completa maacutes raacutepidamente
porque las temperaturas pueden ser ideales para el raacutepido desarrollo del paraacutesito en su
hospedador intermedio mientras que en otras regiones pueden tardar hasta maacutes de un
antildeo para completarlo
Como consecuencia la expresioacuten de la enfermedad y la proliferacioacuten se pueden retrasar
o incluso verse minimizada Conforme a Mas-Coma (2001) las mayores altitudes no son
consideradas negativas y se atribuye a que el terreno montantildeoso presenta depresiones
con acumulacioacuten de agua especialmente en eacutepocas de alta precipitacioacuten que se tornan
las ideales para el haacutebitat del caracol hecho que no pudo demostrarse en este estudio
por sobre los 2800 msnm
La precipitacioacuten como variable es abordada en sus estudios de Fasciolosis por Malone
et al (1998) al sostener que proporciona una condicioacuten adecuada para el haacutebitat de
caracoles Aunque el mayor riesgo de ocurrencia de la enfermedad se produce en
lugares donde el valor de la precipitacioacuten anual es alto asociada con la consiguiente
humedad del suelo en la zona de estudio de esta tesis no se ha visto disminuido el
desarrollo de los caracoles a pesar de un menor volumen de precipitacioacuten
1033 - Estudios en el laboratorio
En el laboratorio las teacutecnicas de criacutea e infeccioacuten experimental de caracoles se mostraron
aptas para el mantenimiento de los moluscos y para la confirmacioacuten como hospedador
intermediario de F hepatica en la regioacuten Son teacutecnicas sencillas simples y que no
requieren muchos cuidados salvo el inconveniente de la contaminacioacuten del medio donde
se los conserva En cuanto a las incubaciones de huevos para la obtencioacuten de miracidios
utilizados en la infeccioacuten de los limneidos se obtuvieron resultados de infeccioacuten
relativamente bajos (no maacutes del 4285)
Para el diagnoacutestico de infecciones de F hepatica en su hospedador intermediario Pointer
et al (2006) utilizan la observacioacuten mediante el examen microscoacutepico de los estadios en
desarrollo dentro del molusco con o sin el aplastamiento del caracol En la tesis se
comprueba que estos procedimientos son tediosos y requieren largas horas de trabajo
ademaacutes de un ojo entrenado en la identificacioacuten parasitaria debido a que las infecciones
en el periacuteodo prepatente (sin emisioacuten de cercarias) son difiacuteciles de identificar Por otra
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parte el miracidio que ingresoacute recientemente soacutelo puede visualizarse mediante cortes
histoloacutegicos La emisioacuten de cercarias utilizada en este trabajo puede ofrecer baja
sensibilidad de deteccioacuten de los estadios tempranos del paraacutesito pero ha demostrado
resultados positivos
Otra dificultad en la deteccioacuten e identificacioacuten del trematode se produce cuando los
caracoles colectados en el campo mueren antes de llegar al laboratorio o durante el
periacuteodo de observacioacuten para la emisioacuten de cercarias La muerte del hospedador
intermediario con la consiguiente lisis tisular hace imposible la observacioacuten de las larvas
que pudieran estar presentes hecho no ocurrido en este estudio ya que el porcentaje de
limneidos muertos fue bajo
1034 - Identificacioacuten microscoacutepica y molecular
Si se considera a la microscopiacutea como la prueba de referencia que arroja los resultados
absolutos (prueba ldquogold standardrdquo) la especificidad para la teacutecnica de PCR utilizada en
esta investigacioacuten resultariacutea baja Seguacuten Cucher et al (2005) esto podriacutea interpretarse
como que la teacutecnica molecular es altamente inespeciacutefica dado el mayor nuacutemero de
positivos obtenidas por la misma Sin embargo la PCR se fundamenta en la identificacioacuten
genoacutemica del paraacutesito dentro del caracol realizando estudios detallados de la secuencia
del amplicoacuten generado y deberiacutea ser considerada tan especiacutefica como la microscopiacutea En
cuanto a la sensibilidad empleando a la microscopiacutea como prueba ldquogold standardrdquo la
PCR detecta la totalidad de los individuos infectados y un mayor nuacutemero de ejemplares
infectados imperceptibles por anaacutelisis directo De acuerdo con Hamburger et al (2004) al
considerar como verdaderos positivos a aquellos caracoles que fueron detectados por
PCR la sensibilidad del anaacutelisis parasitoloacutegico directo seraacute baja debido a que los
estadios larvales dentro del molusco pueden no detectarse Esto demuestra la menor
sensibilidad del anaacutelisis directo frente a la teacutecnica molecular la cual presentoacute un miacutenimo
de deteccioacuten comparable a una porcioacuten de un miracidio mientras que el anaacutelisis directo
se limita a detectar solamente cercarias y en algunos casos redias
Los resultados obtenidos por microscopiacutea oacuteptica son un reflejo del balance entre las
condiciones abioacuteticas que deben enfrentar el paraacutesito y su hospedador intermediario y la
iacutentima relacioacuten que se establece entre ambos una vez que el miracidio logra ingresar al
caracol Esto es asiacute porque ambos organismos son absolutamente dependientes de las
condiciones de humedad y temperatura del medio para poder sobrevivir y cumplir su ciclo
de vida y porque los valores de prevalencia obtenidos por el anaacutelisis directo
corresponden a las infecciones exitosas en las que el paraacutesito logroacute sobrevivir al sistema
de defensa interno del molusco Por lo tanto se infiere que la regioacuten del valle de
Fiambalaacute es apta para el desarrollo de ambos organismos por los factores mencionados
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anteriormente o porque la susceptibilidad del hospedador a la infeccioacuten la infectividad
del trematode o la oferta de paraacutesito son elevadas
En este trabajo se utilizoacute la teacutecnica de microscopiacutea para detectar infeccioacuten en limneidos y
se identificoacute a F hepatica a partir de la morfologiacutea de las redias y cercarias por
considerar que estas teacutecnicas son maacutes econoacutemicas para detectar infeccioacuten en caracoles
provenientes del campo En un todo de acuerdo con Fried (1997) se observoacute que las
cercarias identificadas morfoloacutegicamente como de F hepatica se enquistaron sobre
distintas superficies lo que permitioacute ratificar su identidad ya que las pocas especies de
trematodos que presentan metacercarias con este comportamiento poseen una
morfologiacutea muy distinta a la de F hepatica
El meacutetodo molecular debe ser empleado para detectar infecciones naturales aplicarse en
estudios epidemioloacutegicos a gran escala y para establecer la distribucioacuten geograacutefica del
paraacutesito estudiando nuevas zonas sin reportes de enfermedad Tambieacuten puede aplicarse
a determinar la prevalencia de infeccioacuten El liacutemite de deteccioacuten obtenido puede ser
considerado satisfactorio desde el punto de vista bioloacutegico ya que seguacuten la teacutecnica
desarrollada por Kaplan et al (1995) un umbral de deteccioacuten miacutenimo de 1ng es suficiente
para detectar la presencia de un miracidio a las 4 horas post-infeccioacuten Por lo tanto la
teacutecnica utilizada en esta tesis posee la sensibilidad necesaria para detectar al paraacutesito de
forma temprana en su hospedador intermediario
Aunque la determinacioacuten de la infeccioacuten por microscopiacutea y morfologiacutea posee ciertas
ventajas frente a otras teacutecnicas maacutes modernas como las de PCR ya que permiten
identificar distintos estadios larvales y tambieacuten se pueden reconocer infecciones exitosas
a partir del hallazgo de formas infectivas como lo demostraron Caron et al (2008) la
identidad de las formas inmaduras tambieacuten pudo ser confirmada por PCR
A pesar que Rognlie et al (1996) observaron con respecto al hospedador intermediario
que F hepatica es capaz de propagarse infectando unos pocos caracoles dentro de una
poblacioacuten seguramente debido a su gran capacidad de multiplicacioacuten asexual dentro del
hospedador intermediario los limneidos observados en el laboratorio no presentaron
numerosas formas intermedias que permitieran reconocerlas faacutecilmente
La prevalencia de infeccioacuten natural por F hepatica registrada en limneidos durante el
estudio fue de 25 considerando soacutelo a los caracoles estudiados en el Instituto Malbraacuten
Este nivel de infeccioacuten es similar al 2 registrado en L truncatula en la provincia de
Neuqueacuten por Rubel et al (2005) y en L viatrix en la provincia de Mendoza por Issia et al
(2008) y superior al 07 registrado en L viatrix en los valles Andino-Patagoacutenicos de la
provincia de Chubut por Kleiman et al (2007) o a los 014 y 122 presentados por
Ueta (1980) en Brasil Estos valores estaacuten dentro del rango de variabilidad que presenta
la prevalencia de infeccioacuten natural por F hepatica en su hospedador intermediario que
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para Malone et al (1984) y Rognlie et al (1996) oscila entre 001 y 883 no soacutelo
entre especies de caracoles sino para una misma especie entre regiones como afirma
Gutieacuterrez et al (2005) Esta variabilidad tambieacuten refleja la dificultad para comparar el rol o
la importancia de las distintas especies de limneidos en la transmisioacuten de F hepatica Lo
que siacute es posible afirmar es que con bajas prevalencias en el caracol se observan
prevalencias mayores a 25 en el hospedador definitivo como tambieacuten lo demuestran
Kleiman et al (2007) Rubel et al (2005) y esta tesis lo cual refleja la eficiencia en la
transmisioacuten de F hepatica
Esta comparacioacuten permite concluir que en la zona de estudio Lymnaea spp es un
hospedador intermediario capaz de multiplicar al paraacutesito exitosamente y asegurar la
endemicidad de la infeccioacuten Las caracteriacutesticas que le ayudan a F hepatica a adaptarse
y establecerse exitosamente en ambientes con distintas condiciones son como afirman
DeKock et al (1989) su capacidad para reproducirse por autofecundacioacuten su alto
potencial reproductivo y su tolerancia a un amplio rango de temperaturas como
demostraron Harris y Charleston (1977 c)
1035 - Caracteriacutesticas moleculares
Las secuencias obtenidas demuestran la presencia de L neotropica en el valle de
Fiambalaacute lo que confirma el primer hallazgo de esta especie en Catamarca y en las
provincias del noroeste El hallazgo antildeade complejidad a la transmisioacuten y a la
epidemiologiacutea de Fasciolosis Las caracteriacutesticas ecoloacutegicas de este limneido que vive
en colecciones pequentildeas y superficiales de agua frecuentadas por el ganado sugieren
que puede ser llevado de un lugar al otro permaneciendo en el barro seco de las pezuntildeas
de los animales que las transportan de modo similar a como plantea Mas-Coma et al
(2009) ocurre con L truncatula
L viatrix L truncatula y L neotropica son limneidos muy similares desde el punto de
vista fenotiacutepico incluyendo para Samadi et al (2000) y Pointier et al (2006) las
caracteriacutesticas de la conchilla y la anatomiacutea del caracol o caracteriacutesticas ecoloacutegicas
seguacuten Euzeby (1971) Mera y Sierra (2001) y Ciocco y Scheibler (2008) Esta semejanza
planteoacute un gran problema en el trabajo de campo al no poder tener manera de
diferenciarlos por lo que se recurrioacute a obtener secuencias del marcador de ADN para
poder distinguir entre una y otra especie
Por otra parte el problema de la diferenciacioacuten tambieacuten se refiere a varias teacutecnicas
moleculares que no muestran suficiente precisioacuten Por ejemplo las teacutecnicas moleculares
que se basan en el gen 18S ARNr o partes de eacutel como la heacutelice E10-1 de la regioacuten
variable V2 que es uacutetil para la diferenciacioacuten de limneidos europeos utilizada por
Bargues y Mas-Coma (1997) evidentemente no son uacutetiles en la Argentina debido a la
existencia de especies como L viator y L neotropica que presentan ideacutentica secuencia
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18S En consecuencia la teacutecnica recientemente propuesta por Duffy et al (2009) basada
en la secuencia 18S en estrategia de PCR en tiempo real para la discriminacioacuten raacutepida
entre las principales especies de limneidos de Argentina no se puede aplicar porque no
distingue entre estas dos especies
Todo sugiere que probablemente errores de clasificacioacuten de limneidos se pueden incluir
en varios de los estudios sobre Fasciolosis realizados en Argentina en la que L viator
participa especialmente en la transmisioacuten de la enfermedad Muchos de estos trabajos
probablemente incluiacutean L neotropica o incluso L truncatula Por lo tanto se necesitan
anaacutelisis moleculares apropiados para evaluar la distribucioacuten geograacutefica de cada una de
estas tres especies de limneidos en Argentina para las que aparecen ITS-2 ITS-1 y cox1
como los marcadores maacutes uacutetiles
1036 - Lymnaea neotropica
Las poblaciones de L neotropica del valle de Fiambalaacute presentan secuencias ideacutenticas
para los cuatro marcadores de ADN utilizados incluyendo dos nuevos haplotipos de ITS-
1 y cox1 (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) El nuevo haplotipo ITS-1 (Lneo-HB) no es de
utilidad dada la uniformidad hasta ahora detectada en el nivel de los separadores de
ADNr nuclear Del ITS-1 soacutelo se conoce el haplotipo (Lneo-HA) previamente informado
de Lima (localidad tipo) (Bargues et al 2007 a) y Cajabamba (Bargues et al 2012) en el
Peruacute y tambieacuten en Perdriel Departamento de Lujaacuten de Cuyo Mendoza Argentina (Mera
y Sierra et al 2009) El nuevo haplotipo del marcador de ADN mitocondrial (Lneo-cox1e)
se diferencia de otros haplotipos cox1 descritos para la especie en paiacuteses como Peruacute
Venezuela y Argentina Este uacuteltimo nuevo haplotipo Lneo-cox1e soacutelo muestra identidad
con la secuencia cox1 del NTC2 aislada (JN872453) e informada anteriormente para la
misma especie de limneidos en Mendoza (Standley et al 2013) aunque el fragmento
disponible a partir de ese aislamiento es maacutes corto (655 pb vs 672 pb)
Los haplotipos encontrados en los otros dos marcadores en L neotropica uno en ADNr
ITS-2 (Lneo-H1) y el otro en el ADNmt 16S (Lneo-16SA) fueron informados en Perdriel
(Mera y Sierra et al 2009) Tambieacuten se detectaron estos dos haplotipos ITS-2 y 16S en el
Peruacute en la localidad de Lima (Bargues et al 2007 a) y tambieacuten en Cajamarca (Bargues
et al 2012)
1037 - Lymnaea viator
De L viator se han encontrado en esta investigacioacuten 4 nuevos haplotipos ADNr ITS-2 y
ITS-1 y ADNmt 16S y cox1 (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) La deteccioacuten en la
poblacioacuten de limneidos de un nuevo haplotipo en todos los marcadores estudiados es
realmente sorprendente Previamente en diferentes localidades de Chile Argentina y
Uruguay fueron descritos haplotipos y se aislaron secuencias de los mismos marcadores
de ADN (Veacutease anexo Tablas 16-19 pp 177-180)
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El anaacutelisis de secuencias de los 4 marcadores de ADN de L neotropica y L viator
disponibles en las bases de datos de secuencias muestra que varias secuencias fueron
depositadas sin verificar antes si la misma ya estaba alliacute Por ejemplo en el nivel ITS-2
los nuacutemeros de secuencia de adhesioacuten HQ283265 y JN614465 correspondientes a L
viator de Riacuteo Negro Argentina son ideacutenticos a la secuencia AM412224 de L viator
ventricosa H1 de la localidad tipo que es tambieacuten de Riacuteo Negro (Bargues et al 2007 a)
Del mismo modo el nuacutemero de ITS-1 secuencia de adhesioacuten HQ283254 es ideacutentica a la
secuencia AM412227 de L viator ventricosa HA de la localidad tipo de Riacuteo Negro
(Bargues et al 2007 a) Situaciones similares se encuentran en secuencias de ADNmt tal
como la secuencia de L neotropica 16S JN872473 que es ideacutentica a HE610433 y que es
el haplotipo Lneo-16SA de la localidad tipo de la especie (Bargues et al 2012) Tambieacuten
la secuencia cox1 de L viator nuacutemero JN614397 de Riacuteo Negro es ideacutentica a AM494010
de Lvia-cox1a de la localidad de Riacuteo Negro (Bargues et al 2007 a) Ademaacutes las
secuencias depositadas en las bases de datos como pertenecientes a L Viator ITS-1
(JF960165 y JF960166) en realidad pertenecen a L neotropica aunque la adscripcioacuten de
las especies fue corregida en la publicacioacuten (Sanabria et al 2013)
Desde el punto de vista taxonoacutemico-sistemaacutetico hay que sentildealar que estas 2 especies de
limneidos han sido re-atribuidas al geacutenero Galba en la literatura reciente (Standley et al
2013) Este cambio parece ser precipitado dadas las diferencias en los acuerdos de rama
que aparecen en diferentes aacuterboles filogeneacuteticos en funcioacuten de las especies incluidas en
los anaacutelisis (ver Bargues et al 2011 a) Por lo tanto ambas especies se mantienen aquiacute
en el geacutenero Lymnaea sensu lato conforme a artiacuteculos anteriores sobre el mismo tema
(Bargues et al 2007 a 2011 a b c 2012)
El hallazgo de un alto nuacutemero inusual de haplotipos de ADN en ambas especies de
limneidos y los factores climaacuteticos extremos (casi total falta de precipitaciones y de
humedad) impropio de F hepatica y del desarrollo de los caracoles de agua dulce
demuestran que los focos de transmisioacuten son completamente aislados A su vez se
puede concluir que tanto los limneidos como F hepatica llegaron al valle a traveacutes de la
introduccioacuten de ganado Por otra parte las diferencias de ADN en relacioacuten con otras
poblaciones de L neotropica y de L viator estudiadas previamente en Argentina
sugieren que este fenoacutemeno de introduccioacuten fue independiente de los movimientos de
extensioacuten que permitieron que estas dos especies de limneidos se expandan por el paiacutes
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CONCLUSIONES
Los hallazgos del estudio sobre la epidemiologiacutea de la Fasciolosis realizado en el valle de
Fiambalaacute y los correspondientes anaacutelisis en seres humanos animales y hospedadores
intermedios han permitido establecer ciertos hechos y alcanzar una serie de conclusiones
que a continuacioacuten se enumeran
La endemia poblacional de Fasciolosis estariacutea determinada por los siguientes
factores a) la presencia de reservorios en animales infectados b) los caracoles
limneidos susceptibles (hospedadores intermediarios) que amplifican la
produccioacuten de cercarias
El nuacutemero de casos de Fasciolosis humana diagnosticados en el valle de
Fiambalaacute es mucho mayor que los encontrados en otras regiones del paiacutes
transformaacutendola en una zona endeacutemica donde los ejemplares de F hepatica y los
hospedadores intermedios presentan caracteriacutesticas morfoloacutegicas y moleculares
particulares
Debido a la importancia cliacutenica y patogenicidad de la Fasciolosis los anaacutelisis de
prevalencia obtenidos permiten concluir que la presencia de Fasciolosis humana
debe ser considerada como una patologiacutea infecciosa de gran importancia en
Salud Puacuteblica
La prevalencia en seres humanos obtenida mediante estudios inmunoloacutegicos
convierten a la regioacuten estudiada en la de prevalencia maacutes elevada de la Repuacuteblica
Argentina y debe ser considerada como hiperendeacutemica
La comparacioacuten de diferentes metodologiacuteas de diagnoacutestico permite afirmar que
con la teacutecnica de ELISA se logroacute el mayor nuacutemero de diagnoacutesticos demostrando
relaciones estadisticamente significativas con la edad y la eosinofilia
El presente estudio sobre la epidemiologiacutea de la Fasciolosis humana abarcoacute 305
pacientes siendo la mayor casuiacutestica estudiada en Argentina y reveloacute una mayor
predominancia en la edad comprendida entre 5 y 19 antildeos
El dolor abdominal tipo coacutelico en epigastrio e hipocondrio derecho es el siacutentoma
maacutes frecuente en Fasciolosis ya sea en la fase aguda o croacutenica de la
enfermedad tanto en nintildeos como en adultos
La hepatomegalia y la eosinofilia caracteriacutesticas de la fase aguda no estaacuten
presentes necesariamente en todos los pacientes croacutenicos por lo que su ausencia
no descarta la posibilidad de esta parasitosis en estos casos
La interpretacioacuten de las manifestaciones cliacutenicas el uso de teacutecnicas de
diagnoacutestico por imaacutegenes la aplicacioacuten de meacutetodos de diagnoacutestico etioloacutegico
mediante microscopiacutea en materiales de heces y el uso de herramientas aplicadas
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a diferentes especiacutemenes bioloacutegicos permitieron mediante su utilizacioacuten
sistemaacutetica e integrada realizar el diagnoacutestico e identificacioacuten de Fasciolosis
El estudio ha estimado por primera vez en la provincia de Catamarca una alta
prevalencia de Fasciolosis en la poblacioacuten animal -cameacutelidos sudamericanos
mulares y rumiantes menores- con la teacutecnica de SDSS que permitioacute una faacutecil
identificacioacuten de huevos en heces
El uso integrado de diversas teacutecnicas microscoacutepicas permitioacute una mejor
comprensioacuten de la morfologiacutea de F hepatica Los resultados demostraron
diferencias en las muestras de cada localidad principalmente en la distribucioacuten y
cantidad de espinas en el tegumento
El marcador CO1 muestra que los ejemplares adultos extraiacutedos de hiacutegados de los
animales no se diferencian de otros en las comparaciones efectuadas en distintas
localizaciones
El uso de faacutermacos antihelmiacutenticos es la uacutenica herramienta que se dispone en el
presente frente a Fasciolosis aunque el fenoacutemeno de resistencia encontrado es
un hecho altamente preocupante y es necesario definir nuevas estrategias de
tratamiento
Por los resultados obtenidos se concluye que las condiciones ambientales a
pesar de sus caracteriacutesticas extremas en el valle de Fiambalaacute son favorables
para la mantencioacuten y desarrollo de los caracoles en las zonas donde se localizan
fuentes permanentes de agua
Las teacutecnicas de criacutea e infeccioacuten experimental se mostraron aptas para el
mantenimiento del molusco en el laboratorio y para la confirmacioacuten de la infeccioacuten
natural y experimental de los limneidos con formas larvarias de F hepatica
La prevalencia general de limneidos naturalmente infectados en colectas
realizadas en las vegas estudiadas denota la expansioacuten de F hepatica en el valle
de Fiambalaacute a niveles preocupantes
Las especies de limneidos halladas no se diferencian por su aspecto externo
(morfologiacutea de la conchilla) y fueron necesarios estudios moleculares para
diferenciarlos
Se demostroacute que los caracoles recolectados en la zona de estudio hospedadores
intermediarios de F hepatica son de las especies L viator y L neotropica las
que cohabitan en los mismos biotopos
El hallazgo de L neotropica constituye el primer registro en Catamarca y la
Regioacuten Noroeste Argentina
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La infeccioacuten natural por F hepatica en L neotropica constituye el primer
reconocimiento para la Argentina
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RECOMENDACIONES
Las soluciones para los problemas mencionados no pueden ser pensadas desde una
perspectiva uacutenica ni desvinculada del aacutembito regional La situacioacuten hallada en el aacuterea
indica que para el estudio de Fasciolosis es imperioso el trabajo en equipos
multidisciplinarios que aborden el tema desde un enfoque integral
Es necesario contar en los Centros de Salud con teacutecnicas de diagnoacutestico de mayor
sensibilidad y especificidad tanto para la cliacutenica para determinar casos agudos o como
prueba de tamizaje La ausencia de implementacioacuten de meacutetodos diagnoacutesticos confiables
en el Aacuterea Programaacutetica es el principal factor que lleva a subestimar esta zoonosis
Los enfermos infectados por F hepatica muchas veces pasan por los servicios cliacutenicos
sin ser jamaacutes diagnosticados resultando preciso corregir tan grave deficiencia Los
pacientes que presentan dolor abdominal y una alta eosinofilia deben ser
cuidadosamente estudiados con el fin de descartar esta parasitosis
Se comproboacute que Fasciolosis es endeacutemica en la regioacuten y la situacioacuten debe ser
reconocida como una emergencia de Salud Puacuteblica para la aplicacioacuten de las teacutecnicas
diagnoacutesticas de sedimentacioacuten raacutepida y ELISA y agilizar la implementacioacuten de la terapia
farmacoloacutegica con triclabendazol (Egatenreg) o el uso de futuras drogas en casos de
resistencia
Por otro lado aunque no es propoacutesito de esta tesis es difiacutecil estimar el impacto
econoacutemico de la Fasciolosis humana -que se demostroacute afecta principalmente a los nintildeos-
pero los efectos de la infeccioacuten y las secuelas no solo tienen un impacto econoacutemico en el
Sistema de Salud sino tienen un impacto negativo considerable en el desarrollo y la
salud de los pacientes infectados especialmente en los grupos etarios maacutes joacutevenes
La informacioacuten obtenida contribuye a identificar el riesgo en la regioacuten y deberiacutea permitir
en adelante dirigir las actividades de prevencioacuten y control asiacute como estimular al personal
de salud en la buacutesqueda de este diagnoacutestico durante su actividad asistencial
La infeccioacuten por F hepatica afecta significativamente tanto a los animales como al ser
humano en esta regioacuten y se requiere que las autoridades de los Ministerios
correspondientes tengan una mayor participacioacuten en el control de esta parasitosis tanto
desde el punto de vista educativo como para controlar el efecto que tienen los animales
como hospedadores definitivos en la diseminacioacuten de la Fasciolosis puesto que estaacuten
expuestos a constante reinfeccioacuten
Para tratar de interrumpir la transmisioacuten de la Fasciolosis en los seres humanos se
requieren dos medidas paralelas La primera consiste en establecer programas eficaces
de Salud Puacuteblica Veterinaria para contener las fuentes de infeccioacuten en los animales La
segunda consiste en educar a las personas que viven en las aacutereas endeacutemicas sobre los
riesgos de consumir las plantas acuaacuteticas no cocidas agua y sobre la importancia de la
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eliminacioacuten segura de los desechos humanos Ademaacutes se propone gestionar
calentadores solares individuales que permitan en cada vivienda obtener agua hervida
para consumo e higiene de vajillas y verduras
Se precisa el control de la Fasciolosis animal que concurrentemente incluya el
tratamiento masivo del ganado para evitar la infeccioacuten humana Los resultados sugieren
que de no contar con planeamientos estrateacutegicos teacutecnicamente bien estructurados la
probabilidad de emergencia de paraacutesitos resistentes a triclabendazol es alta y deberiacutea
tratarse a los animales con fasciolicidas alternativos como clorsulon o closantel que han
mostrado alta efectividad de cura de la infeccioacuten La gran dependencia de un uacutenico
faacutermaco pone liacutemites y torna necesarias estrategias de tratamiento de la Fasciolosis En
caso que la resistencia se desarrolle auacuten maacutes la perspectiva seraacute alarmante
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Tabla 11 Caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina de acuerdo con los diferentes sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizados
Foco de transmisioacuten Valle de Fiambalaacute
Coordenadas 27deg29acute52acuteS 67deg35acute 535uml W
Altitud en metros 1630
Clase Koeppen BWk B = Clima aacuterido
D = Deseacutertico
k = Friacuteo
Clima Budyko Deseacutertico Iacutendice de sequiacutea por radiacioacuten 9236 Budyko evaporacioacuten en mmantildeo 151 Budyko escorrentiacutea en mmantildeo 0 Budyko evaporacioacuten en 100 Budyko escorrentiacutea en 0
Aridez Aacuterido Iacutendice de aridez 009 Iacutendice de humedad en -91 Iacutendice De Martonne 6 Deacuteficit de precipitacioacuten en mmantildeo 1547
Iacutendice continental de Gorczynski 385
173
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Tabla 12 Datos comparativos de los tamantildeos obtenidos en ejemplares de F hepatica
del valle de Fiambalaacute con las de diferentes lugares estudiados
Paraacutemetros Catamarca Salta Cordeiro Larvas Galicia
Largo del cuerpo (mm) Ancho del cuerpo (mm)
2438 plusmn 223
1044 plusmn 129
1492 plusmn 182
878 plusmn 080
2068 plusmn 268
1073 plusmn 186
3447 plusmn 337
1233 plusmn 206
1625 plusmn 20
971 plusmn 125
Razoacuten LCAC Largo del cono(mm) Ancho del cono (mm) Aacuterea de la ventosa oral(mm) Aacuterea de la ventosa ventral(mm) Distancia VO- VV (mm)
237 plusmn 034
261 plusmn 030
343 plusmn 046
041 plusmn 007
110 plusmn 036
214 plusmn 022
171 plusmn 022
180 plusmn 023
285 plusmn 032
042 plusmn 004
120 plusmn 015
139 plusmn 018
196 plusmn 031
314 plusmn 085
250 plusmn 063
039 plusmn 006
090 plusmn 037
144 plusmn 021
286 plusmn 048
365 plusmn 060
481 plusmn 035
046 plusmn 016
120 plusmn 018
258 plusmn 020
------------------
174 plusmn 025
317 plusmn 032
041 plusmn 012
098 plusmn 028
------------------
L viator
17
4
Tabla 13 ADN ribosomal nuclear y haplotipo de ADN mitocondrial para la identificacioacuten de coacutedigo L neotropica y L viator colectados en el
valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina
Especies de limneidos
Poblaciones ADNr ITS-2 ADNr ITS-1 ADNmt 16S ADNmt cox1
Lugar H Acc No H Acc No H Acc No H Acc No
Valle de Fiambalaacute Tinogasta
Nomenclatura de la combinacioacuten H
L neotropica Provincia de Catamarca 1 AM412225 B KT215347 16S-
A HE610433 e KT215350 Lneo-1B16SAcox1e
Valle de Fiambalaacute Tinogasta
Provincia de Catamarca 3 KT215348 C KT215349
16S-
B KT215352 d KT215351 Lvia-3C16SBcox1d
Nota H = haplotipo = Nuevos haplotipos para las correspondientes especies de limneidos = Haplotipos solamente preliminares debido a la secuencia
del gen incompleto
175
17
5
Tabla 14 Diferencias de nucleoacutetidos encontradas en el fragmento de la secuencia del gen 16S ADNmt de las poblaciones de L neotropica
estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos 16S aislados de la misma especie disponibles en GenBank
L neotropica haplotipos y aislamientos Paiacuteslugar Posicioacuten del Nucleoacutetido Largo GenBank (pb)
33 3333 1667777767 7777 4690124990 1348
L neo-16SA L neo-16SA
L neo-16S Aislada NtS1 L neo-16S Aislada NtS2 L neo-16S Aislada NtS3
L neo-16S Aislada NtS4
Peruacute Lima Cajamarca Argentina Tatoacuten Catamarca
Argentina Mendoza Argentina Mendoza
Argentina Mendoza Chivilcoy
Argentina Chivilcoy
TTCTTGCCCG A--G --
AAAAAAAT T-- Ghellip-- --
CTT TTGT
425 435 429 429 429
431
HE610433 HE610433 JN872471 JN872472 JN872473
JN872474
Nota Posicioacuten = nuacutemeros referidos a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con M EGA 60 = Ideacutenticas - =
Indeles = Trabajo propio Coacutedigos de haplotipos solamente provisionales debido a secuencias incompletas del gen
176
17
6
Tabla 15 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontradas en la secuencia de fragmento ADNmt del gen cox1 de las poblaciones de L
neotropica estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos cox1 y aislamientos de la misma especie disponibles en
GenBank
L neotropica haplotipos
and aislamientos
Paislocalidad Nucleoacutetido posicioacuten Largo (bp)
Amino acido posicioacuten
GenBank
11 1111122222 2222233333 3333333333 4444444444 5555555555 55666666 1122
233334455 5667788912 4788912244 4777701233 4566777899 0222567889 0122335778 88333456 12722
9401392814 7076827676 4469865803 9136968139 5703358113 5369984032 1623132032 68039210 12315823
L neo-cox1a Peru Lima Peru
Cajamarca L neo-cox1b Argentina
Mendoza L neo-cox1c Venezuela
Carabobo L neo-cox1d Venezuela
Falcon L neo-cox1e Argentina
TatonCatamarca
TCAACCGAGT AGTCTTATTT ATTACAAATT ATAAAATTAA CTTAGAGACT ATGATTTTAG GGTCTCGAGA TAATTTTG 672 DIGIGAW F AM494008
helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphellipAhelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 672 S FN356741
helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphellipGhelliphellip TCGhelliphelliphellip hellipGhelliphelliphelliphelliphellip hellipThelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 672 JF461485 TGGTTTTTC TACTACTACA TAAGTGTTCA GCCTTAATC AAThellipTACTA TCTGCATA AAGTAhellipTTTG CTTACACA 672 V JF461486 Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 672 XXXXXXXX
L neo-cox1
aislada NtC3 Argentina Mza
B Aires Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 ---- JN872454
L neo-cox1 aislada NtC2
L neo-cox1
Argentina Mza Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphellipChelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 ---- JN872453 Argentina Mza Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphellipThelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 --V-- JN872452
aislada NtC1
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizadas con MEGA 60 =
Ideacutenticas iquest= Aminoaacutecido indeterminado - = No secuenciado = Trabajo actual Coacutedigos soacutelo provisionales debidos a secuencias incompletas del Haplotipo
del gen
177
L via aislada VxI3 Argentina Lima Mendoza GCTTGC------- ------------------- --------C helliphelliphellip-- -------------- ----------------
L viaventricosa H1 Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT------------- CTCGC helliphellip--
L via aislada LVX3 Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT-------------- CTCGC helliphelliphellip-- GCTTGCTTGC TT-------------- CTCGC hellip hellip helliphellip-------
L viatrix Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT-------------- -------- helliphelliphelliphelliphelliphellip hellip--- ----------------
423 JX536272 451 AM412224 451 JN614465 445 HQ283265
L via aislada VxI1 Argentina Agua Escondido Mza GCTTGCTTGC TT--------------- GCC--- ------------------ ------------------- --------------- 435 JX536268 L via aislada VxI2 Argentina Azufre Mendoza GCTTGCTTGC TTGCTTGCTT -------- --- ----------------- ------------------- ---------------- 416 JX536269 L via aisalda VxI4 Argentina Linero Mendoza - 436 JX536273
17
7
Tabla 16 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia ADNr ITS-2 de L viator en el valle de Fiambalaacute y otros de Argentina
y haplotipos ITS-2 aislados en la misma especie disponibles en el GenBank
L viator haplotipos Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank
y aislamientos (pb)
134444 4444444444 4444444444 4444444444 5555666666 6666777777 8888690223 3333333334 4444444445 5555555556
6789012345 6789012345 1234241130 1234567890 1234567890 1234567890
L via-H3
L via-H2 Argentina Tatoacuten Catamarca
Chile Casa Blanca Valparaiacuteso
-------------------- -------------------- ---- --GTGTTT TATATTATTA TCTTCTTTCT TTTTTTTCTC GCTTGCTT--- ----------------- ------- helliphellip-
436
443 KT215348
JN051366
Nota Posicioacuten = nuacutemeros referidos a posiciones variables obtenidos en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con MEGA 60 =
Ideacutenticas El sombreado corresponde a las posiciones de microsateacutelites - = Supresiones (en el aacuterea de microsateacutelites) = Trabajo actual =
secuencias ITS-2 incompletas en el 3
178
17
8
Tabla 17 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia del ADNr ITS-1 de L viator colectados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de
Argentina y haplotipos ITS-1 y aislamientos disponibles en GenBank
L viator haplotipos y Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank aislamientos
111111222234 1 1111111112 2222222223 3333333334 444446000034277729
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 123451345683278988
(pb)
L via-HA L via-HB L via-HC L viatrix L via Aislada LVX3 L via Aislada Paysandu L via Aislada VxI1 L via Aislada VxI2 L via Aislada VxI3 L via Aislada VxI4
Argentina Rio Negro Chile Casa Blanca Valparaiacuteso
Argentina Tatoacuten Catamarca Argentina Rio Negro Argentina Rio Negro
Uruguay Paysanduacute Argentina Agua Escondido Mendoza Argentina
Azufre Mendoza Argentina Lima Mendoza
Argentina Linero Mendoza
ATCATTAACG AGTAGCAACA CAACATAACC TTACACTCGC ACAAGG----GCC----A
A ATTGTTGA--
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipA ----TTTGA--
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip--------------
A hellip----T---------
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip----TGAC
---------- GAGTAGC A ----TTGA-- ---------- ---------- ---------- ---------------------------------------------------------- -----C----TTGA-- ---------- ---------- - Ahelliphellip ----TTGA--
---------- --------- Ahelliphellip-----ATTGA-
-
568
574 570 568
567 572
560 525 549
550
AM412227
JN051368 KT215349 HQ283254
JN614428 JF960167
JX536268 JX536269 JX536272 JX536273
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con MEGA 60 =
Ideacutenticas El sombreado corresponde a la posicioacuten de microsateacutelites - = Supresiones = Trabajo actual = ITS-2 secuencias incompletas 5 final
179
17
9
Tabla 18 Diferencias de nucleoacutetidos que se encuentran en la secuencia del gen ADNr 16S y fragmentos del gen
mitocondrial de L neotropica y L viator estudiados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y haplotipos 16S
aislados en la misma especie disponibles en el GenBank
L neotropica y Viator haplotipos y Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank aislamientos (pb)
11112 233333333 116667 77777823394 607777778
346890 12345096982 122345681
L neotropica haplotipo L neo-16SA L neotropica haplotipo L neo-16SA
G neotropica aislado NtS1 G neotropica aislado NtS2 G neotropica aislado NtS3 G neotropica aislado NtS4
Peruacute Lima Peruacute Cajamarca Argentina Tatoacuten Argentina
Mendoza Argentina Mendoza
Argentina Mendoza Chivilcoy
Argentina Chivilcoy
CTTCCTT-GA CCAAG-C-TC GA-T-G -hellip helliphellip--hellip hellip-- hellipAAAAmdashA AA--hellip TT--- G--- --hellip ---- --- helliphellip-- hellip----
C--- helliphellip--T TTTGT
425 437 429 429 429
431
HE610433 HE610433 JN872471 JN872472 JN872473
JN872474
L viator haplotipo Lvia-16SA Chile Casa Blanca Valparaiacuteso --- helliphellipGGATT-C ---- 426 HE610434 L viator haplotipo Lvia-16SB Argentina Tatoacuten Catamarca --- helliphellipGGA-TTC ---- 438 KT215352 G viatrix aislado VxS2 Argentina Agua Escondido amp Azufre Mendoza --- helliphellipGGA-T-C ---- 429 JN872460 G viatrix aislado VxS9 Argentina Cholila Chubut Ghelliphellip--- helliphellipGGA-T-C hellip---- 429 JN872467 G viatrix aislado VxS8 Argentina Linero Mendoza --- GhellipA--T-C ---- 429 JN872466 G viatrix aislado VxS10 Argentina Lima Mendoza hellipChellip--- GhellipA--T-C ---- 429 JN872468 G viatrix aislado VxS4 Argentina Azufre Mendoza AA--- hellipGGA----T-C ---- 429 JN872462 G viatrix aislado VxS12 Argentina Linero Mendoza --- GAGA----T-C hellip---- 429 JN872470 G viatrix aislado VxS6 Argentina Azufre Mendoza GGAC --hellipGGA--T-C TT----- 429 JN872464 G viatrix aislado VxS5 Argentina Azufre Mendoza AAAA GGA--T-C hellip---- 430 JN872463 G viatrix aislado VxS11 Argentina Linero Mendoza GAC --hellipGA--T-C T TT--- 429 JN872469 G viatrix aislado VxS3 Argentina Azufre Mendoza GGhelliphellipGAC --helliphellipGGA-T-C TT---- 429 JN872461 G viatrix aislado VxS7 Argentina Azufre Mendoza hellipCAAAA GGA-T-C -- 430 JN872465 G viatrix aislado VxS1 Argentina Agua Escondido Mendoza GA AhellipGGA-T-CT TTA--- 431 JN872459
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizadas con
MEGA 60 = Ideacutenticas - = Indel = Trabajo actual Coacutedigos de Haplotipos soacutelo provisionales debido a secuencias incompletas del gen
180
1
1234567890 122222 2333334444 45556
1111111112 2222222125 7789212233 4447991678 84882 66666 6666 66666 6677
1234567890 1234567232 2568438905 3464259792 70230 34567 8901 1234567890 693523
18
0
Tabla 19 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontrados en la secuencia del fragmento de ADNmt del gen cox1 de L viator
estudiado en el valle de Fiambalaacute de otros sitios de Argentina y haplotipos cox1 aislados de la misma especie disponibles en el
GenBank
L viator haplotipos y aislamientos
Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Larg o
(pb)
Posicioacuten del aminoaacutecido
1122
1 276922
GenBank
L via-cox1a Argentina Riacuteo Negro ATATTGGTAC TCTATATATA ATCTTTGCCC CCGCTCGATG CCCGTTTCTA CTCTTTGATT TTTT 672 DIGTLYMIFG LSTLWF AM494010 L via-cox1b Chile Casa Blanca Valparaiacuteso T T helliphellipTThelliphellipA helliphelliphellipCCTC CTGChelliphellip hellip 672 helliphelliphellip KC JN051373 L via-cox1c Chile Casa Blanca Valparaiacuteso hellipT helliphelliphelliphellipT helliphellipTThelliphellipA helliphelliphellipCCTC TCTGChelliphellip hellip 672 helliphelliphellip KIC JN051374 L via-cox1d Argentina Tatoacuten Catamarca T T hellipTT TAhelliphelliphelliphellipC 672 hellip F KT215351 L via aislado VxC1 Argentina-Mendoza ---------------- hellipT T TAT helliphelliphellip TAhelliphelliphellipCG ---------- ------- 654 ------helliphellip F-- JN872449 L via aislado VxC2 Argentina-Mendoza ---------------- T helliphelliphelliphellipT TT TAhelliphelliphellipC ---------- ------- 654 ------ F-- JN872450 L via aislado VxC3 Argentina Chubut ---------------- helliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip hellipC hellip ---------- -------- 654 ------ -- JN872451 L via aisladio LVX2 Argentina Rio Negro ------------------ ------------------ -------------------- helliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphellip 644 ------------------ JN614397
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten hecha con MEGA 60 = Ideacutenticas = Am inoaacutecido
indeterminado - = No secuenciado = Trabajo actual El sombreado corresponde a fragmentos maacutes cortos Coacutedigos soacutelo provisionales Haplotipo
debido a secuencias incompletas del gen
181
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Cod Haplotipos y aislamientos paraITS-1 000 000 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 1 KJ425594 L neotropica aislada Zavaliacutea 000 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 2 KJ425590 L neotropica aislada General Loacutepez 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 3 AM412228 L neotropica Lneo-HA 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 4 KJ425591 L neotropica aislada Caseros
1 AM412225 L neotropica Lneo-H1 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 5 J5F960165 L viator aislada San Pedro1 2 KJ425597 L neotropica aislada Zavaliacutea 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 6 KJ425595 L neotropica aislada Caseros 3 KJ425598 L neotropica aislada Caseros 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 7 KJ425593 L neotropica aislada Constitucioacuten 4 KJ425596 L neotropica aislada Constitucioacuten 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 8 KT215347 L neotropica Lneo-HB 5 JF514089 L neotropica Lneo-H2 400 400 400 400 000 100 100 100 000 100 200 100 200 9 AM412227 L viator ventricosa Lvia-HA 6 JN051366 L viator Lvia-H2 1300 1300 1300 1300 1600 100 100 100 000 100 200 100 200 10 HQ283254 L viator 7 JX536268 L viator aislado VxI1 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 000 100 000 100 000 100 11 JN614428 L viator aislada LVX3 8 JX536272 L viator aislado VxI3 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 000 100 000 100 000 100 12 JN051368 L viator Lvia-HB 9 JN614465 L viator aislado LVX3 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 100 000 100 000 100 13 JX536268 L viator aislada VxI1 10 HQ283265 L viator 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 000 100 200 100 200 14 JF960167 L viator aislada Paysanduacute 11 AM412224 L viator Lvia-H1 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 000 000 100 000 100 15 JX536272 L viator aislada VxI3 12 JX536269 L viator aislado VxI2 1400 1400 1400 1400 1700 300 300 400 400 400 400 100 200 16 JX536273 L viator aislada VxI4 13 JX536273 L viator aislado VxI4 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 100 100 100 100 300 100 17 JX536269 L viator aislada VxI2 14KT215348 L viator Lvia-H3 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 100 100 100 100 300 000 18 KT215349 L viator Lvia-HC
Cod Haplotipos y aislamientos para ITS-2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
18
1
Tabla 20 Distancias por pares entre secuencias de haplotipos ITS-2 e ITS-1 aislados de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60
Nota Por abajo de la diagonal = diferencias de caracteres totales a las ITS-2 por encima de la diagonal = diferencias de caracteres totales a las ITS-1 Las
correspondencias del coacutedigo de Haplotipo se enumeran en la Tabla 13
182
18
2
Tabla 21 Distancias por pares entre 16S y secuencias en haplotipos cox1 en aislamientos de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Cod Haplotipo y aislamiento para 16S 000 800 100 000 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 1 HE610433 L neotropica Lneo-16SA 800 100 000 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 2 KT215347 L neotropica Lneo-16SB 900 800 900 1300 1300 1300 1400 1200 1200 1100 1100 1200 1000 1100 1300 1200 1100 3 JN872471 L neotropica aislado NtS1
1 AM494008 L neotropica Lneo-cox1a 100 500 600 600 600 700 500 600 800 600 1100 900 1000 1000 1000 1000 4 JN872472 L neotropica aislado NtS2 2 FN356741 L neotropica Lneo-cox1b 100 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 5 JN872473 L neotropica aislado NtS3 3 JF461485 L neotropica Lneo-cox1c 600 700 1000 1000 1000 1100 900 1000 1200 1000 1100 1300 800 1100 1400 800 6 JN872474 L neotropica aislado NtS4 4 JF461486 L neotropica Lneo-cox1d 7000 7100 7200 000 000 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 7 HE610434 L viator Lvia-16SA 5 KT215350 L neotropica Lneo-cox1e 000 100 600 7000 000 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 8 KT215352 L viator Lvia-16SB 6 JN872452 L neotropica aislado NtC1 100 200 700 7100 100 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 9 JN872460 L viator aisladoVxS2 7 JN872453 L neotropica aislado NtC2 000 100 600 7000 000 100 200 300 300 300 400 400 700 500 500 500 10 JN872467 L viator aislado VxS9 8 JN872454 L neotropica aislado NtC3 100 200 700 7100 100 200 100 100 300 100 600 400 500 700 500 500 11 JN872466 L viator aislado VxS8 9 AM494010 L viatrix ventr Lvia-cox1a 2800 2900 3300 6600 2800 2900 2800 2700 400 200 700 500 600 800 400 600 12 JN872468 L viator aislado VxS10 10 JN051373 L viator Lvia-cox1b 3300 3400 3800 7000 3300 3400 3300 3400 1100 400 700 100 800 800 200 600 13JN872462 L viator aislado VxS4 11 JN051374 L viator Lvia-cox1c 3400 3500 3900 7100 3400 3500 3400 3500 1200 100 700 500 600 800 600 600 14JN872470 L viator aislado VxS12 12 KT215351 L viator Lvia-cox1d 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 500 1200 1300 800 300 100 900 300 15JN872464 L viator aislado VxS6 13 JN872449 L viator aislado VxC1 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 700 1400 1500 200 900 900 300 700 16JN872463 L viator aislado VxS5 14 JN872450 L viator aislado VxC2 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 500 1200 1300 000 200 400 1000 200 17JN872469 L viator aislado VxS11 15 JN872451 L viator aislado VxC3 2900 3000 3400 6600 2900 3000 2900 2800 100 1200 1300 600 800 600 1000 400 18 JN872461 L viator aislado VxS3 16 JN614397 L viator aislado LVX2 2800 2900 3300 6600 2800 2900 2800 2700 000 1100 1200 500 700 500 100 800 19 JN872465 L viator aisladoVxS7
20 JN872459 L viator aisladoVxS1 Cod Haplotipo y aislamiento para cox1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Nota Debajo de la diagonal = diferencias de caracteres totales cox1 por encima de la diagonal = diferencias de caracteres totale s 16S Las
correspondencias del coacutedigo de Haplotipo se enumeran en la Tabla 13
Tabla 22 Promedio de las distancias geneacuteticas entre y dentro de L neotropica y L viator
Grupos
ITS-2
ITS-1
16S
cox1
analizados
L neotropica vs
1515
5790
856
3520
L viator (00354) (01163) (00202) (00554) L neotropica 160 000 (000) 433 1961 (solo) (00040) (00102) (0031) L viator (solo) 139 087 431 753 (0012)
(00035) (00017) (00102)
Nota Se utiliza como modelo de sustitucioacuten de nucleoacutetidos las diferencias totales (ts + tv) y los
meacutetodos p-distancias (entre pareacutentesis) Se muestra la serie de diferencias de base por sitio desde
un promedio de todos los pares de secuencias entre y dentro de grupos Menos del 5 de las
brechas de alineacioacuten los datos que faltan y las bases ambiguas se les permitioacute cualquier
posicioacuten (todas las posiciones con menos del 95 de cobertura de sitio han sido eliminadas)
183
Figura 19 Consentimiento Informado
184
Figura 20 Recoleccioacuten de datos de las viviendas Valle de Fiambalaacute Catamarca
185
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Figura 21 Planilla de recoleccioacuten de datos de las personas Valle de Fiambalaacute
Catamarca Argentina
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Figura 22 Graacuteficas de comparacioacuten de temperaturas promedio mensual en grados
centiacutegrados y precipitacioacuten-aridez entre las localidades de Rio Grande y Tatoacuten
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Figura 23 Diseccioacuten de conductos biliares de un hiacutegado de Lama glama donde se
observan ejemplares de Fasciola hepatica intracanaliculares Valle de Fiambalaacute
Catamarca 2010
Figura 24 Apertura de un conducto biliar intrahepaacutetico en un hiacutegado de Ovis orientalis
aries Se observa un ejemplar de F hepatica colangitis croacutenica con lesiones de la
mucosa biliar hipertrofiada estrecheces inflamatorias fibrosas y piedras Valle de
Fiambalaacute Catamarca 2010
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Figura 25 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino de la provincia de
Salta observadas al microscopio
Nota (A) Cono cefaacutelico VO ventosa oral I ciego intestinal F faringe E esoacutefago C cirro
Ampliacioacuten de 4x (B) Uacutetero lleno de huevos (flechas) C Cirro I ciego intestinal VV ventosa
ventral Aumento 10x
Figura 26 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino del municipio de
Cordeiro RJ Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota Porcioacuten final del cono cefaacutelico que muestra las espinas (flechas) e I ciego intestinal
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Figura 27 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de bovinos de la provincia de Salta
Argentina observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) VO ventosa oral
Figura 28 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado del municipio de Lavras
MG Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota (A B) Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) e I ciego intestinal
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Figura 29 Anaacutelisis filogeneacutetico de F hepatica basado en las secuencias de CO1 FhC01-
CAT-adult
Nota corresponde a la muestra analizada de la zona Las letras y nuacutemeros detraacutes de Fh indican el
nuacutemero de acceso de GenBank de las correspondientes secuencias PwAF219379 corresponde
a Paragonimus westermani CO1 (AF219379) usado como grupo externo El aacuterbol filogeneacutetico se
construyoacute mediante el anaacutelisis de maacutexima verosimilitud utilizando el paquete de
programas PHYLIP
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TRABAJOS CIENTIacuteFICOS A PARTIR DE LA INFORMACIOacuteN GENERADA EN
ESTA TESIS
ANEXO 1121 - TRABAJOS PUBLICADOS
Capiacutetulo de Libro
ldquoFasciolosis o Distomatosisrdquo en ldquoParasitosis Regionalesrdquo Costamagna SR (Compilador)
Editorial de la Universidad Nacional del Sur Red de Editoriales de Universidades
Nacionales Cap 36 419-434
193
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Buacutesqueda Bibliograacutefica de Casos Humanos con
Fasciola Hepatica en Argentina Malandrini J B Carnevale S Soria C C Velaacutesquez J N Molina V E
UNCa Anlis Malbraacuten Hospital Muntildeiz Maestro Quiroga (primera cuadra) 4700-Catamarca brunomalandriniyahoocomar
Bibliographical Search Fasciola hepatica Cases in Humans in Argentina
Summary The case series published in Argentina referred to human cases that presented fasciolosis is scarce As a cause of not being a notificable disease only isolated cases are reported and epidemiological and ecosystem details are not investigated Who detected a case is not required to inform it and on the other hand not all cases diagnosed are published Besides the lack of diagnostic techniques in most health networks complicates the detection of infection and promotes the understated The aim of this study was to report the number of published human cases with fascioliasis in Argentina from 1950 to 2010 It was performed a bibliographical search in the databases of the Science and Technology Secretary in libraries of universities and major scientific institutes of the country There were found presentations of 218 infected people since the first description made in Resistencia Chaco until the publication of cases in Catamarca In discrimination cases female gender (5466) was significantly more frequent than among men Of the total found six patient (4) had an acute process and 144 correspond to chronic illness Six provinces reported sick Catamarca is that with greater number of cases In the bibliographic tonnage carried with exception of some imprecise data in the province of Cordoba the number of diagnosed patients is low Despite the number of total cases reported in the country confirm that it is a secondary or occasional zoonosis and that it does not exist a close relationship between animal and human high incidence the substantial increase in the number of infected warrants a change in category transforming it in a serious public health problem in some regions
Keywords Research Bibliography Humans Fasciola hepatica Argentina
mdash Ciencia Vol 6 Nordm 21 Agosto 2011 Paacutegina 59 mdash
195
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Colecta e Identificacioacuten de Moluscos en la Cuenca
del Riacuteo Abaucaacuten Malandrini J B Soria C C Saldantildeo M B Mozo G M Camantildeo M C Covarrubia N
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa Maestro Quiroga primera cuadra 4700 SFVde Catamarca brunomalandriniyahoocomar
Collection and Identification of Mollusks in Abaucan River
Basin Summary Fasciola hepatica (unca or uncaca) has a digenetic life cycle which means an obligatory intermediate host belonging to the family of freshwater snails Lymnaeidae (Pulmonata Lymnaeidae) at which they develop and multiply the asexual forms This host predominantly in our country is Limnaea viatrix gastropod mollusk amphibian so it prefers soils with humidity The ecology of fasciolosis is closely linked with that of the snails that serve as intermediaries When the miracidia penetrate the foot they head for the liverpaacutencreas where they transform into esporocitos then rediae (first and second generation) and leave as cercariae Physiographic characteristics soil composition and climatic factors determine the rate of reproduction and epidemiological dynamics The aim of this study was to identify snails found in the river Abaucaacuten basin province of Catamarca The study was carried out with mollusks collected in backwaters and wetlands along the river at the height of the ford the road (Medanitos- Taton) where there was a lot of these specimens and domestic animals infected with fluke The specimens were collected by hand and transported to the laboratory in containers with water and mud of the place where they were studied She gathered a sample of 1236 shells The 9150 (n=1131) were identified as the genus Lymnaea spp and 849 (n=105) belonging to the genus Physae spp In those identified as Lymnaea viatrix there were not found infection of intermediate forms of Fasciola hepatica The identification shows the presence of snails involved in the cycle of F hepatica in the study area The spread of the parasite and the increase of fasciolosis in human beings who inhabit the valley make studies needed to relate epidemiological findings
Keywords Mollusks Limnaea Collection Identification Abaucaacuten river
mdash Ciencia Vol 6 Nordm 22 Septiembre 2011 Paacutegina 39 mdash
196
197
198
BIOLOGIacuteA EN AGRONOMIacuteA
Volumen 4 No 1 Marzo de 2014 ISSN 1853-5216 Universidad Nacional de Catamarca Secretariacutea de Ciencia y Tecnologiacutea ‐Editorial Cientiacutefica Universitaria ISSN 1853-5216
FASCIOLOSIS EVALUACIOacuteN DE TEacuteCNICAS PARASITARIAS EN HECES DE ANIMALES CON HIacuteGADOS
DECOMISADOS EN MATADEROS
Martiacutenez M Constanza Malandrini J Bruno Soria Claudia
Caacutetedra de Parasitologiacutea Facultad de Ciencias de la Salud - Universidad Nacional de Catamarca
Avda Belgrano y Maestro Quiroga C P 4700 San Fernando del Valle de Catamarca Argentina
E-mails conimartinez48hotmailcom
Recibido 04072013 Aceptado 07112013
RESUMEN
En la provincia de Catamarca fasciolosis es una enfermedad endeacutemica produciendo un gran dantildeo
econoacutemico de importancia en salud puacuteblica Afecta principalmente a los bovinos presentaacutendose
en sus formas aguda y croacutenica La demostracioacuten microscoacutepica de huevos de Fasciola hepatica en
materia fecal es el principal procedimiento de diagnoacutestico econoacutemico faacutecil de realizar y
sumamente especiacutefico El objetivo del trabajo es determinar las diferencias existentes entre la
presencia del paraacutesito en hiacutegados de animales positivos en las faenas y el valor diagnoacutestico de dos
teacutecnicas coproparasitoloacutegicas utilizadas para demostrar la infeccioacuten en los mismos bovinos Se
estudiaron en los mataderos de los municipios de Andalgalaacute Capital Fiambalaacute El Alto e Icantildeo 13
animales que desde tres meses previos al estudio no recibieron tratamiento fasciolicida Los
hiacutegados fueron decomisados en la inspeccioacuten sanitaria y la materia fecal de esos ejemplares se
recogioacute en frascos con solucioacuten salina formolada al 10 Se identificoacute y transportoacute al laboratorio
Paralelamente se analizaron preparados de 88 muestras de heces por meacutetodo directo y con la
teacutecnica de sedimentacioacuten indicando positividad la deteccioacuten de un solo huevo
En hiacutegados analizados se encontraron formas adultas del paraacutesito y lesiones fibroacuteticas en el
pareacutenquima de las muestras de materia fecal cuatro submuestras resultaron positivas al meacutetodo
directo y 78 al de sedimentacioacuten De los resultados obtenidos se observan limitaciones en la
sensibilidad Para optimizar el diagnoacutestico y evitar los falsos negativos se deberaacuten recoger
muestras fecales en forma seriadas y aumentar el nuacutemero de pruebas cuando presentan
resultados negativos
PALABRAS CLAVE Fasciola hepatica Fasciolosis Diagnoacutestico Coproloacutegico
79
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Elsevier Editorial System(tm) for Acta Tropica Manuscript Draft (En prensa Recibido 30062015)
Title Human fascioliasis endemic areas in Argentina Multigenic phenotypic and environmental characterisation of the snail vectors Lymnaea neotropica and L viator
Article Type Research Paper Keywords Fascioliasis human infection Lymnaea neotropica L viator Lymnaeidae vectors rDNA mtDNA phenotype environment Argentina
Corresponding Author Dra MD Bargues PhD Corresponding Authors Institution University of Valencia First Author MD Bargues PhD Order of Authors MD Bargues PhD J Bruno Malandrini PhD Patricio Artigas PhD Claudia C Soria PhD Jorge N Velasquez PhD Silvana Carnevale PhD Lucia Mateo Master Messaoud Khoubbane PhD Santiago Mas-Coma Prof Dr
Abstract In South America fascioliasis stands out due to the human endemic areas in many countries In Argentina human endemic areas have recently been detected A study was performed in two localities of Catamarca province where lymnaeids were collected in areas described as human endemic (i) locality A beside Taton and Rio Grande villages (ii) locality B close to Recreo town The presence of Lymnaea neotropica and L viator in locality A and of L neotropica in locality B was proved by sequencing of rDNA ITS-2 and ITS-1 and mtDNA 16S and cox1 For the differentiation between these two species ITS-1 shows the highest resolution whereas 16S the less For intraspecific analyses cox1 is the best marker and ITS-1 the worst The intraspecific variability of L neotropica and L viator overlap in all shell features except maximum shell length which may be longer in L viator The desertic-arid conditions surrounding locality A the semiaridity-aridity surrounding locality B and the very low yearly precipitation in both localities are very different from the typical environmental characteristics of fascioliasis transmission foci In these localities lymnaeids are confined to lateral river side floodings and small man-made irrigation systems The two and four new haplotypes in L neotropica and L viator respectively and the extreme climatic factors demonstrate that these transmission foci are isolated environments presenting water availability depending only on the rivers flowing from neighbouring mountains
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ANEXO 1122 - PRESENTACIONES EN CONGRESOS y JORNADAS
4tas Jornadas Universitarias de Ciencias Exactas y Naturales Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca 2009 Presentacioacuten oral
PRESENCIA DE HUEVOS DE PARAacuteSITOS ZOONOTICOS EN VARIAS ESPECIES ANIMALES DE LA LOCALIDAD DE TATOacuteN
Malandrini Jorge Soria Claudia Cecilia Molina Viviana
Mozo Matilde Camantildeo Cecilia Saldantildeo Belen
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa Maestro Quiroga SN 4700- Catamarca brunomalandriniyahoocomar Aacuterea Vinculacioacuten Ciencia Tecnologiacutea y Sociedad
RESUMEN
Casos de parasitosis son observados frecuentemente en las faenas provinciales y en los registros de decomisos en mataderos a su vez el empleo de estudios coproloacutegicos ha mejorado la capacidad de diagnosticar los cuadros El objetivo del presente trabajo fue examinar muestras de materia fecal de distintos animales para reconocer las especies presentes El estudio se llevoacute a cabo en la localidad de Tatoacuten Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia de Catamarca durante los meses de marzo a julio de 2009 Se tomaron muestras de materia fecal (n=78) de animales poli y monogaacutestricos ubicados cerca de las viviendas Las heces se conservaron en recipientes cerrados con solucioacuten salina formolada 5 Para la deteccioacuten se utilizoacute un meacutetodo de sedimentacioacuten en buacutesqueda de Fasciola hepatica con cinco gramos de materia fecal de cada muestra Para el reconocimiento de los huevos se observoacute al microscopio (100x y 400x) La variable fue la presencia de huevos en heces considerando positividad la deteccioacuten de un solo ejemplar con la teacutecnica empleada Se confirmoacute la presencia de distintas especies parasitarias Fasciola hepatica Ascaris suum Oxiuris equi Ostertagia spp Trichuris ovis Haemonchus contortus Trichostrongylus spp Uncinaria stenocephala Toxocara canis y tenias Se hallaron infectadas todas las muestras de materia fecal observadas No se efectuaron recuentos de huevos por gramo
Debates Reflexiones e Interrogantes en la Educacioacuten en Ciencias Antildeo 2009
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca
- 160-
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1er Congreso Nacional de Medicina Tropical Ministerio de Salud Presentacioacuten en
Poster Jujuy 2010
205
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JORNADAS DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE PARASITOLOGIA VETERINARIA
XIX ENCUENTRO RIOPLATENSE DE VETERINARIOS ENDOPARASITOacuteLOGOS ldquoHacia la conferencia mundial de la WAAVP Buenos Aires 2011rdquo
18 al 20 de mayo de 2010
Descripcioacuten de los grupos de Investigacioacuten y Ensentildeanza dependientes de Universidades de Argentina
FASCIOLOSIS UNA ZOONOSIS TRANSMITIDA POR ALIMENTOS DESDE UN ENFOQUE MULTIDISCIPLINARIO DEL EQUIPO DE SALUD
Red de Helmintos Caacutetedra de Anatomiacutea y Fisiologiacutea Animal Comparada Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca Servicio de Inmunologiacutea Parasitaria Departamento de Parasitologiacutea ANLIS ldquoCarlos G Malbraacutenrdquo Hospital de Enfermedades Infecciosas ldquoFrancisco J Muntildeizrdquo MALANDRINI Jorge Bruno CARNEVALE1 Silvana VELASQUEZ2 Jorge Neacutestor SORIA Claudia Cecilia MOLINA1 Viviana Edith MARTINEZ Constanza COVARRUBIA Neacutelida Noemiacute PIZARRO Mariacutea del Carmen Magister en Ciencias de la Salud Meacutedico Veterinario Investigador III Doctora en Ciencias Bioloacutegicas Magister en Epidemiologiacutea Gestioacuten y Poliacuteticas de Salud Bioacuteloga Investigadora Adjunta Conicet Magister en Administracioacuten Sanitaria Meacutedico infectoacutelogo y microbioacutelogo Magister en Tecnologiacutea de Alimentos Licenciada en Bromatologiacutea Bioquiacutemica Meacutedica Veterinaria Licenciada en Bromatologiacutea Bromatoacuteloga Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca Maestro Quiroga sn 4700 - San Fernando del Valle de Catamarca Catamarca Argentina TeFax (54-3833) 441831 e-mail brunomalandriniyahoocomar 1Servicio de Inmunologiacutea Parasitaria Departamento de Parasitologiacutea ANLIS ldquoCarlos G Malbraacutenrdquo Veacutelez Sarsfield 563 Ciudad Autoacutenoma de Buenos Aires Argentina TeFax (54-11) 4301-7437 e- mail silvanaanlisgovcomar 2Hospital de Enfermedades Infecciosas ldquoDr Francisco J Muntildeizrdquo Sala de Hepatopatiacuteas Infecciosas Av Uspallata 2272 Ciudad Autoacutenoma de Buenos Aires (1282) Argentina Te (54-11) 4304-2180 e-mail jorsilspeedycom Aacuterea temaacutetica Ciencias Meacutedicas y Salud
Disciplina Cientiacutefica Parasitologiacutea (Coacutedigo Nordm 1212) Campo de aplicacioacuten Salud Puacuteblica (Coacutedigo Nordm 3237) Categoriacutea Proyecto Orientado Tipo de Actividades Investigacioacuten Aplicada con desarrollo tecnoloacutegico El equipo se conformoacute en 1994 Las necesidades profesionales hicieron necesario integrar un grupo con investigadores provenientes de distintas disciplinas que fue desarrollando estudios epidemioloacutegicos de fasciolosis en Regioacuten del arroyo El Juncal La Toma San Luis 2003
Estudio de foco a partir de un caso humano de fasciolosis en la localidad de Lonco pueacute Neuqueacuten Argentina 2003 Estudio de foco para un caso de fasciolosis humana en Neuqueacuten Argentina 2005 Confirmacioacuten etioloacutegica de un brote de distomatosis hepaacutetica en Mendoza 2006 Diagnoacutestico de Fasciola hepatica con la teacutecnica de ELISA en el Departamento de Tinogasta Catamarca 2006-2009 Actualmente se lleva a cabo un estudio observacional transversal y cuantitativo utilizando datos primarios Para el anaacutelisis de fasciolosis hepaacutetica en las distintas especies se emplean meacutetodos de diagnoacutestico inmunoloacutegicos parasitoloacutegicos y cliacutenicos El trabajo se decidioacute continuarlo en la provincia de Catamarca debido a la previa aparicioacuten de casos humanos y la alta prevalencia de fasciolosis detectada no soacutelo por la inspeccioacuten veterinaria en la faena de ganado bovino en mataderos y frigoriacuteficos que trabajan con control profesional sino tambieacuten en situaciones de campoEl universo de estudio comprende a) Poblacioacuten humana que habita el valle de Fiambalaacute b) Ganado bovino ovino caprino equino porcino y cameacutelidos sudamericanos
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JORNADAS DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE PARASITOLOGIA VETERINARIA
XIX ENCUENTRO RIOPLATENSE DE VETERINARIOS ENDOPARASITOacuteLOGOS ldquoHacia la conferencia mundial de la WAAVP Buenos Aires 2011rdquo
18 al 20 de mayo de 2010
c) Plantas acuaacuteticas de consumo humano presentes en los cursos de agua para la buacutesqueda de metacercarias d) Caracoles compatibles con el geacutenero Lymnaea para su determinacioacuten taxonoacutemica estudio de la emisioacuten de cercariacuteas y verificacioacuten de la infeccioacuten e) Agua de riacuteos arroyos Agua de consumo en las viviendas El ensayo de ELISA y micro-ELISA para la deteccioacuten de anticuerpos anti-rproCL1 de F hepatica
en humanos se desarrolloacute y fue puesto en praacutectica desde 2001 La teacutecnica de ampliacioacuten en cadena de la polimerasa fue desarrollada para determinar la infeccioacuten por Fasciola hepatica en caracoles del geacutenero Lymnaea con infeccioacuten natural utilizada posteriormente para comparar el anaacutelisis directo con el molecular y diagnoacutesticos por PCR en caracoles Lymnaea columella y Lymnaea viatrix colectados
Los avances del grupo de trabajo incluyen
- Clonado expresioacuten y produccioacuten de antiacutegeno recombinante procatepsina L1 de Fasciola hepatica en vector procarionte Resp Carnevale S Participan Malandrini J Soria C - Desarrollo del ensayo inmunoenzimaacutetico empleando el antiacutegeno recombinante para la deteccioacuten
de fasciolosis en hospedadores definitivos (humanos y ganado) Resp Carnevale S Participan Velaacutesquez J Martiacutenez C Malandrini J - Desarrollo de un meacutetodo molecular basado en la amplificacioacuten geacutenica utilizando como blanco el gen de la subunidad 1 de la citocromo c oxidada de F hepatica para la identificacioacuten en hospedadores intermediarios Carnevale S Participan Soria C Covarubia N Pizarro MC - Aplicacioacuten de las metodologiacuteas desarrolladas y de meacutetodos de deteccioacuten directa en aacutereas endeacutemicas mediante estudios transversales Malandrini J Participan Velaacutesquez J Soria C - Desarrollo de reactivos parasitarios Resp Carnevale S Participan Molina V Pizarro MC - Estudios epidemioloacutegicos Resp Malandrini J Participan Soria C Velaacutesquez J Covarrubia N
Martiacutenez C
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23rd International Conference of the World Association Advancement Veterinary
Parasitology (waapv) Presentacion en poster Buenos Aires 2011
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23rd International Conference of the World Association Advancement Veterinary
Parasitology (waapv) Presentacion en poster Buenos Aires 2011
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VII Jornadas Universitarias de Ciencias Exactas y Naturales VII Jucen - Educacioacuten en
Ciencias y Tecnologiacutea 2012 Modalidad oral
Buacutesqueda de caracoles intermediarios del ciclo de Fasciola hepatica en
Tinogasta
Tomassi Carla A Soria Claudia C Malandrini Jorge B Facultad de Ciencias de la Salud-UNCa Maestro Quiroga sn 4700-Catamarca carla_cat1991hotmailcom
Los moluscos constituyen el segundo de los Phyla maacutes numerosos en especies luego de los artroacutepodos
Desde el mar colonizaron ambientes salobres y dulceacuiacutecolas soacutelo los caracoles (gasteroacutepodos) invadieron
el medio terrestre Le han brindado al hombre una serie de beneficios tales como alimento herramientas
medicina Contrariamente la malacofauna acarrea tambieacuten efectos perjudiciales a la Salud Puacuteblica (hombre
y ganado) enfermedades zoonoticas y especies invasoras
Caracoles de la familia Lymnaeidae son hospedadores intermediarios de Fasciola hepatica Linneo
(Trematoda Digenea Fasciolidae) por ello el objetivo del trabajo fue identificar las especies de moluscos
encontrados en el valle de Fiambalaacute
El estudio se lleva a cabo con ejemplares recolectados en remansos y vegas a orillas de riacuteos los lugares
escogidos para la buacutesqueda se escogieron de aquellos donde previamente se diagnosticaron animales con
infecciones naturales de Fasciola hepatica
Los especiacutemenes colectados (N 256) en forma manual en los causes de agua del Riacuteo Abaucaacuten y afluentes
(27ordm30acuteS 67ordf35acuteO) entre los meses de octubre y noviembre se transportan en envases plaacutesticos rotulados
con un algodoacuten huacutemedo hasta el laboratorio El material se fijoacute en alcohol 70 y la identificacioacuten de la
especie se realiza en base a las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla y oacuterganos internos
El reconocimiento de conchillas pequentildeas alargadas lisas con estriacuteas longitudinales muy apretadas dextro
compuestas por cinco anfractos muy convexos separados por una sutura profunda permitieron la
identificacioacuten de los gasteroacutepodos como pertenecientes a los limneidos
Palabras clave Buacutesqueda Limneidos Fasciola hepatica Tinogasta
Eje temaacutetico Desarrollo del pensamiento cientiacutefico
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
VARIABILIDAD GENEacuteTICA INTRAESPECIacuteFICA DE FASCIOLA HEPATICA
EN ARGENTINA
Silvana Carnevale1 Laura Kamenetzky2 Jorge Bruno Malandrini3 Mariacutea Laura
Pantano1 Marcela Larroza4 Claudia Cecilia Soria3 Olga Edith Feres Escaacutendar1
Jorge Neacutestor Velaacutesquez5
1ANLIS ldquoDr Carlos G Malbraacutenrdquo 2IMPaM UBA-CONICET 3Universidad Nacional de Catamarca 4INTA Bariloche 5Hospital de Infecciosas ldquoDr F J Muntildeizrdquo Argentina
e-mail jorgeysilvanaspeedycomar
Fasciola hepatica es un trematode que presenta variabilidad intraespeciacutefica en aislamientos de diferentes regiones del mundo Objetivo Analizar los haplotipos de F hepatica
circulantes en distintas regiones de Argentina Materiales y meacutetodos Se obtuvieron adultos
del paraacutesito de hiacutegados bovinos naturalmente infectados de las provincias de Salta
Catamarca y Riacuteo Negro Se conservaron en etanol 70ordm y se procesaron para la extraccioacuten de
ADN empleando kit comercial Se llevaron a cabo reacciones de PCR para la
amplificacioacuten del marcador molecular correspondiente al gen
mitocondrial de la subunidad 1 de la citocromo c oxidasa (COI) Los amplicones obtenidos
se secuenciaron automaacuteticamente Las filogenias fueron reconstruiacutedas utilizando el
algoritmo de maacutexima parsimonia implementado en el programa PAUP los aacuterboles se
obtuvieron mediante 1000 reacuteplicas bootstrap La adicioacuten de secuencias fue al azar con 5
repeticiones Resultados El anaacutelisis de las secuencias de CO1 mostroacute diferencias en las
muestras de las tres provincias analizadas La muestra de Salta resultoacute ideacutentica a otras
analizadas previamente de las provincias de Catamarca y San Luis correspondiendo al
grupo FhAJ6280346 FhJF82467124 FhAJ628035 FhGQ231551 Fh628039 Para la
muestra de Riacuteo Negro se observoacute un polimorfismo propio no descripto en las secuencias
actualmente disponibles en el GenBank La muestra de Catamarca fue ideacutentica a las
secuencias descriptas FhAJ628035 FhJF824674 Conclusiones El marcador CO1 permitioacute
diferenciar adultos de las tres localizaciones Se analizaraacuten maacutes ejemplares para verificar si
los polimorfismos son poblacionales o individuales
Palabras clave Fasciola hepatica anaacutelisis filogeneacutetico haplotipo
Financiamiento ANLIS Mundo Sano
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
DESARROLLO DE UN MEacuteTODO DE AMPLIFICACIOacuteN GEacuteNICA PARA EL
DIAGNOacuteSTICO DE FASCIOLOSIS EN HOSPEDADORES DEFINITIVOS
Mariacutea Laura Pantano1 Silvana Carnevale1 Laura Kamenetzky2 Jorge Bruno
Malandrini3 Claudia Cecilia Soria 3 Vanesa Raquel Bastin1 Jorge Neacutestor Velaacutesquez4
1ANLIS ldquoDr Carlos G Malbraacutenrdquo 2IMPaM UBA-CONICET 3Universidad Nacional de
Catamarca 4Hospital de Infecciosas ldquoDr F J Muntildeizrdquo Argentina
e-mail jorgeysilvanaspeedycomar La fasciolosis es una zoonosis parasitaria distribuida mundialmente que causa severas
peacuterdidas econoacutemicas en el ganado Objetivo Desarrollar un meacutetodo de PCR para la
identificacioacuten de Fasciola hepatica en muestras de heces de ovinos Materiales y meacutetodos
Se emplearon 19 muestras de ovinos infectados (examen coproparasitoloacutegico positivo) y
11 muestras negativas para F hepatica 6 de ellas con coccidios yo nematodes
gastrointestinales recolectadas en solucioacuten salina formolada 5 Se emplearon 2 g de
muestra lavados con solucioacuten fisioloacutegica y concentrados por centrifugacioacuten con eacuteter para la
purificacioacuten de ADN Se ensayaron protocolos manuales y empleando kits comerciales
seleccionando procedimientos estaacutendar de lisis proteoliacutetica extraccioacuten con fenol-
cloroformo y precipitacioacuten etanoacutelica La teacutecnica de PCR se llevoacute a cabo utilizando primers
con el fin de amplificar un fragmento del gen mitocondrial de la subunidad 1 de la
citocromo c oxidasa (CO1) con tamantildeo esperado de amplicoacuten de 405 pares de bases Se
determinoacute el liacutemite de deteccioacuten empleando cantidades conocidas de ADN de adultos
Resultados La teacutecnica de PCR permitioacute la deteccioacuten de todas las muestras positivas y no
se obtuvieron productos de amplificacioacuten con muestras negativas ni parasitadas con otros
organismos Los primers fueron analizados tambieacuten con las secuencias disponibles en
banco de otros trematodes de ovinos mostrando especificidad El liacutemite de deteccioacuten
resultoacute de 5 pg de ADN de F hepatica Conclusiones El meacutetodo de PCR resulta una
herramienta sensible y especiacutefica para la deteccioacuten de ADN de F hepatica en heces de
hospedadores definitivos Palabras clave Fasciola hepatica PCR ADN
Financiamiento ANLIS Mundo Sano UNCa
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III Congreso Internacional de Educacioacuten en Ciencia y Tecnologiacutea 5deg Congreso de Educacioacuten en Ciencia y Tecnologiacutea Facen - UNCA 2013
Estudio comparativo de teacutecnicas para la obtencioacuten de cuerpos de
caracoles de la Familia Lymnaidae (Gasteropoda Pulmonata) para su
identificacioacuten taxonoacutemica en la provincia de Catamarca
Tomassi CA Soria CC Malandrini JB Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
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Fasciolosis es una zoonosis parasitaria con un ciclo de vida donde participa como
hospedero intermedio un caracol de agua dulce Los moluscos de la Familia Lymnaeidae
(Gasteroacutepoda Pulmonata) modelan la transmisioacuten de Fasciola hepatica de acuerdo a la
especie de caracol involucrado L viator fue considerado durante antildeos como el uacutenico
hospedero involucrado en la epidemiologiacutea de la enfermedad en Argentina Estudios
recientes demuestran la presencia de otras especies y que los caracoles intervinientes en
los casos humanos y animales inclusive de la misma zona seriacutean de distintas especies
El objetivo del presente trabajo fue reportar los resultados comparativos obtenidos con
distintas teacutecnicas utilizadas para la observacioacuten morfoloacutegica de caracoles que permitan
identificar los principales hospederos intermediarios que intervienen en la parasitosis
Se colectaron a mano caracoles (n = 673) de una vega ubicada a la vera del riacuteo Abaucaacuten
(27deg29acute52rdquo S - 67deg35acute535 O) a 1650 m nm y se trasladaron vivos al laboratorio Los
moluscos se separaron en lotes iguales y se enfrentaron para estudio con tres teacutecnicas
directa de Railliet seguacuten Paranaense (1994) y la propuesta de Pointier para poder obtener
la separacioacuten de su cuerpo conchilla aparato reproductor masculino y una porcioacuten de su
pie permitiendo una mejor observacioacuten de los oacuterganos internos de los caracoles para su
reconocimiento taxonoacutemico e identificacioacuten por morfologiacutea Paralelamente se sacoacute la parte
blanda del limneido en busca de formas intermedias de F hepatica en el hepatopaacutencreas
del molusco
Los resultados permiten afirmar que la teacutecnica recomendada por Pointier es de muy faacutecil
aplicacioacuten ademaacutes de ser maacutes econoacutemica y permiten acercar nuevos conocimientos sobre
la enfermedad y los actores involucrados en el mantenimiento y difusioacuten de la parasitosis
Palabras clave Teacutecnicas Lymneidos Identificacioacuten Taxonomiacutea Catamarca
Eje temaacutetico Desarrollo de propuestas de ensentildeanza que contribuyan a la
transversalizacioacuten de contenidos cientiacuteficos
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7mo Encuentro de Docentes Investigadores 2do Encuentro de Joacutevenes Investigadores
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poster
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El reto del desarrollo sostenible Estrategias y Acciones Diaacutelogos y Propuestas Edicioacuten
2014 Liacutenea Cientiacutefica 1ordf Ed Catamarca Universidad Nacional de Catamarca E-Book
ISBN 978-950-746-227-6 1 Medio Ambiente CDD 577
Infeccioacuten Experimental de Hospedadores Intermediarios de
Fasciola hepatica
Tomassi Carla A Malandrini Jorge B Soria Claudia C
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
Maestro Quiroga sn 4700 Catamarca
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RESUMEN
Fasciolosis es una enfermedad que cada vez con mayor frecuencia afecta al ser humano se
presenta en el hombre Siendo Catamarca una zona endeacutemica tanto para los animales como para
las personas se hace necesario conocer detalladamente el ciclo de vida en el hueacutesped
intermediario un caracol del geacutenero Lymnea para poder actuar en su control La diseccioacuten de
caracoles permite visualizar la produccioacuten de cercariacuteas y detectar la infeccioacuten en caracoles
provenientes de campo El objetivo del trabajo fue desarrollar la infeccioacuten de moluscos Lymnea
para observar su ciclo bioloacutegico in vitro y comprobar su capacidad de actuar como hospedadores
intermediarios La infeccioacuten se logroacute mediante la eclosioacuten de huevos de F hepatica previamente
embrionados estos proveniacutean de bilis de animales infectados lavados con solucioacuten fisioloacutegica
isotoacutenica decantados en un vaso de precipitado y mantenidos a 25 degC durante ocho diacuteas Por
accioacuten a la luz artificial (30 minutos) se consiguioacute la apertura del opeacuterculo y posterior salida del
miracidio Se pusieron en contacto 50 miracidios por molusco durante dos horas Se observoacute bajo
la lupa la presencia de miracidios de no estar se consideroacute que penetraron en el caracol (n=74)
Se verificoacute a los tres diacuteas sacrificando los moluscos (n=14) separando las partes blandas de la
conchilla y colocaacutendolas entre dos portaobjetos para visualizarlos al microscopio Se obtuvieron
esporocistos en dos moluscos redias en otros dos y cercarias en dos ejemplares maacutes El ensayo
permitioacute comprobar su intervencioacuten en el ciclo de Fasciola hepatica como hospedadores
intermediarios y demostrar la presencia de los distintos estadios larvarios en el interior del cuerpo
de los caracoles
ndash 149 ndash
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XI Jornadas Cientiacuteficas Regionales en Ciencias de la Salud XI Jornadas Estudiantiles
Regionales Instituto Universitario de Ciencias de las Salud Fundacioacuten Barceloacute La Rioja
2014 Modalidad oral
HALLAZGO E IDENTIFICACIOacuteN DE MOLUCOS INTERMEDIARIOS DEL CICLO DE
Fasciola hepatica EN LAGUNA BLANCA CATAMARCA
Tomassi Carla A (1) - Soria Claudia C(1) - Malandrini Jorge B (1)
Fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonoacutetica transmitida por alimentos causada por
Fasciola hepatica Linneaus 1758 (Trematoda Fasciolidae) que utiliza como hospedadores
intermediarios caracoles de agua dulce de la familia Lymnaeidae El paraacutesito no se encuentra en
regiones donde las condiciones no son las adecuadas para el desarrollo de los caracoles
Pertenecen al phylum Mollusca y a la clase Gasteropoda y las especies de intereacutes se encuentran
en la subclase Euthyneura o Pulmonata Son anfibios y viven en el barro en ambientes de aguas
poco profundas sujetos a las inundaciones y desecaciones Su distribucioacuten no es uniforme porque
dentro de cada haacutebitat pueden concentrarse en aacutereas pequentildeas con canales de drenaje y
filtraciones En la provincia de Catamarca se demostroacute la presencia de lymneidos en casi todos los
departamentos y en diferentes ecosistemas
El objetivo del presente trabajo fue hallar ejemplares de lymeneidos en la localidad de Laguna
Blanca y relacionar su presencia con diagnoacutesticos efectuados en muestras de materia fecal
animales de distintas especies
Los caracoles se colectaron en forma manual (n=490) en tres vegas de la localidad ldquoLas Lomitasrdquo
(26deg3acute21rdquoS-66deg56acute334 O) (706) ldquoCasa Paredrdquo (26deg35acute04rdquoS-66deg56acute47 O) (218) y ldquoHuasi
Cieacutenagardquo (26deg34acute50rdquoS-66deg56acute333 O) (76) y 17 muestras de materia fecal de ovejas (13) llamas
(2) y cabras (2) que pastaban en las vegas
Los moluscos fueron transportados vivos en frascos hermeacuteticos con agua del mismo curso al
laboratorio malacoloacutegico de la facultad de Ciencias de la Salud donde se realizoacute la identificacioacuten
de los geacuteneros en base a la morfologiacutea de su conchilla Las determinaciones parasitoloacutegicas se
llevaron a cabo seguacuten teacutecnica de Dennis Stone y Swason
Se comproboacute la presencia de caracoles del geacutenero Lymnea en las tres vegas En ldquoCasa Paredrdquo
(3452) en ldquoHuasi Cieacutenagardquo (1194) y en la vega ldquoLas Lomitasrdquo (5354) se determinoacute
ademaacutes presencia de moluscos del geacutenero Physa (5205) Los anaacutelisis coproparasitologicos
resultaron positivos confirmando la presencia del parasito en animales (7647)
Los hallazgos realizados y los antecedentes humanos de la enfermedad en otras zonas de la
provincia ameritan estudios epidemioloacutegicos que los involucren
1 Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
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ANEXO 1123 ndash PREMIOS Y DISTINCIONES
217
XXVIII Jornadas de Actualizacioacuten en Ciencias Veterniarias Colegio Medico
Veterinario de la Provincia de Coacuterdoba 2009 Distinguido con Mencioacuten Especial
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Segunda mencioacuten Premio Anual AAPAVET Rioplatense 2012 ldquoDr Rauacutel Martiacuten Mendyrdquo
OCTUBRE de 2012
Volumen XXIX Ndeg 294 ISSN 1852-317X
Se otorgoacute el Premio Anual AAPAVET Rioplatense 2012 ldquoDr Rauacutel Martiacuten Mendyrdquo
El H Jurado integrado por los Drs Ricardo A Moriena (FCV UNNE) Oscar S Anziani (INTA Rafaela) y Cristian Lucas (Actividad privada) dictaminoacute en forma unaacutenime otorgar los siguientes premios
Categoriacutea Investigacioacuten Original
Primer Premio
ldquoIntroduccioacuten de la vacuna EG95 contra la Equinococcosis Ovina en un Programa de Control Obtencioacuten de informacioacuten baacutesica anaacutelisis espacial y primer estudio de impactordquo
Edmundo Larrieu Eduardo Herrero Guillermo Mujica Joseacute L Labanchi Daniel Araya Claudio
Grizmado Arnoldo Calabroacute Gabriel Taimoacuten Guillermo Ruesta Alicia Peacuterez Antonio Gati Graciela
Santillaacuten Marta Cabrera Marcos Arezzo Marcos Seleiman Laura Cagioacuten Mariela Garciacutea Cachau Cristian A Alvarez Rojas Charles G Gauci David D Heath Roberto Lamberti y Marshall W
Lightowlers
1ordf Mencioacuten
ldquoEquinococcosis Neotropical presencia del ciclo silvestre de Echinococcus vogeli en la Provincia de Misiones Argentinardquo
Katherina Alicia Vizcaychipi
Consultores Antonio DrsquoAlessandro Federico Camiccia Marcela A Cucher Karen E DeMatteo Eduardo Guarnera Ariana Gutieacuterrez Marcia Helou Natalia Maccharoli Laura C Prada Miguel A
Rinas Mara Rosenzvit y Graciela Ineacutes Santillaacuten
2ordf Mencioacuten
ldquoEstudio epidemioloacutegico de Fasciolasis en el aacuterea del Departamento Tinogasta Catamarca (Argentina)rdquo
Jorge Bruno Malandrini Jorge N Velaacutesquez Claudia C Soria Mordf Laura Pantano Laura Kamentzky y Silvana Carnevale
Categoriacutea Monografiacutea Original
Primer Premio ldquoParaacutesitos y enfermedades emergentes y re-emergentes calentamiento global cambio climaacutetico
transmisioacuten y migracioacuten de especies Evaluacioacuten de la participacioacuten del hombrerdquo G Mauricio Bulman y Jorge C Lamberti
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Primer premio I Congreso Internacional e Zoonosis y Enfermades Emergentes VII
Congreso Argentino de Zoonosis Asociacion Argentina de Zoonosis Buenos Aires 2011
Modalidad Poster
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A Claudia Leandro y Pilar apoyos espirituales en mi trabajo diario
fuentes permanentes de mi superacioacuten
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AGRADECIMIENTOS No hay tesis doctoral que pueda escribirse sin el apoyo de muchas personas -amigos
fuentes de informacioacuten y numerosos expertos externos- que pacientemente ofrecieron
tanto sus profundos conocimientos como cuantas aclaraciones fueron precisas Mi primer
agradecimiento lo expreso a las Doctoras Paula Budini Ana Litvik y al Doctor Walter
Almiroacuten por su guiacutea aportes conceptuales y de organizacioacuten ademaacutes de su inagotable
paciencia y predisposicioacuten por el proyecto permitiendo que me tomara el tiempo para
hacer la mejor presentacioacuten posible Aprecio mucho su apoyo y espero que ahora se vea
recompensado
Me es a todas luces imposible expresar individualmente mi agradecimiento a todos los
que me han ayudado Sin embargo la Dra Silvana Carnevale y el Dr Jorge Velaacutesquez
quienes figuran ciertamente entre los mejores y maacutes prestigiosos investigadores en la
temaacutetica por haberse tomado la molestia de leer todo el manuscrito y ofrecerme sus
respectivas criacuteticas y consejos
El autor cumple con el deber de agradecer al profesor Santiago Mas-Coma por sus
importantes aportes sus criacuteticas igualmente detalladas -pero mucho maacutes incisivas y
provocativas- durante la investigacioacuten En mis viajes ademaacutes de los estudios he visitado
sus laboratorios aulas universitarias y se ha mostrado generoso con el tiempo y sus
ideas
Tengo la satisfaccioacuten de dar las gracias a la Dra Dolores Bargues en la que concurren
las cualidades propias de una excelente docente e investigadora con las de una cientiacutefica
abierta que centra su intereacutes en Fasciolosis y su estrecha relacioacuten entre la sanidad animal
y la salud humana
A la Dra Rosacircngela Rodriacutegues-Silva y su equipo del Laboratorio de Helmintos Paraacutesitos
de Vertebrados del Fiocruz quieacuten llevoacute a cabo una minuciosa comparacioacuten de los
especiacutemenes observados
Un voto de agradecimiento similar tiene por destinatario a otro de mis colegas el Dr Hugo
Solana quien me abrioacute las puertas de su caacutetedra para el desarrollo de estudios sobre
resistencia antiparasitaria que permitieron resultados de difiacutecil logro en mi provincia
No puedo dejar de mencionar a la Dra Viviana Molina directora del ANLIS-Malbraacuten por
permitir mi participacioacuten docente en los cursos anuales de Enteroparaacutesitos dictados en el
Instituto asiacute como al Dr Sixto R Costamagna por su invitacioacuten para redactar un capiacutetulo
en su libro ldquoParasitosis Regionalesrdquo los que hicieron posible organizar los conocimientos
sobre fasciolosis y se generaran y precisen las ideas que se exponen
Mis palabras de reconocimiento especial a las principales autoridades de la Universidad
Nacional de Catamarca que resultan ser la mejor garantiacutea para que la investigacioacuten
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cientiacutefica sea el ingrediente especial en el claustro catamarquentildeo ademaacutes del aporte por
la beca doctoral otorgada y permitir el uso de equipos y materiales
El autor jamaacutes hubiese podido acceder a la realizacioacuten de esta Tesis Doctoral sin haber
tenido la ocasioacuten de contar con el apoyo econoacutemico de la Fundacioacuten Mundo Sano que
me permitioacute solventar viajes al extranjero
Tanto los trabajos de campo efectuados formando parte de expediciones a la zona del
trabajo como los estudios y anaacutelisis realizados en laboratorios fueron llevados a cabo
con financiamiento obtenido por parte de diferentes proyectos de investigacioacuten
acreditados por la SECyT-UNCa y Focanlis 2011
Las palabras no pueden expresar los sentimientos hacia los integrantes de mi equipo de
investigacioacuten quienes trabajaron sometidos a gran presioacuten durante varias etapas clave
del proceso
Finalmente esta lista no estariacutea completa sin un agradecimiento especial a todos los
integrantes del personal de salud -funcionarios meacutedicos bioquiacutemicos bioacutelogos
enfermeras y agentes sanitarios- participantes de tantos diacuteas de trabajos conjuntos que
permitieron la investigacioacuten
Debo igualmente una mencioacuten especial de gratitud a la Dra Diana T Masih por sus
consejos advertencias y estiacutemulos desde el comienzo de esta investigacioacuten
Ademaacutes tambieacuten debo expresar un especial reconocimiento a la Dra Gladys I Ponte y al
Dr Ernesto J Jacob sin los cuales esta tesis no hubiera podido llegar a buen fin
Huelga decir que soacutelo yo soy responsable de cualquier error que haya podido deslizarse
en esta tesis pese a mis mejores esfuerzos por evitarlo
J B M
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RESUMEN Con el objetivo de contribuir al conocimiento de la epidemiologiacutea de la fasciolosis en el valle
de Fiambalaacute Catamarca Argentina se realizoacute un estudio descriptivo prospectivo con disentildeo
no experimental transeccional durante el periacuteodo 2008-2012
En 305 individuos con seguimiento de la cohorte en humanos se estudioacute la presencia de
anticuerpos anti-rproCL1 de Fasciola hepatica (Fh) eosinofilia proteiacutenas totales aacutecidos
biliares enzimas hepaacuteticas y bilirrubina seacuterica Se analizoacute la presencia de Fasciola hepatica
en la materia fecal y utilizoacute el diagnoacutestico por imagen en los individuos estudiados
La interpretacioacuten de las manifestaciones cliacutenicas (n=174) la deteccioacuten de anticuerpos
antifasciola por ensayo de inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (ELISA) las imaacutegenes (n=57) y
la aplicacioacuten de meacutetodos de diagnoacutestico etioloacutegico por microscopiacutea en materiales de heces
(n=96) mediante su utilizacioacuten sistemaacutetica e integrada permitieron realizar el diagnoacutestico de
fasciolosis
Se estudiaron 1077 muestras de heces de las distintas especies animales domeacutesticas
presentes en la zona como ovinos asnos llamas caprinos bovinos equinos y porcinos
Se obtuvieron 398 ejemplares de Fh de 11 animales faenados y se sometieron a estudios
morfoloacutegicos moleculares por amplificacioacuten del gen mitocondrial de la subunidad 1 de la
citocromo oxidasa y de resistencia antiparasitaria a Triclabendazol por amplificacioacuten aleatoria
de ADN polimoacuterfico
En 2354 limneidos se identificoacute la especie por secuenciacioacuten del aacutecido desoxirribonucleico
(ADN) y se demostroacute la infeccioacuten natural
Se estimoacute una prevalencia en el hombre de 3442 con aumento de eosinoacutefilos (p=0000) de
proteiacutenas seacutericas (p=0000) y una edad promedio menor a 19 antildeos en los individuos positivos
en relacioacuten a los negativos En animales la prevalencia obtenida fue 2674 con mayor
infeccioacuten en ovinos Se encontraron ejemplares adultos de Fh con identidad de secuencias
(994) a ejemplares de San Luis y otros resistentes a TCBZ Se identificoacute a los limneidos
Lymnaea neotropica y Lymnaea viator como los hospedadores intermediarios
Los resultados indican que las poblaciones humanas y animales estudiadas tienen una alta
prevalencia de Fh en el valle de Fiambalaacute Catamarca desde 2008 al 2012 El agente
parasitario es ideacutentico geneacuteticamente a los ya encontrados en otras regiones de Argentina
pero algunos presentan resistencia a TCBZ que compromete el futuro del tratamiento
humano El hospedador intermediario L neotropica constituye la descripcioacuten de una nueva
especie de limneidos en el Noroeste argentino
PALABRAS CLAVE fasciolosis infeccioacuten humana ELISA resistencia antiparasitaria L
neotropica
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SUMMARY In order to contribute to the knowledge of fascioliasisacute epidemiology in the valley of
Fiambalaacute Catamarca Argentina a prospective descriptive study with no experimental
cross-sectional design was done during the period 2008-2012
Within 305 individuals with cohort tracing in human the presence of antibodies anti-
rproCL1 of Fasciola hepatica eosinophilia total proteins bile acids liver enzymes and
serum bilirubin was studied The presence of Fasciola hepatica (Fh) in the stool was
analyzed and diagnostic imaging was used in individuals studied
The interpretation of clinical manifestations (n=174) the use of serological diagnosis
techniques by immunosorbent assay for enzyme-linked (ELISA) images (n=57) and the
application of methods of etiological diagnosis by microscopy in materials feces (n=96)
through its systematic and integrated use allowed the fascioliasis diagnosis
1077 stool samples from different domestic animals species present in the area as sheep
donkeys llamas goats cattle horses and pigs were studied
398 copies of Fasciola hepatica from 11 slaughtered animals were obtained and
subjected to morphological studies molecular by amplification of mitochondrial gene of
subunit 1 of cytochrome oxidase and Triclabendazole antiparasitic resistance by Random
Amplification of Polymorphic DNA (RAPD-PCR)
In 2354 lymnaeid the species was identified by deoxyribonucleic acid (DNA) sequencing
and natural infection was demonstrated
Prevalence of 3442 was estimated in men with increased eosinophilia (p=0000) serum
proteins (p=0000) and a difference in age of 19 years younger in positive individuals in
relation to negative In animal the obtained prevalence was 2674 with more infection in
sheep Fasciola hepatica adult specimens were found with sequence identity (994) in
individuals of San Luis and other resistant to TCBZ The lymnaeid Lymnaea neotropica
and Lymnaea viator and were identified as intermediate hosts
The results indicate that the studied human and animal populations have a high
prevalence of Fasciola hepatica in the valley of Fiambalaacute Catamarca from 2008 to 2012
The parasitic agent is genetically identical to those already found in other regions of
Argentina but some are resistant to TCBZ compromising the future of treatment in human
The intermediate host L neotropica establish the description of a new lymnaeid species in
the Northwest of Argentina
KEYWORDS fascioliosis human infection ELISA antiparasitic resistance L neotropica
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ldquoLA FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS NO SE HACE SOLIDARIA CON LAS
OPINIONES DE ESTA TESISrdquo
Art 43deg Reglamento de la Carrera de Doctorado en Ciencias de la Salud (RHCD Res Ndeg 7222010)
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INDICE GENERAL Contenido
Paacutegina
Portadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Frasehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Dedicatoriahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Agradecimientohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Resumenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Summaryhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Paacutegina de advertenciahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Iacutendice de contenidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Iacutendice de tablas y figurashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I II III IV VI
VII VIII
IX XIII
INTRODUCCIOacuteN Y OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
16
1 Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
20 11 Breve resentildea histoacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20
111 Sinonimiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22 112 Clasificacioacuten taxonoacutemicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22
12 Ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22 121 Aspectos epidemioloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 25
13 Viacuteas de difusioacuten geograacutefica de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 26 131 Distribucioacuten de F hepatica en Ameacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 27
14 Hospedador intermediariohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31 15 Fasciola hepatica en humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 34 16 La infeccioacuten a nivel mundialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 36
161 Ameacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 37 1611 Peruacute Bolivia y Chilehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 38 1612 Repuacuteblica Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 39
17 Factores de riesgo en la infeccioacuten de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphellip 40 18 Sintomatologiacutea cliacutenica y patologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 42 19 Diagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 44
191 Directohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 44 1911 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 45 1912 Teacutecnicas quiruacutergicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 46
192 Indirectohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 46 110 Planteamiento del problemahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 49
1101 Justificacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 51 1102 Viabilidad del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1103 Evaluacioacuten de las deficienciashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52
111 Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1111 Objetivo generalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1112 Objetivos especiacuteficoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52
112 Hipoacutetesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 53 DISENtildeO DEL ESTUDIO Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 54 2 Datos secundarios y caracteriacutesticas del ambientehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55
21 Seleccioacuten del tipo de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 22 Lugar de la poblacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 23 Seleccioacuten de la poblacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 24 Periodo de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 25 Descripcioacuten regional del haacutebitat del valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphellip 56
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17
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31 Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
311 Criterios de inclusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
312 Criterios de exclusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 59 32 Obtencioacuten de las muestrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 60
321 Recoleccioacuten de sangrehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 60
322 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 61
3221 Expresioacuten y purificacioacuten de la proteiacutena recombinante procatepsina L1 (rproCL1)helliphellip 61
3222 Ensayo inmunoenzimaacuteticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3223 Foacutermula leucocitariahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3224 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3225 Proteiacutenas Totaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3226 Aacutecidos biliareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3227 Bilirrubina seacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3228 Enzimashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63 323 Anaacutelisis de los datoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63 324 Materia fecalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 64
3241 Teacutecnica de Sedimentacioacuten Raacutepida (TSR)helliphellip 65
3242 Teacutecnicas de concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 65
32421 Meacutetodo de Telemann modificadohellip 65
32422 Meacutetodo de flotacioacuten de Willishelliphelliphellip 65
32423 Meacutetodo cuantitativo para huevoshelliphellip 65 33 Diagnoacutestico por imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 34 Datos cliacutenicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66
Animales como hospedador definitivo de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 4 - Especies animales estudiadashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66
41 Exaacutemenes coproparasitoloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 411 Identificacioacuten de otros paraacutesitos gastrointestinaleshelliphelliphellip 67
42 Necropsias y obtencioacuten de especiacutemenes de F hepaticahelliphelliphelliphellip 68 421 Estudios morfoloacutegicos de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 69 422 Estudios de haplotipos de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 69 423 Estudios de resistencia a antiparasitarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70
Identificacioacuten del hospedador intermediario de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70 5 Epidemiologiacutea de los caracoleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70
51 Recoleccioacuten de limneidos en la zona del valle de Fiambalaacutehelliphelliphellip 70 511 Transporte de limneidos al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71
52 Tareas en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71 521 Adaptacioacuten y cultivo de limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71 522 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 72 523 Infeccioacuten natural por F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 72 524 Infeccioacuten inducida del hospedador intermediariohelliphelliphelliphellip 73
53 Identificacioacuten de la especie mediante determinacioacuten de haplotipos 73 531 Marcadores de ADN seleccionadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 74 532 Extraccioacuten de ADNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 74 533 Secuenciacioacuten de los marcadores de ADNr y ADNmthelliphellip 74 534 Anaacutelisis de la secuenciahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 75 535 Nomenclatura de los haplotipos de ADNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 75
54 Determinacioacuten molecular de la infeccioacuten natural de limneidos con F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 76
251 Orografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 252 Climahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 253 Hidrografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58 254 Flora y Faunahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
3 Seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58 Epidemiologiacutea en seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
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541 Electroforesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 76 RESULTADOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 78
6 Datos secundarios y caracteriacutesticas del ambientehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 79 61 Caracteriacutesticas de las viviendas del valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphellip 79 62 Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 80 63 Caracteriacutesticas climaacuteticas y haacutebitathelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 80
7 Resultados en seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81 71 Serologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81
711 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81 712 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 713 Proteiacutenas totales enzimas bilirrubina y colesterolhellip 87
72 Geacutenerohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 87 73 Grupos etarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 88 74 Anaacutelisis estadiacutesticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 90 75 Anaacutelisis coproparasitoloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 76 Siacutentomas y signoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 77 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 78 Teacutecnicas invasivashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 79 Descripcioacuten de casos con Fasciolosishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 92
8 Resultados en animaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 98 81 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 98
811 Prevalencia por exaacutemenes coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphellip 98 812 Hallazgos de huevos de otros paraacutesitos
gastrointestinaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 99 82 Recuperacioacuten de ejemplares de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 99 83 Morfologiacutea microscoacutepica de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 100
831 Microscopiacutea de contraste por interferencia diferencial 102 84 Variabilidad geneacutetica intraespeciacuteficahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 102 85 Resistencia al triclabendazolhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 102
9 Resultados en el hospedador intermediario de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 91 Identificacioacuten de los caracoles helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 92 Medicioacuten de moluscoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 93 Mantenimiento en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105
931 Identificacioacuten de gasteroacutepodos infectadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105
9311 Infeccioacuten del hospedador intermediariohelliphelliphelliphelliphellip 105
932 Identificacioacuten molecular de la infeccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9321 PCR de infeccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106 94 Caracterizacioacuten molecular de limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
941 L neotropicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9411 Marcadores moleculareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9412 Marcadores mitocondrialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 107
942 L viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 108
9421 Marcadores ribosomaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 108
9422 Marcadores mitocondriales 109
943 Anaacutelisis comparativo de L neotropica vs L viatorhelliphelliphelliphellip 109 DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 111
101 En los seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 112
1011 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 113
1012 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 114
1013 Proteiacutenas totales y enzimas hepaacuteticashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 115
1014 Geacutenerohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 116
1015 Grupos etarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 117
1016 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 118
1017 Siacutentomas y signoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 119
1018 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 120
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1019 Teacutecnicas invasivashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121 102 En los animaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121
1021 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121
1022 Necropsiashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 124
1023 Morfologiacutea microscoacutepicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 124
1024 Variabilidad geneacutetica intraespeciacuteficahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 125
1025 Resistencia antiparasitariahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 126 103 En los limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 127
1031 Caracteriacutesticas fenotiacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 127
1032 Importancia de las influencias ambientaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 128
1033 Estudios en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 128
1034 Identificacioacuten microscoacutepica y molecularhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 129
1035 Caracteriacutesticas moleculareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 131
1036 Lymnaea neotropicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 132
1037 Lymnaea viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 132 Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 134 Recomendacioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 137 BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 139 ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 171
111 Tablas y figurashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 172 112 Trabajos cientiacuteficos a partir de la informacioacuten generada en esta
tesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 192 1121 Trabajos publicadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 192 1122 Presentacioacuten en Congresos y Jornadashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 203 1123 Premios y Distincioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 217
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hepatogramas datos cliacutenicos imaacutegenes y cirugiacuteas sobre casos positivos con diagnoacutestico documentado Valle de Fiambalaacute Antildeos 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
82 Tabla 3 Resultados comparativos entre la presencia de eosinoacutefilia y ensayos de ELISA seropositivos Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 Tabla 4 Resultados comparativos entre los valores de proteiacutenas totales y anaacutelisis de ELISA positivos Valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphellip 87 Tabla 5 Frecuencia absoluta de casos positivos y negativos al ensayo de ELISA recombinante para Fasciola hepatica en pacientes agrupados por geacutenero en los diferentes grupos etarios Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 88 Tabla 6 Frecuencia y porcentaje acumulado por grupo etario con el ensayo de ELISA para Fasciola hepatica Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- Tabla 7
2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Clasificacioacutena de los casos observados en el Valle de Fiambalaacute 2009-
89
2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 90 Tabla 8 Variables de la ecuacioacuten Valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphellip 90 Tabla 9 Prevalencia de F hepatica en diferentes especies de animales domeacutesticos Valle de Fiambalaacute Catamarca Antildeos 2009-2011helliphelliphelliphellip 99 Tabla 10 Comparacioacuten de las mediciones de conchillas de limneidos entre las poblaciones naturales de L viator y L neotropica colectadas en el valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 104 Tabla 11 Caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina de acuerdo con los diferentes sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 172 Tabla 12 Datos comparativos de los tamantildeos obtenidos en ejemplares de F hepatica del valle de Fiambalaacute con las de diferentes lugares estudiadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 173 Tabla 13 ADN ribosomal nuclear y haplotipo de ADN mitocondrial para la identificacioacuten de coacutedigo L neotropica y L viator del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 174 Tabla 14 Diferencias de nucleoacutetidos encontradas en el fragmento de la secuencia del gen 16S ADNmt de las poblaciones de L neotropica estudiadas y otros haplotipos 16S aislados de la misma especie disponibles en GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 175 Tabla 15 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontradas en la secuencia de fragmento ADNmt del gen cox1 de las poblaciones de L neotropica estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos cox1 y aislamientos de la misma especie disponibles en GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 176 Tabla 16 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia ADNr ITS-2 de L viator en el valle de Fiambalaacute y otros de Argentina y haplotipos ITS- 2 aislados en la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphellip 177 Tabla 17 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia del ADNr ITS-1 de L viator colectados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y otros haplotipos ITS-1 y aislamientos disponibles en
LISTA DE TABLAS Y FIGURAS
Tablas Paacutegina Tabla 1 Hitos en el descubrimiento del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahellip 21
Tabla 2 Resultados de anaacutelisis comparativos seguacuten sexo y edad de la absorbancia de ELISA estudios coproloacutegicos eosinoacutefilia
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GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 178 Tabla 18 Diferencias de nucleoacutetidos que se encuentran en la secuencia del gen ADNr 16S y fragmentos del gen mitocondrial de L neotropica y L viator estudiados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y haplotipos 16S aislados en la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 179 Tabla 19 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontrados en la secuencia del fragmento de ADNmt del gen cox1 de L viator estudiado y otros haplotipos cox1 aislados de la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 180 Tabla 20 Distancias por pares entre secuencias de haplotipos ITS-2 e ITS-1 aislados de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 181 Tabla 21 Distancias por pares entre 16S y secuencias en haplotipos cox1 en aislamientos de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60helliphelliphelliphelliphellip 182 Tabla 22 Promedio de las distancias geneacuteticas entre y dentro de L neotropica y L viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 183 Figura 1 Especiacutemenes adultos de F hepatica sobre la caacutepsula de Glisson obtenidos a partir de una infeccioacuten natural en Lama glama en el valle de Fiambalaacute y esquema de Fasciola hepatica adultahelliphelliphelliphelliphelliphellip 23 Figura 2 Huevos de F hepatica presentes en materia fecal de ovinos infectados naturalmente en el valle de Fiambalaacute obtenidos por el meacutetodo de sedimentacioacuten de Dennis Stone y Swanson donde se aprecian los embriones en su interior y el detalle del opeacuterculo abierto y esquema de un huevo embrionadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 24 Figura 3 Esquema del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 24 Figura 4 Geografiacutea de la probable dispersioacuten de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 27 Figura 5 Imagen y fotografiacutea del aspecto externo de Lymnaea neotropica proveniente del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphellip 31 Figura 6 Ubicacioacuten geograacutefica del Valle de Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia de Catamarca Repuacuteblica Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 Figura 7 Distribucioacuten de personas (n=305) seropositivas y seronegativas en frecuencias relativas () al inmunodiagnoacutestico del ensayo de ELISA analizadas en el Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 Figura 8 Imagen microscoacutepica de huevo de Fasciola hepatica obtenido con la teacutecnica de Lumbreras en la materia fecal de una paciente de 3 antildeos del valle de Fiambalaacute Catamarcahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 93 Figura 9 Ejemplar de F hepatica extraiacutedo del coleacutedoco con CRTE en una paciente de 22 antildeos en el Hospital San Juan Bautista Catamarca 2012helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 94 Figura 10 Imagen ecograacutefica hepaacutetica con hepatomegalia Se observa aumento de la ecogenicidad y una estructura de aspecto filiformehellip 97 Figura 11 Imaacutegenes microscoacutepicas de estructura morfoloacutegica del cono cefaacutelico de Fasciola hepatica obtenidas de un animal bovino faenado en el Valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 100 Figura 12 Estructuras morfoloacutegicas de Fasciola hepatica halladas en un animal bovino del Valle de Fiambalaacute Argentina observadas al microscopio 101 Figura 13 Uacutetero con huevos de un espeacutecimen de Fasciola hepatica obtenido de la necropsia de un animal bovino en el Valle de Fiambalaacute Aumento 10xhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 101 Figura 14 Detalle del tegumento de una F hepatica mostrando las espinashelliphellip 102 Figura 15 Microfotografiacuteas tomadas de estructuras morfoloacutegicas de una F hepatica de ganado bovino del valle de Fiambalaacute observadas con microscopio de contraste por interferencia diferencial helliphelliphelliphelliphelliphellip 102
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Figura 16 Patrones de amplificacioacuten por RAPD PCR de Fasciola hepatica
aisladas de hiacutegados obtenidos para la deteccioacuten de cepas
resistentes a Triclabendazol (TCBZ) comparados con otras zonashellip 103 Figura 17 Conchillas de L viator A) vista ventral B) vista dorsal escala 5 mm y conchillas de L neotropica C) vista ventral D) vista dorsal escala 4 mm Especiacutemenes colectados en vegas del valle de Fiambalaacute 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105 Figura 18 Liacutemite de deteccioacuten del ensayo de PCR por electroforesis en gel de agarosa de los productos de amplificacioacuten utilizado como plantilla de ADN para la deteccioacuten de F hepatica en muestras de limneidos del Valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106 Figura 19 Consentimiento informadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 184 Figura 20 Planilla de recoleccioacuten de datos de las viviendas Valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 185 Figura 21 Planilla de recoleccioacuten de datos de las personas Valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 186 Figura 22 Graacuteficas de comparacioacuten de temperaturas promedio mensual en grados centiacutegrados y precipitacioacuten-aridez entre las localidades de Rio Grande y Tatoacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 187 Figura 23 Diseccioacuten de conductos biliares de un hiacutegado de Lama glama donde se observan ejemplares de Fasciola hepatica intracanaliculares Valle de Fiambalaacute Catamarca 2010helliphelliphelliphelliphellip 188 Figura 24 Apertura de un conducto biliar intrahepaacutetico en un hiacutegado de Ovis orientalis aries Se observa un ejemplar de F hepatica colangitis croacutenica con lesiones de la mucosa biliar hipertrofiada estrecheces inflamatorias fibrosas y piedras Valle de Fiambalaacute Catamarca 2010helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 188 Figura 25 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino de la provincia de Salta observadas al microscopiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 189 Figura 26 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino del municipio de Cordeiro RJ Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 189 Figura 27 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de bovinos de la provincia de Salta Argentina observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 190 Figura 28 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado del municipio de Lavras MG Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 190 Figura 29 Anaacutelisis filogeneacutetico de F hepatica basado en las secuencias de CO1 FhC01-CAT-adulthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 191
INTRODUCCIOacuteN y OBJETIVOS
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Generalidades
La Fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonoacutetica transmitida por
alimentos causada por Fasciola hepatica Linneaus 1758 (Trematoda Fasciolidae) que
utiliza como hospedadores intermediarios caracoles de agua dulce de la familia
Lymnaeidae Los hospedadores definitivos son mamiacuteferos silvestres y el ganado
principalmente ovino y bovino siendo el hombre un hospedador accidental Aunque este
paraacutesito es prevalente y produce severas peacuterdidas econoacutemicas en animales (Espinosa et
al 2010) actualmente emerge como causa de enfermedad en humanos (Chen y Mott
1990)
Fasciolosis era una enfermedad de los animales que en condiciones particulares podriacutea
infectar al hombre No se puede olvidar que se considera actualmente una zoonosis
emergente una de las 17 enfermedades tropicales desatendidas siendo una afeccioacuten
parasitaria ampliamente difundida en el todo el mundo (Organizacioacuten Mundial de la Salud
1995)
La Fasciolosis se caracteriza por estar relacionada con una problemaacutetica muy compleja
que involucra un contexto socio-cultural y socio-econoacutemico que debe ser atendido
sanitariamente en forma simultaacutenea La decisioacuten de prevenir controlar o eliminar la
aparicioacuten de esta enfermedad como muchos otros problemas del sector salud estaacute
relacionada con los estudios realizados
Fasciola hepatica se situacutea en un lugar preferente dentro del campo de conocimiento de la
Parasitologiacutea contribuyendo a ello la publicacioacuten de libros y trabajos dedicados a este
trematodo en los que se analizan aspectos muy distintos y desde puntos de vista
diferentes
Los apoyos recibidos desde la bioquiacutemica biologiacutea molecular geneacutetica epidemiologiacutea
farmacologiacutea e inmunologiacutea han demostrado ser pilares imprescindibles para impulsar
nuevos planteamientos de las investigaciones y han permitido avanzar en el
conocimiento de esta parasitosis
Los puntos de vista desde los que se investiga sobre F hepatica y Fasciolosis son muy
distintos y profundizan todo lo referente a su conocimiento desde los estudios iniciales
puramente bioloacutegicos o ecoloacutegicos hasta los maacutes modernos y actuales que tienen su
maacuteximo apoyo en la aplicacioacuten de avanzadas teacutecnicas de biologiacutea molecular bioquiacutemica
e inmunologiacutea
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Probablemente no sea ajena esta realidad al hecho importante de que la Fasciolosis
tambieacuten afecta al hombre y de hecho existen regiones en el sur de Latinoameacuterica donde
se diagnostican prevalencias muy elevadas de personas parasitadas por F hepatica
(Bargues et al 1996 a)(Bargues et al 1996 b)
En este sentido en zonas de Latinoameacuterica se reconoce el gran impacto en la salud
puacuteblica y en la economiacutea de los productores ganaderos donde los iacutendices de
parasitacioacuten animal son muy altos (Marcos et al 2007) lo que tambieacuten se traduce en la
presentacioacuten de prevalencias de Fasciolosis humana en esa poblacioacuten estando
afectados de manera especial nintildeos y joacutevenes (Valencia et al 2005)
Los sistemas de informacioacuten y de vigilancia de enfermedades transmisibles no incluyen
en muchos casos los indicadores de morbilidad por zoonosis por lo que la casuiacutestica de
esta enfermedad estaacute muy dispersa Dado que el subregistro es importante que la
informacioacuten proporcionada con relacioacuten a los casos es variable de acuerdo a la fuente o a
la persona que la suministra los datos tienen que ser obtenidos en un nuevo contexto
para que den respuestas a los interrogantes planteados sobre el tema
En la Repuacuteblica Argentina la prevalencia de esta parasitosis en el hombre estaacute reducida
por un fuerte subregistro al que se agregan problemas relativos al diagnoacutestico realizado
rutinariamente mediante el anaacutelisis coproparasitoloacutegico que presenta las desventajas de
una baja sensibilidad y no detectar la fase aguda de la enfermedad (Knoblock 1985)
Numerosas teacutecnicas de inmunodiagnoacutestico de esta parasitosis han sido descriptas y
aplicadas en diversos paiacuteses pero las mismas no se llevan a cabo en los laboratorios de
las aacutereas de mayor casuiacutestica de nuestro paiacutes (Carnevale y Velaacutesquez 2011)
En el paiacutes la importancia de esta enfermedad en los humanos no ha sido suficientemente
evaluada habieacutendose detectado esporaacutedicamente casos en pobladores rurales que
habitan en zonas serranas y turistas que visitaron tales aacutereas durante la eacutepoca estival
(Siciliano et al 1989)(Nieto Sosa et al 2008) Es una patologiacutea de intereacutes regional su
notificacioacuten no es obligatoria siendo una infeccioacuten secundaria a la ingesta de berros
comunes del geacutenero Nasturtium officinale (Barcat 2005) achicoria amarga (Toraxacum
officinale) (Siciliano 1982) u otros vegetales silvestres comestibles Por otra parte el
agua se ha citado como fuente de infeccioacuten humana puesto que se demostroacute la
presencia de metacercarias flotantes lo que se relacionoacute con casos de infeccioacuten humana
en zonas de Ameacuterica donde no es habitual el consumo de berros (Vareille et al 1993)
En los animales el diagnoacutestico se basa en la observacioacuten de paraacutesitos mediante
necropsia (Boero 1976) Tambieacuten se utiliza el estudio con teacutecnicas coproparasitoloacutegicas
y se han desarrollado test inmunoloacutegicos para la deteccioacuten de anticuerpos contra el
trematode (Olaechea 2007)
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La infeccioacuten por F hepatica fue siempre considerada una enfermedad de importancia
animal En los uacuteltimos antildeos la prevalencia de infecciones en rumiantes domeacutesticos ha
sido reportada en Europa con valores de 5 en Italia 10 en Gran Bretantildea 295 a
59 en Espantildea 188 en Noruega 119 en Polonia 107 en Alemania 45 en
Irlanda 293 en Turquiacutea y osciloacute entre el 112 al 252 en el centro de Francia
(Martiacutenez-Valladares et al 2013)(Kozłowska-loj y Loj-Maczulska 2013) Sin embargo a
partir de 1990 se planteoacute como un problema de Salud Puacuteblica debido a la aparicioacuten de
publicaciones que demostraban para el periacuteodo 1970-1990 la existencia de personas
infectadas de 42 paiacuteses diferentes de todos los continentes (Chen y Mott 1990)
En nuestro paiacutes aunque los anaacutelisis en cuanto a fisiografiacutea clima prevalencias animales
y limneidos son auacuten escasos (Mera y Sierra et al 2011) la situacioacuten no tiene porqueacute
diferenciarse de lo que ocurre en Bolivia Peruacute y Chile donde Fasciolosis humana es
endeacutemica Debido a esta nueva situacioacuten la Fasciolosis ya no puede considerarse
simplemente como una enfermedad zoonoacutetica secundaria sino maacutes bien como una
importante enfermedad parasitaria del hombre
Hoy se estima que si bien son los animales los que padecen las infecciones con maacutes
frecuencia respecto de las personas y que si en el pasado la Fasciolosis humana estaba
circunscripta a aacutereas y poblaciones maacutes o menos delimitadas recientemente los cambios
climatoloacutegicos y ambientales y sobre todo los cambios de las costumbres y haacutebitos
humanos estaacuten definiendo nuevos liacutemites geograacuteficos para la distribucioacuten de esta
parasitosis y hacen que aumente el riesgo de muchas poblaciones humanas ante esta
zoonosis (OMS 2006) como en otras enfermedades emergentes
La infeccioacuten humana por F hepatica siempre se habiacutea considerado como una
enfermedad de poca importancia ante lo que se veiacutea como una infeccioacuten rara o
escasamente prevalente sin embargo desde la revisioacuten de la situacioacuten (Chen y Mott
1990) se llamoacute la atencioacuten sobre la importancia de la Fasciolosis como un verdadero
problema de Salud Puacuteblica
Estas y otras circunstancias han hecho cambiar de forma radical la idea que hasta
entonces se teniacutea sobre Fasciolosis humana sobre todo teniendo en cuenta las
numerosas regiones que maacutes recientemente se han demostrado como endeacutemicas y por
tanto con elevadas prevalencias e intensidades de parasitacioacuten La Fasciolosis se
reconoce ahora como una enfermedad humana emergente Sea como fuere es indudable
que el nuacutemero real de casos humanos supera ampliamente los que se denuncian y a
pesar de que la situacioacuten ha cambiado desde ese periodo sigue siendo muy aceptada la
idea de que se trata de una enfermedad propia de ovejas y vacas lo que impide
convencer a los responsables regionales de Salud Puacuteblica de la importancia de estudiar
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en detalle las circunstancias que llevan a la infeccioacuten humana en algunos paiacuteses y la
necesidad imperiosa de adoptar medidas de diagnoacutestico y control
Las caracteriacutesticas de la epidemiologiacutea y transmisioacuten de la Fasciolosis conllevan a que su
distribucioacuten se disponga en las tiacutepicas manchas lo que hace que sea maacutes correcto
mencionar la distribucioacuten en aacutereas geograacuteficas o zonas con determinadas condiciones
maacutes que en el territorio completo de los paiacuteses
En el capiacutetulo de la Salud Puacuteblica referente a Fasciolosis se puede afirmar que hay
determinadas regiones con elevada prevalencia y con muchas personas afectadas En
alguno de los paiacuteses avanzados hay un determinado nuacutemero de casos humanos muchos
de los cuales se informan detalladamente en las publicaciones pero en otros lo que
sucede hace pensar que haya mayor nuacutemero de infecciones por el trematodo y que
pasen inadvertidos para la consulta meacutedica o que incluso se presenten casos de
Fasciolosis que cliacutenicamente se diagnostiquen equivocadamente como otros procesos
de ahiacute que sea de la mayor importancia mejorar o precisar el diagnoacutestico tanto a nivel de
semiologiacutea como del laboratorio
Es evidente que muchos de los estudios sobre prevalencias de fasciolosis humana no
son realmente muestras epidemioloacutegicas sino solamente estimaciones del nuacutemero de
casos detectados en una determinada zona La infeccioacuten humana estaacute citada en
numerosos paiacuteses de los cinco continentes lo que viene a demostrar la gran capacidad
de adaptacioacuten a muy distintos haacutebitats y climas
1 - Antecedentes
11 - Breve Resentildea Histoacuterica
La Fasciolosis en el sentido amplio del teacutermino estaacute causada por paraacutesitos trematodos
digeneos que pertenecen al geacutenero Fasciola cuya distribucioacuten geograacutefica entra sin duda
en la categoriacutea de paraacutesito cosmopolita ya que su difusioacuten es mundial (OMS 2006) Se
han descrito varias especies dentro del geacutenero Fasciola pero soacutelo dos se reconocen
como vaacutelidas desde el punto de vista taxonoacutemico como paraacutesitas del hombre y de
animales Esencialmente las especies que intervienen en esta parasitosis son F hepatica
y F gigantica Cobbold 1855 la primera predomina en zonas de climas maacutes templados
sin excluir su presencia en otras regiones y reconociendo que ambas se superponen con
frecuencia en zonas subtropicales (Andrews 1999)
En una investigacioacuten paleo-parasitoloacutegica realizada en el Valle Saale-Unistrut en
Alemania (Teegen 2003) se evidencioacute la presencia de huevos de F hepatica en un
esqueleto humano prehistoacuterico y tambieacuten en los restos de un bovino de unos 3000 antildeos
a C hallazgos que denotan la presencia de Fasciola spp en Europa hace miles de
antildeos La primera descripcioacuten de Fasciolosis en la literatura estaacute contenida en el libro
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titulado ldquoBlack Book of Chirkrdquo publicado cerca de 1200 (Froyd 1969) donde hace
referencia a paraacutesitos en el hiacutegado de las ovejas
Tabla 1 Hitos en el descubrimiento del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
De Brie 1379 Primero en observar al trematodo F hepatica
Redi 1688 Refuta la teoriacutea de la generacioacuten espontaacutenea
Swammerdam
1737 Primero en observar cercarias en un caracol
Muumlller 1773 Observa cercarias nadando en el agua Zeder 1803 Describe el miracidio eclosionando del huevo Nitzsch 1807 Observa cercarias enquistaacutendose
Bojanus 1818 Describe las redias y el desarrollo de cercariacuteas La Valette St
George 1855 Observa la infeccioacuten del caracol por el miracidio
Weinland 1875 Sugiere que las fases larvarias de F hepatica
transcurren en L truncatula
Leuckart Thomas 1882
Confirma que L truncatula es el hospedador intermediario y se comprende el ciclo bioloacutegico del trematodo
Lutz1892 1893 Confirma que los herbiacutevoros adquieren la infeccioacuten mediante la ingestioacuten de metacercarias
Sinitsin 1914 Confirma la ruta de migracioacuten de F hepatica hacia el hiacutegado
Fuente Andrews Stuart J 1999
Seguacuten la historia maacutes cercana de F hepatica se trata del primer trematodo que describioacute
en 1250 Pietro d‟Abano y maacutes tarde en 1379 Jean de Brie vio los paraacutesitos en un hiacutegado
ovino y relacionoacute su presencia con el consumo de una hierba que llama dauve (acaso un
ranuacutenculo) de donde derivoacute el nombre de duela del hiacutegado (Cordero 1999) Gesner
(1551) demostroacute que el distoma del hiacutegado se encontraba alliacute donde el ganado vacuno se
alimentaba con hierba en las proximidades del agua (Piekarski 1959)
De acuerdo a Cole (1944) una descripcioacuten del gusano aplanado del hiacutegado aparece en el
libro titulado ldquoA new Tracte or Treatyse moost profytable for all Husbandemenrdquo publicado
en 1523 por Sir Anthony Fitzherbert Poco despueacutes en 1539 en el libro ldquoDe lumbricis
alvum occupantibusrdquo se hace referencia a una observacioacuten realizada por el meacutedico
Fanensi Gabucinus quien describe gusanos que pareciacutean semillas de calabaza en los
vasos sanguiacuteneos del hiacutegado de ovejas y cabras Durante la segunda mitad del siglo XVI
se reportaron observaciones adicionales sobre la enfermedad del gusano hepaacutetico
aplanado principalmente las de Cornel Gemma (1575) En ese momento todaviacutea era
comuacuten pensar que la alimentacioacuten de las ovejas con determinadas plantas era
responsable de la enfermedad Recieacuten en 1688 esta teoriacutea fue cambiada por Francesco
Redi un meacutedico italiano autor de la primera helmintologiacutea comparada quien mostrando
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que los paraacutesitos liberaban huevos y asiacute destrozoacute la falsa doctrina de la generacioacuten
espontaacutenea Se desconoce el paraacutesito en el cual esta observacioacuten fue realizada por
primera vez pero Redi fue el primero en publicar un cuadro del paraacutesito un esquema de
un espeacutecimen sacado del hiacutegado de un carnero castrado y antildeos maacutes tarde tambieacuten las
recogioacute incluso de una liebre fue eacutel quien realizoacute los primeros dibujos de los que se tiene
constancia de este trematode
Aparentemente John Faber en 1670 afirmoacute que el gusano aplanado del hiacutegado viviacutea en
los conductos biliares y no en los vasos sanguiacuteneos (Reinhard 1957) Pollas en el siglo
XIX descubre el paraacutesito en el hombre mencionaacutendolo por primera vez en 1818 Otro de
los que describioacute el hallazgo de F hepatica en humanos fue Petridge en 1852 en viacuteas
biliares extrahepaacuteticas en Inglaterra (Blancas et al 2004)
En 1883 Leukhart de Alemania (Taylor 1937) y Thomas de Inglaterra investigando por
separado describieron el ciclo de vida completo (Jensen y Mackey 1973) Asiacute pues en
2014 se cumplioacute el primer centenario del descubrimiento del ciclo completo de F hepatica
en el que participaron numerosos investigadores de diversos paiacuteses entre los que se
citan soacutelo los logros maacutes destacados de alguno de ellos Thomas y Leuckart finalmente
concluidos por Sinitsin (Sinitsin 1914)
111 - Sinonimia
La palabra trematodo (derivada del griego) significa abertura o ventosa F hepatica ha
recibido tambieacuten nombres corrientes como ldquoduelardquo ldquodistomardquo o ldquoliver fluke diseaserdquo y
entre su sinonimia ldquojallo jallordquo ldquocallutacardquo ldquohojuelardquo y ldquomariposardquo El nombre vernaacuteculo en
Meacutexico es ldquocazahuaterdquo popularmente conocida como ldquoalicuyardquo o ldquocolerinardquo en la sierra
peruana ldquoTacutealpha laqacuteordquo en Bolivia ldquopirihuiacutenrdquo en Chile o ldquosaguaipeacuterdquo en Uruguay y
Argentina En nuestro paiacutes ldquoPalomilla del hiacutegadordquo en la pampa huacutemeda ldquocorrochordquo en la
provincia de San Juan ldquochonchacordquo en San Luis y ldquouncardquo o ldquouncacardquo en el noroeste
argentino
112 - Clasificacioacuten taxonoacutemica
Seguacuten los trabajos de Yamaguti et al (1958) Pantelouris (1965) Taylor (1937) Schell
(1985) Borchet (1981) Boray (1982) Boch y Supperer (1982) Euzeby (1971) y Urquhart
et al (1987) la clasificacioacuten taxonoacutemica de las especies del geacutenero F hepatica es la
siguiente
Phylum Platyhelminthes (vermes que poseen un cuerpo aplanado y que en su mayoriacutea
son hermafroditas) clase Trematoda (cuerpo no segmentado forma foliaacutecea con aparato
digestivo incompleto y ventosas como oacuterganos de fijacioacuten) subclase Digenea (evolucioacuten
indirecta con uno o maacutes hospedadores intermediarios) orden Echinostomatida suborden
Prosomata Odhner 1905 superfamilia Fascioloidea familia Fasciolidae Railliet 1985
geacutenero Fasciola Linnaeus 1758 especie F hepatica (Belding 1965)
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12 - Ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
El adulto del paraacutesito presenta aspecto foliaacuteceo lanceolado y aplanado Mide de 5 a 13
mm de ancho por 2 a 3 cm de largo (Noble y Noble 1965) es hermafrodita Su aparato
digestivo es incompleto sin ano El de fijacioacuten estaacute constituido por dos ventosas la
posterior o acetaacutebulo estaacute sobre la cara ventral y es de forma triangular la ventosa
anterior es redondeada y maacutes pequentildea Carece de aparato circulatorio y respiratorio
(Belding 1965)
FuenteBIODIDACR Livingstone
Figura 1 Especiacutemenes adultos de F hepatica sobre la caacutepsula de Glisson obtenidos a
partir de una infeccioacuten natural en Lama glama en el valle de Fiambalaacute y esquema de F
hepatica adulta
El uacutetero presenta una forma tubular enrollada dilataacutendose por la acumulacioacuten de los
huevos y desembocando finalmente en el poro genital junto al cirro (Rey Millares
1960)(Belding 1965)(Pezzi Guimaratildees 2002)
Los huevos del paraacutesito (50 x 150 micro de color parduzco) inmaduros son descargados por
los conductos biliares en las heces Pasan a cursos de agua desarrollan el embrioacuten
liberan la primera forma larval el miracidio el cual penetra un hospedador intermediario
que incluye muchas especies del geacutenero Lymnaea en el que se desarrolla a otros
estadios larvales -esporoquistes redias- hasta emerger como cercarias moacuteviles Las
cercarias se liberan del molusco y se enquistan como metacercarias en la superficie de
las plantas acuaacuteticas donde se mantienen intactas e infectivas por largos periacuteodos
El hospedador (mamiacutefero) definitivo se infecta por el consumo de vegetales crudos En eacutel
la metacercaria se desenquista y desarrolla a formas juveniles y adultas que finalmente
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se alojan en los conductos biliares El paraacutesito produce huevos (a partir de los 3 meses)
que pasan con la bilis a las heces del hospedador completando el ciclo (Belding
1965)(Kean et al 1978)
Fuente Centro para el control y prevencioacuten de enfermedades
(CDC)
Figura 2 Huevos de F hepatica presentes en materia fecal de ovinos infectados
naturalmente en el valle de Fiambalaacute obtenidos por el meacutetodo de sedimentacioacuten de
Dennis Stone y Swanson donde se aprecian los embriones en su interior y el detalle del
opeacuterculo abierto y esquema de huevo embrionado
Los paraacutesitos del Phylum Platyhelminthes Clase Trematoda Subclase Digenea se
hallan dentro del grupo de los que se transmiten entre varios hospedadores El ciclo de
vida de los digeneos involucra un hospedador definitivo en general un vertebrado donde
el paraacutesito alcanza la madurez sexual por lo menos un hospedador intermediario donde
se produce la multiplicacioacuten larval (esporoquistes redias y cercarias) y estadios de vida
libre (miracidios y cercarias) (Hasseeb y Fried 1997) El primer hospedador intermediario
es un caracol con respecto al cual los digeneos poseen una gran especificidad El estadio
infectivo para el hospedador definitivo es la metacercaria y para el primer hospedador
intermediario el miracidio
Figura 3 Esquema del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
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Nota Los huevos inmaduros de F hepatica se descargan en los conductos biliares y en
las heces Los huevos embrionados maduran en el agua huevos liberando
miracidios que invaden un hueacutesped intermediario adecuado caracol del geacutenero
GalbaFossaria En el caracol los paraacutesitos pasan por varias etapas de desarrollo
(esporoquistes redias y cercarias ) Las cercarias se liberan del caracol y se
enquistan como metacercarias en la vegetacioacuten acuaacutetica u otras superficies Los
mamiacuteferos adquieren la infeccioacuten por comer la vegetacioacuten que contiene metacercarias
Los seres humanos pueden infectarse al ingerir vegetales que contiene metacercarias
especialmente berros Despueacutes de la ingestioacuten las metacercarias se desenquistan en
el duodeno y migran a traveacutes de la pared intestinal la cavidad peritoneal y el
pareacutenquima hepaacutetico a los conductos biliares donde se desarrollan como trematodos
adultos
Fuente Centro para el Control y Prevencioacuten de Enfermedades (CDC)
121 - Aspectos epidemioloacutegicos
El estudio de la epidemiologiacutea de la Fasciolosis involucra los factores que afectan la
prevalencia y la intensidad de la infeccioacuten y como esto impacta en los animales
(Torgerson y Claxton 1999) La epidemiologiacutea de la enfermedad depende de la
susceptibilidad de las especies de hospedadores definitivos dada por la resistencia
natural o adquirida y por el estado nutricional la edad y otros factores que condicionan la
fisiologiacutea de cada especie y tambieacuten de la presioacuten de infeccioacuten en el ambiente La presioacuten
de infeccioacuten a su vez estaacute fuertemente influenciada por factores abioacuteticos en particular
por la temperatura y la humedad que modulan la presencia y el desarrollo de los
hospedadores intermediarios y el desarrollo del paraacutesito dentro y fuera de eacutestos
(Torgerson y Claxton 1999) La epidemiologiacutea de la Fasciolosis tambieacuten depende de una
gran variedad de factores topograacuteficos bioloacutegicos y de manejo ganadero (Boray et al
1969)
La distribucioacuten de la Fasciolosis es irregular ya que la infeccioacuten estaacute determinada por la
presencia del molusco que actuacutea como hospedador intermediario en el agua dulce de la
presencia de animales herbiacutevoros de las condiciones fisiograacuteficas y climaacuteticas y de los
haacutebitos dietarios humanos (Mas-Coma 2005)
Respecto a las caracteriacutesticas ecoloacutegicas del caracol bajo especiales circunstancias los
limneidos son capaces de adaptarse a las condiciones maacutes extremas Los caracoles
limneidos son maacutes resistentes a las bajas temperaturas que a las altas Las
metacercarias son susceptibles a la desecacioacuten a temperaturas por encima de los 25 ordmC
pero pueden sobrevivir a las bajas temperaturas durante tiempo con suficiente nivel de
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humedad Una alta humedad asociada con abundantes lluvias suelen ser precursoras de
endemias en animales herbiacutevoros (Ripert et al 1988)
Los principales animales que actuacutean como reservorios hospedadores en relacioacuten al
hombre son las ovejas las cabras y los bovinos La oveja es el mamiacutefero reservorio que
juega un papel maacutes importante en la contaminacioacuten de los pastos y por tanto en la
transmisioacuten humana En la oveja la puesta de huevos diaria es relativamente alta (4000-
5000 huevos por paraacutesito adulto y 8800-25100 por hospedador) (Boray 1969)
Los haacutebitos alimenticios del ser humano son muy importantes en la Fasciolosis Comer
berro ademaacutes de otras verduras acuaacuteticas con metacercarias adheridas puede ser
vehiacuteculo de la transmisioacuten asiacute como beber agua contaminada con metacercarias
flotantes (Bargues et al 1996 b)
Los trabajos de Fasciolosis publicados en la literatura permiten distinguir varias
categoriacuteas (I) la mayoriacutea de artiacuteculos se refieren a notificaciones de casos individuales
(II) otros informan de varios miembros de grupos familiares que compartieron alimentos
contaminados (III) artiacuteculos que comunican brotes que no necesariamente afectan a
miembros de la misma familia y (IV) artiacuteculos de estudios epidemioloacutegicos que se
refieren a un gran nuacutemero de personas (Chen y Mott 1990)(Esteban et al 1998)
Cabe destacar la gran capacidad de colonizacioacuten y expansioacuten de esta enfermedad a
partir de los oriacutegenes euroasiaacuteticos de F hepatica relacionada con la gran adaptabilidad
tanto de los trematodes como de los limneidos a medios muy diversos En el caso de F
hepatica resalta su capacidad de adaptarse y dar lugar a grandes endemias en lugares
extremos e inhoacutespitos
13 - Viacuteas de difusioacuten geograacutefica de F hepatica
Los animales domesticados alcanzaron grandes densidades poblacionales y se
concentraron en la proximidad de la vivienda humana aumentando la probabilidad de
transmisioacuten intraespeciacutefica de las infecciones y el contagio a la poblacioacuten humana
(Wisnivesky 2003) Los animales domeacutesticos se originaron en la medialuna feacutertil del
Sudeste asiaacutetico o Mesopotamia y se dispersaron luego alrededor del mundo (Haviland
1997)
El punto inicial de difusioacuten de F hepatica durante el periacuteodo posterior a la adaptacioacuten
peri-domiciliaria mediante pequentildeos rumiantes ovinos y caprinos salvajes hacia el Viejo
Mundo procedioacute del Medio Oriente aproximadamente 6000 a C La dispersioacuten hacia el
oeste centro y norte de Europa tuvo lugar a traveacutes de los Balcanes Turquiacutea y Grecia
entre los milenios 4-3 a C Hacia el oeste la ruta seguida probablemente fue por el
Mediterraacuteneo con los fenicios y maacutes tarde con los romanos llegando al noroeste de
Aacutefrica e Iberia sobre el siglo VIII a C Los ochocientos antildeos de ocupacioacuten aacuterabe de la
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peniacutensula ibeacuterica ciertamente habriacutean contribuido a la difusioacuten de F hepatica hacia el
norte de Aacutefrica a traveacutes de Gibraltar (Mas-Coma et al 2009 a)
La expansioacuten hacia el este en Asia sentildeala dos posibles rutas principales una maacutes
limitada hacia el sur a traveacutes de las montantildeas de Afganistaacuten y hasta Pakistaacuten
probablemente en los milenios IV y III a C y otra viacutea maacutes larga a traveacutes de Mongolia
hasta China y el Lejano Oriente al parecer maacutes reciente
Figura 4 Geografiacutea de la probable dispersioacuten de Fasciola hepatica
Fuente Mas-Coma et al 2009 a
131 - Distribucioacuten de F hepatica en Ameacuterica
Fueron las rutas transoceaacutenicas hacia el Nuevo Mundo y Oceaniacutea las que continuaron la
propagacioacuten de F hepatica durante los uacuteltimos 500 antildeos Otras rutas secundarias
completaron la dispersioacuten en las diferentes zonas de Ameacuterica Esto viene a significar que
la amplia difusioacuten de la Fasciolosis en Espantildea Portugal Francia el Reino Unido y Paiacuteses
Bajos entre los siglos XV y XIX constituyoacute probablemente la viacutea de introduccioacuten del
paraacutesito en tierras americanas
Luego de la llegada de los europeos a Ameacuterica comienza la introduccioacuten de animales
domeacutesticos El ganado espantildeol adquirioacute importante representacioacuten puesto que se habriacutea
extendido inicialmente en el aacuterea del Caribe y despueacutes hacia el resto de Ameacuterica Central
y del Sur En Argentina F hepatica se describe por primera vez como problema en
ovinos en 1888 (Bacigalupo et al 1943)
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El ganado de origen espantildeol introducido en el continente fue inicialmente ovino y
despueacutes se amplioacute al vacuno mientras que el ganado de origen portugueacutes que llegoacute
hacia Brasil fueron bovinos criados principalmente en el noroeste de la peniacutensula Ibeacuterica
(Mirol et al 2003)
La gran uniformidad geneacutetica de las Fasciolas halladas en puntos geograacuteficamente
alejados como Valdivia en Chile o Leoacuten en Espantildea demuestra el origen comuacuten de la
difusioacuten de paraacutesito y de hospedadores en toda Ameacuterica Otro tanto sucede entre los
aislamientos geneacuteticos del Reino Unido en relacioacuten con los hallados en Australia
La Fasciolosis endeacutemica que hoy se extiende por amplias zonas de los paiacuteses del sur de
Latinoameacuterica es producto de la historia En Ameacuterica precolombina no se conociacutean las
ovejas ni las vacas pero los europeos al llegar a las nuevas tierras las importaron desde
Europa presumiblemente ya infectadas con trematodes y no soacutelo eso tambieacuten se
trajeron sin tener conocimiento de ello los caracoles (Lymnaeas)
Tal acarreo ha llegado a generar un verdadero problema ecoloacutegico que con el paso del
tiempo ha alcanzado cotas tan importantes que por ejemplo solamente en la VII Regioacuten
de Chile se ha registrado un porcentaje de animales infectados del 90 con importantes
decomisos hepaacuteticos en las faenas de los mataderos (Apt et al 1992) La invasioacuten
parasitaria fue tan efectiva que afectoacute a otras muchas especies incluso a las vicuntildeas
llamas (Mariacuten 2009) alpacas guanacos liebres (Kleiman et al 2004) conejos silvestres
etceacutetera Otro tanto puede decirse de amplias regiones de Peruacute Bolivia Ecuador y de
paiacuteses centroamericanos como es el caso de Cuba (Acha y Szyfres 1997)
El empleo de especies animales para el transporte de personas bienes y mercanciacuteas que
se produce en todas las civilizaciones humanas proporcionoacute la posibilidad de que F
hepatica se extendiera de modo progresivo a amplias aacutereas geograacuteficas dentro de un
continente o una regioacuten intracontinental Muchos de estos animales entre ellos las mulas
y llamas todaviacutea se emplean hoy para el transporte aunque sea a escala local y en ese
sentido representan un medio importante que posibilita la difusioacuten de la infeccioacuten
La trashumancia es un sistema de explotacioacuten ganadera basado en el pastoreo y
aprovechamiento de pastos en periodos adecuados y se orienta a evitar los efectos
negativos de factores climaacuteticos excesivamente rigurosos por las temperaturas friacuteas o
caacutelidas acompantildeadas de escasas precipitaciones o de excesiva sequiacutea en particular en
ciertas estaciones y regiones determinadas La migracioacuten estacional de la ganaderiacutea
entre tierras bajas y de montantildea ha sido una tradicioacuten importante durante muchos antildeos y
aun todaviacutea se practica en muchas regiones cordilleranas de nuestro paiacutes
Es evidente que los transportes por viacutea terrestre mariacutetima o aeacuterea utilizados
asiduamente para movimientos de importacioacutenexportacioacuten de ganado pueden tener
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repercusiones sanitarias y muy probablemente han sido el origen de introduccioacuten de
Fasciolosis hasta otras zonas lejanas tal como sucedioacute en Ameacuterica
Los problemas relacionados con estos movimientos comerciales ademaacutes de implicar el
riesgo de extender la infeccioacuten por F hepatica hacia otras aacutereas tambieacuten dificultan la
realizacioacuten y obtencioacuten de buenos resultados en estudios geneacuteticos que esteacuten basados
en algunos marcadores moleculares En efecto si las poblaciones de F hepatica
proceden de mezclas anteriores y de distintos oriacutegenes es muy difiacutecil que a traveacutes de los
estudios geneacuteticos se puedan hacer interpretaciones correctas sobre su origen y las viacuteas
seguidas por los paraacutesitos (Semynova et al 2006)(Walker et al 2007) y por tanto habraacute
mucha dificultad para obtener resultados reveladores sobre las rutas seguidas por
Fasciola spp sobre todo si se tiene en cuenta la escasa disponibilidad de marcadores
moleculares fiables
Tales movimientos de ganaderiacutea realmente no soacutelo facilitan la extensioacuten de F hepatica
sino tambieacuten de las especies de caracoles que actuacutean como hueacutespedes intermediarios
como es el caso de los limneidos que se encuentran en contacto directo con los animales
porque ambos comparten haacutebitats similares Esto es lo que sucede con respecto a Galba
truncatula que puede ser arrastrado entre las pezuntildeas de los animales y dispersados a
otros lugares introducieacutendose asiacute de manera accidental donde no es habitual Es lo que
muy probablemente ha sucedido y se ha analizado en zonas de Bolivia (Mas-Coma et al
2001) Las evidencias sugieren que ejemplares de G truncatula pueden permanecer
activos en el seno de trozos de barro adherido a las pezuntildeas de los rumiantes que
pisotean esas zonas y pueden ser trasladados a otras donde tras un periodo de
hibernacioacuten o estivacioacuten se reactivan cuando nuevamente se sumergen en agua
Si se observan los datos sobre la evolucioacuten de la Fasciolosis animal de los uacuteltimos antildeos
en muchas regiones los resultados no dejan de sorprender porque se comproboacute algo
muy llamativo y es que lejos de disminuir la prevalencia ha aumentado
Diversos estudios han puesto de manifiesto diferencias en la resistencia o sensibilidad a
esta parasitosis dependiendo de la especie animal los bovinos ovinos equinos y el
hombre reaccionan en forma tardiacutea permitiendo su desarrollo Asiacute pues la infeccioacuten por
F hepatica no afecta por igual a todas las especies animales el ganado ovino y bovino
son los maacutes receptivos lo que implica considerables peacuterdidas econoacutemicas tanto directas
(son conocidas las mortandades en bovinos debidas a Hemoglobinuria Bacilar por
Clostridium haemolyticum como la Hepatitis Infecciosa Necrosante por C novyi B en
ovinos asociadas a Fasciolosis aguda) como indirectas (decomiso de hiacutegados
disminucioacuten de las producciones gastos en tratamientos etceacutetera) (Olaechea 1994)
Dentro de los animales susceptibles de ser hospedadores reservorios de F hepatica se
diferencia I) animales domeacutesticos principales reservorios ganado vacuno y ovino
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cerdos buacutefalos y monos II) animales domeacutesticos reservorios secundarios caballos
cabras dromedarios camellos y llamas III) animales silvestres liebres conejos y
roedores entre otros (Mas-Coma et al 1997)
Es curioso como en animales de laboratorio como ratas ratones conejos asiacute como en
humanos unos pocos ejemplares de F hepatica producen reacciones muy intensas e
incluso muertes Otros en cambio como el cerdo poseen una resistencia natural a la
migracioacuten de las formas juveniles probablemente por la gran cantidad de tejido
conjuntivo perilobulillar que tienen (Getty 1974) sin embargo tambieacuten hay descritas
Fasciolosis graves En eacutequidos que son hospedadores receptivos a F hepatica las
lesiones son casi inaparentes incluso en caso de parasitacioacuten abundante Se mencionan
casos de muerte relacionados con F hepatica en los que curiosamente se encontraron
nuacutemeros variables de especiacutemenes desde uno a 14 e incluso hasta 40 ejemplares (Rojo
y Ferreacute 1999)
En la Repuacuteblica Argentina los registros de decomiso de hiacutegados indican que la
Fasciolosis es la cuarta enfermedad de importancia veterinaria del ganado bovino de
acuerdo a los datos de la Oficina de Estadiacutestica del Servicio Nacional de Sanidad y
Calidad Agroalimentaria Direccioacuten de Fiscalizacioacuten de Productos de Origen Animal Es
considerada una enfermedad endeacutemica en el paiacutes y su distribucioacuten abarca las provincias
de Buenos Aires Catamarca Coacuterdoba Corrientes Chaco Chubut Entre Riacuteos Jujuy La
Pampa Mendoza Misiones Neuqueacuten Riacuteo Negro Salta San Luiacutes Santa Cruz Santa Fe
y Tierra del Fuego En los uacuteltimos antildeos las mayores prevalencias en animales se
registraron en la Regioacuten Patagoacutenica (68) seguida de la Regioacuten Noreste (41)
Noroeste (25) Cuyo (14) y Pampeana (09) (Prepelitich y Wisnivesky-Colli 2013)
En Catamarca no existen registros oficiales del porcentaje de infeccioacuten en el ganado
vacuno u otras especies animales por este trematodo hepaacutetico aunque los ganaderos
refieren peacuterdidas econoacutemicas importantes La Fasciolosis animal estaacute ampliamente
distribuida en todos los departamentos de la provincia seguacuten se desprende de la
informacioacuten de los decomisos de viacutesceras infectadas en los mataderos
La Fasciolosis se ha considerado una enfermedad que afecta a la ganaderiacutea desde
tiempo inmemorial Debido a su importancia econoacutemica a su particular ciclo bioloacutegico y
forma de transmisioacuten su peculiar especificidad de hospedadores etc se han planteado
a lo largo de muchos antildeos multitud de estudios no soacutelo desde la perspectiva veterinaria
sino tambieacuten de otras muchas aacutereas de conocimiento en lo que se ha convenido en
llamar acercamientos multidisciplinares que van siendo habituales en las investigaciones
parasitoloacutegicas
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14 - Hospedador intermediario
El paraacutesito no se encuentra en regiones donde las condiciones no son las adecuadas
para el desarrollo de los caracoles que sirven de hospedador intermediario Pertenecen al
Phylum Mollusca y a la clase Gasteropoda y las especies de intereacutes se encuentran en la
subclase Euthyneura o Pulmonata dependiendo del sistema de clasificacioacuten (Cuezzo
2009)
Los caracoles pertenecientes al geacutenero Lymnaea se encuentran involucrados en la
transmisioacuten de F hepatica Son anfibios y viven en el barro en ambientes de aguas poco
profundas sujetos a las inundaciones y desecaciones Se los encuentra normalmente en
haacutebitats que se presentan huacutemedos intermitentemente y en aguas ligeramente aacutecidas y
es raro encontrarlos en ambientes permanentemente huacutemedos Su distribucioacuten no es
uniforme porque dentro de cada haacutebitat pueden concentrarse en aacutereas pequentildeas con
canales de drenaje y filtraciones Viajan largas distancias arrastrados por la corriente y en
ciertos paiacuteses del mundo como Australia las grandes regiones con aguas permanentes y
que contienen pocos caracoles son consideradas importantes en la recolonizacioacuten de
cursos de agua temporarios El 30 de los moluscos sobrevive meses de sequiacutea
mediante la estivacioacuten y auacuten los recieacuten eclosionados pueden sobrevivir dos meses de
estivacioacuten Sin embargo una vez que el agua regresa los caracoles son capaces de
procrearse raacutepidamente (Torgerson y Claxton 1999)
Figura 5 Imagen y fotografiacutea del aspecto externo de Lymnaea neotropica proveniente del
valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina
La ecologiacutea de la Fasciolosis estaacute estrechamente relacionada con la de los moluscos que
sirven de hospedadores intermediarios Los caracteres fisiograacuteficos la composicioacuten del
suelo y los factores climaacuteticos determinan el ritmo de la reproduccioacuten de los limneidos y
por consiguiente la dinaacutemica epidemioloacutegica
F hepatica posee una gran especificidad hacia su hospedador intermediario ya que soacutelo
se desarrolla en caracoles de la familia Lymnaeidae Estos caracoles estaacuten distribuidos
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en todo el mundo aunque son maacutes abundantes en las zonas templadas del hemisferio
norte (Malek 1962) Son caracoles pulmonados en su mayoriacutea anfibios capaces de vivir
sobre el fango aunque existen algunas especies maacutes acuaacuteticas que se desarrollan a
varios centiacutemetros de profundidad Habitan una gran variedad de ambientes
dulceacuiacutecolas temporarios y permanentes poco profundos de aguas claras con poca
corriente (Malek 1962)
No todas las especies de limneidos son igualmente susceptibles a F hepatica y tanto los
factores extriacutensecos (condiciones ambientales de cada regioacuten) como los intriacutensecos
(estado nutricional tamantildeo madurez sexual etceacutetera) influyen en el rol de cada especie
como hospedador intermediario (Ollerenshaw 1971)(Mattos y Ueno 1986)(Minchela et
al 1985)
En la mayoriacutea de los paiacuteses de Ameacuterica del Sur L viator L cubensis y L truncatula
estaacuten identificadas como los principales hospedadores de F hepatica (Samadi et al
2000)(Pointer et al 2006)(Kleiman et al 2007) en Brasil la especie introducida L
columella es el principal hospedador intermediario (Amato et al 1986)
Las especies descriptas en nuestro paiacutes son L viator L diaphana L peculiaris L
pictonica y L plicata (Hubendick 1951)(Paraense 1975)(Castellano y Landoni 1981)
(Paraense 1982)(Paraense 1983)(Paraense 1984)(Malek 1985) L columella
(Hubendick 1951)(Prepelich et al 2003) L patagonica L neotropica (Bargues y Mas-
Coma 2005)(Bargues et al 2007 a b) y L truncatula (Issia et al 2008)
En Argentina la relevancia epidemioloacutegica y la distribucioacuten geograacutefica de estos caracoles
no se conocen con precisioacuten y existe poca certeza taxonoacutemica entre las especies del
geacutenero Las especies L plicata Hylton Scott 1953 y L diaphana King 1830 han sido
escasamente citadas (Hubendick 1951)(Hylton 1953) La distribucioacuten de L diaphana se
encuentra asociada a zonas friacuteas abarca la Patagonia Tierra del Fuego e Islas Malvinas
(Castellanos y Landoni 1981) aunque en Salta tambieacuten se ha observado la presencia de
esta especie (Rossanigo et al 1983) La especie L viatrix Orbigny 1835 ha sido
descripta en las siguientes provincias Buenos Aires Catamarca Chubut Coacuterdoba
Corrientes Entre Riacuteos Jujuy Mendoza Neuqueacuten Riacuteo Negro Salta y San Luis
(Paraense 1976 1982)(Lombardero et al 1979)(Castellanos y Landoni
1981)(Rossagnino et al 1983)(Venturini y Fonrouge 1985)(Kleiman et al 2004) La
distribucioacuten de L columella (Say 1817) estaacute restringida al Noreste (Prepelitch et al
2003) mientras L truncaluta es reportada en el paiacutes como el maacutes importante limneido en
la transmisioacuten de Fasciolosis (Bargues et al 2006 b) En la provincia de Catamarca L
viator es la especie reconocida (Bacigalupo 1930)(Morton 1986)(Ubaid 1989)
En la revisioacuten general maacutes reciente sobre limneidos sudamericanos Malek (1985)
catalogoacute la misma especie mencionada por Hubendick (1951) pero aceptando L
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patagonica como vaacutelida y no incluyoacute a L peculiaris Mientras que para Lombardero et al
(1979) el informe en Argentina de la especie europea Stagnicola como L palustris por
NJ Evans del Museo Britaacutenico de Historia Natural es sorprendente ya que seriacutea el uacutenico
Stagnicola reconocido en la Regioacuten Neotropical Asimismo se deberiacutea confirmar la cita
de la especie L cousini (Olaechea 1994) ya que puede haber un malentendido sobre
esta especie porque contrariamente a lo que se sentildeala no se incluye la presencia de L
cousini en Argentina en la uacuteltima revisioacuten de Castellanos y Landoni (1981)
Recientemente los hallazgos de L neotropica por Mera y Sierra (2009) en la provincia de
Mendoza y el de Pujadas et al (2014) en la provincia de Entre Riacuteos representan tanto
una nueva especie de limneido para la fauna argentina como un intereacutes adicional del
punto de vista de la enfermedad
Cuando la temperatura ambiente oscila entre los 10-30 ordmC y hay suficiente humedad en el
suelo se generan condiciones favorables para el establecimiento y desarrollo de los
caracoles de la familia Lymnaeidae (Torgerson y Claxton 1999) Estas condiciones
permiten que los moluscos desarrollen poblaciones abundantes y persistentes en el
tiempo A su vez los huevos de F hepatica eliminados por el ganado infectado se
desarrollan satisfactoriamente bajo estas mismas condiciones ambientales liberaacutendose al
ambiente gran cantidad de miracidios Estos se ponen en contacto con los caracoles
susceptibles y aumenta el nuacutemero de ejemplares infectados que luego emitiraacuten cercarias
que se enquistaraacuten en la vegetacioacuten Una gran cantidad de hospedadores definitivos
susceptibles ya sea porque tienen una resistencia innata pobre o una respuesta inmune
deficiente estaraacute en condiciones de infectarse y desarrollar exitosamente la infeccioacuten
Si bien el hospedador intermediario juega un rol fundamental en el ciclo de transmisioacuten
porque el paraacutesito se multiplica asexualmente en eacutel y aumenta en forma exponencial el
nuacutemero de larvas el hospedador definitivo es importante en la diseminacioacuten de la
infeccioacuten debido a su mayor capacidad para trasladarse (Haseeb y Fried 1997) Para
entender el modo de transmisioacuten en este tipo de ciclos es esencial conocer la biologiacutea de
los hospedadores intermediarios y definitivos Maacutes auacuten la dinaacutemica de transmisioacuten de las
infecciones por digeneos soacutelo puede ser comprendida teniendo en cuenta los factores
abioacuteticos que regulan las poblaciones de hospedadores intermediarios y aquellos que
influyen en el desarrollo de los estadios de vida libre del paraacutesito (Haseeb y Fried 1997)
Las pequentildeas especies de limneidos incluidas en el grupo GalbaFossaria son muy
importantes debido a su gran capacidad para transmitir F hepatica Hay sin embargo
especies incluidas en este grupo que muestran una alta capacidad de transmisioacuten y en el
extremo opuesto hay otras que han demostrado no ser susceptibles a la infeccioacuten por
etapas larvales de F hepatica como L schirazensis (Bargues et al 2011 a) Por otra
parte hay especies de este grupo que estaacuten claramente relacionadas con las aacutereas
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endeacutemicas de Fasciolosis humana debido a su ecologiacutea antropofiacutelica y comportamiento
mientras que otras especies por lo general habitan biotopos frecuentados por el ganado
pero alejados de los lugares donde los humanos viven o desarrollan sus actividades
(Artigas et al 2011)(Bargues et al 2012)
Debido a este aspecto estar maacutes relacionado con la infeccioacuten humana o la infeccioacuten
animal presenta un intereacutes aplicado a la diferenciacioacuten entre las especies que
pertenecen a este grupo cuando se trata de los hospedadores intermediarios presentes
en una zona endeacutemica (Bargues et al 2011 c)
La susceptibilidad de las especies de limneidos en Fasciolosis representa un factor
crucial en el establecimiento no soacutelo de la distribucioacuten geograacutefica de la enfermedad en los
animales y los seres humanos sino tambieacuten en las prevalencias e intensidades debido a
caracteriacutesticas ecoloacutegicas (dinaacutemica de la poblacioacuten caracteriacutestica antropofiacutelica tipo de
cuerpos de agua etceacutetera) de las distintas especies de limneidos Es por ello que los
limneidos aparecen vinculados a los diferentes patrones de transmisioacuten (Mas-Coma
2005) y escenarios epidemioloacutegicos (Mas-Coma et al 1999 a) de esta enfermedad muy
heterogeacutenea en los seres humanos (Mas-Coma et al 2009 a) Las diferencias en faunas
de limneidos continentales tambieacuten explican porque la Fasciolosis en Ameacuterica solamente
es causada por F hepatica debido a la ausencia de limneidos del geacutenero Radix que
actuacutean como intermediarios de F gigantica (Bargues et al 2001)
A nivel de especies de limneidos los problemas se encuentran principalmente en la
uniformidad morfoloacutegica y anatoacutemica interespeciacutefica que por lo general da serias
dificultades en la clasificacioacuten de una muestra (Bargues y Mas-Coma 2005)(Bargues et
al 2007 a 2011 a) Por otra parte la variacioacuten intraespeciacutefica de la forma de la conchilla
es particularmente marcada en limneidos dependiendo de las condiciones ambientales
Por lo tanto hay muchos problemas de clasificacioacuten de muestras principalmente
relacionados con las especies del grupo GalbaFossaria (Bargues et al 2011 a)
Afortunadamente hay marcadores de secuencia tanto en el ADNr nuclear y el ADN
mitocondrial que permiten una apropiada clasificacioacuten de muestras en estos
invertebrados (Mas-Coma y Bargues 2009)
15 - Fasciola hepatica en humanos
En lo que hace referencia a la Fasciolosis humana durante muchos antildeos se encuadroacute
como una enfermedad que se presentaba en situaciones muy particulares de modo que
se habiacutean citado relativamente pocos casos y de forma esporaacutedica lo que condujo a que
esta parasitosis haya estado clasificada como ldquoenfermedad secundariardquo
Esta situacioacuten ha cambiado apreciablemente en los uacuteltimos antildeos cuando la OMS
comenzoacute a sospechar que habiacutea aspectos nuevos que atender puesto que al disponer
de informes serios de varios paiacuteses se confirmaba la existencia de la infeccioacuten humana
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por F hepatica con mucha maacutes frecuencia de lo que se suponiacutea Fue en ese periodo
cuando la OMS decidioacute apoyar las investigaciones sobre Fasciolosis humana a nivel
mundial con una iniciativa que incluyoacute diversos campos de investigacioacuten dentro de lo que
se denomina colaboracioacuten de equipos multidisciplinares y con la aplicacioacuten avanzada de
procedimientos de estudio que por ejemplo incluiacutean la geneacutetica molecular
Desde la deacutecada de 1990 la Fasciolosis humana tiene una mayor relevancia debido no
solo al aumento en el diagnoacutestico del nuacutemero de casos y la alta tasa de morbilidad que
causa entre la poblacioacuten afectada sino tambieacuten por el elevado nuacutemero de personas en
riesgo de infeccioacuten (Chen y Mott 1990) Este hecho refleja un serio problema de Salud
Puacuteblica con una importante repercusioacuten en la economiacutea de las sociedades traducido
como ausencias escolares y laborales por parte de la poblacioacuten parasitada Esto respalda
que la Fasciolosis no siga siendo considerada una mera zoonosis secundaria
Se estimaba que la poblacioacuten humana afectada por Fasciolosis podriacutea situarse entre los
24 (Rim et al 1996) y 17 millones de personas (Hopkins 1992) con un total de 180
millones en riesgo de contraer la enfermedad (OMS 1995) Ademaacutes si se tiene en
cuenta la falta de conocimiento sobre la enfermedad en humanos en muchas regiones de
Aacutefrica y Asia el nuacutemero de personas afectadas podriacutea ser mucho mayor que el notificado
(Mas-Coma 2004 a b)
La Fasciolosis humana ha sido descrita en 51 paiacuteses diferentes de los 5 continentes
(Esteban et al 1998) Los anaacutelisis de distribucioacuten de la enfermedad han mostrado que es
la parasitosis que presenta una distribucioacuten geograacutefica con la mayor amplitud latitudinal
longitudinal y altitudinal conocidas (Mas-Coma et al 2003) En la Fasciolosis humana se
han descrito situaciones de hipoendeacutemia mesoendeacutemia e hiperendeacutemia (Mas-Coma et
al 1999 a 2008 2009 a)
La Fasciolosis es una enfermedad parasitaria cosmopolita En todo el mundo se
presentan casos humanos esporaacutedicos (Soulsby 1987) habieacutendose incrementado su
incidencia desde fines del siglo pasado (Loja et al 2003) Es asiacute como en la deacutecada del
noventa se empezaba a considerar como una parasitosis de mayor importancia en salud
humana Los brotes que se registraban con anterioridad eran localizados y afectaban un
nuacutemero reducido de personas Para esa eacutepoca la OMS reconoce el intereacutes meacutedico a
escala mundial
Hasta hace pocos antildeos la Fasciolosis se circunscribiacutea a poblaciones de cuencas
hidrograacuteficas bien delimitadas pero los recientes cambios ambientales y del
comportamiento humano estaacuten definiendo nuevos liacutemites geograacuteficos y aumentando las
poblaciones en riesgo (Savioli et al 1999) por ende la enfermedad posee una
distribucioacuten irregular Las caracteriacutesticas corresponden no a un paiacutes determinado sino a
una determinada zona fisiograacutefica y climaacuteticamente homogeacutenea (Mas-Coma et al 1999
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b) Tiacutepicamente ocurre en regiones templadas a excepcioacuten de Oceaniacutea distribuyeacutendose
ademaacutes en zonas tropicales y subtropicales La Fasciolosis humana es una enfermedad
tropical re-emergente que en los uacuteltimos antildeos se reporta con mayor incidencia aun
donde anteriormente se habiacutea asociado a casos surgidos entre el ganado de la zona
afectada (Mas-Coma et al 1999 b)
Despueacutes de antildeos de estudio en las zonas donde la infeccioacuten humana por F hepatica es
comuacuten se propuso una clasificacioacuten en base a supuestos epidemioloacutegicos (Mas-Coma et
al 2009 c) Asiacute se indican casos humanos ldquoimportadosrdquo que aparecen en zonas sin
Fasciolosis pero que se han adquirido en otros lugares endeacutemicos Hay tambieacuten casos
ldquoautoacutectonosrdquo que se presentan generalmente donde hay una casuiacutestica animal
importante y que aparecen de manera esporaacutedica o muy irregular Finalmente se
entiende que hay zonas ldquoendeacutemicasrdquo detectadas mediante pruebas directas y por
serologiacutea Entre ellas hay diferencias importantes en cuanto a la prevalencias desde las
que tienen porcentajes inferiores al 1 hasta otras zonas en las que se puede definir un
estadio de hiperendemismo con prevalencias que superan el 10
En esos lugares endeacutemicos pueden distinguirse tres tipos de situaciones atendiendo a la
prevalencia en la poblacioacuten total Hipoendeacutemico la prevalencia es menor al 1
Mesoendeacutemico con porcentajes de infeccioacuten del 1 al 10 donde puede presentarse una
alta prevalencia en nintildeos de 5 a 15 antildeos e Hiperendeacutemico porcentajes de infeccioacuten
superiores al 10 (Mas-Coma 2005) y donde los casos humanos participan
significativamente en la transmisioacuten a traveacutes de la eliminacioacuten de huevos generalmente
se presenta asociada a condiciones sanitarias muy deficientes (Mas-Coma et al 1999 a)
Ademaacutes hay diferentes tipos de brotes de acuerdo a la situacioacuten endeacutemicano endeacutemica
de la zona
a)Epidemia en aacutereas donde la Fasciolosis es endeacutemica en los animales pero no en los
humanos zonas donde los reportes previos de casos humanos han sido siempre aislados
y esporaacutedicos esos brotes usualmente involucran a pocos individuos que resultan
infectados desde el mismo foco de contaminacioacuten (familia o pequentildeo grupo berros u
hortalizas silvestres de cultivo domeacutestico o comercial portadoras de metacercarias)
b)Epidemia en aacutereas humanas endeacutemicas brotes en zonas donde la enfermedad es
endeacutemica en los humanos pueden involucrar a un gran nuacutemero de individuos
usualmente estaacute relacionado a condiciones climaacuteticas favorables para el desarrollo del
ciclo bioloacutegico tanto del paraacutesito como del caracol La epidemia puede tener lugar en
aacutereas hipoendeacutemicas mesoendeacutemicas o hiperendeacutemicas (Mas Coma et al 1999 a)
16 - La infeccioacuten a nivel mundial
La infeccioacuten ha sido reportada en Unioacuten Sovieacutetica China Europa Aacutefrica Ameacuterica del
Norte Sudameacuterica Centro Ameacuterica y Australia (OMS 1995) Las epidemias maacutes
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extensas ocurrieron en Francia con maacutes de 500 casos (Courde y Triozon 1957) y en
Cuba con 799 casos (Peacuterez et al 1983)
Ejemplos de prevalencia muy reducida se dan en Francia Niveles intermedios se hallan
en Iraacuten Yemen (Farag 1998) Portugal (Mas-Coma 2005) Vietnam (Tran et al 2001) y
Egipto (Curtale et al 2000)(Amer et al 2011) La maacutes alta prevalencia e intensidad de la
infeccioacuten en humanos se presenta en Bolivia con 72 realizando diagnoacutesticos por
meacutetodos coproloacutegicos y 96 por serologiacutea (Esteban et al 1997 b 1999)
161 - Ameacuterica
La infeccioacuten humana por F hepatica se ha denunciado en muchos paiacuteses del mundo
pero es en Ameacuterica donde ocurren maacutes casos (Acha y Syfres 1997) demostraacutendose que
las maacutes importantes regiones endeacutemicas de Fasciolosis humana estaacuten localizadas en
Ameacuterica del Sur (Marcos et al 2004) La frecuencia de la infeccioacuten humana en Ameacuterica
Latina se ha subestimado en la bibliografiacutea parasitoloacutegica
En diversos lugares de Latinoameacuterica la prevalencia e incidencia de las enteroparasitosis
son un indicador del nivel socio econoacutemico y de vida de la poblacioacuten Los factores de
riesgo asociados a deficientes condiciones sanitarias hacinamiento promiscuidad
analfabetismo ruralidad y pobreza continuacutean estando presentes en estas infecciones
Aun hoy las enfermedades tropicales olvidadas (NTDs) (OMS 2008) siguen siendo las
infecciones maacutes comunes de las personas pobres que habitan en Ameacuterica Latina
(Caacuteceres 1989)
Dentro de las diversas regiones de mayor concentracioacuten de Fasciolosis humana
conocidas (Mas-Coma et al 2005 2009 a) Ameacuterica del Sur se destaca por las zonas
endeacutemicas humanas descritas en muchos paiacuteses Altas prevalencias e intensidades en
los seres humanos se han reportado en los paiacuteses andinos como Bolivia (Hillyer et al
1992)(Esteban et al 1997a b 1999)(Mas-Coma et al 1999 b) Peruacute (Esteban et al
2002)(Espinoza et al 2007)(Gonzaacutelez et al 2011) y Chile (Apt et al 1993)(Artigas et al
2011) Zonas endeacutemicas humanas tambieacuten se han descripto aunque con prevalencias e
intensidades maacutes bajas en Centroameacuterica (Arroyo et al 1981) y recientemente tambieacuten
en Ameacuterica del Norte (Zumaquero et al 2013) Se denuncia soacutelo en forma esporaacutedica en
Estados Unidos (Graham et al 2001) o en Canadaacute (Fullerton et al 2006) y con mayor
incidencia en zonas de Meacutexico (Cruz Loacutepez et al 2006) Varios casos humanos tambieacuten
se han registrado en zonas de altitud de Ecuador (Trueba et al 2000) Colombia
(Bargues et al 2011 b) y Venezuela (Bargues et al 2011 c) En Uruguay (Binkley y
Sinniah 1997) y Brasil los informes humanos soacutelo se refieren a casos esporaacutedicos y
aislados En la regioacuten del Caribe la Fasciolosis humana plantea principalmente
problemas en Cuba donde los pacientes son diagnosticados de forma continua (Millaacuten et
al 2000)(Diacuteaz Fernaacutendez et al 2011) incluso con alta incidencia (Gonzaacuteles Santana et
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al 2013) al igual que en Haitiacute (Agnamey et al 2012) Puerto Rico todaviacutea se puede
considerar una zona riesgosa de infeccioacuten humana despueacutes de la situacioacuten
epidemioloacutegica en el pasado (Hillyer 1981) En Ameacuterica casi todas las especies de
limneidos involucradas en la transmisioacuten de F hepatica pertenecen al grupo
GalbaFossaria hecho que demuestra que la clasificacioacuten por simples herramientas
malacoloacutegicas es pronunciadamente difiacutecil pero que es de suma importancia ya que hay
especies de caracoles de este grupo que no participan en la transmisioacuten aunque por lo
general estaacuten presente en zonas de alta transmisioacuten (Bargues et al 2011 a)
1611 - Peruacute Bolivia y Chile
Las prevalencias e intensidades de infeccioacuten encontradas en Peruacute son muy altas donde
el nuacutemero de personas infectadas es de 742000 (Marcos et al 2007) Concretamente se
denunciaron prevalencias ligeramente superiores al 30 de la poblacioacuten estudiada en
Santa Ana (Stork et al 2003) y Juniacuten (Marcos et al 2004) clasificaacutendose como zona
hiperendeacutemica para la Fasciolosis humana Estudios efectuados en Huertas localidad
perteneciente al valle de Mantaro realizados mediante pruebas seroloacutegicas y exaacutemenes
parasitoloacutegicos de heces revelan una prevalencia de Fasciolosis del 283 por teacutecnicas
coproloacutegicas alcanzando 363 por meacutetodos seroloacutegicos realizados con Fas2-ELISA
(Marcos et al 2004)
En Asillo departamento Puno la prevalencia general de Fasciolosis por exaacutemenes de
heces fue 333 y por serologiacutea 519 (Marcos et al 2005) siendo analizadas tambieacuten
por el ensayo Fas2-ELISA (Maco et al 2002) Posteriormente se recopiloacute el nuacutemero de
casos humanos de infeccioacuten por F hepatica en cuatro deacutecadas llegando a la conclusioacuten
de que la Fasciolosis humana es una enfermedad emergente en el Peruacute y de mayor
importancia en Salud Puacuteblica (Marcos et al 2007) Los estudios realizados determinan
que no hay diferencias significativas entre el geacutenero masculino y el femenino (Marcos et
al 2004) Son susceptibles las personas de cualquier edad y en las zonas de alta
prevalencia las tasas maacutes elevadas suelen aparecer entre los nintildeos menores de 15
antildeos a diferencia de lo que ocurre en zonas no endeacutemicas (Blancas et al 2004)
Se distinguen aacutereas de baja prevalencia como 87 en Cajamarca (Knobloch 1985) en
tanto que ejemplos de alta prevalencia se encuentran en la regioacuten de Puno (156)(Mas-
Coma et al 1999 a) y del valle de Mantaro (342) (Marcos et al 2007 a)
En Bolivia el aacuterea endeacutemica para ldquotalpacutea laqordquo (lengua Aymaraacute) estaacute limitada a una
relativa pequentildea regioacuten (60 x 60 Km) en el noroeste del altiplano boliviano entre el lago
Titicaca y la ciudad de La Paz donde se presenta una prevalencia de la infeccioacuten en
nintildeos en edad escolar con un rango entre 312 y 382 (Mas-Coma et al 2001)
Aunque no se pensaba antes ahora se sabe que hay lugares con prevalencias altas de
infeccioacuten por F hepatica en personas que viven en aacutereas endeacutemicas Ademaacutes se ha
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constatado que frecuentemente afecta de manera preferente a nintildeos y mujeres y
asimismo se ha comprobado que no es excepcional que en aacutereas humanas
hiperendeacutemicas como en Bolivia y Peruacute se detecten cifras de maacutes de 400 huevos por
gramo de heces (Esteban et al 1997) en algunos casos como el de nintildeos bolivianos se
han superado los 5000 hpg de heces lo que revela la existencia de un grave problema
de salud en esas zonas
En Chile las infecciones por F hepatica son frecuentes en todo el paiacutes extendieacutendose la
enfermedad desde la Primera hasta la Undeacutecima Regioacuten siendo las zonas de mayor
prevalencia las comprendidas entre la VI y la IX Es poco frecuente en la poblacioacuten
humana pero en ninguacuten caso es una enfermedad rara (Sapunar et al 2001) En un
estudio realizado a 5861 individuos en la VII regioacuten se registroacute un 07 de prevalencia
(41 casos) encontrando un 06 en los sectores rurales de la provincia de Curicoacute 075
por ciento en Talca y 071 en Linares (Apt et al 1992)
1612 - Repuacuteblica Argentina
En Argentina se hallan identificados 58 reportes registrando 555 casos que involucran 13
provincias la mayoriacutea de ellas (977) en zonas altas en aacutereas montantildeosas centrales y
valles andinos concentrados en Coacuterdoba (430) San Luis (29) y Mendoza (28) mientras
que el resto de las provincias son raramente afectadas La mayor prevalencia se observa
en mujeres La edad variacutea de 3-95 antildeos con una media aritmeacutetica de 371 En general
las infecciones ocurren de enero a abril al aumentar las precipitaciones y las
temperaturas y los diagnoacutesticos se realizaron por anaacutelisis coproparasitoacutegicos (288)
intradermoreaccioacuten (63) cirugiacutea (43) serologiacutea (13) y seis presentaciones erraacuteticas (Mera
y Sierra et al 2011)
Varios brotes que presentan caracteriacutesticas tiacutepicas de transmisioacuten alimentaria aparecen
relacionados con la ingestioacuten de berros que crecen naturalmente a lo largo de los lechos
de riacuteos y arroyos recogidos durante fines de semana o actividades vacacionales en aacutereas
serranas de Coacuterdoba (Siciliano et al 1989) y San Luis (Carnevale et al 2012) donde la
Fasciolosis ha sido diagnosticada como un problema de Salud Puacuteblica a tener en cuenta
Un anaacutelisis retrospectivo permite destacar los informes de publicaciones (Roffo
1913)(Greenway 1924)(Bengolea et al 1927)(Del Valle y Donovan 1928)(Bacilalupo
et al 1930)(Mascheroni 1933)(Castex y Greenway 1937)(Paladino y Galarce
1938)(Boto1939)(Cames1940)(Bacigalupo 1942)(Solari y Canepa 1943)(Bacigalupo
et al 1943)(Cuenya 1944)(Cid 1947)(Cames et al 1947)(Rodriacuteguez 1952)(Longo y
Daraio 1953)(Petraglia 1954)(Rodriacuteguez 1954)(Caacuteceres 1955)(Logaldo 1955)
(Rodriacuteguez 1961)(Strada 1961)(Ahualli y Arias 1961)(Urrutia y Ferraris 1962)(Cantildeas
et al 1964)(Cornejo y Castillo 1964)(Simoacuten et al 1964)(Ruggieri et al 1967)(Sosa y
Romero 1967)(Correa et al 1969)(Peiretti 1969)(Trosero y Nocetti 1969)(Padilla et al
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1970)(Carena et al 1972)(Ossola et al 1972)(Peiretti y Morales 1973)(Sonzini et al
1973)(Alaggia 1981)(Majul et al 1981)(Siciliano 1982)(Gifoniello et al 1983)(Miguel
et al 1985)(Siciliano et al 1989)(Melero et al 1991)(Siciliano et al 1992)(Minoprio et
al 1995)(Ale et al 2000)(Barcat 2005)(Lloret et al 2005)(Rubel et al 2005)(Corti et al
2006)(Nieto Sosa et al 2006)(Salomoacuten et al 2006)(Nieto Sosa et al 2008)(Riacuteos et al
2008) (Nieto Sosa et al 2012)(Carnevale et al 2012) referidos a casos esporaacutedicos y
aislados
En la provincia de Catamarca la presencia de F hepatica se registra en la deacutecada de
1980 cuando se hallaron ejemplares adultos en actos quiruacutergicos realizados a cinco
pacientes del geacutenero femenino (Andrada et al 1983)
17 - Factores de riesgo en la infeccioacuten de F hepatica
La epidemiologiacutea y transmisioacuten de la Fasciolosis humana estaacute determinada por la
presencia de caracoles dulceacuiacutecolas como hospedadores intermediarios animales
domeacutesticos infectados condiciones climaacuteticas y por algunos haacutebitos de consumo No
obstante algunos autores han demostrado que en las aacutereas endeacutemicas los factores
epidemioloacutegicos y de transmisioacuten no son tan simples como pudiera parecer a priori y que
se deben tener en cuenta otros factores adicionales para proponer una clasificacioacuten
epidemioloacutegica respecto de las aacutereas de presentacioacuten de Fasciolosis humana (Esteban et
al 1999)
El hombre es un hueacutesped accidental La infeccioacuten es de relativa baja frecuencia en el ser
humano debido a que su principal mecanismo de transmisioacuten estaacute ligado a los haacutebitos
alimentarios de los individuos La mayor frecuencia de casos se presenta despueacutes de
veranos huacutemedos cuando las aguas de drenaje de los pastos irrigados y encharcados de
los animales cubren completamente a los berros (Nasturtium spp) (Soulsby 1987) en
los que se encuentran enquistadas las metacercarias (Faust 1949) la ingesta de berros
contaminados por el paraacutesito es un antecedente que ocurre en la mayoriacutea de los casos
Tambieacuten se infectan por el haacutebito que tienen muchas personas de llevarse a la boca
tallos de plantas acederas briznas de hierba etc y de esta manera enferman los
agricultores y ganaderos (Piekarsky 1959) Ademaacutes en la infeccioacuten humana intervienen
especies vegetales como las hojas de Taraxacum dens leonis (diente de leoacuten) Mentha
spp (menta) Medicago sativa (alfalfa) Cichorium intybus (achicoria) Juncus andicola y
Juncus ebracteactus (juncos) Nostoc sp (Cianofitas) (Bjorland et al 1995) Tambieacuten se
suele asociar a la ingestioacuten de plantas acuaacuteticas tales como el mastuerzo (Radostits et
al 2002) y a los emolientes que son consumidos como plantas medicinales existiendo la
creencia que los berros y la alfalfa son buenos para el hiacutegado son otra viacutea de infeccioacuten
(Marcos et al 2004)
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El agua es una fuente de infeccioacuten sea por beberla sin hervir o por contaminacioacuten de
hortalizas o utensilios de cocina (Mas-Coma et al 2007) Se ha demostrado que los seres
humanos participan en la transmisioacuten de la enfermedad en aquellos lugares donde se
practica la defecacioacuten al aire libre (Mas-Coma et al 1999)
En aacutereas epideacutemicas hay diferentes tipos de brotes en relacioacuten con las caracteriacutesticas de
la zona Generalmente coinciden las zonas epideacutemicas con las de Fasciolosis animal y en
tales casos normalmente concuerdan con un grupo de personas que consumen la misma
fuente de contaminacioacuten generalmente verduras Lactuca sativa (lechuga) Spinacea
oleracea (espinaca) u otros vegetales frescos y contaminados con metacercarias de F
hepatica Estos casos habitualmente se presentan en miembros de una familia o en
comunidades de una misma zona
George A Alleyne en el proacutelogo de la publicacioacuten ldquoEnfermedades transmisibles geacutenero y
equidad en la saludrdquo (Hartigan 2001) cita a Levins cuando comparte que la complejidad
de los factores determinantes (geacutenero raza y clase social) de las enfermedades
emergentes constituye un serio problema cientiacutefico de nuestra eacutepoca (Levins 1995) En
las distintas infecciones humanas es importante profundizar en los factores que afectan a
la distribucioacuten de la enfermedad como analizar la influencia del geacutenero del hospedador
definitivo sobre la Fasciolosis
Hasta 2003 en la mayoriacutea de estudios sobre la Fasciolosis humana y su incidencia en las
diferentes zonas de endemicidad los aspectos referidos a la epidemiologia de la
enfermedad en funcioacuten del geacutenero del hospedador definitivo arrojaban resultados
contradictorios obtenieacutendose zonas donde las prevalencias e intensidades de infeccioacuten
eran diferentes De ese modo los estudios referidos anteriormente muestran que tanto en
Bolivia como en Peruacute (Esteban et al 1999) las diferencias relativas a la prevalencia de
infeccioacuten por F hepatica en funcioacuten del geacutenero no eran significativas Por el contrario en
Egipto al igual que en Chile (Apt et al 1992) existiacutean diferencias significativas en la
prevalencia de infeccioacuten dependiendo de si afectaba a hombres o mujeres
Las investigaciones continuaron y no es hasta la deacutecada pasada cuando se llega a
recopilar (Curtale et al 2007) maacutes de 21000 casos con casi 1000 positivos Ambos
paraacutemetros analizados prevalencia e intensidad de infeccioacuten resultaron
significativamente mayores en mujeres que en hombres en Egipto poniendo de
manifiesto lo que la tendencia ya reflejaba y es que siuml existen diferencias en cuanto a las
intensidades de infeccioacuten en funcioacuten del geacutenero afectando en mayor medida a las
mujeres
Mientras que el predominio de Fasciolosis humana puede ser insignificante en aacutereas
donde la forma veterinaria de la enfermedad ocurre las tasas variacutean extensamente en
aacutereas donde la enfermedad es endeacutemica en la gente
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La relacioacuten entre el predominio de Fasciolosis y la edad del hueacutesped se diferencia en
aacutereas humanas endeacutemicas y humanas no endeacutemicas El alto predominio en nintildeos
menores de 15 antildeos se presenta por lo general en aacutereas endeacutemicas con las tasas maacutes
elevadas en contraste con la situacioacuten corriente en aacutereas humanas no endeacutemicas
(Esteban et al 2002)
18 - Sintomatologiacutea cliacutenica y patologiacutea
El primer caso de Fasciolosis humana en el mundo fue reportado en 1600 (Naacutequira et al
1975) mientras que en 1852 se describe por primera vez el hallazgo de especiacutemenes
adultos de F hepatica en las viacuteas biliares intrahepaacuteticas del hombre
El diagnoacutestico de Fasciolosis humana se presenta ante un enfermo con un cuadro cliacutenico
caracterizado por trastornos digestivos especialmente hepatobiliares y fiebre
Presentando o no urticaria de evolucioacuten aguda o croacutenica que puede estar acompantildeada
de eosinofilia elevada y en el que puede haber antecedentes de ingestioacuten de berros
Aunque tambieacuten es posible que la parasitosis curse en forma subcliacutenica si la infeccioacuten
es por pocos ejemplares La importancia de la cliacutenica estaacute condicionada por el nuacutemero de
metacercarias ingeridas
Las manifestaciones cliacutenicas por F hepatica se agrupan en las fases agudas o croacutenicas
(Behm y Sangster 1999) La forma aguda se clasifica en tres subtipos diferentes tiacutepica
(Chen y Mott 1990)(Vilches et al 1993) atiacutepica (Ibaacutentildeez et al 1994) y ectoacutepica
(Catchpole y Snow 1952)(Mas-Coma et al 2014) mientras que la forma croacutenica se
diferencia con dos subtipos sintomaacutetica (Jimeacutenez et al 2001) y asintomaacutetica (Arjona et
al 1995) El siacutendrome agudo corresponde al periodo de migracioacuten de las formas
inmaduras se caracteriza por fiebre de intensidad variable eosinofilia (Behm y Sangster
1999) ictericia (Kianman et al 1996) dolor del hipocondrio derecho con signo de Murphy
y dolor abdominal (Naacutequira 1995) mialgias artralgias cefalea naacuteuseas voacutemitos
(Picoaga 1980) flatulencia alergia (prurito o urticaria) (Ortiz et al 2000) hepatomegalia
fatiga decaimiento perdida de peso anorexia y alteracioacuten de las pruebas funcionales
hepaacuteticas (Espinosa et al 2010) Puede durar 3 meses pero muchos infectados cursan
asintomaacuteticamente aunque fiebre hepatomegalia y eosinofilia sugieren Fasciolosis en
aacutereas endeacutemicas (Marcos et al 2007 b) Esta fase aguda se debe a los tuacuteneles que las
formas inmaduras del paraacutesito al migrar cavan en el pareacutenquima hepaacutetico durante las
primeras semanas los que se llenan con sangre (Loja et al 2003) y ceacutelulas de una
respuesta inmunitaria mediada por linfocitos con reclutamiento masivo de eosinoacutefilos
El cuadro puede llegar a cinco meses y presenta las complicaciones maacutes severas de la
enfermedad entre las que se destacan hematoma subcapsular granuloma muacuteltiples
abscesos hepaacuteticos anemia severa colecistitis pancreatitis colangitis derrames
pleurales y eventualmente fibrosis hepaacutetica (Dalton 1999)
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El estadio o fase croacutenica (Maclean y Graeme-Cook 2002) aparece cuando los paraacutesitos
adultos ya se ubican en la luz de los conductos biliares y empiezan a emitir los huevos
Presenta siacutentomas inespeciacuteficos o vagos en la mayoriacutea de los casos aunque algunos de
ellos se complican principalmente por obstruccioacuten biliar (Umac et al 2006) y terminan en
intervenciones quiruacutergicas momento en el que se hace el diagnoacutestico encontraacutendose los
paraacutesitos adultos en los conductos biliares o causando disfuncioacuten hepaacutetica Muchos
casos se diagnostican como colecistitis aguda Los siacutentomas son causados por la
inflamacioacuten del conducto e incluyen dispepsia diarrea ictericia colecistitis coacutelico biliar y
litiasis del coleacutedoco Dentro del conducto biliar se observa inflamacioacuten perivascular que
el proceso de resolucioacuten transforma en fibrosis
La fase aguda puede superponerse a la fase croacutenica si se estaacute en permanente exposicioacuten
a la fuente de contaminacioacuten y podriacutea adquirirse la infeccioacuten aguda sobre la croacutenica
previamente presente por lo tanto se pueden observar casos de Fasciolosis croacutenica con
cifras altas de eosinofilia
La migracioacuten de las formas inmaduras a traveacutes del pareacutenquima hepaacutetico puede producir
lesiones traumaacuteticas y necroacuteticas Destruccioacuten considerable del hiacutegado caracterizada por
necrosis coagulativa (Dalton 1999) abscesos hemorraacutegicos (Loja et al 2003) y hepatitis
con infiltracioacuten de neutroacutefilos linfocitos y eritrocitos (Bryan y Michelson 1995) La
patogeacutenesis de la Fasciolosis depende de la carga parasitaria y del tamantildeo de los
trematodos adultos que provocan reacciones granulomatosas con agrupaciones de
histiocitos ceacutelulas epiteliales y gigantes En la etapa croacutenica se observa que en la pared
de los conductos biliares el paraacutesito adulto produce alteraciones inflamatorias
adenomatosas y fibroacuteticas (Saacutenchez et al 2000) existiendo hiperplasia del epitelio que
puede llegar a la obliteracioacuten total provocando ictericia obstructiva infeccioacuten bacteriana
secundaria atrofia del hiacutegado cirrosis periportal colecistitis y colelitiasis (Atias 2001)
En los conductos biliares en infecciones graves con gran nuacutemero de paraacutesitos puede
haber litiasis biliar y cirrosis que ocurren con cierta frecuencia en los casos croacutenicos
(Bryan y Michelson 1995)
Se distinguen ademaacutes los siguientes periodos cliacutenicos
Fase de incubacioacuten desde la ingestioacuten de las metacercarias hasta la aparicioacuten del primer
siacutentoma variacutea dependiendo del nuacutemero de metacercarias consumidas y de la repuesta
del hospedador Su duracioacuten es variable
Fase aguda o invasiva comienza cuando ocurre la migracioacuten parasitaria hasta el
conducto biliar la sintomatologiacutea se debe principalmente a la destruccioacuten mecaacutenica del
tejido hepaacutetico y del peritoneo abdominal debida a la migracioacuten de las larvas Dura 2 a
cuatro meses y sus principales signos son Fiebre dolor abdominal desde leve a severo
generalmente localizado en el hipocondrio derecho o bajo el xifoides trastornos
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gastrointestinales como peacuterdida de apetito flatulencia nausea y diarrea urticaria
Ocasionalmente ocurren siacutentomas respiratorios tos disnea hemoptisis y dolor toraacutecico
Al examen fiacutesico pueden aparecer ademaacutes hepato y esplenomegalia ascitis la que se
caracteriza por ser un liacutequido amarillo con un alto contenido de leucocitos y con
predominio de eosinofilos una anemia leve a moderada signos toraacutecicos por
auscultacioacuten o radiografiacutea e ictericia la cual es poco frecuente
Fase latente incluye la etapa de maduracioacuten hasta el inicio de la ovoposicioacuten
Puede durar meses o antildeos los pacientes frecuentemente son descubiertos durante un
screening familiar tras detectar a uno de sus integrantes infectado Pueden tener
dolores gastrointestinales o una o maacutes recaiacutedas de los siacutentomas agudos
Fase obstructiva o croacutenica cuando el paraacutesito se establece en el conducto biliar
Puede desarrollarse durante meses o antildeos despueacutes de la infeccioacuten inicial El paraacutesito
adulto en el conducto biliar causa inflamacioacuten e hiperplasia del epitelio La resultante
colangitis y colecistitis combinada con el gran tamantildeo del paraacutesito son suficientes para
producir una obstruccioacuten mecaacutenica del conducto biliar
Existen tambieacuten Fasciolosis de tipo ectoacutepicas por parte de estados inmaduros del
paraacutesito que pueden desviarse durante la migracioacuten En el hombre los sitios maacutes
frecuentes para esta presentacioacuten estaacuten en el tracto gastrointestinal Otros lugares
pueden ser el tejido subcutaacuteneo corazoacuten vasos sanguiacuteneos pulmoacuten y cavidad pleural
cerebro pared abdominal apeacutendice paacutencreas glaacutendula mamaria articulaciones y bazo
Aquellos paraacutesitos ectoacutepicos nunca logran madurar y sus efectos patoloacutegicos son debido
a los surcos de migracioacuten que causan dantildeo tisular con inflamacioacuten y fibrosis Este
paraacutesito puede ser calcificado o incorporado en un granuloma (Mas-Coma et al 1999 b)
La duracioacuten de la infeccioacuten humana es desconocida pero algunos investigadores han
estimado que el paraacutesito podriacutea sobrevivir por 5 a 12 antildeos (Karnaukhov 1978) y desde 9
a 135 antildeos (Dan et al 1981)
19 - Diagnoacutestico
191 - Directo
El diagnoacutestico de certeza en humanos se establece de forma directa cuando se
encuentran huevos del paraacutesito en las heces o bilis obtenida por sondeo duodenal Los
exaacutemenes coproloacutegicos de rutina desde el examen directo hasta los meacutetodos de
sedimentacioacuten se utilizan en la fase croacutenica pero el meacutetodo coproparasitoloacutegico presenta
baja sensibilidad (Levine et al 1980) soacutelo permite detectar la infeccioacuten cuando el paraacutesito
adulto ya estaacute instalado en los conductos biliares y requiere la recoleccioacuten de muestras
seriadas resultando poco confiable y complicado (Chen y Mott 1990)
Asimismo hay que considerar la dinaacutemica en la produccioacuten de huevos que en el hombre
se conoce menos aunque se sabe que el nuacutemero de huevos y su liberacioacuten pueden ser
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reducida o intermitente (Maco et al 2002) El hombre no se considera un hospedador
muy receptivo para F hepatica y la mayor parte de los ejemplares juveniles quedan
atrapados en el pareacutenquima hepaacutetico durante su migracioacuten aunque algunos siacute alcanzan
los conductos biliares y maduran
Debido a la ovoposicioacuten intermitente del paraacutesito en muchos casos nunca se llega a
detectarlos de esta manera resultan negativos los exaacutemenes coproloacutegicos de hasta tres
diacuteas de recoleccioacuten consecutiva La manifestacioacuten microscoacutepica de huevos es
sumamente especiacutefica pero tiene limitaciones en la sensibilidad debido al tiempo de
maduracioacuten sexual y posterior produccioacuten de huevos El examen coproloacutegico meacutetodo
sencillo y de bajo costo no detecta infecciones tempranas (los ejemplares joacutevenes no
producen huevos) ni cargas parasitarias bajas En el hombre el nuacutemero de huevos
producidos y su dinaacutemica son poco conocidos
Una buena teacutecnica para el diagnoacutestico coproparasitoloacutegico de Fasciolosis humana es la
sedimentacioacuten en copa o teacutecnica de sedimentacioacuten raacutepida (TSR) (Lumbreras et al 1962)
Tambieacuten hay que considerar en queacute fase de la infeccioacuten se encuentran puesto que el
periodo de prepatencia es de 3 a 4 meses post-infeccioacuten y los siacutentomas cliacutenicos pueden
aparecer mucho antes de que se observen los huevos en las heces (Marcos et al 2007
a)
Se debe considerar que el anaacutelisis cuantitativo (Kato y Miura 1954) no refleja cuaacutentos
ejemplares de especiacutemenes adultos albergan esos individuos y tampoco las pruebas de
diagnoacutestico indirecto o seroloacutegico si bien es faacutecil suponer que son procedimientos muy
uacutetiles de diagnoacutestico Un segundo problema se plantea a la hora del tratamiento de modo
que la aplicacioacuten de un faacutermaco eficaz puede provocar concentracioacuten de paraacutesitos
adultos muertos y por su tamantildeo llegar a obstruir los canales biliares y el coleacutedoco
Tambieacuten hay que tener muy en cuenta la resistencia parasitaria a las drogas
antihelmiacutenticas (Villegas et al 2012)
1911 - Imaacutegenes
Existen otros meacutetodos directos de diagnoacutestico como son las imaacutegenes obtenidas por
radiografiacutea ecografiacutea (Van Beers et al 1990) scanner tomografiacutea axial computada
(TAC) colangiopancreotomiacutea retroacutegrada endoscoacutepica (Martiacutenez et al 2000) o resonancia
magneacutetica nuclear Estas teacutecnicas se utilizan ante la sospecha de infeccioacuten y para
confirmar el diagnoacutestico y posterior seguimiento durante y despueacutes del tratamiento
(Gonzaacutelez et al 2001)(Corti et al 2006)
Las imaacutegenes ayudan al diagnoacutestico y a la evaluacioacuten de complicaciones Los hallazgos
dependeraacuten de la fase cliacutenica en la cual se encuentre el paciente En fase aguda la
ecografiacutea puede mostrar heterogeneidad del pareacutenquima hepaacutetico lesiones nodulares
hipoecogeacutenicas muacuteltiples o uacutenicas y linfonoacutedulos periportales (Castro 2010) Durante la
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fase croacutenica es posible visualizar partiacuteculas orogeacutenicas intravesiculares edema de la
pared vesicular y engrosamiento parietal del coleacutedoco con dilatacioacuten moderada (Castro
2010)
Sin embargo de los exaacutemenes de imagenologiacutea usados para estudiar el hiacutegado y las viacuteas
biliares ninguno confiere certeza diagnoacutestica La forma de los paraacutesitos puede
confundirse con los caacutelculos del coleacutedoco o los coaacutegulos de hemoglobina (Arjona 1995)
aunque la ecografiacutea resulta de valor y puede mostrar (10 semanas despueacutes de la
infeccioacuten) lesiones hepaacuteticas nodulares hipodensas o quiacutesticas dilatacioacuten de los
conductos biliares y formas moacuteviles ecogeacutenicas dentro de la viacutea biliar (Gonzaacutelez Llorente
et al 2002)
Dentro del estudio por imaacutegenes la Fasciolosis se deberiacutea encontrar entre los
diagnoacutesticos diferenciales de granuloma hepaacutetico Esta lesioacuten aunque no cuente con
biopsia debe sugerir que en todo paciente que proceda de zona endeacutemica y que
presente lesiones en el hiacutegado ecograacuteficamente compatibles con granuloma hepaacutetico
debe incluirse a esta parasitosis dentro de los principales diagnoacutesticos diferenciales y no
tomarse meramente como de exclusioacuten (Sezgin et al 2004)
1912 - Teacutecnicas quiruacutergicas
La primera publicacioacuten sobre una cirugiacutea realizada en Argentina que permitioacute el hallazgo
de ejemplares de F hepatica data de principio del siglo pasado (Del Valle y Donovan
1923) Mientras que en una litiasis biliar (Cantildeas et al 1964) por coledocotomiacutea extraen
paraacutesitos sin encontrar huevos en la bilis reportando que en la praacutectica se sacan 2
ejemplares y diacuteas posteriores por el tubo de Kehr salen huevos de F hepatica La mayor
casuiacutestica es reportada por Alaggia (1981) que presenta 16 pacientes positivos operados
En Catamarca se registra la presencia de especiacutemenes adultos en actos quiruacutergicos de
las viacuteas biliares practicados en 5 oportunidades (Andrada et al 1983)
192 - Indirecto
Numerosas pruebas seroloacutegicas han sido evaluadas para el diagnoacutestico de infecciones
por F hepatica La deteccioacuten de anticuerpos en suero es claramente el meacutetodo de
preferencia para el inmunodiagnoacutestico (Hillyer 1999) de la Fasciolosis humana
Los niveles de inmunoglobulinas (Ig) IgG IgM e IgE estaacuten generalmente aumentados en
Fasciolosis incluso los niveles de IgE se correlacionan positivamente con la carga de
huevos la edad las caracteriacutesticas cliacutenicas y el grado de eosinofilia En lo que a la clase
IgG se refiere las subclases predominantes son IgG1 y el isotipo IgG4 (Mas-Coma et al
1999 b)
La Fasciolosis humana es de difiacutecil diagnoacutestico principalmente en la fase aguda o
invasiva porque no puede ser diagnosticada por el examen de huevos en heces y
depende de pruebas seroloacutegicas (Maco et al 2002) por lo cual numerosas teacutecnicas de
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inmunodiagnoacutestico de esta parasitosis han sido descriptas y aplicadas en diversos paiacuteses
(Espino et al 1987)(Coacuterdova et al 1999)(Carnevale et al 2001 a)
Se ha comprobado la respuesta inmunoloacutegica en el hombre ante antiacutegenos metaboacutelicos
y tambieacuten ante las cistein-proteasas procatepsina L1 (Cornejo et al 2003)(Carnevale et
al 2001 b)
El inmunodiagnoacutestico se ha planteado como una interesante alternativa en la buacutesqueda
de meacutetodos diagnoacutesticos maacutes sensibles y especiacuteficos tal es el caso del ensayo por
inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (ELISA) Sin embargo generalmente se han usado
antiacutegenos constituidos por complejos antigeacutenicos que frecuentemente conducen a
problemas de sensibilidad o especificidad El preparado antigeacutenico utilizado
primariamente fue un extracto del gusano adulto luego fueron productos de excrecioacuten-
secrecioacuten y fracciones parcialmente purificadas El anaacutelisis mediante
inmunoelectroforesis en geles de agarosa (inmunoprecipitacioacuten simple y cruzada) ha
permitido determinar que los extractos parasitarios crudos de F hepatica muestran una
composicioacuten antigeacutenica variada siendo maacutes complejos los antiacutegenos somaacuteticos y de E-S
provenientes de paraacutesitos adultos (Gorman et al 1992) Maacutes recientemente han sido
usados antiacutegenos nativos purificados y antiacutegenos recombinantes (Hillyer 1999) Los
antiacutegenos E-S han sido considerados importantes inductores de la respuesta inmune
humoral en la Fasciolosis y tanto su especificidad como su utilidad diagnoacutestica han sido
demostradas en numerosos estudios de Fasciolosis humana y animal (Diacuteaz et al 1998)
Otros estudios tambieacuten se han enfocado sobre la deteccioacuten directa de antiacutegenos
parasitarios ya sea en suero plasma o heces (Hillyer 1999) En 1990 se desarrolloacute un
ELISA para detectar antiacutegeno parasitario circulante en personas con Fasciolosis el cual
al aplicarlo sobre 25 pacientes resultoacute que el 100 de ellos fue reconocido como positivo
a Fasciolosis ademaacutes no se presentaron reacciones cruzadas con otras parasitosis
(Espino et al 1990)
Actualmente el diagnoacutestico de rutina de Fasciolosis humana se basa en la deteccioacuten de
anticuerpos contra el paraacutesito en suero principalmente por el meacutetodo de ELISA
considerada una de las pruebas maacutes ampliamente usadas pero su sensibilidad y
especificidad dependen de la calidad de los antiacutegenos (Espino et al 1991) del paraacutesito
empleados para evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti- F hepatica en humanos
(OacuteNeill et al 1998) La proteasa usada como antiacutegeno cisteiacuten-proteasa procatepsina L1
de F hepatica purificada o como proteiacutena recombinante se expresa en levaduras o
bacterias resultando una prueba con buena sensibilidad y especificidad (OacuteNeill et al
1999)
Asimismo hay evidencia de un fenoacutemeno de variacioacuten de antiacutegenos del tegumento de F
hepatica como mecanismo de evasioacuten y se ha puesto de relieve la existencia de cierta
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similitud antigeacutenica con el propio hospedador hasta el punto que el paraacutesito no sea
reconocido tan faacutecilmente por el sistema inmunitario (Espino et al 1997) aunque la
deteccioacuten de anticuerpos contra F hepatica en suero con ELISA es considerado un
meacutetodo sensible para infecciones agudas y croacutenicas (Hillyer 1999)
La teacutecnica inmunoenzimaacutetica de ELISA emplea el principio de la deteccioacuten del complejo
antiacutegeno anticuerpo (IgG) mediante conjugados anti inmunoglobulinas especiacuteficas
marcadas con una enzima la cual es revelada por la adicioacuten de su sustrato Esto permite
determinar la concentracioacuten de antiacutegeno o de anticuerpos mediante el uso de uno de
ellos unido a una fase soacutelida y el otro en solucioacuten Es una teacutecnica relativamente sencilla
que permite procesar una gran cantidad de muestras en un corto periacuteodo de tiempo tanto
para estudios cliacutenicos como seroepidemioloacutegicos Los antiacutegenos mayormente empleados
en ELISA corresponden a preparados somaacuteticos o productos de excrecioacuten-secrecioacuten
provenientes de tremaacutetodos adultos El primero de ellos corresponde a un macerado total
del paraacutesito adulto y el otro a un derivado metaboacutelico in vitro o productos de E-S de
estados adultos de F hepatica (Espino et al 1987)(Pfister 1990)
En Japoacuten se realizoacute el primer estudio que identificoacute y caracterizoacute la enzima cisteiacuten-
proteasa purificada a partir de ejemplares adultos del paraacutesito (Yamasaky et al 1989)
Esta proteiacutena luego fue usada como antiacutegeno en una prueba de ELISA demostrando ser
reconocida por el 100 de los pacientes con Fasciolosis que fueron estudiados Esta
proteasa estariacutea involucrada en la alimentacioacuten migracioacuten y evasioacuten de la respuesta
inmune del paraacutesito (Smooker 2000)
La procatepsina L1 (CL1) una cisteiacuten-proteasa secretada por estadios adultos y juveniles
de F hepatica tiene potencial como agente diagnoacutestico de la Fasciolosis humana Para
demostrarlo se realizoacute un ELISA dentro de una poblacioacuten de 95 pacientes en el altiplano
boliviano usando tres tipos de antiacutegenos crudo E-S y CL1 en el caso del antiacutegeno
crudo la diferencia entre individuos seronegativos y seropositivos fue pobremente
definida en tanto con los antiacutegenos E-S y CL1 hubo una gran discriminacioacuten entre ambos
grupos (Espino et al 1991) Esta diferencia fue mejorada al usar un segundo ELISA pero
sobre IgG4 (isotipo predominante en la infeccioacuten) CL1 identificoacute menos individuos
seropositivos al compararlo con E-S pero mejoroacute mucho la discriminacioacuten entre
individuos seropositivos y seronegativos En tanto al aplicar esta prueba sobre sueros con
otras parasitosis todos dieron resultados negativos por lo que se demostroacute que ademaacutes
este IgG4 ELISA es especifica en el diagnoacutestico de Fasciolosis (O Neill et al 1998)
El mismo grupo de trabajo un antildeo despueacutes utilizoacute dos ELISA basados en la deteccioacuten de
IgG4 (en suero de pacientes con Fasciolosis) producida por una procatepsina L1
recombinante (CL1) (en ADN de Saccharomyces cerevisiae) y una procatepsina L1
nativa Los resultados mostraron una significativa correlacioacuten estadiacutestica entre los
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resultados de los valores de absorbancia obtenidos con los dos antiacutegenos Ademaacutes no
se presentaron reacciones cruzadas con otras parasitosis en ninguno de los casos Por
esta razoacuten CL1 recombinante presenta un excelente potencial para el desarrollo del
primer ensayo estandarizado para un diagnoacutestico sensible y especiacutefico de la Fasciolosis
humana (ONeill et al 1999)
Las alteraciones del hemograma dan eosinofilia marcada (Blancas et al 2004)
leucocitosis con desviacioacuten a la izquierda (Atias 1991) hiperbilirubinemia (Carrada y
Escamilla 2005) y anemia la cual es comuacuten pero generalmente no es tan severa
(Vilchez et al 1993)
No obstante se describen casos que pueden evolucionar con eosinofilia fluctuante (Atias
2001) La fluctuacioacuten de la eosinofilia y lo polimorfo del cuadro cliacutenico orientan el
diagnoacutestico hacia otras patologiacuteas (Apt et al 2002)
Las pruebas de funcionalidad hepaacutetica en la fase aguda pueden detectar un aumento de
enzimas como alaninoaminotransferasa o transaminasa glutaacutemica piruacutevica (ALT o GPT) y
aspartato-aminotransferasa o transaminasa glutaacutemica oxalaceacutetica (AST o GOT) (Gianini
et al 2005) ademaacutes de globulina y bilirrubina seacuterica debiendo ser consideradas un
marcador de valor diagnoacutestico y de control terapeacuteutico en casos de Fasciolosis (Atias
2001) Asimismo se puede observar una tendencia a tener maacutes alto el nivel de
transaminasas seacutericas en los casos croacutenicos mientras que el patroacuten colestaacutesico soacutelo estaacute
presente en pacientes de la fase croacutenica y levemente elevado en la fase aguda
Cuando el paraacutesito pasa a los canaliacuteculos biliares provoca el aumento de la fosfatasa
alcalina (FA) que estaacute elevada en patologiacuteas del hiacutegado asociadas con enfermedad de
las viacuteas biliares y colestasis (Pratt y Kaplan 2000) Durante la fase obstructiva la ictericia
es caracteriacutestica y se observa aumento en los procesos obstructivos a nivel de viacuteas
biliares Son indicadoras del dantildeo del hiacutegado asociado con la prevalencia de F hepatica
(Marcos et al 2008) Las bilirrubinas conjugadas se hallan incrementadas en la etapa
aguda y la actividad del citocromo p450 hepaacutetico estaacute reducida (Honkakoski y Negishi
2000)
110 - Planteamiento del problema
La dinaacutemica de transmisioacuten de Fasciolosis tiene fuertes determinantes ambientales que
modelan y generan patrones de transmisioacuten particulares en cada regioacuten En Argentina
por su gran amplitud longitudinal y latitudinal es de esperar que la dinaacutemica de
transmisioacuten de F hepatica en las distintas zonas endeacutemicas del paiacutes sea diferente y se
vea afectada por distintos factores
En nuestro paiacutes son pocos los trabajos relacionados con el estudio de la Fasciolosis y
en general eacutestos abordan el tema desde una perspectiva veterinaria analizando soacutelo lo
que ocurre en los hospedadores definitivos de importancia econoacutemica (Lombardero et al
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1979 b)(Dwinger et al 1982)(Olaechea 2007)(Moreira et al 2009) Los trabajos que
emprenden el estudio de eacutesta parasitosis desde una perspectiva epidemioloacutegica
analizando los factores involucrados en la dinaacutemica de transmisioacuten (hospedadores
definitivos hospedadores intermediarios paraacutesito ambiente clima etceacutetera) son escasos
(Rubel et al 2005)(Kleiman et al 2007) Entre ellos se destaca la investigacioacuten sobre los
factores involucrados en el ciclo de transmisioacuten de F hepatica realizado en los valles
cordilleranos patagoacutenicos de la provincia de Chubut por ser el maacutes actual y completo del
paiacutes (Kleiman et al 2007) Los resultados obtenidos en dicho trabajo reforzaron la
necesidad de estudiar la dinaacutemica de F hepatica en otra zona endeacutemica con
caracteriacutesticas climaacuteticas y topograacuteficas contrastantes para identificar los factores que la
determinan comparar los patrones de transmisioacuten y obtener una visioacuten global e integrada
de esta zoonosis a nivel nacional
La regioacuten Noroeste se presenta interesante para delimitar un estudio epidemioloacutegico de
Fasciolosis ya que es un aacuterea endeacutemica para la enfermedad animal una zona de
importancia a nivel de prevalencias de infeccioacuten y presenta caracteriacutesticas climaacuteticas y
fisonoacutemicas distintas a la patagoacutenica
Las caracteriacutesticas fisiograacuteficas justifican en gran medida la situacioacuten de la mayor parte
de la regioacuten con existencia de baja densidad poblacional y la imposibilidad de desarrollo
de actividades agropecuarias de importancia Se localizan asentamientos poblacionales
de distintas magnitudes en estrecha dependencia con los riacuteos Estos pobladores utilizan
el agua proveniente de cursos temporarios para consumo familiar y riego Se encuentran
algunos puestos de pocas personas en varios casos grupos de individuos emparentados
que permanecen en viviendas sumamente precarias construidas con material de la zona
llevados por la necesidad de alimentar el ganado seguacuten la estacioacuten del antildeo
La proteccioacuten del agua contra la contaminacioacuten fecal constituye un elemento de relevante
importancia Sin embargo las caracteriacutesticas de los suelos y la altura no permiten la
obtencioacuten de agua subterraacutenea a un costo accesible para el poblador quien opta por la
utilizacioacuten de las aguas superficiales que poseen una alta contaminacioacuten fecal tanto de
humanos como animales de criacutea y silvestres Una alternativa medianamente posible
incluiriacutea someter el agua a hervor o filtrado adecuado Con respecto al hervor no se
presenta en algunos casos como un meacutetodo simple de descontaminacioacuten ya que el uso
de lentildea como combustible claacutesico induce a la gente a su utilizacioacuten restringida Con
respecto a la filtracioacuten los equipamientos adecuados suelen ser costosos y si bien
pueden ser uacutetiles en la reduccioacuten de la carga pueden no ser totalmente efectivos en la
eliminacioacuten dependiendo de la porosidad
Las praacutecticas sanitarias habituales para la evacuacioacuten de desechos humanos y animales
pueden interrumpir el ciclo de vida de algunos de estos paraacutesitos pero el mal
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saneamiento y la falta de higiene personal pueden introducir propagar y mantener la
transmisioacuten en la comunidad revistiendo gran importancia la disponibilidad y uso de
letrinas
Ademaacutes entre las fuentes de riesgo de contraer enfermedades zoonoacuteticas se encuentra
el comportamiento alimentario por lo tanto es indispensable entender estos haacutebitos para
prevenir y controlar estas infecciones La educacioacuten sanitaria en la comunidad sobre la
preparacioacuten higieacutenica de alimentos limpieza lavado coccioacuten ayuda tambieacuten a reducir el
riesgo
La situacioacuten descripta muestra la necesidad de efectuar estudios epidemioloacutegicos en
aacutereas donde una prueba piloto ha detectado casos humanos de la enfermedad y que
permitan la identificacioacuten de especies que mantienen el ciclo bioloacutegico como reservorios y
hospedadores intermediarios
Ademaacutes es necesario aplicar meacutetodos de diagnoacutesticos directos e indirectos para la
deteccioacuten sensible y especiacutefica de esta parasitosis En el capiacutetulo de la Salud Puacuteblica
referente a Fasciolosis hay determinadas regiones en el mundo con elevada prevalencia
y con muchas personas afectadas Lo que sucede hace pensar que haya mayor nuacutemero
de casos de trematodosis y que pasen inadvertidos para la consulta meacutedica o que incluso
se presenten casos de Fasciolosis que cliacutenicamente se diagnostiquen equivocadamente
como otros procesos de ahiacute que sea de la mayor importancia mejorar o precisar el
diagnoacutestico tanto a nivel de semiologiacutea como de laboratorio Todos estos antecedentes
llevan a la necesidad de revisar los conocimientos actuales sobre la epidemiologiacutea de la
enfermedad
A partir de ello se formula la siguiente pregunta de investigacioacuten iquestCuaacutel es la probabilidad
de que la Fasciolosis endeacutemica en el valle de Fiambalaacute se transmita a los seres humanos
en forma epideacutemica
1101 - Justificacioacuten
Los informes de la OMS sentildealan que la Fasciolosis incrementa permanentemente el
nuacutemero de personas infectadas en el mundo se propaga en forma alarmante entre la
poblacioacuten y va adquiriendo mayor importancia con el transcurso del tiempo Ante la
evidencia de que no es un hecho aislado ni localizado surge la necesidad de conocer la
situacioacuten epidemioloacutegica de manera eficaz y medir sus alcances
La investigacioacuten planteada contribuiraacute a generar estrategias para entender y resolver
para que los resultados ayuden a crear un mayor conocimiento sobre la enfermedad Se
cuenta con indicadores que prometen resultados efectivos los que mediraacuten las variables
de estudio en el contexto catamarquentildeo y se desea aportar informacioacuten con aplicaciones
a otros ambientes provinciales
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1102 - Viabilidad del estudio
El estudio fue factible porque se ha tenido en cuenta la disponibilidad de recursos
financieros humanos y materiales que determinaron el alcance de la investigacioacuten Para
que el estudio fuera viable y no se dispersara se circunscribioacute la poblacioacuten a la localidad
de Tatoacuten y su zona de influencia dentro del valle de Fiambalaacute
Se contoacute con el aval de las autoridades sanitarias provinciales y asimismo se obtuvo el
apoyo de instituciones interesadas en conocer no solo la situacioacuten sino participar en la
toma y el procesamiento de las muestras lo que facilitoacute el desarrollo del trabajo
1103 - Evaluacioacuten de las deficiencias
Como deficiencia en el desarrollo hay que tener en cuenta el acceso al contexto y lugar
donde se realizoacute el trabajo de campo La investigacioacuten fue muy respetuosa con las
personas que participaron en el estudio No se anticipa ninguacuten efecto negativo en cambio
se pretende proporcionar informacioacuten valiosa a personas que conviven con factores de
riesgo Desde luego fue necesario obtener el consentimiento informado de los
pobladores
111 - Objetivos
1111 - Objetivo general
Contribuir al conocimiento de la epidemiologiacutea de la Fasciolosis describiendo la
ocurrencia de la infeccioacuten por Fasciola hepatica en la poblacioacuten humana animales
y hospedadores intermediarios utilizando diferentes meacutetodos de diagnoacutestico en el
valle de Fiambalaacute Catamarca
1112 - Objetivos especiacuteficos
Reconocer los principales factores que determinan la presencia de Fasciolosis
Estimar la prevalencia seroloacutegica de Fasciolosis en personas que habitan el valle
de Fiambalaacute
Analizar diferentes metodologiacuteas de diagnoacutestico (directo e indirecto) signos y
siacutentomas de la enfermedad en humanos
Determinar la prevalencia de Fasciolosis en especies de ganado que se criacutean en
la zona (asnos rumiantes menores y cameacutelidos sudamericanos) mediante
meacutetodos coproparasitoloacutegicos
Realizar estudios anatomorfoloacutegicos de ejemplares de F hepatica que permitan
caracterizar el fenotipo de los especiacutemenes en el valle de Fiambalaacute
Observar si las caracteriacutesticas microscoacutepicas de los paraacutesitos presentan
variaciones con las de otras localizaciones de origen del hospedador definitivo
Analizar la variabilidad geneacutetica para la identificacioacuten de ADN de F hepatica en la
regioacuten
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Comprobar con teacutecnicas moleculares la posible presencia de cepas de F hepatica
resistentes a faacutermacos antiparasitarios en ejemplares recogidos en las necropsias
Reproducir el ciclo bioloacutegico de moluscos intermediarios en el laboratorio para
probar infeccioacuten inducida
Demostrar la infeccioacuten natural de los limneidos y la prevalencia de caracoles
infectados
Caracterizar el fenotipo de los limneidos por la morfometriacutea de su conchilla
Identificar la especie de Lymnaea spp en el ciclo de F hepatica involucrada en
el valle de Fiambalaacute mediante herramientas moleculares
112 - Hipoacutetesis
El nuacutemero de casos de Fasciolosis humana diagnosticados en el valle de Fiambalaacute
presenta importantes variaciones con otras regiones del paiacutes transformaacutendola en una
zona endeacutemica que manifiesta nuevas caracteriacutesticas tanto en los ejemplares de F
hepatica como a nivel de los hospedadores intermedios
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DISENtildeO DEL ESTUDIO Y MEacuteTODOS
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2 - DATOS SECUNDARIOS Y CARACTERIacuteSTICAS DEL AMBIENTE
21 - Seleccioacuten del tipo de estudio
Se realizoacute un estudio de alcance descriptivo prospectivo con disentildeo no experimental
transeccional con seguimiento de la cohorte en humanos durante el periacuteodo 2008-2012
en el Valle de Fiambalaacute provincia de Catamarca Repuacuteblica Argentina
22 - Lugar de la poblacioacuten
Los trabajos de campo se llevaron a cabo en Tatoacuten aacuterea perteneciente al noreste del
valle o bolsoacuten (Niz et al 2004) de Fiambalaacute (El topoacutenimo Fiambalaacute proviene de la
voz cacaacuten fiambalao que significa casa del viento o paiacutes del viento) (Lafone Quevedo
1999) departamento Tinogasta provincia de Catamarca Argentina (Figura 6) Unos 40
kiloacutemetros al norte de la ciudad de Fiambalaacute surgen oasis como Tatoacuten (1874 msnm)
27ordm20acute2033rdquoS y 67ordm31acute2837rdquoO y haciacutea el este Riacuteo Grande (2834 msnm)
27deg13acute3421umlS y 67deg22acute2825umlO Estas poblaciones viven de la explotacioacuten en pequentildea
escala de la ganaderiacutea ovina caprina y cameacutelidos sudamericanos de las plantaciones de
frutales vid del cultivo de maiacutez y alfalfa (Machado Araacuteoz 2007)(Orgaz et al 2007)
b
a
c
Figura 6 Ubicacioacuten geograacutefica del Valle de Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia
de Catamarca Repuacuteblica Argentina
Nota a Mapa poliacutetico de la Repuacuteblica Argentina b Mapa de la provincia de Catamarca c Vista
satelital del Valle de Fiambalaacute
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23 - Seleccioacuten de la poblacioacuten
La poblacioacuten humana estudiada reunioacute las siguientes condiciones a) compartir su haacutebitat
con animales domeacutesticos infectados con F hepatica y b) que esos animales fueran
nacidos y criados en la zona para garantizar que el foco de transmisioacuten fuese local
24 - Periacuteodo de estudio
El estudio se desarrolloacute entre septiembre de 2008 y noviembre de 2012
25 - Descripcioacuten regional del haacutebitat del valle de Fiambalaacute
El liacutemite fiacutesico al norte del valle es la ladera sur de la cordillera de San Buena Ventura
que la separa de la puna Al este gira hacia el sur por la divisoria de aguas que separa la
cuenca del riacuteo Grande El oeste se halla delimitado por la Sierra de Famatina (Montero
Loacutepez et al 2009)
La existencia de vegetacioacuten achaparrada muerta y meacutedanos indican los aspectos tiacutepicos
del paisaje resultante del tipo climaacutetico y que son denominador comuacuten del centro de los
bolsones ocupado por salares o barreales rodeados de meacutedanos (Quiroga 1986)
Las caracteriacutesticas del haacutebitat natural el medio ambiente y los factores climaacuteticos locales
son cruciales para entender el aacuterea endeacutemica humana en cuestioacuten en relacioacuten con el
patroacuten de transmisioacuten (Mas-Coma 2005 Mas-Coma et al 2009 a) el escenario
epidemioloacutegico (Mas-Coma et al 1999 a 2009 a) y las mejores estrategias para el
diagnoacutestico y encuestas (Mas-Coma et al 2014 a)
251 - Orografiacutea
La zona posee en su formacioacuten materiales que pertenecen a los primeros tiempos de la
tierra los que discordan con rocas modernas Orograacuteficamente se destaca el flanco
occidental de la Sierra de Fiambalaacute (Paleozoico) que se dispone de norte a sur (Cabrera
1958)
La regioacuten estaacute cubierta de tipos erosivos cuyas caracteriacutesticas responden al resultado de
la accioacuten del termoclastismo que produce desintegracioacuten mecaacutenica resquebrajamiento y
disgregacioacuten que son acumuladas por el viento (Navarro 1994)
En las zonas maacutes bajas se observa material que comprende extensos abanicos aluviales
y la presencia de innumerables dunas en forma de medialunas y meacutedanos que hacen
tiacutepico el aacuterido paisaje
252 - Clima
La zona de estudio se encuentra dentro del dominio de lo que se denomina Clima
Templado correspondiente a la categoriacutea Aacuterido de Sierras y Bolsones (Argerich 2004)
Se producen heladas todo el antildeo existiendo friacuteo seco de altura inviernos friacuteos y veranos
templados La presencia de sierras da lugar a la formacioacuten de microclimas lo que
acondiciona el marco topograacutefico para la existencia de oasis que se localizan en los
conoides de deyeccioacuten en la falda occidental de los valles
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El relieve es un factor decisivo ya que produce un efecto barrera o de aislamiento que
convierte a los valles en compartimientos separados y define el clima El valle por el que
corre el riacuteo Abaucaacuten presenta un clima mesoteacutermico con amplitudes teacutermicas
estacionales y diacuteanoche tanto en verano como en invierno se producen grandes
amplitudes diurnas
Los determinantes maacutes importantes del clima son la temperatura el reacutegimen de lluvias y
el balance hiacutedrico El clima es ventoso seco conocido como ldquoviento zondardquo Se alcanza un
nivel de presioacuten atmosfeacuterica media de aproximadamente 620 hPa (Castantildeeda y Ratto
2005)
Las lluvias son escasas y torrenciales se dan principalmente en verano la precipitacioacuten
anual no supera los 50 mm El reacutegimen hiacutedrico del suelo resulta importante para el
desarrollo de los caracoles y para la transmisioacuten de F hepatica (Malone 1994) porque
produce encharcamientos donde se reproducen los moluscos En el valle de Fiambalaacute la
altura de la sierra homoacutenima de 3000 m snm aproximadamente resulta insuficiente
para producir lluvias importantes
La evolucioacuten anual de los factores climaacuteticos se obtuvo por interpolacioacuten proporcionada
por las estaciones meteoroloacutegicas circundantes maacutes cercanas a partir de una base de
datos seriada de 50 antildeos (1950-2000) Los valores fueron obtenidos de la base de datos
agroclimaacuteticos de Agromet Grupo FAO (FAOCLIM) El meacutetodo de interpolacioacuten utilizado
para evaluar las caracteriacutesticas climaacuteticas del aacuterea local es el Nuevo LocClim 110
descargado de la Organizacioacuten de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentacioacuten (FAO) con una resolucioacuten temporal de diacuteas
Entre la variedad de iacutendices existentes para cuantificar la aridezhumedad y
continentalidad se seleccionaron el iacutendice de aridez de De Martonne y el iacutendice de
continentalidad de Gorczynski Los iacutendices de aridez proporcionan una manera sencilla
de expresar la relacioacuten de precipitacioacutenevaporacioacuten El iacutendice de aridez de De Martonne
se define como la relacioacuten de la suma anual de la precipitacioacuten en mm y la temperatura
media anual de 10 degC El iacutendice de continentalidad de Gorczynski es una manera simple
pero eficiente para estimar la influencia del oceacuteano en el clima local El iacutendice depende
linealmente de la amplitud teacutermica anual (diferencia de temperatura media mensual entre
el mes maacutes caacutelido y el maacutes friacuteo) (Grieser et al 2006)
Para evaluar las caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute se utilizaron las
clasificaciones de Koeppen y Budyko La clasificacioacuten climaacutetica de Koeppen es uno de los
sistemas maacutes utilizados para la clasificacioacuten del clima y se basa en el concepto de que la
vegetacioacuten nativa es la mejor expresioacuten del clima Por lo tanto los liacutemites de la zona
climaacutetica se seleccionan de acuerdo con la distribucioacuten de la vegetacioacuten Combina las
temperaturas medias anuales y mensuales y la precipitacioacuten y la estacionalidad de la
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precipitacioacuten El sistema de clasificacioacuten climaacutetica Budyko es un meacutetodo de
categorizacioacuten de los climas basado en la relacioacuten de energiacutea recibida a la energiacutea
requerida para evaporar la precipitacioacuten local Los principios de la clasificacioacuten de Budyko
tienen en cuenta las caracteriacutesticas de radiacioacuten que se estrecha y los correlaciona
directamente con la temperatura en la estacioacuten caacutelida y los factores de circulacioacuten que
correlacionan indirectamente las caracteriacutesticas cuantitativas de la precipitacioacuten y el
reacutegimen de humectacioacuten (Oliver y Wilson 1987)
Este software permite precisar la altitud y las correcciones horizontales Los factores
climaacuteticos analizados incluyeron las temperaturas maacuteximas medias y miacutenimas la
precipitacioacuten la evapotranspiracioacuten potencial (ETP) periodo huacutemedo (estacioacuten de
crecimiento de vegetacioacuten) y el periacuteodo seco En relacioacuten con la vegetacioacuten la estacioacuten
de crecimiento es el periodo durante un antildeo cuando la precipitacioacuten es superior a la
mitad de la evapotranspiracioacuten potencial y se define por PrecETP gt 05 (FAO 1978)
aunque para este foco se analizaron ETP gt 05 y EPT gt 045 debido a sus condiciones de
aridez extrema
253 - Hidrografiacutea
La cuenca se alimenta con aguas provenientes de deshielos y vertientes temporarias las
cuales llegan al valle de Fiambalaacute formadas por efluentes y cursos secundarios en
donde el sistema vuelca sus aguas al riacuteo Abaucaacuten (Sempeacute 1983) Las vegas de
superficie poco definida son ambientes lenticos permanentes su agua es transparente
neutra a ligeramente aacutecida
254 - Flora y Fauna
La mayor cantidad de pastos se producen en las vegas predominando las siguientes
especies forrajeras Hydrocotyle sp Halerpestes cimbalaria (Pursh) Greene Ludwigia
sp Mulhembergia aperifolia Deyeuxia haeckeli y Sinzyrinchium chilense (Navarro
1994)
Dentro de los herbiacutevoros de la fauna silvestre cabe mencionar vicuntildea (Vicugna vicugna)
y guanaco (Lama guanicoe)
SERES HUMANOS
3 - Epidemiologia en seres humanos
31 - Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiada
A partir de estudios previos se estimoacute en base a los registros de los agentes sanitarios
del Aacuterea Programaacutetica Ndeg 10 una poblacioacuten de 350 habitantes en la localidad de Tatoacuten y
sus alrededores
311 - Criterios de inclusioacuten En el inicio de la investigacioacuten se incluyoacute a toda la
poblacioacuten de la localidad elegida
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312 - Criterios de exclusioacuten Se excluyeron a aquellas personas que no desearon
participar pacientes con antecedentes siacutentomas o signos de enfermedades
hematoloacutegicas que suponiacutean un riesgo para la extraccioacuten de sangre recieacuten nacidos o
nintildeos de un antildeo o menos
Como consecuencia de ello la poblacioacuten estudiada comprendioacute 305 personas de ambos
sexos quienes concurrieron voluntariamente a las postas sanitarias donde se realizaron
los estudios El rango de edad de los pacientes fue de 2 a 86 antildeos
El trabajo se inicioacute en 2008 y finalizoacute en 2012 con la colaboracioacuten de los Hospitales ldquoSan
Juan Bautistardquo y ldquoEva Peroacutenrdquo de la ciudad de Catamarca el Hospital Municipal de
Enfermedades Infecciosas ldquoDr Francisco Javier Muntildeizrdquo de la ciudad autoacutenoma de
Buenos Aires del Ministerio de Salud de Catamarca el Hospital Zonal ldquoSan Juan
Bautistardquo de Tinogasta el Hospital Zonal ldquoLuis Agoterdquo de Fiambalaacute y el Minihospital ldquoReneacute
Favalorordquo de Medanitos Tambieacuten participaron el Centro de Estudios de Alta Complejidad
(CEAC) de la ciudad autoacutenoma de Buenos Aires el laboratorio de Parasitologiacutea de la
Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca en forma conjunta
con el ex Instituto Nacional de Microbiologiacutea ldquoDr Carlos Gregorio Malbraacutenrdquo actual
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas de la Administracioacuten Nacional de
Laboratorios e Institutos de Salud ubicado en la ciudad de Buenos Aires Repuacuteblica
Argentina
Para estudiar a las personas durante toda la investigacioacuten se solicitoacute una declaracioacuten en
la que los interesados dieron su consentimiento verbal y escrito (Veacutease anexo Figura 19
pp 184) y se obtuvo la correspondiente autorizacioacuten de las autoridades de la Divisioacuten de
Docencia e Investigacioacuten del Hospital San Juan Bautista de la Provincia de Catamarca
para realizar la investigacioacuten De cada paciente se recolectaron los datos personales se
describieron siacutentomas signos y se realizaron exaacutemenes de laboratorio
Para el estudio se seleccionoacute un grupo de pacientes que reuniacutean los siguientes criterios
- Pacientes con serologiacutea positiva para F hepatica especialmente aquellos con
maacutes de una prueba positiva en antildeos sucesivos
- Pacientes con sintomatologiacutea cliacutenica naacuteuseas voacutemitos y dolor en hipocondrio
derecho
- Patroacuten humoral de colangitis aumento de fosfatasa alcalina transaminasas y
fundamentalmente de eosinofilia
- Anormalidades de las viacuteas biliares en la ecografiacutea dilatacioacuten de las viacuteas biliares
intrahepaacuteticas dilatacioacuten del coleacutedoco mayor o igual a 7 miliacutemetros
engrosamiento de las paredes del coleacutedoco y bandas ecogeacutenicas periportales
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32 - Obtencioacuten de las muestras
Se trabajoacute con un cuestionario para la recoleccioacuten de datos El mismo presentoacute dos
partes una correspondiente a personas y la otra a hogares Se emplearon para la
recoleccioacuten de datos personales que incluiacutean la identificacioacuten edad sexo ocupacioacuten y
domicilio datos de haacutebitos alimenticios y contactos con animales Datos de la vivienda
referidos al tipo materiales de construccioacuten servicios fuentes de provisioacuten de agua y
energiacutea El cuestionario se completoacute durante la visita a los pobladores mediante
interrogacioacuten a adultos y nintildeos (en este caso en presencia de un familiar a cargo) y
observacioacuten del encuestador (Veacutease anexo Figura 20-21 pp 185-186)
321 - Recoleccioacuten de sangre
Las muestras de sangre obtenidas por venopuncioacuten fueron empleadas (previa a su
colocacioacuten en los tubos) para realizar extendidos hemaacuteticos Para ello se colocoacute una gota
sobre un portaobjetos y se distribuyoacute con el uso de un extensor
Los extendidos se dejaron secar a temperatura ambiente se fijaron con alcohol metiacutelico y
colorearon con la tincioacuten de Giemsa se rotularon con laacutepiz indicando nombre apellido y
nuacutemero de frotis en uno de los extremos del vidrio Estos materiales se transportaron a
temperatura ambiente en cajas para almacenamiento de portaobjetos hasta los
laboratorios bioquiacutemicos
Durante los antildeos 2009 2010 y 2011 se obtuvieron muestras de 10 ml de sangre de las
personas (n=305) por venopuntura (Lavery e Ingram 2005) colocaacutendolas en dos tubos
uno con anticoagulante EDTA (3 ml de sangre) y otro tubo seco (7 ml de sangre) para
separacioacuten del suero rotulados con nombre apellido y nuacutemero de envase En estas
condiciones fueron transportados hasta el Laboratorio del Hospital Zonal ldquoLuis Agoterdquo de
Fiambalaacute Alliacute se mantuvieron 8 horas a temperatura ambiente para su exudacioacuten
posteriormente se centrifugaron a 3000 rpm y despueacutes fueron separados por aspiracioacuten
con pipetas y transferidos a 2 tubos con los mismos roacutetulos En aquellas muestras donde
se observoacute hemoacutelisis se realizoacute centrifugacioacuten a baja velocidad y transferencia a tubos
limpios
Las muestras obtenidas fueron mantenidas en heladera y transportadas a 4 ordmC a la
ciudad de Catamarca donde se congelaron a -20 degC para conservarlas hasta llevar a
cabo los anaacutelisis correspondientes El suero contenido en un tubo se utilizoacute para los
diagnoacutesticos inmunoloacutegicos y el del otro para la determinacioacuten de enzimas proteiacutenas y
bilirrubina
A una de las muestras de suero en el departamento de Parasitologiacutea del Instituto
Malbraacuten se les realizoacute el ensayo por inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (Enzyme-Linked
InmunoSorbent Assay ELISA) para la identificacioacuten de los anticuerpos anti-F hepatica
presentes en los sueros de los pacientes (utilizando proteiacutena recombinante procatepsina
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L1)
El segundo tubo con suero para las demaacutes determinaciones se analizoacute en los
laboratorios bioquiacutemicos con los cuales se trabajoacute
322 - Inmunodiagnoacutestico
El ensayo inmunoenzimaacutetico es una prueba ampliamente usada para el diagnoacutestico de
fasciolosis Su sensibilidad y especificidad dependen de la calidad de los antiacutegenos del
paraacutesito empleados para evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti-F hepatica (Binkley y
Sinniah 1997) La procatepsina L1 (cisteiacuten-proteasa) obtenida como recombinante se
usoacute como antiacutegeno en ELISA por ser una prueba con buenos resultados previos
(Carnevale et al 2001 a)
3221 - Expresioacuten y purificacioacuten de la proteiacutena recombinante procatepsina L1 (rproCL1)
El protocolo de expresioacuten del antiacutegeno E-S fue realizado previamente en el Instituto
Malbran (Carnevale et al 2001 a) en bacterias Escherichia coli M15 recombinantes
conteniendo el plaacutesmido pQE-proCL1 que se multiplicaron en medio Luria (LB)
suplementado con los antibioacuteticos ampicilina (100 microgml) y kanamicina (10 microgml) toda la
noche y en agitacioacuten a 37 degC El cultivo se diluyoacute 20 veces en 100 ml del mismo medio
se incuboacute en agitacioacuten durante 4 hs a 37 degC con la adicioacuten de isopropil-szlig-
Dtiogalactopiranosido (IPTG) a concentracioacuten final de 2 microM para inducir la expresioacuten de
rproCL1
El lisado de bacterias se obtuvo en presencia de agentes desnaturalizantes y se sometioacute
a diaacutelisis La preparacioacuten proteica obtenida se purificoacute por cromatografiacutea quelante a
traveacutes de una resina de Ni2+-aacutecido nitrilotriaceacutetico en condiciones desnaturalizantes
(Carnevale et al 2001 a) Las fracciones de elucioacuten se analizaron por SDS-PAGE
(Wiltfang et al 1991) y la proteiacutena purificada se cuantificoacute por el meacutetodo de Bradford
(Bradford 1976) y se guardoacute a -70 degC en aliacutecuotas de 40 microg
Las bacterias se cosecharon por centrifugacioacuten y el pellet fue resuspendido en 2 ml de
solucioacuten de resuspensioacuten (20 mM Tris-HCl pH 80 1 mM EDTA pH 80 5 -
mercaptoetanol 25 SDS) para posteriormente hervirlo durante 5 min La muestra asiacute
tratada se centrifugoacute 30 min a 4 degC a 15000 x g recuperaacutendose el sobrenadante El SDS
presente en la preparacioacuten se precipitoacute por adicioacuten de un volumen de KCl 100 mM
incubado por 10 min a temperatura ambiente y centrifugacioacuten a 15000 x g durante 3 min
El sobrenadante fue equilibrado en solucioacuten de lisis por diaacutelisis con 10 voluacutemenes de
buffer de lisis (dos recambios) durante 48 horas a 4 degC
La preparacioacuten proteica obtenida se pasoacute a traveacutes de una resina de Ni2+-aacutecido
nitrilotriaceacutetico (Qiagen) La proteiacutena rproCL1 se unioacute por afinidad al Ni2+ y el remanente
de proteiacutenas de la bacteria se eluyoacute por sucesivos lavados con solucioacuten de lavado (buffer
de lisis a pH 63) Finalmente la proteiacutena rproCL1 se eluyoacute de la columna con solucioacuten de
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elucioacuten (buffer de lisis a pH 45) (Carnevale et al 2001 a) Las fracciones de elucioacuten se
analizaron por electroforesis en geles desnaturalizantes de poliacrilamida coloreados con
azul de Coomassie
3222 - Ensayo inmumoenzimaacutetico
El ensayo de ELISA para la deteccioacuten de anticuerpos anti-rproCL1 de F hepatica se
desarrolloacute en base al protocolo previamente descripto (Carnevale et al 2001 b) Se utilizoacute
en el desarrollo de la prueba el antiacutegeno rproCL1 a concentracioacuten 4 microgml y como
cromoacutegeno ABTS Para el ensayo se utilizaron placas de ELISA de 96 pocillos ldquoPolySorprdquo
(Nunc) sensibilizadas con el antiacutegeno rproCL1 a concentracioacuten 4 microgml en buffer
carbonato 005 M pH 96 (100 microlpocillo) mediante incubacioacuten por 3 horas a 37 degC y 18
horas a 4 ordmC en caacutemara huacutemeda
Despueacutes de la sensibilizacioacuten con el antiacutegeno los pocillos se lavaron 3 veces con 200
microlpocillo de PBS005 Tween antes de la adicioacuten de 200 microlpocillo de la solucioacuten de
bloqueo (PBS005 Tween3 seroalbuacutemina bovina) Despueacutes de 30 min de
incubacioacuten a 37 degC en una caacutemara huacutemeda los pocillos se lavaron como se describioacute
anteriormente Los sueros humanos en dilucioacuten 1250 (100 microlpocillo) en solucioacuten de
bloqueo fueron antildeadidos por duplicado a la placa e incubados durante 30 min a 37 degC
Luego de nuevos lavados la placa fue incubada por otros 30 min a 37 degC en presencia de
100 microl de un segundo anticuerpo anti-IgG humana preparado en cabra y marcado con
peroxidasa (Sigma) diluido 14000 en solucioacuten de bloqueo
Finalmente se procedioacute a detectar el anticuerpo unido al antiacutegeno despueacutes de nuevos
lavados mediante la reaccioacuten enzimaacutetica de la peroxidasa en presencia del sustrato
peroacutexido de hidroacutegeno y del cromoacutegeno 22-azino-bis 3-etilbenzotiazolin-6-aacutecido sulfoacutenico
(Sigma) Las placas se leyeron a los 10 min en el lector de ELISA iMarktrade BioRad La
densidad oacuteptica expresoacute el valor de corte de la teacutecnica diferenciando sueros positivos y
negativos (el caacutelculo se realizoacute en base a las densidades oacutepticas de los controles
negativos) El punto de corte fue de ge0410 nM aplicando el criterio de +3 desviacuteos
estaacutendar por sobre el cual se consideroacute todo suero analizado como positivo
Para validar el ensayo fueron llevadas 12 muestras positivas al Centro Colaborador de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud Departamento de Parasitologiacutea de la Universitat de
Valencia Espantildea
3223 - Foacutermula leucocitaria
Se procedioacute en primer lugar a la determinacioacuten en los extendidos hemaacuteticos de la
foacutermula leucocitaria
3224 - Eosinofilia
El nivel de eosinofilia fue calculado (foacutermula absoluta y relativa) mediante recuento
diferencial de eosinoacutefilos respecto al caacutelculo de leucocitos totales en los extendidos
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hemaacuteticos coloreados Considerando como normales hasta 350mm3 se efectuoacute la
determinacioacuten en campos no superpuestos (Louis et al 1962)
3225 - Proteinas Totales
Este examen se realizoacute con reactivos comerciales utilizando el meacutetodo colorimeacutetrico para
determinar proteiacutenas totales en suero por ser uacutetil para el seguimiento de cambios
ocasionados por diversos estados de enfermedad hepaacutetica (McPherson 2011) mediante
la lectura de la absorvancia Se mezcloacute con varilla se incuboacute 15 min a 37 degC y se leyoacute en
espectrofotoacutemetro a 540 nM o en fotocoloriacutemetro con filtro verde (520-560 nM) llevando a
cero con el blanco de reactivo Longitud de onda 625 nM en espectrofotoacutemetro o en
fotocoloriacutemetro con filtro rojo (620-650 nM) con una temperatura de reaccioacuten de 15 a 28
degC y un tiempo de reaccioacuten de 10 min Tomando como valores normales el rango de 60 a
83 gmdL (gramos por decilitro)
3226 - Aacutecidos biliares
Reabsorbidos en el intestino grueso y transportados por la albuacutemina hacia el hiacutegado
como parte de su ciclo enterohepaacutetico En plasma el 88 de las sales biliares se
encuentran unidas a la albuacutemina Se consideraron los valores normales inferiores a 10
nMml
3227 - Bilirrubina seacuterica
Es el ligando maacutes estudiado En plasma la bilirrubina es insoluble y su unioacuten a la
albuacutemina la vuelve soluble La unioacuten a la albuacutemina determina su detoxificacioacuten en cuanto
a su rol antimitocondrial promueve su efecto antioxidante y colabora en su destruccioacuten
por parte de la luz in vivo El nivel normal considerado de bilirrubina directa es 0 a 03
mgdL y el de bilirrubina total 03 a 19 mgdL
3228 - Enzimas
Se realizaron pruebas de funcionalidad hepaacutetica para detectar un aumento de las
enzimas alanina amino transferasa o transaminasa glutaacutemico-piruacutevica (ALT o GPT)
aceptando los valores normales de 6 a 35 UIL y aspartato amino transferasa o
transaminasa glutaacutemica oxalaceacutetica (AST o GOT) con valores normales entre 6 a 30 UIL
(Gianini et al 2005)
Para conocer el pasaje del paraacutesito a los canaliacuteculos biliares y una posible fase croacutenica
de la enfermedad se analizoacute el aumento de fosfatasa alcalina (FAL) que se encuentra
elevada en patologiacuteas del hiacutegado asociadas con enfermedad de las viacuteas biliares y
colestasis Se tomaron como valores normales en adultos desde 25 a 100 UIL y en nintildeos
menos de 350 UIL (Pratt y Kaplan 2000)
323 - Anaacutelisis de los datos
Se utilizoacute la regresioacuten logiacutestica por ser una de las herramientas estadiacutesticas con mejor
capacidad para el anaacutelisis de datos en investigacioacuten cliacutenica y epidemiologiacutea Esta teacutecnica
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modeloacute coacutemo influyoacute en la probabilidad de aparicioacuten de un suceso habitualmente
dicotoacutemico la presencia o no de diversos factores y el valor o nivel de los mismos En
este caso con el objeto de identificar aquellos factores significativos en la explicacioacuten de
la probabilidad de que un paciente presente fasciolosis se aplicoacute un modelo de regresioacuten
logiacutestica muacuteltiple con el programa SPSSreg versioacuten 115 para Windows El modelo
matemaacutetico permitioacute ademaacutes evaluar la contribucioacuten de cada variable sobre las chances
(odds) que tiene un paciente de presentar un resultado positivo
Se clasificoacute el valor de la variable respuesta como 0 cuando no se presentoacute el suceso
(caso negativo) y con el valor 1 cuando siacute estuvo presente (paciente con resultado
positivo) Se consideraron como variables independientes o explicativas en el modelo
edad sexo resultado de los exaacutemenes y siacutentomas
Todos los datos se registraron seguacuten el nuacutemero de identificacioacuten utilizado durante la
recoleccioacuten correspondiente al integrante de la poblacioacuten y el nuacutemero de la muestra para
el resto de los materiales analizados
Las prevalencias de infeccioacuten por diferentes meacutetodos se compararon usando el test de
Chi2 y se calcularon los valores predictivos con intervalos de confianza de 95 El valor
obtenido para el estadiacutestico de contraste de hipoacutetesis H0 β=0 llamado test de Wald se
halloacute mediante el cociente entre el coeficiente y su error estaacutendar Este estadiacutestico siguioacute
una distribucioacuten Chi2 con 1 grado de libertad
324 - Materia fecal
Antes del inicio de la toma de muestras para coproparasitologiacutea se realizoacute una
explicacioacuten oral respecto a la metodologiacutea de recoleccioacuten con solicitud de repeticioacuten de
las indicaciones por parte de los participantes Se entregoacute un instructivo impreso por
persona los envases con la solucioacuten y una cucharita descartable para la recoleccioacuten de
cada muestra
El procedimiento consistioacute en recolectar muestras de materia fecal (n=96) emitida durante
3 diacuteas consecutivos y colocarla en recipientes (rotulados con el nombre apellido y
nuacutemero de envase) con solucioacuten salina formolada 5 como conservante Los frascos
conteniendo las muestras fueron retirados por los agentes sanitarios a partir del cuarto
diacutea posterior a su entrega las mismas se conservaron a temperatura ambiente y se
transportaron hasta el Laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la
Salud Universidad Nacional de Catamarca en cajas destinadas para tal fin
Las personas participantes de ambos sexos y distintos grupos etarios no fueron
discriminadas por familias por que se analizaron individualmente Se destaca que en
general la poblacioacuten fue reacia a proporcionar las muestras
La eleccioacuten del conservante fue realizada por las ventajas de su faacutecil preparacioacuten bajo
costo fijador multipropoacutesito larga duracioacuten y apropiada para procedimientos de
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sedimentacioacuten
3231 - Teacutecnica de Sedimentacioacuten Raacutepida (TSR)
De cada muestra de materia fecal (n=96) se tomaron de 4-8 gr de heces que fueron
homogenizadas en un vaso coacutenico con una varilla de vidrio en 30 ml agua corriente
filtrada y calentada a 50 degC Obtenida una buena homogenizacioacuten se agregoacute agua hasta
completar 150 ml La mezcla se trasvasoacute a un recipiente coacutenico de vidrio de 250 ml de
capacidad tamizaacutendola con un colador de malla Se completoacute el volumen con agua
filtrada y se dejoacute reposar por 3 a 4 min no maacutes (la sedimentacioacuten se basoacute en que el
tiempo de caiacuteda de los huevos de F hepatica en el agua es 100 mmmin maacutes raacutepido que
el de la caiacuteda de detritos de las materias fecales) Luego se decantoacute dos terceras partes
del sobrenadante y se volvioacute a agregar agua friacutea hasta completar la capacidad de la copa
Se repitieron los mismos pasos 2 o 3 veces o hasta que el sobrenadante quedara limpio
Finalmente se removioacute el sedimento se aspiroacute parte con una pipeta Pasteur el que fue
vertido en un portaobjeto con concavidades y se observoacute al microscopio con lentes de
menor aumento
3232 - Teacutecnicas de concentracioacuten
32321 - Meacutetodo de Telemann modificado
Las heces fijadas (n=96) en solucioacuten salina formolada fueron homogeneizadas con varilla
de vidrio y filtradas a traveacutes de un embudo con una doble gasa en tubo de centriacutefuga Se
agregaron aproximadamente 2 ml de eacuteter y los tubos se centrifugaron a 1000-1500 rpm
de 3 a 5 min Se eliminoacute con golpe seco el sobrenadante Se tomoacute con pipeta Pasteur
una pequentildea cantidad del sedimento y se colocoacute en portaobjetos Se agregoacute una gota de
lugol y se selloacute con un cubreobjetos para su observacioacuten al microscopio oacuteptico
32322 - Meacutetodo de flotacioacuten de Willis
Se cubrioacute el fondo de un vaso de 50 ml (sin pico vertedor) con un volumen de muestra de
heces previamente homogeneizada (n=96) Se llenoacute hasta la cuarta parte del frasco con
solucioacuten salina sobresaturada y se mezcloacute con varilla de vidrio hasta obtener una
suspensioacuten muy fina Se dejoacute la solucioacuten en estas condiciones 20 min Se aspiroacute el
volumen superior de la solucioacuten y se recuperoacute con pipeta una muestra del fondo que fue
colocada entre portaobjeto y cubreobjetos y se observoacute al microscopio Este uacuteltimo
procedimiento fue adicionado para la buacutesqueda de huevos operculados de F hepatica
que presentan la caracteriacutestica de no flotar
32323 - Meacutetodo cuantitativo para huevos
La teacutecnica de Kato-Katz o frotis grueso (solicitada para la entrega gratuita de Egatenreg
triclabendazol para uso humano donacioacuten de Novartis Pharma AG) (Savioli et al
1999)(OMS 2006)(Keiser et al 2007) se preparoacute por recomendacioacuten de la OMS para la
buacutesqueda hallazgo y recuento de huevos de F hepatica en heces (n=15)
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33 - Diagnoacutestico por imaacutegenes
A los casos seleccionados por nivel elevado de eosinofilia fosfatasa alcalina o
resultados seroloacutegicos de F hepatica positivos se efectuoacute ecografiacutea abdominal con un
equipo portaacutetil Aloka 500 con transductor Coacutenvex 35 MHz
En dos oportunidades meacutedicos especialistas del Hospital Muntildeiz y del Ministerio de Salud
de la provincia de Catamarca efectuaron las ecografiacuteas (n=57) de aquellas personas a las
que previamente se habiacutea seleccionado
En el caso de pacientes sintomaacuteticas (n=2) meacutedicos gastroenteroacutelogos practicaron una
exploracioacuten con el meacutetodo invasivo Colangiopancreotografiacutea Endoscoacutepica Retrograda
(CPRE) con el uso de coledocoscopio flexible Olympus CHF P20 de 49 mm con canal
de trabajo de 22 mm y visioacuten lateral realizando una papilotomiacutea retrograda endoscoacutepica
y barrido instrumental con cateacuteteres de Dormia (Mazzariello 2009) en cliacutenicas privadas
de las ciudades de San Fernando del Valle de Catamarca y Coacuterdoba
34 - Datos cliacutenicos
Meacutedicos de los distintos nosocomios efectuaron los exaacutemenes cliacutenicos a personas
sospechosas de fasciolosis o que lo solicitaron donde se evaluaron siacutentomas y signos
tales como fiebre dispepsia diarrea ictericia dolor abdominal voacutemitos hepatomegalia
etceacutetera Los datos fueron anotados en la planilla de registro de observaciones disentildeada
para este fin que corresponde a una fraccioacuten del cuestionario (Veacutease anexo Figura 21
pp 186)
ANIMALES COMO HOSPEDADOR DEFINITIVO DE F hepatica
4 - Especies animales estudiadas
El componente animal incluyoacute para su estudio ejemplares (n=1088) de las especies
domeacutesticas Bos primigenius taurus (bovinos) Capra aegagrus hircus (caprinos) Equus
africanus asinus (asnos) Equus ferus caballus (caballos) Lama glama (llamas) Ovis
orientalis aries (ovinos) y Sus scrofa domestica (cerdos) de diferentes razas categoriacuteas y
sexos
41 - Exaacutemenes coproparasitoloacutegicos
Para conocer la prevalencia de infeccioacuten por F hepatica y la contaminacioacuten del ambiente
por el aporte de huevos al medio se recolectaron muestras de materia fecal en 36 viajes
a campo realizados en primavera y otontildeo Las muestras (n=1077) se obtuvieron de las
distintas especies animales domesticas presentes en la zona ovinos (n=322) asnos
(n=192) llamas (n=210) caprinos (n=197) bovinos (n=72) equinos (n=46) y porcinos
(n= 38) durante los antildeos 2008-2011
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Las muestras de heces fueron recogidas en el momento de la defecacioacuten de cada
ejemplar o con el uso de guantes descartables de pared delgada que permitieron la
penetracioacuten completa de la mano o de un dedo seguacuten la especie animal a evaluar Se
humedecioacute la proteccioacuten con agua corriente al igual que la regioacuten anal para no maltratar
al animal en el momento de extraccioacuten de las bontildeigas del recto
La materia fecal obtenida fue colocada en recipientes plaacutesticos individuales que
conteniacutean solucioacuten salina formolada al 5 y se transportaron al laboratorio de
Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de
Catamarca para su anaacutelisis En el diagnoacutestico de infeccioacuten por F hepatica se utilizoacute la
teacutecnica de sedimentacioacuten para la deteccioacuten de huevos en materia fecal (Dennis et al
1954) fundamentada en repetidos lavados y filtrados de la muestra coproloacutegica y la
observacioacuten posterior Se preparoacute una solucioacuten detergente con 95 ml de agua destilada y
5 ml de detergente liacutequido maacutes unas gotas de solucioacuten al 1 de sulfato de aluminio y
potasio
Se pesoacute 5 gr de heces de cada muestra se colocaron en un mortero se agregoacute 25 ml de
solucioacuten detergente y se mezcloacute cuidadosamente con varilla sin formar espuma En un
embudo colador se colocoacute una doble gasa y se filtroacute la suspensioacuten a un tubo de 50 ml de
capacidad se lavoacute con solucioacuten detergente el recipiente que conteniacutea las muestras
filtrando este liacutequido y agregaacutendolo al tubo adicionando maacutes solucioacuten detergente al
sedimento de la malla hasta llenar el tubo Se dejoacute el tubo en reposo entre 5 y 10 min
eliminando 34 parte del sobrenadante se lavoacute el embudo con solucioacuten detergente y
agregoacute al tubo Se volvioacute a llenar el tubo hasta el reborde con solucioacuten detergente
dejando reposar aproximadamente 10 min Se eliminoacute el sobrenadante del tubo dejando
2 a 3 ml de sedimento Se tintildeoacute con gotas de azul de metileno al 1 o 2 gotas de tintura
de yodo y se dejoacute en reposo de 2 a 5 min vertiendo este contenido en una caja de Petri
Se lavoacute el tubo con 5 ml de agua corriente agregaacutendolo a la placa y se observoacute al
microscopio de 4x a 10x Finalmente se reportoacute la presencia o ausencia de huevos de F
hepatica La identificacioacuten de los huevos se realizoacute a partir de sus caracteriacutesticas
morfoloacutegicas forma ovalada u ovoide con una envoltura lisa de color amarillento o
marroacuten claro que en una de sus extremidades posee un pequentildeo opeacuterculo cuyas
medidas variacutean entre 130-140 μm de largo por 70-90 μm de ancho (Boero 1976) Las
prevalencias de infeccioacuten de las diferentes especies se compararon usando el test de
Chi2
411 - Identificacioacuten de otros paraacutesitos gastrointestinales
Muestras de materia fecal ovina fueron estudiadas con el meacutetodo de Willis para
comprobar presenciaausencia de especies paraacutesitas que pudieran cohabitar con F
hepatica
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42 - Necropsias y obtencioacuten de especiacutemenes de F hepatica
Se participoacute durante 2008 2009 y 2010 en las faenas domiciliarias y peridomiciliarias de
11 animales domeacutesticos [Lama glama (n=4) Ovis orientalis aries (n=4) Capra aegagrus
hircus (n=2) y Bos primigenius taurus (n=1)] de ambos sexos y distintas edades
sacrificados por los pobladores que de esa forma se proveiacutean de carne para la
alimentacioacuten familiar Se obtuvo autorizacioacuten verbal para realizar la inspeccioacuten sanitaria
de los cadaacuteveres que permitiera la buacutesqueda de ejemplares adultos de F hepatica y
otros signos de enfermedad El estudio se realizoacute con el material recogido del ganado
sacrificado por sus propietarios por lo que no se necesitoacute la autorizacioacuten del Comiteacute de
Eacutetica del Colegio Meacutedico Veterinario de la Provincia de Catamarca
En la cavidad abdominal se examinaron los oacuterganos in situ observando esencialmente la
relacioacuten entre ellos y las anormalidades en el peritoneo y contenido del abdomen El
hiacutegado se inspeccionoacute mediante palpacioacuten en toda la superficie para posteriormente
realizar cortes paralelos a traveacutes del pareacutenquima
De manera especial se procedioacute in situ a la inspeccioacuten visual del hiacutegado cuando se
trataba de fasciolosis aguda (n=2) para observar inflamacioacuten presencia de hemorragias
en el pareacutenquima producidas por la migracioacuten de los paraacutesitos inmaduros durante las
primeras semanas post-infeccioacuten o trayectos con sangre coagulada hematomas debajo
de la caacutepsula de Glisson (subcapsulares) congestioacuten venosa y peritonitis fibrosa
adyacente La buacutesqueda de formas joacutevenes de F hepatica se realizoacute mediante incisiones
paralelas del pareacutenquima hepaacutetico con cortes en laacutemina cada dos centiacutemetros y medio
de espesor
En los animales revisados que presentaban fasciolosis croacutenica (n=5) los hallazgos
dependieron de la presencia y nuacutemero de paraacutesitos Se buscoacute especialmente en las
carcasas edemas en ldquocuello de botellardquo edemas generalizados y signos de caquexia En
los hiacutegados se examinoacute todo dato objetivo observado de colangitis fibrosis hepaacutetica y
ganglios linfaacuteticos agrandados En los cortes practicados a los canales biliares se observoacute
la presencia de engrosamientos en las paredes de los ductos y depoacutesitos calcaacutereos en su
lumen
En las necropsias se recolectoacute bilis para la buacutesqueda de huevos de F hepatica los que
a posteriori seriacutean utilizados con los caracoles en la reproduccioacuten in vitro del ciclo La
bilis se colectoacute en tubos coacutenicos de 50 ml de capacidad recubiertos en papel de aluminio
se refrigeroacute y se transportoacute hasta el laboratorio de la Facultad de Ciencias de la Salud
donde se conservaron en heladera a 4-8 degC
Los ejemplares de paraacutesitos hallados durante las faenas se lavaron durante 30 min en
solucioacuten fisioloacutegica fueron dispuestos en 3 grupos de envases uno con solucioacuten AFA
(etanol 95ordm 85 ml formaldehiacutedo comercial 10 ml y aacutecido aceacutetico glacial 5 ml) para realizar
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estudios anatomorfoloacutegicos un segundo al que se agregoacute etanol 70deg para el anaacutelisis de la
variabilidad geneacutetica y un tercero conteniendo ARNlaterR para estudios de resistencia
antiparasitaria Todos los tubos fueron numerados para identificar lugar especie sexo
edad aproximada o categoriacutea de los animales y datos del propietario del animal faenado
421 - Estudios morfoloacutegicos de F hepatica
Ejemplares de F hepatica obtenidos en la faena de un bovino infectado naturalmente en
el valle de Fiambalaacute (n=20) se compararon con las medidas de especiacutemenes procedentes
de Rosario de la Frontera Salta Argentina (n=15) de Cordeiro Riacuteo de Janeiro (n=23)
Lavras Minas Gerais Brasil (n=18) y Galicia Espantildea
El meacutetodo de estudio aplicado se basoacute en el protocolo propuesto por Valero et al (2005)
y se llevoacute a cabo en el Laboratoacuterio de Helmintos Paraacutesitos de Vertebrados Fiocruz Riacuteo
de Janeiro Brasil Se realizaron estudios morfoloacutegicos de F hepatica con microscopia de
campo claro y usando microscopia de contraste por interferencia diferencial o teacutecnica DIC
(Differential-Interference Contrast) Normarski Los especiacutemenes fueron mantenidos en
solucioacuten AFA hasta el laboratorio del Fiocruz donde se fijaron en etanol 70deg se
presionaron entre vidrios transparentes para facilitar la visualizacioacuten de las estructuras e
inmediatamente despueacutes se realizoacute la deshidratacioacuten de las muestras con una serie
ascendente de alcoholes y luego se tintildeeron con carmiacuten alcohoacutelico de Langeron (1949)
seguido de una aclaracioacuten con solucioacuten de salicilato de metilo y baacutelsamo de Canadaacute en
la proporcioacuten 11 El material fue montado entre portaobjetos Se midieron los ejemplares
para su registro y comparacioacuten de tamantildeo con especiacutemenes de las otras regiones Las
microfotografiacuteas se obtuvieron usando un microscopio de campo claro (Olympus BX51)
Ademaacutes se obtuvieron microfotografiacuteas utilizando contraste de interferencia diferencial
(Normarski) para estudiar especiacutemenes un tanto gruesos que no permiten el uso de
contraste de fases La imagen proyectada al ser seudo tridimensional facilitoacute observar las
espinas del tegumento para diferenciarlos Esta teacutecnica se aplicoacute a 23 especiacutemenes
Ocho muestras del valle de Fiambalaacute 7 de Salta 4 especiacutemenes de Cordeiro y 4
ejemplares de Lavras
422 - Estudios de haplotipos de F hepatica
Para analizar los haplotipos de F hepatica circulantes paraacutesitos obtenidos (n=30) en la
necropsia de un bovino naturalmente infectado se conservaron hasta su transporte al
Instituto Malbraacuten en etanol 70ordm y se procesaron para la extraccioacuten de ADN empleando un
kit comercial Se llevaron a cabo reacciones de PCR para la amplificacioacuten del marcador
molecular correspondiente al gen mitocondrial de la subunidad 1 de la citocromo c
oxidasa (COI) Los amplicones obtenidos se secuenciaron automaacuteticamente Las
filogenias fueron reconstruidas utilizando el algoritmo de maacutexima parsimonia
implementado en el programa PAUP (Swoffod 2001) Los aacuterboles se obtuvieron
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mediante 1000 reacuteplicas bootstrap La adicioacuten de secuencias fue al azar con 5
repeticiones Se compararon con ejemplares de fasciolas de otras regiones del paiacutes
423 - Estudios de resistencia a antiparasitarios
Para conocer la posible resistencia a drogas antiparasitarias (Triclabendazol TCBZ) se
utilizoacute la teacutecnica RAPD PCR para la que se seleccionoacute ejemplares procedentes de un
bovino (n=9) y 2 ovinos (n=18) obtenidas en las faenas realizadas en septiembre de 2009
y noviembre de 2010 En cada tubo de microcentrifuga de 2 ml de capacidad se
colocaron 3 ejemplares de F hepatica con el medio ARNlaterR y se enviaron a la Caacutetedra
de Farmacologiacutea de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad del Centro
de la Provincia de Buenos Aires para realizar el ensayo que involucroacute el anaacutelisis de los
fragmentos amplificados mediante electroforesis en geles de
poliacrilamida desnaturalizantes El iniciador empleado se marcoacute con un compuesto
fluorescente y se resolvioacute empleando un secuenciador automaacutetico Se emplearon como
testigos muestras de F hepatica procedentes de la provincia de Chubut y otras de
Cajamarca Peruacute En cada tubo se preparoacute BSA 1mgml 25 microl dNTPs 20 mM 2 microl Taq
directa sin diluir 025 microl DNA 10 ngmicrol 1 microl MgCl 25 mM 2 microl primer mezcla F y R 1 microl y
H2O csp 1625 microl La secuencia del cebador utilizado fue M-13 GAG GGT GGC GGT
TCT y el Programa 7 Di 94 degC 2 min 94 degC 30 seg 37 degC 1 min 72 degC 2 min (45 ciclos)
Ef 72 degC 5 min Los tubos y orden de siembra fueron 1) PM 10 microL 2) ADN Fh Sensible
(cepa pura Cullompton) 3) ADN Fh Resistente (cepa pura Sligo) 4) ADN Fh Peruacute ovino
(Pedro Ortiz de Cajamarca) 5) ADN Fh Quebrada Grande (Vega) 6) ADN Fh Puerta de
Tatoacuten (Bayoacuten) 7) ADN Fh Casa Grande (Loacutepez) 8) ADN Fh Chubut ovino (Jensen)
IDENTIFICACIOacuteN DEL HOSPEDADOR INTERMEDIARIO DE Fasciola hepatica
5 - Epidemiologiacutea de los caracoles
51 - Recoleccioacuten de limneidos en la zona del valle de Fiambalaacute
Los meacutetodos malacoloacutegicos correspondieron a los baacutesicos utilizados en malacologiacutea y
comprendieron la recoleccioacuten de los limneidos (n=2354) en la naturaleza su transporte y
la posterior aclimatacioacuten de los mismos en condiciones de laboratorio para su estudio
(Roberts 1950)(Malek 1962)(Prasertphon 1990)
Se seleccionaron 4 biotopos donde se colectaron caracoles mediante la buacutesqueda visual
sobre la vegetacioacuten o de los ejemplares que se desplazaban libremente en la superficie
del agua Tambieacuten se buscaron moluscos en restos del sustrato seco troncos hojas
tallos etceacutetera
El aacuterea de trabajo fue determinada con el fin de recolectar el mayor nuacutemero de
ejemplares posibles en total se realizaron 24 muestreos de 3 horas cada uno desde
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septiembre a mayo de cada antildeo colectando moluscos en sus diferentes haacutebitats
mediante las manos enguantadas para no dantildear al caracol y reduciendo el impacto sobre
el biotopo En los diferentes muestreos y en cada sitio se recolectaron todas las especies
de caracoles presentes utilizando igual meacutetodo de captura (Rabinovich 1980)
El material malacoloacutegico colectado proveniacutea de poblaciones naturales del valle de
Fiambalaacute Las expediciones para la recoleccioacuten de los moluscos se realizaron en
poblaciones de caracoles del riacuteo Abaucaacuten (27ordm29acute2871S y 67ordm360612O) en la vega
ubicada en las afueras de Tatoacuten (27ordm202935S y 67ordm315824O) gasteroacutepodos
presentes de la vega ldquoLa Primavera de Isatacordquo (27ordm292871S y 67ordm360612O) entre
las localidades de Tatoacuten y Medanitos y en Riacuteo Grande (27ordm133794S y 67ordm224317O)
Estos lugares fueron escogidos teniendo en cuenta los casos registrados en el marco
veterinario (Curtale et al 2000) y las primeras estimaciones sobre fasciolosis en seres
humanos detectadas en la zona
De cada una de las aacutereas de recoleccioacuten se tuvieron en cuenta una serie de
caracteriacutesticas bioacuteticas tales como la presencia de otras especies de moluscos
(Paraense 2005) presenciaausencia de vertebrados como potenciales hospedadores
definitivos y tipo de vegetacioacuten de la zona
511 - Transporte de limneidos al laboratorio
La recoleccioacuten de moluscos en el terreno se realizoacute siguiendo las instrucciones generales
que cabe encontrar en cualquier libro de malacologiacutea que se refiera a gasteroacutepodos de
agua dulce Siempre se tratoacute de hacer colectas lo maacutes numerosas posibles dada la
mortalidad de estos caracoles en situaciones experimentales
Para el transporte de los ejemplares vivos se utilizoacute recipientes de plaacutestico conteniendo
agua del lugar Durante los viajes se hizo especial hincapieacute en la temperatura (menor a
20 degC) para evitar la contaminacioacuten del agua que podiacutea llevar a la mortalidad de los
caracoles recolectados A su vez se colectaron especiacutemenes que fueron colocados en
tubos con alcohol etiacutelico Se trasladaron al laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de
Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de Catamarca para estudios apropiados
52 - Tareas en el laboratorio
521 - Adaptacioacuten y cultivo de limneidos
El primer paso que se realizoacute en el laboratorio fue la aclimatacioacuten de los moluscos
recolectados tratando de simular las condiciones que encontraban en la naturaleza Esta
fase duroacute aproximadamente 48 horas (Rondelaud y Barthe 1987)(Audousset et al
1989) Durante este periacuteodo los ejemplares se colocaron en recipientes de vidrio con
agua y un suministro de lechuga a temperaturas entre 20 y 25 ordmC
Se consiguioacute un correcto mantenimiento para la reproduccioacuten del ciclo bioloacutegico al
disponer en el fondo de los recipientes una capa fina de sedimentos de grava
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(Rondelaud y Barthe 1978)(Audousset et al 1989) cubierta con agua ambos elementos
previamente esterilizados mediante el empleo del autoclave Cada 3 a 4 diacuteas se antildeadiacutean
hojas de lechuga (Venturini et al 1981) y se procediacutea al cambio de agua del recipiente
(Bouix-Busson et al 1985 a)(Bouix-Busson et al 1985 b)
522 - Taxonomiacutea
De los primeros ejemplares (n=1236) colectados en diciembre de 2009 un grupo (n=298)
de los moluscos se llevaron al Laboratorio de Parasitologiacutea General Unidad de Ecologiacutea
de Reservorios y Vectores de Paraacutesitos Departamento de Ecologiacutea Geneacutetica y
Evolucioacuten Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires donde
se confirmoacute por las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla (Paraense 1982) y
oacuterganos internos que se trataba de limneidos
El material colectado y conservado en etanol (n=236) en septiembre de 2010 se
comparoacute con las descripciones y los dibujos de las especies de limneidos detalladas para
la Regioacuten Neotropical (Paraense 1982)(Paraense 1984)
La caracterizacioacuten morfomeacutetrica comparativa de la conchilla de los limneidos es una
caracteriacutestica adicional de intereacutes sobre todo cuando se trata de especies de
hospedadores intermediarios del grupo GalbaFossaria ampliamente distribuido en zonas
endeacutemicas de fasciolosis de Ameacuterica del Sur (Samadi et al 2000)(Bargues et al 2007 a
2011 a)
Las conchillas de limneidos se midieron de acuerdo con los meacutetodos tradicionales
malacoloacutegicos (Oviedo et al 1995)(Samadi et al 2000) Para estudiar la estructura
anatoacutemica de la poblacioacuten se midioacute el largo de la conchilla desde el aacutepex hasta el margen
anterior y el ancho en la seccioacuten maacutes amplia (Hubendick 1951) de los caracoles
recolectados en cada ambiente y por fecha de muestreo utilizando un calibre de Vernier
Otros moluscos recolectados simultaacuteneamente con los de la familia Lymnaeidae fueron
identificados a nivel de geacutenero siguiendo las claves y descripciones de los gasteroacutepodos
de agua dulce de Argentina (Castellanos y Landoni 1981)(Rumi et al 2008)
523 - Infeccioacuten natural por F hepatica
Teniendo en cuenta que los moluscos fueron recolectados en zonas de endemia animal
se consideroacute necesaria la comprobacioacuten de una posible parasitacioacuten Despueacutes de su
aclimatacioacuten 70 ejemplares recolectados en 2011 fueron aislados en cajas de Petri
individuales para comprobar en eacutestos la emisioacuten de cercarias durante 60 diacuteas Las cajas
de cultivo fueron revisadas una vez a la semana en busca de la posible presencia de
metacercarias enquistadas en las paredes del recipiente o en la lechuga que serviacutea de
alimento
Un grupo de cuerpos de caracoles (n=453) se examinaron para la identificacioacuten de
estadios intermediarios de F hepatica Se sacrificaron y relajaron los ejemplares y luego
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al llevar a cabo la diseccioacuten de los cuerpos en fresco separando las partes duras de las
blandas con agujas de diseccioacuten se comprimieron entre dos portaobjetos y se
observaron al microscopio oacuteptico (4x) para reconocer las estructuras de los diferentes
estadios intermedios del parasito
524 - Infeccioacuten inducida del hospedador intermediario
En el laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la Salud se realizoacute la
infeccioacuten experimental del hospedador intermediario la que se consiguioacute forzando el
contacto miracidio-molusco (n=60) y manteniendo los caracoles infectados bajo
condiciones controladas de temperatura humedad e iluminacioacuten (Mas-Coma et al 1997
a)(Valero y Mas-Coma 2000)
Los miracidios utilizados se obtuvieron de forma experimental mediante la eclosioacuten de los
huevos previamente embrionados (recogidos en las necropsias lavados con solucioacuten
isotoacutenica y filtrados) Se mantuvieron en estufa a temperatura de 25 degC durante 8 diacuteas
observaacutendolos cada 24 horas para comprobar la maduracioacuten de los mismos Los huevos
embrionados se sometieron a la accioacuten de la luz durante 30 min promoviendo la apertura
del opeacuterculo y salida del estadio larvario (Ubaid 1989) La infeccioacuten se logroacute poniendo en
contacto los moluscos con varios miracidios -infeccioacuten plurimiracidial- en una caja de Petri
durante un tiempo que osciloacute entre 2 y 6 horas Pasado este periodo se observoacute el
recipiente bajo la lupa en busca de miracidios y en caso de no estar presentes se
consideroacute un signo inequiacutevoco de que habiacutean penetrado en el caracol (Krull
1941)(Kendall 1950)(Roberts 1950)
53 - Identificacioacuten de la especie mediante determinacioacuten de haplotipos
Se transportaron caracoles de una misma poblacioacuten de limneidos (n=38) colectados
durante 2012 en los biotopos de la zona y fijados con alcohol etiacutelico 70 al Centro
Colaborador de la OMS Departamento de Parasitologiacutea de la Universitat de Valencia
Espantildea para realizar los anaacutelisis moleculares mediante procedimientos de extraccioacuten de
ADN Su mantenimiento durante el viaje se llevoacute a cabo mediante cambios del alcohol en
forma perioacutedica
En la presente investigacioacuten entre los marcadores moleculares utilizados en la
identificacioacuten de los limneidos y para demostrar a que especie perteneciacutean se
seleccionaron ADN nuclear ribosomal (ADNr) marcador de ADN mitocondrial (ADNmt)
primer espaciador transcrito interno (ITS-1) segundo espaciador transcrito (ITS-2) ARN
ribosomal codificacioacuten de gen de la subunidad grande del gen mitocondrial (16S)
citocromo c oxidasa subunidad I de secuencia de nucleoacutetidos y la secuencia de
aminoaacutecidos (Cox1)
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531 - Marcadores de ADN seleccionados
Los marcadores se utilizaron para demostrar la clasificacioacuten de las especies de limneidos
y evaluar comparativamente la variabilidad intraespeciacutefica de sus poblaciones en muchos
paiacuteses de Ameacuterica Latina (Bargues y Mas-Coma 2005)(Bargues et al 2001 2007 a
2011 a b c) que tambieacuten incluye Argentina (Bargues et al 2006 2007 b)(Mera y Sierra
et al 2009)
532 - Extraccioacuten de ADN
El total de ADN fue aislado con fenol-cloroformo y se precipitoacute en etanol (Sambrook et al
1989) La extraccioacuten se realizoacute individualmente de una pequentildea porcioacuten del tejido de la
cabeza-pie de cada caracol (Manlatis et al 1989) Las muestras de los especiacutemenes de
limneidos se suspendieron en un tubo eppendorf con 400 μL de tampoacuten de lisis 10 μL
Tris-HCl pH 80 100 μL EDTA 100 μL NaCl 1 SDS conteniendo 500 microgml de
proteinasa K (Promega Madison WI USA) y digeridos durante 2 horas a 55 degC con
agitacioacuten alterna cada 15 min Los pasos del procedimiento se realizaron de acuerdo con
meacutetodos descriptos previamente (Bargues y Mas-Coma 1997)(Bargues et al 2001 2007
a) El sedimento (pellet) se secoacute y se resuspendioacute de nuevo en 30 μL de buffer TE esteacuteril
(pH 80) esta suspensioacuten fue almacenada a -20 ordmC hasta su empleo
533 - Secuenciacioacuten de los marcadores de ADNr y ADNmt
Las secuencias de ADN fueron amplificadas mediante la reaccioacuten en cadena de
polimerasa (PCR) con la utilizacioacuten de 4-6 μL de ADN genoacutemico cada 50 μL de reaccioacuten
de PCR seguacuten meacutetodos descritos en la bibliografiacutea (Bargues y Mas-Coma 1997
2005)(Bargues et al 1997 2001 2006 a c 2007 2011 a b c 2012 a b)(Mas-Coma et
al 2001) El programa utilizado para los espaciadores fue 1) 30 seg a 94 ordmC 2) 30 seg a
94 ordmC 3) 30 seg a 50 ordmC 4) 1 min a 72 ordmC 30 ciclos repetitivos de los pasos 2 a 4 5) 7
min a 72 ordmC 6) descenso y mantenimiento a 4 ordmC Diez μL de cada producto de PCR se
chequeoacute mediante electroforesis en gel de agarosa coloreadas con bromuro de etidio 1
(NuSievereg GTGreg agarosa) Para poder extrapolar el peso de los fragmentos de ADN se
utilizoacute el marcador de peso molecular VI (Boehringer Mannheim)
La purificacioacuten de los productos amplificados por PCR tuvo la finalidad de obtener una
solucioacuten concentrada y de alta pureza del fragmento eliminando los restos de cebadores
nucleoacutetidos sales etceacutetera La concentracioacuten de ADN asiacute como su pureza fueron
calculadas por espectrofotometriacutea en una dilucioacuten de la muestra al 5 en tampoacuten Tris 10
μL
Cada uno de los cuatro marcadores de ADN (ADNr ITS-2 y ITS-1 y de ADNmt genes
16S y cox1) se amplificaron por PCR en forma independiente para cada muestra y cada
producto de PCR se secuencioacute para la caracterizacioacuten del haplotipo Los espaciadores
ITS-2 y ITS-1 se amplificaron utilizando los cebadores descritos anteriormente (Bargues
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et al 2001 2006 2007 a b)(Mas-Coma et al 2009 a) Los fragmentos diana de los
genes 16S y cox1 fueron amplificados por PCR usando un conjunto de cebadores
universales (Simoacuten et al 1991)(Folmer et al 1994) Los procedimientos de amplificacioacuten
y las condiciones del ciclador teacutermico para cada uno de los marcadores de ADN se
llevaron a cabo en un Mastercycle Epgradient (Eppendorf Hamburgo Alemania) como
se describioacute previamente (Mas-Coma et al 2009 a)(Bargues et al 2011 a)
Los productos de PCR fueron purificados utilizando el Ultra Clean Systemtrade Purificacioacuten
de ADN PCR Clean-up (MoBio Solana Beach CA USA) de acuerdo con el protocolo del
fabricante y se resuspendieron en 50 μL de 10 mM de tampoacuten TE (pH 76) La
concentracioacuten final de ADN se determinoacute midiendo la absorbancia a 260 y 280 nM en un
Eppendorf BioPhotometer (Hamburgo Alemania)
La secuenciacioacuten de cada marcador molecular se realizoacute en ambas hebras por el meacutetodo
didesoxinucleoacutetidos (ddNTPs) de terminacioacuten de cadena Se llevoacute a cabo con el kit que
contiene tinte de color de enzima termoestable Taq en un Applied Biosystems 3730 DNA
Analyzer (Applied Biosystems Foster City CA USA) usando cebadores de PCR
534 - Anaacutelisis de la secuencia
Las secuencias fueron alineadas utilizando CLUSTALW2 (Larkin et al 2007) en versioacuten
606 MEGA (Tamura et al 2013) y el conjunto se trabajoacute con el paquete Staden (Staden
et al 2001) Las correcciones menores para el mejor ajuste de nucleoacutetidos se hicieron en
los casos de los espaciadores ITS Las homologiacuteas se realizaron utilizando el programa
BLASTN (Camacho et al 2008) del Centro Nacional para el sitio web de informacioacuten
sobre Biotecnologiacutea (httpwwwncbinlmnihgovBLAST) Las distancias geneacuteticas se
midieron usando paraacutemetros proporcionados por PAUP v40b10 (Swofford 2001)
Como la sistemaacutetica de limneidos sudamericanos pertenecientes al grupo GalbaFossaria
es controversial y no se puede hacer solo con criterios morfoloacutegicos (Bargues et al 2007
a)(Mera y Sierra et al 2009) para identificar queacute individuos pertenecen a L neotropica o
L viator la comparacioacuten de las secuencias se realizaron utilizando todos los datos de
secuencias ribosomales y mitocondriales de moluscos descargados de GenBank
535 - Nomenclatura de los haplotipos de ADN
En lo referente a la nomenclatura los coacutedigos de las secuencias obtenidas utilizados para
la definicioacuten de los haplotipos siguen la propuesta estaacutendar para limneidos (Bargues y
Mas-Coma 2005)(Bargues et al 2006 a)(Mas-Coma et al 2009 a) Es importante
puntualizar que los coacutedigos de haplotipos son definitivos soacutelo cuando se trata de
secuencias completas del marcador utilizado para haplotipar Sin embargo se consideran
coacutedigos preliminares cuando la secuencias utilizadas corresponden a fragmentos o
secuencias incompletas
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54 - Determinacioacuten molecular de la infeccioacuten natural de limneidos con F hepatica
Se seleccionaron al azar caracoles (n=120) recolectados a fines del verano de 2011 y
conservados individualmente en alcohol 70 Los ejemplares fueron llevados al
Departamento de Parasitologiacutea del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas
ANLIS bdquobdquoDr Carlos G Malbranrdquo donde se sometieron a la teacutecnica de amplificacioacuten en
cadena de la polimerasa (Cucher et al 2006) La secuencia completa del ADN
mitocondrial de F hepatica disponible en la base de datos GenBank (Nuacutemero de acceso
AF216697) se empleoacute para adquirir el par de cebadores utilizados en el meacutetodo
La identidad de F hepatica se corroboroacute mediante la determinacioacuten molecular en los
caracoles limneidos Esta teacutecnica se empleoacute a fin de determinar la infeccioacuten de moluscos
del geacutenero Lymnaea con F hepatica A 10 μL de material geneacutetico obtenido se le
adicionaron 40 μL de mezcla de reaccioacuten compuesta de 025 microL de cebadores FhCO1F
025 microL de cebadores FhCO1R 020 microL de ddNTPs 020 microL de enzima Taq polimerasa
5 microL de MgCl 5 microL de buffer de reaccioacuten 040 microL de BSA y 2870 microL de agua bidestilada
esteacuteril Este proceso se realizoacute en tandas de 75 muestras a modo de trabajar con mayor
practicidad El protocolo empleado fue el mismo usado para determinar si existioacute
amplificacioacuten en la secuencia de ADN en las muestras de limneidos colectados a campo
De estas muestras se tomaron 5 μL para ser sembrados en un gel de electroforesis de
concentracioacuten 15 para verificar si hubo amplificacioacuten de la muestra a su vez se
sembroacute la mezcla de reaccioacuten (sin ADN) y una muestra de control positivo que permitioacute
verificar si las muestras analizadas estaban infectadas Se procedioacute a realizar la
electroforesis en las mismas condiciones anteriores
La teacutecnica de PCR se empleoacute para amplificar la secuencia de ADN de las muestras
limneidos A 10 microl de material geneacutetico se les adicionoacute 40 microl de mezcla de reaccioacuten 05 microl
de primer 213 10 mM 05 microl de primer 297 10 mM 02 microl de dNTPs 02 microl enzima Taq
polimerasa 5 microl MgCl 5 microl de buffer de reaccioacuten B10x ClK 04 microl de BSA y 282 microl de
agua bidestilada esteacuteril
Los tubos de ADN y uno que conteniacutea agua (a modo de control) fueron llevados a un
termociclador empleando el programa ldquosil Lymnaea 18srdquo previamente cargado en el
equipo Se llevoacute a una temperatura de 95 degC durante 5 min luego a temperaturas de 94
degC 55 degC y 72 degC durante 10 seg repitiendo este ciclo 35 veces para despueacutes llevarlos
durante 10 min a 72 degC para finalmente bajar la temperatura hasta 4 degC
541 - Electroforesis
De las muestras se tomaron 5 microl para ser sembrados en un gel de electroforesis de
concentracioacuten 25 que permitioacute la separacioacuten de las macromoleacuteculas en base a su
carga y masa al colocarlo en una cuba de electroforesis que poseiacutea un tampoacuten y donde
se aplicoacute corriente eleacutectrica Esto se realizoacute mezclando 6 g de agarosa en 400 ml de
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buffer TAE (tris-acetato) calentando para disolver la agarosa luego se dejoacute enfriar la
mezcla hasta 50-60 degC y se antildeadieron 24 microl de bromuro de etidio que actuoacute como
colorante Se vertioacute en un molde y colocando un peine se formaron pocillos donde fueron
sembradas las muestras y colocadas en la cubeta de electroforesis que presentaba
solucioacuten tampoacuten de TAE 1x el gel quedoacute completamente cubierto
Una vez realizado esto se colocoacute en el primer pocillo el ADN marcador adecuado (100
bp) en el uacuteltimo la mezcla de reaccioacuten con agua y en los pocillos restantes las muestras
que se analizaron por duplicado El ADN migroacute hacia el aacutenodo aplicando tensioacuten eleacutectrica
hasta que el bromuro de etidio recorrioacute la distancia a traveacutes del gel (30 min) Finalmente
se introdujo el gel en un transiluminador UV y se fotografioacute Se eliminoacute el gel en el
recipiente aparte para residuos soacutelidos destinado al bromuro de etidio
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RESULTADOS
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6 - DATOS SECUNDARIOS Y CARACTERISTICAS DEL AMBIENTE
61 - Caracteriacutesticas de las viviendas del valle de Fiambalaacute
El nuacutemero de familias estudiadas (n=52) habitaban en viviendas ubicadas en Tatoacuten
(n=34) (271 personas) (7742) y en puestos aledantildeos a Riacuteo Grande (n=18) (79
personas) (2257) Las viviendas se clasificaron seguacuten su tipo en ranchos 36 (6923)
viviendas precarias 12 (2307) y casas 4 (769)
Los hogares se agruparon en funcioacuten de la calidad de los materiales de construccioacuten
correspondiendo maacutes de la mitad de ellos a viviendas construidas con materiales no
resistentes ni soacutelidos En cuanto a los materiales utilizados en los pisos de las viviendas
predominaba la tierra (9230) seguida por el cemento (576) y el ceraacutemico (194)
Las paredes estaban construidas principalmente de piedra o bloques de cemento
(5683) y adobe (4317) y en general no contaban con revoque exterior (9522)
Los techos presentaron como elementos constitutivos principales la paja con adobe
(4348) y la chapa (5652) sin cielorraso (9891)
En las viviendas estudiadas el principal combustible utilizado correspondioacute a la lentildea
(7652) mientras que el gas envasado en garrafas se encontroacute en segundo teacutermino
(2348)
La fuente de agua para consumo correspondioacute en su mayoriacutea a la extraiacuteda del Riacuteo
Grande por medio de acequias dirigidas hacia cisternas de decantacioacuten y desde alliacute en
precaria red de cantildeeriacuteas plaacutesticas hasta los domicilios Las viviendas rurales se
abasteciacutean con agua de vertiente utilizando bidones para el almacenamiento Todas las
familias utilizaban para su consumo el agua de vertiente o de red sin proceso de filtracioacuten
o cloracioacuten Cuando se recolectoacute informacioacuten acerca de la utilizacioacuten de agua hervida
soacutelo 2 familias (384) indicaron que la empleaban para consumo mientras que ninguna
familia la usaba para el lavado de alimentos ni la higiene personal
En cuanto a la eliminacioacuten de excretas la forma principal correspondioacute a la eliminacioacuten a
cielo abierto 33 familias (6346) El bantildeo interior se encontroacute solo en el 193 de las
viviendas visitadas y 3461 utilizaba letrinas con descarga a pozo encontraacutendose todas
a menos de 50 metros de la casa
Las caracteriacutesticas generales de precariedad de las viviendas se relacionan con el hecho
de que en soacutelo 15 (2884) de los hogares visitados el ingreso familiar era fijo El ingreso
variable era reflejo de la actividad laboral del jefe de familia que se desempentildeaba en las
tareas rurales
La presencia de animales se registroacute en 48 casas (9230) En estas viviendas los
animales de compantildeiacutea (perros y gatos) constituiacutean el mayor porcentaje (9615) seguida
por la criacutea de ganado (ovinos y porcinos) (7076) y las aves de corral (6190)
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62 - Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiada
La poblacioacuten estudiada (n=305) comprendioacute 124 personas de sexo masculino (4065) y
181 de sexo femenino (5934) Entre los varones 71 (5725) perteneciacutean a los grupos
etarios menores de 19 antildeos mientras que entre las mujeres las menores fueron 101
(5580) Los pacientes menores de 14 antildeos fueron 130 (4263) y los mayores de 14
antildeos 175 (5737)
Las personas que residiacutean en el aacuterea de estudio desde su nacimiento fueron 263
(8652) por un periacuteodo de entre 5 y 33 antildeos 30 personas (964) y por un periodo
menor de un antildeo al momento del estudio 12 (384)
La informacioacuten recolectada acerca de los haacutebitos de las personas (considerando un total
de 300 ya que 5 teniacutean 3 antildeos o menos y no podiacutean responder las preguntas incluidas
en el cuestionario) indicoacute que 187 (6233) reconociacutean vegetales silvestres comestibles
en los riacuteos y vegas identificaacutendolos como plantas de berro Entre las personas que
reconocieron el berro 54 (2887) refirioacute que lo comiacutea
La actividad de faena era realizada por 31 familias (5961) Entre las encuestadas 14
(2692) reconociacutean el paraacutesito (ldquouncardquo) y 11 (2115) comentoacute haber visto estas
estructuras parasitarias Este porcentaje se considera sobreestimado debido a que
algunos pobladores dedicados a la criacutea del ganado confunden F hepatica con otros
paraacutesitos hecho observado al momento de las visitas a los corrales de encierro Por otro
lado se confirma el desconocimiento de la parasitosis al comparar los hallazgos
obtenidos en los muestreos donde solo 9 criadores sabiacutean de la presencia del paraacutesito
en los animales de sus corrales siendo 21 los rebantildeos positivos Es de destacar que en
algunos casos se observaron registros de mortandad atribuidos a la fasciolosis en
animales sin tratamientos fasciolicidas
El contacto con animales fue referido por 290 de las personas encuestadas (9508)
siendo 215 en el peridomicilio y 87 en la actividad laboral El contacto de las personas
con ovinos fue indicado por 212 individuos (6950) mientras que con caprinos 174
(5704) con bovinos 122 (40) con mulares 190 (6229) con equinos 55 (1803)
con cameacutelidos 115 (3770) con porcinos 46 (1508) y con aves domeacutesticas 188
(6163) Con animales de compantildeiacutea el contacto fue de 291 encuestados con perros
(9540) y 174 con gatos (5704)
Las ocupaciones maacutes frecuentes en pacientes mayores de 15 antildeos eran la agricultura y
la ganaderiacutea (36) empleados en la administracioacuten puacuteblica (2414) completaacutendose
con estudiantes (685) y amas de casa (6285)
63 - Caracteriacutesticas climaacuteticas y haacutebitat
Las caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute de acuerdo con los diferentes
sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizados se indican
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en la Tabla 11 (Veacutease anexo pp 172) Los resultados de los anaacutelisis de las
clasificaciones climaacuteticas de Koeppen y Budyko asiacute como por el iacutendice de aridez de De
Martonne permiten destacar las caracteriacutesticas ambientales aacuteridas (extremas deseacuterticas)
que rodean el valle La influencia del oceacuteano en el clima local estimada por el iacutendice de
continentalidad de Gorczynski indica pequentildeas diferencias entre Tatoacuten y Rio Grande
situadas a diferentes altitudes al este y al oeste de la cadena montantildeosa
Las temperaturas maacuteximas medias y miacutenimas diarias muestran una estacionalidad
marcada con un pico en enero y un descenso hasta los valores miacutenimos en junio-julio
(Veacutease anexo Figura 22 A y C pp 187) La media de los valores de temperatura son
inferiores al umbral de temperatura miacutenima de 10 ordmC reconocido para el desarrollo de F
hepatica en el periacuteodo de junio a julio
El anaacutelisis de la evolucioacuten anual de la precipitacioacuten y la evapotranspiracioacuten potencial
muestra la muy baja disponibilidad de lluvias con un pico pequentildeo en enero-febrero y
precipitacioacuten casi inexistente durante el periacuteodo comprendido desde abril-mayo a octubre-
noviembre (Veacutease anexo Figura 22 B y D pp187) Se presenta aridez durante todo el
antildeo (cuando se utiliza ETP gt 05) (Veacutease anexo Figura 22 D pp 187)
Los resultados indican que los focos de transmisioacuten de fasciolosis en el valle de Fiambalaacute
se presentan en ambientes de hecho aislados que presentan disponibilidad de agua
dependiente solo de los riacuteos que bajan de las sierras vecinas
Las caracteriacutesticas ambientales extremadamente aacuteridas que rodean el valle de Fiambalaacute
asiacute como la muy baja precipitacioacuten anual son sorprendentes y muy diferentes de las
caracteriacutesticas ambientales tiacutepicas que rodean focos de transmisioacuten de la fasciolosis
En la zona de estudio los datos indican una concentracioacuten de todos los factores de
transmisioacuten de la enfermedad en aacutereas pequentildeas donde los humanos y los animales
comparten el suministro de agua Esta situacioacuten de transmisioacuten concentrada recuerda las
caracteriacutesticas epidemioloacutegicas de los focos de transmisioacuten de esquistosomiosis en los
oasis del desierto del Sahara en los paiacuteses africanos (Doumenge et al 1987)
Una transmisioacuten estacional se puede esperar en funcioacuten de la coincidencia puntual de la
temperatura apropiada y la disponibilidad de agua de los riacuteos Dicha estacionalidad es
conocida en las zonas endeacutemicas siguiendo el modelo valle de la transmisioacuten de la
fasciolosis conocida en otros paiacuteses andinos (Mas-Coma 2005)(Valero et al 2012)
7 - RESULTADOS EN SERES HUMANOS
71 - Serologiacutea
711 - Inmunodiagnoacutestico
En la poblacioacuten de personas estudiadas (n=305) se identificaron los casos seroloacutegicos
positivos (n=105) al inmunodiagnoacutestico realizado con el ensayo de ELISA (Tabla 2)
3 M
77
M
Paciente
Edad
Sexo
ELISA 1 (nM)
2009
ELISA 2 (nM)
2010
ELISA 3 (nM)
2011
Coproparasitoloacutegico
Eosinofilia
()
Enzimas y
Bilirrubina
Cliacutenica
Imaacutegenes
Cirugiacutea
(Elevadas) 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
37 F 0490 DAD
0479
0444 8 BD GOTFAL
BD
UH
43
F
0529
0466
Negativo
9
GOTFALB TBD
D
38 F 0377 0503 0440 Negativo BTPT 44 F 0498 0482 Negativo 7 FAL FDAV Colecist
40 M 0479 57 M 0607 64 F 0469 0461 FALPT IDADVH Negativa Positivo 16 F 0456 0433 Positivo 8 PT DDA 39 F 0185 0471 FAL 20 M 0250 0443 FALBD 48 F 0550 0464 Negativo FUDAD 20 F 0438 0448 Negativo 38 F 0459 0450 8 FALBD 77 M 0587 0487 5 FALBD 51 M 0532 0443 5 FDAV 45 F 0481 0633 7 BTBD DAV 63 F 0478 8 BD DA
20
21
22
23
24
46 F 0488 0464 Negativo 10 PT IDAD 46 M 0470 8 GOTGTPF
ALBTD 43 F 0453 DDAV 27 F 0445 Negativo 5 FAL 3 M 0479 Negativo
82
Tabla 2 Resultados de anaacutelisis comparativos seguacuten sexo y edad de la absorbancia de ELISA estudios coproloacutegicos eosinofilia
hepatogramas datos cliacutenicos imaacutegenes y cirugiacuteas sobre casos positivos con diagnoacutestico documentado Valle de Fiambalaacute Antildeos 2009-2011
9 F
11 M
M M M M
8 M 18 M 14 M 63 M
6 M 18 M 9
14
25 0448 Positivo GOTGTPF ALPT 26 0491 Negativo 27 40 F 0555 0435 Negativo 28 84 0486 0485 FAL D 29 24 0574 5 30 65 0445 31 31 0451 32 43 F 0547 0531 Negativo 8 FAL DVH Negativa 33 63 F 0528 0344 Negativo 34 31 F 0431 U 35 24 F 0452 IDAUV 36 0487 Positivo 6 FAL DDAVD Negativa 37 0465 Negativo 5 FAL DAD 38 0166 0454 39 0468 5 GOTGTP DV 40 0204 0483 Negativo 41 0222 0483 DDAUV 42 F 0457 DADV 43 F 0406 0531 44 23 F 0604 0485 FAL V 45 38 F 0492 Negativo DAUVH 46 31 F 0413 Negativo DA 47 12 F 0259 0516 V 48 10 M 0508 Negativo 49 16 F 0151 0489 FAL FDAV 50 16 F 0207 0442 Negativo 5 U 51 22 M 0426 0169 IDAV 52 20 M 0414 53 59 F 0279 0438 U
54 15 F 0152 0437 DAV
55 58 F 0502 0441 Negativo 8 FALPT DFDAUDV H
Positivo
83
M
9 F
F
F
9 7
86 M
8 M 15 M
56 14 M 0464 0428 Negativo FAL 57 19 F 0488 0419 Negativo DAUDV 58 10 F 0496 0444 Negativo FALPT VD 59 25 F 0443 Negativo FAL V 60 82 F 0440 61 16 F 0374 0468 Negativo 5 I 62 36 F 0488 0132 UD Litiasis 63
29
F
0648
0477 GOTGTPF
ALP
DAVD
64 62 F 0464 65 54 F 0451 0364 Negativo 7 FALBT DAVD Positiva 66 54 F 0592 0545 5 VDH 67 32 0566 0445 6 FALPT DAUV Negativa 68 0498 0524 Negativo 8 V 69 0547 FALBDPT DV 70 0490 Negativo 5 DA 71 0530 5 PT H 72 59 F 0543 0485 Negativo FALPT FDAV 73 27 F 0471 FALPT DAV 74 47 F 0491 5 BD FDAV 75 GOTFALB 7 F 0481 6 TPT 76 5 F 0471 F 77 20 F 0442 FALPT DAV 78 21 F 0418 PT UV 79 27 F 0567 Negativo D 80 0430 V 81 0236 0454 0550 8 FAL DAVD 82 30 F 0431 PT DA 83 57 F 0485 0168 Negativo FALPT DAVD 84 79 M 0559 0499 Negativo FAL FH Negativa 85 26 F 0331 0415 Negativo DAUD 86 65 F 0537 FALPT DDAV 87 51 M 0558 0419 Negativo 6 Negativa Colicistec
84
M M
7 F
M M M
15 F 56 M
88 20 0460 DAV
89 46 0426 BT DAU 90 0498 FDAV Negativa 91 49 F 0446 DAV 92 68 F 0441 FAL VD Negativa 93 35 M 0404 0480 PT DAV Negativa 94 85 F 0548 FALPT DAV 95 43 0501 H 96 68 0478 DAD 97 58 0466 VH 98 0445 FALPT DV 99 0430 0482 8 FALPT DH 100 26 F 0441 101 30 M 0407 0480 PT V 102 32 F 0456 0484 0597 Positivo 5 BDPT Negativa 103 9 M 0461 Negativo FALBD DV Negativa 104 65 F 0457 DAUDV 105 19 F 0445 8
85
Color Amarillo grupos etarios menores de 19 antildeos Azul sexo masculino Rojo coproparasitoloacutegico positivo GOT=transaminasa glutaacutemico oxalaceacutetica
GTP=transaminasa glutaacutemico-piruacutevica FAL=fosfatasa alcalina BT=bilirrubina total BD=bilirrubina directa PT=proteiacutenas DA=dolor abdominal D=diarrea
U=urticaria H=hepatalgia F=fiebre V=vomito I=ictericia Colicistec=colecistectomiacutea Naranja imagen compatible Verde cirugiacutea con hallazgos
Valores de referencia eosinoacutefilos 0 a 4 GOT 6-30 UIL GTP 6-35 UIL FAL˃ 200 UIL BD 0 a 03 mgdL BT 03 a 13 mgdL PT 60 a 83 gmdL
Eosinofilos
Normales
Nuacutemero de casos
Seronegativo 174
Seropositivo 71
Total 245
(lt350mm3) Resultado () 870 676a 803
Elevados
Nuacutemero de casos
26
34
60 (˃350mm3) Resultado () 130 324b 197
Total
Nuacutemero de casos
200
105
305
Resultado () 100 100 100
Resultaron a la prueba de ELISA con valor de corte 0410nm 105 sueros positivos
(3442) y 200 seronegativos (6558) (Figura 7) Una persona resultoacute seropositiva en
ensayos realizados en extracciones de 3 antildeos consecutivos 27 personas resultaron
seropositivas en extracciones realizados en 2 antildeos seguidos y 55 en una sola
oportunidad de testeo Quince pasaron de una primera prueba seronegativa a
seropositivo en un segundo estudio Dos partiendo de un primer anaacutelisis seronegativo
resultaron seropositivas en los 2 antildeos subsiguientes y 5 personas pasaron a ser
seronegativas en la tercera extraccioacuten
3442 Negativos
Positivos 6548
Figura 7 Distribucioacuten de personas (n=305) seropositivas y seronegativas en frecuencias
relativas () al inmunodiagnoacutestico del ensayo de ELISA analizadas en el Valle de
Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
712 - Eosinofilia
De los pacientes estudiados se detectaron diferencias estadiacutesticamente significativas en
la proporcioacuten de casos con eosinofilos elevados entre seropositivos y seronegativos
Dentro del grupo de pacientes con serodiagnoacutestico positivo es superior el porcentual con
eosinofilos elevados (Tabla 3)
Tabla 3 Resultados comparativos entre la presencia de eosinofilia y ensayos de ELISA
seropositivos Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Serologiacutea
a y b presentan diferencias estadiacutesticamente significativas
(χ2 = 1636 Gl = 1 p= 0000)
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713 - Proteiacutenas totales enzimas bilirrubina y colesterol
En el grupo de casos positivos al test de ELISA el porcentual con valores elevados de
proteiacutenas totales es significativamente superior (Tabla 4)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas en la proporcioacuten de casos
con bilirrubina total elevada y en la proporcioacuten de casos con colesterol elevado entre
positivos y negativos Tampoco se encontraron diferencias estadiacutesticamente
significativas en la proporcioacuten de casos con valores de GOT y GPT elevados
En el grupo de casos positivos al test de ELISA el porcentual con valores elevados de
FAL es superior pero esta diferencia no es estadiacutesticamente significativa
Tabla 4 Resultados comparativos entre los valores de proteiacutenas totales y anaacutelisis de
ELISA positivos Valle de Fiambalaacute 2009-2011
Serologiacutea
Proteiacutenas
Normales
Nuacutemero de casos Negativo
77 Positivo
28 Total 105
Totales Resultado 566 326a 473
Elevados
Nuacutemero de casos
59
58
117
Resultado 434 674b 527
Total
Nuacutemero de casos
136
86
222
Resultado 1000 1000 1000
a y b presentan diferencias estadiacutesticamente significativas
(χ2 = 1223 Gl = 1 p= 0000)
72 - Geacutenero
Con respecto al geacutenero tanto dentro del grupo de casos seroloacutegicamente positivos como
dentro del grupo de negativos los mayores porcentuales corresponden a mujeres en
general (Tabla 5) El test Chi2 no arrojoacute asociacioacuten estadiacutesticamente significativa entre
geacutenero en relacioacuten a la enfermedad
Se realizoacute un Chi2 para la franja etaria y casos seropositivos y seronegativos que muestra
diferencias significativas Al ser un test no parameacutetrico no se pudo determinar entre que
grupos etarios estaacuten
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Tabla 5 Frecuencia absoluta de casos positivos y negativos al ensayo de ELISA
recombinante para Fasciola hepatica en pacientes agrupados por geacutenero en los
diferentes grupos etarios Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Grupo
Etario Ambos sexos
Hombres Mujeres
+ - + - + -
0-4
2
15
2
6
-
9
5-9 12 39 4 11 8 28
10-14 7 55 4 27 3 28
15-19 10 32 3 14 7 18
20-24 10 12 5 3 5 9
25-29 7 6 - 2 7 4
30-34 7 8 3 5 4 3
35-39 7 9 2 5 5 4
40-44 7 6 2 5 5 1
45-49 7 3 2 - 5 3
50-54 4 3 2 1 2 2
55-59 7 2 3 - 4 2
60-64 5 - 1 - 4 -
65-69 6 4 2 2 4 2
70-74 - 1 - - - 1
75-79 3 2 3 1 - 1
80 y + 4 3 2 - 2 3
TOTAL
105
200
40
82
65
118
(χ2 = 0316 Gl = 1 p˃= 005)
73 - Grupo etarios Considerando en conjunto ambos sexos el grupo etario de 5-9 antildeos fue el que presentoacute
el mayor valor de infeccioacuten (114) como se observa en la Tabla 6 Tambieacuten muestra que
el 305 de los casos positivos tienen 19 antildeos o menos
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Tabla 6 Frecuencia y porcentaje acumulado por grupo etario con el ensayo de ELISA
para Fasciola hepatica Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Grupo Etario Frecuencia Frecuencia Porcentaje
absoluta Relativa () Acumulado
0-4 2 19 19 5-9 12 114 133
10-14 7 67 200 15-19 11 105 305 20-24 10 95 400 25-29 7 67 467 30-34 7 67 533 35-39 7 67 600 40-44 7 67 667 45-49 7 67 733 50-54 4 38 771 55-59 7 67 835 60-64 5 48 886 65-69 5 48 933 75-79 3 29 962
80 o maacutes 4 38 1000
Total 105 1000
En siacutentesis considerando como variables independientes o explicativas en el modelo
edad sexo resultado de los exaacutemenes cliacutenicos y siacutentomas resultaron significativas
edad nivel de proteiacutenas totales y recuento de eosinofilos
Las diferencias en la proporcioacuten de casos con valores de enzimas elevados entre
positivos y negativos no resultaron estadiacutesticamente significativas GOT (χ2 = 0259 Gl =
1 p˃ 005) GPT (χ2 = 0181 Gl = 1 p˃ 005) y FAL (χ2 = 0577 Gl = 1 p˃ 005)
La proporcioacuten de casos con bilirrubina elevada presentaron ausencia de significacioacuten (χ2
= 0681 Gl = 1 p˃ 005) al igual que el colesterol elevado entre positivos y negativos (χ2
= 0100 Gl = 1 p˃ 005)
Se presenta la clasificacioacuten de los casos seguacuten su ocurrencia y seguacuten la prediccioacuten
realizada en funcioacuten del modelo nulo Se indica queacute porcentaje de veces el modelo
predice correctamente el grupo (positivonegativo) en el cual se encuentra la persona Se
muestra que el 694 de las veces la prediccioacuten del modelo es correcta es decir dada
una persona el modelo predice adecuadamente en queacute grupo va a estar
(Tabla 7)
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Tabla 7 Clasificacioacutena de los casos observados en el Valle de Fiambalaacute 2009-2011
Pronosticado Resultado
Porcentaje
Negativo Positivo correcto Paso Resultado Negativo 96 40 706
Positivo 28 58 674 Porcentaje
global 694
a El valor de corte para determinar el grupo es 0350
Se presentan los estimadores de los paraacutemetros (coeficientes B) sus errores estaacutendar el
estadiacutestico W de Wald (Chi2) sus grados de libertad y su probabilidad asociada las
estimaciones de las odds ratio (Exp B) para las variables predictoras y la constante para
cada modelo (Tabla 8)
Tabla 8 Variables de la ecuacioacuten Valle de Fiambalaacute 2009-2011
B
ET
Wald
gl
Sig
Exp(B)
Paso 1 Edad de extraccioacuten
0035
0008
19324
1
0000
1035
Proteiacutenas
0736
0312
5560
1
0018
2088
Eosinofilos
0945
0379
6224
1
0013
2572
Constante -1945 0305 40570 1 0000 0143
a Variable (s) introducida (s) en el paso 1 Edad Proteiacutenas totales Eosinoacutefilos
74 - Anaacutelisis estadiacutesticos
El odds asociado a la presencia de la enfermedad es el cociente entre la probabilidad de
que ocurra frente a la probabilidad de que no ocurra Odds = p (1-p) siendo p la
probabilidad del suceso
El odds de la edad asociado a la presencia de fasciolosis fue 1035
El odds de la presencia de valores elevados de proteiacutenas es 2088 e indica que las
chances de que un paciente presente la enfermedad se incrementan maacutes de dos veces si
los valores del examen son altos
El odds de la presencia de valores elevados de eosinofilos es de 2752 indicando que las
chances de que el paciente tenga presente la enfermedad aumentan casi tres veces si
existen valores del examen altos
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75 - Anaacutelisis coproparasitoloacutegicos
Con respecto a la materia fecal se identificoacute la presencia de huevos de F hepatica en las
heces de 4 personas siendo negativas las 92 muestras restantes obtenidas La teacutecnica
de sedimentacioacuten raacutepida de Lumbreras (TSR) fue la uacutenica que permitioacute los diagnoacutesticos
positivos
Las otras teacutecnicas coproparasitoloacutegicas utilizadas demostraron la existencia de huevos y
quistes de otros paraacutesitos presentes tanto en nintildeos como en adultos el maacutes frecuente fue
Blastocystis hominis (2934) y en menor proporcioacuten se observoacute la presencia de
Entamoeba coli (869) Giardia lamblia (760) Hymenolepis nana (760)
Microsporidios (543) Entamoeba nana (543) Iodamoeba buumltschlii (326)
Chilomastix mesnili (324) Enterobius vermicularis (217) Isospora belli (108)
Endolimax nana (108) y aacutecaros Se presentaron 8 casos de triparasitismo
76 - Siacutentomas y signos
Se presentan los siacutentomas principales observados tanto en los adultos (n=141) como en
los casos pediaacutetricos (n=33) Se evidencia que los siacutentomas maacutes frecuentes fueron dolor
abdominal (2553) naacuteuseas y voacutemitos (2411) diarrea (1702) fiebre (992)
hepatomegalia (851) ictericia (425) dispepsia (141) En pacientes pediaacutetricos los
maacutes frecuentes fueron voacutemitos (303) dolor abdominal (2424) y diarrea (2121)
El dolor abdominal (n=44) fue el siacutentoma maacutes frecuente en todos los grupos mostrados
anteriormente presentaacutendose sus caracteriacutesticas principales como localizacioacuten maacutes
frecuente en epigastrio (5454) y en hipocondrio derecho (4545) tipo de dolor (el
coacutelico representa el de mayor frecuencia en epigastrio (3636) e hipocondrio derecho
(2838) y otras como la relacioacuten con la ingesta de alimentos (2727) y el nuacutemero de
casos con diferente irradiacioacuten (maacutes frecuente a espalda en el 1590)
77 - Imaacutegenes
Las ecografiacuteas realizadas en terreno permitieron un diagnostico positivo ademaacutes se
observaron 10 hiacutegados y 32 vesiacuteculas normales 3 litiasis 18 pacientes con
hepatomegalia 1 absceso hepaacutetico una paciente embarazada y otra con litiasis renal
78 - Teacutecnicas invasivas
A raiacutez de los estudios realizados durante esta investigacioacuten fueron hallados al momento
de llevar a cabo intervenciones quiruacutergicas ejemplares vivos de F hepatica en dos
pacientes de sexo femenino La primera presentaba el coleacutedoco muy dilatado y de
paredes sumamente engrosadas sin evidencia de litiasis El segundo caso se refiere a la
coexistencia de litiasis y fasciolosis en el coleacutedoco del que se extrajeron estructuras
adultas del paraacutesito mediante una colecistectomiacutea que permitioacute la confirmacioacuten del
ensayo de ELISA realizado A una tercera paciente del valle de Fiambalaacute le fue extraiacutedo
un ejemplar por CPRE con cesta de Dormia
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79 - Descripcioacuten de casos con fasciolosis
Se seleccionoacute un grupo de ocho pacientes que reuniacutean los siguientes criterios de
inclusioacuten
a) Pacientes con coproparasitoloacutegico positivo a F hepatica
b) Pacientes con serologiacutea positiva para F hepatica
c) Pacientes con diagnoacutestico por imaacutegenes positivo
d) Pacientes que en la colecistectomiacutea presentaron ejemplares de F hepatica
Caso 1
Paciente de 64 antildeos sexo femenino soltera de ocupacioacuten ama de casa natural y
procedente de la zona que se presenta con ictericia fugaz dolor abdominal en
hipocondrio derecho de varias semanas de evolucioacuten diarrea y voacutemitos En el
interrogatorio refiere haber comido berro muchos antildeos atraacutes Los exaacutemenes de
laboratorio demostraron gloacutebulos rojos 4380000mm3 hemoglobina 1220 g
hematocrito 355 gloacutebulos blancos 6300mm3 con neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 62 eosinofilos 567mm3 (9) basoacutefilos 0 linfocitos 24
monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 plaquetas 456000mm3 GOT 35 UIL
(VN 12 a 40) GTP 20 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 572 UIL (VN hasta 280 UIL)
bilirrubina total 120 mg bilirrubina directa 039 mg bilirrubina Indirecta 081mg
proteiacutenas 72 gl colesterol 196 mg albuacutemina 41 gl No se realizoacute examen
coproparasitoloacutegico por falta de colaboracioacuten de la paciente El diagnoacutestico se efectuoacute por
medio del test de ELISA para anticuerpos contra F hepatica en el Departamento de
Parasitologiacutea INEI ANLIS Carlos G Malbraacuten en Buenos Aires La serologiacutea de ELISA
presentaba valores de absorbancia ˃0410 nM (valor de corte) (1) 0661 nM (2) 0457
nM (3) 0559 nM (4) 0529 nM absorbancia promedio 0529 nM con resultado positivo
en 2009 y valores de absorbancia (1) 0436 nM (2) 0495 nM absorbancia promedio
0466 nM con resultado positivo en 2010 Se solicitoacute ecografiacutea abdominal que mostroacute
estructura hepaacutetica conservada viacuteas biliares intrahepaacuteticas no dilatadas se informoacute leve
dilatacioacuten del coleacutedoco sin demostrar alteraciones el resto del estudio paacutencreas y bazo
normales Ante la persistencia de la sintomatologiacutea se indicoacute internacioacuten con diagnoacutestico
presuntivo de litiasis vesicular por el estudio que evidenciaba dilatacioacuten de viacuteas biliares
sin evidencia de caacutelculos La paciente fue intervenida quiruacutergicamente encontraacutendose en
viacuteas biliares especiacutemenes adultos de F hepatica (sin litiasis) Tiempo de internacioacuten 14
diacuteas No se efectuoacute tratamiento por no conseguir TCBZ
Caso 2
Mujer 16 antildeos estudios primarios completos sin ocupacioacuten con sintomatologiacutea desde
maacutes de un antildeo caracterizada por dolor abdominal tipo coacutelico naacuteuseas voacutemitos siacutendrome
febril y peacuterdida de peso Los exaacutemenes de laboratorio demostraron formula leucocitaria
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9100mm3 neutroacutefilos en cayado 2 neutroacutefilos segmentados 60 eosinofilos 364mm3
(4) basoacutefilos 0 linfocitos 30 monocitos 4 GOT 18 UIL GTP 21 UIL fosfatasa
alcalina 267 UIL bilirrubina total 096 mgdL bilirrubina directa 023 mgdL bilirrubina
indirecta 073 mgdL proteiacutenas 76 mgdL colesterol 267 mgdL albuacutemina 51mgdL Las
teacutecnicas coproloacutegicas demostraron la presencia de Blastocystis hominis larvas sin
identificar y estructuras compatibles con esporos y la prueba de TSR demostroacute la
presencia de huevos de F hepatica El estudio ecograacutefico fue normal La serologiacutea de
ELISA presentaba siguientes valores de absorbancia 0448 nM (1) 0391 nM (2) 0492
nM (3) 0413 nM (4) 0418 nM (5) 0573 nM (6) 0456 nM (7) absorbancia promedio
0529 nM con resultado positivo en 2009 y valores de absorbancia 0492nM (1) 0466nM
(2) absorbancia promedio 0484nM con resultado positivo en 2010 No se efectuoacute
tratamiento por no conseguir TCBZ
Caso 3
Nintildea de nueve antildeos de edad siacutendrome doloroso abdominal asociado a emesis Foacutermula
leucocitaria 7100mm3 neutroacutefilos en cayado 1 neutroacutefilos segmentados 64
eosinofilos 284mm3 (4) basoacutefilos 0 linfocitos 26 monocitos 4 ceacutelulas de
irritacioacuten linfaacutetica 1 GOT 39 UIL GTP 47 UIL fosfatasa alcalina 330 UIL bilirrubina
total 125 mgdL bilirrubina directa 015 mgdL bilirrubina indirecta 110 mgdL proteiacutenas
totales 72 mgdL colesterol 181 mgdL albuacutemina 47 mgdL Con Telemann se
evidencian huevos de Blastocystis hominis y con la prueba de TSR escasos huevos de
F hepatica El ensayo de Elisa resultoacute en 2010 0596 nM (1) 0441 nM (2) 0359 nM (3)
0402 nM (4) 0420 nM (5) con valores promedios positivos de 0444 nM No se efectuoacute
tratamiento por no conseguirse TCBZ
Figura 8 Imagen microscoacutepica de un huevo de Fasciola hepatica obtenido con la teacutecnica
de Lumbreras en la materia fecal de una paciente de 3 antildeos del valle de Fiambalaacute
Catamarca
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Caso 4
Paciente mujer de 22 antildeos de edad natural y procedente del aacuterea serrana quien acude a
emergencia del Hospital San Juan Bautista San Fernando del Valle de Catamarca
Catamarca con un tiempo de enfermedad de 25 diacuteas caracterizado por cefalea dolor
abdominal agudo voacutemitos y urticaria Refiere que antes de su ingreso inicia un cuadro de
dolor abdominal tipo coacutelico de intensidad moderada desencadenado por la ingesta de
grasas el cual se acompantildea de hiporexia y voacutemitos de contenido alimentario en varias
oportunidades y bilioso en dos oportunidades Acude a la primer consulta en una cliacutenica
privada de la capital provincial presentando coacutelicos biliares recurrentes y fiebre
intermitente Durante el examen fiacutesico se detectoacute hepatomegalia Su vesiacutecula biliar
estaba ausente por colecistectomiacutea practicada a los 15 antildeos aunque presentaba
episodios de coacutelicos biliares por litiasis residual En los frotis y hepatogramas se
observaron 24000 leucocitosmm3 con neutroacutefilos segmentados 71 eosinofilos
2640mm3 (11) linfocitos 13 monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 1 GTP 100
UIL (IR hasta 40 UIL) TGO 64 UIL (IR hasta 42 UIL) fosfatasa alcalina 265 UIL (IR
100-400 UIL) bilirrubina total 092 mgdL bilirrubina directa 017 mgdL bilirrubina
indirecta 075 mgdL proteiacutenas 7 mgdL colesterol 166 mgdL albuacutemina 44 mgdL Las
muestras de materia fecal para realizar los exaacutemenes parasitoloacutegicos resultaron
Telemann positivo a E nana Willis Kato y la prueba de TSR negativas para F hepatica
todas realizadas en 3 oportunidades El ensayo de ELISA para anticuerpos efectuado en
el Departamento de Parasitologiacutea INEI ANLIS Carlos G Malbraacuten en Buenos Aires dio
resultado negativo en dos oportunidades
Por persistencia de la sintomatologiacutea se presentoacute en el Hospital San Juan Bautista Al
examen fiacutesico se encontroacute una paciente en mal estado general en regular estado de
nutricioacuten deshidratada con ictericia moderada de piel El examen del abdomen mostroacute
distensioacuten leve y palpacioacuten hepaacutetica dolorosa e irradiacioacuten a la zona lumbar Resto del
examen fiacutesico sin alteraciones
Los exaacutemenes hematoloacutegicos del ingreso mostraron hemoglobina 10 mgdL hematocrito
31 leucocitos 11000mm3 con desviacioacuten izquierda (11 de abastonados) y eosinofilos
770mm3 (7) Presentoacute elevacioacuten de bilirrubina total en 427 mgdL a predominio directo
(278) fosfatasa alcalina 595 UIL (VN 65-306) y elevacioacuten moderada de enzimas
hepaacuteticas TGO 267 UIL y TGP 482 UIL El tiempo de protrombina estuvo prolongado al
doble del control 266rdquo136rdquo (valor referidovalor control) (INR=226) al igual que el tiempo
de tromboplastina 336rdquo276rdquo Los resultados de glucosa creatinina electrolitos seacutericos
proteiacutenas totales albuacutemina globulinas y amilasa fueron normales
Se realizoacute colangiopancreatografiacutea retroacutegrada endoscoacutepica (CPRE) observando viacuteas
biliares extrahepaacuteticas dilatadas con imaacutegenes filiformes en coleacutedoco distal Se procedioacute
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a efectuar una papilotomiacutea retroacutegrada endoscoacutepica con barrido instrumental en canastilla
de Dormia extrayendo 3 paraacutesitos adultos vivos de F hepatica No se efectuoacute
tratamiento por no conseguir TCBZ
Figura 9 Ejemplar de F hepatica extraiacutedo del coleacutedoco utilizando CRTE en una
paciente de 22 antildeos en el Hospital San Juan Bautista Catamarca 2012
Caso 5
Paciente pediaacutetrico de ocho antildeos de edad sexo masculino Alumno de escuela primaria
Sin presencia de siacutentomas Foacutermula leucocitaria 4900 mm3 neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 64 eosinofilos 196mm3 (4) basoacutefilos 0 linfocitos 26
monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 1 GTP 47 UIL (IR hasta 40 UIL) TGO 39
UIL (IR hasta 42 UIL) fosfatasa alcalina 330 UIL (IR 100-400 UIL) bilirrubina total 125
mgdL bilirrubina directa 015 mgdL bilirrubina indirecta 110 mgdL proteiacutenas 72
mgdL colesterol 181 mgdL albuacutemina 47 mgdL La serologiacutea de ELISA presentaba
valores de absorbancia ˃410 nM (1) 0495 nM (2) 0447 nM (3) 0551 nM (4) 0627 nM
(5) 0383 nM (6) 0421 nM Absorbancia promedio 0487 nM con resultado positivo en
2010 La materia fecal examinada con la prueba de TSR confirmoacute la presencia de 14
huevos de F hepatica Sin tratamiento
Caso 6
Paciente mujer de 58 antildeos de edad casada de procedencia rural de profesioacuten
enfermera Dispepsia desde la nintildeez Consumiacutea berro cosechado a orillas del rio del lugar
y tambieacuten bebiacutea del agua del rio Prurito aleacutergico a repeticioacuten (tratado por dermatoacutelogo
quien antildeos atraacutes habiacutea diagnosticado Parasitosis Intestinal)
Por sus molestias de dolor abdominal en hipocondrio derecho tipo coacutelico acompantildeado de
naacuteuseas se automedicaba con antiespasmoacutedicos Meses antes de su consulta se
despertoacute de madrugada presentando voacutemitos de contenido alimentario y bilioso
concomitantemente tuvo escalofriacuteos y fiebre que cedieron momentaacuteneamente con
paracetamol Horas maacutes tarde persisten los siacutentomas y se adicionan ictericia hiporexia
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coluria prurito y paacutepulas que se presentaron primero en el cuero cabelludo y luego se
generalizaron a tronco y extremidades Fue atendida por 3 facultativos los cuales
indicaron varios exaacutemenes auxiliares una ecografiacutea que reportoacute la presencia de una
colecistopatiacutea no calculosa y un examen de orina que mostroacute leucocituria y geacutermenes
gramnegativos abundantes por lo que le prescribieron norfloxacina ademaacutes de ranitidina
y clorfeniramina Con este tratamiento se evidencioacute disminucioacuten de la intensidad del
prurito y desaparicioacuten de las paacutepulas la fiebre cedioacute aproximadamente a los 7 diacuteas la
condralgia disminuyoacute de intensidad pero persistiacutea al igual que el resto de los siacutentomas
por cuya razoacuten y relaciones familiares acudioacute a la emergencia del Hospital Regional de La
Rioja ldquoEnrique Vera Barrosrdquo presentaacutendose a consulta en octubre de 2012 con
sintomatologiacutea digestiva similar a la que padeciacutea previamente (epigastralgiacutea distensioacuten
abdominal posprandial coluria marcada y acolia)
Los hallazgos maacutes importantes del examen fiacutesico fueron fiebre precedida de escalofriacuteos
ictericia dolor a la palpacioacuten del hipocondrio derecho y puntildeopercusioacuten lumbar positiva
bilateral
Se realizaron exaacutemenes de laboratorio cuyos resultados fueron hemograma 11800mm3
gloacutebulos blancos 6300mm3 neutroacutefilos en cayado 2 neutroacutefilos segmentados 55
eosinofilos 708mm3 (6) basoacutefilos 0 linfocitos 34 monocitos 3 ceacutelulas de
irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT 17 UIL (VN 12 a 40) GTP 24 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa
alcalina 386 UIL (VN hasta 280 UIL) bilirrubina total 125 mgdL bilirrubina directa 099
mgdL bilirrubina indirecta 026 mgdL proteiacutenas totales 61 mgdL colesterol 226 mgdL
albuacutemina 33 mgdL
Una ecografiacutea de las viacuteas biliares sugirioacute la existencia de un caacutelculo enclavado en el
tercio distal del coleacutedoco Se plantearon las siguientes posibilidades diagnoacutesticas
infeccioacuten del tracto urinario y litiasis coledociana complicada con colangitis Recibioacute
gentamicina 80 mg Ev tid clindamicina 600 mg EV tid
La serologiacutea de ELISA presentoacute valores de absorbancia (1) 0596 nM (2) 0586 nM (3)
0404 nM (4) 0425 nM absorbancia promedio 0503 nM con resultado positivo en 2010 y
valores de absorbancia (1) 0338 nM (2) 0541 nM (3) 0440 nM absorbancia promedio
0441 nM en 2011 El estudio parasitoloacutegico seriado con la prueba de TSR no reportoacute la
presencia de huevos de F hepatica
Despueacutes de hospitalizada fue intervenida quiruacutergicamente con el diagnoacutestico
preoperatorio de coledocolitiasis Se realizoacute una colecistectomiacutea mixta exploracioacuten de
viacuteas biliares con litiasis residual y se dejoacute drenaje de Kehr Los hallazgos histopatoloacutegicos
macroscoacutepicos de la vesiacutecula biliar mostraron una pared edematosa congestiva
conservando espesor y elasticidad mucosa presentando aspecto atroacutefico con superficie
reticulada color verde paacutelida revestida por exudado fibrinoide espeso Se constata la
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presencia de una estructura lanceolada plana elaacutestica de superficie lisa que mide 13 x
1 cm con pequentildea ventosa en uno de sus polos Microscoacutepicamente se observa la pared
de vesiacutecula biliar con grados variables de reaccioacuten inflamatoria croacutenica representados por
focos de supuracioacuten y acuacutemulos de plasmocitos linfocitos y eosinofilos en la mucosa
discreta proliferacioacuten fibrinosa acompantildeada por infiltracioacuten de ceacutelulas polimorfonucleares
Diagnoacutestico histopatoloacutegico Fascioliasis hepaacutetica Colecistitis croacutenica supurada
(habilitada por paraacutesitos en su luz) Durante los 45 diacuteas posteriores al alta fue medicada
con Praziquantel
Caso 7
Mujer de 54 antildeos de edad que a la consulta refiere haber tenido episodios febriles de
375 a 38 degC anorexia y dolor en hipocondrio derecho de pocos diacuteas de evolucioacuten
Voacutemitos y hepatalgia Los exaacutemenes de laboratorio maacutes significativos mostraron gloacutebulos
rojos 4410000mm3 hemoglobina 1230 g hematocrito 43 Foacutermula leucocitaria
6700 mm3 neutroacutefilos en cayado 1 neutroacutefilos segmentados 52 eosinofilos 469mm3
(7) basoacutefilos 0 linfocitos 37 monocitos 3 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT
20 UIL (VN 12 a 40) GTP 17 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 252 UIL (VN hasta 280
UL) bilirrubina total 141mgdL bilirrubina directa 025mgdL bilirrubina indirecta 116
mgdL proteiacutenas 81 mgdL colesterol 262 mgdL albuacutemina 47 mgdL
Reiterados exaacutemenes parasitoloacutegicos de materia fecal en fresco y seriados fueron
negativos La serologiacutea para F hepatica con el ensayo de ELISA resultoacute positiva en el
antildeo 2010 con los siguientes valores 0539 nM (1) 0377 nM (2) 0427 nM (3) 0334 nM
(4) 0432 nM (5) 0594 nM (6) y un resultado promedio 0451 nM
Fue seleccionada para practicarle una ecografiacutea abdominal que mostroacute una estructura
hepaacutetica conservada viacuteas biliares intrahepaacuteticas no dilatadas vesiacutecula ausente por
colecistectomiacutea y leve dilatacioacuten del coleacutedoco sin demostrar alteraciones el resto del
estudio paacutencreas y bazo normales Se observoacute pequentildea imagen de aspecto filiforme de
aproximadamente 1 cm de largo y se diagnosticoacute estructura compatible con F hepatica
Figura 10 Imagen ecograacutefica hepaacutetica con hepatomegalia Se observa aumento de la
ecogenicidad y una estructura de aspecto filiforme
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Caso 8
Sexo femenino 32 antildeos de edad ama de casa En el interrogatorio comenta haber
comido berro de los riachos en la zona casi todos los antildeos Al ser un caso con tres
estudios seroloacutegicos previos positivos y materia fecal negativa a la presencia de huevos
de F hepatica se le practica una ecografiacutea abdominal con resultado negativo
El coproloacutegico con la teacutecnica de Telemann demostroacute la presencia de Blastocystis hominis
y luego de varias repeticiones la teacutecnica de Lumbreras permitioacute el hallazgo de huevos de
F hepatica en el antildeo 2011 Los frotis y hemogramas presentaron los siguientes
resultados hematocrito 44 foacutermula leucocitaria 7700mm3 neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 47 eosinofilos 385mm3 (5) basoacutefilos 0 linfocitos 40
monocitos 7 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT 23 UIL (VN 12 a 40) GTP 11 UIL
(VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 290 UIL (VN hasta 280 UIL) bilirrubina total 106 mgdL
bilirrubina directa 038 mgdL bilirrubina indirecta 01 mgdL proteiacutenas totales 71 mgdL
colesterol 163 mgdL albuacutemina 42 mgdL
El empleo de procatepsina L1 durante tres antildeos consecutivos arrojoacute para la serologiacutea de
ELISA los siguientes resultados valores de absorbancia (1) 0476 nM (2) 0366 nM (3)
0551 nM (4) 0431 nM absorbancia promedio 0456 nM con resultado positivo en 2009
Valores de absorbancia (1) 0517 nM (2) 0580 nM (3) 0405 nM (4) 0457 nM (5) 0462
nM absorbancia promedio 0484 nM con resultado positivo en 2010 y (1) 0623 nM (2)
0570 nM absorbancia promedio 0597 nM con resultado positivo en 2011
8 RESULTADOS EN ANIMALES
81 - Estudios coproloacutegicos
811 - Prevalencia por exaacutemenes coproloacutegicos
La cantidad de muestras de materia fecal de distintas especies animales analizadas
permitioacute conocer que la prevalencia promedio de fasciolosis animal es 2674
(2881077) (Tabla 9)
Tabla 9 Prevalencia de F hepatica en diferentes especies de animales domeacutesticos Valle
de Fiambalaacute Catamarca Antildeos 2009-2011
Especie Positivos Total de animales Prevalencia Ovinos 114 322 3958 Asnos 56 192 1954 Llamas 53 210 1840 Caprinos 38 197 1319 Bovinos 18 72 625 Equinos 6 46 208 Porcinos 3 38 104
TOTAL 288 1077 10000 (χ2 = 21643 gl = 6 significancialt= 0000)
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Las diferencias estadiacutesticamente significativas se presentan entre ovinos-llamas
(p=0016741) ovinos-caprinos (p=0000099) ovinos-equinos (p=0002185) ovinos-
porcinos (p=0000782) asnos-equinos (p=0038298) y asnos-caprinos (p=0024745)
812 - Hallazgos de huevos de otros paraacutesitos gastrointestinales
Los resultados obtenidos indican ademaacutes la presencia en el ganado ovino del valle de
Fiambalaacute de coccidios y nematodes gastrointestinales Eimeria sp Haemonchus
contortus Trichostrongylus sp Nematodirus sp y Trichuris ovis
82 - Recuperacioacuten de ejemplares de F hepatica
De los hiacutegados de animales inspeccionados durante el proceso de faena (n=11) se
recuperaron en total 398 trematodos adultos Todos los paraacutesitos colectados se
encontraban sobre los 100 diacuteas post-infeccioacuten El nuacutemero de paraacutesitos recobrados en las
diferentes especies fueron 206 en ovinos 128 en cameacutelidos y 64 en bovinos
Al revisar los hiacutegados que presentaban fasciolosis croacutenica se observoacute una reaccioacuten
orgaacutenica con lesiones visibles de fibrosis hepaacutetica como consecuencia de la fase
migratoria y colangitis hiperplaacutesica por la presencia de los vermes adultos en los
conductos biliares (Veacutease anexo Figura 23 pp188) Tambieacuten se encontraron
agrandados los noacutedulos linfaacuteticos engrosamiento de los conductos y la superficie
presentaba consistencia dura al tacto en gran parte del oacutergano y sus bordes En el hiacutegado
del ejemplar bovino se observoacute una reaccioacuten orgaacutenica que produjo una intensa reaccioacuten
tisular mucho maacutes manifiesta que en los ovinos llamas y caprinos
La erosioacuten de la mucosa ocasionada por la actividad de los ejemplares adultos de F
hepatica en los conductos biliares provocoacute una reaccioacuten inflamatoria organizada en una
fibrosis peribiliar (Veacutease anexo Figura 24 pp188) El movimiento de los vermes extendioacute
la fibrosis a casi todo el aacuterbol biliar La colangitis hiperplaacutesica se presentoacute como resultado
del traumatismo originado por los trematodos adultos en la mucosa de los conductos
biliares Ante la extensa erosioacuten y necrosis de la mucosa biliar se desarrolloacute una intensa
reaccioacuten inflamatoria que interesoacute a la laacutemina propia adyacente La compresioacuten
extriacutenseca del canal biliar principal por las venas colaterales dilatadas junto con la
fibrosis pericoledocal causada por el proceso inflamatorio provocoacute trombosis portal
conduciendo a la dilatacioacuten de los conductos biliares intrahepaacuteticos hecho que permitioacute
observar en 3 ocasiones la formacioacuten de piedras biliares secundarias y en 2 la presencia
de liacutequido en el peritoneo de las ovejas
83 - Morfologiacutea microscoacutepica de F hepatica
Las mediciones realizadas dieron los siguiente datos promedios longitud del cuerpo
2438 plusmn 223 (mm) ancho del cuerpo 1044 plusmn 129 (mm) razoacuten LCAC 237 plusmn 034
longitud del cono 261 plusmn 030 ancho del cono 343 plusmn 046 (mm) aacuterea de la ventosa oral
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041 plusmn 007 (mm) aacuterea de la ventosa ventral 110 plusmn 036 (mm) aacuterea de distancia VO-VV
214 plusmn 022 (mm) Todas presentaban un cuerpo con forma de hoja aplanado de dorsal a
ventral con el cono cefaacutelico (Figura 11) muy visible situado en la parte anterior del cuerpo
del paraacutesito Datos comparativos se presentan en la Tabla 12 (Veacutease anexo pp 173)
A B
Figura 11 A y B Imaacutegenes microscoacutepicas de la estructura morfoloacutegica del cono cefaacutelico
de Fasciola hepatica obtenidas de un animal bovino faenado en el Valle de Fiambalaacute
Nota A Cono cefaacutelico VO ventosa oral I ciego intestinal F faringe VV cara ventral Detalle del
cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) aumento 4x B ventosa oral (297x)
Ademaacutes de estas caracteriacutesticas la ventosa oral redondeada se observoacute en el veacutertice del
cono seguido por la faringe muscular el estoacutemago y el esoacutefago bifurcado en dos ciegos
intestinales entre los que surgen las ramas secundarias el ciego intestinal se presenta
extendido hasta el extremo anterior del cuerpo (Figura 12 A) La ventosa ventral se
encuentra en la regioacuten media del cuerpo cerca de los aparatos reproductores y su
tamantildeo era maacutes grande que la ventosa oral En la Figura 12 B se observan niacutetidamente
las espinas ubicadas en el cono cefaacutelico
A B
Figura 12 A y 12 B Estructuras morfoloacutegicas de Fasciola hepatica halladas en un animal
bovino del Valle de Fiambalaacute Argentina observadas al microscopio
Nota (A) Cono cefaacutelico VO ventosa oral F faringe C cirro VV cara ventral I ciego intestinal
se extiende en la parte anterior y terminal del cuerpo Aumento 4x (B) Detalle del cono cefaacutelico
mostrando las espinas magnitud 120x
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En las muestras analizadas el sistema reproductor femenino estaba formado por un
ovario ramificado oviducto y el uacutetero lleno de huevos (Figuras 13 A B C) Las glaacutendulas
vitelinas muy ramificadas se ubicaban en posicioacuten lateral del cuerpo y extendidas desde
la regioacuten de la ventosa ventral al extremo posterior del cuerpo La glaacutendula de Mehlis que
se encuentra cerca del ovario en la parte media del cuerpo fue faacutecilmente observable El
sistema reproductor masculino presenta los testiacuteculos ramificados situados uno debajo
del otro sin llegar a la regioacuten posterior o a los lados del cuerpo teniendo las glaacutendulas
vitelinas como liacutemites Se observoacute cerca de la ventosa ventral la bolsa del cirro bien
formada (Figura 14 B)
A B C
Figura 13 A B y C Uacutetero con huevos de un espeacutecimen de Fasciola hepatica obtenido de
la necropsia de un animal bovino en el Valle de Fiambalaacute Aumento 10x
Nota (A) Ovario ramificado y oviducto (B) uacutetero lleno de huevos (C) Uacutetero lleno de huevos
(flechas)
Todos los ejemplares presentaron el tegumento cubierto de espinas (Figuras 14 A)
dirigidas hacia la parte posterior del cuerpo y se pueden comparar con las de otras
regioacutenes observadas (Veacutease anexo Figuras 25 26 27 y 28 pp189-190)
A B
Figura 14 Detalle del tegumento de una Fasciola hepatica mostrando las espinas
Nota (A) Las flechas indican las espinas aumento 10x (B) bolsa de cirro aumento 20x
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831 - Microscopiacutea de contraste por interferencia diferencial
Esta teacutecnica permitioacute visualizar las espinas en el tegumento de los todos especiacutemenes
recolectados (Figuras 15 A B y C) Los ejemplares del Valle de Fiambalaacute presentaban el
cuerpo cubierto con espinas pero en menos nuacutemero que los otros ejemplares
observados
A B C
Figura 15 Microfotografiacuteas tomadas de estructuras morfoloacutegicas de una F hepatica de
ganado bovino del valle de Fiambalaacute observadas con microscopio de contraste por
interferencia diferencial
Nota A y B Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) aumentos 10x y 20x
C Espinas con mayor resolucioacuten Noacutetese el aspecto tridimensional
84 - Variabilidad geneacutetica intraespeciacutefica
El anaacutelisis de 16 secuencias del gen CO1 de 309 bases de longitud cada una totalizando
4944 bases mostroacute una topografiacutea de agrupamiento que indica que la secuencia
proveniente de la muestra de paraacutesito adulto de la zona denominada FhCO1-CAT-adult
corresponde al grupo FhAJ6280346 FhJF82467124 FhAJ628035 FhGQ231551
Fh628039 (Veacutease anexo Figura 29 pp 191) Este resultado se encuentra en
concordancia con el hecho de que la identidad de las secuencias proveniente del adulto
de F hepatica posee una identidad alta con dichos haplotipos (994 a 990 de identidad
nucleotiacutedica)
85 - Resistencia al triclabendazol
Se observa que las muestras expusieron patrones diferentes de amplificacioacuten al azar de
ADN polimoacuterfico por lo que fue posible evaluar la presencia de variaciones geneacuteticas
entre las cepas de una misma especie y distinguir entre cepas de trematodos TCBZ-
susceptibles calle 2 (cepa Cullompton) y TCBZ-resistentes calle 3 (cepa Sligo) (Figura
16) donde no se detectaron estos cambios geneacuteticos en la moleacutecula de tubulina
revelando una significativa divergencia geneacutetica entre especies demostrado por las
diferencias entre las bandas generadas por las especies de la poblacioacuten de Cajamarca
Peruacute Chubut Argentina y las procedentes de la Puerta de Tatoacuten en el valle de Fiambalaacute
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1 2 3 4 5 6 7 8
Figura 16 Patrones de amplificacioacuten por RAPD PCR de Fasciola hepatica aisladas de
hiacutegados obtenidos para la deteccioacuten de cepas resistentes a Triclabendazol (TCBZ)
comparados con las de otras zonas
Nota Obseacutervese que el patroacuten de bandeo en la calle 2 (cepa Cullompton sensible) y en la calle 3
(cepa Sligo resistente) son diferentes Desde la calle 4 en adelante son ejemplares procedentes
de Cajamarca Peruacute (4) Quebrada Grande (5) Casa Grande (7) y provincia de Chubut (8) La
mayoriacutea corre igual a las sensibles (2) pero la muestra de La Puerta (6) corre como la cepa
resistente (3)
9 RESULTADOS EN EL HOSPEDADOR INTERMEDIARIO DE F hepatica
91 Identificacioacuten de los caracoles
Las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla de los ejemplares recolectados en las
diferentes oportunidades coinciden con las descripciones de las familias Lymnaeidae
(n=2354 8686) Physidae (n=240 885) Chilinidae (n=81 298) y Planorbidae
(n=35 129) Los resultados moleculares revelaron la presencia de dos especies de
limneidos L neotropica y L viator De las muestras analizadas 26 (6842) fueron
identificadas molecularmente como L neotropica y 12 (3158) como L viator Se
comproboacute que ambas especies comparten las mismas vegas siendo el primer registro
para el NOA de L neotropica
92 Medicioacuten de moluscos
La coexistencia de las dos especies L neotropica y L viator en las vegas del valle de
Fiambalaacute proporcionoacute la posibilidad de un estudio de morfometriacutea comparativo para
evaluar si estas especies de vectores se pueden diferenciar anatoacutemicamente (Tabla 10)
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Tabla 10 Comparacioacuten de las mediciones de conchillas de limneidos entre las
poblaciones naturales de L viator y L neotropica colectadas en el valle de Fiambalaacute
2009-2011
Especie de limneido L viator L neotropica
Lugar y nuacutemero de especiacutemenes estudiados
Valle de Fiambalaacute (n = 12) Valle de Fiambalaacute (n = 26)
Valores extremos
miacutenimo y
Media (plusmn
desviacuteo estaacutendar SD)
Valores extremos
miacutenimo y
Media (plusmn
desviacuteo estaacutendar SD)
Caracteriacutestica de la conchilla maacuteximo maacuteximo
Largo (SL) 562-1085 921 (plusmn 152) 552-918 749 (plusmn 089) Ancho maacuteximo (SW) 311-579 488 (plusmn 084) 313-501 410 (plusmn 047) Largo de la apertura (AL) 297-605 473 (plusmn 083) 314-664 385 (plusmn 040) Ancho de la apertura (AW) 190-331 273(plusmn 042) 188-274 228 (plusmn 023) Longitud de la uacuteltima espira (LSL) 452-831 699 (plusmn 106) 442-893 576 (plusmn 060) Aacutengulo de la espira (SSA) 4130deg-5491deg 4704deg (plusmn 435) 3302deg-5468deg 4509deg (plusmn 592) SLSW ratio 167-202 189 (plusmn 010) 169-198 183 (plusmn 008) SLAL ratio 178-211 195 (plusmn 010) 175-210 194 (plusmn 010) SLLSL ratio 124-137 131 (plusmn 004) 123-138 130 (plusmn 004)
Nota Se incluye el rango con los extremos miacutenimo y maacuteximo y la media (plusmn desviacioacuten estaacutendar
entre pareacutentesis) Las mediciones se presentan en miliacutemetros (excepto el aacutengulo del espiral que es
en grados) n = Nuacutemero de especiacutemenes medidos
La conchilla de ambas especies es de color marroacuten a marroacuten claro coacutenica alargada de
paredes delgadas por lo general con 4 verticilos regulares convexos y hasta 55 verticilos
en los especiacutemenes maacutes largos La aguja es maacutes o menos acentuada o corta con un
aacutepice maacutes obtuso Las liacuteneas de crecimiento y el ombligo son poco pronunciadas La
escultura espiral es muy deacutebil y no se ve faacutecilmente La abertura es oval y casi toda
circular con peristoma delgado La forma de la conchilla de L viator y L neotropica es
muy similar tanto como el nuacutemero de espiras aunque los ejemplares de L viator a veces
pueden aparecer algo maacutes delgados (Figura 17)
La comparacioacuten de las mediciones de la conchilla y ratios (Tabla 10) muestra que la
relacioacuten del ancho y la maacutexima longitud de la conchilla se superpone en las dos especies
y por lo tanto la variabilidad de este paraacutemetro no se pudo utilizar para la diferenciacioacuten
de estas especies Un problema similar aparece en todos los demaacutes paraacutemetros de la
conchilla con excepcioacuten de la longitud media que no soacutelo alcanza un mayor largo
maacuteximo evidente sino tambieacuten una longitud maacutes grande de la conchilla en L viator en
comparacioacuten con L neotropica (1085 y 921 vs 918 y 749 mm)
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C D
Figura 17 Conchillas de L viator A) vista ventral B) vista dorsal escala 5 mm y
conchillas de L neotropica C) vista ventral D) vista dorsal escala 4 mm Especiacutemenes
colectados en vegas del valle de Fiambalaacute 2011
93 - Mantenimiento en el laboratorio
Se observoacute que los moluscos respondieron favorablemente a la alimentacioacuten con lechuga
y al cambio cada tres diacuteas del agua donde se encontraban lograacutendose el mantenimiento
de 180 caracoles del geacutenero Lymnaea criados en el laboratorio de los que se obtuvo el
desarrollo de 60 ejemplares que realizaron la puesta de masas de ovisaco dando lugar a
la eclosioacuten de 250 limneidos vivos
931 - Identificacioacuten de gasteroacutepodos infectados
Mediante el aplastamiento de los cuerpos de moluscos entre dos portaobjetos y la
posterior observacioacuten microscoacutepica de las formas intermedias de F hepatica se logroacute la
identificacioacuten de moluscos infectados 286 (13453) en su haacutebitat natural
9311 - Infeccioacuten del hospedador intermediario
La infeccioacuten plumiracidial de los caracoles en el laboratorio permitioacute observar la presencia
de los distintos estadios larvarios De los 70 limneidos infectados se sacrificaron 14
ejemplares obteniendo formas de esporocistos en 2 moluscos redias en otros 2 y
cercariacuteas en 2 ejemplares maacutes obteniendo una eclosioacuten de larvas del 4285 (614) Se
logroacute la visualizacioacuten de la emisioacuten de metacercarias de los moluscos mantenidos vivos
en las hojas de la vegetacioacuten con la que se alimentaban y en las paredes de los
recipientes donde se los dispuso
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932 - Identificacioacuten molecular de la infeccioacuten
9321 - PCR de Infeccioacuten
De las muestras obtenidas en la vega de Tatoacuten (n=120) y analizadas para verificar su
infeccioacuten con F hepatica en el Instituto Malbraacuten se diagnosticaron 3 moluscos
infectados (25) mostrando amplificacioacuten en el gel de electroforesis (Figura 18)
Figura 18 Liacutemite de deteccioacuten del ensayo de PCR por electroforesis en gel de agarosa
de los productos de amplificacioacuten utilizado como plantilla de ADN para la deteccioacuten de F
hepatica en muestras de limneidos del Valle de Fiambalaacute
Nota Calle M marcador de tamantildeo molecular (100 escalera pb) calles 1 25 ng de ADN de F
hepatica calle 2 mezcla de reaccioacuten calles 3-12 plantilla de ADN a partir de 10 especiacutemenes de
muestra de 1 evidenciando en la calle 3 amplificacioacuten calles 13-19 ejemplares de muestra 2 de la
mezcla de reaccioacuten
94 - Caracterizacioacuten molecular de limneidos
Los ADNr nucleares ITS-2 y ITS-1 el ADNmt 16S y los datos de la secuencia de
nucleoacutetidos cox1 reportados en esta tesis estaacuten disponibles en las bases de datos
GenBanktrade EMBL y DDBJ bajo los nuacutemeros de acceso indicados en la Tabla 13 (Veacutease
anexo pp 174)
941 - L neotropica
9411 - Marcadores moleculares
- ADNr ITS-2 Todas las muestras del valle de Fiambalaacute presentan la misma secuencia
con una longitud de 417 pb y 5683 de contenido de GC Cuando se compara con las
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ITS-2 de L neotropica haplotipo Lneo-H1 (AM412225) de la localidad tipo en el Peruacute no
se pudo encontrar diferencia en un nucleoacutetido El haplotipo Lneo-H2 de Venezuela
(JF514089) difiere de la secuencia de Argentina en la falta de una repeticioacuten de
microsateacutelites (AT) en las posiciones 402 a 403 y en una mutacioacuten en la posicioacuten 350 de
la secuencia de alineacioacuten de ambos haplotipos ITS-2 Otras cepas argentinas de L
neotropica disponibles en las bases de datos (KJ425597 = 415 pb KJ425598 = 415 pb
KJ425596 = 414 pb) soacutelo muestran algunas diferencias (deleciones) en el extremo 3 de
los ITS-2 aunque estas secuencias parecen incompletas en comparacioacuten con los
haplotipos completos descritos anteriormente para esta especie y por lo tanto deberaacute ser
revisada
- ADNr ITS-1 Un nuevo haplotipo para L neotropica se ha detectado en las vegas del
valle de Fiambalaacute Todas las muestras estudiadas presentaron los mismos ITS-1 con
secuencia de 535 pb y un contenido de GC 5645 Este nuevo haplotipo estaacute descrito
aquiacute como Lneo-HB Diferencias con el haplotipo Lneo-HA estaacuten a soacutelo dos inserciones
en la regioacuten poli-A en el extremo 3 (posiciones 512-529) siendo esta regioacuten de 16 o 18
consecutivo A en Lneo-HA y Lneo-HB respectivamente Los resultados BLASTN
muestran homologiacuteas del 98 con otras secuencias de L neotropica obtenidas en
Argentina (KJ425594 = 528 pb KJ425590 = 528 pb KJ425591 = 527 pb KJ425595 =
525 pb KJ425593 = 523 pb) y curiosamente con una de L viator (JF960165 = 533 pb)
las diferencias (indeles) aparecen de nuevo en el extremo 3 del espaciador ITS-1 Estas
otras secuencias parecen ser incompletas en comparacioacuten con los haplotipos completos
descritos anteriormente para esta especie y por lo tanto deberaacute ser revisada
9412 - Marcadores mitocondriales
- ADNmt 16S Soacutelo se detectoacute un haplotipo en las muestras estudiadas de las
poblaciones identificadas como L neotropica Esta secuencia parcial fue 435 pb de
longitud presenta un sesgo AT contenido de 6965 y resultoacute ser ideacutentica a la ya
encontrada en esta especie de limneido Lneo-16SA y que tambieacuten se informoacute en el
aacuterea endeacutemica de fasciolosis humana de Cajamarca Peruacute (HE610433) Con una
secuencia de 439 pb de largo de alineacioacuten de este haplotipo (Lneo-16SA) con otra L
neotropica aislada (de 429 a 431 pb) disponibles en GenBank aparecen 12 posiciones
variables la mayoriacutea de ellas se generan por el NtS1 aislado de Argentina (JN872471)
cuyas mutaciones (la mayoriacutea de ellos siempre A) deberaacute ser revisada (Veacutease anexo
Tabla 14 pp 175)
- ADNmt cox1 Todos los especiacutemenes colectados identificados como L neotropica
mostraron ideacutentica secuencia del fragmento de 672 pb cox1 y sesgada AT contenido de
6979 Esta secuencia se comparoacute con los 4 haplotipos cox1 descritos hasta hoy para
L neotropica y ha demostrado ser diferente en soacutelo una mutacioacuten en la posicioacuten 9 de la
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alineacioacuten con el haplotipo descrito previamente Lneo-cox1a de la localidad tipo de esta
especie (AM494008) Del mismo modo una mutacioacuten en la posicioacuten 375 es la uacutenica
diferencia con el haplotipo Lneo-cox1b informado de Mendoza Argentina Las
diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos con todos los haplotipos L neotropica (672 pb
de longitud) y otros aislamientos (655 pb de largo) que muestran secuencias muy
similares de acuerdo a los resultados de BLASTN se detallan en la Tabla 15 (Veacutease
anexo pp 176)
942 - L viator
9421 - Marcadores ribosomales
- ADNr ITS-2 Todos los ejemplares presentan los mismos ITS-2 de secuencia de 436 pb
y 5367 de contenido de GC Cuando se compara con los haplotipos ITS-2 de L viator
disponibles en GenBank la maacutes parecida a este haplotipo es Lvia-H2 (JN051366 de
Chile) siendo solamente maacutes corta en longitud debido a sitios polimoacuterficos
correspondientes a 8 indeles relacionados a un nuacutemero diferente de repeticiones en los
microsateacutelites GCTT y GCTC Estos microsateacutelites son (GCTT)2 (GCTC)1 en el valle de
Fiambalaacute mientras que (GCTT)4 y (GCTC)1 en Casa Blanca Chile El coacutedigo H3 se ha
atribuido a este nuevo haplotipo (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) Otras secuencias con
el haplotipo Lvia-H1 y otros aislamientos de L viator se muestran incompletos en el
extremo 3 del espaciador ITS-2 y se presentan en la Tabla 16 (Veacutease anexo pp 177)
- ADNr ITS-1 Todos los limneidos mostraron ideacutentica secuencia de ITS-1 de 570 pb y
5403 de contenido de GC Esta secuencia fue muy similar al haplotipo de L viator de
Chile (Lvia-HB JN051368) que difiere en soacutelo 5 sitios polimoacuterficos correspondiente a
una mutacioacuten y una repeticioacuten tetranucleotide (ATTG) El coacutedigo de HC se ha atribuido a
este nuevo haplotipo Diferencias detalladas con haplotipos de L viator HA de Argentina
y de Chile HB asiacute como con otros secuencias de L viator se muestran incompletas en el
extremo 5 del ITS-1 Se enumeran en la Tabla 17 (Veacutease anexo pp 178)
9422 - Marcadores mitocondriales
- ADNmt 16S Un nuevo haplotipo se ha detectado en las muestras estudiadas en el valle
de Fiambalaacute por lo cual se le asigna el nuevo coacutedigo Lvia-16SB Esta secuencia parcial
es de 436 pb de longitud y presenta un sesgo AT contenido de 6949 Este haplotipo es
muy similar al que se encuentra en esta especie de limneido Lvia-16SA (HE610434) que
difiere en soacutelo 2 de insercioacutensupresioacuten (indeles) Es importante sentildealar que se
detectaron muy pocas diferencias en este fragmento del 16S entre L neotropica y
especiacutemenes L viator ya estudiados en Argentina (soacutelo 5 posiciones variables 4
mutaciones y 1 indel) Por lo tanto se realizoacute un anaacutelisis comparativo de secuencias
incluyendo L neotropica y haplotipos L viator y otros haplotipos 16S aislados de la
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misma especie disponibles en el GenBank que muestran secuencias muy similares de
acuerdo con BLASTN (Veacutease anexo Tabla 18 pp 179)
- ADNmt cox1 Soacutelo una secuencia de nucleoacutetidos se encontroacute igual en todas las
muestras analizadas de 672 pb y un sesgo AT con contenido de 7004 Esta secuencia
resulta ser nueva y el nuevo coacutedigo haplotipo Lvia-cox1d fue exigido Cuando se
compara con los haplotipos descritos anteriormente en nucleoacutetidos de L viator cox1a
cox1b y cox1c las diferencias oscilan entre 6 y 11 el haplotipo Lvia-cox1a de Riacuteo Negro
Argentina (AM494010) aparece como el maacutes parecido Los resultados BLASTN
proporcionan una semejanza del 100 solamente con un fragmento cox1 maacutes corto de L
viatrix (VxC2 de 654 pb) de Mendoza (JN872450) Las diferencias de nucleoacutetidos y
aminoaacutecidos con haplotipos L viator y otros aislados se detallan en la Tabla 19 (Veacutease
anexo pp 180)
943 - Anaacutelisis comparativo de L neotropica vs L viator
A nivel de ADNr nuclear ITS-1 muestra ser un buen marcador en la distincioacuten entre estas
dos especies de limneidos El ITS-2 ofrece 60 posiciones variables (incluidas 29
mutaciones y 31 indeles) en una larga alineacioacuten de 464 pb en ambas especies y
respectivos haplotipos aislados Ademaacutes este marcador ofrece interesantes
microsateacutelites para la caracterizacioacuten de la poblacioacuten (Veacutease Anexo Tabla 16 pp 177)
El ITS-1 ofrece 119 posiciones variables incluyendo 93 mutaciones y 26 indeles en una
larga alineacioacuten de 580 pb El total de diferencias de caraacutecter entre especies son muy
claras y coexisten mostrando una gama de 57 a 59 (promedio de 5790) con un
promedio de p-distancia de 01163 (un total de 80 parsimonias en su respectiva
alineacioacuten) para distinguir las especies Una matriz de distancias por pares entre
secuencias de haplotipos ITS-2 y ITS-1 y aislamientos de L neotropica y L viator se
enumeran en la Tabla 20 (Veacutease anexo pp 181)
El nivel de los marcadores mitocondriales cox1 es excelente para distinguir las especies
y poblaciones cuando se utiliza como secuencia de nucleoacutetidos pero no cuando se
traduce a la proteiacutena que muestra identidad de secuencia de aminoaacutecidos en algunos
aislamientos de L neotropica y L viator A diferencia de los otros tres marcadores
utilizados 16S es el uacutenico que puede crear confusioacuten si se utiliza solo para lograr
diferenciacioacuten molecular entre ambas especies Las causas de esta afirmacioacuten son la
corta longitud del fragmento utilizado y el muy bajo nuacutemero de posiciones variables
obtenidas (25 de las cuales 19 son mutaciones y 6 indeles en una alineacioacuten de largo
442 pb 565) que logran generar una separacioacuten coherente entre ambas especies y
haplotipos (Veacutease anexo Tabla 18 pp179) El total de las diferencias de caracteres se
han utilizado para construir una matriz de distancia comparable entre 16S y secuencias
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de cox1 aisladas de haplotipos de L neotropica y L viator (Veacutease anexo Tabla 21 pp
182)
La informacioacuten proporcionada por los 4 marcadores moleculares utilizados y aplicados
para distinguir L neotropica y L viator se detalla en la Tabla 22 (Veacutease anexo pp 183)
Para la diferenciacioacuten entre estas dos especies ITS-1 aparece como el marcador con
mayor resolucioacuten y 16S como el de menor Para los anaacutelisis intraespeciacuteficos cox1
aparece como el mejor marcador y ITS-1 el peor La baja resolucioacuten del fragmento del
gen 16S para la distincioacuten de especies es digna de tenerse en cuenta Por ejemplo la
estimacioacuten de distancia media de 16S utilizando como modelo de sustitucioacuten de
nucleoacutetidos las diferencias totales (ts + tv) entre L neotropica y L viator es solo 856
siendo de 433 y 431 en las secuencias de L neotroacutepica y L viator respectivamente
(Veacutease anexo Tabla 22 pp 183)
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DISCUSIOacuteN
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101 - EN LOS SERES HUMANOS
La regioacuten endeacutemica en el valle de Fiambalaacute presenta las prevalencias maacutes altas e
intensidades registradas en el paiacutes demostrando ser un problema de Salud Puacuteblica con
singulares caracteriacutesticas epidemioloacutegicas En el presente estudio la prevalencia
obtenida por meacutetodos seroloacutegicos (3442) en Tatoacuten y aacutereas de influencia incluyendo
Riacuteo Grande es la maacutes alta reportada en la Repuacuteblica Argentina Esta prevalencia es
comparable a la encontrada por Marcos et al (2002) en pruebas seroloacutegicas (363) en
Mantaro asiacute como en el valle de Cajamarca tambieacuten en Peruacute por Gonzaacutelez et al (2011)
El estudio epidemioloacutegico realizado demuestra que esta zona puede ser clasificada como
una situacioacuten hiperendeacutemica humana en base a los criterios propuestos a la OMS por
Mas-Coma et al (1999 a) Los resultados obtenidos en esta investigacioacuten permiten la
descripcioacuten epidemioloacutegica del aacuterea y muestran factores que intervienen en el
mantenimiento del ciclo de la Fasciolosis a pesar que el subregistro y la falta de
denuncias epidemioloacutegicas contribuye a que la enfermedad sea subestimada La falta de
teacutecnicas de diagnoacutestico raacutepidas sensibles y econoacutemicas que esteacuten al alcance de todos
los centros de salud y sean uacutetiles tanto en la fase aguda como croacutenica de la enfermedad
seriacutea uno de los principales factores en la subestimacioacuten
Desde las aproximadamente 2500 personas infectadas registradas por Chen y Mott
(1990) en 42 paiacuteses de Asia Europa Ameacuterica Latina Aacutefrica del Norte y el Paciacutefico Oeste
entre 1970 y 1990 y el reporte global de la OMS (1995) en alrededor de 24 millones de
afectados hasta la estimacioacuten actual de Mas-Coma et al (2005) de 17 millones de
infectados a nivel mundial los casos reportados de Fasciolosis han ido aumentando en
los uacuteltimos 25 antildeos Tambieacuten para Mas-Coma (2009 a) es muy probable la
subestimacioacuten de la situacioacuten real debido al desconocimiento del estado de la
enfermedad en muchos paiacuteses
En Argentina no hay datos suficientes para conocer cabalmente la epidemiologiacutea y la
epizootiologiacutea de esta zoonosis parasitaria aunque sabemos que el problema existe (58
trabajos publicados con 555 casos) Sin embargo se presentan estudios como el de Pizzi
et al (1982) cuestionado por Barcat (2005) referido a 54 pacientes atendidos durante un
lapso de 5 antildeos en la provincia de Coacuterdoba
Las teacutecnicas disponibles para diagnoacutestico en los laboratorios cliacutenicos no son optimas
(Carnevale y Velaacutesquez 2011) ya que no se dispone faacutecilmente de antiacutegenos
estandarizados para realizar pruebas seroloacutegicas y seguramente muchos de los casos
observados no se notifican ni se publican por lo que se conoce soacutelo la punta del iceberg
La importancia de la infeccioacuten humana por F hepatica ha sido reconocida en antildeos
recientes por Mas-Coma et al (1999 c) Lo que maacutes sorprende es la capacidad de esta
enfermedad de llegar a causar situaciones epidemioloacutegicas problemaacuteticas en Salud
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Puacuteblica en medios tan diferentes y extremos como en la aridez del valle de Fiambalaacute a
nivel del mar en el delta del Nilo (Esteban et al 2003) y a 4000 m de altitud en el
Altiplano Boliviano (Mas-Coma et al 1999 a) y Peruano (Esteban et al 2002) en lugares
con alta pluviometriacutea y en lugares extremadamente secos en lugares de temperaturas
constantes a lo largo del antildeo y en otros con variacioacuten de temperatura pronunciada seguacuten
las estaciones en focos relacionados con aguas permanentes y en focos con aguas
temporales como observaron en sus estudios Mas-Coma et al (2008 b)
1011 - Inmunodiagnoacutestico
Al igual que los obtenidos en Fiambalaacute todos los diagnoacutesticos realizados en el paiacutes a
partir de 2001 exceptuando los efectuados en Coacuterdoba por Nieto Sosa (2008 2012)
fueron confirmados mediante el ensayo de ELISA (Lloret et al 2005)(Rubel et al
2005)(Salomoacuten et al 2006)(Corti et al 2006)(Riacuteos et al 2008)(Carnevale et al 2012)
El nuacutemero de reportes de casos humanos se sigue incrementando en el mundo y los
trabajos publicados por Arjona et al (1995) demuestran en esta serie de casos que esta
enfermedad afecta a las personas con una prevalencia de hasta 72 por coprologiacutea y
100 por serologiacutea donde ELISA tiene una sensibilidad del 100 y una especificidad
superior al 90 para la deteccioacuten de anticuerpos
Los resultados obtenidos permiten sostener que a pesar de su uso extendido las pruebas
coproloacutegicas comunes son poco sensibles e inferiores a las pruebas seroloacutegicas que
muestran mayores valores de sensibilidad en la deteccioacuten de la fase aguda y croacutenica de
la infeccioacuten por F hepatica En Peruacute Coacuterdova et al (1997 1999) y OacuteNeill et al (1999)
realizaron estudios para el diagnoacutestico precoz y oportuno por medio de meacutetodos
seroloacutegicos que muestran una mayor especificidad y sensibilidad en la determinacioacuten de
esta helmintiasis Cornejo (2003) y Espinosa (2010) reconocen como limitacioacuten de las
pruebas seroloacutegicas que no distinguen entre infeccioacuten actual o pasada y por lo tanto un
resultado positivo en un paciente proveniente de una zona endeacutemica con un cuadro
cliacutenico no compatible con Fasciolosis puede resultar de una respuesta inmune a la
infeccioacuten en el pasado
La deteccioacuten de anticuerpos fue el meacutetodo empleado para el inmunodiagnoacutestico de
Fasciolosis en el valle de Fiambalaacute debido a su relativa simplicidad y la temprana
seroconversioacuten (usualmente 1-2 semanas) durante la infeccioacuten primaria comparada con
el periacuteodo de patencia tardiacutea (2-3 meses) hallada por Hillyer (1999) Sin embargo se tuvo
en cuenta que su positividad no puede ser de modo alguno considerada como un criterio
de infeccioacuten activa ya que Espino (1997) ha demostrado que muchos pacientes ya
curados mantienen elevados niveles de anticuerpos contra el paraacutesito por periacuteodos que
pueden llegar hasta 2 o 3 antildeos
Shaker (1994) en estudios epidemioloacutegicos realizados en Egipto empleoacute ELISA para
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detectar anticuerpos circulantes contra F hepatica en suero de pacientes infectados
enfrentados a un antiacutegeno purificado por inmunoafinidad desde homogeneizados del
paraacutesito adulto ELISA resultoacute ser 100 sensible y tuvo una especificidad de 93
Entonces planteoacute que ELISA puede ser usada como una buena prueba de screening
mientras que el ensayo inmunoenzimaacutetico de electrotransferencia (EITB) serviriacutea como
un test confirmatorio en el inmunodiagnoacutestico de Fasciolosis
En Chile Apt (1992) sostiene que el meacutetodo ELISA posee una sensibilidad de 976 y
especificidad de 938 mientras para Castro (2010) la teacutecnica de ELISA utilizando los
productos de E-S del paraacutesito tiene una sensibilidad de 100 y una especificidad de
978 aunque Zulantay (1992) utilizando un IgG ELISA y un antiacutegeno somaacutetico soluble
de F hepatica obtuvo una sensibilidad de 923 y una especificidad de 994 en tanto
los valores predictivos positivo y negativo fueron de 916 y 994 respectivamente
Para el desarrollo de esta investigacioacuten se utilizoacute antiacutegeno E-S del paraacutesito y para
evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti-F hepatica en los sueros humanos se aplicoacute un
ELISA con una sensibilidad y especificidad en la prueba de 100
1012 - Eosinofilia
En lo que respecta a los exaacutemenes auxiliares llevados a cabo el dato maacutes importante del
hemocitoloacutegico es la eosinofilia elevada registrada en el 3238 de los casos estudiados
en esta tesis sin que se encontraran elementos inmaduros en las muestras como reporta
Siciliano (1982)
En Fasciolosis como en otras parasitosis la eosinofilia es el hallazgo de laboratorio maacutes
frecuentemente encontrado seguacuten su porcentual y valor absoluto en sangre perifeacuterica
(Arjona et al 1995) Las alteraciones del hemograma demuestran eosinofilia marcada
(47) para Blancas et al (2004) y leucocitosis con desviacioacuten a la izquierda como lo
manifiesta Atias (1991)
Asiacute para el total de pacientes estudiados la eosinofilia elevada es el hallazgo maacutes
frecuente (n= 60) lo que concuerda con los trabajos de Rubel et al (2005) y Nieto Sosa
(2008) siendo uno de los datos que orienta el diagnoacutestico haciacutea la Fasciolosis Para
Lloret et al (2005) la leucocitosis con hipereosinofilia creciente fue una anomaliacutea
universal con valores del 38 al 62 y estuvo presente en todos sus pacientes mientras
que Giffoniello (1983) la reporta del 30-50 seguacuten Miguel (1985) en 80 y para Siciliano
(1989) en 93
En Peruacute Cosme et al (2001) reportan 37 casos de Fasciolosis en los que el 918 de los
pacientes presentoacute eosinofilia El porcentaje de pacientes con eosinofilia en determinado
grupo de estudio depende mucho del porcentaje de pacientes agudos en cada caso
Vera (1989) hace notar que en 83 de 134 pacientes (619) en etapa croacutenica no se
presentoacute eosinofilia por lo que su ausencia en un paciente dado no descarta la
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posibilidad de la enfermedad y esto podriacutea explicar el escaso nuacutemero de individuos con
diagnoacutestico de Fasciolosis que al no sospechar su diagnoacutestico como lo afirman Marcos
et al (2002) no se solicitoacute el anaacutelisis parasitoloacutegico respectivo Cabe destacar que algunos
pacientes clasificados en fase croacutenica son realmente casos en transicioacuten (final de la fase
aguda y comienzo del periodo de ovoposicioacuten)
Seguacuten Arjona et al (1995) la eosinofilia se presenta en el 95 de los pacientes siendo la
mayoriacutea agudos Mientras Marcos et al (2007 a) refiere haberla encontrado en el 46 de
los pacientes (todos en fase croacutenica) De esto se deduce que con respecto a la
eosinofilia y la Fasciolosis cabe mencionar que las maacutes altas tasas de eosinofilia se
observan en la fase aguda o invasiva y estadios tempranos de la fase croacutenica llegando
incluso a cifras muy altas (70-80) como se menciona anteriormente Para Blancas et al
(2004) la eosinofilia no siempre estaacute presente en la fase croacutenica Solo 47 de los 277
casos implicados en un interesante estudio hospitalario de maacutes de 30 antildeos teniacutea
eosinofilia (Blancas et al 2004) mientras que el 50 de los sujetos con Fasciolosis
croacutenica teniacutea eosinofilia en aacutereas endeacutemicas (Marcos et al 2002)
Tambieacuten en Peruacute donde la eosinofilia estuvo presente en el 47 de los casos croacutenicos
se demuestra que en esta fase puede encontrarse y seriacutea importante para poder
sospechar el diagnoacutestico de esta parasitosis Sin embargo muchos individuos con
Fasciolosis croacutenica no presentan eosinofilia y esto seriacutea otro punto importante al igual
que las caracteriacutesticas cliacutenicas lo que explicariacutea la falta de personas diagnosticadas
previamente con Fasciolosis en los hospitales del valle de Fiambalaacute ya que no se
investigoacute este diagnoacutestico
La eosinofilia puede ser el primer signo a sospechar sobre Fasciolosis en las zonas
endeacutemicas pero tambieacuten estos sujetos pueden tener muacuteltiples paraacutesitos intestinales que
pueden aumentar el conteo de eosinofilos especialmente helmintos o pueden tener otra
patologiacutea como asma Se deberaacute tener presentes estas asociaciones que requieren un
enfoque integral de diagnoacutestico En resumen si un paciente proviene de un aacuterea
endeacutemica se sospecha de cualquier anomaliacutea del tracto biliar y presenta eosinofilia
puede ser Fasciolosis y se deberaacute incluir para el diagnoacutestico diferencial
1013 - Proteiacutenas totales y enzimas hepaacuteticas
Otro rasgo de la infeccioacuten por F hepatica fue la presentacioacuten de hiperproteinemiacutea quizaacutes
debido a cambios de volumen del agua plasmaacutetica por deshidratacioacuten (aporte insuficiente
de agua voacutemitos o diarreas severas) La hiperproteinemiacutea puede ser debida a
deshidratacioacuten o a un aumento en la concentracioacuten de proteiacutenas especiacuteficas
(inmunoglobulinas policlonales en infecciones) pero estas no fueron analizadas
Para analizar el impacto del valor del laboratorio se diferenciaron los datos aportados por
aquellas determinaciones como el hemograma de las especiacuteficas en patologiacutea
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hepatobiliar Las determinaciones especiacuteficas en patologiacutea hepatobiliar incluyen las
enzimas de citoacutelisis (GOT o AST y GPT o ALT) para que reflejen alteraciones del
pareacutenquima hepaacutetico y la elevacioacuten de FAL (3619) la bilirrubina (BT) directa (BD) e
indirecta (BI) La fosfatasa alcalina se halla elevada como enzima de colestasis aunque
los valores registrados son inferiores al reporte de Siciliano et al (1989) donde el
laboratorio reveloacute fosfatasa alcalina aumentada en el 43 de los casos Nieto Sosa et al
(2012) encontraron GOT GPT y FAL elevadas en todos los pacientes de un grupo
familiar estudiado
1014 - Geacutenero
En la mayoriacutea de los estudios sobre la Fasciolosis humana y su incidencia en las
diferentes zonas de endemicidad los aspectos referidos a la epidemiologiacutea de la
enfermedad en funcioacuten del sexo del hospedador definitivo accidental arrojan resultados
contradictorios obtenieacutendose zonas donde las prevalencias e intensidades de infeccioacuten
eran diferentes si bien en la mayoriacutea de las veces de forma no significativa
De acuerdo con esta afirmacioacuten en los resultados obtenidos en el valle Fiambalaacute tanto
dentro de los casos positivos como en el grupo de negativos los mayores porcentuales
corresponden al sexo femenino (mujeres 60 40 en hombres) sin embargo la
prevalencia no presenta asociacioacuten estadiacutesticamente significativa
La diferencia no significativa entre prevalencia y sexo puede ser explicada por la similitud
de roles por geacutenero y por la ingesta de varios tipos de vegetales crudos o agua como
factores de riesgo para la infeccioacuten por F hepatica Estos resultados concuerdan con las
investigaciones realizadas en zonas tan distantes como Satipo Peruacute llevadas a cabo por
Delgado (1995) y las de Brooker (1999) quien trabajoacute en Kenia
Del mismo modo como ocurre con casi todas las enfermedades infecciosas las tasas de
prevalencia e intensidad entre los sexos variacutean en funcioacuten de los papeles y
responsabilidades de cada uno Sin embargo si tanto hombres como mujeres comparten
condiciones econoacutemicas y sociales similares sus estructuras fisioloacutegicas pueden
responder de forma diferente a un mismo riesgo
De ese modo Apt et al (1992) ha realizado numerosos estudios en las distintas zonas
endeacutemicas de Fasciolosis en Chile donde la prevalencia de parasitacioacuten animal es
elevada En aacutereas rurales hiperendeacutemicas para Fasciolosis animal los resultados de
Fasciolosis humana obtenidos en relacioacuten al geacutenero mostraban que las mujeres eran
parasitadas de forma maacutes frecuente que los hombres 732 frente al 268
respectivamente
Estudios epidemioloacutegicos muy interesantes llevados a cabo en Bolivia por Esteban et al
(1999 2002) en regiones de alta endemicidad de Fasciolosis humana encontraron
prevalencia de hasta un 682 (media 154) aunque no existiacutean diferencias en cuanto
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al geacutenero de individuos analizados Farag et al (1979) en trabajos anteriores en Egipto
mostraban diferencias significativas en cuanto a la prevalencia de infeccioacuten por
Fasciolosis en funcioacuten del geacutenero afectando maacutes a las mujeres con un 103 frente a un
44 en hombres
De ese modo los estudios referidos muestran que tanto en Bolivia como en Peruacute
(Esteban et al 1999 2002) las diferencias relativas a la prevalencia de infeccioacuten por F
hepatica en funcioacuten del geacutenero no eran significativas al igual de lo encontrado en el
presente trabajo Por el contrario en Egipto (Curtale et al 2007)(Esteban et al 2003) al
igual que en Chile (Apt et al 1992 1993) si existiacutean diferencias significativas en la
prevalencia de infeccioacuten dependiendo de si afectaba a hombres o mujeres
1015 - Grupos etarios
El estudio demuestra que la infeccioacuten es maacutes frecuente en los pacientes de los grupos
etarios menores de 19 antildeos a diferencia del estudio reportado por Biagi (1957) en la
poblacioacuten de Atlixto (zona endeacutemica mexicana) que mostroacute como la frecuencia de
reacciones positivas aumentaba de manera rectiliacutenea en los adultos
Datos similares a los obtenidos en esta investigacioacuten se observan en la casuiacutestica
estudiada por Alban (2002) sobre casos de Fasciolosis en el Hospital de Cajamarca
Peruacute donde su mayor poblacioacuten correspondioacute a los grupos etarios menores de 20 antildeos
Tambieacuten en Peruacute Marcos (2002 2005) observa en zonas endeacutemicas que la mayoriacutea de
casos son nintildeos en edad escolar (5-15 antildeos) siendo maacutes propensos que los adultos a
convertirse en infectados como lo ejemplifica en los niveles maacutes altos de prevalencia de
infeccioacuten y para desarrollar eventos mecaacutenicos adversos despueacutes del tratamiento
debido al tamantildeo maacutes pequentildeo de sus conductos biliares y por lo tanto a una mayor
probabilidad de bloqueo (Marcos et al 2007 b)(Cornejo et al 2003)(Valencia et al
2005)(Gabrielli et al 2011)
Los resultados tambieacuten coinciden con estudios de campo reportados en el valle de
Mantaro (zona endeacutemica peruana) donde Naacutequira (2000) obtiene 93 de muestras
positivas en los menores de 20 antildeos Valero et al (2003 2006 2008) y Girones et al
(2007) sostienen el gran impacto de esta enfermedad en la morbilidad de nintildeos con
infecciones croacutenicas
Sin embargo los resultados del valle de Fiambalaacute difieren de la casuiacutestica hospitalaria
encontrada en Coacuterdoba por Siciliano (1980) donde la edad promedio en que se
presenta la enfermedad es de 355 antildeos ( a pesar de tener en cuenta que en el Hospital
Rawson de la ciudad de Coacuterdoba se atienden personas adultas) y en Peruacute donde
Blancas (2004) sostiene que las poblaciones maacutes importantes correspondieron a los
grupos comprendidos entre los 20 y 39 antildeos y Peacuterez (1986) que observa la mayor
proporcioacuten de enfermos entre 15 a 49 antildeos
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Los adultos suelen ser los maacutes afectados en aquellos lugares en los que la Fasciolosis
humana es poco frecuente como lo describen Carrada y Escamilla (2005) en Francia o
los casos de turistas que veranean en zonas serranas de Coacuterdoba Argentina
diagnosticados por Siciliano (1980) y Nieto Sosa (2006) Tambieacuten los observados por
Maco et al (2002) en profesiones ligadas al campo relacionadas al pastoreo o cuidado
del ganado constituyeacutendose en grupos de riesgo y donde la enfermedad se muestra
seguacuten Mas-Coma y Bargues (1997 a) en agregados familiares
1016 - Estudios coproloacutegicos
Uno de los aspectos investigados para el diagnoacutestico definitivo de Fasciolosis fue el
hallazgo de huevos en materia fecal aun reconociendo que el estudio
coproparasitoloacutegico presenta baja sensibilidad y requiere la recoleccioacuten de muestras
seriadas En este sentido la teacutecnica coproloacutegica maacutes rentable eficaz y sensible resultoacute la
TSR descrita por Lumbreras et al (1962)
A pesar de los bajos resultados obtenidos (4 casos) la TSR al compararla con las otras
teacutecnicas maacutes complejas y de mayor costo como la teacutecnica de Kato-Katz o el meacutetodo de
concentracioacuten eacuteter-formol permitioacute la identificacioacuten de los casos positivos A diferencia de
los reportes de otros autores donde los estudios coproparasitoloacutegicos dieron excelentes
resultados como en Mendoza donde Salomoacuten et al (2006) utilizando las teacutecnicas de
Faust Sheather y Lumbreras comprobaron positivos a dos pacientes o los casos
reportados por Nieto Sosa (2008) de Coacuterdoba y San Luis donde hallaron huevos de F
hepatica en 15 pacientes
En un estudio muy interesante Lumbreras et al (1962) comparando el anaacutelisis directo de
heces y el procedimiento de sedimentacioacuten raacutepida para investigar huevos de F hepatica
en materia fecal obtienen un resultado significativo de 919 a 9081 de positividad
Villegas et al (2012) en el Altiplano Boliviano regioacuten de alta endemicidad de Fasciolosis
humana encontraron prevalencias de hasta 217 a diferencia del presente trabajo
donde solo fue posible confirmar por anaacutelisis de materia fecal 416 de los casos
estudiados correspondientes a pacientes sintomaacuteticos en su fase croacutenica entre ellos dos
nintildeos
Cabe destacar que por razones logiacutesticas la toma de muestras seriadas para el examen
de heces fue soacutelo de 3 diacuteas consecutivos lo que pudo reducir el hallazgo de huevos
debido a la ovoposicioacuten intermitente del paraacutesito Es importante sentildealar ademaacutes que las
personas no cooperaron con la toma de muestras
De los casos positivos encontrados llama la atencioacuten el de la paciente a la que se extrajo
especiacutemenes de F hepatica con CPRE quien previamente resultoacute negativa a los
distintos coproparasitoloacutegicos que se le realizaron y a los ELISA practicados Lo mismo
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ocurrioacute con la paciente en la que se halloacute un ejemplar durante una intervencioacuten quiruacutergica
y tambieacuten dio negativo al anaacutelisis de materia fecal aunque eacutesta fue positiva al ELISA
A pesar de no formar parte de los objetivos del presente estudio las demaacutes teacutecnicas
coproparasitoloacutegicas utilizadas permitieron demostrar la existencia de huevos de varios
paraacutesitos presentes tanto en nintildeos como en adultos presentaacutendose casos donde
conviviacutean hasta 3 paraacutesitos distintos al igual que el trabajo de Esteban (1999) quien
diagnostica parasitosis coexistentes con Fasciolosis mencionando la presencia de
Blastocystis hominis tal como lo observado en el valle de Fiambalaacute
1017 - Siacutentomas y signos
La presentacioacuten cliacutenica patogeniacutea situacioacuten epidemioloacutegica y patrones de transmisioacuten de
Fasciolosis humana es ampliacutesima no soacutelo por las dificultades diagnoacutesticas en la fase
aguda de la enfermedad sino por el hecho de que estudios de Valero et al (2003 2006
2008) en los uacuteltimos antildeos han venido a demostrar serios problemas cliacutenicos y
patogeacutenicos durante la muy prolongada fase de cronicidad que en humanos se estima
del orden de 135 antildeos
Queda demostrado en este estudio que lamentablemente la casuiacutestica en sucesos
cliacutenicos no refleja su frecuencia quizaacutes porque la mayoriacutea de los casos que llegan a los
centros hospitalarios lo hacen por complicaciones de la fase croacutenica (cuadros
obstructivos biliares colangitis colecistitis etceacutetera) y los siacutentomas de la Fasciolosis de
la viacutea biliar son tan semejantes a los que produce la litiasis biliar que los pacientes llegan
a la cirugiacutea con este uacuteltimo diagnoacutestico siendo el hallazgo del paraacutesito un hecho
inesperado durante la intervencioacuten como lo revelan los trabajos de Del Valle y Donovan
(1923) Cuenya (1944) Longo y Dariacuteo (1953) Logaldo (1955) Ahualli y Arias (1961)
Cantildeas et al (1964) Padilla et al (1970) Carena et al (1972) y Andrada et al (1983) igual
que lo ocurrido con dos pacientes de Fiambalaacute
En esta investigacioacuten al analizar la sintomatologiacutea se observa que el dolor abdominal es
el maacutes frecuente presente en el 2553 de los casos Estos datos contrastantes con
otros estudios hospitalarios como los obtenidos en Peruacute por Picoaga (1980) 88 y
Alban (2002) que hablan de 88 y 84 respectivamente o en Chile donde el dolor
abdominal para Faiguenbaum (1962) fue el maacutes habitual en 70 de los casos
Los siacutentomas que siguieron en frecuencia en este estudio fueron naacuteuseas y voacutemitos
(2411) diarrea (1702) fiebre (992) valores muy proacuteximos a los obtenidos en
Peruacute donde Picoaga (1980) reporta naacuteuseas y voacutemitos en 30 anorexia en 27 y
diarrea soacutelo en 16 en tanto para Alban (2002) voacutemitos en 28 la hiporexia en el 26
las naacuteuseas en 17 la diarrea en 12 y la peacuterdida de peso en el 13 En Chile
Faiguenbaum (1962) encuentra maacutes frecuente la diarrea (36) y la peacuterdida de peso
(36) Faacutebregas et al (1976) en Cuba presenta porcentajes maacutes bajos diarrea 26
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voacutemitos 22 anorexia 19 peacuterdida de peso y naacuteuseas 15 A pesar de estos
porcentajes es de destacar que los siacutentomas son inespeciacuteficos y ayudan poco a precisar
el diagnoacutestico
Respecto a la semiologiacutea del dolor abdominal se observa que en cuanto a localizacioacuten
es maacutes frecuente en epigastrio (5454) e hipocondrio derecho (4545) lo que
concuerda con estudios de Cornejo (1951) en Peruacute Faacutebregas et al (1976) observa el
dolor epigaacutestrico presente en el 59 y en hipocondrio derecho en el 37 de sus
pacientes El mismo orden se mantiene en Chile (Faiguenbaum 1962) pero con
porcentajes menores (26 y 19 respectivamente) Al igual que en Peruacute (Picoaga
1980)(Cornejo 1951) el dolor tipo coacutelico ha sido el que maacutes frecuentemente se ha
observado en este estudio
En la Repuacuteblica Argentina de acuerdo al examen fiacutesico para el total de pacientes
atendidos en los grupos agudo croacutenico y pediaacutetrico los hallazgos maacutes frecuentes fueron
dolor a la palpacioacuten en hipocondrio derecho y signo de Murphy (Longo y Daraiacuteo 1953)
(Ahualli y Arias 1961)(Cantildeas et al 1964)(Padilla et al 1970)(Andrada et al 1983)
(Giffoniello et al 1983) (Lloret et al 2005) hepatomegalia (Padilla et al 1970) palidez y
fiebre (Andrada et al 1983) aunque en los datos de los pacientes del valle de Fiambalaacute
es de destacar en algunos casos la hepatomegalia y la ictericia presente en adultos
Por lo tanto es correcto afirmar que el escaso nuacutemero de individuos diagnosticados
cliacutenicamente de Fasciolosis no presentan sintomatologiacutea biliar claacutesica como coacutelico biliar
observado por Andrada et al (1983) o signo de Murphy (Longo y Daraiacuteo 1953) y esto
pudiera ser una de las causas que explicariacutea el escaso nuacutemero de individuos
diagnosticados cliacutenicamente de Fasciolosis
1018 - Imaacutegenes
En la presente tesis doctoral soacutelo 3 observaciones (75) coexistieron con litiasis 5
(125) con colecistectomiacutea y 29 (725) con vesiacutecula normal Se encontroacute un caso
ecograacutefico que mostraba una imagen factible del paraacutesito El estudio realizado mostroacute
una imagen clara aplanada y alargada perfectamente compatible con F hepatica con
estructura hepaacutetica conservada viacuteas biliares intra y extrahepaacutetica no dilatadas Se
informoacute tambieacuten ausencia de vesiacutecula biliar por colecistectomiacutea y leve dilatacioacuten del
coleacutedoco sin demostrar alteraciones en el resto del estudio Descripciones semejantes
son reportadas en Peruacute por Gonzaacutelez-Carbajal et al (2001) y Meacutexico por Vaacutezquez et al
(2007)
Blancas et al (2004) describioacute los hallazgos principales de 27 ecografiacuteas abdominales
(desde 1989 al 2002) realizadas en el Hospital Cayetano Heredia de Lima Estas fueron
hepatomegalia en el 37 imaacutegenes sospechosas de F hepaacutetica en 30 colecistitis en
26 y litiasis en 15 y Alban (2002) en el hospital de Cajamarca reportoacute 8 ecografiacuteas
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(de 101 casos de Fasciolosis) de los cuales cinco (63) tuvieron caacutelculos y dos (25)
pared vesicular engrosada
La tomografiacutea axial computada es utilizada por Arjona et al (1995) mencionando su
utilidad especialmente en el reporte de 1520 pacientes con Fasciolosis y Van Beers et al
(1994) con presencia de ejemplares en viacuteas biliares El presente estudio no contoacute con la
posibilidad de emplear TAC en los pacientes
1019 - Teacutecnicas invasivas
A raiacutez de los estudios realizados para esta tesis fueron hallados como se expresoacute antes
en el momento de llevar a cabo intervenciones quiruacutergicas ejemplares vivos de F
hepatica en dos pacientes femeninos La primera presentaba el coleacutedoco muy dilatado y
de paredes sumamente engrosadas sin evidencia de litiasis El segundo reporte se
refiere a la coexistencia de litiasis y Fasciolosis en el coleacutedoco de las que se extrajo
estructuras adultas del paraacutesito En Peruacute Alban (2002) refiere situaciones similares al
haber encontrado especiacutemenes en 2162 (12) colecistectomiacuteas practicadas en el
hospital de Cajamarca durante 5 antildeos
En una de las pacientes del valle de Fiambalaacute fue extraiacutedo un ejemplar por CPRE con
cesta de Dormia convirtieacutendose en una muy buena alternativa para evitar cirugiacuteas
mayores como ya habiacutea publicado Veerappan (1991) o en Cuba donde Martiacutenez et al
(2000) reportan resultados satisfactorios comprobando la presencia del paraacutesito en las
viacuteas biliares por CPRE y procediendo a la extraccioacuten de especiacutemenes bajo visioacuten directa
con canastillas helicoidales
Durante esta investigacioacuten uno de los casos citados al que se le practicoacute una
colecistectomiacutea permitioacute la confirmacioacuten por ELISA realizado al extraerse un ejemplar de
F hepatica
102 - EN LOS ANIMALES
1021 - Estudios coproloacutegicos
Seguacuten Boray (1969) y Mas-Coma et al (1999) los hospedadores definitivos maacutes
importantes de F hepatica son los ovinos y los bovinos mientras para Acha y Szyfres
(1986) muchos animales de especies domeacutesticas o silvestres pueden infectarse Este
estudio muestra que entre ellas herbiacutevoros poligaacutestricos -cameacutelidos- o monogaacutestricos -
equinos y mulares- actuacutean como importantes hospedadores alternativos existiendo
diferencias en el desarrollo de la infeccioacuten en las distintas especies estudiadas
determinadas entre otros factores por su diferente susceptibilidad a la infeccioacuten tal como
lo sostienen Dixon (1964) o Reddington et al (1986) Esto se manifiesta durante el curso
de la investigacioacuten por los porcentajes de hospedadores infectados y los niveles de
excrecioacuten de huevos de F hepatica en materia fecal obtenidos
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En el valle de Fiambalaacute los mayores porcentajes de muestras positivas corresponden a
los ovinos y asnos-mulares (3958 al 1954) siendo tambieacuten alto el porcentaje en
llamas y caprinos El anaacutelisis de estos porcentajes considera el sistema de alimentacioacuten
utilizado ya que es determinante de la epidemiologiacutea de la enfermedad como lo
demuestran Cordero del Campillo et al (2002) Las muestras analizadas proveniacutean de
animales sometidos a los manejos tradicionales de produccioacuten en la zona lo que limita
sus preferencias de haacutebitat y sus haacutebitos forrajeros independientemente de la especie
raza o categoriacutea etaria
En contraste a lo observado por Olaechea (1994) en el caso de los ovinos y los caprinos
ambas especies deben pastorear en las vegas (ambientes pantanosos) incluso los
caprinos incorporan una proporcioacuten considerable de especies arbustivas en su dieta
(Mintildeoacuten et al 1991)(Aguirre et al 2005) Estos animales al verse obligados a consumir
forrajes contaminados de la zona ademaacutes de infectarse tambieacuten se transforman en
contaminadores continuos del aacuterea Cafrune et al (1996) sostienen que los cameacutelidos
sudamericanos se infectan de los ovinos aunque los altos porcentajes de llamas
positivas (184) hallados en Tatoacuten y Riacuteo Grande deben relacionarse a la susceptibilidad
que manifiestan a la infeccioacuten por trematodes y a ser poblaciones que habitaban antes de
la introduccioacuten de los ovinos a la zona
Pereyra y Leiras (1991) estudiaron que los rumiantes invierten maacutes de un tercio del diacutea
pastando y como las ovejas cabras y cameacutelidos se alimentan en los mismos lugares y
tienen acceso a los mismos ambientes las probabilidades de consumir metacercarias al
alimentarse seriacutean las mismas
Frente a la prevalencia (2674) obtenida en esta tesis el meacutetodo de diagnoacutestico
coproparasitoloacutegico utilizado presentoacute porcentajes maacutes elevados que los datos de Aguirre
et al (2005) 2367 Rossanigo et al (1983) 99 Moreira et al (2004) 2353 y Mariacuten
(2009) 216
Resultados similares a los mostrados fueron observados en la regioacuten norte del Altiplano
boliviano zona altamente endeacutemica (2586) por Ueno et al (1975) La prevalencia por
F hepatica en el estado de Santa Catarina Brasil donde Da Serra-Freire y Nuernberg
(1992) luego de analizados 12 antildeos de muestreos presentan un 2786 en promedio La
distribucioacuten geograacutefica de establecimientos agropecuarios en Uruguay muestran tropas
con porcentajes mayores a 20 de animales infectados en cualquier aacuterea del territorio
como lo registran Loacutepez y Hernaacutendez (1961) y Nari y Cardozo (1976) Chile presenta una
tasa promedio (3012) tanto en bovinos como en la infeccioacuten caprina (Alcaiacuteno y Apt
1989) Seguacuten Pascal y Goacutemez (1986) tambieacuten se encuentran presentes en Venezuela
con 215
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Boray (1969) sostiene que los huevos de F hepatica eliminados en la materia fecal
dependen de factores relacionados con el hospedador (edad estado inmune y
nutricional) y con el trematode (intensidad del parasitismo y duracioacuten de la infeccioacuten)
factores que explican el amplio rango de resultados encontrados en esta tesis (desde
104 en porcinos 184 en llamas hasta 3958 en ovinos) Las diferencias
estadiacutesticamente significativas de prevalencia en ovinos supera ampliamente las
encontradas en las demaacutes especies esto se relaciona con su alta susceptibilidad y pone
en evidencia su potencial como contaminador de las pasturas
En la zona de estudio existen algunos factores particulares a tener en cuenta la
ganaderiacutea normalmente es mixta con lo cual las diferentes especies de animales ademaacutes
de pastorear en ambientes compartidos consumen las mismas metacercarias los
hospedadores tienen similitud en el tracto digestivo y estaacuten muy relacionados
filogeneacuteticamente (ungulados)
Por la dispersioacuten del alimento en grandes extensiones del terreno y consecuente baja
infestacioacuten de los pastos no era esperable encontrar infecciones altas Los lugares con
una gran contaminacioacuten de los pastos presentan los pocos eventos de pastoreo que los
animales pueden utilizar y de ese modo ingerir metacercarias e infectarse En el valle de
Fiambalaacute F hepatica se halla concentrada en los sitios huacutemedos conocidos como vegas
aunque la trashumancia y largas distancias logran que se disperse ampliamente
La explicacioacuten es que esta prevalencia alcanza para mantener el ciclo de transmisioacuten a lo
largo del tiempo ademaacutes recordemos que el paraacutesito posee una gran capacidad de
multiplicacioacuten asexual en el hospedador intermediario seguacuten Ollerenshaw (1971 a) por
cada miracidio que penetra al caracol pueden emerger entre 800 y 4000 cercarias Otra
explicacioacuten razonable es pensar que existen en los campos compartidos por varios
propietarios -comuneros- otros hospedadores definitivos domeacutesticos o silvestres que
tambieacuten aportan huevos al ambiente tal como lo propone Olaechea (2004)
Los herbiacutevoros como hospederos definitivos desempentildean dentro de la cadena
epidemioloacutegica un papel importante en la diseminacioacuten de la Fasciolosis y ello podriacutea
estar influyendo en los altos iacutendices que se encuentran en humanos sin embargo Mas-
Coma (2005) presenta zonas donde los casos humanos podriacutean ser independientes de la
infeccioacuten animal
1022 - Necropsias
La necropsia como teacutecnica tambieacuten permitioacute establecer un diagnoacutestico de certeza No
necesitoacute de la confirmacioacuten mediante estudios histopatoloacutegicos y seroloacutegicos
complementarios como los planteados por Robles y Uzal (1991) porque las lesiones y los
paraacutesitos hallados confirman el agente etioloacutegico causante de la enfermedad
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Los cambios de tamantildeo en la viacutescera pudieron ser debidos a un estado de caquexia
apareciendo un hiacutegado maacutes pequentildeo del normal y con una falsa imagen de distensioacuten de
la vesiacutecula biliar No se encontraron depresiones de color rojo oscuro correspondientes a
telangiectasias ni procesos degenerativos acompantildeados de coloracioacuten amarillenta
(esteatosis) o congestioacuten croacutenica que diera lugar a una coloracioacuten rojo oscura
entremezclada con aacutereas amarillentas (hiacutegado de nuez moscada) como sostiene Ruager
(1969)
A diferencia de los hallazgos de Morales y Pino (1977) la apertura de la vesiacutecula biliar no
presentoacute alteraciones del contenido ni en la superficie mucosa Los canaliacuteculos biliares
presentaron engrosamiento manifiesto y en el interior de estos se observoacute la presencia de
ejemplares de F hepatica material semisoacutelido color negro fibrosis y calcificacioacuten de los
conductos biliares que podriacutea actuar como una barrera mecaacutenica confiriendo una
significativa resistencia frente a futuras reinfecciones tal como lo plantean en su trabajo
Rojo Vaacutezquez y Ferre-Peacuterez (1999)
En el tubo digestivo el intestino delgado no presentoacute intususcepcioacuten o necrosis tampoco
reaccioacuten fibrino-purulenta alrededor de la lesioacuten o adherencia a la pared abdominal ni el
abomaso con formaciones nodulares muacuteltiples de miliacutemetros de diaacutemetro distribuidas en
toda la mucosa como describieron Dimattia et al (2013)
En los animales con paraacutesitos la extraccioacuten de las formas juveniles a nivel del
pareacutenquima hepaacutetico y de las adultas en los canales biliares se vio favorecida por la
necropsia siendo importante que las mismas se realizaran a nivel de campo al ser maacutes
faacutecil praacutectica y econoacutemica su ejecucioacuten
1023 - Morfologiacutea microscoacutepica
Los trabajos de Rosa (1969) utilizando la microscopiacutea con fines taxonoacutemicos favorecieron
la profundizacioacuten en el conocimiento de la estructuras de F hepatica A posteriori la
microscopiacutea de campo claro ha sido utilizada en el estudio morfoloacutegico de las diferentes
etapas de desarrollo de los trematodos (Jamjoom y Shalaby 2006) En la uacuteltima deacutecada
esta teacutecnica ha traiacutedo importantes contribuciones en paraacutesitos adultos y huevos de F
hepatica como lo muestran Valero et al (2005 2012) y Periago et al (2008)
En el presente estudio se observaron similitudes morfoloacutegicas entre ejemplares adultos
originarios del valle de Fiambalaacute que no difieren de los especiacutemenes de las otras zonas
de Latinoameacuterica estudiados En lugares separados por grandes distancias geograacuteficas
los trabajos de Arauacutejo et al (1995) en Goiacuteas Brasil o los de Periago et al (2006) en
Espantildea y Valero et al (1999) en Bolivia tienen diferencias alomeacutetricas ontogeacutenicas El
aspecto de los huevos uterinos no difiere de los detallados previamente en la literatura
por Hussein et al (2010)
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Fue importante la observacioacuten de tubeacuterculos y espinas en el tegumento porque su
presencia contribuye a la creacioacuten del haacutebitat de los helmintos Por otra parte el
tegumento es la regioacuten de la interaccioacuten del paraacutesito con el hueacutesped por eacutel no solo entran
nutrientes al paraacutesito sino que tambieacuten como lo sentildealaron Moreau y Chauvin (2010)
desarrolla estrategias para la evasioacuten de la respuesta inmune del hueacutesped
A pesar de las numerosas ventajas ofrecidas por estudios de microscopiacutea de campo
brillante en Helmintologiacutea como demostraron Szmygiel et al (2014) la caracterizacioacuten de
ciertos detalles morfoloacutegicos observados en este estudio como afirman Singh et al (2014)
requiere el uso de otras teacutecnicas tales como el contraste de interferencia diferencial que
permitioacute la observacioacuten tridimensional de las estructuras Los resultados obtenidos
muestran por primera vez que el uso integrado de las dos teacutecnicas en F hepatica
permiten observar la presencia de espinas con resultados fiables Los ejemplares de F
hepatica presentan similitud morfoloacutegica cuando se analizan por microscopiacutea de campo
claro siendo necesario el uso integrado de diversas teacutecnicas microscoacutepicas para una
mejor comprensioacuten de la morfologiacutea del paraacutesito
102 4 - Variabilidad geneacutetica intraespeciacutefica
La Fasciolosis se encuentra distribuida por Ameacuterica Latina Europa Aacutefrica y Asia (Mas-
Coma 2004 a b 2005 2007) con una enorme capacidad de adaptacioacuten y expansioacuten
incluso a medios inhoacutespitos (Mas-Coma et al 2003) relacionada tanto con el cambio
global (Mas-Coma 2007 a) como con el cambio climaacutetico (Mas-Coma et al 2008) por lo
que el marcador CO1 utilizado permitioacute diferenciar ejemplares adultos de F hepatica y
conocer si los polimorfismos son poblacionales o individuales Para ello se procedioacute a
estudiar los paraacutesitos mediante meacutetodos moleculares optando por la secuenciacioacuten de
genes y espaciadores del ADN como dianas maacutes adecuadas y aportando el maacuteximo de
informacioacuten para el estudio epidemioloacutegico Por la manera de manifestarse la
enfermedad se sugiere la conveniencia de ofrecer una base de genes sobre la cual las
regiones puedan proceder a describir sus situaciones epidemioloacutegicas incluyendo los
estudios sobre transmisioacuten para caracterizar el paraacutesito en los distintos lugares y
comprender el polimorfismo de los trematodes involucrados en cada lugar permitiendo
constituir un marcador de gran utilidad para los estudios epidemioloacutegicos y las estrategias
de control (Mas-Coma 2005) Las secuencias de ADN constituyen el uacutenico meacutetodo capaz
de diferenciar especies y tambieacuten diferenciar poblaciones y cepas (Bargues y Mas-Coma
2005) de modo que sean vaacutelidos para la distincioacuten de la variabilidad intraespeciacutefica con
caraacutecter sistemaacutetico (subespecies) pero tambieacuten de cepas geograacuteficas razas
susceptibles o resistentes a la transmisioacuten etceacutetera
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1025 - Resistencia antiparasitaria
Si bien se recuperaron ejemplares procedentes de animales sacrificados en el valle de
Fiambalaacute no habiacutea datos sobre la susceptibilidad o resistencia a antihelmiacutenticos en las F
hepaticas obtenidas sin embargo ya que ninguacuten tipo de tratamiento antihelmiacutentico se
lleva a cabo en los campos donde los animales fueron criados era poco probable aislar
susceptibles a los compuestos fasciolicidas incluyendo albendazoles (ABZ) por lo que
es importante la identificacioacuten de la sensibilidad y de los ejemplares resistentes de La
Puerta de Tatoacuten
En aislamientos de F hepatica ABZ-susceptibles en la cuenca del Salado tales como la
cepa Cullompton ABZ mostroacute excelente actividad y alta eficacia ovicida (Aacutelvarez et al
2009) incluso a concentraciones tan bajas como 005 nmolml No obstante en los
aislamientos del Centro de Diagnoacutestico Veterinario Facultad de Ciencias Veterinarias
Universidad Nacional de La Plata para Sanabria et al (2013) no fue inhibida incluso en
la maacutes alta concentracioacuten probada (5 nmolml)
Entre los paraacutesitos obtenidos se ha aislado una cepa del trematode resistente al
triclabendazol la cual seraacute utilizada en futuras investigaciones Los resultados
preliminares utilizando RAPD-PCR con ADN de cepas de F hepatica sensibles o
resistentes al triclabendazol en el valle de Fiambalaacute presentaron diferencias significativas
entre ellas las cuales podriacutean ser uacutetiles en la deteccioacuten de cepas de campo de F
hepatica resistentes al triclabendazol (Scarcella et al 2011) Los resultados obtenidos
son altamente indicativos de la presencia de F hepatica TCBZ-resistente en animales del
valle de Fiambalaacute
Tal como lo proponen Olaechea et al (2011) las estrategias para minimizar el desarrollo
de resistencia antiparasitaria necesitan incluir el uso de combinaciones sineacutergicas de
drogas junto con el disentildeo de programas integrados de manejo y la buacutesqueda de
alternativas a los faacutermacos en particular las vacunas (Fairweather y Boray 1999)
Melero et al (1991) por primera vez en el paiacutes utilizaron triclabendazol para un
tratamiento humano en la ciudad de Coacuterdoba y a partir de ese caso se indica como
droga de eleccioacuten en las personas enfermas de Fasciolosis Se cuenta con una amplia
revisioacuten sobre el uso de TCBZ en el control de la Fasciolosis (OMS 2006) donde se
alerta sobre la gravedad que la resistencia al faacutermaco demostrada en animales se
presente en humanos especialmente en nintildeos (Hillyer et al 2001)(Esteban et al 2002)
A pesar que en diciembre de 1997 el Comiteacute de Expertos de la Organizacioacuten de las
Naciones Unidas (ONU) recomendoacute incluir al triclabendazol en la lista de drogas
esenciales (Savioli et al 1999) el triclabendazol de uso veterinario ha sido utilizado en
Argentina para el tratamiento de la Fasciolosis humana mostrando una buena eficacia y
tolerabilidad con escasos efectos adversos (Jave et al 1999)
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103 - EN LOS LIMNEIDOS
Lymnaea viator era la uacutenica especie involucrada en la transmisioacuten de F hepatica en la
provincia de Catamarca Bacigalupo la citoacute por primera vez en 1939 al encontrarla en los
alrededores de la ciudad de San Fernando del Valle En la deacutecada de 1980 fue
reconocida en trabajos arqueoloacutegicos realizados por Morton (1986) en el departamento
Santa Mariacutea mientras Ubaid (1989) la halloacute en el departamento Pacliacuten y en este estudio
en el valle de Fiambalaacute En los restantes departamentos donde se presenta la infeccioacuten
por F hepatica se desconoce queacute especie de limneido actuacutea como hospedador
intermediario ya que no se han llevado a cabo estudios epidemioloacutegicos integrales y la
prevalencia de Fasciolosis en el ganado bovino es estimada sin corroborar los datos en
los decomisos de hiacutegados en mataderos municipales
Desafortunadamente la mayoriacutea de las especies de limneidos presentan un fenotipo
similar con caracteriacutesticas morfoloacutegicas y morfomeacutetricas que hacen muy difiacutecil su
diferenciacioacuten lo que a veces incluso impide su clasificacioacuten La similitud morfoloacutegica
puede ser consecuencia para Bargues et al (2012) de una evolucioacuten convergente hacia
la adaptacioacuten a un comportamiento anfibio
1031 - Caracteriacutesticas fenotiacutepicas
El estudio fenotiacutepico realizado en el valle de Fiambalaacute ha demostrado que en la
variabilidad intraespeciacutefica de L neotropica y L viator existe superposicioacuten en todas las
caracteriacutesticas de la conchilla con excepcioacuten de la longitud maacutexima que puede ser maacutes
larga en L viator Desafortunadamente no hay ninguna conclusioacuten definitiva sobre esta
caracteriacutestica potencialmente diferente dependiendo del crecimiento de la conchilla
Ademaacutes las dos especies coexisten en las mismas colecciones de agua recordando una
situacioacuten similar que Mera y Sierra (2010) encuentra en muchos lugares de la provincia
de Mendoza donde hay superposicioacuten de especies Tambieacuten para Bargues et al (2011 a)
un fenoacutemeno que lleva a la confusioacuten entre los limneidos se debe a la imposibilidad de
distinguir entre especies y a las repercusiones para la transmisioacuten de la enfermedad
atribuidas a L truncatula y L schirazensis
Se presentan en Catamarca varias zonas endeacutemicas de Fasciolosis animal en las que no
se conoce la especie de limneido involucrada En algunos departamentos o regiones
donde pueden coexistir varios caracoles intermediarios no se sabe cuaacutel es el principal y
cuaacutel el potencial tal como Iturbe y Muntildeiz (2012) demuestran que ocurre en Cuzco Peruacute
En el valle de Fiambalaacute como biotopo de colecta se halloacute ademaacutes L neotropica que
adquiere importancia en la dispersioacuten geograacutefica y colonizacioacuten de nuevas poblaciones
de limneidos introducidos en Argentina
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1032 Importancia de las influencias ambientales
A diferencia de lo que sostienen Pino et al (1995) las condiciones climaacuteticas de la zona
de estudio que podriacutean parecer desfavorables a la presencia de limneidos (escasos diacuteas
de lluvia y temperatura maacutexima elevada) es relevante sentildealar la importancia de las
condiciones micro climaacuteticas para el desarrollo del ciclo bioloacutegico del trematodo
Para Malone et al (1998) la asociacioacuten entre la proporcioacuten de casos de Fasciolosis y la
zona de estudio estaacute relacionada con la temperatura del lugar En la mayoriacutea de las
regiones donde la enfermedad se presenta el ciclo de vida se completa maacutes raacutepidamente
porque las temperaturas pueden ser ideales para el raacutepido desarrollo del paraacutesito en su
hospedador intermedio mientras que en otras regiones pueden tardar hasta maacutes de un
antildeo para completarlo
Como consecuencia la expresioacuten de la enfermedad y la proliferacioacuten se pueden retrasar
o incluso verse minimizada Conforme a Mas-Coma (2001) las mayores altitudes no son
consideradas negativas y se atribuye a que el terreno montantildeoso presenta depresiones
con acumulacioacuten de agua especialmente en eacutepocas de alta precipitacioacuten que se tornan
las ideales para el haacutebitat del caracol hecho que no pudo demostrarse en este estudio
por sobre los 2800 msnm
La precipitacioacuten como variable es abordada en sus estudios de Fasciolosis por Malone
et al (1998) al sostener que proporciona una condicioacuten adecuada para el haacutebitat de
caracoles Aunque el mayor riesgo de ocurrencia de la enfermedad se produce en
lugares donde el valor de la precipitacioacuten anual es alto asociada con la consiguiente
humedad del suelo en la zona de estudio de esta tesis no se ha visto disminuido el
desarrollo de los caracoles a pesar de un menor volumen de precipitacioacuten
1033 - Estudios en el laboratorio
En el laboratorio las teacutecnicas de criacutea e infeccioacuten experimental de caracoles se mostraron
aptas para el mantenimiento de los moluscos y para la confirmacioacuten como hospedador
intermediario de F hepatica en la regioacuten Son teacutecnicas sencillas simples y que no
requieren muchos cuidados salvo el inconveniente de la contaminacioacuten del medio donde
se los conserva En cuanto a las incubaciones de huevos para la obtencioacuten de miracidios
utilizados en la infeccioacuten de los limneidos se obtuvieron resultados de infeccioacuten
relativamente bajos (no maacutes del 4285)
Para el diagnoacutestico de infecciones de F hepatica en su hospedador intermediario Pointer
et al (2006) utilizan la observacioacuten mediante el examen microscoacutepico de los estadios en
desarrollo dentro del molusco con o sin el aplastamiento del caracol En la tesis se
comprueba que estos procedimientos son tediosos y requieren largas horas de trabajo
ademaacutes de un ojo entrenado en la identificacioacuten parasitaria debido a que las infecciones
en el periacuteodo prepatente (sin emisioacuten de cercarias) son difiacuteciles de identificar Por otra
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parte el miracidio que ingresoacute recientemente soacutelo puede visualizarse mediante cortes
histoloacutegicos La emisioacuten de cercarias utilizada en este trabajo puede ofrecer baja
sensibilidad de deteccioacuten de los estadios tempranos del paraacutesito pero ha demostrado
resultados positivos
Otra dificultad en la deteccioacuten e identificacioacuten del trematode se produce cuando los
caracoles colectados en el campo mueren antes de llegar al laboratorio o durante el
periacuteodo de observacioacuten para la emisioacuten de cercarias La muerte del hospedador
intermediario con la consiguiente lisis tisular hace imposible la observacioacuten de las larvas
que pudieran estar presentes hecho no ocurrido en este estudio ya que el porcentaje de
limneidos muertos fue bajo
1034 - Identificacioacuten microscoacutepica y molecular
Si se considera a la microscopiacutea como la prueba de referencia que arroja los resultados
absolutos (prueba ldquogold standardrdquo) la especificidad para la teacutecnica de PCR utilizada en
esta investigacioacuten resultariacutea baja Seguacuten Cucher et al (2005) esto podriacutea interpretarse
como que la teacutecnica molecular es altamente inespeciacutefica dado el mayor nuacutemero de
positivos obtenidas por la misma Sin embargo la PCR se fundamenta en la identificacioacuten
genoacutemica del paraacutesito dentro del caracol realizando estudios detallados de la secuencia
del amplicoacuten generado y deberiacutea ser considerada tan especiacutefica como la microscopiacutea En
cuanto a la sensibilidad empleando a la microscopiacutea como prueba ldquogold standardrdquo la
PCR detecta la totalidad de los individuos infectados y un mayor nuacutemero de ejemplares
infectados imperceptibles por anaacutelisis directo De acuerdo con Hamburger et al (2004) al
considerar como verdaderos positivos a aquellos caracoles que fueron detectados por
PCR la sensibilidad del anaacutelisis parasitoloacutegico directo seraacute baja debido a que los
estadios larvales dentro del molusco pueden no detectarse Esto demuestra la menor
sensibilidad del anaacutelisis directo frente a la teacutecnica molecular la cual presentoacute un miacutenimo
de deteccioacuten comparable a una porcioacuten de un miracidio mientras que el anaacutelisis directo
se limita a detectar solamente cercarias y en algunos casos redias
Los resultados obtenidos por microscopiacutea oacuteptica son un reflejo del balance entre las
condiciones abioacuteticas que deben enfrentar el paraacutesito y su hospedador intermediario y la
iacutentima relacioacuten que se establece entre ambos una vez que el miracidio logra ingresar al
caracol Esto es asiacute porque ambos organismos son absolutamente dependientes de las
condiciones de humedad y temperatura del medio para poder sobrevivir y cumplir su ciclo
de vida y porque los valores de prevalencia obtenidos por el anaacutelisis directo
corresponden a las infecciones exitosas en las que el paraacutesito logroacute sobrevivir al sistema
de defensa interno del molusco Por lo tanto se infiere que la regioacuten del valle de
Fiambalaacute es apta para el desarrollo de ambos organismos por los factores mencionados
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anteriormente o porque la susceptibilidad del hospedador a la infeccioacuten la infectividad
del trematode o la oferta de paraacutesito son elevadas
En este trabajo se utilizoacute la teacutecnica de microscopiacutea para detectar infeccioacuten en limneidos y
se identificoacute a F hepatica a partir de la morfologiacutea de las redias y cercarias por
considerar que estas teacutecnicas son maacutes econoacutemicas para detectar infeccioacuten en caracoles
provenientes del campo En un todo de acuerdo con Fried (1997) se observoacute que las
cercarias identificadas morfoloacutegicamente como de F hepatica se enquistaron sobre
distintas superficies lo que permitioacute ratificar su identidad ya que las pocas especies de
trematodos que presentan metacercarias con este comportamiento poseen una
morfologiacutea muy distinta a la de F hepatica
El meacutetodo molecular debe ser empleado para detectar infecciones naturales aplicarse en
estudios epidemioloacutegicos a gran escala y para establecer la distribucioacuten geograacutefica del
paraacutesito estudiando nuevas zonas sin reportes de enfermedad Tambieacuten puede aplicarse
a determinar la prevalencia de infeccioacuten El liacutemite de deteccioacuten obtenido puede ser
considerado satisfactorio desde el punto de vista bioloacutegico ya que seguacuten la teacutecnica
desarrollada por Kaplan et al (1995) un umbral de deteccioacuten miacutenimo de 1ng es suficiente
para detectar la presencia de un miracidio a las 4 horas post-infeccioacuten Por lo tanto la
teacutecnica utilizada en esta tesis posee la sensibilidad necesaria para detectar al paraacutesito de
forma temprana en su hospedador intermediario
Aunque la determinacioacuten de la infeccioacuten por microscopiacutea y morfologiacutea posee ciertas
ventajas frente a otras teacutecnicas maacutes modernas como las de PCR ya que permiten
identificar distintos estadios larvales y tambieacuten se pueden reconocer infecciones exitosas
a partir del hallazgo de formas infectivas como lo demostraron Caron et al (2008) la
identidad de las formas inmaduras tambieacuten pudo ser confirmada por PCR
A pesar que Rognlie et al (1996) observaron con respecto al hospedador intermediario
que F hepatica es capaz de propagarse infectando unos pocos caracoles dentro de una
poblacioacuten seguramente debido a su gran capacidad de multiplicacioacuten asexual dentro del
hospedador intermediario los limneidos observados en el laboratorio no presentaron
numerosas formas intermedias que permitieran reconocerlas faacutecilmente
La prevalencia de infeccioacuten natural por F hepatica registrada en limneidos durante el
estudio fue de 25 considerando soacutelo a los caracoles estudiados en el Instituto Malbraacuten
Este nivel de infeccioacuten es similar al 2 registrado en L truncatula en la provincia de
Neuqueacuten por Rubel et al (2005) y en L viatrix en la provincia de Mendoza por Issia et al
(2008) y superior al 07 registrado en L viatrix en los valles Andino-Patagoacutenicos de la
provincia de Chubut por Kleiman et al (2007) o a los 014 y 122 presentados por
Ueta (1980) en Brasil Estos valores estaacuten dentro del rango de variabilidad que presenta
la prevalencia de infeccioacuten natural por F hepatica en su hospedador intermediario que
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para Malone et al (1984) y Rognlie et al (1996) oscila entre 001 y 883 no soacutelo
entre especies de caracoles sino para una misma especie entre regiones como afirma
Gutieacuterrez et al (2005) Esta variabilidad tambieacuten refleja la dificultad para comparar el rol o
la importancia de las distintas especies de limneidos en la transmisioacuten de F hepatica Lo
que siacute es posible afirmar es que con bajas prevalencias en el caracol se observan
prevalencias mayores a 25 en el hospedador definitivo como tambieacuten lo demuestran
Kleiman et al (2007) Rubel et al (2005) y esta tesis lo cual refleja la eficiencia en la
transmisioacuten de F hepatica
Esta comparacioacuten permite concluir que en la zona de estudio Lymnaea spp es un
hospedador intermediario capaz de multiplicar al paraacutesito exitosamente y asegurar la
endemicidad de la infeccioacuten Las caracteriacutesticas que le ayudan a F hepatica a adaptarse
y establecerse exitosamente en ambientes con distintas condiciones son como afirman
DeKock et al (1989) su capacidad para reproducirse por autofecundacioacuten su alto
potencial reproductivo y su tolerancia a un amplio rango de temperaturas como
demostraron Harris y Charleston (1977 c)
1035 - Caracteriacutesticas moleculares
Las secuencias obtenidas demuestran la presencia de L neotropica en el valle de
Fiambalaacute lo que confirma el primer hallazgo de esta especie en Catamarca y en las
provincias del noroeste El hallazgo antildeade complejidad a la transmisioacuten y a la
epidemiologiacutea de Fasciolosis Las caracteriacutesticas ecoloacutegicas de este limneido que vive
en colecciones pequentildeas y superficiales de agua frecuentadas por el ganado sugieren
que puede ser llevado de un lugar al otro permaneciendo en el barro seco de las pezuntildeas
de los animales que las transportan de modo similar a como plantea Mas-Coma et al
(2009) ocurre con L truncatula
L viatrix L truncatula y L neotropica son limneidos muy similares desde el punto de
vista fenotiacutepico incluyendo para Samadi et al (2000) y Pointier et al (2006) las
caracteriacutesticas de la conchilla y la anatomiacutea del caracol o caracteriacutesticas ecoloacutegicas
seguacuten Euzeby (1971) Mera y Sierra (2001) y Ciocco y Scheibler (2008) Esta semejanza
planteoacute un gran problema en el trabajo de campo al no poder tener manera de
diferenciarlos por lo que se recurrioacute a obtener secuencias del marcador de ADN para
poder distinguir entre una y otra especie
Por otra parte el problema de la diferenciacioacuten tambieacuten se refiere a varias teacutecnicas
moleculares que no muestran suficiente precisioacuten Por ejemplo las teacutecnicas moleculares
que se basan en el gen 18S ARNr o partes de eacutel como la heacutelice E10-1 de la regioacuten
variable V2 que es uacutetil para la diferenciacioacuten de limneidos europeos utilizada por
Bargues y Mas-Coma (1997) evidentemente no son uacutetiles en la Argentina debido a la
existencia de especies como L viator y L neotropica que presentan ideacutentica secuencia
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18S En consecuencia la teacutecnica recientemente propuesta por Duffy et al (2009) basada
en la secuencia 18S en estrategia de PCR en tiempo real para la discriminacioacuten raacutepida
entre las principales especies de limneidos de Argentina no se puede aplicar porque no
distingue entre estas dos especies
Todo sugiere que probablemente errores de clasificacioacuten de limneidos se pueden incluir
en varios de los estudios sobre Fasciolosis realizados en Argentina en la que L viator
participa especialmente en la transmisioacuten de la enfermedad Muchos de estos trabajos
probablemente incluiacutean L neotropica o incluso L truncatula Por lo tanto se necesitan
anaacutelisis moleculares apropiados para evaluar la distribucioacuten geograacutefica de cada una de
estas tres especies de limneidos en Argentina para las que aparecen ITS-2 ITS-1 y cox1
como los marcadores maacutes uacutetiles
1036 - Lymnaea neotropica
Las poblaciones de L neotropica del valle de Fiambalaacute presentan secuencias ideacutenticas
para los cuatro marcadores de ADN utilizados incluyendo dos nuevos haplotipos de ITS-
1 y cox1 (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) El nuevo haplotipo ITS-1 (Lneo-HB) no es de
utilidad dada la uniformidad hasta ahora detectada en el nivel de los separadores de
ADNr nuclear Del ITS-1 soacutelo se conoce el haplotipo (Lneo-HA) previamente informado
de Lima (localidad tipo) (Bargues et al 2007 a) y Cajabamba (Bargues et al 2012) en el
Peruacute y tambieacuten en Perdriel Departamento de Lujaacuten de Cuyo Mendoza Argentina (Mera
y Sierra et al 2009) El nuevo haplotipo del marcador de ADN mitocondrial (Lneo-cox1e)
se diferencia de otros haplotipos cox1 descritos para la especie en paiacuteses como Peruacute
Venezuela y Argentina Este uacuteltimo nuevo haplotipo Lneo-cox1e soacutelo muestra identidad
con la secuencia cox1 del NTC2 aislada (JN872453) e informada anteriormente para la
misma especie de limneidos en Mendoza (Standley et al 2013) aunque el fragmento
disponible a partir de ese aislamiento es maacutes corto (655 pb vs 672 pb)
Los haplotipos encontrados en los otros dos marcadores en L neotropica uno en ADNr
ITS-2 (Lneo-H1) y el otro en el ADNmt 16S (Lneo-16SA) fueron informados en Perdriel
(Mera y Sierra et al 2009) Tambieacuten se detectaron estos dos haplotipos ITS-2 y 16S en el
Peruacute en la localidad de Lima (Bargues et al 2007 a) y tambieacuten en Cajamarca (Bargues
et al 2012)
1037 - Lymnaea viator
De L viator se han encontrado en esta investigacioacuten 4 nuevos haplotipos ADNr ITS-2 y
ITS-1 y ADNmt 16S y cox1 (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) La deteccioacuten en la
poblacioacuten de limneidos de un nuevo haplotipo en todos los marcadores estudiados es
realmente sorprendente Previamente en diferentes localidades de Chile Argentina y
Uruguay fueron descritos haplotipos y se aislaron secuencias de los mismos marcadores
de ADN (Veacutease anexo Tablas 16-19 pp 177-180)
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El anaacutelisis de secuencias de los 4 marcadores de ADN de L neotropica y L viator
disponibles en las bases de datos de secuencias muestra que varias secuencias fueron
depositadas sin verificar antes si la misma ya estaba alliacute Por ejemplo en el nivel ITS-2
los nuacutemeros de secuencia de adhesioacuten HQ283265 y JN614465 correspondientes a L
viator de Riacuteo Negro Argentina son ideacutenticos a la secuencia AM412224 de L viator
ventricosa H1 de la localidad tipo que es tambieacuten de Riacuteo Negro (Bargues et al 2007 a)
Del mismo modo el nuacutemero de ITS-1 secuencia de adhesioacuten HQ283254 es ideacutentica a la
secuencia AM412227 de L viator ventricosa HA de la localidad tipo de Riacuteo Negro
(Bargues et al 2007 a) Situaciones similares se encuentran en secuencias de ADNmt tal
como la secuencia de L neotropica 16S JN872473 que es ideacutentica a HE610433 y que es
el haplotipo Lneo-16SA de la localidad tipo de la especie (Bargues et al 2012) Tambieacuten
la secuencia cox1 de L viator nuacutemero JN614397 de Riacuteo Negro es ideacutentica a AM494010
de Lvia-cox1a de la localidad de Riacuteo Negro (Bargues et al 2007 a) Ademaacutes las
secuencias depositadas en las bases de datos como pertenecientes a L Viator ITS-1
(JF960165 y JF960166) en realidad pertenecen a L neotropica aunque la adscripcioacuten de
las especies fue corregida en la publicacioacuten (Sanabria et al 2013)
Desde el punto de vista taxonoacutemico-sistemaacutetico hay que sentildealar que estas 2 especies de
limneidos han sido re-atribuidas al geacutenero Galba en la literatura reciente (Standley et al
2013) Este cambio parece ser precipitado dadas las diferencias en los acuerdos de rama
que aparecen en diferentes aacuterboles filogeneacuteticos en funcioacuten de las especies incluidas en
los anaacutelisis (ver Bargues et al 2011 a) Por lo tanto ambas especies se mantienen aquiacute
en el geacutenero Lymnaea sensu lato conforme a artiacuteculos anteriores sobre el mismo tema
(Bargues et al 2007 a 2011 a b c 2012)
El hallazgo de un alto nuacutemero inusual de haplotipos de ADN en ambas especies de
limneidos y los factores climaacuteticos extremos (casi total falta de precipitaciones y de
humedad) impropio de F hepatica y del desarrollo de los caracoles de agua dulce
demuestran que los focos de transmisioacuten son completamente aislados A su vez se
puede concluir que tanto los limneidos como F hepatica llegaron al valle a traveacutes de la
introduccioacuten de ganado Por otra parte las diferencias de ADN en relacioacuten con otras
poblaciones de L neotropica y de L viator estudiadas previamente en Argentina
sugieren que este fenoacutemeno de introduccioacuten fue independiente de los movimientos de
extensioacuten que permitieron que estas dos especies de limneidos se expandan por el paiacutes
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CONCLUSIONES
Los hallazgos del estudio sobre la epidemiologiacutea de la Fasciolosis realizado en el valle de
Fiambalaacute y los correspondientes anaacutelisis en seres humanos animales y hospedadores
intermedios han permitido establecer ciertos hechos y alcanzar una serie de conclusiones
que a continuacioacuten se enumeran
La endemia poblacional de Fasciolosis estariacutea determinada por los siguientes
factores a) la presencia de reservorios en animales infectados b) los caracoles
limneidos susceptibles (hospedadores intermediarios) que amplifican la
produccioacuten de cercarias
El nuacutemero de casos de Fasciolosis humana diagnosticados en el valle de
Fiambalaacute es mucho mayor que los encontrados en otras regiones del paiacutes
transformaacutendola en una zona endeacutemica donde los ejemplares de F hepatica y los
hospedadores intermedios presentan caracteriacutesticas morfoloacutegicas y moleculares
particulares
Debido a la importancia cliacutenica y patogenicidad de la Fasciolosis los anaacutelisis de
prevalencia obtenidos permiten concluir que la presencia de Fasciolosis humana
debe ser considerada como una patologiacutea infecciosa de gran importancia en
Salud Puacuteblica
La prevalencia en seres humanos obtenida mediante estudios inmunoloacutegicos
convierten a la regioacuten estudiada en la de prevalencia maacutes elevada de la Repuacuteblica
Argentina y debe ser considerada como hiperendeacutemica
La comparacioacuten de diferentes metodologiacuteas de diagnoacutestico permite afirmar que
con la teacutecnica de ELISA se logroacute el mayor nuacutemero de diagnoacutesticos demostrando
relaciones estadisticamente significativas con la edad y la eosinofilia
El presente estudio sobre la epidemiologiacutea de la Fasciolosis humana abarcoacute 305
pacientes siendo la mayor casuiacutestica estudiada en Argentina y reveloacute una mayor
predominancia en la edad comprendida entre 5 y 19 antildeos
El dolor abdominal tipo coacutelico en epigastrio e hipocondrio derecho es el siacutentoma
maacutes frecuente en Fasciolosis ya sea en la fase aguda o croacutenica de la
enfermedad tanto en nintildeos como en adultos
La hepatomegalia y la eosinofilia caracteriacutesticas de la fase aguda no estaacuten
presentes necesariamente en todos los pacientes croacutenicos por lo que su ausencia
no descarta la posibilidad de esta parasitosis en estos casos
La interpretacioacuten de las manifestaciones cliacutenicas el uso de teacutecnicas de
diagnoacutestico por imaacutegenes la aplicacioacuten de meacutetodos de diagnoacutestico etioloacutegico
mediante microscopiacutea en materiales de heces y el uso de herramientas aplicadas
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a diferentes especiacutemenes bioloacutegicos permitieron mediante su utilizacioacuten
sistemaacutetica e integrada realizar el diagnoacutestico e identificacioacuten de Fasciolosis
El estudio ha estimado por primera vez en la provincia de Catamarca una alta
prevalencia de Fasciolosis en la poblacioacuten animal -cameacutelidos sudamericanos
mulares y rumiantes menores- con la teacutecnica de SDSS que permitioacute una faacutecil
identificacioacuten de huevos en heces
El uso integrado de diversas teacutecnicas microscoacutepicas permitioacute una mejor
comprensioacuten de la morfologiacutea de F hepatica Los resultados demostraron
diferencias en las muestras de cada localidad principalmente en la distribucioacuten y
cantidad de espinas en el tegumento
El marcador CO1 muestra que los ejemplares adultos extraiacutedos de hiacutegados de los
animales no se diferencian de otros en las comparaciones efectuadas en distintas
localizaciones
El uso de faacutermacos antihelmiacutenticos es la uacutenica herramienta que se dispone en el
presente frente a Fasciolosis aunque el fenoacutemeno de resistencia encontrado es
un hecho altamente preocupante y es necesario definir nuevas estrategias de
tratamiento
Por los resultados obtenidos se concluye que las condiciones ambientales a
pesar de sus caracteriacutesticas extremas en el valle de Fiambalaacute son favorables
para la mantencioacuten y desarrollo de los caracoles en las zonas donde se localizan
fuentes permanentes de agua
Las teacutecnicas de criacutea e infeccioacuten experimental se mostraron aptas para el
mantenimiento del molusco en el laboratorio y para la confirmacioacuten de la infeccioacuten
natural y experimental de los limneidos con formas larvarias de F hepatica
La prevalencia general de limneidos naturalmente infectados en colectas
realizadas en las vegas estudiadas denota la expansioacuten de F hepatica en el valle
de Fiambalaacute a niveles preocupantes
Las especies de limneidos halladas no se diferencian por su aspecto externo
(morfologiacutea de la conchilla) y fueron necesarios estudios moleculares para
diferenciarlos
Se demostroacute que los caracoles recolectados en la zona de estudio hospedadores
intermediarios de F hepatica son de las especies L viator y L neotropica las
que cohabitan en los mismos biotopos
El hallazgo de L neotropica constituye el primer registro en Catamarca y la
Regioacuten Noroeste Argentina
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La infeccioacuten natural por F hepatica en L neotropica constituye el primer
reconocimiento para la Argentina
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RECOMENDACIONES
Las soluciones para los problemas mencionados no pueden ser pensadas desde una
perspectiva uacutenica ni desvinculada del aacutembito regional La situacioacuten hallada en el aacuterea
indica que para el estudio de Fasciolosis es imperioso el trabajo en equipos
multidisciplinarios que aborden el tema desde un enfoque integral
Es necesario contar en los Centros de Salud con teacutecnicas de diagnoacutestico de mayor
sensibilidad y especificidad tanto para la cliacutenica para determinar casos agudos o como
prueba de tamizaje La ausencia de implementacioacuten de meacutetodos diagnoacutesticos confiables
en el Aacuterea Programaacutetica es el principal factor que lleva a subestimar esta zoonosis
Los enfermos infectados por F hepatica muchas veces pasan por los servicios cliacutenicos
sin ser jamaacutes diagnosticados resultando preciso corregir tan grave deficiencia Los
pacientes que presentan dolor abdominal y una alta eosinofilia deben ser
cuidadosamente estudiados con el fin de descartar esta parasitosis
Se comproboacute que Fasciolosis es endeacutemica en la regioacuten y la situacioacuten debe ser
reconocida como una emergencia de Salud Puacuteblica para la aplicacioacuten de las teacutecnicas
diagnoacutesticas de sedimentacioacuten raacutepida y ELISA y agilizar la implementacioacuten de la terapia
farmacoloacutegica con triclabendazol (Egatenreg) o el uso de futuras drogas en casos de
resistencia
Por otro lado aunque no es propoacutesito de esta tesis es difiacutecil estimar el impacto
econoacutemico de la Fasciolosis humana -que se demostroacute afecta principalmente a los nintildeos-
pero los efectos de la infeccioacuten y las secuelas no solo tienen un impacto econoacutemico en el
Sistema de Salud sino tienen un impacto negativo considerable en el desarrollo y la
salud de los pacientes infectados especialmente en los grupos etarios maacutes joacutevenes
La informacioacuten obtenida contribuye a identificar el riesgo en la regioacuten y deberiacutea permitir
en adelante dirigir las actividades de prevencioacuten y control asiacute como estimular al personal
de salud en la buacutesqueda de este diagnoacutestico durante su actividad asistencial
La infeccioacuten por F hepatica afecta significativamente tanto a los animales como al ser
humano en esta regioacuten y se requiere que las autoridades de los Ministerios
correspondientes tengan una mayor participacioacuten en el control de esta parasitosis tanto
desde el punto de vista educativo como para controlar el efecto que tienen los animales
como hospedadores definitivos en la diseminacioacuten de la Fasciolosis puesto que estaacuten
expuestos a constante reinfeccioacuten
Para tratar de interrumpir la transmisioacuten de la Fasciolosis en los seres humanos se
requieren dos medidas paralelas La primera consiste en establecer programas eficaces
de Salud Puacuteblica Veterinaria para contener las fuentes de infeccioacuten en los animales La
segunda consiste en educar a las personas que viven en las aacutereas endeacutemicas sobre los
riesgos de consumir las plantas acuaacuteticas no cocidas agua y sobre la importancia de la
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eliminacioacuten segura de los desechos humanos Ademaacutes se propone gestionar
calentadores solares individuales que permitan en cada vivienda obtener agua hervida
para consumo e higiene de vajillas y verduras
Se precisa el control de la Fasciolosis animal que concurrentemente incluya el
tratamiento masivo del ganado para evitar la infeccioacuten humana Los resultados sugieren
que de no contar con planeamientos estrateacutegicos teacutecnicamente bien estructurados la
probabilidad de emergencia de paraacutesitos resistentes a triclabendazol es alta y deberiacutea
tratarse a los animales con fasciolicidas alternativos como clorsulon o closantel que han
mostrado alta efectividad de cura de la infeccioacuten La gran dependencia de un uacutenico
faacutermaco pone liacutemites y torna necesarias estrategias de tratamiento de la Fasciolosis En
caso que la resistencia se desarrolle auacuten maacutes la perspectiva seraacute alarmante
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Tabla 11 Caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina de acuerdo con los diferentes sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizados
Foco de transmisioacuten Valle de Fiambalaacute
Coordenadas 27deg29acute52acuteS 67deg35acute 535uml W
Altitud en metros 1630
Clase Koeppen BWk B = Clima aacuterido
D = Deseacutertico
k = Friacuteo
Clima Budyko Deseacutertico Iacutendice de sequiacutea por radiacioacuten 9236 Budyko evaporacioacuten en mmantildeo 151 Budyko escorrentiacutea en mmantildeo 0 Budyko evaporacioacuten en 100 Budyko escorrentiacutea en 0
Aridez Aacuterido Iacutendice de aridez 009 Iacutendice de humedad en -91 Iacutendice De Martonne 6 Deacuteficit de precipitacioacuten en mmantildeo 1547
Iacutendice continental de Gorczynski 385
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Tabla 12 Datos comparativos de los tamantildeos obtenidos en ejemplares de F hepatica
del valle de Fiambalaacute con las de diferentes lugares estudiados
Paraacutemetros Catamarca Salta Cordeiro Larvas Galicia
Largo del cuerpo (mm) Ancho del cuerpo (mm)
2438 plusmn 223
1044 plusmn 129
1492 plusmn 182
878 plusmn 080
2068 plusmn 268
1073 plusmn 186
3447 plusmn 337
1233 plusmn 206
1625 plusmn 20
971 plusmn 125
Razoacuten LCAC Largo del cono(mm) Ancho del cono (mm) Aacuterea de la ventosa oral(mm) Aacuterea de la ventosa ventral(mm) Distancia VO- VV (mm)
237 plusmn 034
261 plusmn 030
343 plusmn 046
041 plusmn 007
110 plusmn 036
214 plusmn 022
171 plusmn 022
180 plusmn 023
285 plusmn 032
042 plusmn 004
120 plusmn 015
139 plusmn 018
196 plusmn 031
314 plusmn 085
250 plusmn 063
039 plusmn 006
090 plusmn 037
144 plusmn 021
286 plusmn 048
365 plusmn 060
481 plusmn 035
046 plusmn 016
120 plusmn 018
258 plusmn 020
------------------
174 plusmn 025
317 plusmn 032
041 plusmn 012
098 plusmn 028
------------------
L viator
17
4
Tabla 13 ADN ribosomal nuclear y haplotipo de ADN mitocondrial para la identificacioacuten de coacutedigo L neotropica y L viator colectados en el
valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina
Especies de limneidos
Poblaciones ADNr ITS-2 ADNr ITS-1 ADNmt 16S ADNmt cox1
Lugar H Acc No H Acc No H Acc No H Acc No
Valle de Fiambalaacute Tinogasta
Nomenclatura de la combinacioacuten H
L neotropica Provincia de Catamarca 1 AM412225 B KT215347 16S-
A HE610433 e KT215350 Lneo-1B16SAcox1e
Valle de Fiambalaacute Tinogasta
Provincia de Catamarca 3 KT215348 C KT215349
16S-
B KT215352 d KT215351 Lvia-3C16SBcox1d
Nota H = haplotipo = Nuevos haplotipos para las correspondientes especies de limneidos = Haplotipos solamente preliminares debido a la secuencia
del gen incompleto
175
17
5
Tabla 14 Diferencias de nucleoacutetidos encontradas en el fragmento de la secuencia del gen 16S ADNmt de las poblaciones de L neotropica
estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos 16S aislados de la misma especie disponibles en GenBank
L neotropica haplotipos y aislamientos Paiacuteslugar Posicioacuten del Nucleoacutetido Largo GenBank (pb)
33 3333 1667777767 7777 4690124990 1348
L neo-16SA L neo-16SA
L neo-16S Aislada NtS1 L neo-16S Aislada NtS2 L neo-16S Aislada NtS3
L neo-16S Aislada NtS4
Peruacute Lima Cajamarca Argentina Tatoacuten Catamarca
Argentina Mendoza Argentina Mendoza
Argentina Mendoza Chivilcoy
Argentina Chivilcoy
TTCTTGCCCG A--G --
AAAAAAAT T-- Ghellip-- --
CTT TTGT
425 435 429 429 429
431
HE610433 HE610433 JN872471 JN872472 JN872473
JN872474
Nota Posicioacuten = nuacutemeros referidos a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con M EGA 60 = Ideacutenticas - =
Indeles = Trabajo propio Coacutedigos de haplotipos solamente provisionales debido a secuencias incompletas del gen
176
17
6
Tabla 15 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontradas en la secuencia de fragmento ADNmt del gen cox1 de las poblaciones de L
neotropica estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos cox1 y aislamientos de la misma especie disponibles en
GenBank
L neotropica haplotipos
and aislamientos
Paislocalidad Nucleoacutetido posicioacuten Largo (bp)
Amino acido posicioacuten
GenBank
11 1111122222 2222233333 3333333333 4444444444 5555555555 55666666 1122
233334455 5667788912 4788912244 4777701233 4566777899 0222567889 0122335778 88333456 12722
9401392814 7076827676 4469865803 9136968139 5703358113 5369984032 1623132032 68039210 12315823
L neo-cox1a Peru Lima Peru
Cajamarca L neo-cox1b Argentina
Mendoza L neo-cox1c Venezuela
Carabobo L neo-cox1d Venezuela
Falcon L neo-cox1e Argentina
TatonCatamarca
TCAACCGAGT AGTCTTATTT ATTACAAATT ATAAAATTAA CTTAGAGACT ATGATTTTAG GGTCTCGAGA TAATTTTG 672 DIGIGAW F AM494008
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L neo-cox1
aislada NtC3 Argentina Mza
B Aires Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 ---- JN872454
L neo-cox1 aislada NtC2
L neo-cox1
Argentina Mza Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphellipChelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 ---- JN872453 Argentina Mza Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphellipThelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 --V-- JN872452
aislada NtC1
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizadas con MEGA 60 =
Ideacutenticas iquest= Aminoaacutecido indeterminado - = No secuenciado = Trabajo actual Coacutedigos soacutelo provisionales debidos a secuencias incompletas del Haplotipo
del gen
177
L via aislada VxI3 Argentina Lima Mendoza GCTTGC------- ------------------- --------C helliphelliphellip-- -------------- ----------------
L viaventricosa H1 Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT------------- CTCGC helliphellip--
L via aislada LVX3 Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT-------------- CTCGC helliphelliphellip-- GCTTGCTTGC TT-------------- CTCGC hellip hellip helliphellip-------
L viatrix Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT-------------- -------- helliphelliphelliphelliphelliphellip hellip--- ----------------
423 JX536272 451 AM412224 451 JN614465 445 HQ283265
L via aislada VxI1 Argentina Agua Escondido Mza GCTTGCTTGC TT--------------- GCC--- ------------------ ------------------- --------------- 435 JX536268 L via aislada VxI2 Argentina Azufre Mendoza GCTTGCTTGC TTGCTTGCTT -------- --- ----------------- ------------------- ---------------- 416 JX536269 L via aisalda VxI4 Argentina Linero Mendoza - 436 JX536273
17
7
Tabla 16 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia ADNr ITS-2 de L viator en el valle de Fiambalaacute y otros de Argentina
y haplotipos ITS-2 aislados en la misma especie disponibles en el GenBank
L viator haplotipos Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank
y aislamientos (pb)
134444 4444444444 4444444444 4444444444 5555666666 6666777777 8888690223 3333333334 4444444445 5555555556
6789012345 6789012345 1234241130 1234567890 1234567890 1234567890
L via-H3
L via-H2 Argentina Tatoacuten Catamarca
Chile Casa Blanca Valparaiacuteso
-------------------- -------------------- ---- --GTGTTT TATATTATTA TCTTCTTTCT TTTTTTTCTC GCTTGCTT--- ----------------- ------- helliphellip-
436
443 KT215348
JN051366
Nota Posicioacuten = nuacutemeros referidos a posiciones variables obtenidos en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con MEGA 60 =
Ideacutenticas El sombreado corresponde a las posiciones de microsateacutelites - = Supresiones (en el aacuterea de microsateacutelites) = Trabajo actual =
secuencias ITS-2 incompletas en el 3
178
17
8
Tabla 17 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia del ADNr ITS-1 de L viator colectados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de
Argentina y haplotipos ITS-1 y aislamientos disponibles en GenBank
L viator haplotipos y Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank aislamientos
111111222234 1 1111111112 2222222223 3333333334 444446000034277729
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 123451345683278988
(pb)
L via-HA L via-HB L via-HC L viatrix L via Aislada LVX3 L via Aislada Paysandu L via Aislada VxI1 L via Aislada VxI2 L via Aislada VxI3 L via Aislada VxI4
Argentina Rio Negro Chile Casa Blanca Valparaiacuteso
Argentina Tatoacuten Catamarca Argentina Rio Negro Argentina Rio Negro
Uruguay Paysanduacute Argentina Agua Escondido Mendoza Argentina
Azufre Mendoza Argentina Lima Mendoza
Argentina Linero Mendoza
ATCATTAACG AGTAGCAACA CAACATAACC TTACACTCGC ACAAGG----GCC----A
A ATTGTTGA--
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipA ----TTTGA--
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip--------------
A hellip----T---------
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip----TGAC
---------- GAGTAGC A ----TTGA-- ---------- ---------- ---------- ---------------------------------------------------------- -----C----TTGA-- ---------- ---------- - Ahelliphellip ----TTGA--
---------- --------- Ahelliphellip-----ATTGA-
-
568
574 570 568
567 572
560 525 549
550
AM412227
JN051368 KT215349 HQ283254
JN614428 JF960167
JX536268 JX536269 JX536272 JX536273
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con MEGA 60 =
Ideacutenticas El sombreado corresponde a la posicioacuten de microsateacutelites - = Supresiones = Trabajo actual = ITS-2 secuencias incompletas 5 final
179
17
9
Tabla 18 Diferencias de nucleoacutetidos que se encuentran en la secuencia del gen ADNr 16S y fragmentos del gen
mitocondrial de L neotropica y L viator estudiados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y haplotipos 16S
aislados en la misma especie disponibles en el GenBank
L neotropica y Viator haplotipos y Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank aislamientos (pb)
11112 233333333 116667 77777823394 607777778
346890 12345096982 122345681
L neotropica haplotipo L neo-16SA L neotropica haplotipo L neo-16SA
G neotropica aislado NtS1 G neotropica aislado NtS2 G neotropica aislado NtS3 G neotropica aislado NtS4
Peruacute Lima Peruacute Cajamarca Argentina Tatoacuten Argentina
Mendoza Argentina Mendoza
Argentina Mendoza Chivilcoy
Argentina Chivilcoy
CTTCCTT-GA CCAAG-C-TC GA-T-G -hellip helliphellip--hellip hellip-- hellipAAAAmdashA AA--hellip TT--- G--- --hellip ---- --- helliphellip-- hellip----
C--- helliphellip--T TTTGT
425 437 429 429 429
431
HE610433 HE610433 JN872471 JN872472 JN872473
JN872474
L viator haplotipo Lvia-16SA Chile Casa Blanca Valparaiacuteso --- helliphellipGGATT-C ---- 426 HE610434 L viator haplotipo Lvia-16SB Argentina Tatoacuten Catamarca --- helliphellipGGA-TTC ---- 438 KT215352 G viatrix aislado VxS2 Argentina Agua Escondido amp Azufre Mendoza --- helliphellipGGA-T-C ---- 429 JN872460 G viatrix aislado VxS9 Argentina Cholila Chubut Ghelliphellip--- helliphellipGGA-T-C hellip---- 429 JN872467 G viatrix aislado VxS8 Argentina Linero Mendoza --- GhellipA--T-C ---- 429 JN872466 G viatrix aislado VxS10 Argentina Lima Mendoza hellipChellip--- GhellipA--T-C ---- 429 JN872468 G viatrix aislado VxS4 Argentina Azufre Mendoza AA--- hellipGGA----T-C ---- 429 JN872462 G viatrix aislado VxS12 Argentina Linero Mendoza --- GAGA----T-C hellip---- 429 JN872470 G viatrix aislado VxS6 Argentina Azufre Mendoza GGAC --hellipGGA--T-C TT----- 429 JN872464 G viatrix aislado VxS5 Argentina Azufre Mendoza AAAA GGA--T-C hellip---- 430 JN872463 G viatrix aislado VxS11 Argentina Linero Mendoza GAC --hellipGA--T-C T TT--- 429 JN872469 G viatrix aislado VxS3 Argentina Azufre Mendoza GGhelliphellipGAC --helliphellipGGA-T-C TT---- 429 JN872461 G viatrix aislado VxS7 Argentina Azufre Mendoza hellipCAAAA GGA-T-C -- 430 JN872465 G viatrix aislado VxS1 Argentina Agua Escondido Mendoza GA AhellipGGA-T-CT TTA--- 431 JN872459
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizadas con
MEGA 60 = Ideacutenticas - = Indel = Trabajo actual Coacutedigos de Haplotipos soacutelo provisionales debido a secuencias incompletas del gen
180
1
1234567890 122222 2333334444 45556
1111111112 2222222125 7789212233 4447991678 84882 66666 6666 66666 6677
1234567890 1234567232 2568438905 3464259792 70230 34567 8901 1234567890 693523
18
0
Tabla 19 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontrados en la secuencia del fragmento de ADNmt del gen cox1 de L viator
estudiado en el valle de Fiambalaacute de otros sitios de Argentina y haplotipos cox1 aislados de la misma especie disponibles en el
GenBank
L viator haplotipos y aislamientos
Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Larg o
(pb)
Posicioacuten del aminoaacutecido
1122
1 276922
GenBank
L via-cox1a Argentina Riacuteo Negro ATATTGGTAC TCTATATATA ATCTTTGCCC CCGCTCGATG CCCGTTTCTA CTCTTTGATT TTTT 672 DIGTLYMIFG LSTLWF AM494010 L via-cox1b Chile Casa Blanca Valparaiacuteso T T helliphellipTThelliphellipA helliphelliphellipCCTC CTGChelliphellip hellip 672 helliphelliphellip KC JN051373 L via-cox1c Chile Casa Blanca Valparaiacuteso hellipT helliphelliphelliphellipT helliphellipTThelliphellipA helliphelliphellipCCTC TCTGChelliphellip hellip 672 helliphelliphellip KIC JN051374 L via-cox1d Argentina Tatoacuten Catamarca T T hellipTT TAhelliphelliphelliphellipC 672 hellip F KT215351 L via aislado VxC1 Argentina-Mendoza ---------------- hellipT T TAT helliphelliphellip TAhelliphelliphellipCG ---------- ------- 654 ------helliphellip F-- JN872449 L via aislado VxC2 Argentina-Mendoza ---------------- T helliphelliphelliphellipT TT TAhelliphelliphellipC ---------- ------- 654 ------ F-- JN872450 L via aislado VxC3 Argentina Chubut ---------------- helliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip hellipC hellip ---------- -------- 654 ------ -- JN872451 L via aisladio LVX2 Argentina Rio Negro ------------------ ------------------ -------------------- helliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphellip 644 ------------------ JN614397
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten hecha con MEGA 60 = Ideacutenticas = Am inoaacutecido
indeterminado - = No secuenciado = Trabajo actual El sombreado corresponde a fragmentos maacutes cortos Coacutedigos soacutelo provisionales Haplotipo
debido a secuencias incompletas del gen
181
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Cod Haplotipos y aislamientos paraITS-1 000 000 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 1 KJ425594 L neotropica aislada Zavaliacutea 000 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 2 KJ425590 L neotropica aislada General Loacutepez 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 3 AM412228 L neotropica Lneo-HA 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 4 KJ425591 L neotropica aislada Caseros
1 AM412225 L neotropica Lneo-H1 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 5 J5F960165 L viator aislada San Pedro1 2 KJ425597 L neotropica aislada Zavaliacutea 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 6 KJ425595 L neotropica aislada Caseros 3 KJ425598 L neotropica aislada Caseros 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 7 KJ425593 L neotropica aislada Constitucioacuten 4 KJ425596 L neotropica aislada Constitucioacuten 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 8 KT215347 L neotropica Lneo-HB 5 JF514089 L neotropica Lneo-H2 400 400 400 400 000 100 100 100 000 100 200 100 200 9 AM412227 L viator ventricosa Lvia-HA 6 JN051366 L viator Lvia-H2 1300 1300 1300 1300 1600 100 100 100 000 100 200 100 200 10 HQ283254 L viator 7 JX536268 L viator aislado VxI1 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 000 100 000 100 000 100 11 JN614428 L viator aislada LVX3 8 JX536272 L viator aislado VxI3 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 000 100 000 100 000 100 12 JN051368 L viator Lvia-HB 9 JN614465 L viator aislado LVX3 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 100 000 100 000 100 13 JX536268 L viator aislada VxI1 10 HQ283265 L viator 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 000 100 200 100 200 14 JF960167 L viator aislada Paysanduacute 11 AM412224 L viator Lvia-H1 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 000 000 100 000 100 15 JX536272 L viator aislada VxI3 12 JX536269 L viator aislado VxI2 1400 1400 1400 1400 1700 300 300 400 400 400 400 100 200 16 JX536273 L viator aislada VxI4 13 JX536273 L viator aislado VxI4 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 100 100 100 100 300 100 17 JX536269 L viator aislada VxI2 14KT215348 L viator Lvia-H3 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 100 100 100 100 300 000 18 KT215349 L viator Lvia-HC
Cod Haplotipos y aislamientos para ITS-2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
18
1
Tabla 20 Distancias por pares entre secuencias de haplotipos ITS-2 e ITS-1 aislados de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60
Nota Por abajo de la diagonal = diferencias de caracteres totales a las ITS-2 por encima de la diagonal = diferencias de caracteres totales a las ITS-1 Las
correspondencias del coacutedigo de Haplotipo se enumeran en la Tabla 13
182
18
2
Tabla 21 Distancias por pares entre 16S y secuencias en haplotipos cox1 en aislamientos de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Cod Haplotipo y aislamiento para 16S 000 800 100 000 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 1 HE610433 L neotropica Lneo-16SA 800 100 000 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 2 KT215347 L neotropica Lneo-16SB 900 800 900 1300 1300 1300 1400 1200 1200 1100 1100 1200 1000 1100 1300 1200 1100 3 JN872471 L neotropica aislado NtS1
1 AM494008 L neotropica Lneo-cox1a 100 500 600 600 600 700 500 600 800 600 1100 900 1000 1000 1000 1000 4 JN872472 L neotropica aislado NtS2 2 FN356741 L neotropica Lneo-cox1b 100 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 5 JN872473 L neotropica aislado NtS3 3 JF461485 L neotropica Lneo-cox1c 600 700 1000 1000 1000 1100 900 1000 1200 1000 1100 1300 800 1100 1400 800 6 JN872474 L neotropica aislado NtS4 4 JF461486 L neotropica Lneo-cox1d 7000 7100 7200 000 000 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 7 HE610434 L viator Lvia-16SA 5 KT215350 L neotropica Lneo-cox1e 000 100 600 7000 000 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 8 KT215352 L viator Lvia-16SB 6 JN872452 L neotropica aislado NtC1 100 200 700 7100 100 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 9 JN872460 L viator aisladoVxS2 7 JN872453 L neotropica aislado NtC2 000 100 600 7000 000 100 200 300 300 300 400 400 700 500 500 500 10 JN872467 L viator aislado VxS9 8 JN872454 L neotropica aislado NtC3 100 200 700 7100 100 200 100 100 300 100 600 400 500 700 500 500 11 JN872466 L viator aislado VxS8 9 AM494010 L viatrix ventr Lvia-cox1a 2800 2900 3300 6600 2800 2900 2800 2700 400 200 700 500 600 800 400 600 12 JN872468 L viator aislado VxS10 10 JN051373 L viator Lvia-cox1b 3300 3400 3800 7000 3300 3400 3300 3400 1100 400 700 100 800 800 200 600 13JN872462 L viator aislado VxS4 11 JN051374 L viator Lvia-cox1c 3400 3500 3900 7100 3400 3500 3400 3500 1200 100 700 500 600 800 600 600 14JN872470 L viator aislado VxS12 12 KT215351 L viator Lvia-cox1d 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 500 1200 1300 800 300 100 900 300 15JN872464 L viator aislado VxS6 13 JN872449 L viator aislado VxC1 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 700 1400 1500 200 900 900 300 700 16JN872463 L viator aislado VxS5 14 JN872450 L viator aislado VxC2 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 500 1200 1300 000 200 400 1000 200 17JN872469 L viator aislado VxS11 15 JN872451 L viator aislado VxC3 2900 3000 3400 6600 2900 3000 2900 2800 100 1200 1300 600 800 600 1000 400 18 JN872461 L viator aislado VxS3 16 JN614397 L viator aislado LVX2 2800 2900 3300 6600 2800 2900 2800 2700 000 1100 1200 500 700 500 100 800 19 JN872465 L viator aisladoVxS7
20 JN872459 L viator aisladoVxS1 Cod Haplotipo y aislamiento para cox1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Nota Debajo de la diagonal = diferencias de caracteres totales cox1 por encima de la diagonal = diferencias de caracteres totale s 16S Las
correspondencias del coacutedigo de Haplotipo se enumeran en la Tabla 13
Tabla 22 Promedio de las distancias geneacuteticas entre y dentro de L neotropica y L viator
Grupos
ITS-2
ITS-1
16S
cox1
analizados
L neotropica vs
1515
5790
856
3520
L viator (00354) (01163) (00202) (00554) L neotropica 160 000 (000) 433 1961 (solo) (00040) (00102) (0031) L viator (solo) 139 087 431 753 (0012)
(00035) (00017) (00102)
Nota Se utiliza como modelo de sustitucioacuten de nucleoacutetidos las diferencias totales (ts + tv) y los
meacutetodos p-distancias (entre pareacutentesis) Se muestra la serie de diferencias de base por sitio desde
un promedio de todos los pares de secuencias entre y dentro de grupos Menos del 5 de las
brechas de alineacioacuten los datos que faltan y las bases ambiguas se les permitioacute cualquier
posicioacuten (todas las posiciones con menos del 95 de cobertura de sitio han sido eliminadas)
183
Figura 19 Consentimiento Informado
184
Figura 20 Recoleccioacuten de datos de las viviendas Valle de Fiambalaacute Catamarca
185
186
Universidad Nacional de Catamarca - Secretariacutea de Ciencia y Tecnologiacutea Editorial Cientiacutefica Universitaria
ISBN 978-987-661-270-8
Figura 21 Planilla de recoleccioacuten de datos de las personas Valle de Fiambalaacute
Catamarca Argentina
187
Universidad Nacional de Catamarca - Secretariacutea de Ciencia y Tecnologiacutea Editorial Cientiacutefica Universitaria
ISBN 978-987-661-270-8
Figura 22 Graacuteficas de comparacioacuten de temperaturas promedio mensual en grados
centiacutegrados y precipitacioacuten-aridez entre las localidades de Rio Grande y Tatoacuten
188
Universidad Nacional de Catamarca - Secretariacutea de Ciencia y Tecnologiacutea Editorial Cientiacutefica Universitaria
ISBN 978-987-661-270-8
Figura 23 Diseccioacuten de conductos biliares de un hiacutegado de Lama glama donde se
observan ejemplares de Fasciola hepatica intracanaliculares Valle de Fiambalaacute
Catamarca 2010
Figura 24 Apertura de un conducto biliar intrahepaacutetico en un hiacutegado de Ovis orientalis
aries Se observa un ejemplar de F hepatica colangitis croacutenica con lesiones de la
mucosa biliar hipertrofiada estrecheces inflamatorias fibrosas y piedras Valle de
Fiambalaacute Catamarca 2010
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Figura 25 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino de la provincia de
Salta observadas al microscopio
Nota (A) Cono cefaacutelico VO ventosa oral I ciego intestinal F faringe E esoacutefago C cirro
Ampliacioacuten de 4x (B) Uacutetero lleno de huevos (flechas) C Cirro I ciego intestinal VV ventosa
ventral Aumento 10x
Figura 26 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino del municipio de
Cordeiro RJ Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota Porcioacuten final del cono cefaacutelico que muestra las espinas (flechas) e I ciego intestinal
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Figura 27 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de bovinos de la provincia de Salta
Argentina observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) VO ventosa oral
Figura 28 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado del municipio de Lavras
MG Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota (A B) Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) e I ciego intestinal
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Figura 29 Anaacutelisis filogeneacutetico de F hepatica basado en las secuencias de CO1 FhC01-
CAT-adult
Nota corresponde a la muestra analizada de la zona Las letras y nuacutemeros detraacutes de Fh indican el
nuacutemero de acceso de GenBank de las correspondientes secuencias PwAF219379 corresponde
a Paragonimus westermani CO1 (AF219379) usado como grupo externo El aacuterbol filogeneacutetico se
construyoacute mediante el anaacutelisis de maacutexima verosimilitud utilizando el paquete de
programas PHYLIP
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TRABAJOS CIENTIacuteFICOS A PARTIR DE LA INFORMACIOacuteN GENERADA EN
ESTA TESIS
ANEXO 1121 - TRABAJOS PUBLICADOS
Capiacutetulo de Libro
ldquoFasciolosis o Distomatosisrdquo en ldquoParasitosis Regionalesrdquo Costamagna SR (Compilador)
Editorial de la Universidad Nacional del Sur Red de Editoriales de Universidades
Nacionales Cap 36 419-434
193
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Buacutesqueda Bibliograacutefica de Casos Humanos con
Fasciola Hepatica en Argentina Malandrini J B Carnevale S Soria C C Velaacutesquez J N Molina V E
UNCa Anlis Malbraacuten Hospital Muntildeiz Maestro Quiroga (primera cuadra) 4700-Catamarca brunomalandriniyahoocomar
Bibliographical Search Fasciola hepatica Cases in Humans in Argentina
Summary The case series published in Argentina referred to human cases that presented fasciolosis is scarce As a cause of not being a notificable disease only isolated cases are reported and epidemiological and ecosystem details are not investigated Who detected a case is not required to inform it and on the other hand not all cases diagnosed are published Besides the lack of diagnostic techniques in most health networks complicates the detection of infection and promotes the understated The aim of this study was to report the number of published human cases with fascioliasis in Argentina from 1950 to 2010 It was performed a bibliographical search in the databases of the Science and Technology Secretary in libraries of universities and major scientific institutes of the country There were found presentations of 218 infected people since the first description made in Resistencia Chaco until the publication of cases in Catamarca In discrimination cases female gender (5466) was significantly more frequent than among men Of the total found six patient (4) had an acute process and 144 correspond to chronic illness Six provinces reported sick Catamarca is that with greater number of cases In the bibliographic tonnage carried with exception of some imprecise data in the province of Cordoba the number of diagnosed patients is low Despite the number of total cases reported in the country confirm that it is a secondary or occasional zoonosis and that it does not exist a close relationship between animal and human high incidence the substantial increase in the number of infected warrants a change in category transforming it in a serious public health problem in some regions
Keywords Research Bibliography Humans Fasciola hepatica Argentina
mdash Ciencia Vol 6 Nordm 21 Agosto 2011 Paacutegina 59 mdash
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Colecta e Identificacioacuten de Moluscos en la Cuenca
del Riacuteo Abaucaacuten Malandrini J B Soria C C Saldantildeo M B Mozo G M Camantildeo M C Covarrubia N
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa Maestro Quiroga primera cuadra 4700 SFVde Catamarca brunomalandriniyahoocomar
Collection and Identification of Mollusks in Abaucan River
Basin Summary Fasciola hepatica (unca or uncaca) has a digenetic life cycle which means an obligatory intermediate host belonging to the family of freshwater snails Lymnaeidae (Pulmonata Lymnaeidae) at which they develop and multiply the asexual forms This host predominantly in our country is Limnaea viatrix gastropod mollusk amphibian so it prefers soils with humidity The ecology of fasciolosis is closely linked with that of the snails that serve as intermediaries When the miracidia penetrate the foot they head for the liverpaacutencreas where they transform into esporocitos then rediae (first and second generation) and leave as cercariae Physiographic characteristics soil composition and climatic factors determine the rate of reproduction and epidemiological dynamics The aim of this study was to identify snails found in the river Abaucaacuten basin province of Catamarca The study was carried out with mollusks collected in backwaters and wetlands along the river at the height of the ford the road (Medanitos- Taton) where there was a lot of these specimens and domestic animals infected with fluke The specimens were collected by hand and transported to the laboratory in containers with water and mud of the place where they were studied She gathered a sample of 1236 shells The 9150 (n=1131) were identified as the genus Lymnaea spp and 849 (n=105) belonging to the genus Physae spp In those identified as Lymnaea viatrix there were not found infection of intermediate forms of Fasciola hepatica The identification shows the presence of snails involved in the cycle of F hepatica in the study area The spread of the parasite and the increase of fasciolosis in human beings who inhabit the valley make studies needed to relate epidemiological findings
Keywords Mollusks Limnaea Collection Identification Abaucaacuten river
mdash Ciencia Vol 6 Nordm 22 Septiembre 2011 Paacutegina 39 mdash
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BIOLOGIacuteA EN AGRONOMIacuteA
Volumen 4 No 1 Marzo de 2014 ISSN 1853-5216 Universidad Nacional de Catamarca Secretariacutea de Ciencia y Tecnologiacutea ‐Editorial Cientiacutefica Universitaria ISSN 1853-5216
FASCIOLOSIS EVALUACIOacuteN DE TEacuteCNICAS PARASITARIAS EN HECES DE ANIMALES CON HIacuteGADOS
DECOMISADOS EN MATADEROS
Martiacutenez M Constanza Malandrini J Bruno Soria Claudia
Caacutetedra de Parasitologiacutea Facultad de Ciencias de la Salud - Universidad Nacional de Catamarca
Avda Belgrano y Maestro Quiroga C P 4700 San Fernando del Valle de Catamarca Argentina
E-mails conimartinez48hotmailcom
Recibido 04072013 Aceptado 07112013
RESUMEN
En la provincia de Catamarca fasciolosis es una enfermedad endeacutemica produciendo un gran dantildeo
econoacutemico de importancia en salud puacuteblica Afecta principalmente a los bovinos presentaacutendose
en sus formas aguda y croacutenica La demostracioacuten microscoacutepica de huevos de Fasciola hepatica en
materia fecal es el principal procedimiento de diagnoacutestico econoacutemico faacutecil de realizar y
sumamente especiacutefico El objetivo del trabajo es determinar las diferencias existentes entre la
presencia del paraacutesito en hiacutegados de animales positivos en las faenas y el valor diagnoacutestico de dos
teacutecnicas coproparasitoloacutegicas utilizadas para demostrar la infeccioacuten en los mismos bovinos Se
estudiaron en los mataderos de los municipios de Andalgalaacute Capital Fiambalaacute El Alto e Icantildeo 13
animales que desde tres meses previos al estudio no recibieron tratamiento fasciolicida Los
hiacutegados fueron decomisados en la inspeccioacuten sanitaria y la materia fecal de esos ejemplares se
recogioacute en frascos con solucioacuten salina formolada al 10 Se identificoacute y transportoacute al laboratorio
Paralelamente se analizaron preparados de 88 muestras de heces por meacutetodo directo y con la
teacutecnica de sedimentacioacuten indicando positividad la deteccioacuten de un solo huevo
En hiacutegados analizados se encontraron formas adultas del paraacutesito y lesiones fibroacuteticas en el
pareacutenquima de las muestras de materia fecal cuatro submuestras resultaron positivas al meacutetodo
directo y 78 al de sedimentacioacuten De los resultados obtenidos se observan limitaciones en la
sensibilidad Para optimizar el diagnoacutestico y evitar los falsos negativos se deberaacuten recoger
muestras fecales en forma seriadas y aumentar el nuacutemero de pruebas cuando presentan
resultados negativos
PALABRAS CLAVE Fasciola hepatica Fasciolosis Diagnoacutestico Coproloacutegico
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Elsevier Editorial System(tm) for Acta Tropica Manuscript Draft (En prensa Recibido 30062015)
Title Human fascioliasis endemic areas in Argentina Multigenic phenotypic and environmental characterisation of the snail vectors Lymnaea neotropica and L viator
Article Type Research Paper Keywords Fascioliasis human infection Lymnaea neotropica L viator Lymnaeidae vectors rDNA mtDNA phenotype environment Argentina
Corresponding Author Dra MD Bargues PhD Corresponding Authors Institution University of Valencia First Author MD Bargues PhD Order of Authors MD Bargues PhD J Bruno Malandrini PhD Patricio Artigas PhD Claudia C Soria PhD Jorge N Velasquez PhD Silvana Carnevale PhD Lucia Mateo Master Messaoud Khoubbane PhD Santiago Mas-Coma Prof Dr
Abstract In South America fascioliasis stands out due to the human endemic areas in many countries In Argentina human endemic areas have recently been detected A study was performed in two localities of Catamarca province where lymnaeids were collected in areas described as human endemic (i) locality A beside Taton and Rio Grande villages (ii) locality B close to Recreo town The presence of Lymnaea neotropica and L viator in locality A and of L neotropica in locality B was proved by sequencing of rDNA ITS-2 and ITS-1 and mtDNA 16S and cox1 For the differentiation between these two species ITS-1 shows the highest resolution whereas 16S the less For intraspecific analyses cox1 is the best marker and ITS-1 the worst The intraspecific variability of L neotropica and L viator overlap in all shell features except maximum shell length which may be longer in L viator The desertic-arid conditions surrounding locality A the semiaridity-aridity surrounding locality B and the very low yearly precipitation in both localities are very different from the typical environmental characteristics of fascioliasis transmission foci In these localities lymnaeids are confined to lateral river side floodings and small man-made irrigation systems The two and four new haplotypes in L neotropica and L viator respectively and the extreme climatic factors demonstrate that these transmission foci are isolated environments presenting water availability depending only on the rivers flowing from neighbouring mountains
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ANEXO 1122 - PRESENTACIONES EN CONGRESOS y JORNADAS
4tas Jornadas Universitarias de Ciencias Exactas y Naturales Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca 2009 Presentacioacuten oral
PRESENCIA DE HUEVOS DE PARAacuteSITOS ZOONOTICOS EN VARIAS ESPECIES ANIMALES DE LA LOCALIDAD DE TATOacuteN
Malandrini Jorge Soria Claudia Cecilia Molina Viviana
Mozo Matilde Camantildeo Cecilia Saldantildeo Belen
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa Maestro Quiroga SN 4700- Catamarca brunomalandriniyahoocomar Aacuterea Vinculacioacuten Ciencia Tecnologiacutea y Sociedad
RESUMEN
Casos de parasitosis son observados frecuentemente en las faenas provinciales y en los registros de decomisos en mataderos a su vez el empleo de estudios coproloacutegicos ha mejorado la capacidad de diagnosticar los cuadros El objetivo del presente trabajo fue examinar muestras de materia fecal de distintos animales para reconocer las especies presentes El estudio se llevoacute a cabo en la localidad de Tatoacuten Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia de Catamarca durante los meses de marzo a julio de 2009 Se tomaron muestras de materia fecal (n=78) de animales poli y monogaacutestricos ubicados cerca de las viviendas Las heces se conservaron en recipientes cerrados con solucioacuten salina formolada 5 Para la deteccioacuten se utilizoacute un meacutetodo de sedimentacioacuten en buacutesqueda de Fasciola hepatica con cinco gramos de materia fecal de cada muestra Para el reconocimiento de los huevos se observoacute al microscopio (100x y 400x) La variable fue la presencia de huevos en heces considerando positividad la deteccioacuten de un solo ejemplar con la teacutecnica empleada Se confirmoacute la presencia de distintas especies parasitarias Fasciola hepatica Ascaris suum Oxiuris equi Ostertagia spp Trichuris ovis Haemonchus contortus Trichostrongylus spp Uncinaria stenocephala Toxocara canis y tenias Se hallaron infectadas todas las muestras de materia fecal observadas No se efectuaron recuentos de huevos por gramo
Debates Reflexiones e Interrogantes en la Educacioacuten en Ciencias Antildeo 2009
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- 160-
204
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1er Congreso Nacional de Medicina Tropical Ministerio de Salud Presentacioacuten en
Poster Jujuy 2010
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JORNADAS DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE PARASITOLOGIA VETERINARIA
XIX ENCUENTRO RIOPLATENSE DE VETERINARIOS ENDOPARASITOacuteLOGOS ldquoHacia la conferencia mundial de la WAAVP Buenos Aires 2011rdquo
18 al 20 de mayo de 2010
Descripcioacuten de los grupos de Investigacioacuten y Ensentildeanza dependientes de Universidades de Argentina
FASCIOLOSIS UNA ZOONOSIS TRANSMITIDA POR ALIMENTOS DESDE UN ENFOQUE MULTIDISCIPLINARIO DEL EQUIPO DE SALUD
Red de Helmintos Caacutetedra de Anatomiacutea y Fisiologiacutea Animal Comparada Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca Servicio de Inmunologiacutea Parasitaria Departamento de Parasitologiacutea ANLIS ldquoCarlos G Malbraacutenrdquo Hospital de Enfermedades Infecciosas ldquoFrancisco J Muntildeizrdquo MALANDRINI Jorge Bruno CARNEVALE1 Silvana VELASQUEZ2 Jorge Neacutestor SORIA Claudia Cecilia MOLINA1 Viviana Edith MARTINEZ Constanza COVARRUBIA Neacutelida Noemiacute PIZARRO Mariacutea del Carmen Magister en Ciencias de la Salud Meacutedico Veterinario Investigador III Doctora en Ciencias Bioloacutegicas Magister en Epidemiologiacutea Gestioacuten y Poliacuteticas de Salud Bioacuteloga Investigadora Adjunta Conicet Magister en Administracioacuten Sanitaria Meacutedico infectoacutelogo y microbioacutelogo Magister en Tecnologiacutea de Alimentos Licenciada en Bromatologiacutea Bioquiacutemica Meacutedica Veterinaria Licenciada en Bromatologiacutea Bromatoacuteloga Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca Maestro Quiroga sn 4700 - San Fernando del Valle de Catamarca Catamarca Argentina TeFax (54-3833) 441831 e-mail brunomalandriniyahoocomar 1Servicio de Inmunologiacutea Parasitaria Departamento de Parasitologiacutea ANLIS ldquoCarlos G Malbraacutenrdquo Veacutelez Sarsfield 563 Ciudad Autoacutenoma de Buenos Aires Argentina TeFax (54-11) 4301-7437 e- mail silvanaanlisgovcomar 2Hospital de Enfermedades Infecciosas ldquoDr Francisco J Muntildeizrdquo Sala de Hepatopatiacuteas Infecciosas Av Uspallata 2272 Ciudad Autoacutenoma de Buenos Aires (1282) Argentina Te (54-11) 4304-2180 e-mail jorsilspeedycom Aacuterea temaacutetica Ciencias Meacutedicas y Salud
Disciplina Cientiacutefica Parasitologiacutea (Coacutedigo Nordm 1212) Campo de aplicacioacuten Salud Puacuteblica (Coacutedigo Nordm 3237) Categoriacutea Proyecto Orientado Tipo de Actividades Investigacioacuten Aplicada con desarrollo tecnoloacutegico El equipo se conformoacute en 1994 Las necesidades profesionales hicieron necesario integrar un grupo con investigadores provenientes de distintas disciplinas que fue desarrollando estudios epidemioloacutegicos de fasciolosis en Regioacuten del arroyo El Juncal La Toma San Luis 2003
Estudio de foco a partir de un caso humano de fasciolosis en la localidad de Lonco pueacute Neuqueacuten Argentina 2003 Estudio de foco para un caso de fasciolosis humana en Neuqueacuten Argentina 2005 Confirmacioacuten etioloacutegica de un brote de distomatosis hepaacutetica en Mendoza 2006 Diagnoacutestico de Fasciola hepatica con la teacutecnica de ELISA en el Departamento de Tinogasta Catamarca 2006-2009 Actualmente se lleva a cabo un estudio observacional transversal y cuantitativo utilizando datos primarios Para el anaacutelisis de fasciolosis hepaacutetica en las distintas especies se emplean meacutetodos de diagnoacutestico inmunoloacutegicos parasitoloacutegicos y cliacutenicos El trabajo se decidioacute continuarlo en la provincia de Catamarca debido a la previa aparicioacuten de casos humanos y la alta prevalencia de fasciolosis detectada no soacutelo por la inspeccioacuten veterinaria en la faena de ganado bovino en mataderos y frigoriacuteficos que trabajan con control profesional sino tambieacuten en situaciones de campoEl universo de estudio comprende a) Poblacioacuten humana que habita el valle de Fiambalaacute b) Ganado bovino ovino caprino equino porcino y cameacutelidos sudamericanos
64
JORNADAS DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE PARASITOLOGIA VETERINARIA
XIX ENCUENTRO RIOPLATENSE DE VETERINARIOS ENDOPARASITOacuteLOGOS ldquoHacia la conferencia mundial de la WAAVP Buenos Aires 2011rdquo
18 al 20 de mayo de 2010
c) Plantas acuaacuteticas de consumo humano presentes en los cursos de agua para la buacutesqueda de metacercarias d) Caracoles compatibles con el geacutenero Lymnaea para su determinacioacuten taxonoacutemica estudio de la emisioacuten de cercariacuteas y verificacioacuten de la infeccioacuten e) Agua de riacuteos arroyos Agua de consumo en las viviendas El ensayo de ELISA y micro-ELISA para la deteccioacuten de anticuerpos anti-rproCL1 de F hepatica
en humanos se desarrolloacute y fue puesto en praacutectica desde 2001 La teacutecnica de ampliacioacuten en cadena de la polimerasa fue desarrollada para determinar la infeccioacuten por Fasciola hepatica en caracoles del geacutenero Lymnaea con infeccioacuten natural utilizada posteriormente para comparar el anaacutelisis directo con el molecular y diagnoacutesticos por PCR en caracoles Lymnaea columella y Lymnaea viatrix colectados
Los avances del grupo de trabajo incluyen
- Clonado expresioacuten y produccioacuten de antiacutegeno recombinante procatepsina L1 de Fasciola hepatica en vector procarionte Resp Carnevale S Participan Malandrini J Soria C - Desarrollo del ensayo inmunoenzimaacutetico empleando el antiacutegeno recombinante para la deteccioacuten
de fasciolosis en hospedadores definitivos (humanos y ganado) Resp Carnevale S Participan Velaacutesquez J Martiacutenez C Malandrini J - Desarrollo de un meacutetodo molecular basado en la amplificacioacuten geacutenica utilizando como blanco el gen de la subunidad 1 de la citocromo c oxidada de F hepatica para la identificacioacuten en hospedadores intermediarios Carnevale S Participan Soria C Covarubia N Pizarro MC - Aplicacioacuten de las metodologiacuteas desarrolladas y de meacutetodos de deteccioacuten directa en aacutereas endeacutemicas mediante estudios transversales Malandrini J Participan Velaacutesquez J Soria C - Desarrollo de reactivos parasitarios Resp Carnevale S Participan Molina V Pizarro MC - Estudios epidemioloacutegicos Resp Malandrini J Participan Soria C Velaacutesquez J Covarrubia N
Martiacutenez C
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23rd International Conference of the World Association Advancement Veterinary
Parasitology (waapv) Presentacion en poster Buenos Aires 2011
208
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23rd International Conference of the World Association Advancement Veterinary
Parasitology (waapv) Presentacion en poster Buenos Aires 2011
209
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VII Jornadas Universitarias de Ciencias Exactas y Naturales VII Jucen - Educacioacuten en
Ciencias y Tecnologiacutea 2012 Modalidad oral
Buacutesqueda de caracoles intermediarios del ciclo de Fasciola hepatica en
Tinogasta
Tomassi Carla A Soria Claudia C Malandrini Jorge B Facultad de Ciencias de la Salud-UNCa Maestro Quiroga sn 4700-Catamarca carla_cat1991hotmailcom
Los moluscos constituyen el segundo de los Phyla maacutes numerosos en especies luego de los artroacutepodos
Desde el mar colonizaron ambientes salobres y dulceacuiacutecolas soacutelo los caracoles (gasteroacutepodos) invadieron
el medio terrestre Le han brindado al hombre una serie de beneficios tales como alimento herramientas
medicina Contrariamente la malacofauna acarrea tambieacuten efectos perjudiciales a la Salud Puacuteblica (hombre
y ganado) enfermedades zoonoticas y especies invasoras
Caracoles de la familia Lymnaeidae son hospedadores intermediarios de Fasciola hepatica Linneo
(Trematoda Digenea Fasciolidae) por ello el objetivo del trabajo fue identificar las especies de moluscos
encontrados en el valle de Fiambalaacute
El estudio se lleva a cabo con ejemplares recolectados en remansos y vegas a orillas de riacuteos los lugares
escogidos para la buacutesqueda se escogieron de aquellos donde previamente se diagnosticaron animales con
infecciones naturales de Fasciola hepatica
Los especiacutemenes colectados (N 256) en forma manual en los causes de agua del Riacuteo Abaucaacuten y afluentes
(27ordm30acuteS 67ordf35acuteO) entre los meses de octubre y noviembre se transportan en envases plaacutesticos rotulados
con un algodoacuten huacutemedo hasta el laboratorio El material se fijoacute en alcohol 70 y la identificacioacuten de la
especie se realiza en base a las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla y oacuterganos internos
El reconocimiento de conchillas pequentildeas alargadas lisas con estriacuteas longitudinales muy apretadas dextro
compuestas por cinco anfractos muy convexos separados por una sutura profunda permitieron la
identificacioacuten de los gasteroacutepodos como pertenecientes a los limneidos
Palabras clave Buacutesqueda Limneidos Fasciola hepatica Tinogasta
Eje temaacutetico Desarrollo del pensamiento cientiacutefico
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
211
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
VARIABILIDAD GENEacuteTICA INTRAESPECIacuteFICA DE FASCIOLA HEPATICA
EN ARGENTINA
Silvana Carnevale1 Laura Kamenetzky2 Jorge Bruno Malandrini3 Mariacutea Laura
Pantano1 Marcela Larroza4 Claudia Cecilia Soria3 Olga Edith Feres Escaacutendar1
Jorge Neacutestor Velaacutesquez5
1ANLIS ldquoDr Carlos G Malbraacutenrdquo 2IMPaM UBA-CONICET 3Universidad Nacional de Catamarca 4INTA Bariloche 5Hospital de Infecciosas ldquoDr F J Muntildeizrdquo Argentina
e-mail jorgeysilvanaspeedycomar
Fasciola hepatica es un trematode que presenta variabilidad intraespeciacutefica en aislamientos de diferentes regiones del mundo Objetivo Analizar los haplotipos de F hepatica
circulantes en distintas regiones de Argentina Materiales y meacutetodos Se obtuvieron adultos
del paraacutesito de hiacutegados bovinos naturalmente infectados de las provincias de Salta
Catamarca y Riacuteo Negro Se conservaron en etanol 70ordm y se procesaron para la extraccioacuten de
ADN empleando kit comercial Se llevaron a cabo reacciones de PCR para la
amplificacioacuten del marcador molecular correspondiente al gen
mitocondrial de la subunidad 1 de la citocromo c oxidasa (COI) Los amplicones obtenidos
se secuenciaron automaacuteticamente Las filogenias fueron reconstruiacutedas utilizando el
algoritmo de maacutexima parsimonia implementado en el programa PAUP los aacuterboles se
obtuvieron mediante 1000 reacuteplicas bootstrap La adicioacuten de secuencias fue al azar con 5
repeticiones Resultados El anaacutelisis de las secuencias de CO1 mostroacute diferencias en las
muestras de las tres provincias analizadas La muestra de Salta resultoacute ideacutentica a otras
analizadas previamente de las provincias de Catamarca y San Luis correspondiendo al
grupo FhAJ6280346 FhJF82467124 FhAJ628035 FhGQ231551 Fh628039 Para la
muestra de Riacuteo Negro se observoacute un polimorfismo propio no descripto en las secuencias
actualmente disponibles en el GenBank La muestra de Catamarca fue ideacutentica a las
secuencias descriptas FhAJ628035 FhJF824674 Conclusiones El marcador CO1 permitioacute
diferenciar adultos de las tres localizaciones Se analizaraacuten maacutes ejemplares para verificar si
los polimorfismos son poblacionales o individuales
Palabras clave Fasciola hepatica anaacutelisis filogeneacutetico haplotipo
Financiamiento ANLIS Mundo Sano
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
DESARROLLO DE UN MEacuteTODO DE AMPLIFICACIOacuteN GEacuteNICA PARA EL
DIAGNOacuteSTICO DE FASCIOLOSIS EN HOSPEDADORES DEFINITIVOS
Mariacutea Laura Pantano1 Silvana Carnevale1 Laura Kamenetzky2 Jorge Bruno
Malandrini3 Claudia Cecilia Soria 3 Vanesa Raquel Bastin1 Jorge Neacutestor Velaacutesquez4
1ANLIS ldquoDr Carlos G Malbraacutenrdquo 2IMPaM UBA-CONICET 3Universidad Nacional de
Catamarca 4Hospital de Infecciosas ldquoDr F J Muntildeizrdquo Argentina
e-mail jorgeysilvanaspeedycomar La fasciolosis es una zoonosis parasitaria distribuida mundialmente que causa severas
peacuterdidas econoacutemicas en el ganado Objetivo Desarrollar un meacutetodo de PCR para la
identificacioacuten de Fasciola hepatica en muestras de heces de ovinos Materiales y meacutetodos
Se emplearon 19 muestras de ovinos infectados (examen coproparasitoloacutegico positivo) y
11 muestras negativas para F hepatica 6 de ellas con coccidios yo nematodes
gastrointestinales recolectadas en solucioacuten salina formolada 5 Se emplearon 2 g de
muestra lavados con solucioacuten fisioloacutegica y concentrados por centrifugacioacuten con eacuteter para la
purificacioacuten de ADN Se ensayaron protocolos manuales y empleando kits comerciales
seleccionando procedimientos estaacutendar de lisis proteoliacutetica extraccioacuten con fenol-
cloroformo y precipitacioacuten etanoacutelica La teacutecnica de PCR se llevoacute a cabo utilizando primers
con el fin de amplificar un fragmento del gen mitocondrial de la subunidad 1 de la
citocromo c oxidasa (CO1) con tamantildeo esperado de amplicoacuten de 405 pares de bases Se
determinoacute el liacutemite de deteccioacuten empleando cantidades conocidas de ADN de adultos
Resultados La teacutecnica de PCR permitioacute la deteccioacuten de todas las muestras positivas y no
se obtuvieron productos de amplificacioacuten con muestras negativas ni parasitadas con otros
organismos Los primers fueron analizados tambieacuten con las secuencias disponibles en
banco de otros trematodes de ovinos mostrando especificidad El liacutemite de deteccioacuten
resultoacute de 5 pg de ADN de F hepatica Conclusiones El meacutetodo de PCR resulta una
herramienta sensible y especiacutefica para la deteccioacuten de ADN de F hepatica en heces de
hospedadores definitivos Palabras clave Fasciola hepatica PCR ADN
Financiamiento ANLIS Mundo Sano UNCa
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III Congreso Internacional de Educacioacuten en Ciencia y Tecnologiacutea 5deg Congreso de Educacioacuten en Ciencia y Tecnologiacutea Facen - UNCA 2013
Estudio comparativo de teacutecnicas para la obtencioacuten de cuerpos de
caracoles de la Familia Lymnaidae (Gasteropoda Pulmonata) para su
identificacioacuten taxonoacutemica en la provincia de Catamarca
Tomassi CA Soria CC Malandrini JB Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
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Fasciolosis es una zoonosis parasitaria con un ciclo de vida donde participa como
hospedero intermedio un caracol de agua dulce Los moluscos de la Familia Lymnaeidae
(Gasteroacutepoda Pulmonata) modelan la transmisioacuten de Fasciola hepatica de acuerdo a la
especie de caracol involucrado L viator fue considerado durante antildeos como el uacutenico
hospedero involucrado en la epidemiologiacutea de la enfermedad en Argentina Estudios
recientes demuestran la presencia de otras especies y que los caracoles intervinientes en
los casos humanos y animales inclusive de la misma zona seriacutean de distintas especies
El objetivo del presente trabajo fue reportar los resultados comparativos obtenidos con
distintas teacutecnicas utilizadas para la observacioacuten morfoloacutegica de caracoles que permitan
identificar los principales hospederos intermediarios que intervienen en la parasitosis
Se colectaron a mano caracoles (n = 673) de una vega ubicada a la vera del riacuteo Abaucaacuten
(27deg29acute52rdquo S - 67deg35acute535 O) a 1650 m nm y se trasladaron vivos al laboratorio Los
moluscos se separaron en lotes iguales y se enfrentaron para estudio con tres teacutecnicas
directa de Railliet seguacuten Paranaense (1994) y la propuesta de Pointier para poder obtener
la separacioacuten de su cuerpo conchilla aparato reproductor masculino y una porcioacuten de su
pie permitiendo una mejor observacioacuten de los oacuterganos internos de los caracoles para su
reconocimiento taxonoacutemico e identificacioacuten por morfologiacutea Paralelamente se sacoacute la parte
blanda del limneido en busca de formas intermedias de F hepatica en el hepatopaacutencreas
del molusco
Los resultados permiten afirmar que la teacutecnica recomendada por Pointier es de muy faacutecil
aplicacioacuten ademaacutes de ser maacutes econoacutemica y permiten acercar nuevos conocimientos sobre
la enfermedad y los actores involucrados en el mantenimiento y difusioacuten de la parasitosis
Palabras clave Teacutecnicas Lymneidos Identificacioacuten Taxonomiacutea Catamarca
Eje temaacutetico Desarrollo de propuestas de ensentildeanza que contribuyan a la
transversalizacioacuten de contenidos cientiacuteficos
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7mo Encuentro de Docentes Investigadores 2do Encuentro de Joacutevenes Investigadores
Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca 2013 Modalidad
poster
215
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El reto del desarrollo sostenible Estrategias y Acciones Diaacutelogos y Propuestas Edicioacuten
2014 Liacutenea Cientiacutefica 1ordf Ed Catamarca Universidad Nacional de Catamarca E-Book
ISBN 978-950-746-227-6 1 Medio Ambiente CDD 577
Infeccioacuten Experimental de Hospedadores Intermediarios de
Fasciola hepatica
Tomassi Carla A Malandrini Jorge B Soria Claudia C
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
Maestro Quiroga sn 4700 Catamarca
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RESUMEN
Fasciolosis es una enfermedad que cada vez con mayor frecuencia afecta al ser humano se
presenta en el hombre Siendo Catamarca una zona endeacutemica tanto para los animales como para
las personas se hace necesario conocer detalladamente el ciclo de vida en el hueacutesped
intermediario un caracol del geacutenero Lymnea para poder actuar en su control La diseccioacuten de
caracoles permite visualizar la produccioacuten de cercariacuteas y detectar la infeccioacuten en caracoles
provenientes de campo El objetivo del trabajo fue desarrollar la infeccioacuten de moluscos Lymnea
para observar su ciclo bioloacutegico in vitro y comprobar su capacidad de actuar como hospedadores
intermediarios La infeccioacuten se logroacute mediante la eclosioacuten de huevos de F hepatica previamente
embrionados estos proveniacutean de bilis de animales infectados lavados con solucioacuten fisioloacutegica
isotoacutenica decantados en un vaso de precipitado y mantenidos a 25 degC durante ocho diacuteas Por
accioacuten a la luz artificial (30 minutos) se consiguioacute la apertura del opeacuterculo y posterior salida del
miracidio Se pusieron en contacto 50 miracidios por molusco durante dos horas Se observoacute bajo
la lupa la presencia de miracidios de no estar se consideroacute que penetraron en el caracol (n=74)
Se verificoacute a los tres diacuteas sacrificando los moluscos (n=14) separando las partes blandas de la
conchilla y colocaacutendolas entre dos portaobjetos para visualizarlos al microscopio Se obtuvieron
esporocistos en dos moluscos redias en otros dos y cercarias en dos ejemplares maacutes El ensayo
permitioacute comprobar su intervencioacuten en el ciclo de Fasciola hepatica como hospedadores
intermediarios y demostrar la presencia de los distintos estadios larvarios en el interior del cuerpo
de los caracoles
ndash 149 ndash
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XI Jornadas Cientiacuteficas Regionales en Ciencias de la Salud XI Jornadas Estudiantiles
Regionales Instituto Universitario de Ciencias de las Salud Fundacioacuten Barceloacute La Rioja
2014 Modalidad oral
HALLAZGO E IDENTIFICACIOacuteN DE MOLUCOS INTERMEDIARIOS DEL CICLO DE
Fasciola hepatica EN LAGUNA BLANCA CATAMARCA
Tomassi Carla A (1) - Soria Claudia C(1) - Malandrini Jorge B (1)
Fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonoacutetica transmitida por alimentos causada por
Fasciola hepatica Linneaus 1758 (Trematoda Fasciolidae) que utiliza como hospedadores
intermediarios caracoles de agua dulce de la familia Lymnaeidae El paraacutesito no se encuentra en
regiones donde las condiciones no son las adecuadas para el desarrollo de los caracoles
Pertenecen al phylum Mollusca y a la clase Gasteropoda y las especies de intereacutes se encuentran
en la subclase Euthyneura o Pulmonata Son anfibios y viven en el barro en ambientes de aguas
poco profundas sujetos a las inundaciones y desecaciones Su distribucioacuten no es uniforme porque
dentro de cada haacutebitat pueden concentrarse en aacutereas pequentildeas con canales de drenaje y
filtraciones En la provincia de Catamarca se demostroacute la presencia de lymneidos en casi todos los
departamentos y en diferentes ecosistemas
El objetivo del presente trabajo fue hallar ejemplares de lymeneidos en la localidad de Laguna
Blanca y relacionar su presencia con diagnoacutesticos efectuados en muestras de materia fecal
animales de distintas especies
Los caracoles se colectaron en forma manual (n=490) en tres vegas de la localidad ldquoLas Lomitasrdquo
(26deg3acute21rdquoS-66deg56acute334 O) (706) ldquoCasa Paredrdquo (26deg35acute04rdquoS-66deg56acute47 O) (218) y ldquoHuasi
Cieacutenagardquo (26deg34acute50rdquoS-66deg56acute333 O) (76) y 17 muestras de materia fecal de ovejas (13) llamas
(2) y cabras (2) que pastaban en las vegas
Los moluscos fueron transportados vivos en frascos hermeacuteticos con agua del mismo curso al
laboratorio malacoloacutegico de la facultad de Ciencias de la Salud donde se realizoacute la identificacioacuten
de los geacuteneros en base a la morfologiacutea de su conchilla Las determinaciones parasitoloacutegicas se
llevaron a cabo seguacuten teacutecnica de Dennis Stone y Swason
Se comproboacute la presencia de caracoles del geacutenero Lymnea en las tres vegas En ldquoCasa Paredrdquo
(3452) en ldquoHuasi Cieacutenagardquo (1194) y en la vega ldquoLas Lomitasrdquo (5354) se determinoacute
ademaacutes presencia de moluscos del geacutenero Physa (5205) Los anaacutelisis coproparasitologicos
resultaron positivos confirmando la presencia del parasito en animales (7647)
Los hallazgos realizados y los antecedentes humanos de la enfermedad en otras zonas de la
provincia ameritan estudios epidemioloacutegicos que los involucren
1 Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
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ANEXO 1123 ndash PREMIOS Y DISTINCIONES
217
XXVIII Jornadas de Actualizacioacuten en Ciencias Veterniarias Colegio Medico
Veterinario de la Provincia de Coacuterdoba 2009 Distinguido con Mencioacuten Especial
218
219
220
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Segunda mencioacuten Premio Anual AAPAVET Rioplatense 2012 ldquoDr Rauacutel Martiacuten Mendyrdquo
OCTUBRE de 2012
Volumen XXIX Ndeg 294 ISSN 1852-317X
Se otorgoacute el Premio Anual AAPAVET Rioplatense 2012 ldquoDr Rauacutel Martiacuten Mendyrdquo
El H Jurado integrado por los Drs Ricardo A Moriena (FCV UNNE) Oscar S Anziani (INTA Rafaela) y Cristian Lucas (Actividad privada) dictaminoacute en forma unaacutenime otorgar los siguientes premios
Categoriacutea Investigacioacuten Original
Primer Premio
ldquoIntroduccioacuten de la vacuna EG95 contra la Equinococcosis Ovina en un Programa de Control Obtencioacuten de informacioacuten baacutesica anaacutelisis espacial y primer estudio de impactordquo
Edmundo Larrieu Eduardo Herrero Guillermo Mujica Joseacute L Labanchi Daniel Araya Claudio
Grizmado Arnoldo Calabroacute Gabriel Taimoacuten Guillermo Ruesta Alicia Peacuterez Antonio Gati Graciela
Santillaacuten Marta Cabrera Marcos Arezzo Marcos Seleiman Laura Cagioacuten Mariela Garciacutea Cachau Cristian A Alvarez Rojas Charles G Gauci David D Heath Roberto Lamberti y Marshall W
Lightowlers
1ordf Mencioacuten
ldquoEquinococcosis Neotropical presencia del ciclo silvestre de Echinococcus vogeli en la Provincia de Misiones Argentinardquo
Katherina Alicia Vizcaychipi
Consultores Antonio DrsquoAlessandro Federico Camiccia Marcela A Cucher Karen E DeMatteo Eduardo Guarnera Ariana Gutieacuterrez Marcia Helou Natalia Maccharoli Laura C Prada Miguel A
Rinas Mara Rosenzvit y Graciela Ineacutes Santillaacuten
2ordf Mencioacuten
ldquoEstudio epidemioloacutegico de Fasciolasis en el aacuterea del Departamento Tinogasta Catamarca (Argentina)rdquo
Jorge Bruno Malandrini Jorge N Velaacutesquez Claudia C Soria Mordf Laura Pantano Laura Kamentzky y Silvana Carnevale
Categoriacutea Monografiacutea Original
Primer Premio ldquoParaacutesitos y enfermedades emergentes y re-emergentes calentamiento global cambio climaacutetico
transmisioacuten y migracioacuten de especies Evaluacioacuten de la participacioacuten del hombrerdquo G Mauricio Bulman y Jorge C Lamberti
221
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Primer premio I Congreso Internacional e Zoonosis y Enfermades Emergentes VII
Congreso Argentino de Zoonosis Asociacion Argentina de Zoonosis Buenos Aires 2011
Modalidad Poster
IV
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AGRADECIMIENTOS No hay tesis doctoral que pueda escribirse sin el apoyo de muchas personas -amigos
fuentes de informacioacuten y numerosos expertos externos- que pacientemente ofrecieron
tanto sus profundos conocimientos como cuantas aclaraciones fueron precisas Mi primer
agradecimiento lo expreso a las Doctoras Paula Budini Ana Litvik y al Doctor Walter
Almiroacuten por su guiacutea aportes conceptuales y de organizacioacuten ademaacutes de su inagotable
paciencia y predisposicioacuten por el proyecto permitiendo que me tomara el tiempo para
hacer la mejor presentacioacuten posible Aprecio mucho su apoyo y espero que ahora se vea
recompensado
Me es a todas luces imposible expresar individualmente mi agradecimiento a todos los
que me han ayudado Sin embargo la Dra Silvana Carnevale y el Dr Jorge Velaacutesquez
quienes figuran ciertamente entre los mejores y maacutes prestigiosos investigadores en la
temaacutetica por haberse tomado la molestia de leer todo el manuscrito y ofrecerme sus
respectivas criacuteticas y consejos
El autor cumple con el deber de agradecer al profesor Santiago Mas-Coma por sus
importantes aportes sus criacuteticas igualmente detalladas -pero mucho maacutes incisivas y
provocativas- durante la investigacioacuten En mis viajes ademaacutes de los estudios he visitado
sus laboratorios aulas universitarias y se ha mostrado generoso con el tiempo y sus
ideas
Tengo la satisfaccioacuten de dar las gracias a la Dra Dolores Bargues en la que concurren
las cualidades propias de una excelente docente e investigadora con las de una cientiacutefica
abierta que centra su intereacutes en Fasciolosis y su estrecha relacioacuten entre la sanidad animal
y la salud humana
A la Dra Rosacircngela Rodriacutegues-Silva y su equipo del Laboratorio de Helmintos Paraacutesitos
de Vertebrados del Fiocruz quieacuten llevoacute a cabo una minuciosa comparacioacuten de los
especiacutemenes observados
Un voto de agradecimiento similar tiene por destinatario a otro de mis colegas el Dr Hugo
Solana quien me abrioacute las puertas de su caacutetedra para el desarrollo de estudios sobre
resistencia antiparasitaria que permitieron resultados de difiacutecil logro en mi provincia
No puedo dejar de mencionar a la Dra Viviana Molina directora del ANLIS-Malbraacuten por
permitir mi participacioacuten docente en los cursos anuales de Enteroparaacutesitos dictados en el
Instituto asiacute como al Dr Sixto R Costamagna por su invitacioacuten para redactar un capiacutetulo
en su libro ldquoParasitosis Regionalesrdquo los que hicieron posible organizar los conocimientos
sobre fasciolosis y se generaran y precisen las ideas que se exponen
Mis palabras de reconocimiento especial a las principales autoridades de la Universidad
Nacional de Catamarca que resultan ser la mejor garantiacutea para que la investigacioacuten
V
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cientiacutefica sea el ingrediente especial en el claustro catamarquentildeo ademaacutes del aporte por
la beca doctoral otorgada y permitir el uso de equipos y materiales
El autor jamaacutes hubiese podido acceder a la realizacioacuten de esta Tesis Doctoral sin haber
tenido la ocasioacuten de contar con el apoyo econoacutemico de la Fundacioacuten Mundo Sano que
me permitioacute solventar viajes al extranjero
Tanto los trabajos de campo efectuados formando parte de expediciones a la zona del
trabajo como los estudios y anaacutelisis realizados en laboratorios fueron llevados a cabo
con financiamiento obtenido por parte de diferentes proyectos de investigacioacuten
acreditados por la SECyT-UNCa y Focanlis 2011
Las palabras no pueden expresar los sentimientos hacia los integrantes de mi equipo de
investigacioacuten quienes trabajaron sometidos a gran presioacuten durante varias etapas clave
del proceso
Finalmente esta lista no estariacutea completa sin un agradecimiento especial a todos los
integrantes del personal de salud -funcionarios meacutedicos bioquiacutemicos bioacutelogos
enfermeras y agentes sanitarios- participantes de tantos diacuteas de trabajos conjuntos que
permitieron la investigacioacuten
Debo igualmente una mencioacuten especial de gratitud a la Dra Diana T Masih por sus
consejos advertencias y estiacutemulos desde el comienzo de esta investigacioacuten
Ademaacutes tambieacuten debo expresar un especial reconocimiento a la Dra Gladys I Ponte y al
Dr Ernesto J Jacob sin los cuales esta tesis no hubiera podido llegar a buen fin
Huelga decir que soacutelo yo soy responsable de cualquier error que haya podido deslizarse
en esta tesis pese a mis mejores esfuerzos por evitarlo
J B M
VI
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RESUMEN Con el objetivo de contribuir al conocimiento de la epidemiologiacutea de la fasciolosis en el valle
de Fiambalaacute Catamarca Argentina se realizoacute un estudio descriptivo prospectivo con disentildeo
no experimental transeccional durante el periacuteodo 2008-2012
En 305 individuos con seguimiento de la cohorte en humanos se estudioacute la presencia de
anticuerpos anti-rproCL1 de Fasciola hepatica (Fh) eosinofilia proteiacutenas totales aacutecidos
biliares enzimas hepaacuteticas y bilirrubina seacuterica Se analizoacute la presencia de Fasciola hepatica
en la materia fecal y utilizoacute el diagnoacutestico por imagen en los individuos estudiados
La interpretacioacuten de las manifestaciones cliacutenicas (n=174) la deteccioacuten de anticuerpos
antifasciola por ensayo de inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (ELISA) las imaacutegenes (n=57) y
la aplicacioacuten de meacutetodos de diagnoacutestico etioloacutegico por microscopiacutea en materiales de heces
(n=96) mediante su utilizacioacuten sistemaacutetica e integrada permitieron realizar el diagnoacutestico de
fasciolosis
Se estudiaron 1077 muestras de heces de las distintas especies animales domeacutesticas
presentes en la zona como ovinos asnos llamas caprinos bovinos equinos y porcinos
Se obtuvieron 398 ejemplares de Fh de 11 animales faenados y se sometieron a estudios
morfoloacutegicos moleculares por amplificacioacuten del gen mitocondrial de la subunidad 1 de la
citocromo oxidasa y de resistencia antiparasitaria a Triclabendazol por amplificacioacuten aleatoria
de ADN polimoacuterfico
En 2354 limneidos se identificoacute la especie por secuenciacioacuten del aacutecido desoxirribonucleico
(ADN) y se demostroacute la infeccioacuten natural
Se estimoacute una prevalencia en el hombre de 3442 con aumento de eosinoacutefilos (p=0000) de
proteiacutenas seacutericas (p=0000) y una edad promedio menor a 19 antildeos en los individuos positivos
en relacioacuten a los negativos En animales la prevalencia obtenida fue 2674 con mayor
infeccioacuten en ovinos Se encontraron ejemplares adultos de Fh con identidad de secuencias
(994) a ejemplares de San Luis y otros resistentes a TCBZ Se identificoacute a los limneidos
Lymnaea neotropica y Lymnaea viator como los hospedadores intermediarios
Los resultados indican que las poblaciones humanas y animales estudiadas tienen una alta
prevalencia de Fh en el valle de Fiambalaacute Catamarca desde 2008 al 2012 El agente
parasitario es ideacutentico geneacuteticamente a los ya encontrados en otras regiones de Argentina
pero algunos presentan resistencia a TCBZ que compromete el futuro del tratamiento
humano El hospedador intermediario L neotropica constituye la descripcioacuten de una nueva
especie de limneidos en el Noroeste argentino
PALABRAS CLAVE fasciolosis infeccioacuten humana ELISA resistencia antiparasitaria L
neotropica
VII
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SUMMARY In order to contribute to the knowledge of fascioliasisacute epidemiology in the valley of
Fiambalaacute Catamarca Argentina a prospective descriptive study with no experimental
cross-sectional design was done during the period 2008-2012
Within 305 individuals with cohort tracing in human the presence of antibodies anti-
rproCL1 of Fasciola hepatica eosinophilia total proteins bile acids liver enzymes and
serum bilirubin was studied The presence of Fasciola hepatica (Fh) in the stool was
analyzed and diagnostic imaging was used in individuals studied
The interpretation of clinical manifestations (n=174) the use of serological diagnosis
techniques by immunosorbent assay for enzyme-linked (ELISA) images (n=57) and the
application of methods of etiological diagnosis by microscopy in materials feces (n=96)
through its systematic and integrated use allowed the fascioliasis diagnosis
1077 stool samples from different domestic animals species present in the area as sheep
donkeys llamas goats cattle horses and pigs were studied
398 copies of Fasciola hepatica from 11 slaughtered animals were obtained and
subjected to morphological studies molecular by amplification of mitochondrial gene of
subunit 1 of cytochrome oxidase and Triclabendazole antiparasitic resistance by Random
Amplification of Polymorphic DNA (RAPD-PCR)
In 2354 lymnaeid the species was identified by deoxyribonucleic acid (DNA) sequencing
and natural infection was demonstrated
Prevalence of 3442 was estimated in men with increased eosinophilia (p=0000) serum
proteins (p=0000) and a difference in age of 19 years younger in positive individuals in
relation to negative In animal the obtained prevalence was 2674 with more infection in
sheep Fasciola hepatica adult specimens were found with sequence identity (994) in
individuals of San Luis and other resistant to TCBZ The lymnaeid Lymnaea neotropica
and Lymnaea viator and were identified as intermediate hosts
The results indicate that the studied human and animal populations have a high
prevalence of Fasciola hepatica in the valley of Fiambalaacute Catamarca from 2008 to 2012
The parasitic agent is genetically identical to those already found in other regions of
Argentina but some are resistant to TCBZ compromising the future of treatment in human
The intermediate host L neotropica establish the description of a new lymnaeid species in
the Northwest of Argentina
KEYWORDS fascioliosis human infection ELISA antiparasitic resistance L neotropica
VIIIVIIIVIII
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ldquoLA FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS NO SE HACE SOLIDARIA CON LAS
OPINIONES DE ESTA TESISrdquo
Art 43deg Reglamento de la Carrera de Doctorado en Ciencias de la Salud (RHCD Res Ndeg 7222010)
IX
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INDICE GENERAL Contenido
Paacutegina
Portadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Frasehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Dedicatoriahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Agradecimientohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Resumenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Summaryhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Paacutegina de advertenciahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Iacutendice de contenidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Iacutendice de tablas y figurashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
I II III IV VI
VII VIII
IX XIII
INTRODUCCIOacuteN Y OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
16
1 Antecedenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
20 11 Breve resentildea histoacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20
111 Sinonimiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22 112 Clasificacioacuten taxonoacutemicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22
12 Ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22 121 Aspectos epidemioloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 25
13 Viacuteas de difusioacuten geograacutefica de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 26 131 Distribucioacuten de F hepatica en Ameacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 27
14 Hospedador intermediariohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31 15 Fasciola hepatica en humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 34 16 La infeccioacuten a nivel mundialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 36
161 Ameacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 37 1611 Peruacute Bolivia y Chilehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 38 1612 Repuacuteblica Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 39
17 Factores de riesgo en la infeccioacuten de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphellip 40 18 Sintomatologiacutea cliacutenica y patologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 42 19 Diagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 44
191 Directohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 44 1911 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 45 1912 Teacutecnicas quiruacutergicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 46
192 Indirectohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 46 110 Planteamiento del problemahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 49
1101 Justificacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 51 1102 Viabilidad del estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1103 Evaluacioacuten de las deficienciashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52
111 Objetivoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1111 Objetivo generalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52 1112 Objetivos especiacuteficoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 52
112 Hipoacutetesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 53 DISENtildeO DEL ESTUDIO Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 54 2 Datos secundarios y caracteriacutesticas del ambientehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55
21 Seleccioacuten del tipo de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 22 Lugar de la poblacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 23 Seleccioacuten de la poblacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 24 Periodo de estudiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 25 Descripcioacuten regional del haacutebitat del valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphellip 56
Generalidadeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17
X
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31 Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
311 Criterios de inclusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
312 Criterios de exclusioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 59 32 Obtencioacuten de las muestrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 60
321 Recoleccioacuten de sangrehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 60
322 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 61
3221 Expresioacuten y purificacioacuten de la proteiacutena recombinante procatepsina L1 (rproCL1)helliphellip 61
3222 Ensayo inmunoenzimaacuteticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3223 Foacutermula leucocitariahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3224 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 62
3225 Proteiacutenas Totaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3226 Aacutecidos biliareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3227 Bilirrubina seacutericahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63
3228 Enzimashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63 323 Anaacutelisis de los datoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 63 324 Materia fecalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 64
3241 Teacutecnica de Sedimentacioacuten Raacutepida (TSR)helliphellip 65
3242 Teacutecnicas de concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 65
32421 Meacutetodo de Telemann modificadohellip 65
32422 Meacutetodo de flotacioacuten de Willishelliphelliphellip 65
32423 Meacutetodo cuantitativo para huevoshelliphellip 65 33 Diagnoacutestico por imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 34 Datos cliacutenicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66
Animales como hospedador definitivo de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 4 - Especies animales estudiadashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66
41 Exaacutemenes coproparasitoloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 66 411 Identificacioacuten de otros paraacutesitos gastrointestinaleshelliphelliphellip 67
42 Necropsias y obtencioacuten de especiacutemenes de F hepaticahelliphelliphelliphellip 68 421 Estudios morfoloacutegicos de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 69 422 Estudios de haplotipos de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 69 423 Estudios de resistencia a antiparasitarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70
Identificacioacuten del hospedador intermediario de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70 5 Epidemiologiacutea de los caracoleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 70
51 Recoleccioacuten de limneidos en la zona del valle de Fiambalaacutehelliphelliphellip 70 511 Transporte de limneidos al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71
52 Tareas en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71 521 Adaptacioacuten y cultivo de limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 71 522 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 72 523 Infeccioacuten natural por F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 72 524 Infeccioacuten inducida del hospedador intermediariohelliphelliphelliphellip 73
53 Identificacioacuten de la especie mediante determinacioacuten de haplotipos 73 531 Marcadores de ADN seleccionadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 74 532 Extraccioacuten de ADNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 74 533 Secuenciacioacuten de los marcadores de ADNr y ADNmthelliphellip 74 534 Anaacutelisis de la secuenciahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 75 535 Nomenclatura de los haplotipos de ADNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 75
54 Determinacioacuten molecular de la infeccioacuten natural de limneidos con F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 76
251 Orografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 252 Climahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 56 253 Hidrografiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58 254 Flora y Faunahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
3 Seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58 Epidemiologiacutea en seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 58
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ISBN 978-987-661-270-8
541 Electroforesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 76 RESULTADOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 78
6 Datos secundarios y caracteriacutesticas del ambientehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 79 61 Caracteriacutesticas de las viviendas del valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphellip 79 62 Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiadahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 80 63 Caracteriacutesticas climaacuteticas y haacutebitathelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 80
7 Resultados en seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81 71 Serologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81
711 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 81 712 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 713 Proteiacutenas totales enzimas bilirrubina y colesterolhellip 87
72 Geacutenerohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 87 73 Grupos etarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 88 74 Anaacutelisis estadiacutesticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 90 75 Anaacutelisis coproparasitoloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 76 Siacutentomas y signoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 77 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 78 Teacutecnicas invasivashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 91 79 Descripcioacuten de casos con Fasciolosishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 92
8 Resultados en animaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 98 81 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 98
811 Prevalencia por exaacutemenes coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphellip 98 812 Hallazgos de huevos de otros paraacutesitos
gastrointestinaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 99 82 Recuperacioacuten de ejemplares de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 99 83 Morfologiacutea microscoacutepica de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 100
831 Microscopiacutea de contraste por interferencia diferencial 102 84 Variabilidad geneacutetica intraespeciacuteficahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 102 85 Resistencia al triclabendazolhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 102
9 Resultados en el hospedador intermediario de F hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 91 Identificacioacuten de los caracoles helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 92 Medicioacuten de moluscoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 103 93 Mantenimiento en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105
931 Identificacioacuten de gasteroacutepodos infectadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105
9311 Infeccioacuten del hospedador intermediariohelliphelliphelliphelliphellip 105
932 Identificacioacuten molecular de la infeccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9321 PCR de infeccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106 94 Caracterizacioacuten molecular de limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
941 L neotropicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9411 Marcadores moleculareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106
9412 Marcadores mitocondrialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 107
942 L viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 108
9421 Marcadores ribosomaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 108
9422 Marcadores mitocondriales 109
943 Anaacutelisis comparativo de L neotropica vs L viatorhelliphelliphelliphellip 109 DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 111
101 En los seres humanoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 112
1011 Inmunodiagnoacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 113
1012 Eosinofiliahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 114
1013 Proteiacutenas totales y enzimas hepaacuteticashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 115
1014 Geacutenerohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 116
1015 Grupos etarioshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 117
1016 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 118
1017 Siacutentomas y signoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 119
1018 Imaacutegeneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 120
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1019 Teacutecnicas invasivashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121 102 En los animaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121
1021 Estudios coproloacutegicoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 121
1022 Necropsiashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 124
1023 Morfologiacutea microscoacutepicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 124
1024 Variabilidad geneacutetica intraespeciacuteficahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 125
1025 Resistencia antiparasitariahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 126 103 En los limneidoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 127
1031 Caracteriacutesticas fenotiacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 127
1032 Importancia de las influencias ambientaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 128
1033 Estudios en el laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 128
1034 Identificacioacuten microscoacutepica y molecularhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 129
1035 Caracteriacutesticas moleculareshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 131
1036 Lymnaea neotropicahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 132
1037 Lymnaea viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 132 Conclusioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 134 Recomendacioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 137 BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 139 ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 171
111 Tablas y figurashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 172 112 Trabajos cientiacuteficos a partir de la informacioacuten generada en esta
tesishelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 192 1121 Trabajos publicadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 192 1122 Presentacioacuten en Congresos y Jornadashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 203 1123 Premios y Distincioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 217
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hepatogramas datos cliacutenicos imaacutegenes y cirugiacuteas sobre casos positivos con diagnoacutestico documentado Valle de Fiambalaacute Antildeos 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip
82 Tabla 3 Resultados comparativos entre la presencia de eosinoacutefilia y ensayos de ELISA seropositivos Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 Tabla 4 Resultados comparativos entre los valores de proteiacutenas totales y anaacutelisis de ELISA positivos Valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphellip 87 Tabla 5 Frecuencia absoluta de casos positivos y negativos al ensayo de ELISA recombinante para Fasciola hepatica en pacientes agrupados por geacutenero en los diferentes grupos etarios Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 88 Tabla 6 Frecuencia y porcentaje acumulado por grupo etario con el ensayo de ELISA para Fasciola hepatica Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- Tabla 7
2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip Clasificacioacutena de los casos observados en el Valle de Fiambalaacute 2009-
89
2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 90 Tabla 8 Variables de la ecuacioacuten Valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphellip 90 Tabla 9 Prevalencia de F hepatica en diferentes especies de animales domeacutesticos Valle de Fiambalaacute Catamarca Antildeos 2009-2011helliphelliphelliphellip 99 Tabla 10 Comparacioacuten de las mediciones de conchillas de limneidos entre las poblaciones naturales de L viator y L neotropica colectadas en el valle de Fiambalaacute 2009-2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 104 Tabla 11 Caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina de acuerdo con los diferentes sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 172 Tabla 12 Datos comparativos de los tamantildeos obtenidos en ejemplares de F hepatica del valle de Fiambalaacute con las de diferentes lugares estudiadoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 173 Tabla 13 ADN ribosomal nuclear y haplotipo de ADN mitocondrial para la identificacioacuten de coacutedigo L neotropica y L viator del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 174 Tabla 14 Diferencias de nucleoacutetidos encontradas en el fragmento de la secuencia del gen 16S ADNmt de las poblaciones de L neotropica estudiadas y otros haplotipos 16S aislados de la misma especie disponibles en GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 175 Tabla 15 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontradas en la secuencia de fragmento ADNmt del gen cox1 de las poblaciones de L neotropica estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos cox1 y aislamientos de la misma especie disponibles en GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 176 Tabla 16 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia ADNr ITS-2 de L viator en el valle de Fiambalaacute y otros de Argentina y haplotipos ITS- 2 aislados en la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphellip 177 Tabla 17 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia del ADNr ITS-1 de L viator colectados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y otros haplotipos ITS-1 y aislamientos disponibles en
LISTA DE TABLAS Y FIGURAS
Tablas Paacutegina Tabla 1 Hitos en el descubrimiento del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahellip 21
Tabla 2 Resultados de anaacutelisis comparativos seguacuten sexo y edad de la absorbancia de ELISA estudios coproloacutegicos eosinoacutefilia
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GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 178 Tabla 18 Diferencias de nucleoacutetidos que se encuentran en la secuencia del gen ADNr 16S y fragmentos del gen mitocondrial de L neotropica y L viator estudiados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y haplotipos 16S aislados en la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 179 Tabla 19 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontrados en la secuencia del fragmento de ADNmt del gen cox1 de L viator estudiado y otros haplotipos cox1 aislados de la misma especie disponibles en el GenBankhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 180 Tabla 20 Distancias por pares entre secuencias de haplotipos ITS-2 e ITS-1 aislados de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 181 Tabla 21 Distancias por pares entre 16S y secuencias en haplotipos cox1 en aislamientos de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60helliphelliphelliphelliphellip 182 Tabla 22 Promedio de las distancias geneacuteticas entre y dentro de L neotropica y L viatorhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 183 Figura 1 Especiacutemenes adultos de F hepatica sobre la caacutepsula de Glisson obtenidos a partir de una infeccioacuten natural en Lama glama en el valle de Fiambalaacute y esquema de Fasciola hepatica adultahelliphelliphelliphelliphelliphellip 23 Figura 2 Huevos de F hepatica presentes en materia fecal de ovinos infectados naturalmente en el valle de Fiambalaacute obtenidos por el meacutetodo de sedimentacioacuten de Dennis Stone y Swanson donde se aprecian los embriones en su interior y el detalle del opeacuterculo abierto y esquema de un huevo embrionadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 24 Figura 3 Esquema del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 24 Figura 4 Geografiacutea de la probable dispersioacuten de Fasciola hepaticahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 27 Figura 5 Imagen y fotografiacutea del aspecto externo de Lymnaea neotropica proveniente del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphellip 31 Figura 6 Ubicacioacuten geograacutefica del Valle de Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia de Catamarca Repuacuteblica Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 55 Figura 7 Distribucioacuten de personas (n=305) seropositivas y seronegativas en frecuencias relativas () al inmunodiagnoacutestico del ensayo de ELISA analizadas en el Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009- 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 86 Figura 8 Imagen microscoacutepica de huevo de Fasciola hepatica obtenido con la teacutecnica de Lumbreras en la materia fecal de una paciente de 3 antildeos del valle de Fiambalaacute Catamarcahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 93 Figura 9 Ejemplar de F hepatica extraiacutedo del coleacutedoco con CRTE en una paciente de 22 antildeos en el Hospital San Juan Bautista Catamarca 2012helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 94 Figura 10 Imagen ecograacutefica hepaacutetica con hepatomegalia Se observa aumento de la ecogenicidad y una estructura de aspecto filiformehellip 97 Figura 11 Imaacutegenes microscoacutepicas de estructura morfoloacutegica del cono cefaacutelico de Fasciola hepatica obtenidas de un animal bovino faenado en el Valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 100 Figura 12 Estructuras morfoloacutegicas de Fasciola hepatica halladas en un animal bovino del Valle de Fiambalaacute Argentina observadas al microscopio 101 Figura 13 Uacutetero con huevos de un espeacutecimen de Fasciola hepatica obtenido de la necropsia de un animal bovino en el Valle de Fiambalaacute Aumento 10xhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 101 Figura 14 Detalle del tegumento de una F hepatica mostrando las espinashelliphellip 102 Figura 15 Microfotografiacuteas tomadas de estructuras morfoloacutegicas de una F hepatica de ganado bovino del valle de Fiambalaacute observadas con microscopio de contraste por interferencia diferencial helliphelliphelliphelliphelliphellip 102
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Figura 16 Patrones de amplificacioacuten por RAPD PCR de Fasciola hepatica
aisladas de hiacutegados obtenidos para la deteccioacuten de cepas
resistentes a Triclabendazol (TCBZ) comparados con otras zonashellip 103 Figura 17 Conchillas de L viator A) vista ventral B) vista dorsal escala 5 mm y conchillas de L neotropica C) vista ventral D) vista dorsal escala 4 mm Especiacutemenes colectados en vegas del valle de Fiambalaacute 2011helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 105 Figura 18 Liacutemite de deteccioacuten del ensayo de PCR por electroforesis en gel de agarosa de los productos de amplificacioacuten utilizado como plantilla de ADN para la deteccioacuten de F hepatica en muestras de limneidos del Valle de Fiambalaacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 106 Figura 19 Consentimiento informadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 184 Figura 20 Planilla de recoleccioacuten de datos de las viviendas Valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 185 Figura 21 Planilla de recoleccioacuten de datos de las personas Valle de Fiambalaacute Catamarca Argentinahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 186 Figura 22 Graacuteficas de comparacioacuten de temperaturas promedio mensual en grados centiacutegrados y precipitacioacuten-aridez entre las localidades de Rio Grande y Tatoacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 187 Figura 23 Diseccioacuten de conductos biliares de un hiacutegado de Lama glama donde se observan ejemplares de Fasciola hepatica intracanaliculares Valle de Fiambalaacute Catamarca 2010helliphelliphelliphelliphellip 188 Figura 24 Apertura de un conducto biliar intrahepaacutetico en un hiacutegado de Ovis orientalis aries Se observa un ejemplar de F hepatica colangitis croacutenica con lesiones de la mucosa biliar hipertrofiada estrecheces inflamatorias fibrosas y piedras Valle de Fiambalaacute Catamarca 2010helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 188 Figura 25 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino de la provincia de Salta observadas al microscopiohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 189 Figura 26 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino del municipio de Cordeiro RJ Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 189 Figura 27 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de bovinos de la provincia de Salta Argentina observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 190 Figura 28 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado del municipio de Lavras MG Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 190 Figura 29 Anaacutelisis filogeneacutetico de F hepatica basado en las secuencias de CO1 FhC01-CAT-adulthelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 191
INTRODUCCIOacuteN y OBJETIVOS
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Generalidades
La Fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonoacutetica transmitida por
alimentos causada por Fasciola hepatica Linneaus 1758 (Trematoda Fasciolidae) que
utiliza como hospedadores intermediarios caracoles de agua dulce de la familia
Lymnaeidae Los hospedadores definitivos son mamiacuteferos silvestres y el ganado
principalmente ovino y bovino siendo el hombre un hospedador accidental Aunque este
paraacutesito es prevalente y produce severas peacuterdidas econoacutemicas en animales (Espinosa et
al 2010) actualmente emerge como causa de enfermedad en humanos (Chen y Mott
1990)
Fasciolosis era una enfermedad de los animales que en condiciones particulares podriacutea
infectar al hombre No se puede olvidar que se considera actualmente una zoonosis
emergente una de las 17 enfermedades tropicales desatendidas siendo una afeccioacuten
parasitaria ampliamente difundida en el todo el mundo (Organizacioacuten Mundial de la Salud
1995)
La Fasciolosis se caracteriza por estar relacionada con una problemaacutetica muy compleja
que involucra un contexto socio-cultural y socio-econoacutemico que debe ser atendido
sanitariamente en forma simultaacutenea La decisioacuten de prevenir controlar o eliminar la
aparicioacuten de esta enfermedad como muchos otros problemas del sector salud estaacute
relacionada con los estudios realizados
Fasciola hepatica se situacutea en un lugar preferente dentro del campo de conocimiento de la
Parasitologiacutea contribuyendo a ello la publicacioacuten de libros y trabajos dedicados a este
trematodo en los que se analizan aspectos muy distintos y desde puntos de vista
diferentes
Los apoyos recibidos desde la bioquiacutemica biologiacutea molecular geneacutetica epidemiologiacutea
farmacologiacutea e inmunologiacutea han demostrado ser pilares imprescindibles para impulsar
nuevos planteamientos de las investigaciones y han permitido avanzar en el
conocimiento de esta parasitosis
Los puntos de vista desde los que se investiga sobre F hepatica y Fasciolosis son muy
distintos y profundizan todo lo referente a su conocimiento desde los estudios iniciales
puramente bioloacutegicos o ecoloacutegicos hasta los maacutes modernos y actuales que tienen su
maacuteximo apoyo en la aplicacioacuten de avanzadas teacutecnicas de biologiacutea molecular bioquiacutemica
e inmunologiacutea
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Probablemente no sea ajena esta realidad al hecho importante de que la Fasciolosis
tambieacuten afecta al hombre y de hecho existen regiones en el sur de Latinoameacuterica donde
se diagnostican prevalencias muy elevadas de personas parasitadas por F hepatica
(Bargues et al 1996 a)(Bargues et al 1996 b)
En este sentido en zonas de Latinoameacuterica se reconoce el gran impacto en la salud
puacuteblica y en la economiacutea de los productores ganaderos donde los iacutendices de
parasitacioacuten animal son muy altos (Marcos et al 2007) lo que tambieacuten se traduce en la
presentacioacuten de prevalencias de Fasciolosis humana en esa poblacioacuten estando
afectados de manera especial nintildeos y joacutevenes (Valencia et al 2005)
Los sistemas de informacioacuten y de vigilancia de enfermedades transmisibles no incluyen
en muchos casos los indicadores de morbilidad por zoonosis por lo que la casuiacutestica de
esta enfermedad estaacute muy dispersa Dado que el subregistro es importante que la
informacioacuten proporcionada con relacioacuten a los casos es variable de acuerdo a la fuente o a
la persona que la suministra los datos tienen que ser obtenidos en un nuevo contexto
para que den respuestas a los interrogantes planteados sobre el tema
En la Repuacuteblica Argentina la prevalencia de esta parasitosis en el hombre estaacute reducida
por un fuerte subregistro al que se agregan problemas relativos al diagnoacutestico realizado
rutinariamente mediante el anaacutelisis coproparasitoloacutegico que presenta las desventajas de
una baja sensibilidad y no detectar la fase aguda de la enfermedad (Knoblock 1985)
Numerosas teacutecnicas de inmunodiagnoacutestico de esta parasitosis han sido descriptas y
aplicadas en diversos paiacuteses pero las mismas no se llevan a cabo en los laboratorios de
las aacutereas de mayor casuiacutestica de nuestro paiacutes (Carnevale y Velaacutesquez 2011)
En el paiacutes la importancia de esta enfermedad en los humanos no ha sido suficientemente
evaluada habieacutendose detectado esporaacutedicamente casos en pobladores rurales que
habitan en zonas serranas y turistas que visitaron tales aacutereas durante la eacutepoca estival
(Siciliano et al 1989)(Nieto Sosa et al 2008) Es una patologiacutea de intereacutes regional su
notificacioacuten no es obligatoria siendo una infeccioacuten secundaria a la ingesta de berros
comunes del geacutenero Nasturtium officinale (Barcat 2005) achicoria amarga (Toraxacum
officinale) (Siciliano 1982) u otros vegetales silvestres comestibles Por otra parte el
agua se ha citado como fuente de infeccioacuten humana puesto que se demostroacute la
presencia de metacercarias flotantes lo que se relacionoacute con casos de infeccioacuten humana
en zonas de Ameacuterica donde no es habitual el consumo de berros (Vareille et al 1993)
En los animales el diagnoacutestico se basa en la observacioacuten de paraacutesitos mediante
necropsia (Boero 1976) Tambieacuten se utiliza el estudio con teacutecnicas coproparasitoloacutegicas
y se han desarrollado test inmunoloacutegicos para la deteccioacuten de anticuerpos contra el
trematode (Olaechea 2007)
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La infeccioacuten por F hepatica fue siempre considerada una enfermedad de importancia
animal En los uacuteltimos antildeos la prevalencia de infecciones en rumiantes domeacutesticos ha
sido reportada en Europa con valores de 5 en Italia 10 en Gran Bretantildea 295 a
59 en Espantildea 188 en Noruega 119 en Polonia 107 en Alemania 45 en
Irlanda 293 en Turquiacutea y osciloacute entre el 112 al 252 en el centro de Francia
(Martiacutenez-Valladares et al 2013)(Kozłowska-loj y Loj-Maczulska 2013) Sin embargo a
partir de 1990 se planteoacute como un problema de Salud Puacuteblica debido a la aparicioacuten de
publicaciones que demostraban para el periacuteodo 1970-1990 la existencia de personas
infectadas de 42 paiacuteses diferentes de todos los continentes (Chen y Mott 1990)
En nuestro paiacutes aunque los anaacutelisis en cuanto a fisiografiacutea clima prevalencias animales
y limneidos son auacuten escasos (Mera y Sierra et al 2011) la situacioacuten no tiene porqueacute
diferenciarse de lo que ocurre en Bolivia Peruacute y Chile donde Fasciolosis humana es
endeacutemica Debido a esta nueva situacioacuten la Fasciolosis ya no puede considerarse
simplemente como una enfermedad zoonoacutetica secundaria sino maacutes bien como una
importante enfermedad parasitaria del hombre
Hoy se estima que si bien son los animales los que padecen las infecciones con maacutes
frecuencia respecto de las personas y que si en el pasado la Fasciolosis humana estaba
circunscripta a aacutereas y poblaciones maacutes o menos delimitadas recientemente los cambios
climatoloacutegicos y ambientales y sobre todo los cambios de las costumbres y haacutebitos
humanos estaacuten definiendo nuevos liacutemites geograacuteficos para la distribucioacuten de esta
parasitosis y hacen que aumente el riesgo de muchas poblaciones humanas ante esta
zoonosis (OMS 2006) como en otras enfermedades emergentes
La infeccioacuten humana por F hepatica siempre se habiacutea considerado como una
enfermedad de poca importancia ante lo que se veiacutea como una infeccioacuten rara o
escasamente prevalente sin embargo desde la revisioacuten de la situacioacuten (Chen y Mott
1990) se llamoacute la atencioacuten sobre la importancia de la Fasciolosis como un verdadero
problema de Salud Puacuteblica
Estas y otras circunstancias han hecho cambiar de forma radical la idea que hasta
entonces se teniacutea sobre Fasciolosis humana sobre todo teniendo en cuenta las
numerosas regiones que maacutes recientemente se han demostrado como endeacutemicas y por
tanto con elevadas prevalencias e intensidades de parasitacioacuten La Fasciolosis se
reconoce ahora como una enfermedad humana emergente Sea como fuere es indudable
que el nuacutemero real de casos humanos supera ampliamente los que se denuncian y a
pesar de que la situacioacuten ha cambiado desde ese periodo sigue siendo muy aceptada la
idea de que se trata de una enfermedad propia de ovejas y vacas lo que impide
convencer a los responsables regionales de Salud Puacuteblica de la importancia de estudiar
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en detalle las circunstancias que llevan a la infeccioacuten humana en algunos paiacuteses y la
necesidad imperiosa de adoptar medidas de diagnoacutestico y control
Las caracteriacutesticas de la epidemiologiacutea y transmisioacuten de la Fasciolosis conllevan a que su
distribucioacuten se disponga en las tiacutepicas manchas lo que hace que sea maacutes correcto
mencionar la distribucioacuten en aacutereas geograacuteficas o zonas con determinadas condiciones
maacutes que en el territorio completo de los paiacuteses
En el capiacutetulo de la Salud Puacuteblica referente a Fasciolosis se puede afirmar que hay
determinadas regiones con elevada prevalencia y con muchas personas afectadas En
alguno de los paiacuteses avanzados hay un determinado nuacutemero de casos humanos muchos
de los cuales se informan detalladamente en las publicaciones pero en otros lo que
sucede hace pensar que haya mayor nuacutemero de infecciones por el trematodo y que
pasen inadvertidos para la consulta meacutedica o que incluso se presenten casos de
Fasciolosis que cliacutenicamente se diagnostiquen equivocadamente como otros procesos
de ahiacute que sea de la mayor importancia mejorar o precisar el diagnoacutestico tanto a nivel de
semiologiacutea como del laboratorio
Es evidente que muchos de los estudios sobre prevalencias de fasciolosis humana no
son realmente muestras epidemioloacutegicas sino solamente estimaciones del nuacutemero de
casos detectados en una determinada zona La infeccioacuten humana estaacute citada en
numerosos paiacuteses de los cinco continentes lo que viene a demostrar la gran capacidad
de adaptacioacuten a muy distintos haacutebitats y climas
1 - Antecedentes
11 - Breve Resentildea Histoacuterica
La Fasciolosis en el sentido amplio del teacutermino estaacute causada por paraacutesitos trematodos
digeneos que pertenecen al geacutenero Fasciola cuya distribucioacuten geograacutefica entra sin duda
en la categoriacutea de paraacutesito cosmopolita ya que su difusioacuten es mundial (OMS 2006) Se
han descrito varias especies dentro del geacutenero Fasciola pero soacutelo dos se reconocen
como vaacutelidas desde el punto de vista taxonoacutemico como paraacutesitas del hombre y de
animales Esencialmente las especies que intervienen en esta parasitosis son F hepatica
y F gigantica Cobbold 1855 la primera predomina en zonas de climas maacutes templados
sin excluir su presencia en otras regiones y reconociendo que ambas se superponen con
frecuencia en zonas subtropicales (Andrews 1999)
En una investigacioacuten paleo-parasitoloacutegica realizada en el Valle Saale-Unistrut en
Alemania (Teegen 2003) se evidencioacute la presencia de huevos de F hepatica en un
esqueleto humano prehistoacuterico y tambieacuten en los restos de un bovino de unos 3000 antildeos
a C hallazgos que denotan la presencia de Fasciola spp en Europa hace miles de
antildeos La primera descripcioacuten de Fasciolosis en la literatura estaacute contenida en el libro
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titulado ldquoBlack Book of Chirkrdquo publicado cerca de 1200 (Froyd 1969) donde hace
referencia a paraacutesitos en el hiacutegado de las ovejas
Tabla 1 Hitos en el descubrimiento del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
De Brie 1379 Primero en observar al trematodo F hepatica
Redi 1688 Refuta la teoriacutea de la generacioacuten espontaacutenea
Swammerdam
1737 Primero en observar cercarias en un caracol
Muumlller 1773 Observa cercarias nadando en el agua Zeder 1803 Describe el miracidio eclosionando del huevo Nitzsch 1807 Observa cercarias enquistaacutendose
Bojanus 1818 Describe las redias y el desarrollo de cercariacuteas La Valette St
George 1855 Observa la infeccioacuten del caracol por el miracidio
Weinland 1875 Sugiere que las fases larvarias de F hepatica
transcurren en L truncatula
Leuckart Thomas 1882
Confirma que L truncatula es el hospedador intermediario y se comprende el ciclo bioloacutegico del trematodo
Lutz1892 1893 Confirma que los herbiacutevoros adquieren la infeccioacuten mediante la ingestioacuten de metacercarias
Sinitsin 1914 Confirma la ruta de migracioacuten de F hepatica hacia el hiacutegado
Fuente Andrews Stuart J 1999
Seguacuten la historia maacutes cercana de F hepatica se trata del primer trematodo que describioacute
en 1250 Pietro d‟Abano y maacutes tarde en 1379 Jean de Brie vio los paraacutesitos en un hiacutegado
ovino y relacionoacute su presencia con el consumo de una hierba que llama dauve (acaso un
ranuacutenculo) de donde derivoacute el nombre de duela del hiacutegado (Cordero 1999) Gesner
(1551) demostroacute que el distoma del hiacutegado se encontraba alliacute donde el ganado vacuno se
alimentaba con hierba en las proximidades del agua (Piekarski 1959)
De acuerdo a Cole (1944) una descripcioacuten del gusano aplanado del hiacutegado aparece en el
libro titulado ldquoA new Tracte or Treatyse moost profytable for all Husbandemenrdquo publicado
en 1523 por Sir Anthony Fitzherbert Poco despueacutes en 1539 en el libro ldquoDe lumbricis
alvum occupantibusrdquo se hace referencia a una observacioacuten realizada por el meacutedico
Fanensi Gabucinus quien describe gusanos que pareciacutean semillas de calabaza en los
vasos sanguiacuteneos del hiacutegado de ovejas y cabras Durante la segunda mitad del siglo XVI
se reportaron observaciones adicionales sobre la enfermedad del gusano hepaacutetico
aplanado principalmente las de Cornel Gemma (1575) En ese momento todaviacutea era
comuacuten pensar que la alimentacioacuten de las ovejas con determinadas plantas era
responsable de la enfermedad Recieacuten en 1688 esta teoriacutea fue cambiada por Francesco
Redi un meacutedico italiano autor de la primera helmintologiacutea comparada quien mostrando
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que los paraacutesitos liberaban huevos y asiacute destrozoacute la falsa doctrina de la generacioacuten
espontaacutenea Se desconoce el paraacutesito en el cual esta observacioacuten fue realizada por
primera vez pero Redi fue el primero en publicar un cuadro del paraacutesito un esquema de
un espeacutecimen sacado del hiacutegado de un carnero castrado y antildeos maacutes tarde tambieacuten las
recogioacute incluso de una liebre fue eacutel quien realizoacute los primeros dibujos de los que se tiene
constancia de este trematode
Aparentemente John Faber en 1670 afirmoacute que el gusano aplanado del hiacutegado viviacutea en
los conductos biliares y no en los vasos sanguiacuteneos (Reinhard 1957) Pollas en el siglo
XIX descubre el paraacutesito en el hombre mencionaacutendolo por primera vez en 1818 Otro de
los que describioacute el hallazgo de F hepatica en humanos fue Petridge en 1852 en viacuteas
biliares extrahepaacuteticas en Inglaterra (Blancas et al 2004)
En 1883 Leukhart de Alemania (Taylor 1937) y Thomas de Inglaterra investigando por
separado describieron el ciclo de vida completo (Jensen y Mackey 1973) Asiacute pues en
2014 se cumplioacute el primer centenario del descubrimiento del ciclo completo de F hepatica
en el que participaron numerosos investigadores de diversos paiacuteses entre los que se
citan soacutelo los logros maacutes destacados de alguno de ellos Thomas y Leuckart finalmente
concluidos por Sinitsin (Sinitsin 1914)
111 - Sinonimia
La palabra trematodo (derivada del griego) significa abertura o ventosa F hepatica ha
recibido tambieacuten nombres corrientes como ldquoduelardquo ldquodistomardquo o ldquoliver fluke diseaserdquo y
entre su sinonimia ldquojallo jallordquo ldquocallutacardquo ldquohojuelardquo y ldquomariposardquo El nombre vernaacuteculo en
Meacutexico es ldquocazahuaterdquo popularmente conocida como ldquoalicuyardquo o ldquocolerinardquo en la sierra
peruana ldquoTacutealpha laqacuteordquo en Bolivia ldquopirihuiacutenrdquo en Chile o ldquosaguaipeacuterdquo en Uruguay y
Argentina En nuestro paiacutes ldquoPalomilla del hiacutegadordquo en la pampa huacutemeda ldquocorrochordquo en la
provincia de San Juan ldquochonchacordquo en San Luis y ldquouncardquo o ldquouncacardquo en el noroeste
argentino
112 - Clasificacioacuten taxonoacutemica
Seguacuten los trabajos de Yamaguti et al (1958) Pantelouris (1965) Taylor (1937) Schell
(1985) Borchet (1981) Boray (1982) Boch y Supperer (1982) Euzeby (1971) y Urquhart
et al (1987) la clasificacioacuten taxonoacutemica de las especies del geacutenero F hepatica es la
siguiente
Phylum Platyhelminthes (vermes que poseen un cuerpo aplanado y que en su mayoriacutea
son hermafroditas) clase Trematoda (cuerpo no segmentado forma foliaacutecea con aparato
digestivo incompleto y ventosas como oacuterganos de fijacioacuten) subclase Digenea (evolucioacuten
indirecta con uno o maacutes hospedadores intermediarios) orden Echinostomatida suborden
Prosomata Odhner 1905 superfamilia Fascioloidea familia Fasciolidae Railliet 1985
geacutenero Fasciola Linnaeus 1758 especie F hepatica (Belding 1965)
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12 - Ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
El adulto del paraacutesito presenta aspecto foliaacuteceo lanceolado y aplanado Mide de 5 a 13
mm de ancho por 2 a 3 cm de largo (Noble y Noble 1965) es hermafrodita Su aparato
digestivo es incompleto sin ano El de fijacioacuten estaacute constituido por dos ventosas la
posterior o acetaacutebulo estaacute sobre la cara ventral y es de forma triangular la ventosa
anterior es redondeada y maacutes pequentildea Carece de aparato circulatorio y respiratorio
(Belding 1965)
FuenteBIODIDACR Livingstone
Figura 1 Especiacutemenes adultos de F hepatica sobre la caacutepsula de Glisson obtenidos a
partir de una infeccioacuten natural en Lama glama en el valle de Fiambalaacute y esquema de F
hepatica adulta
El uacutetero presenta una forma tubular enrollada dilataacutendose por la acumulacioacuten de los
huevos y desembocando finalmente en el poro genital junto al cirro (Rey Millares
1960)(Belding 1965)(Pezzi Guimaratildees 2002)
Los huevos del paraacutesito (50 x 150 micro de color parduzco) inmaduros son descargados por
los conductos biliares en las heces Pasan a cursos de agua desarrollan el embrioacuten
liberan la primera forma larval el miracidio el cual penetra un hospedador intermediario
que incluye muchas especies del geacutenero Lymnaea en el que se desarrolla a otros
estadios larvales -esporoquistes redias- hasta emerger como cercarias moacuteviles Las
cercarias se liberan del molusco y se enquistan como metacercarias en la superficie de
las plantas acuaacuteticas donde se mantienen intactas e infectivas por largos periacuteodos
El hospedador (mamiacutefero) definitivo se infecta por el consumo de vegetales crudos En eacutel
la metacercaria se desenquista y desarrolla a formas juveniles y adultas que finalmente
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se alojan en los conductos biliares El paraacutesito produce huevos (a partir de los 3 meses)
que pasan con la bilis a las heces del hospedador completando el ciclo (Belding
1965)(Kean et al 1978)
Fuente Centro para el control y prevencioacuten de enfermedades
(CDC)
Figura 2 Huevos de F hepatica presentes en materia fecal de ovinos infectados
naturalmente en el valle de Fiambalaacute obtenidos por el meacutetodo de sedimentacioacuten de
Dennis Stone y Swanson donde se aprecian los embriones en su interior y el detalle del
opeacuterculo abierto y esquema de huevo embrionado
Los paraacutesitos del Phylum Platyhelminthes Clase Trematoda Subclase Digenea se
hallan dentro del grupo de los que se transmiten entre varios hospedadores El ciclo de
vida de los digeneos involucra un hospedador definitivo en general un vertebrado donde
el paraacutesito alcanza la madurez sexual por lo menos un hospedador intermediario donde
se produce la multiplicacioacuten larval (esporoquistes redias y cercarias) y estadios de vida
libre (miracidios y cercarias) (Hasseeb y Fried 1997) El primer hospedador intermediario
es un caracol con respecto al cual los digeneos poseen una gran especificidad El estadio
infectivo para el hospedador definitivo es la metacercaria y para el primer hospedador
intermediario el miracidio
Figura 3 Esquema del ciclo bioloacutegico de Fasciola hepatica
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Nota Los huevos inmaduros de F hepatica se descargan en los conductos biliares y en
las heces Los huevos embrionados maduran en el agua huevos liberando
miracidios que invaden un hueacutesped intermediario adecuado caracol del geacutenero
GalbaFossaria En el caracol los paraacutesitos pasan por varias etapas de desarrollo
(esporoquistes redias y cercarias ) Las cercarias se liberan del caracol y se
enquistan como metacercarias en la vegetacioacuten acuaacutetica u otras superficies Los
mamiacuteferos adquieren la infeccioacuten por comer la vegetacioacuten que contiene metacercarias
Los seres humanos pueden infectarse al ingerir vegetales que contiene metacercarias
especialmente berros Despueacutes de la ingestioacuten las metacercarias se desenquistan en
el duodeno y migran a traveacutes de la pared intestinal la cavidad peritoneal y el
pareacutenquima hepaacutetico a los conductos biliares donde se desarrollan como trematodos
adultos
Fuente Centro para el Control y Prevencioacuten de Enfermedades (CDC)
121 - Aspectos epidemioloacutegicos
El estudio de la epidemiologiacutea de la Fasciolosis involucra los factores que afectan la
prevalencia y la intensidad de la infeccioacuten y como esto impacta en los animales
(Torgerson y Claxton 1999) La epidemiologiacutea de la enfermedad depende de la
susceptibilidad de las especies de hospedadores definitivos dada por la resistencia
natural o adquirida y por el estado nutricional la edad y otros factores que condicionan la
fisiologiacutea de cada especie y tambieacuten de la presioacuten de infeccioacuten en el ambiente La presioacuten
de infeccioacuten a su vez estaacute fuertemente influenciada por factores abioacuteticos en particular
por la temperatura y la humedad que modulan la presencia y el desarrollo de los
hospedadores intermediarios y el desarrollo del paraacutesito dentro y fuera de eacutestos
(Torgerson y Claxton 1999) La epidemiologiacutea de la Fasciolosis tambieacuten depende de una
gran variedad de factores topograacuteficos bioloacutegicos y de manejo ganadero (Boray et al
1969)
La distribucioacuten de la Fasciolosis es irregular ya que la infeccioacuten estaacute determinada por la
presencia del molusco que actuacutea como hospedador intermediario en el agua dulce de la
presencia de animales herbiacutevoros de las condiciones fisiograacuteficas y climaacuteticas y de los
haacutebitos dietarios humanos (Mas-Coma 2005)
Respecto a las caracteriacutesticas ecoloacutegicas del caracol bajo especiales circunstancias los
limneidos son capaces de adaptarse a las condiciones maacutes extremas Los caracoles
limneidos son maacutes resistentes a las bajas temperaturas que a las altas Las
metacercarias son susceptibles a la desecacioacuten a temperaturas por encima de los 25 ordmC
pero pueden sobrevivir a las bajas temperaturas durante tiempo con suficiente nivel de
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humedad Una alta humedad asociada con abundantes lluvias suelen ser precursoras de
endemias en animales herbiacutevoros (Ripert et al 1988)
Los principales animales que actuacutean como reservorios hospedadores en relacioacuten al
hombre son las ovejas las cabras y los bovinos La oveja es el mamiacutefero reservorio que
juega un papel maacutes importante en la contaminacioacuten de los pastos y por tanto en la
transmisioacuten humana En la oveja la puesta de huevos diaria es relativamente alta (4000-
5000 huevos por paraacutesito adulto y 8800-25100 por hospedador) (Boray 1969)
Los haacutebitos alimenticios del ser humano son muy importantes en la Fasciolosis Comer
berro ademaacutes de otras verduras acuaacuteticas con metacercarias adheridas puede ser
vehiacuteculo de la transmisioacuten asiacute como beber agua contaminada con metacercarias
flotantes (Bargues et al 1996 b)
Los trabajos de Fasciolosis publicados en la literatura permiten distinguir varias
categoriacuteas (I) la mayoriacutea de artiacuteculos se refieren a notificaciones de casos individuales
(II) otros informan de varios miembros de grupos familiares que compartieron alimentos
contaminados (III) artiacuteculos que comunican brotes que no necesariamente afectan a
miembros de la misma familia y (IV) artiacuteculos de estudios epidemioloacutegicos que se
refieren a un gran nuacutemero de personas (Chen y Mott 1990)(Esteban et al 1998)
Cabe destacar la gran capacidad de colonizacioacuten y expansioacuten de esta enfermedad a
partir de los oriacutegenes euroasiaacuteticos de F hepatica relacionada con la gran adaptabilidad
tanto de los trematodes como de los limneidos a medios muy diversos En el caso de F
hepatica resalta su capacidad de adaptarse y dar lugar a grandes endemias en lugares
extremos e inhoacutespitos
13 - Viacuteas de difusioacuten geograacutefica de F hepatica
Los animales domesticados alcanzaron grandes densidades poblacionales y se
concentraron en la proximidad de la vivienda humana aumentando la probabilidad de
transmisioacuten intraespeciacutefica de las infecciones y el contagio a la poblacioacuten humana
(Wisnivesky 2003) Los animales domeacutesticos se originaron en la medialuna feacutertil del
Sudeste asiaacutetico o Mesopotamia y se dispersaron luego alrededor del mundo (Haviland
1997)
El punto inicial de difusioacuten de F hepatica durante el periacuteodo posterior a la adaptacioacuten
peri-domiciliaria mediante pequentildeos rumiantes ovinos y caprinos salvajes hacia el Viejo
Mundo procedioacute del Medio Oriente aproximadamente 6000 a C La dispersioacuten hacia el
oeste centro y norte de Europa tuvo lugar a traveacutes de los Balcanes Turquiacutea y Grecia
entre los milenios 4-3 a C Hacia el oeste la ruta seguida probablemente fue por el
Mediterraacuteneo con los fenicios y maacutes tarde con los romanos llegando al noroeste de
Aacutefrica e Iberia sobre el siglo VIII a C Los ochocientos antildeos de ocupacioacuten aacuterabe de la
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peniacutensula ibeacuterica ciertamente habriacutean contribuido a la difusioacuten de F hepatica hacia el
norte de Aacutefrica a traveacutes de Gibraltar (Mas-Coma et al 2009 a)
La expansioacuten hacia el este en Asia sentildeala dos posibles rutas principales una maacutes
limitada hacia el sur a traveacutes de las montantildeas de Afganistaacuten y hasta Pakistaacuten
probablemente en los milenios IV y III a C y otra viacutea maacutes larga a traveacutes de Mongolia
hasta China y el Lejano Oriente al parecer maacutes reciente
Figura 4 Geografiacutea de la probable dispersioacuten de Fasciola hepatica
Fuente Mas-Coma et al 2009 a
131 - Distribucioacuten de F hepatica en Ameacuterica
Fueron las rutas transoceaacutenicas hacia el Nuevo Mundo y Oceaniacutea las que continuaron la
propagacioacuten de F hepatica durante los uacuteltimos 500 antildeos Otras rutas secundarias
completaron la dispersioacuten en las diferentes zonas de Ameacuterica Esto viene a significar que
la amplia difusioacuten de la Fasciolosis en Espantildea Portugal Francia el Reino Unido y Paiacuteses
Bajos entre los siglos XV y XIX constituyoacute probablemente la viacutea de introduccioacuten del
paraacutesito en tierras americanas
Luego de la llegada de los europeos a Ameacuterica comienza la introduccioacuten de animales
domeacutesticos El ganado espantildeol adquirioacute importante representacioacuten puesto que se habriacutea
extendido inicialmente en el aacuterea del Caribe y despueacutes hacia el resto de Ameacuterica Central
y del Sur En Argentina F hepatica se describe por primera vez como problema en
ovinos en 1888 (Bacigalupo et al 1943)
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El ganado de origen espantildeol introducido en el continente fue inicialmente ovino y
despueacutes se amplioacute al vacuno mientras que el ganado de origen portugueacutes que llegoacute
hacia Brasil fueron bovinos criados principalmente en el noroeste de la peniacutensula Ibeacuterica
(Mirol et al 2003)
La gran uniformidad geneacutetica de las Fasciolas halladas en puntos geograacuteficamente
alejados como Valdivia en Chile o Leoacuten en Espantildea demuestra el origen comuacuten de la
difusioacuten de paraacutesito y de hospedadores en toda Ameacuterica Otro tanto sucede entre los
aislamientos geneacuteticos del Reino Unido en relacioacuten con los hallados en Australia
La Fasciolosis endeacutemica que hoy se extiende por amplias zonas de los paiacuteses del sur de
Latinoameacuterica es producto de la historia En Ameacuterica precolombina no se conociacutean las
ovejas ni las vacas pero los europeos al llegar a las nuevas tierras las importaron desde
Europa presumiblemente ya infectadas con trematodes y no soacutelo eso tambieacuten se
trajeron sin tener conocimiento de ello los caracoles (Lymnaeas)
Tal acarreo ha llegado a generar un verdadero problema ecoloacutegico que con el paso del
tiempo ha alcanzado cotas tan importantes que por ejemplo solamente en la VII Regioacuten
de Chile se ha registrado un porcentaje de animales infectados del 90 con importantes
decomisos hepaacuteticos en las faenas de los mataderos (Apt et al 1992) La invasioacuten
parasitaria fue tan efectiva que afectoacute a otras muchas especies incluso a las vicuntildeas
llamas (Mariacuten 2009) alpacas guanacos liebres (Kleiman et al 2004) conejos silvestres
etceacutetera Otro tanto puede decirse de amplias regiones de Peruacute Bolivia Ecuador y de
paiacuteses centroamericanos como es el caso de Cuba (Acha y Szyfres 1997)
El empleo de especies animales para el transporte de personas bienes y mercanciacuteas que
se produce en todas las civilizaciones humanas proporcionoacute la posibilidad de que F
hepatica se extendiera de modo progresivo a amplias aacutereas geograacuteficas dentro de un
continente o una regioacuten intracontinental Muchos de estos animales entre ellos las mulas
y llamas todaviacutea se emplean hoy para el transporte aunque sea a escala local y en ese
sentido representan un medio importante que posibilita la difusioacuten de la infeccioacuten
La trashumancia es un sistema de explotacioacuten ganadera basado en el pastoreo y
aprovechamiento de pastos en periodos adecuados y se orienta a evitar los efectos
negativos de factores climaacuteticos excesivamente rigurosos por las temperaturas friacuteas o
caacutelidas acompantildeadas de escasas precipitaciones o de excesiva sequiacutea en particular en
ciertas estaciones y regiones determinadas La migracioacuten estacional de la ganaderiacutea
entre tierras bajas y de montantildea ha sido una tradicioacuten importante durante muchos antildeos y
aun todaviacutea se practica en muchas regiones cordilleranas de nuestro paiacutes
Es evidente que los transportes por viacutea terrestre mariacutetima o aeacuterea utilizados
asiduamente para movimientos de importacioacutenexportacioacuten de ganado pueden tener
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repercusiones sanitarias y muy probablemente han sido el origen de introduccioacuten de
Fasciolosis hasta otras zonas lejanas tal como sucedioacute en Ameacuterica
Los problemas relacionados con estos movimientos comerciales ademaacutes de implicar el
riesgo de extender la infeccioacuten por F hepatica hacia otras aacutereas tambieacuten dificultan la
realizacioacuten y obtencioacuten de buenos resultados en estudios geneacuteticos que esteacuten basados
en algunos marcadores moleculares En efecto si las poblaciones de F hepatica
proceden de mezclas anteriores y de distintos oriacutegenes es muy difiacutecil que a traveacutes de los
estudios geneacuteticos se puedan hacer interpretaciones correctas sobre su origen y las viacuteas
seguidas por los paraacutesitos (Semynova et al 2006)(Walker et al 2007) y por tanto habraacute
mucha dificultad para obtener resultados reveladores sobre las rutas seguidas por
Fasciola spp sobre todo si se tiene en cuenta la escasa disponibilidad de marcadores
moleculares fiables
Tales movimientos de ganaderiacutea realmente no soacutelo facilitan la extensioacuten de F hepatica
sino tambieacuten de las especies de caracoles que actuacutean como hueacutespedes intermediarios
como es el caso de los limneidos que se encuentran en contacto directo con los animales
porque ambos comparten haacutebitats similares Esto es lo que sucede con respecto a Galba
truncatula que puede ser arrastrado entre las pezuntildeas de los animales y dispersados a
otros lugares introducieacutendose asiacute de manera accidental donde no es habitual Es lo que
muy probablemente ha sucedido y se ha analizado en zonas de Bolivia (Mas-Coma et al
2001) Las evidencias sugieren que ejemplares de G truncatula pueden permanecer
activos en el seno de trozos de barro adherido a las pezuntildeas de los rumiantes que
pisotean esas zonas y pueden ser trasladados a otras donde tras un periodo de
hibernacioacuten o estivacioacuten se reactivan cuando nuevamente se sumergen en agua
Si se observan los datos sobre la evolucioacuten de la Fasciolosis animal de los uacuteltimos antildeos
en muchas regiones los resultados no dejan de sorprender porque se comproboacute algo
muy llamativo y es que lejos de disminuir la prevalencia ha aumentado
Diversos estudios han puesto de manifiesto diferencias en la resistencia o sensibilidad a
esta parasitosis dependiendo de la especie animal los bovinos ovinos equinos y el
hombre reaccionan en forma tardiacutea permitiendo su desarrollo Asiacute pues la infeccioacuten por
F hepatica no afecta por igual a todas las especies animales el ganado ovino y bovino
son los maacutes receptivos lo que implica considerables peacuterdidas econoacutemicas tanto directas
(son conocidas las mortandades en bovinos debidas a Hemoglobinuria Bacilar por
Clostridium haemolyticum como la Hepatitis Infecciosa Necrosante por C novyi B en
ovinos asociadas a Fasciolosis aguda) como indirectas (decomiso de hiacutegados
disminucioacuten de las producciones gastos en tratamientos etceacutetera) (Olaechea 1994)
Dentro de los animales susceptibles de ser hospedadores reservorios de F hepatica se
diferencia I) animales domeacutesticos principales reservorios ganado vacuno y ovino
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cerdos buacutefalos y monos II) animales domeacutesticos reservorios secundarios caballos
cabras dromedarios camellos y llamas III) animales silvestres liebres conejos y
roedores entre otros (Mas-Coma et al 1997)
Es curioso como en animales de laboratorio como ratas ratones conejos asiacute como en
humanos unos pocos ejemplares de F hepatica producen reacciones muy intensas e
incluso muertes Otros en cambio como el cerdo poseen una resistencia natural a la
migracioacuten de las formas juveniles probablemente por la gran cantidad de tejido
conjuntivo perilobulillar que tienen (Getty 1974) sin embargo tambieacuten hay descritas
Fasciolosis graves En eacutequidos que son hospedadores receptivos a F hepatica las
lesiones son casi inaparentes incluso en caso de parasitacioacuten abundante Se mencionan
casos de muerte relacionados con F hepatica en los que curiosamente se encontraron
nuacutemeros variables de especiacutemenes desde uno a 14 e incluso hasta 40 ejemplares (Rojo
y Ferreacute 1999)
En la Repuacuteblica Argentina los registros de decomiso de hiacutegados indican que la
Fasciolosis es la cuarta enfermedad de importancia veterinaria del ganado bovino de
acuerdo a los datos de la Oficina de Estadiacutestica del Servicio Nacional de Sanidad y
Calidad Agroalimentaria Direccioacuten de Fiscalizacioacuten de Productos de Origen Animal Es
considerada una enfermedad endeacutemica en el paiacutes y su distribucioacuten abarca las provincias
de Buenos Aires Catamarca Coacuterdoba Corrientes Chaco Chubut Entre Riacuteos Jujuy La
Pampa Mendoza Misiones Neuqueacuten Riacuteo Negro Salta San Luiacutes Santa Cruz Santa Fe
y Tierra del Fuego En los uacuteltimos antildeos las mayores prevalencias en animales se
registraron en la Regioacuten Patagoacutenica (68) seguida de la Regioacuten Noreste (41)
Noroeste (25) Cuyo (14) y Pampeana (09) (Prepelitich y Wisnivesky-Colli 2013)
En Catamarca no existen registros oficiales del porcentaje de infeccioacuten en el ganado
vacuno u otras especies animales por este trematodo hepaacutetico aunque los ganaderos
refieren peacuterdidas econoacutemicas importantes La Fasciolosis animal estaacute ampliamente
distribuida en todos los departamentos de la provincia seguacuten se desprende de la
informacioacuten de los decomisos de viacutesceras infectadas en los mataderos
La Fasciolosis se ha considerado una enfermedad que afecta a la ganaderiacutea desde
tiempo inmemorial Debido a su importancia econoacutemica a su particular ciclo bioloacutegico y
forma de transmisioacuten su peculiar especificidad de hospedadores etc se han planteado
a lo largo de muchos antildeos multitud de estudios no soacutelo desde la perspectiva veterinaria
sino tambieacuten de otras muchas aacutereas de conocimiento en lo que se ha convenido en
llamar acercamientos multidisciplinares que van siendo habituales en las investigaciones
parasitoloacutegicas
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14 - Hospedador intermediario
El paraacutesito no se encuentra en regiones donde las condiciones no son las adecuadas
para el desarrollo de los caracoles que sirven de hospedador intermediario Pertenecen al
Phylum Mollusca y a la clase Gasteropoda y las especies de intereacutes se encuentran en la
subclase Euthyneura o Pulmonata dependiendo del sistema de clasificacioacuten (Cuezzo
2009)
Los caracoles pertenecientes al geacutenero Lymnaea se encuentran involucrados en la
transmisioacuten de F hepatica Son anfibios y viven en el barro en ambientes de aguas poco
profundas sujetos a las inundaciones y desecaciones Se los encuentra normalmente en
haacutebitats que se presentan huacutemedos intermitentemente y en aguas ligeramente aacutecidas y
es raro encontrarlos en ambientes permanentemente huacutemedos Su distribucioacuten no es
uniforme porque dentro de cada haacutebitat pueden concentrarse en aacutereas pequentildeas con
canales de drenaje y filtraciones Viajan largas distancias arrastrados por la corriente y en
ciertos paiacuteses del mundo como Australia las grandes regiones con aguas permanentes y
que contienen pocos caracoles son consideradas importantes en la recolonizacioacuten de
cursos de agua temporarios El 30 de los moluscos sobrevive meses de sequiacutea
mediante la estivacioacuten y auacuten los recieacuten eclosionados pueden sobrevivir dos meses de
estivacioacuten Sin embargo una vez que el agua regresa los caracoles son capaces de
procrearse raacutepidamente (Torgerson y Claxton 1999)
Figura 5 Imagen y fotografiacutea del aspecto externo de Lymnaea neotropica proveniente del
valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina
La ecologiacutea de la Fasciolosis estaacute estrechamente relacionada con la de los moluscos que
sirven de hospedadores intermediarios Los caracteres fisiograacuteficos la composicioacuten del
suelo y los factores climaacuteticos determinan el ritmo de la reproduccioacuten de los limneidos y
por consiguiente la dinaacutemica epidemioloacutegica
F hepatica posee una gran especificidad hacia su hospedador intermediario ya que soacutelo
se desarrolla en caracoles de la familia Lymnaeidae Estos caracoles estaacuten distribuidos
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en todo el mundo aunque son maacutes abundantes en las zonas templadas del hemisferio
norte (Malek 1962) Son caracoles pulmonados en su mayoriacutea anfibios capaces de vivir
sobre el fango aunque existen algunas especies maacutes acuaacuteticas que se desarrollan a
varios centiacutemetros de profundidad Habitan una gran variedad de ambientes
dulceacuiacutecolas temporarios y permanentes poco profundos de aguas claras con poca
corriente (Malek 1962)
No todas las especies de limneidos son igualmente susceptibles a F hepatica y tanto los
factores extriacutensecos (condiciones ambientales de cada regioacuten) como los intriacutensecos
(estado nutricional tamantildeo madurez sexual etceacutetera) influyen en el rol de cada especie
como hospedador intermediario (Ollerenshaw 1971)(Mattos y Ueno 1986)(Minchela et
al 1985)
En la mayoriacutea de los paiacuteses de Ameacuterica del Sur L viator L cubensis y L truncatula
estaacuten identificadas como los principales hospedadores de F hepatica (Samadi et al
2000)(Pointer et al 2006)(Kleiman et al 2007) en Brasil la especie introducida L
columella es el principal hospedador intermediario (Amato et al 1986)
Las especies descriptas en nuestro paiacutes son L viator L diaphana L peculiaris L
pictonica y L plicata (Hubendick 1951)(Paraense 1975)(Castellano y Landoni 1981)
(Paraense 1982)(Paraense 1983)(Paraense 1984)(Malek 1985) L columella
(Hubendick 1951)(Prepelich et al 2003) L patagonica L neotropica (Bargues y Mas-
Coma 2005)(Bargues et al 2007 a b) y L truncatula (Issia et al 2008)
En Argentina la relevancia epidemioloacutegica y la distribucioacuten geograacutefica de estos caracoles
no se conocen con precisioacuten y existe poca certeza taxonoacutemica entre las especies del
geacutenero Las especies L plicata Hylton Scott 1953 y L diaphana King 1830 han sido
escasamente citadas (Hubendick 1951)(Hylton 1953) La distribucioacuten de L diaphana se
encuentra asociada a zonas friacuteas abarca la Patagonia Tierra del Fuego e Islas Malvinas
(Castellanos y Landoni 1981) aunque en Salta tambieacuten se ha observado la presencia de
esta especie (Rossanigo et al 1983) La especie L viatrix Orbigny 1835 ha sido
descripta en las siguientes provincias Buenos Aires Catamarca Chubut Coacuterdoba
Corrientes Entre Riacuteos Jujuy Mendoza Neuqueacuten Riacuteo Negro Salta y San Luis
(Paraense 1976 1982)(Lombardero et al 1979)(Castellanos y Landoni
1981)(Rossagnino et al 1983)(Venturini y Fonrouge 1985)(Kleiman et al 2004) La
distribucioacuten de L columella (Say 1817) estaacute restringida al Noreste (Prepelitch et al
2003) mientras L truncaluta es reportada en el paiacutes como el maacutes importante limneido en
la transmisioacuten de Fasciolosis (Bargues et al 2006 b) En la provincia de Catamarca L
viator es la especie reconocida (Bacigalupo 1930)(Morton 1986)(Ubaid 1989)
En la revisioacuten general maacutes reciente sobre limneidos sudamericanos Malek (1985)
catalogoacute la misma especie mencionada por Hubendick (1951) pero aceptando L
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patagonica como vaacutelida y no incluyoacute a L peculiaris Mientras que para Lombardero et al
(1979) el informe en Argentina de la especie europea Stagnicola como L palustris por
NJ Evans del Museo Britaacutenico de Historia Natural es sorprendente ya que seriacutea el uacutenico
Stagnicola reconocido en la Regioacuten Neotropical Asimismo se deberiacutea confirmar la cita
de la especie L cousini (Olaechea 1994) ya que puede haber un malentendido sobre
esta especie porque contrariamente a lo que se sentildeala no se incluye la presencia de L
cousini en Argentina en la uacuteltima revisioacuten de Castellanos y Landoni (1981)
Recientemente los hallazgos de L neotropica por Mera y Sierra (2009) en la provincia de
Mendoza y el de Pujadas et al (2014) en la provincia de Entre Riacuteos representan tanto
una nueva especie de limneido para la fauna argentina como un intereacutes adicional del
punto de vista de la enfermedad
Cuando la temperatura ambiente oscila entre los 10-30 ordmC y hay suficiente humedad en el
suelo se generan condiciones favorables para el establecimiento y desarrollo de los
caracoles de la familia Lymnaeidae (Torgerson y Claxton 1999) Estas condiciones
permiten que los moluscos desarrollen poblaciones abundantes y persistentes en el
tiempo A su vez los huevos de F hepatica eliminados por el ganado infectado se
desarrollan satisfactoriamente bajo estas mismas condiciones ambientales liberaacutendose al
ambiente gran cantidad de miracidios Estos se ponen en contacto con los caracoles
susceptibles y aumenta el nuacutemero de ejemplares infectados que luego emitiraacuten cercarias
que se enquistaraacuten en la vegetacioacuten Una gran cantidad de hospedadores definitivos
susceptibles ya sea porque tienen una resistencia innata pobre o una respuesta inmune
deficiente estaraacute en condiciones de infectarse y desarrollar exitosamente la infeccioacuten
Si bien el hospedador intermediario juega un rol fundamental en el ciclo de transmisioacuten
porque el paraacutesito se multiplica asexualmente en eacutel y aumenta en forma exponencial el
nuacutemero de larvas el hospedador definitivo es importante en la diseminacioacuten de la
infeccioacuten debido a su mayor capacidad para trasladarse (Haseeb y Fried 1997) Para
entender el modo de transmisioacuten en este tipo de ciclos es esencial conocer la biologiacutea de
los hospedadores intermediarios y definitivos Maacutes auacuten la dinaacutemica de transmisioacuten de las
infecciones por digeneos soacutelo puede ser comprendida teniendo en cuenta los factores
abioacuteticos que regulan las poblaciones de hospedadores intermediarios y aquellos que
influyen en el desarrollo de los estadios de vida libre del paraacutesito (Haseeb y Fried 1997)
Las pequentildeas especies de limneidos incluidas en el grupo GalbaFossaria son muy
importantes debido a su gran capacidad para transmitir F hepatica Hay sin embargo
especies incluidas en este grupo que muestran una alta capacidad de transmisioacuten y en el
extremo opuesto hay otras que han demostrado no ser susceptibles a la infeccioacuten por
etapas larvales de F hepatica como L schirazensis (Bargues et al 2011 a) Por otra
parte hay especies de este grupo que estaacuten claramente relacionadas con las aacutereas
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endeacutemicas de Fasciolosis humana debido a su ecologiacutea antropofiacutelica y comportamiento
mientras que otras especies por lo general habitan biotopos frecuentados por el ganado
pero alejados de los lugares donde los humanos viven o desarrollan sus actividades
(Artigas et al 2011)(Bargues et al 2012)
Debido a este aspecto estar maacutes relacionado con la infeccioacuten humana o la infeccioacuten
animal presenta un intereacutes aplicado a la diferenciacioacuten entre las especies que
pertenecen a este grupo cuando se trata de los hospedadores intermediarios presentes
en una zona endeacutemica (Bargues et al 2011 c)
La susceptibilidad de las especies de limneidos en Fasciolosis representa un factor
crucial en el establecimiento no soacutelo de la distribucioacuten geograacutefica de la enfermedad en los
animales y los seres humanos sino tambieacuten en las prevalencias e intensidades debido a
caracteriacutesticas ecoloacutegicas (dinaacutemica de la poblacioacuten caracteriacutestica antropofiacutelica tipo de
cuerpos de agua etceacutetera) de las distintas especies de limneidos Es por ello que los
limneidos aparecen vinculados a los diferentes patrones de transmisioacuten (Mas-Coma
2005) y escenarios epidemioloacutegicos (Mas-Coma et al 1999 a) de esta enfermedad muy
heterogeacutenea en los seres humanos (Mas-Coma et al 2009 a) Las diferencias en faunas
de limneidos continentales tambieacuten explican porque la Fasciolosis en Ameacuterica solamente
es causada por F hepatica debido a la ausencia de limneidos del geacutenero Radix que
actuacutean como intermediarios de F gigantica (Bargues et al 2001)
A nivel de especies de limneidos los problemas se encuentran principalmente en la
uniformidad morfoloacutegica y anatoacutemica interespeciacutefica que por lo general da serias
dificultades en la clasificacioacuten de una muestra (Bargues y Mas-Coma 2005)(Bargues et
al 2007 a 2011 a) Por otra parte la variacioacuten intraespeciacutefica de la forma de la conchilla
es particularmente marcada en limneidos dependiendo de las condiciones ambientales
Por lo tanto hay muchos problemas de clasificacioacuten de muestras principalmente
relacionados con las especies del grupo GalbaFossaria (Bargues et al 2011 a)
Afortunadamente hay marcadores de secuencia tanto en el ADNr nuclear y el ADN
mitocondrial que permiten una apropiada clasificacioacuten de muestras en estos
invertebrados (Mas-Coma y Bargues 2009)
15 - Fasciola hepatica en humanos
En lo que hace referencia a la Fasciolosis humana durante muchos antildeos se encuadroacute
como una enfermedad que se presentaba en situaciones muy particulares de modo que
se habiacutean citado relativamente pocos casos y de forma esporaacutedica lo que condujo a que
esta parasitosis haya estado clasificada como ldquoenfermedad secundariardquo
Esta situacioacuten ha cambiado apreciablemente en los uacuteltimos antildeos cuando la OMS
comenzoacute a sospechar que habiacutea aspectos nuevos que atender puesto que al disponer
de informes serios de varios paiacuteses se confirmaba la existencia de la infeccioacuten humana
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por F hepatica con mucha maacutes frecuencia de lo que se suponiacutea Fue en ese periodo
cuando la OMS decidioacute apoyar las investigaciones sobre Fasciolosis humana a nivel
mundial con una iniciativa que incluyoacute diversos campos de investigacioacuten dentro de lo que
se denomina colaboracioacuten de equipos multidisciplinares y con la aplicacioacuten avanzada de
procedimientos de estudio que por ejemplo incluiacutean la geneacutetica molecular
Desde la deacutecada de 1990 la Fasciolosis humana tiene una mayor relevancia debido no
solo al aumento en el diagnoacutestico del nuacutemero de casos y la alta tasa de morbilidad que
causa entre la poblacioacuten afectada sino tambieacuten por el elevado nuacutemero de personas en
riesgo de infeccioacuten (Chen y Mott 1990) Este hecho refleja un serio problema de Salud
Puacuteblica con una importante repercusioacuten en la economiacutea de las sociedades traducido
como ausencias escolares y laborales por parte de la poblacioacuten parasitada Esto respalda
que la Fasciolosis no siga siendo considerada una mera zoonosis secundaria
Se estimaba que la poblacioacuten humana afectada por Fasciolosis podriacutea situarse entre los
24 (Rim et al 1996) y 17 millones de personas (Hopkins 1992) con un total de 180
millones en riesgo de contraer la enfermedad (OMS 1995) Ademaacutes si se tiene en
cuenta la falta de conocimiento sobre la enfermedad en humanos en muchas regiones de
Aacutefrica y Asia el nuacutemero de personas afectadas podriacutea ser mucho mayor que el notificado
(Mas-Coma 2004 a b)
La Fasciolosis humana ha sido descrita en 51 paiacuteses diferentes de los 5 continentes
(Esteban et al 1998) Los anaacutelisis de distribucioacuten de la enfermedad han mostrado que es
la parasitosis que presenta una distribucioacuten geograacutefica con la mayor amplitud latitudinal
longitudinal y altitudinal conocidas (Mas-Coma et al 2003) En la Fasciolosis humana se
han descrito situaciones de hipoendeacutemia mesoendeacutemia e hiperendeacutemia (Mas-Coma et
al 1999 a 2008 2009 a)
La Fasciolosis es una enfermedad parasitaria cosmopolita En todo el mundo se
presentan casos humanos esporaacutedicos (Soulsby 1987) habieacutendose incrementado su
incidencia desde fines del siglo pasado (Loja et al 2003) Es asiacute como en la deacutecada del
noventa se empezaba a considerar como una parasitosis de mayor importancia en salud
humana Los brotes que se registraban con anterioridad eran localizados y afectaban un
nuacutemero reducido de personas Para esa eacutepoca la OMS reconoce el intereacutes meacutedico a
escala mundial
Hasta hace pocos antildeos la Fasciolosis se circunscribiacutea a poblaciones de cuencas
hidrograacuteficas bien delimitadas pero los recientes cambios ambientales y del
comportamiento humano estaacuten definiendo nuevos liacutemites geograacuteficos y aumentando las
poblaciones en riesgo (Savioli et al 1999) por ende la enfermedad posee una
distribucioacuten irregular Las caracteriacutesticas corresponden no a un paiacutes determinado sino a
una determinada zona fisiograacutefica y climaacuteticamente homogeacutenea (Mas-Coma et al 1999
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b) Tiacutepicamente ocurre en regiones templadas a excepcioacuten de Oceaniacutea distribuyeacutendose
ademaacutes en zonas tropicales y subtropicales La Fasciolosis humana es una enfermedad
tropical re-emergente que en los uacuteltimos antildeos se reporta con mayor incidencia aun
donde anteriormente se habiacutea asociado a casos surgidos entre el ganado de la zona
afectada (Mas-Coma et al 1999 b)
Despueacutes de antildeos de estudio en las zonas donde la infeccioacuten humana por F hepatica es
comuacuten se propuso una clasificacioacuten en base a supuestos epidemioloacutegicos (Mas-Coma et
al 2009 c) Asiacute se indican casos humanos ldquoimportadosrdquo que aparecen en zonas sin
Fasciolosis pero que se han adquirido en otros lugares endeacutemicos Hay tambieacuten casos
ldquoautoacutectonosrdquo que se presentan generalmente donde hay una casuiacutestica animal
importante y que aparecen de manera esporaacutedica o muy irregular Finalmente se
entiende que hay zonas ldquoendeacutemicasrdquo detectadas mediante pruebas directas y por
serologiacutea Entre ellas hay diferencias importantes en cuanto a la prevalencias desde las
que tienen porcentajes inferiores al 1 hasta otras zonas en las que se puede definir un
estadio de hiperendemismo con prevalencias que superan el 10
En esos lugares endeacutemicos pueden distinguirse tres tipos de situaciones atendiendo a la
prevalencia en la poblacioacuten total Hipoendeacutemico la prevalencia es menor al 1
Mesoendeacutemico con porcentajes de infeccioacuten del 1 al 10 donde puede presentarse una
alta prevalencia en nintildeos de 5 a 15 antildeos e Hiperendeacutemico porcentajes de infeccioacuten
superiores al 10 (Mas-Coma 2005) y donde los casos humanos participan
significativamente en la transmisioacuten a traveacutes de la eliminacioacuten de huevos generalmente
se presenta asociada a condiciones sanitarias muy deficientes (Mas-Coma et al 1999 a)
Ademaacutes hay diferentes tipos de brotes de acuerdo a la situacioacuten endeacutemicano endeacutemica
de la zona
a)Epidemia en aacutereas donde la Fasciolosis es endeacutemica en los animales pero no en los
humanos zonas donde los reportes previos de casos humanos han sido siempre aislados
y esporaacutedicos esos brotes usualmente involucran a pocos individuos que resultan
infectados desde el mismo foco de contaminacioacuten (familia o pequentildeo grupo berros u
hortalizas silvestres de cultivo domeacutestico o comercial portadoras de metacercarias)
b)Epidemia en aacutereas humanas endeacutemicas brotes en zonas donde la enfermedad es
endeacutemica en los humanos pueden involucrar a un gran nuacutemero de individuos
usualmente estaacute relacionado a condiciones climaacuteticas favorables para el desarrollo del
ciclo bioloacutegico tanto del paraacutesito como del caracol La epidemia puede tener lugar en
aacutereas hipoendeacutemicas mesoendeacutemicas o hiperendeacutemicas (Mas Coma et al 1999 a)
16 - La infeccioacuten a nivel mundial
La infeccioacuten ha sido reportada en Unioacuten Sovieacutetica China Europa Aacutefrica Ameacuterica del
Norte Sudameacuterica Centro Ameacuterica y Australia (OMS 1995) Las epidemias maacutes
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extensas ocurrieron en Francia con maacutes de 500 casos (Courde y Triozon 1957) y en
Cuba con 799 casos (Peacuterez et al 1983)
Ejemplos de prevalencia muy reducida se dan en Francia Niveles intermedios se hallan
en Iraacuten Yemen (Farag 1998) Portugal (Mas-Coma 2005) Vietnam (Tran et al 2001) y
Egipto (Curtale et al 2000)(Amer et al 2011) La maacutes alta prevalencia e intensidad de la
infeccioacuten en humanos se presenta en Bolivia con 72 realizando diagnoacutesticos por
meacutetodos coproloacutegicos y 96 por serologiacutea (Esteban et al 1997 b 1999)
161 - Ameacuterica
La infeccioacuten humana por F hepatica se ha denunciado en muchos paiacuteses del mundo
pero es en Ameacuterica donde ocurren maacutes casos (Acha y Syfres 1997) demostraacutendose que
las maacutes importantes regiones endeacutemicas de Fasciolosis humana estaacuten localizadas en
Ameacuterica del Sur (Marcos et al 2004) La frecuencia de la infeccioacuten humana en Ameacuterica
Latina se ha subestimado en la bibliografiacutea parasitoloacutegica
En diversos lugares de Latinoameacuterica la prevalencia e incidencia de las enteroparasitosis
son un indicador del nivel socio econoacutemico y de vida de la poblacioacuten Los factores de
riesgo asociados a deficientes condiciones sanitarias hacinamiento promiscuidad
analfabetismo ruralidad y pobreza continuacutean estando presentes en estas infecciones
Aun hoy las enfermedades tropicales olvidadas (NTDs) (OMS 2008) siguen siendo las
infecciones maacutes comunes de las personas pobres que habitan en Ameacuterica Latina
(Caacuteceres 1989)
Dentro de las diversas regiones de mayor concentracioacuten de Fasciolosis humana
conocidas (Mas-Coma et al 2005 2009 a) Ameacuterica del Sur se destaca por las zonas
endeacutemicas humanas descritas en muchos paiacuteses Altas prevalencias e intensidades en
los seres humanos se han reportado en los paiacuteses andinos como Bolivia (Hillyer et al
1992)(Esteban et al 1997a b 1999)(Mas-Coma et al 1999 b) Peruacute (Esteban et al
2002)(Espinoza et al 2007)(Gonzaacutelez et al 2011) y Chile (Apt et al 1993)(Artigas et al
2011) Zonas endeacutemicas humanas tambieacuten se han descripto aunque con prevalencias e
intensidades maacutes bajas en Centroameacuterica (Arroyo et al 1981) y recientemente tambieacuten
en Ameacuterica del Norte (Zumaquero et al 2013) Se denuncia soacutelo en forma esporaacutedica en
Estados Unidos (Graham et al 2001) o en Canadaacute (Fullerton et al 2006) y con mayor
incidencia en zonas de Meacutexico (Cruz Loacutepez et al 2006) Varios casos humanos tambieacuten
se han registrado en zonas de altitud de Ecuador (Trueba et al 2000) Colombia
(Bargues et al 2011 b) y Venezuela (Bargues et al 2011 c) En Uruguay (Binkley y
Sinniah 1997) y Brasil los informes humanos soacutelo se refieren a casos esporaacutedicos y
aislados En la regioacuten del Caribe la Fasciolosis humana plantea principalmente
problemas en Cuba donde los pacientes son diagnosticados de forma continua (Millaacuten et
al 2000)(Diacuteaz Fernaacutendez et al 2011) incluso con alta incidencia (Gonzaacuteles Santana et
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al 2013) al igual que en Haitiacute (Agnamey et al 2012) Puerto Rico todaviacutea se puede
considerar una zona riesgosa de infeccioacuten humana despueacutes de la situacioacuten
epidemioloacutegica en el pasado (Hillyer 1981) En Ameacuterica casi todas las especies de
limneidos involucradas en la transmisioacuten de F hepatica pertenecen al grupo
GalbaFossaria hecho que demuestra que la clasificacioacuten por simples herramientas
malacoloacutegicas es pronunciadamente difiacutecil pero que es de suma importancia ya que hay
especies de caracoles de este grupo que no participan en la transmisioacuten aunque por lo
general estaacuten presente en zonas de alta transmisioacuten (Bargues et al 2011 a)
1611 - Peruacute Bolivia y Chile
Las prevalencias e intensidades de infeccioacuten encontradas en Peruacute son muy altas donde
el nuacutemero de personas infectadas es de 742000 (Marcos et al 2007) Concretamente se
denunciaron prevalencias ligeramente superiores al 30 de la poblacioacuten estudiada en
Santa Ana (Stork et al 2003) y Juniacuten (Marcos et al 2004) clasificaacutendose como zona
hiperendeacutemica para la Fasciolosis humana Estudios efectuados en Huertas localidad
perteneciente al valle de Mantaro realizados mediante pruebas seroloacutegicas y exaacutemenes
parasitoloacutegicos de heces revelan una prevalencia de Fasciolosis del 283 por teacutecnicas
coproloacutegicas alcanzando 363 por meacutetodos seroloacutegicos realizados con Fas2-ELISA
(Marcos et al 2004)
En Asillo departamento Puno la prevalencia general de Fasciolosis por exaacutemenes de
heces fue 333 y por serologiacutea 519 (Marcos et al 2005) siendo analizadas tambieacuten
por el ensayo Fas2-ELISA (Maco et al 2002) Posteriormente se recopiloacute el nuacutemero de
casos humanos de infeccioacuten por F hepatica en cuatro deacutecadas llegando a la conclusioacuten
de que la Fasciolosis humana es una enfermedad emergente en el Peruacute y de mayor
importancia en Salud Puacuteblica (Marcos et al 2007) Los estudios realizados determinan
que no hay diferencias significativas entre el geacutenero masculino y el femenino (Marcos et
al 2004) Son susceptibles las personas de cualquier edad y en las zonas de alta
prevalencia las tasas maacutes elevadas suelen aparecer entre los nintildeos menores de 15
antildeos a diferencia de lo que ocurre en zonas no endeacutemicas (Blancas et al 2004)
Se distinguen aacutereas de baja prevalencia como 87 en Cajamarca (Knobloch 1985) en
tanto que ejemplos de alta prevalencia se encuentran en la regioacuten de Puno (156)(Mas-
Coma et al 1999 a) y del valle de Mantaro (342) (Marcos et al 2007 a)
En Bolivia el aacuterea endeacutemica para ldquotalpacutea laqordquo (lengua Aymaraacute) estaacute limitada a una
relativa pequentildea regioacuten (60 x 60 Km) en el noroeste del altiplano boliviano entre el lago
Titicaca y la ciudad de La Paz donde se presenta una prevalencia de la infeccioacuten en
nintildeos en edad escolar con un rango entre 312 y 382 (Mas-Coma et al 2001)
Aunque no se pensaba antes ahora se sabe que hay lugares con prevalencias altas de
infeccioacuten por F hepatica en personas que viven en aacutereas endeacutemicas Ademaacutes se ha
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constatado que frecuentemente afecta de manera preferente a nintildeos y mujeres y
asimismo se ha comprobado que no es excepcional que en aacutereas humanas
hiperendeacutemicas como en Bolivia y Peruacute se detecten cifras de maacutes de 400 huevos por
gramo de heces (Esteban et al 1997) en algunos casos como el de nintildeos bolivianos se
han superado los 5000 hpg de heces lo que revela la existencia de un grave problema
de salud en esas zonas
En Chile las infecciones por F hepatica son frecuentes en todo el paiacutes extendieacutendose la
enfermedad desde la Primera hasta la Undeacutecima Regioacuten siendo las zonas de mayor
prevalencia las comprendidas entre la VI y la IX Es poco frecuente en la poblacioacuten
humana pero en ninguacuten caso es una enfermedad rara (Sapunar et al 2001) En un
estudio realizado a 5861 individuos en la VII regioacuten se registroacute un 07 de prevalencia
(41 casos) encontrando un 06 en los sectores rurales de la provincia de Curicoacute 075
por ciento en Talca y 071 en Linares (Apt et al 1992)
1612 - Repuacuteblica Argentina
En Argentina se hallan identificados 58 reportes registrando 555 casos que involucran 13
provincias la mayoriacutea de ellas (977) en zonas altas en aacutereas montantildeosas centrales y
valles andinos concentrados en Coacuterdoba (430) San Luis (29) y Mendoza (28) mientras
que el resto de las provincias son raramente afectadas La mayor prevalencia se observa
en mujeres La edad variacutea de 3-95 antildeos con una media aritmeacutetica de 371 En general
las infecciones ocurren de enero a abril al aumentar las precipitaciones y las
temperaturas y los diagnoacutesticos se realizaron por anaacutelisis coproparasitoacutegicos (288)
intradermoreaccioacuten (63) cirugiacutea (43) serologiacutea (13) y seis presentaciones erraacuteticas (Mera
y Sierra et al 2011)
Varios brotes que presentan caracteriacutesticas tiacutepicas de transmisioacuten alimentaria aparecen
relacionados con la ingestioacuten de berros que crecen naturalmente a lo largo de los lechos
de riacuteos y arroyos recogidos durante fines de semana o actividades vacacionales en aacutereas
serranas de Coacuterdoba (Siciliano et al 1989) y San Luis (Carnevale et al 2012) donde la
Fasciolosis ha sido diagnosticada como un problema de Salud Puacuteblica a tener en cuenta
Un anaacutelisis retrospectivo permite destacar los informes de publicaciones (Roffo
1913)(Greenway 1924)(Bengolea et al 1927)(Del Valle y Donovan 1928)(Bacilalupo
et al 1930)(Mascheroni 1933)(Castex y Greenway 1937)(Paladino y Galarce
1938)(Boto1939)(Cames1940)(Bacigalupo 1942)(Solari y Canepa 1943)(Bacigalupo
et al 1943)(Cuenya 1944)(Cid 1947)(Cames et al 1947)(Rodriacuteguez 1952)(Longo y
Daraio 1953)(Petraglia 1954)(Rodriacuteguez 1954)(Caacuteceres 1955)(Logaldo 1955)
(Rodriacuteguez 1961)(Strada 1961)(Ahualli y Arias 1961)(Urrutia y Ferraris 1962)(Cantildeas
et al 1964)(Cornejo y Castillo 1964)(Simoacuten et al 1964)(Ruggieri et al 1967)(Sosa y
Romero 1967)(Correa et al 1969)(Peiretti 1969)(Trosero y Nocetti 1969)(Padilla et al
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1970)(Carena et al 1972)(Ossola et al 1972)(Peiretti y Morales 1973)(Sonzini et al
1973)(Alaggia 1981)(Majul et al 1981)(Siciliano 1982)(Gifoniello et al 1983)(Miguel
et al 1985)(Siciliano et al 1989)(Melero et al 1991)(Siciliano et al 1992)(Minoprio et
al 1995)(Ale et al 2000)(Barcat 2005)(Lloret et al 2005)(Rubel et al 2005)(Corti et al
2006)(Nieto Sosa et al 2006)(Salomoacuten et al 2006)(Nieto Sosa et al 2008)(Riacuteos et al
2008) (Nieto Sosa et al 2012)(Carnevale et al 2012) referidos a casos esporaacutedicos y
aislados
En la provincia de Catamarca la presencia de F hepatica se registra en la deacutecada de
1980 cuando se hallaron ejemplares adultos en actos quiruacutergicos realizados a cinco
pacientes del geacutenero femenino (Andrada et al 1983)
17 - Factores de riesgo en la infeccioacuten de F hepatica
La epidemiologiacutea y transmisioacuten de la Fasciolosis humana estaacute determinada por la
presencia de caracoles dulceacuiacutecolas como hospedadores intermediarios animales
domeacutesticos infectados condiciones climaacuteticas y por algunos haacutebitos de consumo No
obstante algunos autores han demostrado que en las aacutereas endeacutemicas los factores
epidemioloacutegicos y de transmisioacuten no son tan simples como pudiera parecer a priori y que
se deben tener en cuenta otros factores adicionales para proponer una clasificacioacuten
epidemioloacutegica respecto de las aacutereas de presentacioacuten de Fasciolosis humana (Esteban et
al 1999)
El hombre es un hueacutesped accidental La infeccioacuten es de relativa baja frecuencia en el ser
humano debido a que su principal mecanismo de transmisioacuten estaacute ligado a los haacutebitos
alimentarios de los individuos La mayor frecuencia de casos se presenta despueacutes de
veranos huacutemedos cuando las aguas de drenaje de los pastos irrigados y encharcados de
los animales cubren completamente a los berros (Nasturtium spp) (Soulsby 1987) en
los que se encuentran enquistadas las metacercarias (Faust 1949) la ingesta de berros
contaminados por el paraacutesito es un antecedente que ocurre en la mayoriacutea de los casos
Tambieacuten se infectan por el haacutebito que tienen muchas personas de llevarse a la boca
tallos de plantas acederas briznas de hierba etc y de esta manera enferman los
agricultores y ganaderos (Piekarsky 1959) Ademaacutes en la infeccioacuten humana intervienen
especies vegetales como las hojas de Taraxacum dens leonis (diente de leoacuten) Mentha
spp (menta) Medicago sativa (alfalfa) Cichorium intybus (achicoria) Juncus andicola y
Juncus ebracteactus (juncos) Nostoc sp (Cianofitas) (Bjorland et al 1995) Tambieacuten se
suele asociar a la ingestioacuten de plantas acuaacuteticas tales como el mastuerzo (Radostits et
al 2002) y a los emolientes que son consumidos como plantas medicinales existiendo la
creencia que los berros y la alfalfa son buenos para el hiacutegado son otra viacutea de infeccioacuten
(Marcos et al 2004)
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El agua es una fuente de infeccioacuten sea por beberla sin hervir o por contaminacioacuten de
hortalizas o utensilios de cocina (Mas-Coma et al 2007) Se ha demostrado que los seres
humanos participan en la transmisioacuten de la enfermedad en aquellos lugares donde se
practica la defecacioacuten al aire libre (Mas-Coma et al 1999)
En aacutereas epideacutemicas hay diferentes tipos de brotes en relacioacuten con las caracteriacutesticas de
la zona Generalmente coinciden las zonas epideacutemicas con las de Fasciolosis animal y en
tales casos normalmente concuerdan con un grupo de personas que consumen la misma
fuente de contaminacioacuten generalmente verduras Lactuca sativa (lechuga) Spinacea
oleracea (espinaca) u otros vegetales frescos y contaminados con metacercarias de F
hepatica Estos casos habitualmente se presentan en miembros de una familia o en
comunidades de una misma zona
George A Alleyne en el proacutelogo de la publicacioacuten ldquoEnfermedades transmisibles geacutenero y
equidad en la saludrdquo (Hartigan 2001) cita a Levins cuando comparte que la complejidad
de los factores determinantes (geacutenero raza y clase social) de las enfermedades
emergentes constituye un serio problema cientiacutefico de nuestra eacutepoca (Levins 1995) En
las distintas infecciones humanas es importante profundizar en los factores que afectan a
la distribucioacuten de la enfermedad como analizar la influencia del geacutenero del hospedador
definitivo sobre la Fasciolosis
Hasta 2003 en la mayoriacutea de estudios sobre la Fasciolosis humana y su incidencia en las
diferentes zonas de endemicidad los aspectos referidos a la epidemiologia de la
enfermedad en funcioacuten del geacutenero del hospedador definitivo arrojaban resultados
contradictorios obtenieacutendose zonas donde las prevalencias e intensidades de infeccioacuten
eran diferentes De ese modo los estudios referidos anteriormente muestran que tanto en
Bolivia como en Peruacute (Esteban et al 1999) las diferencias relativas a la prevalencia de
infeccioacuten por F hepatica en funcioacuten del geacutenero no eran significativas Por el contrario en
Egipto al igual que en Chile (Apt et al 1992) existiacutean diferencias significativas en la
prevalencia de infeccioacuten dependiendo de si afectaba a hombres o mujeres
Las investigaciones continuaron y no es hasta la deacutecada pasada cuando se llega a
recopilar (Curtale et al 2007) maacutes de 21000 casos con casi 1000 positivos Ambos
paraacutemetros analizados prevalencia e intensidad de infeccioacuten resultaron
significativamente mayores en mujeres que en hombres en Egipto poniendo de
manifiesto lo que la tendencia ya reflejaba y es que siuml existen diferencias en cuanto a las
intensidades de infeccioacuten en funcioacuten del geacutenero afectando en mayor medida a las
mujeres
Mientras que el predominio de Fasciolosis humana puede ser insignificante en aacutereas
donde la forma veterinaria de la enfermedad ocurre las tasas variacutean extensamente en
aacutereas donde la enfermedad es endeacutemica en la gente
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La relacioacuten entre el predominio de Fasciolosis y la edad del hueacutesped se diferencia en
aacutereas humanas endeacutemicas y humanas no endeacutemicas El alto predominio en nintildeos
menores de 15 antildeos se presenta por lo general en aacutereas endeacutemicas con las tasas maacutes
elevadas en contraste con la situacioacuten corriente en aacutereas humanas no endeacutemicas
(Esteban et al 2002)
18 - Sintomatologiacutea cliacutenica y patologiacutea
El primer caso de Fasciolosis humana en el mundo fue reportado en 1600 (Naacutequira et al
1975) mientras que en 1852 se describe por primera vez el hallazgo de especiacutemenes
adultos de F hepatica en las viacuteas biliares intrahepaacuteticas del hombre
El diagnoacutestico de Fasciolosis humana se presenta ante un enfermo con un cuadro cliacutenico
caracterizado por trastornos digestivos especialmente hepatobiliares y fiebre
Presentando o no urticaria de evolucioacuten aguda o croacutenica que puede estar acompantildeada
de eosinofilia elevada y en el que puede haber antecedentes de ingestioacuten de berros
Aunque tambieacuten es posible que la parasitosis curse en forma subcliacutenica si la infeccioacuten
es por pocos ejemplares La importancia de la cliacutenica estaacute condicionada por el nuacutemero de
metacercarias ingeridas
Las manifestaciones cliacutenicas por F hepatica se agrupan en las fases agudas o croacutenicas
(Behm y Sangster 1999) La forma aguda se clasifica en tres subtipos diferentes tiacutepica
(Chen y Mott 1990)(Vilches et al 1993) atiacutepica (Ibaacutentildeez et al 1994) y ectoacutepica
(Catchpole y Snow 1952)(Mas-Coma et al 2014) mientras que la forma croacutenica se
diferencia con dos subtipos sintomaacutetica (Jimeacutenez et al 2001) y asintomaacutetica (Arjona et
al 1995) El siacutendrome agudo corresponde al periodo de migracioacuten de las formas
inmaduras se caracteriza por fiebre de intensidad variable eosinofilia (Behm y Sangster
1999) ictericia (Kianman et al 1996) dolor del hipocondrio derecho con signo de Murphy
y dolor abdominal (Naacutequira 1995) mialgias artralgias cefalea naacuteuseas voacutemitos
(Picoaga 1980) flatulencia alergia (prurito o urticaria) (Ortiz et al 2000) hepatomegalia
fatiga decaimiento perdida de peso anorexia y alteracioacuten de las pruebas funcionales
hepaacuteticas (Espinosa et al 2010) Puede durar 3 meses pero muchos infectados cursan
asintomaacuteticamente aunque fiebre hepatomegalia y eosinofilia sugieren Fasciolosis en
aacutereas endeacutemicas (Marcos et al 2007 b) Esta fase aguda se debe a los tuacuteneles que las
formas inmaduras del paraacutesito al migrar cavan en el pareacutenquima hepaacutetico durante las
primeras semanas los que se llenan con sangre (Loja et al 2003) y ceacutelulas de una
respuesta inmunitaria mediada por linfocitos con reclutamiento masivo de eosinoacutefilos
El cuadro puede llegar a cinco meses y presenta las complicaciones maacutes severas de la
enfermedad entre las que se destacan hematoma subcapsular granuloma muacuteltiples
abscesos hepaacuteticos anemia severa colecistitis pancreatitis colangitis derrames
pleurales y eventualmente fibrosis hepaacutetica (Dalton 1999)
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El estadio o fase croacutenica (Maclean y Graeme-Cook 2002) aparece cuando los paraacutesitos
adultos ya se ubican en la luz de los conductos biliares y empiezan a emitir los huevos
Presenta siacutentomas inespeciacuteficos o vagos en la mayoriacutea de los casos aunque algunos de
ellos se complican principalmente por obstruccioacuten biliar (Umac et al 2006) y terminan en
intervenciones quiruacutergicas momento en el que se hace el diagnoacutestico encontraacutendose los
paraacutesitos adultos en los conductos biliares o causando disfuncioacuten hepaacutetica Muchos
casos se diagnostican como colecistitis aguda Los siacutentomas son causados por la
inflamacioacuten del conducto e incluyen dispepsia diarrea ictericia colecistitis coacutelico biliar y
litiasis del coleacutedoco Dentro del conducto biliar se observa inflamacioacuten perivascular que
el proceso de resolucioacuten transforma en fibrosis
La fase aguda puede superponerse a la fase croacutenica si se estaacute en permanente exposicioacuten
a la fuente de contaminacioacuten y podriacutea adquirirse la infeccioacuten aguda sobre la croacutenica
previamente presente por lo tanto se pueden observar casos de Fasciolosis croacutenica con
cifras altas de eosinofilia
La migracioacuten de las formas inmaduras a traveacutes del pareacutenquima hepaacutetico puede producir
lesiones traumaacuteticas y necroacuteticas Destruccioacuten considerable del hiacutegado caracterizada por
necrosis coagulativa (Dalton 1999) abscesos hemorraacutegicos (Loja et al 2003) y hepatitis
con infiltracioacuten de neutroacutefilos linfocitos y eritrocitos (Bryan y Michelson 1995) La
patogeacutenesis de la Fasciolosis depende de la carga parasitaria y del tamantildeo de los
trematodos adultos que provocan reacciones granulomatosas con agrupaciones de
histiocitos ceacutelulas epiteliales y gigantes En la etapa croacutenica se observa que en la pared
de los conductos biliares el paraacutesito adulto produce alteraciones inflamatorias
adenomatosas y fibroacuteticas (Saacutenchez et al 2000) existiendo hiperplasia del epitelio que
puede llegar a la obliteracioacuten total provocando ictericia obstructiva infeccioacuten bacteriana
secundaria atrofia del hiacutegado cirrosis periportal colecistitis y colelitiasis (Atias 2001)
En los conductos biliares en infecciones graves con gran nuacutemero de paraacutesitos puede
haber litiasis biliar y cirrosis que ocurren con cierta frecuencia en los casos croacutenicos
(Bryan y Michelson 1995)
Se distinguen ademaacutes los siguientes periodos cliacutenicos
Fase de incubacioacuten desde la ingestioacuten de las metacercarias hasta la aparicioacuten del primer
siacutentoma variacutea dependiendo del nuacutemero de metacercarias consumidas y de la repuesta
del hospedador Su duracioacuten es variable
Fase aguda o invasiva comienza cuando ocurre la migracioacuten parasitaria hasta el
conducto biliar la sintomatologiacutea se debe principalmente a la destruccioacuten mecaacutenica del
tejido hepaacutetico y del peritoneo abdominal debida a la migracioacuten de las larvas Dura 2 a
cuatro meses y sus principales signos son Fiebre dolor abdominal desde leve a severo
generalmente localizado en el hipocondrio derecho o bajo el xifoides trastornos
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gastrointestinales como peacuterdida de apetito flatulencia nausea y diarrea urticaria
Ocasionalmente ocurren siacutentomas respiratorios tos disnea hemoptisis y dolor toraacutecico
Al examen fiacutesico pueden aparecer ademaacutes hepato y esplenomegalia ascitis la que se
caracteriza por ser un liacutequido amarillo con un alto contenido de leucocitos y con
predominio de eosinofilos una anemia leve a moderada signos toraacutecicos por
auscultacioacuten o radiografiacutea e ictericia la cual es poco frecuente
Fase latente incluye la etapa de maduracioacuten hasta el inicio de la ovoposicioacuten
Puede durar meses o antildeos los pacientes frecuentemente son descubiertos durante un
screening familiar tras detectar a uno de sus integrantes infectado Pueden tener
dolores gastrointestinales o una o maacutes recaiacutedas de los siacutentomas agudos
Fase obstructiva o croacutenica cuando el paraacutesito se establece en el conducto biliar
Puede desarrollarse durante meses o antildeos despueacutes de la infeccioacuten inicial El paraacutesito
adulto en el conducto biliar causa inflamacioacuten e hiperplasia del epitelio La resultante
colangitis y colecistitis combinada con el gran tamantildeo del paraacutesito son suficientes para
producir una obstruccioacuten mecaacutenica del conducto biliar
Existen tambieacuten Fasciolosis de tipo ectoacutepicas por parte de estados inmaduros del
paraacutesito que pueden desviarse durante la migracioacuten En el hombre los sitios maacutes
frecuentes para esta presentacioacuten estaacuten en el tracto gastrointestinal Otros lugares
pueden ser el tejido subcutaacuteneo corazoacuten vasos sanguiacuteneos pulmoacuten y cavidad pleural
cerebro pared abdominal apeacutendice paacutencreas glaacutendula mamaria articulaciones y bazo
Aquellos paraacutesitos ectoacutepicos nunca logran madurar y sus efectos patoloacutegicos son debido
a los surcos de migracioacuten que causan dantildeo tisular con inflamacioacuten y fibrosis Este
paraacutesito puede ser calcificado o incorporado en un granuloma (Mas-Coma et al 1999 b)
La duracioacuten de la infeccioacuten humana es desconocida pero algunos investigadores han
estimado que el paraacutesito podriacutea sobrevivir por 5 a 12 antildeos (Karnaukhov 1978) y desde 9
a 135 antildeos (Dan et al 1981)
19 - Diagnoacutestico
191 - Directo
El diagnoacutestico de certeza en humanos se establece de forma directa cuando se
encuentran huevos del paraacutesito en las heces o bilis obtenida por sondeo duodenal Los
exaacutemenes coproloacutegicos de rutina desde el examen directo hasta los meacutetodos de
sedimentacioacuten se utilizan en la fase croacutenica pero el meacutetodo coproparasitoloacutegico presenta
baja sensibilidad (Levine et al 1980) soacutelo permite detectar la infeccioacuten cuando el paraacutesito
adulto ya estaacute instalado en los conductos biliares y requiere la recoleccioacuten de muestras
seriadas resultando poco confiable y complicado (Chen y Mott 1990)
Asimismo hay que considerar la dinaacutemica en la produccioacuten de huevos que en el hombre
se conoce menos aunque se sabe que el nuacutemero de huevos y su liberacioacuten pueden ser
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reducida o intermitente (Maco et al 2002) El hombre no se considera un hospedador
muy receptivo para F hepatica y la mayor parte de los ejemplares juveniles quedan
atrapados en el pareacutenquima hepaacutetico durante su migracioacuten aunque algunos siacute alcanzan
los conductos biliares y maduran
Debido a la ovoposicioacuten intermitente del paraacutesito en muchos casos nunca se llega a
detectarlos de esta manera resultan negativos los exaacutemenes coproloacutegicos de hasta tres
diacuteas de recoleccioacuten consecutiva La manifestacioacuten microscoacutepica de huevos es
sumamente especiacutefica pero tiene limitaciones en la sensibilidad debido al tiempo de
maduracioacuten sexual y posterior produccioacuten de huevos El examen coproloacutegico meacutetodo
sencillo y de bajo costo no detecta infecciones tempranas (los ejemplares joacutevenes no
producen huevos) ni cargas parasitarias bajas En el hombre el nuacutemero de huevos
producidos y su dinaacutemica son poco conocidos
Una buena teacutecnica para el diagnoacutestico coproparasitoloacutegico de Fasciolosis humana es la
sedimentacioacuten en copa o teacutecnica de sedimentacioacuten raacutepida (TSR) (Lumbreras et al 1962)
Tambieacuten hay que considerar en queacute fase de la infeccioacuten se encuentran puesto que el
periodo de prepatencia es de 3 a 4 meses post-infeccioacuten y los siacutentomas cliacutenicos pueden
aparecer mucho antes de que se observen los huevos en las heces (Marcos et al 2007
a)
Se debe considerar que el anaacutelisis cuantitativo (Kato y Miura 1954) no refleja cuaacutentos
ejemplares de especiacutemenes adultos albergan esos individuos y tampoco las pruebas de
diagnoacutestico indirecto o seroloacutegico si bien es faacutecil suponer que son procedimientos muy
uacutetiles de diagnoacutestico Un segundo problema se plantea a la hora del tratamiento de modo
que la aplicacioacuten de un faacutermaco eficaz puede provocar concentracioacuten de paraacutesitos
adultos muertos y por su tamantildeo llegar a obstruir los canales biliares y el coleacutedoco
Tambieacuten hay que tener muy en cuenta la resistencia parasitaria a las drogas
antihelmiacutenticas (Villegas et al 2012)
1911 - Imaacutegenes
Existen otros meacutetodos directos de diagnoacutestico como son las imaacutegenes obtenidas por
radiografiacutea ecografiacutea (Van Beers et al 1990) scanner tomografiacutea axial computada
(TAC) colangiopancreotomiacutea retroacutegrada endoscoacutepica (Martiacutenez et al 2000) o resonancia
magneacutetica nuclear Estas teacutecnicas se utilizan ante la sospecha de infeccioacuten y para
confirmar el diagnoacutestico y posterior seguimiento durante y despueacutes del tratamiento
(Gonzaacutelez et al 2001)(Corti et al 2006)
Las imaacutegenes ayudan al diagnoacutestico y a la evaluacioacuten de complicaciones Los hallazgos
dependeraacuten de la fase cliacutenica en la cual se encuentre el paciente En fase aguda la
ecografiacutea puede mostrar heterogeneidad del pareacutenquima hepaacutetico lesiones nodulares
hipoecogeacutenicas muacuteltiples o uacutenicas y linfonoacutedulos periportales (Castro 2010) Durante la
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fase croacutenica es posible visualizar partiacuteculas orogeacutenicas intravesiculares edema de la
pared vesicular y engrosamiento parietal del coleacutedoco con dilatacioacuten moderada (Castro
2010)
Sin embargo de los exaacutemenes de imagenologiacutea usados para estudiar el hiacutegado y las viacuteas
biliares ninguno confiere certeza diagnoacutestica La forma de los paraacutesitos puede
confundirse con los caacutelculos del coleacutedoco o los coaacutegulos de hemoglobina (Arjona 1995)
aunque la ecografiacutea resulta de valor y puede mostrar (10 semanas despueacutes de la
infeccioacuten) lesiones hepaacuteticas nodulares hipodensas o quiacutesticas dilatacioacuten de los
conductos biliares y formas moacuteviles ecogeacutenicas dentro de la viacutea biliar (Gonzaacutelez Llorente
et al 2002)
Dentro del estudio por imaacutegenes la Fasciolosis se deberiacutea encontrar entre los
diagnoacutesticos diferenciales de granuloma hepaacutetico Esta lesioacuten aunque no cuente con
biopsia debe sugerir que en todo paciente que proceda de zona endeacutemica y que
presente lesiones en el hiacutegado ecograacuteficamente compatibles con granuloma hepaacutetico
debe incluirse a esta parasitosis dentro de los principales diagnoacutesticos diferenciales y no
tomarse meramente como de exclusioacuten (Sezgin et al 2004)
1912 - Teacutecnicas quiruacutergicas
La primera publicacioacuten sobre una cirugiacutea realizada en Argentina que permitioacute el hallazgo
de ejemplares de F hepatica data de principio del siglo pasado (Del Valle y Donovan
1923) Mientras que en una litiasis biliar (Cantildeas et al 1964) por coledocotomiacutea extraen
paraacutesitos sin encontrar huevos en la bilis reportando que en la praacutectica se sacan 2
ejemplares y diacuteas posteriores por el tubo de Kehr salen huevos de F hepatica La mayor
casuiacutestica es reportada por Alaggia (1981) que presenta 16 pacientes positivos operados
En Catamarca se registra la presencia de especiacutemenes adultos en actos quiruacutergicos de
las viacuteas biliares practicados en 5 oportunidades (Andrada et al 1983)
192 - Indirecto
Numerosas pruebas seroloacutegicas han sido evaluadas para el diagnoacutestico de infecciones
por F hepatica La deteccioacuten de anticuerpos en suero es claramente el meacutetodo de
preferencia para el inmunodiagnoacutestico (Hillyer 1999) de la Fasciolosis humana
Los niveles de inmunoglobulinas (Ig) IgG IgM e IgE estaacuten generalmente aumentados en
Fasciolosis incluso los niveles de IgE se correlacionan positivamente con la carga de
huevos la edad las caracteriacutesticas cliacutenicas y el grado de eosinofilia En lo que a la clase
IgG se refiere las subclases predominantes son IgG1 y el isotipo IgG4 (Mas-Coma et al
1999 b)
La Fasciolosis humana es de difiacutecil diagnoacutestico principalmente en la fase aguda o
invasiva porque no puede ser diagnosticada por el examen de huevos en heces y
depende de pruebas seroloacutegicas (Maco et al 2002) por lo cual numerosas teacutecnicas de
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inmunodiagnoacutestico de esta parasitosis han sido descriptas y aplicadas en diversos paiacuteses
(Espino et al 1987)(Coacuterdova et al 1999)(Carnevale et al 2001 a)
Se ha comprobado la respuesta inmunoloacutegica en el hombre ante antiacutegenos metaboacutelicos
y tambieacuten ante las cistein-proteasas procatepsina L1 (Cornejo et al 2003)(Carnevale et
al 2001 b)
El inmunodiagnoacutestico se ha planteado como una interesante alternativa en la buacutesqueda
de meacutetodos diagnoacutesticos maacutes sensibles y especiacuteficos tal es el caso del ensayo por
inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (ELISA) Sin embargo generalmente se han usado
antiacutegenos constituidos por complejos antigeacutenicos que frecuentemente conducen a
problemas de sensibilidad o especificidad El preparado antigeacutenico utilizado
primariamente fue un extracto del gusano adulto luego fueron productos de excrecioacuten-
secrecioacuten y fracciones parcialmente purificadas El anaacutelisis mediante
inmunoelectroforesis en geles de agarosa (inmunoprecipitacioacuten simple y cruzada) ha
permitido determinar que los extractos parasitarios crudos de F hepatica muestran una
composicioacuten antigeacutenica variada siendo maacutes complejos los antiacutegenos somaacuteticos y de E-S
provenientes de paraacutesitos adultos (Gorman et al 1992) Maacutes recientemente han sido
usados antiacutegenos nativos purificados y antiacutegenos recombinantes (Hillyer 1999) Los
antiacutegenos E-S han sido considerados importantes inductores de la respuesta inmune
humoral en la Fasciolosis y tanto su especificidad como su utilidad diagnoacutestica han sido
demostradas en numerosos estudios de Fasciolosis humana y animal (Diacuteaz et al 1998)
Otros estudios tambieacuten se han enfocado sobre la deteccioacuten directa de antiacutegenos
parasitarios ya sea en suero plasma o heces (Hillyer 1999) En 1990 se desarrolloacute un
ELISA para detectar antiacutegeno parasitario circulante en personas con Fasciolosis el cual
al aplicarlo sobre 25 pacientes resultoacute que el 100 de ellos fue reconocido como positivo
a Fasciolosis ademaacutes no se presentaron reacciones cruzadas con otras parasitosis
(Espino et al 1990)
Actualmente el diagnoacutestico de rutina de Fasciolosis humana se basa en la deteccioacuten de
anticuerpos contra el paraacutesito en suero principalmente por el meacutetodo de ELISA
considerada una de las pruebas maacutes ampliamente usadas pero su sensibilidad y
especificidad dependen de la calidad de los antiacutegenos (Espino et al 1991) del paraacutesito
empleados para evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti- F hepatica en humanos
(OacuteNeill et al 1998) La proteasa usada como antiacutegeno cisteiacuten-proteasa procatepsina L1
de F hepatica purificada o como proteiacutena recombinante se expresa en levaduras o
bacterias resultando una prueba con buena sensibilidad y especificidad (OacuteNeill et al
1999)
Asimismo hay evidencia de un fenoacutemeno de variacioacuten de antiacutegenos del tegumento de F
hepatica como mecanismo de evasioacuten y se ha puesto de relieve la existencia de cierta
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similitud antigeacutenica con el propio hospedador hasta el punto que el paraacutesito no sea
reconocido tan faacutecilmente por el sistema inmunitario (Espino et al 1997) aunque la
deteccioacuten de anticuerpos contra F hepatica en suero con ELISA es considerado un
meacutetodo sensible para infecciones agudas y croacutenicas (Hillyer 1999)
La teacutecnica inmunoenzimaacutetica de ELISA emplea el principio de la deteccioacuten del complejo
antiacutegeno anticuerpo (IgG) mediante conjugados anti inmunoglobulinas especiacuteficas
marcadas con una enzima la cual es revelada por la adicioacuten de su sustrato Esto permite
determinar la concentracioacuten de antiacutegeno o de anticuerpos mediante el uso de uno de
ellos unido a una fase soacutelida y el otro en solucioacuten Es una teacutecnica relativamente sencilla
que permite procesar una gran cantidad de muestras en un corto periacuteodo de tiempo tanto
para estudios cliacutenicos como seroepidemioloacutegicos Los antiacutegenos mayormente empleados
en ELISA corresponden a preparados somaacuteticos o productos de excrecioacuten-secrecioacuten
provenientes de tremaacutetodos adultos El primero de ellos corresponde a un macerado total
del paraacutesito adulto y el otro a un derivado metaboacutelico in vitro o productos de E-S de
estados adultos de F hepatica (Espino et al 1987)(Pfister 1990)
En Japoacuten se realizoacute el primer estudio que identificoacute y caracterizoacute la enzima cisteiacuten-
proteasa purificada a partir de ejemplares adultos del paraacutesito (Yamasaky et al 1989)
Esta proteiacutena luego fue usada como antiacutegeno en una prueba de ELISA demostrando ser
reconocida por el 100 de los pacientes con Fasciolosis que fueron estudiados Esta
proteasa estariacutea involucrada en la alimentacioacuten migracioacuten y evasioacuten de la respuesta
inmune del paraacutesito (Smooker 2000)
La procatepsina L1 (CL1) una cisteiacuten-proteasa secretada por estadios adultos y juveniles
de F hepatica tiene potencial como agente diagnoacutestico de la Fasciolosis humana Para
demostrarlo se realizoacute un ELISA dentro de una poblacioacuten de 95 pacientes en el altiplano
boliviano usando tres tipos de antiacutegenos crudo E-S y CL1 en el caso del antiacutegeno
crudo la diferencia entre individuos seronegativos y seropositivos fue pobremente
definida en tanto con los antiacutegenos E-S y CL1 hubo una gran discriminacioacuten entre ambos
grupos (Espino et al 1991) Esta diferencia fue mejorada al usar un segundo ELISA pero
sobre IgG4 (isotipo predominante en la infeccioacuten) CL1 identificoacute menos individuos
seropositivos al compararlo con E-S pero mejoroacute mucho la discriminacioacuten entre
individuos seropositivos y seronegativos En tanto al aplicar esta prueba sobre sueros con
otras parasitosis todos dieron resultados negativos por lo que se demostroacute que ademaacutes
este IgG4 ELISA es especifica en el diagnoacutestico de Fasciolosis (O Neill et al 1998)
El mismo grupo de trabajo un antildeo despueacutes utilizoacute dos ELISA basados en la deteccioacuten de
IgG4 (en suero de pacientes con Fasciolosis) producida por una procatepsina L1
recombinante (CL1) (en ADN de Saccharomyces cerevisiae) y una procatepsina L1
nativa Los resultados mostraron una significativa correlacioacuten estadiacutestica entre los
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resultados de los valores de absorbancia obtenidos con los dos antiacutegenos Ademaacutes no
se presentaron reacciones cruzadas con otras parasitosis en ninguno de los casos Por
esta razoacuten CL1 recombinante presenta un excelente potencial para el desarrollo del
primer ensayo estandarizado para un diagnoacutestico sensible y especiacutefico de la Fasciolosis
humana (ONeill et al 1999)
Las alteraciones del hemograma dan eosinofilia marcada (Blancas et al 2004)
leucocitosis con desviacioacuten a la izquierda (Atias 1991) hiperbilirubinemia (Carrada y
Escamilla 2005) y anemia la cual es comuacuten pero generalmente no es tan severa
(Vilchez et al 1993)
No obstante se describen casos que pueden evolucionar con eosinofilia fluctuante (Atias
2001) La fluctuacioacuten de la eosinofilia y lo polimorfo del cuadro cliacutenico orientan el
diagnoacutestico hacia otras patologiacuteas (Apt et al 2002)
Las pruebas de funcionalidad hepaacutetica en la fase aguda pueden detectar un aumento de
enzimas como alaninoaminotransferasa o transaminasa glutaacutemica piruacutevica (ALT o GPT) y
aspartato-aminotransferasa o transaminasa glutaacutemica oxalaceacutetica (AST o GOT) (Gianini
et al 2005) ademaacutes de globulina y bilirrubina seacuterica debiendo ser consideradas un
marcador de valor diagnoacutestico y de control terapeacuteutico en casos de Fasciolosis (Atias
2001) Asimismo se puede observar una tendencia a tener maacutes alto el nivel de
transaminasas seacutericas en los casos croacutenicos mientras que el patroacuten colestaacutesico soacutelo estaacute
presente en pacientes de la fase croacutenica y levemente elevado en la fase aguda
Cuando el paraacutesito pasa a los canaliacuteculos biliares provoca el aumento de la fosfatasa
alcalina (FA) que estaacute elevada en patologiacuteas del hiacutegado asociadas con enfermedad de
las viacuteas biliares y colestasis (Pratt y Kaplan 2000) Durante la fase obstructiva la ictericia
es caracteriacutestica y se observa aumento en los procesos obstructivos a nivel de viacuteas
biliares Son indicadoras del dantildeo del hiacutegado asociado con la prevalencia de F hepatica
(Marcos et al 2008) Las bilirrubinas conjugadas se hallan incrementadas en la etapa
aguda y la actividad del citocromo p450 hepaacutetico estaacute reducida (Honkakoski y Negishi
2000)
110 - Planteamiento del problema
La dinaacutemica de transmisioacuten de Fasciolosis tiene fuertes determinantes ambientales que
modelan y generan patrones de transmisioacuten particulares en cada regioacuten En Argentina
por su gran amplitud longitudinal y latitudinal es de esperar que la dinaacutemica de
transmisioacuten de F hepatica en las distintas zonas endeacutemicas del paiacutes sea diferente y se
vea afectada por distintos factores
En nuestro paiacutes son pocos los trabajos relacionados con el estudio de la Fasciolosis y
en general eacutestos abordan el tema desde una perspectiva veterinaria analizando soacutelo lo
que ocurre en los hospedadores definitivos de importancia econoacutemica (Lombardero et al
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1979 b)(Dwinger et al 1982)(Olaechea 2007)(Moreira et al 2009) Los trabajos que
emprenden el estudio de eacutesta parasitosis desde una perspectiva epidemioloacutegica
analizando los factores involucrados en la dinaacutemica de transmisioacuten (hospedadores
definitivos hospedadores intermediarios paraacutesito ambiente clima etceacutetera) son escasos
(Rubel et al 2005)(Kleiman et al 2007) Entre ellos se destaca la investigacioacuten sobre los
factores involucrados en el ciclo de transmisioacuten de F hepatica realizado en los valles
cordilleranos patagoacutenicos de la provincia de Chubut por ser el maacutes actual y completo del
paiacutes (Kleiman et al 2007) Los resultados obtenidos en dicho trabajo reforzaron la
necesidad de estudiar la dinaacutemica de F hepatica en otra zona endeacutemica con
caracteriacutesticas climaacuteticas y topograacuteficas contrastantes para identificar los factores que la
determinan comparar los patrones de transmisioacuten y obtener una visioacuten global e integrada
de esta zoonosis a nivel nacional
La regioacuten Noroeste se presenta interesante para delimitar un estudio epidemioloacutegico de
Fasciolosis ya que es un aacuterea endeacutemica para la enfermedad animal una zona de
importancia a nivel de prevalencias de infeccioacuten y presenta caracteriacutesticas climaacuteticas y
fisonoacutemicas distintas a la patagoacutenica
Las caracteriacutesticas fisiograacuteficas justifican en gran medida la situacioacuten de la mayor parte
de la regioacuten con existencia de baja densidad poblacional y la imposibilidad de desarrollo
de actividades agropecuarias de importancia Se localizan asentamientos poblacionales
de distintas magnitudes en estrecha dependencia con los riacuteos Estos pobladores utilizan
el agua proveniente de cursos temporarios para consumo familiar y riego Se encuentran
algunos puestos de pocas personas en varios casos grupos de individuos emparentados
que permanecen en viviendas sumamente precarias construidas con material de la zona
llevados por la necesidad de alimentar el ganado seguacuten la estacioacuten del antildeo
La proteccioacuten del agua contra la contaminacioacuten fecal constituye un elemento de relevante
importancia Sin embargo las caracteriacutesticas de los suelos y la altura no permiten la
obtencioacuten de agua subterraacutenea a un costo accesible para el poblador quien opta por la
utilizacioacuten de las aguas superficiales que poseen una alta contaminacioacuten fecal tanto de
humanos como animales de criacutea y silvestres Una alternativa medianamente posible
incluiriacutea someter el agua a hervor o filtrado adecuado Con respecto al hervor no se
presenta en algunos casos como un meacutetodo simple de descontaminacioacuten ya que el uso
de lentildea como combustible claacutesico induce a la gente a su utilizacioacuten restringida Con
respecto a la filtracioacuten los equipamientos adecuados suelen ser costosos y si bien
pueden ser uacutetiles en la reduccioacuten de la carga pueden no ser totalmente efectivos en la
eliminacioacuten dependiendo de la porosidad
Las praacutecticas sanitarias habituales para la evacuacioacuten de desechos humanos y animales
pueden interrumpir el ciclo de vida de algunos de estos paraacutesitos pero el mal
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saneamiento y la falta de higiene personal pueden introducir propagar y mantener la
transmisioacuten en la comunidad revistiendo gran importancia la disponibilidad y uso de
letrinas
Ademaacutes entre las fuentes de riesgo de contraer enfermedades zoonoacuteticas se encuentra
el comportamiento alimentario por lo tanto es indispensable entender estos haacutebitos para
prevenir y controlar estas infecciones La educacioacuten sanitaria en la comunidad sobre la
preparacioacuten higieacutenica de alimentos limpieza lavado coccioacuten ayuda tambieacuten a reducir el
riesgo
La situacioacuten descripta muestra la necesidad de efectuar estudios epidemioloacutegicos en
aacutereas donde una prueba piloto ha detectado casos humanos de la enfermedad y que
permitan la identificacioacuten de especies que mantienen el ciclo bioloacutegico como reservorios y
hospedadores intermediarios
Ademaacutes es necesario aplicar meacutetodos de diagnoacutesticos directos e indirectos para la
deteccioacuten sensible y especiacutefica de esta parasitosis En el capiacutetulo de la Salud Puacuteblica
referente a Fasciolosis hay determinadas regiones en el mundo con elevada prevalencia
y con muchas personas afectadas Lo que sucede hace pensar que haya mayor nuacutemero
de casos de trematodosis y que pasen inadvertidos para la consulta meacutedica o que incluso
se presenten casos de Fasciolosis que cliacutenicamente se diagnostiquen equivocadamente
como otros procesos de ahiacute que sea de la mayor importancia mejorar o precisar el
diagnoacutestico tanto a nivel de semiologiacutea como de laboratorio Todos estos antecedentes
llevan a la necesidad de revisar los conocimientos actuales sobre la epidemiologiacutea de la
enfermedad
A partir de ello se formula la siguiente pregunta de investigacioacuten iquestCuaacutel es la probabilidad
de que la Fasciolosis endeacutemica en el valle de Fiambalaacute se transmita a los seres humanos
en forma epideacutemica
1101 - Justificacioacuten
Los informes de la OMS sentildealan que la Fasciolosis incrementa permanentemente el
nuacutemero de personas infectadas en el mundo se propaga en forma alarmante entre la
poblacioacuten y va adquiriendo mayor importancia con el transcurso del tiempo Ante la
evidencia de que no es un hecho aislado ni localizado surge la necesidad de conocer la
situacioacuten epidemioloacutegica de manera eficaz y medir sus alcances
La investigacioacuten planteada contribuiraacute a generar estrategias para entender y resolver
para que los resultados ayuden a crear un mayor conocimiento sobre la enfermedad Se
cuenta con indicadores que prometen resultados efectivos los que mediraacuten las variables
de estudio en el contexto catamarquentildeo y se desea aportar informacioacuten con aplicaciones
a otros ambientes provinciales
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1102 - Viabilidad del estudio
El estudio fue factible porque se ha tenido en cuenta la disponibilidad de recursos
financieros humanos y materiales que determinaron el alcance de la investigacioacuten Para
que el estudio fuera viable y no se dispersara se circunscribioacute la poblacioacuten a la localidad
de Tatoacuten y su zona de influencia dentro del valle de Fiambalaacute
Se contoacute con el aval de las autoridades sanitarias provinciales y asimismo se obtuvo el
apoyo de instituciones interesadas en conocer no solo la situacioacuten sino participar en la
toma y el procesamiento de las muestras lo que facilitoacute el desarrollo del trabajo
1103 - Evaluacioacuten de las deficiencias
Como deficiencia en el desarrollo hay que tener en cuenta el acceso al contexto y lugar
donde se realizoacute el trabajo de campo La investigacioacuten fue muy respetuosa con las
personas que participaron en el estudio No se anticipa ninguacuten efecto negativo en cambio
se pretende proporcionar informacioacuten valiosa a personas que conviven con factores de
riesgo Desde luego fue necesario obtener el consentimiento informado de los
pobladores
111 - Objetivos
1111 - Objetivo general
Contribuir al conocimiento de la epidemiologiacutea de la Fasciolosis describiendo la
ocurrencia de la infeccioacuten por Fasciola hepatica en la poblacioacuten humana animales
y hospedadores intermediarios utilizando diferentes meacutetodos de diagnoacutestico en el
valle de Fiambalaacute Catamarca
1112 - Objetivos especiacuteficos
Reconocer los principales factores que determinan la presencia de Fasciolosis
Estimar la prevalencia seroloacutegica de Fasciolosis en personas que habitan el valle
de Fiambalaacute
Analizar diferentes metodologiacuteas de diagnoacutestico (directo e indirecto) signos y
siacutentomas de la enfermedad en humanos
Determinar la prevalencia de Fasciolosis en especies de ganado que se criacutean en
la zona (asnos rumiantes menores y cameacutelidos sudamericanos) mediante
meacutetodos coproparasitoloacutegicos
Realizar estudios anatomorfoloacutegicos de ejemplares de F hepatica que permitan
caracterizar el fenotipo de los especiacutemenes en el valle de Fiambalaacute
Observar si las caracteriacutesticas microscoacutepicas de los paraacutesitos presentan
variaciones con las de otras localizaciones de origen del hospedador definitivo
Analizar la variabilidad geneacutetica para la identificacioacuten de ADN de F hepatica en la
regioacuten
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Comprobar con teacutecnicas moleculares la posible presencia de cepas de F hepatica
resistentes a faacutermacos antiparasitarios en ejemplares recogidos en las necropsias
Reproducir el ciclo bioloacutegico de moluscos intermediarios en el laboratorio para
probar infeccioacuten inducida
Demostrar la infeccioacuten natural de los limneidos y la prevalencia de caracoles
infectados
Caracterizar el fenotipo de los limneidos por la morfometriacutea de su conchilla
Identificar la especie de Lymnaea spp en el ciclo de F hepatica involucrada en
el valle de Fiambalaacute mediante herramientas moleculares
112 - Hipoacutetesis
El nuacutemero de casos de Fasciolosis humana diagnosticados en el valle de Fiambalaacute
presenta importantes variaciones con otras regiones del paiacutes transformaacutendola en una
zona endeacutemica que manifiesta nuevas caracteriacutesticas tanto en los ejemplares de F
hepatica como a nivel de los hospedadores intermedios
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DISENtildeO DEL ESTUDIO Y MEacuteTODOS
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2 - DATOS SECUNDARIOS Y CARACTERIacuteSTICAS DEL AMBIENTE
21 - Seleccioacuten del tipo de estudio
Se realizoacute un estudio de alcance descriptivo prospectivo con disentildeo no experimental
transeccional con seguimiento de la cohorte en humanos durante el periacuteodo 2008-2012
en el Valle de Fiambalaacute provincia de Catamarca Repuacuteblica Argentina
22 - Lugar de la poblacioacuten
Los trabajos de campo se llevaron a cabo en Tatoacuten aacuterea perteneciente al noreste del
valle o bolsoacuten (Niz et al 2004) de Fiambalaacute (El topoacutenimo Fiambalaacute proviene de la
voz cacaacuten fiambalao que significa casa del viento o paiacutes del viento) (Lafone Quevedo
1999) departamento Tinogasta provincia de Catamarca Argentina (Figura 6) Unos 40
kiloacutemetros al norte de la ciudad de Fiambalaacute surgen oasis como Tatoacuten (1874 msnm)
27ordm20acute2033rdquoS y 67ordm31acute2837rdquoO y haciacutea el este Riacuteo Grande (2834 msnm)
27deg13acute3421umlS y 67deg22acute2825umlO Estas poblaciones viven de la explotacioacuten en pequentildea
escala de la ganaderiacutea ovina caprina y cameacutelidos sudamericanos de las plantaciones de
frutales vid del cultivo de maiacutez y alfalfa (Machado Araacuteoz 2007)(Orgaz et al 2007)
b
a
c
Figura 6 Ubicacioacuten geograacutefica del Valle de Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia
de Catamarca Repuacuteblica Argentina
Nota a Mapa poliacutetico de la Repuacuteblica Argentina b Mapa de la provincia de Catamarca c Vista
satelital del Valle de Fiambalaacute
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23 - Seleccioacuten de la poblacioacuten
La poblacioacuten humana estudiada reunioacute las siguientes condiciones a) compartir su haacutebitat
con animales domeacutesticos infectados con F hepatica y b) que esos animales fueran
nacidos y criados en la zona para garantizar que el foco de transmisioacuten fuese local
24 - Periacuteodo de estudio
El estudio se desarrolloacute entre septiembre de 2008 y noviembre de 2012
25 - Descripcioacuten regional del haacutebitat del valle de Fiambalaacute
El liacutemite fiacutesico al norte del valle es la ladera sur de la cordillera de San Buena Ventura
que la separa de la puna Al este gira hacia el sur por la divisoria de aguas que separa la
cuenca del riacuteo Grande El oeste se halla delimitado por la Sierra de Famatina (Montero
Loacutepez et al 2009)
La existencia de vegetacioacuten achaparrada muerta y meacutedanos indican los aspectos tiacutepicos
del paisaje resultante del tipo climaacutetico y que son denominador comuacuten del centro de los
bolsones ocupado por salares o barreales rodeados de meacutedanos (Quiroga 1986)
Las caracteriacutesticas del haacutebitat natural el medio ambiente y los factores climaacuteticos locales
son cruciales para entender el aacuterea endeacutemica humana en cuestioacuten en relacioacuten con el
patroacuten de transmisioacuten (Mas-Coma 2005 Mas-Coma et al 2009 a) el escenario
epidemioloacutegico (Mas-Coma et al 1999 a 2009 a) y las mejores estrategias para el
diagnoacutestico y encuestas (Mas-Coma et al 2014 a)
251 - Orografiacutea
La zona posee en su formacioacuten materiales que pertenecen a los primeros tiempos de la
tierra los que discordan con rocas modernas Orograacuteficamente se destaca el flanco
occidental de la Sierra de Fiambalaacute (Paleozoico) que se dispone de norte a sur (Cabrera
1958)
La regioacuten estaacute cubierta de tipos erosivos cuyas caracteriacutesticas responden al resultado de
la accioacuten del termoclastismo que produce desintegracioacuten mecaacutenica resquebrajamiento y
disgregacioacuten que son acumuladas por el viento (Navarro 1994)
En las zonas maacutes bajas se observa material que comprende extensos abanicos aluviales
y la presencia de innumerables dunas en forma de medialunas y meacutedanos que hacen
tiacutepico el aacuterido paisaje
252 - Clima
La zona de estudio se encuentra dentro del dominio de lo que se denomina Clima
Templado correspondiente a la categoriacutea Aacuterido de Sierras y Bolsones (Argerich 2004)
Se producen heladas todo el antildeo existiendo friacuteo seco de altura inviernos friacuteos y veranos
templados La presencia de sierras da lugar a la formacioacuten de microclimas lo que
acondiciona el marco topograacutefico para la existencia de oasis que se localizan en los
conoides de deyeccioacuten en la falda occidental de los valles
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El relieve es un factor decisivo ya que produce un efecto barrera o de aislamiento que
convierte a los valles en compartimientos separados y define el clima El valle por el que
corre el riacuteo Abaucaacuten presenta un clima mesoteacutermico con amplitudes teacutermicas
estacionales y diacuteanoche tanto en verano como en invierno se producen grandes
amplitudes diurnas
Los determinantes maacutes importantes del clima son la temperatura el reacutegimen de lluvias y
el balance hiacutedrico El clima es ventoso seco conocido como ldquoviento zondardquo Se alcanza un
nivel de presioacuten atmosfeacuterica media de aproximadamente 620 hPa (Castantildeeda y Ratto
2005)
Las lluvias son escasas y torrenciales se dan principalmente en verano la precipitacioacuten
anual no supera los 50 mm El reacutegimen hiacutedrico del suelo resulta importante para el
desarrollo de los caracoles y para la transmisioacuten de F hepatica (Malone 1994) porque
produce encharcamientos donde se reproducen los moluscos En el valle de Fiambalaacute la
altura de la sierra homoacutenima de 3000 m snm aproximadamente resulta insuficiente
para producir lluvias importantes
La evolucioacuten anual de los factores climaacuteticos se obtuvo por interpolacioacuten proporcionada
por las estaciones meteoroloacutegicas circundantes maacutes cercanas a partir de una base de
datos seriada de 50 antildeos (1950-2000) Los valores fueron obtenidos de la base de datos
agroclimaacuteticos de Agromet Grupo FAO (FAOCLIM) El meacutetodo de interpolacioacuten utilizado
para evaluar las caracteriacutesticas climaacuteticas del aacuterea local es el Nuevo LocClim 110
descargado de la Organizacioacuten de las Naciones Unidas para la Agricultura y la
Alimentacioacuten (FAO) con una resolucioacuten temporal de diacuteas
Entre la variedad de iacutendices existentes para cuantificar la aridezhumedad y
continentalidad se seleccionaron el iacutendice de aridez de De Martonne y el iacutendice de
continentalidad de Gorczynski Los iacutendices de aridez proporcionan una manera sencilla
de expresar la relacioacuten de precipitacioacutenevaporacioacuten El iacutendice de aridez de De Martonne
se define como la relacioacuten de la suma anual de la precipitacioacuten en mm y la temperatura
media anual de 10 degC El iacutendice de continentalidad de Gorczynski es una manera simple
pero eficiente para estimar la influencia del oceacuteano en el clima local El iacutendice depende
linealmente de la amplitud teacutermica anual (diferencia de temperatura media mensual entre
el mes maacutes caacutelido y el maacutes friacuteo) (Grieser et al 2006)
Para evaluar las caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute se utilizaron las
clasificaciones de Koeppen y Budyko La clasificacioacuten climaacutetica de Koeppen es uno de los
sistemas maacutes utilizados para la clasificacioacuten del clima y se basa en el concepto de que la
vegetacioacuten nativa es la mejor expresioacuten del clima Por lo tanto los liacutemites de la zona
climaacutetica se seleccionan de acuerdo con la distribucioacuten de la vegetacioacuten Combina las
temperaturas medias anuales y mensuales y la precipitacioacuten y la estacionalidad de la
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precipitacioacuten El sistema de clasificacioacuten climaacutetica Budyko es un meacutetodo de
categorizacioacuten de los climas basado en la relacioacuten de energiacutea recibida a la energiacutea
requerida para evaporar la precipitacioacuten local Los principios de la clasificacioacuten de Budyko
tienen en cuenta las caracteriacutesticas de radiacioacuten que se estrecha y los correlaciona
directamente con la temperatura en la estacioacuten caacutelida y los factores de circulacioacuten que
correlacionan indirectamente las caracteriacutesticas cuantitativas de la precipitacioacuten y el
reacutegimen de humectacioacuten (Oliver y Wilson 1987)
Este software permite precisar la altitud y las correcciones horizontales Los factores
climaacuteticos analizados incluyeron las temperaturas maacuteximas medias y miacutenimas la
precipitacioacuten la evapotranspiracioacuten potencial (ETP) periodo huacutemedo (estacioacuten de
crecimiento de vegetacioacuten) y el periacuteodo seco En relacioacuten con la vegetacioacuten la estacioacuten
de crecimiento es el periodo durante un antildeo cuando la precipitacioacuten es superior a la
mitad de la evapotranspiracioacuten potencial y se define por PrecETP gt 05 (FAO 1978)
aunque para este foco se analizaron ETP gt 05 y EPT gt 045 debido a sus condiciones de
aridez extrema
253 - Hidrografiacutea
La cuenca se alimenta con aguas provenientes de deshielos y vertientes temporarias las
cuales llegan al valle de Fiambalaacute formadas por efluentes y cursos secundarios en
donde el sistema vuelca sus aguas al riacuteo Abaucaacuten (Sempeacute 1983) Las vegas de
superficie poco definida son ambientes lenticos permanentes su agua es transparente
neutra a ligeramente aacutecida
254 - Flora y Fauna
La mayor cantidad de pastos se producen en las vegas predominando las siguientes
especies forrajeras Hydrocotyle sp Halerpestes cimbalaria (Pursh) Greene Ludwigia
sp Mulhembergia aperifolia Deyeuxia haeckeli y Sinzyrinchium chilense (Navarro
1994)
Dentro de los herbiacutevoros de la fauna silvestre cabe mencionar vicuntildea (Vicugna vicugna)
y guanaco (Lama guanicoe)
SERES HUMANOS
3 - Epidemiologia en seres humanos
31 - Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiada
A partir de estudios previos se estimoacute en base a los registros de los agentes sanitarios
del Aacuterea Programaacutetica Ndeg 10 una poblacioacuten de 350 habitantes en la localidad de Tatoacuten y
sus alrededores
311 - Criterios de inclusioacuten En el inicio de la investigacioacuten se incluyoacute a toda la
poblacioacuten de la localidad elegida
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312 - Criterios de exclusioacuten Se excluyeron a aquellas personas que no desearon
participar pacientes con antecedentes siacutentomas o signos de enfermedades
hematoloacutegicas que suponiacutean un riesgo para la extraccioacuten de sangre recieacuten nacidos o
nintildeos de un antildeo o menos
Como consecuencia de ello la poblacioacuten estudiada comprendioacute 305 personas de ambos
sexos quienes concurrieron voluntariamente a las postas sanitarias donde se realizaron
los estudios El rango de edad de los pacientes fue de 2 a 86 antildeos
El trabajo se inicioacute en 2008 y finalizoacute en 2012 con la colaboracioacuten de los Hospitales ldquoSan
Juan Bautistardquo y ldquoEva Peroacutenrdquo de la ciudad de Catamarca el Hospital Municipal de
Enfermedades Infecciosas ldquoDr Francisco Javier Muntildeizrdquo de la ciudad autoacutenoma de
Buenos Aires del Ministerio de Salud de Catamarca el Hospital Zonal ldquoSan Juan
Bautistardquo de Tinogasta el Hospital Zonal ldquoLuis Agoterdquo de Fiambalaacute y el Minihospital ldquoReneacute
Favalorordquo de Medanitos Tambieacuten participaron el Centro de Estudios de Alta Complejidad
(CEAC) de la ciudad autoacutenoma de Buenos Aires el laboratorio de Parasitologiacutea de la
Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca en forma conjunta
con el ex Instituto Nacional de Microbiologiacutea ldquoDr Carlos Gregorio Malbraacutenrdquo actual
Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas de la Administracioacuten Nacional de
Laboratorios e Institutos de Salud ubicado en la ciudad de Buenos Aires Repuacuteblica
Argentina
Para estudiar a las personas durante toda la investigacioacuten se solicitoacute una declaracioacuten en
la que los interesados dieron su consentimiento verbal y escrito (Veacutease anexo Figura 19
pp 184) y se obtuvo la correspondiente autorizacioacuten de las autoridades de la Divisioacuten de
Docencia e Investigacioacuten del Hospital San Juan Bautista de la Provincia de Catamarca
para realizar la investigacioacuten De cada paciente se recolectaron los datos personales se
describieron siacutentomas signos y se realizaron exaacutemenes de laboratorio
Para el estudio se seleccionoacute un grupo de pacientes que reuniacutean los siguientes criterios
- Pacientes con serologiacutea positiva para F hepatica especialmente aquellos con
maacutes de una prueba positiva en antildeos sucesivos
- Pacientes con sintomatologiacutea cliacutenica naacuteuseas voacutemitos y dolor en hipocondrio
derecho
- Patroacuten humoral de colangitis aumento de fosfatasa alcalina transaminasas y
fundamentalmente de eosinofilia
- Anormalidades de las viacuteas biliares en la ecografiacutea dilatacioacuten de las viacuteas biliares
intrahepaacuteticas dilatacioacuten del coleacutedoco mayor o igual a 7 miliacutemetros
engrosamiento de las paredes del coleacutedoco y bandas ecogeacutenicas periportales
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32 - Obtencioacuten de las muestras
Se trabajoacute con un cuestionario para la recoleccioacuten de datos El mismo presentoacute dos
partes una correspondiente a personas y la otra a hogares Se emplearon para la
recoleccioacuten de datos personales que incluiacutean la identificacioacuten edad sexo ocupacioacuten y
domicilio datos de haacutebitos alimenticios y contactos con animales Datos de la vivienda
referidos al tipo materiales de construccioacuten servicios fuentes de provisioacuten de agua y
energiacutea El cuestionario se completoacute durante la visita a los pobladores mediante
interrogacioacuten a adultos y nintildeos (en este caso en presencia de un familiar a cargo) y
observacioacuten del encuestador (Veacutease anexo Figura 20-21 pp 185-186)
321 - Recoleccioacuten de sangre
Las muestras de sangre obtenidas por venopuncioacuten fueron empleadas (previa a su
colocacioacuten en los tubos) para realizar extendidos hemaacuteticos Para ello se colocoacute una gota
sobre un portaobjetos y se distribuyoacute con el uso de un extensor
Los extendidos se dejaron secar a temperatura ambiente se fijaron con alcohol metiacutelico y
colorearon con la tincioacuten de Giemsa se rotularon con laacutepiz indicando nombre apellido y
nuacutemero de frotis en uno de los extremos del vidrio Estos materiales se transportaron a
temperatura ambiente en cajas para almacenamiento de portaobjetos hasta los
laboratorios bioquiacutemicos
Durante los antildeos 2009 2010 y 2011 se obtuvieron muestras de 10 ml de sangre de las
personas (n=305) por venopuntura (Lavery e Ingram 2005) colocaacutendolas en dos tubos
uno con anticoagulante EDTA (3 ml de sangre) y otro tubo seco (7 ml de sangre) para
separacioacuten del suero rotulados con nombre apellido y nuacutemero de envase En estas
condiciones fueron transportados hasta el Laboratorio del Hospital Zonal ldquoLuis Agoterdquo de
Fiambalaacute Alliacute se mantuvieron 8 horas a temperatura ambiente para su exudacioacuten
posteriormente se centrifugaron a 3000 rpm y despueacutes fueron separados por aspiracioacuten
con pipetas y transferidos a 2 tubos con los mismos roacutetulos En aquellas muestras donde
se observoacute hemoacutelisis se realizoacute centrifugacioacuten a baja velocidad y transferencia a tubos
limpios
Las muestras obtenidas fueron mantenidas en heladera y transportadas a 4 ordmC a la
ciudad de Catamarca donde se congelaron a -20 degC para conservarlas hasta llevar a
cabo los anaacutelisis correspondientes El suero contenido en un tubo se utilizoacute para los
diagnoacutesticos inmunoloacutegicos y el del otro para la determinacioacuten de enzimas proteiacutenas y
bilirrubina
A una de las muestras de suero en el departamento de Parasitologiacutea del Instituto
Malbraacuten se les realizoacute el ensayo por inmunoadsorcioacuten ligado a enzimas (Enzyme-Linked
InmunoSorbent Assay ELISA) para la identificacioacuten de los anticuerpos anti-F hepatica
presentes en los sueros de los pacientes (utilizando proteiacutena recombinante procatepsina
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L1)
El segundo tubo con suero para las demaacutes determinaciones se analizoacute en los
laboratorios bioquiacutemicos con los cuales se trabajoacute
322 - Inmunodiagnoacutestico
El ensayo inmunoenzimaacutetico es una prueba ampliamente usada para el diagnoacutestico de
fasciolosis Su sensibilidad y especificidad dependen de la calidad de los antiacutegenos del
paraacutesito empleados para evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti-F hepatica (Binkley y
Sinniah 1997) La procatepsina L1 (cisteiacuten-proteasa) obtenida como recombinante se
usoacute como antiacutegeno en ELISA por ser una prueba con buenos resultados previos
(Carnevale et al 2001 a)
3221 - Expresioacuten y purificacioacuten de la proteiacutena recombinante procatepsina L1 (rproCL1)
El protocolo de expresioacuten del antiacutegeno E-S fue realizado previamente en el Instituto
Malbran (Carnevale et al 2001 a) en bacterias Escherichia coli M15 recombinantes
conteniendo el plaacutesmido pQE-proCL1 que se multiplicaron en medio Luria (LB)
suplementado con los antibioacuteticos ampicilina (100 microgml) y kanamicina (10 microgml) toda la
noche y en agitacioacuten a 37 degC El cultivo se diluyoacute 20 veces en 100 ml del mismo medio
se incuboacute en agitacioacuten durante 4 hs a 37 degC con la adicioacuten de isopropil-szlig-
Dtiogalactopiranosido (IPTG) a concentracioacuten final de 2 microM para inducir la expresioacuten de
rproCL1
El lisado de bacterias se obtuvo en presencia de agentes desnaturalizantes y se sometioacute
a diaacutelisis La preparacioacuten proteica obtenida se purificoacute por cromatografiacutea quelante a
traveacutes de una resina de Ni2+-aacutecido nitrilotriaceacutetico en condiciones desnaturalizantes
(Carnevale et al 2001 a) Las fracciones de elucioacuten se analizaron por SDS-PAGE
(Wiltfang et al 1991) y la proteiacutena purificada se cuantificoacute por el meacutetodo de Bradford
(Bradford 1976) y se guardoacute a -70 degC en aliacutecuotas de 40 microg
Las bacterias se cosecharon por centrifugacioacuten y el pellet fue resuspendido en 2 ml de
solucioacuten de resuspensioacuten (20 mM Tris-HCl pH 80 1 mM EDTA pH 80 5 -
mercaptoetanol 25 SDS) para posteriormente hervirlo durante 5 min La muestra asiacute
tratada se centrifugoacute 30 min a 4 degC a 15000 x g recuperaacutendose el sobrenadante El SDS
presente en la preparacioacuten se precipitoacute por adicioacuten de un volumen de KCl 100 mM
incubado por 10 min a temperatura ambiente y centrifugacioacuten a 15000 x g durante 3 min
El sobrenadante fue equilibrado en solucioacuten de lisis por diaacutelisis con 10 voluacutemenes de
buffer de lisis (dos recambios) durante 48 horas a 4 degC
La preparacioacuten proteica obtenida se pasoacute a traveacutes de una resina de Ni2+-aacutecido
nitrilotriaceacutetico (Qiagen) La proteiacutena rproCL1 se unioacute por afinidad al Ni2+ y el remanente
de proteiacutenas de la bacteria se eluyoacute por sucesivos lavados con solucioacuten de lavado (buffer
de lisis a pH 63) Finalmente la proteiacutena rproCL1 se eluyoacute de la columna con solucioacuten de
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elucioacuten (buffer de lisis a pH 45) (Carnevale et al 2001 a) Las fracciones de elucioacuten se
analizaron por electroforesis en geles desnaturalizantes de poliacrilamida coloreados con
azul de Coomassie
3222 - Ensayo inmumoenzimaacutetico
El ensayo de ELISA para la deteccioacuten de anticuerpos anti-rproCL1 de F hepatica se
desarrolloacute en base al protocolo previamente descripto (Carnevale et al 2001 b) Se utilizoacute
en el desarrollo de la prueba el antiacutegeno rproCL1 a concentracioacuten 4 microgml y como
cromoacutegeno ABTS Para el ensayo se utilizaron placas de ELISA de 96 pocillos ldquoPolySorprdquo
(Nunc) sensibilizadas con el antiacutegeno rproCL1 a concentracioacuten 4 microgml en buffer
carbonato 005 M pH 96 (100 microlpocillo) mediante incubacioacuten por 3 horas a 37 degC y 18
horas a 4 ordmC en caacutemara huacutemeda
Despueacutes de la sensibilizacioacuten con el antiacutegeno los pocillos se lavaron 3 veces con 200
microlpocillo de PBS005 Tween antes de la adicioacuten de 200 microlpocillo de la solucioacuten de
bloqueo (PBS005 Tween3 seroalbuacutemina bovina) Despueacutes de 30 min de
incubacioacuten a 37 degC en una caacutemara huacutemeda los pocillos se lavaron como se describioacute
anteriormente Los sueros humanos en dilucioacuten 1250 (100 microlpocillo) en solucioacuten de
bloqueo fueron antildeadidos por duplicado a la placa e incubados durante 30 min a 37 degC
Luego de nuevos lavados la placa fue incubada por otros 30 min a 37 degC en presencia de
100 microl de un segundo anticuerpo anti-IgG humana preparado en cabra y marcado con
peroxidasa (Sigma) diluido 14000 en solucioacuten de bloqueo
Finalmente se procedioacute a detectar el anticuerpo unido al antiacutegeno despueacutes de nuevos
lavados mediante la reaccioacuten enzimaacutetica de la peroxidasa en presencia del sustrato
peroacutexido de hidroacutegeno y del cromoacutegeno 22-azino-bis 3-etilbenzotiazolin-6-aacutecido sulfoacutenico
(Sigma) Las placas se leyeron a los 10 min en el lector de ELISA iMarktrade BioRad La
densidad oacuteptica expresoacute el valor de corte de la teacutecnica diferenciando sueros positivos y
negativos (el caacutelculo se realizoacute en base a las densidades oacutepticas de los controles
negativos) El punto de corte fue de ge0410 nM aplicando el criterio de +3 desviacuteos
estaacutendar por sobre el cual se consideroacute todo suero analizado como positivo
Para validar el ensayo fueron llevadas 12 muestras positivas al Centro Colaborador de la
Organizacioacuten Mundial de la Salud Departamento de Parasitologiacutea de la Universitat de
Valencia Espantildea
3223 - Foacutermula leucocitaria
Se procedioacute en primer lugar a la determinacioacuten en los extendidos hemaacuteticos de la
foacutermula leucocitaria
3224 - Eosinofilia
El nivel de eosinofilia fue calculado (foacutermula absoluta y relativa) mediante recuento
diferencial de eosinoacutefilos respecto al caacutelculo de leucocitos totales en los extendidos
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hemaacuteticos coloreados Considerando como normales hasta 350mm3 se efectuoacute la
determinacioacuten en campos no superpuestos (Louis et al 1962)
3225 - Proteinas Totales
Este examen se realizoacute con reactivos comerciales utilizando el meacutetodo colorimeacutetrico para
determinar proteiacutenas totales en suero por ser uacutetil para el seguimiento de cambios
ocasionados por diversos estados de enfermedad hepaacutetica (McPherson 2011) mediante
la lectura de la absorvancia Se mezcloacute con varilla se incuboacute 15 min a 37 degC y se leyoacute en
espectrofotoacutemetro a 540 nM o en fotocoloriacutemetro con filtro verde (520-560 nM) llevando a
cero con el blanco de reactivo Longitud de onda 625 nM en espectrofotoacutemetro o en
fotocoloriacutemetro con filtro rojo (620-650 nM) con una temperatura de reaccioacuten de 15 a 28
degC y un tiempo de reaccioacuten de 10 min Tomando como valores normales el rango de 60 a
83 gmdL (gramos por decilitro)
3226 - Aacutecidos biliares
Reabsorbidos en el intestino grueso y transportados por la albuacutemina hacia el hiacutegado
como parte de su ciclo enterohepaacutetico En plasma el 88 de las sales biliares se
encuentran unidas a la albuacutemina Se consideraron los valores normales inferiores a 10
nMml
3227 - Bilirrubina seacuterica
Es el ligando maacutes estudiado En plasma la bilirrubina es insoluble y su unioacuten a la
albuacutemina la vuelve soluble La unioacuten a la albuacutemina determina su detoxificacioacuten en cuanto
a su rol antimitocondrial promueve su efecto antioxidante y colabora en su destruccioacuten
por parte de la luz in vivo El nivel normal considerado de bilirrubina directa es 0 a 03
mgdL y el de bilirrubina total 03 a 19 mgdL
3228 - Enzimas
Se realizaron pruebas de funcionalidad hepaacutetica para detectar un aumento de las
enzimas alanina amino transferasa o transaminasa glutaacutemico-piruacutevica (ALT o GPT)
aceptando los valores normales de 6 a 35 UIL y aspartato amino transferasa o
transaminasa glutaacutemica oxalaceacutetica (AST o GOT) con valores normales entre 6 a 30 UIL
(Gianini et al 2005)
Para conocer el pasaje del paraacutesito a los canaliacuteculos biliares y una posible fase croacutenica
de la enfermedad se analizoacute el aumento de fosfatasa alcalina (FAL) que se encuentra
elevada en patologiacuteas del hiacutegado asociadas con enfermedad de las viacuteas biliares y
colestasis Se tomaron como valores normales en adultos desde 25 a 100 UIL y en nintildeos
menos de 350 UIL (Pratt y Kaplan 2000)
323 - Anaacutelisis de los datos
Se utilizoacute la regresioacuten logiacutestica por ser una de las herramientas estadiacutesticas con mejor
capacidad para el anaacutelisis de datos en investigacioacuten cliacutenica y epidemiologiacutea Esta teacutecnica
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modeloacute coacutemo influyoacute en la probabilidad de aparicioacuten de un suceso habitualmente
dicotoacutemico la presencia o no de diversos factores y el valor o nivel de los mismos En
este caso con el objeto de identificar aquellos factores significativos en la explicacioacuten de
la probabilidad de que un paciente presente fasciolosis se aplicoacute un modelo de regresioacuten
logiacutestica muacuteltiple con el programa SPSSreg versioacuten 115 para Windows El modelo
matemaacutetico permitioacute ademaacutes evaluar la contribucioacuten de cada variable sobre las chances
(odds) que tiene un paciente de presentar un resultado positivo
Se clasificoacute el valor de la variable respuesta como 0 cuando no se presentoacute el suceso
(caso negativo) y con el valor 1 cuando siacute estuvo presente (paciente con resultado
positivo) Se consideraron como variables independientes o explicativas en el modelo
edad sexo resultado de los exaacutemenes y siacutentomas
Todos los datos se registraron seguacuten el nuacutemero de identificacioacuten utilizado durante la
recoleccioacuten correspondiente al integrante de la poblacioacuten y el nuacutemero de la muestra para
el resto de los materiales analizados
Las prevalencias de infeccioacuten por diferentes meacutetodos se compararon usando el test de
Chi2 y se calcularon los valores predictivos con intervalos de confianza de 95 El valor
obtenido para el estadiacutestico de contraste de hipoacutetesis H0 β=0 llamado test de Wald se
halloacute mediante el cociente entre el coeficiente y su error estaacutendar Este estadiacutestico siguioacute
una distribucioacuten Chi2 con 1 grado de libertad
324 - Materia fecal
Antes del inicio de la toma de muestras para coproparasitologiacutea se realizoacute una
explicacioacuten oral respecto a la metodologiacutea de recoleccioacuten con solicitud de repeticioacuten de
las indicaciones por parte de los participantes Se entregoacute un instructivo impreso por
persona los envases con la solucioacuten y una cucharita descartable para la recoleccioacuten de
cada muestra
El procedimiento consistioacute en recolectar muestras de materia fecal (n=96) emitida durante
3 diacuteas consecutivos y colocarla en recipientes (rotulados con el nombre apellido y
nuacutemero de envase) con solucioacuten salina formolada 5 como conservante Los frascos
conteniendo las muestras fueron retirados por los agentes sanitarios a partir del cuarto
diacutea posterior a su entrega las mismas se conservaron a temperatura ambiente y se
transportaron hasta el Laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la
Salud Universidad Nacional de Catamarca en cajas destinadas para tal fin
Las personas participantes de ambos sexos y distintos grupos etarios no fueron
discriminadas por familias por que se analizaron individualmente Se destaca que en
general la poblacioacuten fue reacia a proporcionar las muestras
La eleccioacuten del conservante fue realizada por las ventajas de su faacutecil preparacioacuten bajo
costo fijador multipropoacutesito larga duracioacuten y apropiada para procedimientos de
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sedimentacioacuten
3231 - Teacutecnica de Sedimentacioacuten Raacutepida (TSR)
De cada muestra de materia fecal (n=96) se tomaron de 4-8 gr de heces que fueron
homogenizadas en un vaso coacutenico con una varilla de vidrio en 30 ml agua corriente
filtrada y calentada a 50 degC Obtenida una buena homogenizacioacuten se agregoacute agua hasta
completar 150 ml La mezcla se trasvasoacute a un recipiente coacutenico de vidrio de 250 ml de
capacidad tamizaacutendola con un colador de malla Se completoacute el volumen con agua
filtrada y se dejoacute reposar por 3 a 4 min no maacutes (la sedimentacioacuten se basoacute en que el
tiempo de caiacuteda de los huevos de F hepatica en el agua es 100 mmmin maacutes raacutepido que
el de la caiacuteda de detritos de las materias fecales) Luego se decantoacute dos terceras partes
del sobrenadante y se volvioacute a agregar agua friacutea hasta completar la capacidad de la copa
Se repitieron los mismos pasos 2 o 3 veces o hasta que el sobrenadante quedara limpio
Finalmente se removioacute el sedimento se aspiroacute parte con una pipeta Pasteur el que fue
vertido en un portaobjeto con concavidades y se observoacute al microscopio con lentes de
menor aumento
3232 - Teacutecnicas de concentracioacuten
32321 - Meacutetodo de Telemann modificado
Las heces fijadas (n=96) en solucioacuten salina formolada fueron homogeneizadas con varilla
de vidrio y filtradas a traveacutes de un embudo con una doble gasa en tubo de centriacutefuga Se
agregaron aproximadamente 2 ml de eacuteter y los tubos se centrifugaron a 1000-1500 rpm
de 3 a 5 min Se eliminoacute con golpe seco el sobrenadante Se tomoacute con pipeta Pasteur
una pequentildea cantidad del sedimento y se colocoacute en portaobjetos Se agregoacute una gota de
lugol y se selloacute con un cubreobjetos para su observacioacuten al microscopio oacuteptico
32322 - Meacutetodo de flotacioacuten de Willis
Se cubrioacute el fondo de un vaso de 50 ml (sin pico vertedor) con un volumen de muestra de
heces previamente homogeneizada (n=96) Se llenoacute hasta la cuarta parte del frasco con
solucioacuten salina sobresaturada y se mezcloacute con varilla de vidrio hasta obtener una
suspensioacuten muy fina Se dejoacute la solucioacuten en estas condiciones 20 min Se aspiroacute el
volumen superior de la solucioacuten y se recuperoacute con pipeta una muestra del fondo que fue
colocada entre portaobjeto y cubreobjetos y se observoacute al microscopio Este uacuteltimo
procedimiento fue adicionado para la buacutesqueda de huevos operculados de F hepatica
que presentan la caracteriacutestica de no flotar
32323 - Meacutetodo cuantitativo para huevos
La teacutecnica de Kato-Katz o frotis grueso (solicitada para la entrega gratuita de Egatenreg
triclabendazol para uso humano donacioacuten de Novartis Pharma AG) (Savioli et al
1999)(OMS 2006)(Keiser et al 2007) se preparoacute por recomendacioacuten de la OMS para la
buacutesqueda hallazgo y recuento de huevos de F hepatica en heces (n=15)
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33 - Diagnoacutestico por imaacutegenes
A los casos seleccionados por nivel elevado de eosinofilia fosfatasa alcalina o
resultados seroloacutegicos de F hepatica positivos se efectuoacute ecografiacutea abdominal con un
equipo portaacutetil Aloka 500 con transductor Coacutenvex 35 MHz
En dos oportunidades meacutedicos especialistas del Hospital Muntildeiz y del Ministerio de Salud
de la provincia de Catamarca efectuaron las ecografiacuteas (n=57) de aquellas personas a las
que previamente se habiacutea seleccionado
En el caso de pacientes sintomaacuteticas (n=2) meacutedicos gastroenteroacutelogos practicaron una
exploracioacuten con el meacutetodo invasivo Colangiopancreotografiacutea Endoscoacutepica Retrograda
(CPRE) con el uso de coledocoscopio flexible Olympus CHF P20 de 49 mm con canal
de trabajo de 22 mm y visioacuten lateral realizando una papilotomiacutea retrograda endoscoacutepica
y barrido instrumental con cateacuteteres de Dormia (Mazzariello 2009) en cliacutenicas privadas
de las ciudades de San Fernando del Valle de Catamarca y Coacuterdoba
34 - Datos cliacutenicos
Meacutedicos de los distintos nosocomios efectuaron los exaacutemenes cliacutenicos a personas
sospechosas de fasciolosis o que lo solicitaron donde se evaluaron siacutentomas y signos
tales como fiebre dispepsia diarrea ictericia dolor abdominal voacutemitos hepatomegalia
etceacutetera Los datos fueron anotados en la planilla de registro de observaciones disentildeada
para este fin que corresponde a una fraccioacuten del cuestionario (Veacutease anexo Figura 21
pp 186)
ANIMALES COMO HOSPEDADOR DEFINITIVO DE F hepatica
4 - Especies animales estudiadas
El componente animal incluyoacute para su estudio ejemplares (n=1088) de las especies
domeacutesticas Bos primigenius taurus (bovinos) Capra aegagrus hircus (caprinos) Equus
africanus asinus (asnos) Equus ferus caballus (caballos) Lama glama (llamas) Ovis
orientalis aries (ovinos) y Sus scrofa domestica (cerdos) de diferentes razas categoriacuteas y
sexos
41 - Exaacutemenes coproparasitoloacutegicos
Para conocer la prevalencia de infeccioacuten por F hepatica y la contaminacioacuten del ambiente
por el aporte de huevos al medio se recolectaron muestras de materia fecal en 36 viajes
a campo realizados en primavera y otontildeo Las muestras (n=1077) se obtuvieron de las
distintas especies animales domesticas presentes en la zona ovinos (n=322) asnos
(n=192) llamas (n=210) caprinos (n=197) bovinos (n=72) equinos (n=46) y porcinos
(n= 38) durante los antildeos 2008-2011
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Las muestras de heces fueron recogidas en el momento de la defecacioacuten de cada
ejemplar o con el uso de guantes descartables de pared delgada que permitieron la
penetracioacuten completa de la mano o de un dedo seguacuten la especie animal a evaluar Se
humedecioacute la proteccioacuten con agua corriente al igual que la regioacuten anal para no maltratar
al animal en el momento de extraccioacuten de las bontildeigas del recto
La materia fecal obtenida fue colocada en recipientes plaacutesticos individuales que
conteniacutean solucioacuten salina formolada al 5 y se transportaron al laboratorio de
Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de
Catamarca para su anaacutelisis En el diagnoacutestico de infeccioacuten por F hepatica se utilizoacute la
teacutecnica de sedimentacioacuten para la deteccioacuten de huevos en materia fecal (Dennis et al
1954) fundamentada en repetidos lavados y filtrados de la muestra coproloacutegica y la
observacioacuten posterior Se preparoacute una solucioacuten detergente con 95 ml de agua destilada y
5 ml de detergente liacutequido maacutes unas gotas de solucioacuten al 1 de sulfato de aluminio y
potasio
Se pesoacute 5 gr de heces de cada muestra se colocaron en un mortero se agregoacute 25 ml de
solucioacuten detergente y se mezcloacute cuidadosamente con varilla sin formar espuma En un
embudo colador se colocoacute una doble gasa y se filtroacute la suspensioacuten a un tubo de 50 ml de
capacidad se lavoacute con solucioacuten detergente el recipiente que conteniacutea las muestras
filtrando este liacutequido y agregaacutendolo al tubo adicionando maacutes solucioacuten detergente al
sedimento de la malla hasta llenar el tubo Se dejoacute el tubo en reposo entre 5 y 10 min
eliminando 34 parte del sobrenadante se lavoacute el embudo con solucioacuten detergente y
agregoacute al tubo Se volvioacute a llenar el tubo hasta el reborde con solucioacuten detergente
dejando reposar aproximadamente 10 min Se eliminoacute el sobrenadante del tubo dejando
2 a 3 ml de sedimento Se tintildeoacute con gotas de azul de metileno al 1 o 2 gotas de tintura
de yodo y se dejoacute en reposo de 2 a 5 min vertiendo este contenido en una caja de Petri
Se lavoacute el tubo con 5 ml de agua corriente agregaacutendolo a la placa y se observoacute al
microscopio de 4x a 10x Finalmente se reportoacute la presencia o ausencia de huevos de F
hepatica La identificacioacuten de los huevos se realizoacute a partir de sus caracteriacutesticas
morfoloacutegicas forma ovalada u ovoide con una envoltura lisa de color amarillento o
marroacuten claro que en una de sus extremidades posee un pequentildeo opeacuterculo cuyas
medidas variacutean entre 130-140 μm de largo por 70-90 μm de ancho (Boero 1976) Las
prevalencias de infeccioacuten de las diferentes especies se compararon usando el test de
Chi2
411 - Identificacioacuten de otros paraacutesitos gastrointestinales
Muestras de materia fecal ovina fueron estudiadas con el meacutetodo de Willis para
comprobar presenciaausencia de especies paraacutesitas que pudieran cohabitar con F
hepatica
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42 - Necropsias y obtencioacuten de especiacutemenes de F hepatica
Se participoacute durante 2008 2009 y 2010 en las faenas domiciliarias y peridomiciliarias de
11 animales domeacutesticos [Lama glama (n=4) Ovis orientalis aries (n=4) Capra aegagrus
hircus (n=2) y Bos primigenius taurus (n=1)] de ambos sexos y distintas edades
sacrificados por los pobladores que de esa forma se proveiacutean de carne para la
alimentacioacuten familiar Se obtuvo autorizacioacuten verbal para realizar la inspeccioacuten sanitaria
de los cadaacuteveres que permitiera la buacutesqueda de ejemplares adultos de F hepatica y
otros signos de enfermedad El estudio se realizoacute con el material recogido del ganado
sacrificado por sus propietarios por lo que no se necesitoacute la autorizacioacuten del Comiteacute de
Eacutetica del Colegio Meacutedico Veterinario de la Provincia de Catamarca
En la cavidad abdominal se examinaron los oacuterganos in situ observando esencialmente la
relacioacuten entre ellos y las anormalidades en el peritoneo y contenido del abdomen El
hiacutegado se inspeccionoacute mediante palpacioacuten en toda la superficie para posteriormente
realizar cortes paralelos a traveacutes del pareacutenquima
De manera especial se procedioacute in situ a la inspeccioacuten visual del hiacutegado cuando se
trataba de fasciolosis aguda (n=2) para observar inflamacioacuten presencia de hemorragias
en el pareacutenquima producidas por la migracioacuten de los paraacutesitos inmaduros durante las
primeras semanas post-infeccioacuten o trayectos con sangre coagulada hematomas debajo
de la caacutepsula de Glisson (subcapsulares) congestioacuten venosa y peritonitis fibrosa
adyacente La buacutesqueda de formas joacutevenes de F hepatica se realizoacute mediante incisiones
paralelas del pareacutenquima hepaacutetico con cortes en laacutemina cada dos centiacutemetros y medio
de espesor
En los animales revisados que presentaban fasciolosis croacutenica (n=5) los hallazgos
dependieron de la presencia y nuacutemero de paraacutesitos Se buscoacute especialmente en las
carcasas edemas en ldquocuello de botellardquo edemas generalizados y signos de caquexia En
los hiacutegados se examinoacute todo dato objetivo observado de colangitis fibrosis hepaacutetica y
ganglios linfaacuteticos agrandados En los cortes practicados a los canales biliares se observoacute
la presencia de engrosamientos en las paredes de los ductos y depoacutesitos calcaacutereos en su
lumen
En las necropsias se recolectoacute bilis para la buacutesqueda de huevos de F hepatica los que
a posteriori seriacutean utilizados con los caracoles en la reproduccioacuten in vitro del ciclo La
bilis se colectoacute en tubos coacutenicos de 50 ml de capacidad recubiertos en papel de aluminio
se refrigeroacute y se transportoacute hasta el laboratorio de la Facultad de Ciencias de la Salud
donde se conservaron en heladera a 4-8 degC
Los ejemplares de paraacutesitos hallados durante las faenas se lavaron durante 30 min en
solucioacuten fisioloacutegica fueron dispuestos en 3 grupos de envases uno con solucioacuten AFA
(etanol 95ordm 85 ml formaldehiacutedo comercial 10 ml y aacutecido aceacutetico glacial 5 ml) para realizar
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estudios anatomorfoloacutegicos un segundo al que se agregoacute etanol 70deg para el anaacutelisis de la
variabilidad geneacutetica y un tercero conteniendo ARNlaterR para estudios de resistencia
antiparasitaria Todos los tubos fueron numerados para identificar lugar especie sexo
edad aproximada o categoriacutea de los animales y datos del propietario del animal faenado
421 - Estudios morfoloacutegicos de F hepatica
Ejemplares de F hepatica obtenidos en la faena de un bovino infectado naturalmente en
el valle de Fiambalaacute (n=20) se compararon con las medidas de especiacutemenes procedentes
de Rosario de la Frontera Salta Argentina (n=15) de Cordeiro Riacuteo de Janeiro (n=23)
Lavras Minas Gerais Brasil (n=18) y Galicia Espantildea
El meacutetodo de estudio aplicado se basoacute en el protocolo propuesto por Valero et al (2005)
y se llevoacute a cabo en el Laboratoacuterio de Helmintos Paraacutesitos de Vertebrados Fiocruz Riacuteo
de Janeiro Brasil Se realizaron estudios morfoloacutegicos de F hepatica con microscopia de
campo claro y usando microscopia de contraste por interferencia diferencial o teacutecnica DIC
(Differential-Interference Contrast) Normarski Los especiacutemenes fueron mantenidos en
solucioacuten AFA hasta el laboratorio del Fiocruz donde se fijaron en etanol 70deg se
presionaron entre vidrios transparentes para facilitar la visualizacioacuten de las estructuras e
inmediatamente despueacutes se realizoacute la deshidratacioacuten de las muestras con una serie
ascendente de alcoholes y luego se tintildeeron con carmiacuten alcohoacutelico de Langeron (1949)
seguido de una aclaracioacuten con solucioacuten de salicilato de metilo y baacutelsamo de Canadaacute en
la proporcioacuten 11 El material fue montado entre portaobjetos Se midieron los ejemplares
para su registro y comparacioacuten de tamantildeo con especiacutemenes de las otras regiones Las
microfotografiacuteas se obtuvieron usando un microscopio de campo claro (Olympus BX51)
Ademaacutes se obtuvieron microfotografiacuteas utilizando contraste de interferencia diferencial
(Normarski) para estudiar especiacutemenes un tanto gruesos que no permiten el uso de
contraste de fases La imagen proyectada al ser seudo tridimensional facilitoacute observar las
espinas del tegumento para diferenciarlos Esta teacutecnica se aplicoacute a 23 especiacutemenes
Ocho muestras del valle de Fiambalaacute 7 de Salta 4 especiacutemenes de Cordeiro y 4
ejemplares de Lavras
422 - Estudios de haplotipos de F hepatica
Para analizar los haplotipos de F hepatica circulantes paraacutesitos obtenidos (n=30) en la
necropsia de un bovino naturalmente infectado se conservaron hasta su transporte al
Instituto Malbraacuten en etanol 70ordm y se procesaron para la extraccioacuten de ADN empleando un
kit comercial Se llevaron a cabo reacciones de PCR para la amplificacioacuten del marcador
molecular correspondiente al gen mitocondrial de la subunidad 1 de la citocromo c
oxidasa (COI) Los amplicones obtenidos se secuenciaron automaacuteticamente Las
filogenias fueron reconstruidas utilizando el algoritmo de maacutexima parsimonia
implementado en el programa PAUP (Swoffod 2001) Los aacuterboles se obtuvieron
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mediante 1000 reacuteplicas bootstrap La adicioacuten de secuencias fue al azar con 5
repeticiones Se compararon con ejemplares de fasciolas de otras regiones del paiacutes
423 - Estudios de resistencia a antiparasitarios
Para conocer la posible resistencia a drogas antiparasitarias (Triclabendazol TCBZ) se
utilizoacute la teacutecnica RAPD PCR para la que se seleccionoacute ejemplares procedentes de un
bovino (n=9) y 2 ovinos (n=18) obtenidas en las faenas realizadas en septiembre de 2009
y noviembre de 2010 En cada tubo de microcentrifuga de 2 ml de capacidad se
colocaron 3 ejemplares de F hepatica con el medio ARNlaterR y se enviaron a la Caacutetedra
de Farmacologiacutea de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad del Centro
de la Provincia de Buenos Aires para realizar el ensayo que involucroacute el anaacutelisis de los
fragmentos amplificados mediante electroforesis en geles de
poliacrilamida desnaturalizantes El iniciador empleado se marcoacute con un compuesto
fluorescente y se resolvioacute empleando un secuenciador automaacutetico Se emplearon como
testigos muestras de F hepatica procedentes de la provincia de Chubut y otras de
Cajamarca Peruacute En cada tubo se preparoacute BSA 1mgml 25 microl dNTPs 20 mM 2 microl Taq
directa sin diluir 025 microl DNA 10 ngmicrol 1 microl MgCl 25 mM 2 microl primer mezcla F y R 1 microl y
H2O csp 1625 microl La secuencia del cebador utilizado fue M-13 GAG GGT GGC GGT
TCT y el Programa 7 Di 94 degC 2 min 94 degC 30 seg 37 degC 1 min 72 degC 2 min (45 ciclos)
Ef 72 degC 5 min Los tubos y orden de siembra fueron 1) PM 10 microL 2) ADN Fh Sensible
(cepa pura Cullompton) 3) ADN Fh Resistente (cepa pura Sligo) 4) ADN Fh Peruacute ovino
(Pedro Ortiz de Cajamarca) 5) ADN Fh Quebrada Grande (Vega) 6) ADN Fh Puerta de
Tatoacuten (Bayoacuten) 7) ADN Fh Casa Grande (Loacutepez) 8) ADN Fh Chubut ovino (Jensen)
IDENTIFICACIOacuteN DEL HOSPEDADOR INTERMEDIARIO DE Fasciola hepatica
5 - Epidemiologiacutea de los caracoles
51 - Recoleccioacuten de limneidos en la zona del valle de Fiambalaacute
Los meacutetodos malacoloacutegicos correspondieron a los baacutesicos utilizados en malacologiacutea y
comprendieron la recoleccioacuten de los limneidos (n=2354) en la naturaleza su transporte y
la posterior aclimatacioacuten de los mismos en condiciones de laboratorio para su estudio
(Roberts 1950)(Malek 1962)(Prasertphon 1990)
Se seleccionaron 4 biotopos donde se colectaron caracoles mediante la buacutesqueda visual
sobre la vegetacioacuten o de los ejemplares que se desplazaban libremente en la superficie
del agua Tambieacuten se buscaron moluscos en restos del sustrato seco troncos hojas
tallos etceacutetera
El aacuterea de trabajo fue determinada con el fin de recolectar el mayor nuacutemero de
ejemplares posibles en total se realizaron 24 muestreos de 3 horas cada uno desde
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septiembre a mayo de cada antildeo colectando moluscos en sus diferentes haacutebitats
mediante las manos enguantadas para no dantildear al caracol y reduciendo el impacto sobre
el biotopo En los diferentes muestreos y en cada sitio se recolectaron todas las especies
de caracoles presentes utilizando igual meacutetodo de captura (Rabinovich 1980)
El material malacoloacutegico colectado proveniacutea de poblaciones naturales del valle de
Fiambalaacute Las expediciones para la recoleccioacuten de los moluscos se realizaron en
poblaciones de caracoles del riacuteo Abaucaacuten (27ordm29acute2871S y 67ordm360612O) en la vega
ubicada en las afueras de Tatoacuten (27ordm202935S y 67ordm315824O) gasteroacutepodos
presentes de la vega ldquoLa Primavera de Isatacordquo (27ordm292871S y 67ordm360612O) entre
las localidades de Tatoacuten y Medanitos y en Riacuteo Grande (27ordm133794S y 67ordm224317O)
Estos lugares fueron escogidos teniendo en cuenta los casos registrados en el marco
veterinario (Curtale et al 2000) y las primeras estimaciones sobre fasciolosis en seres
humanos detectadas en la zona
De cada una de las aacutereas de recoleccioacuten se tuvieron en cuenta una serie de
caracteriacutesticas bioacuteticas tales como la presencia de otras especies de moluscos
(Paraense 2005) presenciaausencia de vertebrados como potenciales hospedadores
definitivos y tipo de vegetacioacuten de la zona
511 - Transporte de limneidos al laboratorio
La recoleccioacuten de moluscos en el terreno se realizoacute siguiendo las instrucciones generales
que cabe encontrar en cualquier libro de malacologiacutea que se refiera a gasteroacutepodos de
agua dulce Siempre se tratoacute de hacer colectas lo maacutes numerosas posibles dada la
mortalidad de estos caracoles en situaciones experimentales
Para el transporte de los ejemplares vivos se utilizoacute recipientes de plaacutestico conteniendo
agua del lugar Durante los viajes se hizo especial hincapieacute en la temperatura (menor a
20 degC) para evitar la contaminacioacuten del agua que podiacutea llevar a la mortalidad de los
caracoles recolectados A su vez se colectaron especiacutemenes que fueron colocados en
tubos con alcohol etiacutelico Se trasladaron al laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de
Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional de Catamarca para estudios apropiados
52 - Tareas en el laboratorio
521 - Adaptacioacuten y cultivo de limneidos
El primer paso que se realizoacute en el laboratorio fue la aclimatacioacuten de los moluscos
recolectados tratando de simular las condiciones que encontraban en la naturaleza Esta
fase duroacute aproximadamente 48 horas (Rondelaud y Barthe 1987)(Audousset et al
1989) Durante este periacuteodo los ejemplares se colocaron en recipientes de vidrio con
agua y un suministro de lechuga a temperaturas entre 20 y 25 ordmC
Se consiguioacute un correcto mantenimiento para la reproduccioacuten del ciclo bioloacutegico al
disponer en el fondo de los recipientes una capa fina de sedimentos de grava
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(Rondelaud y Barthe 1978)(Audousset et al 1989) cubierta con agua ambos elementos
previamente esterilizados mediante el empleo del autoclave Cada 3 a 4 diacuteas se antildeadiacutean
hojas de lechuga (Venturini et al 1981) y se procediacutea al cambio de agua del recipiente
(Bouix-Busson et al 1985 a)(Bouix-Busson et al 1985 b)
522 - Taxonomiacutea
De los primeros ejemplares (n=1236) colectados en diciembre de 2009 un grupo (n=298)
de los moluscos se llevaron al Laboratorio de Parasitologiacutea General Unidad de Ecologiacutea
de Reservorios y Vectores de Paraacutesitos Departamento de Ecologiacutea Geneacutetica y
Evolucioacuten Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires donde
se confirmoacute por las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla (Paraense 1982) y
oacuterganos internos que se trataba de limneidos
El material colectado y conservado en etanol (n=236) en septiembre de 2010 se
comparoacute con las descripciones y los dibujos de las especies de limneidos detalladas para
la Regioacuten Neotropical (Paraense 1982)(Paraense 1984)
La caracterizacioacuten morfomeacutetrica comparativa de la conchilla de los limneidos es una
caracteriacutestica adicional de intereacutes sobre todo cuando se trata de especies de
hospedadores intermediarios del grupo GalbaFossaria ampliamente distribuido en zonas
endeacutemicas de fasciolosis de Ameacuterica del Sur (Samadi et al 2000)(Bargues et al 2007 a
2011 a)
Las conchillas de limneidos se midieron de acuerdo con los meacutetodos tradicionales
malacoloacutegicos (Oviedo et al 1995)(Samadi et al 2000) Para estudiar la estructura
anatoacutemica de la poblacioacuten se midioacute el largo de la conchilla desde el aacutepex hasta el margen
anterior y el ancho en la seccioacuten maacutes amplia (Hubendick 1951) de los caracoles
recolectados en cada ambiente y por fecha de muestreo utilizando un calibre de Vernier
Otros moluscos recolectados simultaacuteneamente con los de la familia Lymnaeidae fueron
identificados a nivel de geacutenero siguiendo las claves y descripciones de los gasteroacutepodos
de agua dulce de Argentina (Castellanos y Landoni 1981)(Rumi et al 2008)
523 - Infeccioacuten natural por F hepatica
Teniendo en cuenta que los moluscos fueron recolectados en zonas de endemia animal
se consideroacute necesaria la comprobacioacuten de una posible parasitacioacuten Despueacutes de su
aclimatacioacuten 70 ejemplares recolectados en 2011 fueron aislados en cajas de Petri
individuales para comprobar en eacutestos la emisioacuten de cercarias durante 60 diacuteas Las cajas
de cultivo fueron revisadas una vez a la semana en busca de la posible presencia de
metacercarias enquistadas en las paredes del recipiente o en la lechuga que serviacutea de
alimento
Un grupo de cuerpos de caracoles (n=453) se examinaron para la identificacioacuten de
estadios intermediarios de F hepatica Se sacrificaron y relajaron los ejemplares y luego
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al llevar a cabo la diseccioacuten de los cuerpos en fresco separando las partes duras de las
blandas con agujas de diseccioacuten se comprimieron entre dos portaobjetos y se
observaron al microscopio oacuteptico (4x) para reconocer las estructuras de los diferentes
estadios intermedios del parasito
524 - Infeccioacuten inducida del hospedador intermediario
En el laboratorio de Parasitologiacutea de la Facultad de Ciencias de la Salud se realizoacute la
infeccioacuten experimental del hospedador intermediario la que se consiguioacute forzando el
contacto miracidio-molusco (n=60) y manteniendo los caracoles infectados bajo
condiciones controladas de temperatura humedad e iluminacioacuten (Mas-Coma et al 1997
a)(Valero y Mas-Coma 2000)
Los miracidios utilizados se obtuvieron de forma experimental mediante la eclosioacuten de los
huevos previamente embrionados (recogidos en las necropsias lavados con solucioacuten
isotoacutenica y filtrados) Se mantuvieron en estufa a temperatura de 25 degC durante 8 diacuteas
observaacutendolos cada 24 horas para comprobar la maduracioacuten de los mismos Los huevos
embrionados se sometieron a la accioacuten de la luz durante 30 min promoviendo la apertura
del opeacuterculo y salida del estadio larvario (Ubaid 1989) La infeccioacuten se logroacute poniendo en
contacto los moluscos con varios miracidios -infeccioacuten plurimiracidial- en una caja de Petri
durante un tiempo que osciloacute entre 2 y 6 horas Pasado este periodo se observoacute el
recipiente bajo la lupa en busca de miracidios y en caso de no estar presentes se
consideroacute un signo inequiacutevoco de que habiacutean penetrado en el caracol (Krull
1941)(Kendall 1950)(Roberts 1950)
53 - Identificacioacuten de la especie mediante determinacioacuten de haplotipos
Se transportaron caracoles de una misma poblacioacuten de limneidos (n=38) colectados
durante 2012 en los biotopos de la zona y fijados con alcohol etiacutelico 70 al Centro
Colaborador de la OMS Departamento de Parasitologiacutea de la Universitat de Valencia
Espantildea para realizar los anaacutelisis moleculares mediante procedimientos de extraccioacuten de
ADN Su mantenimiento durante el viaje se llevoacute a cabo mediante cambios del alcohol en
forma perioacutedica
En la presente investigacioacuten entre los marcadores moleculares utilizados en la
identificacioacuten de los limneidos y para demostrar a que especie perteneciacutean se
seleccionaron ADN nuclear ribosomal (ADNr) marcador de ADN mitocondrial (ADNmt)
primer espaciador transcrito interno (ITS-1) segundo espaciador transcrito (ITS-2) ARN
ribosomal codificacioacuten de gen de la subunidad grande del gen mitocondrial (16S)
citocromo c oxidasa subunidad I de secuencia de nucleoacutetidos y la secuencia de
aminoaacutecidos (Cox1)
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531 - Marcadores de ADN seleccionados
Los marcadores se utilizaron para demostrar la clasificacioacuten de las especies de limneidos
y evaluar comparativamente la variabilidad intraespeciacutefica de sus poblaciones en muchos
paiacuteses de Ameacuterica Latina (Bargues y Mas-Coma 2005)(Bargues et al 2001 2007 a
2011 a b c) que tambieacuten incluye Argentina (Bargues et al 2006 2007 b)(Mera y Sierra
et al 2009)
532 - Extraccioacuten de ADN
El total de ADN fue aislado con fenol-cloroformo y se precipitoacute en etanol (Sambrook et al
1989) La extraccioacuten se realizoacute individualmente de una pequentildea porcioacuten del tejido de la
cabeza-pie de cada caracol (Manlatis et al 1989) Las muestras de los especiacutemenes de
limneidos se suspendieron en un tubo eppendorf con 400 μL de tampoacuten de lisis 10 μL
Tris-HCl pH 80 100 μL EDTA 100 μL NaCl 1 SDS conteniendo 500 microgml de
proteinasa K (Promega Madison WI USA) y digeridos durante 2 horas a 55 degC con
agitacioacuten alterna cada 15 min Los pasos del procedimiento se realizaron de acuerdo con
meacutetodos descriptos previamente (Bargues y Mas-Coma 1997)(Bargues et al 2001 2007
a) El sedimento (pellet) se secoacute y se resuspendioacute de nuevo en 30 μL de buffer TE esteacuteril
(pH 80) esta suspensioacuten fue almacenada a -20 ordmC hasta su empleo
533 - Secuenciacioacuten de los marcadores de ADNr y ADNmt
Las secuencias de ADN fueron amplificadas mediante la reaccioacuten en cadena de
polimerasa (PCR) con la utilizacioacuten de 4-6 μL de ADN genoacutemico cada 50 μL de reaccioacuten
de PCR seguacuten meacutetodos descritos en la bibliografiacutea (Bargues y Mas-Coma 1997
2005)(Bargues et al 1997 2001 2006 a c 2007 2011 a b c 2012 a b)(Mas-Coma et
al 2001) El programa utilizado para los espaciadores fue 1) 30 seg a 94 ordmC 2) 30 seg a
94 ordmC 3) 30 seg a 50 ordmC 4) 1 min a 72 ordmC 30 ciclos repetitivos de los pasos 2 a 4 5) 7
min a 72 ordmC 6) descenso y mantenimiento a 4 ordmC Diez μL de cada producto de PCR se
chequeoacute mediante electroforesis en gel de agarosa coloreadas con bromuro de etidio 1
(NuSievereg GTGreg agarosa) Para poder extrapolar el peso de los fragmentos de ADN se
utilizoacute el marcador de peso molecular VI (Boehringer Mannheim)
La purificacioacuten de los productos amplificados por PCR tuvo la finalidad de obtener una
solucioacuten concentrada y de alta pureza del fragmento eliminando los restos de cebadores
nucleoacutetidos sales etceacutetera La concentracioacuten de ADN asiacute como su pureza fueron
calculadas por espectrofotometriacutea en una dilucioacuten de la muestra al 5 en tampoacuten Tris 10
μL
Cada uno de los cuatro marcadores de ADN (ADNr ITS-2 y ITS-1 y de ADNmt genes
16S y cox1) se amplificaron por PCR en forma independiente para cada muestra y cada
producto de PCR se secuencioacute para la caracterizacioacuten del haplotipo Los espaciadores
ITS-2 y ITS-1 se amplificaron utilizando los cebadores descritos anteriormente (Bargues
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et al 2001 2006 2007 a b)(Mas-Coma et al 2009 a) Los fragmentos diana de los
genes 16S y cox1 fueron amplificados por PCR usando un conjunto de cebadores
universales (Simoacuten et al 1991)(Folmer et al 1994) Los procedimientos de amplificacioacuten
y las condiciones del ciclador teacutermico para cada uno de los marcadores de ADN se
llevaron a cabo en un Mastercycle Epgradient (Eppendorf Hamburgo Alemania) como
se describioacute previamente (Mas-Coma et al 2009 a)(Bargues et al 2011 a)
Los productos de PCR fueron purificados utilizando el Ultra Clean Systemtrade Purificacioacuten
de ADN PCR Clean-up (MoBio Solana Beach CA USA) de acuerdo con el protocolo del
fabricante y se resuspendieron en 50 μL de 10 mM de tampoacuten TE (pH 76) La
concentracioacuten final de ADN se determinoacute midiendo la absorbancia a 260 y 280 nM en un
Eppendorf BioPhotometer (Hamburgo Alemania)
La secuenciacioacuten de cada marcador molecular se realizoacute en ambas hebras por el meacutetodo
didesoxinucleoacutetidos (ddNTPs) de terminacioacuten de cadena Se llevoacute a cabo con el kit que
contiene tinte de color de enzima termoestable Taq en un Applied Biosystems 3730 DNA
Analyzer (Applied Biosystems Foster City CA USA) usando cebadores de PCR
534 - Anaacutelisis de la secuencia
Las secuencias fueron alineadas utilizando CLUSTALW2 (Larkin et al 2007) en versioacuten
606 MEGA (Tamura et al 2013) y el conjunto se trabajoacute con el paquete Staden (Staden
et al 2001) Las correcciones menores para el mejor ajuste de nucleoacutetidos se hicieron en
los casos de los espaciadores ITS Las homologiacuteas se realizaron utilizando el programa
BLASTN (Camacho et al 2008) del Centro Nacional para el sitio web de informacioacuten
sobre Biotecnologiacutea (httpwwwncbinlmnihgovBLAST) Las distancias geneacuteticas se
midieron usando paraacutemetros proporcionados por PAUP v40b10 (Swofford 2001)
Como la sistemaacutetica de limneidos sudamericanos pertenecientes al grupo GalbaFossaria
es controversial y no se puede hacer solo con criterios morfoloacutegicos (Bargues et al 2007
a)(Mera y Sierra et al 2009) para identificar queacute individuos pertenecen a L neotropica o
L viator la comparacioacuten de las secuencias se realizaron utilizando todos los datos de
secuencias ribosomales y mitocondriales de moluscos descargados de GenBank
535 - Nomenclatura de los haplotipos de ADN
En lo referente a la nomenclatura los coacutedigos de las secuencias obtenidas utilizados para
la definicioacuten de los haplotipos siguen la propuesta estaacutendar para limneidos (Bargues y
Mas-Coma 2005)(Bargues et al 2006 a)(Mas-Coma et al 2009 a) Es importante
puntualizar que los coacutedigos de haplotipos son definitivos soacutelo cuando se trata de
secuencias completas del marcador utilizado para haplotipar Sin embargo se consideran
coacutedigos preliminares cuando la secuencias utilizadas corresponden a fragmentos o
secuencias incompletas
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54 - Determinacioacuten molecular de la infeccioacuten natural de limneidos con F hepatica
Se seleccionaron al azar caracoles (n=120) recolectados a fines del verano de 2011 y
conservados individualmente en alcohol 70 Los ejemplares fueron llevados al
Departamento de Parasitologiacutea del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas
ANLIS bdquobdquoDr Carlos G Malbranrdquo donde se sometieron a la teacutecnica de amplificacioacuten en
cadena de la polimerasa (Cucher et al 2006) La secuencia completa del ADN
mitocondrial de F hepatica disponible en la base de datos GenBank (Nuacutemero de acceso
AF216697) se empleoacute para adquirir el par de cebadores utilizados en el meacutetodo
La identidad de F hepatica se corroboroacute mediante la determinacioacuten molecular en los
caracoles limneidos Esta teacutecnica se empleoacute a fin de determinar la infeccioacuten de moluscos
del geacutenero Lymnaea con F hepatica A 10 μL de material geneacutetico obtenido se le
adicionaron 40 μL de mezcla de reaccioacuten compuesta de 025 microL de cebadores FhCO1F
025 microL de cebadores FhCO1R 020 microL de ddNTPs 020 microL de enzima Taq polimerasa
5 microL de MgCl 5 microL de buffer de reaccioacuten 040 microL de BSA y 2870 microL de agua bidestilada
esteacuteril Este proceso se realizoacute en tandas de 75 muestras a modo de trabajar con mayor
practicidad El protocolo empleado fue el mismo usado para determinar si existioacute
amplificacioacuten en la secuencia de ADN en las muestras de limneidos colectados a campo
De estas muestras se tomaron 5 μL para ser sembrados en un gel de electroforesis de
concentracioacuten 15 para verificar si hubo amplificacioacuten de la muestra a su vez se
sembroacute la mezcla de reaccioacuten (sin ADN) y una muestra de control positivo que permitioacute
verificar si las muestras analizadas estaban infectadas Se procedioacute a realizar la
electroforesis en las mismas condiciones anteriores
La teacutecnica de PCR se empleoacute para amplificar la secuencia de ADN de las muestras
limneidos A 10 microl de material geneacutetico se les adicionoacute 40 microl de mezcla de reaccioacuten 05 microl
de primer 213 10 mM 05 microl de primer 297 10 mM 02 microl de dNTPs 02 microl enzima Taq
polimerasa 5 microl MgCl 5 microl de buffer de reaccioacuten B10x ClK 04 microl de BSA y 282 microl de
agua bidestilada esteacuteril
Los tubos de ADN y uno que conteniacutea agua (a modo de control) fueron llevados a un
termociclador empleando el programa ldquosil Lymnaea 18srdquo previamente cargado en el
equipo Se llevoacute a una temperatura de 95 degC durante 5 min luego a temperaturas de 94
degC 55 degC y 72 degC durante 10 seg repitiendo este ciclo 35 veces para despueacutes llevarlos
durante 10 min a 72 degC para finalmente bajar la temperatura hasta 4 degC
541 - Electroforesis
De las muestras se tomaron 5 microl para ser sembrados en un gel de electroforesis de
concentracioacuten 25 que permitioacute la separacioacuten de las macromoleacuteculas en base a su
carga y masa al colocarlo en una cuba de electroforesis que poseiacutea un tampoacuten y donde
se aplicoacute corriente eleacutectrica Esto se realizoacute mezclando 6 g de agarosa en 400 ml de
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buffer TAE (tris-acetato) calentando para disolver la agarosa luego se dejoacute enfriar la
mezcla hasta 50-60 degC y se antildeadieron 24 microl de bromuro de etidio que actuoacute como
colorante Se vertioacute en un molde y colocando un peine se formaron pocillos donde fueron
sembradas las muestras y colocadas en la cubeta de electroforesis que presentaba
solucioacuten tampoacuten de TAE 1x el gel quedoacute completamente cubierto
Una vez realizado esto se colocoacute en el primer pocillo el ADN marcador adecuado (100
bp) en el uacuteltimo la mezcla de reaccioacuten con agua y en los pocillos restantes las muestras
que se analizaron por duplicado El ADN migroacute hacia el aacutenodo aplicando tensioacuten eleacutectrica
hasta que el bromuro de etidio recorrioacute la distancia a traveacutes del gel (30 min) Finalmente
se introdujo el gel en un transiluminador UV y se fotografioacute Se eliminoacute el gel en el
recipiente aparte para residuos soacutelidos destinado al bromuro de etidio
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RESULTADOS
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6 - DATOS SECUNDARIOS Y CARACTERISTICAS DEL AMBIENTE
61 - Caracteriacutesticas de las viviendas del valle de Fiambalaacute
El nuacutemero de familias estudiadas (n=52) habitaban en viviendas ubicadas en Tatoacuten
(n=34) (271 personas) (7742) y en puestos aledantildeos a Riacuteo Grande (n=18) (79
personas) (2257) Las viviendas se clasificaron seguacuten su tipo en ranchos 36 (6923)
viviendas precarias 12 (2307) y casas 4 (769)
Los hogares se agruparon en funcioacuten de la calidad de los materiales de construccioacuten
correspondiendo maacutes de la mitad de ellos a viviendas construidas con materiales no
resistentes ni soacutelidos En cuanto a los materiales utilizados en los pisos de las viviendas
predominaba la tierra (9230) seguida por el cemento (576) y el ceraacutemico (194)
Las paredes estaban construidas principalmente de piedra o bloques de cemento
(5683) y adobe (4317) y en general no contaban con revoque exterior (9522)
Los techos presentaron como elementos constitutivos principales la paja con adobe
(4348) y la chapa (5652) sin cielorraso (9891)
En las viviendas estudiadas el principal combustible utilizado correspondioacute a la lentildea
(7652) mientras que el gas envasado en garrafas se encontroacute en segundo teacutermino
(2348)
La fuente de agua para consumo correspondioacute en su mayoriacutea a la extraiacuteda del Riacuteo
Grande por medio de acequias dirigidas hacia cisternas de decantacioacuten y desde alliacute en
precaria red de cantildeeriacuteas plaacutesticas hasta los domicilios Las viviendas rurales se
abasteciacutean con agua de vertiente utilizando bidones para el almacenamiento Todas las
familias utilizaban para su consumo el agua de vertiente o de red sin proceso de filtracioacuten
o cloracioacuten Cuando se recolectoacute informacioacuten acerca de la utilizacioacuten de agua hervida
soacutelo 2 familias (384) indicaron que la empleaban para consumo mientras que ninguna
familia la usaba para el lavado de alimentos ni la higiene personal
En cuanto a la eliminacioacuten de excretas la forma principal correspondioacute a la eliminacioacuten a
cielo abierto 33 familias (6346) El bantildeo interior se encontroacute solo en el 193 de las
viviendas visitadas y 3461 utilizaba letrinas con descarga a pozo encontraacutendose todas
a menos de 50 metros de la casa
Las caracteriacutesticas generales de precariedad de las viviendas se relacionan con el hecho
de que en soacutelo 15 (2884) de los hogares visitados el ingreso familiar era fijo El ingreso
variable era reflejo de la actividad laboral del jefe de familia que se desempentildeaba en las
tareas rurales
La presencia de animales se registroacute en 48 casas (9230) En estas viviendas los
animales de compantildeiacutea (perros y gatos) constituiacutean el mayor porcentaje (9615) seguida
por la criacutea de ganado (ovinos y porcinos) (7076) y las aves de corral (6190)
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62 - Caracteriacutesticas de la poblacioacuten estudiada
La poblacioacuten estudiada (n=305) comprendioacute 124 personas de sexo masculino (4065) y
181 de sexo femenino (5934) Entre los varones 71 (5725) perteneciacutean a los grupos
etarios menores de 19 antildeos mientras que entre las mujeres las menores fueron 101
(5580) Los pacientes menores de 14 antildeos fueron 130 (4263) y los mayores de 14
antildeos 175 (5737)
Las personas que residiacutean en el aacuterea de estudio desde su nacimiento fueron 263
(8652) por un periacuteodo de entre 5 y 33 antildeos 30 personas (964) y por un periodo
menor de un antildeo al momento del estudio 12 (384)
La informacioacuten recolectada acerca de los haacutebitos de las personas (considerando un total
de 300 ya que 5 teniacutean 3 antildeos o menos y no podiacutean responder las preguntas incluidas
en el cuestionario) indicoacute que 187 (6233) reconociacutean vegetales silvestres comestibles
en los riacuteos y vegas identificaacutendolos como plantas de berro Entre las personas que
reconocieron el berro 54 (2887) refirioacute que lo comiacutea
La actividad de faena era realizada por 31 familias (5961) Entre las encuestadas 14
(2692) reconociacutean el paraacutesito (ldquouncardquo) y 11 (2115) comentoacute haber visto estas
estructuras parasitarias Este porcentaje se considera sobreestimado debido a que
algunos pobladores dedicados a la criacutea del ganado confunden F hepatica con otros
paraacutesitos hecho observado al momento de las visitas a los corrales de encierro Por otro
lado se confirma el desconocimiento de la parasitosis al comparar los hallazgos
obtenidos en los muestreos donde solo 9 criadores sabiacutean de la presencia del paraacutesito
en los animales de sus corrales siendo 21 los rebantildeos positivos Es de destacar que en
algunos casos se observaron registros de mortandad atribuidos a la fasciolosis en
animales sin tratamientos fasciolicidas
El contacto con animales fue referido por 290 de las personas encuestadas (9508)
siendo 215 en el peridomicilio y 87 en la actividad laboral El contacto de las personas
con ovinos fue indicado por 212 individuos (6950) mientras que con caprinos 174
(5704) con bovinos 122 (40) con mulares 190 (6229) con equinos 55 (1803)
con cameacutelidos 115 (3770) con porcinos 46 (1508) y con aves domeacutesticas 188
(6163) Con animales de compantildeiacutea el contacto fue de 291 encuestados con perros
(9540) y 174 con gatos (5704)
Las ocupaciones maacutes frecuentes en pacientes mayores de 15 antildeos eran la agricultura y
la ganaderiacutea (36) empleados en la administracioacuten puacuteblica (2414) completaacutendose
con estudiantes (685) y amas de casa (6285)
63 - Caracteriacutesticas climaacuteticas y haacutebitat
Las caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute de acuerdo con los diferentes
sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizados se indican
81
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en la Tabla 11 (Veacutease anexo pp 172) Los resultados de los anaacutelisis de las
clasificaciones climaacuteticas de Koeppen y Budyko asiacute como por el iacutendice de aridez de De
Martonne permiten destacar las caracteriacutesticas ambientales aacuteridas (extremas deseacuterticas)
que rodean el valle La influencia del oceacuteano en el clima local estimada por el iacutendice de
continentalidad de Gorczynski indica pequentildeas diferencias entre Tatoacuten y Rio Grande
situadas a diferentes altitudes al este y al oeste de la cadena montantildeosa
Las temperaturas maacuteximas medias y miacutenimas diarias muestran una estacionalidad
marcada con un pico en enero y un descenso hasta los valores miacutenimos en junio-julio
(Veacutease anexo Figura 22 A y C pp 187) La media de los valores de temperatura son
inferiores al umbral de temperatura miacutenima de 10 ordmC reconocido para el desarrollo de F
hepatica en el periacuteodo de junio a julio
El anaacutelisis de la evolucioacuten anual de la precipitacioacuten y la evapotranspiracioacuten potencial
muestra la muy baja disponibilidad de lluvias con un pico pequentildeo en enero-febrero y
precipitacioacuten casi inexistente durante el periacuteodo comprendido desde abril-mayo a octubre-
noviembre (Veacutease anexo Figura 22 B y D pp187) Se presenta aridez durante todo el
antildeo (cuando se utiliza ETP gt 05) (Veacutease anexo Figura 22 D pp 187)
Los resultados indican que los focos de transmisioacuten de fasciolosis en el valle de Fiambalaacute
se presentan en ambientes de hecho aislados que presentan disponibilidad de agua
dependiente solo de los riacuteos que bajan de las sierras vecinas
Las caracteriacutesticas ambientales extremadamente aacuteridas que rodean el valle de Fiambalaacute
asiacute como la muy baja precipitacioacuten anual son sorprendentes y muy diferentes de las
caracteriacutesticas ambientales tiacutepicas que rodean focos de transmisioacuten de la fasciolosis
En la zona de estudio los datos indican una concentracioacuten de todos los factores de
transmisioacuten de la enfermedad en aacutereas pequentildeas donde los humanos y los animales
comparten el suministro de agua Esta situacioacuten de transmisioacuten concentrada recuerda las
caracteriacutesticas epidemioloacutegicas de los focos de transmisioacuten de esquistosomiosis en los
oasis del desierto del Sahara en los paiacuteses africanos (Doumenge et al 1987)
Una transmisioacuten estacional se puede esperar en funcioacuten de la coincidencia puntual de la
temperatura apropiada y la disponibilidad de agua de los riacuteos Dicha estacionalidad es
conocida en las zonas endeacutemicas siguiendo el modelo valle de la transmisioacuten de la
fasciolosis conocida en otros paiacuteses andinos (Mas-Coma 2005)(Valero et al 2012)
7 - RESULTADOS EN SERES HUMANOS
71 - Serologiacutea
711 - Inmunodiagnoacutestico
En la poblacioacuten de personas estudiadas (n=305) se identificaron los casos seroloacutegicos
positivos (n=105) al inmunodiagnoacutestico realizado con el ensayo de ELISA (Tabla 2)
3 M
77
M
Paciente
Edad
Sexo
ELISA 1 (nM)
2009
ELISA 2 (nM)
2010
ELISA 3 (nM)
2011
Coproparasitoloacutegico
Eosinofilia
()
Enzimas y
Bilirrubina
Cliacutenica
Imaacutegenes
Cirugiacutea
(Elevadas) 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
37 F 0490 DAD
0479
0444 8 BD GOTFAL
BD
UH
43
F
0529
0466
Negativo
9
GOTFALB TBD
D
38 F 0377 0503 0440 Negativo BTPT 44 F 0498 0482 Negativo 7 FAL FDAV Colecist
40 M 0479 57 M 0607 64 F 0469 0461 FALPT IDADVH Negativa Positivo 16 F 0456 0433 Positivo 8 PT DDA 39 F 0185 0471 FAL 20 M 0250 0443 FALBD 48 F 0550 0464 Negativo FUDAD 20 F 0438 0448 Negativo 38 F 0459 0450 8 FALBD 77 M 0587 0487 5 FALBD 51 M 0532 0443 5 FDAV 45 F 0481 0633 7 BTBD DAV 63 F 0478 8 BD DA
20
21
22
23
24
46 F 0488 0464 Negativo 10 PT IDAD 46 M 0470 8 GOTGTPF
ALBTD 43 F 0453 DDAV 27 F 0445 Negativo 5 FAL 3 M 0479 Negativo
82
Tabla 2 Resultados de anaacutelisis comparativos seguacuten sexo y edad de la absorbancia de ELISA estudios coproloacutegicos eosinofilia
hepatogramas datos cliacutenicos imaacutegenes y cirugiacuteas sobre casos positivos con diagnoacutestico documentado Valle de Fiambalaacute Antildeos 2009-2011
9 F
11 M
M M M M
8 M 18 M 14 M 63 M
6 M 18 M 9
14
25 0448 Positivo GOTGTPF ALPT 26 0491 Negativo 27 40 F 0555 0435 Negativo 28 84 0486 0485 FAL D 29 24 0574 5 30 65 0445 31 31 0451 32 43 F 0547 0531 Negativo 8 FAL DVH Negativa 33 63 F 0528 0344 Negativo 34 31 F 0431 U 35 24 F 0452 IDAUV 36 0487 Positivo 6 FAL DDAVD Negativa 37 0465 Negativo 5 FAL DAD 38 0166 0454 39 0468 5 GOTGTP DV 40 0204 0483 Negativo 41 0222 0483 DDAUV 42 F 0457 DADV 43 F 0406 0531 44 23 F 0604 0485 FAL V 45 38 F 0492 Negativo DAUVH 46 31 F 0413 Negativo DA 47 12 F 0259 0516 V 48 10 M 0508 Negativo 49 16 F 0151 0489 FAL FDAV 50 16 F 0207 0442 Negativo 5 U 51 22 M 0426 0169 IDAV 52 20 M 0414 53 59 F 0279 0438 U
54 15 F 0152 0437 DAV
55 58 F 0502 0441 Negativo 8 FALPT DFDAUDV H
Positivo
83
M
9 F
F
F
9 7
86 M
8 M 15 M
56 14 M 0464 0428 Negativo FAL 57 19 F 0488 0419 Negativo DAUDV 58 10 F 0496 0444 Negativo FALPT VD 59 25 F 0443 Negativo FAL V 60 82 F 0440 61 16 F 0374 0468 Negativo 5 I 62 36 F 0488 0132 UD Litiasis 63
29
F
0648
0477 GOTGTPF
ALP
DAVD
64 62 F 0464 65 54 F 0451 0364 Negativo 7 FALBT DAVD Positiva 66 54 F 0592 0545 5 VDH 67 32 0566 0445 6 FALPT DAUV Negativa 68 0498 0524 Negativo 8 V 69 0547 FALBDPT DV 70 0490 Negativo 5 DA 71 0530 5 PT H 72 59 F 0543 0485 Negativo FALPT FDAV 73 27 F 0471 FALPT DAV 74 47 F 0491 5 BD FDAV 75 GOTFALB 7 F 0481 6 TPT 76 5 F 0471 F 77 20 F 0442 FALPT DAV 78 21 F 0418 PT UV 79 27 F 0567 Negativo D 80 0430 V 81 0236 0454 0550 8 FAL DAVD 82 30 F 0431 PT DA 83 57 F 0485 0168 Negativo FALPT DAVD 84 79 M 0559 0499 Negativo FAL FH Negativa 85 26 F 0331 0415 Negativo DAUD 86 65 F 0537 FALPT DDAV 87 51 M 0558 0419 Negativo 6 Negativa Colicistec
84
M M
7 F
M M M
15 F 56 M
88 20 0460 DAV
89 46 0426 BT DAU 90 0498 FDAV Negativa 91 49 F 0446 DAV 92 68 F 0441 FAL VD Negativa 93 35 M 0404 0480 PT DAV Negativa 94 85 F 0548 FALPT DAV 95 43 0501 H 96 68 0478 DAD 97 58 0466 VH 98 0445 FALPT DV 99 0430 0482 8 FALPT DH 100 26 F 0441 101 30 M 0407 0480 PT V 102 32 F 0456 0484 0597 Positivo 5 BDPT Negativa 103 9 M 0461 Negativo FALBD DV Negativa 104 65 F 0457 DAUDV 105 19 F 0445 8
85
Color Amarillo grupos etarios menores de 19 antildeos Azul sexo masculino Rojo coproparasitoloacutegico positivo GOT=transaminasa glutaacutemico oxalaceacutetica
GTP=transaminasa glutaacutemico-piruacutevica FAL=fosfatasa alcalina BT=bilirrubina total BD=bilirrubina directa PT=proteiacutenas DA=dolor abdominal D=diarrea
U=urticaria H=hepatalgia F=fiebre V=vomito I=ictericia Colicistec=colecistectomiacutea Naranja imagen compatible Verde cirugiacutea con hallazgos
Valores de referencia eosinoacutefilos 0 a 4 GOT 6-30 UIL GTP 6-35 UIL FAL˃ 200 UIL BD 0 a 03 mgdL BT 03 a 13 mgdL PT 60 a 83 gmdL
Eosinofilos
Normales
Nuacutemero de casos
Seronegativo 174
Seropositivo 71
Total 245
(lt350mm3) Resultado () 870 676a 803
Elevados
Nuacutemero de casos
26
34
60 (˃350mm3) Resultado () 130 324b 197
Total
Nuacutemero de casos
200
105
305
Resultado () 100 100 100
Resultaron a la prueba de ELISA con valor de corte 0410nm 105 sueros positivos
(3442) y 200 seronegativos (6558) (Figura 7) Una persona resultoacute seropositiva en
ensayos realizados en extracciones de 3 antildeos consecutivos 27 personas resultaron
seropositivas en extracciones realizados en 2 antildeos seguidos y 55 en una sola
oportunidad de testeo Quince pasaron de una primera prueba seronegativa a
seropositivo en un segundo estudio Dos partiendo de un primer anaacutelisis seronegativo
resultaron seropositivas en los 2 antildeos subsiguientes y 5 personas pasaron a ser
seronegativas en la tercera extraccioacuten
3442 Negativos
Positivos 6548
Figura 7 Distribucioacuten de personas (n=305) seropositivas y seronegativas en frecuencias
relativas () al inmunodiagnoacutestico del ensayo de ELISA analizadas en el Valle de
Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
712 - Eosinofilia
De los pacientes estudiados se detectaron diferencias estadiacutesticamente significativas en
la proporcioacuten de casos con eosinofilos elevados entre seropositivos y seronegativos
Dentro del grupo de pacientes con serodiagnoacutestico positivo es superior el porcentual con
eosinofilos elevados (Tabla 3)
Tabla 3 Resultados comparativos entre la presencia de eosinofilia y ensayos de ELISA
seropositivos Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Serologiacutea
a y b presentan diferencias estadiacutesticamente significativas
(χ2 = 1636 Gl = 1 p= 0000)
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713 - Proteiacutenas totales enzimas bilirrubina y colesterol
En el grupo de casos positivos al test de ELISA el porcentual con valores elevados de
proteiacutenas totales es significativamente superior (Tabla 4)
No se encontraron diferencias estadiacutesticamente significativas en la proporcioacuten de casos
con bilirrubina total elevada y en la proporcioacuten de casos con colesterol elevado entre
positivos y negativos Tampoco se encontraron diferencias estadiacutesticamente
significativas en la proporcioacuten de casos con valores de GOT y GPT elevados
En el grupo de casos positivos al test de ELISA el porcentual con valores elevados de
FAL es superior pero esta diferencia no es estadiacutesticamente significativa
Tabla 4 Resultados comparativos entre los valores de proteiacutenas totales y anaacutelisis de
ELISA positivos Valle de Fiambalaacute 2009-2011
Serologiacutea
Proteiacutenas
Normales
Nuacutemero de casos Negativo
77 Positivo
28 Total 105
Totales Resultado 566 326a 473
Elevados
Nuacutemero de casos
59
58
117
Resultado 434 674b 527
Total
Nuacutemero de casos
136
86
222
Resultado 1000 1000 1000
a y b presentan diferencias estadiacutesticamente significativas
(χ2 = 1223 Gl = 1 p= 0000)
72 - Geacutenero
Con respecto al geacutenero tanto dentro del grupo de casos seroloacutegicamente positivos como
dentro del grupo de negativos los mayores porcentuales corresponden a mujeres en
general (Tabla 5) El test Chi2 no arrojoacute asociacioacuten estadiacutesticamente significativa entre
geacutenero en relacioacuten a la enfermedad
Se realizoacute un Chi2 para la franja etaria y casos seropositivos y seronegativos que muestra
diferencias significativas Al ser un test no parameacutetrico no se pudo determinar entre que
grupos etarios estaacuten
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Tabla 5 Frecuencia absoluta de casos positivos y negativos al ensayo de ELISA
recombinante para Fasciola hepatica en pacientes agrupados por geacutenero en los
diferentes grupos etarios Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Grupo
Etario Ambos sexos
Hombres Mujeres
+ - + - + -
0-4
2
15
2
6
-
9
5-9 12 39 4 11 8 28
10-14 7 55 4 27 3 28
15-19 10 32 3 14 7 18
20-24 10 12 5 3 5 9
25-29 7 6 - 2 7 4
30-34 7 8 3 5 4 3
35-39 7 9 2 5 5 4
40-44 7 6 2 5 5 1
45-49 7 3 2 - 5 3
50-54 4 3 2 1 2 2
55-59 7 2 3 - 4 2
60-64 5 - 1 - 4 -
65-69 6 4 2 2 4 2
70-74 - 1 - - - 1
75-79 3 2 3 1 - 1
80 y + 4 3 2 - 2 3
TOTAL
105
200
40
82
65
118
(χ2 = 0316 Gl = 1 p˃= 005)
73 - Grupo etarios Considerando en conjunto ambos sexos el grupo etario de 5-9 antildeos fue el que presentoacute
el mayor valor de infeccioacuten (114) como se observa en la Tabla 6 Tambieacuten muestra que
el 305 de los casos positivos tienen 19 antildeos o menos
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Tabla 6 Frecuencia y porcentaje acumulado por grupo etario con el ensayo de ELISA
para Fasciola hepatica Valle de Fiambalaacute Catamarca 2009-2011
Grupo Etario Frecuencia Frecuencia Porcentaje
absoluta Relativa () Acumulado
0-4 2 19 19 5-9 12 114 133
10-14 7 67 200 15-19 11 105 305 20-24 10 95 400 25-29 7 67 467 30-34 7 67 533 35-39 7 67 600 40-44 7 67 667 45-49 7 67 733 50-54 4 38 771 55-59 7 67 835 60-64 5 48 886 65-69 5 48 933 75-79 3 29 962
80 o maacutes 4 38 1000
Total 105 1000
En siacutentesis considerando como variables independientes o explicativas en el modelo
edad sexo resultado de los exaacutemenes cliacutenicos y siacutentomas resultaron significativas
edad nivel de proteiacutenas totales y recuento de eosinofilos
Las diferencias en la proporcioacuten de casos con valores de enzimas elevados entre
positivos y negativos no resultaron estadiacutesticamente significativas GOT (χ2 = 0259 Gl =
1 p˃ 005) GPT (χ2 = 0181 Gl = 1 p˃ 005) y FAL (χ2 = 0577 Gl = 1 p˃ 005)
La proporcioacuten de casos con bilirrubina elevada presentaron ausencia de significacioacuten (χ2
= 0681 Gl = 1 p˃ 005) al igual que el colesterol elevado entre positivos y negativos (χ2
= 0100 Gl = 1 p˃ 005)
Se presenta la clasificacioacuten de los casos seguacuten su ocurrencia y seguacuten la prediccioacuten
realizada en funcioacuten del modelo nulo Se indica queacute porcentaje de veces el modelo
predice correctamente el grupo (positivonegativo) en el cual se encuentra la persona Se
muestra que el 694 de las veces la prediccioacuten del modelo es correcta es decir dada
una persona el modelo predice adecuadamente en queacute grupo va a estar
(Tabla 7)
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Tabla 7 Clasificacioacutena de los casos observados en el Valle de Fiambalaacute 2009-2011
Pronosticado Resultado
Porcentaje
Negativo Positivo correcto Paso Resultado Negativo 96 40 706
Positivo 28 58 674 Porcentaje
global 694
a El valor de corte para determinar el grupo es 0350
Se presentan los estimadores de los paraacutemetros (coeficientes B) sus errores estaacutendar el
estadiacutestico W de Wald (Chi2) sus grados de libertad y su probabilidad asociada las
estimaciones de las odds ratio (Exp B) para las variables predictoras y la constante para
cada modelo (Tabla 8)
Tabla 8 Variables de la ecuacioacuten Valle de Fiambalaacute 2009-2011
B
ET
Wald
gl
Sig
Exp(B)
Paso 1 Edad de extraccioacuten
0035
0008
19324
1
0000
1035
Proteiacutenas
0736
0312
5560
1
0018
2088
Eosinofilos
0945
0379
6224
1
0013
2572
Constante -1945 0305 40570 1 0000 0143
a Variable (s) introducida (s) en el paso 1 Edad Proteiacutenas totales Eosinoacutefilos
74 - Anaacutelisis estadiacutesticos
El odds asociado a la presencia de la enfermedad es el cociente entre la probabilidad de
que ocurra frente a la probabilidad de que no ocurra Odds = p (1-p) siendo p la
probabilidad del suceso
El odds de la edad asociado a la presencia de fasciolosis fue 1035
El odds de la presencia de valores elevados de proteiacutenas es 2088 e indica que las
chances de que un paciente presente la enfermedad se incrementan maacutes de dos veces si
los valores del examen son altos
El odds de la presencia de valores elevados de eosinofilos es de 2752 indicando que las
chances de que el paciente tenga presente la enfermedad aumentan casi tres veces si
existen valores del examen altos
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75 - Anaacutelisis coproparasitoloacutegicos
Con respecto a la materia fecal se identificoacute la presencia de huevos de F hepatica en las
heces de 4 personas siendo negativas las 92 muestras restantes obtenidas La teacutecnica
de sedimentacioacuten raacutepida de Lumbreras (TSR) fue la uacutenica que permitioacute los diagnoacutesticos
positivos
Las otras teacutecnicas coproparasitoloacutegicas utilizadas demostraron la existencia de huevos y
quistes de otros paraacutesitos presentes tanto en nintildeos como en adultos el maacutes frecuente fue
Blastocystis hominis (2934) y en menor proporcioacuten se observoacute la presencia de
Entamoeba coli (869) Giardia lamblia (760) Hymenolepis nana (760)
Microsporidios (543) Entamoeba nana (543) Iodamoeba buumltschlii (326)
Chilomastix mesnili (324) Enterobius vermicularis (217) Isospora belli (108)
Endolimax nana (108) y aacutecaros Se presentaron 8 casos de triparasitismo
76 - Siacutentomas y signos
Se presentan los siacutentomas principales observados tanto en los adultos (n=141) como en
los casos pediaacutetricos (n=33) Se evidencia que los siacutentomas maacutes frecuentes fueron dolor
abdominal (2553) naacuteuseas y voacutemitos (2411) diarrea (1702) fiebre (992)
hepatomegalia (851) ictericia (425) dispepsia (141) En pacientes pediaacutetricos los
maacutes frecuentes fueron voacutemitos (303) dolor abdominal (2424) y diarrea (2121)
El dolor abdominal (n=44) fue el siacutentoma maacutes frecuente en todos los grupos mostrados
anteriormente presentaacutendose sus caracteriacutesticas principales como localizacioacuten maacutes
frecuente en epigastrio (5454) y en hipocondrio derecho (4545) tipo de dolor (el
coacutelico representa el de mayor frecuencia en epigastrio (3636) e hipocondrio derecho
(2838) y otras como la relacioacuten con la ingesta de alimentos (2727) y el nuacutemero de
casos con diferente irradiacioacuten (maacutes frecuente a espalda en el 1590)
77 - Imaacutegenes
Las ecografiacuteas realizadas en terreno permitieron un diagnostico positivo ademaacutes se
observaron 10 hiacutegados y 32 vesiacuteculas normales 3 litiasis 18 pacientes con
hepatomegalia 1 absceso hepaacutetico una paciente embarazada y otra con litiasis renal
78 - Teacutecnicas invasivas
A raiacutez de los estudios realizados durante esta investigacioacuten fueron hallados al momento
de llevar a cabo intervenciones quiruacutergicas ejemplares vivos de F hepatica en dos
pacientes de sexo femenino La primera presentaba el coleacutedoco muy dilatado y de
paredes sumamente engrosadas sin evidencia de litiasis El segundo caso se refiere a la
coexistencia de litiasis y fasciolosis en el coleacutedoco del que se extrajeron estructuras
adultas del paraacutesito mediante una colecistectomiacutea que permitioacute la confirmacioacuten del
ensayo de ELISA realizado A una tercera paciente del valle de Fiambalaacute le fue extraiacutedo
un ejemplar por CPRE con cesta de Dormia
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79 - Descripcioacuten de casos con fasciolosis
Se seleccionoacute un grupo de ocho pacientes que reuniacutean los siguientes criterios de
inclusioacuten
a) Pacientes con coproparasitoloacutegico positivo a F hepatica
b) Pacientes con serologiacutea positiva para F hepatica
c) Pacientes con diagnoacutestico por imaacutegenes positivo
d) Pacientes que en la colecistectomiacutea presentaron ejemplares de F hepatica
Caso 1
Paciente de 64 antildeos sexo femenino soltera de ocupacioacuten ama de casa natural y
procedente de la zona que se presenta con ictericia fugaz dolor abdominal en
hipocondrio derecho de varias semanas de evolucioacuten diarrea y voacutemitos En el
interrogatorio refiere haber comido berro muchos antildeos atraacutes Los exaacutemenes de
laboratorio demostraron gloacutebulos rojos 4380000mm3 hemoglobina 1220 g
hematocrito 355 gloacutebulos blancos 6300mm3 con neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 62 eosinofilos 567mm3 (9) basoacutefilos 0 linfocitos 24
monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 plaquetas 456000mm3 GOT 35 UIL
(VN 12 a 40) GTP 20 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 572 UIL (VN hasta 280 UIL)
bilirrubina total 120 mg bilirrubina directa 039 mg bilirrubina Indirecta 081mg
proteiacutenas 72 gl colesterol 196 mg albuacutemina 41 gl No se realizoacute examen
coproparasitoloacutegico por falta de colaboracioacuten de la paciente El diagnoacutestico se efectuoacute por
medio del test de ELISA para anticuerpos contra F hepatica en el Departamento de
Parasitologiacutea INEI ANLIS Carlos G Malbraacuten en Buenos Aires La serologiacutea de ELISA
presentaba valores de absorbancia ˃0410 nM (valor de corte) (1) 0661 nM (2) 0457
nM (3) 0559 nM (4) 0529 nM absorbancia promedio 0529 nM con resultado positivo
en 2009 y valores de absorbancia (1) 0436 nM (2) 0495 nM absorbancia promedio
0466 nM con resultado positivo en 2010 Se solicitoacute ecografiacutea abdominal que mostroacute
estructura hepaacutetica conservada viacuteas biliares intrahepaacuteticas no dilatadas se informoacute leve
dilatacioacuten del coleacutedoco sin demostrar alteraciones el resto del estudio paacutencreas y bazo
normales Ante la persistencia de la sintomatologiacutea se indicoacute internacioacuten con diagnoacutestico
presuntivo de litiasis vesicular por el estudio que evidenciaba dilatacioacuten de viacuteas biliares
sin evidencia de caacutelculos La paciente fue intervenida quiruacutergicamente encontraacutendose en
viacuteas biliares especiacutemenes adultos de F hepatica (sin litiasis) Tiempo de internacioacuten 14
diacuteas No se efectuoacute tratamiento por no conseguir TCBZ
Caso 2
Mujer 16 antildeos estudios primarios completos sin ocupacioacuten con sintomatologiacutea desde
maacutes de un antildeo caracterizada por dolor abdominal tipo coacutelico naacuteuseas voacutemitos siacutendrome
febril y peacuterdida de peso Los exaacutemenes de laboratorio demostraron formula leucocitaria
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9100mm3 neutroacutefilos en cayado 2 neutroacutefilos segmentados 60 eosinofilos 364mm3
(4) basoacutefilos 0 linfocitos 30 monocitos 4 GOT 18 UIL GTP 21 UIL fosfatasa
alcalina 267 UIL bilirrubina total 096 mgdL bilirrubina directa 023 mgdL bilirrubina
indirecta 073 mgdL proteiacutenas 76 mgdL colesterol 267 mgdL albuacutemina 51mgdL Las
teacutecnicas coproloacutegicas demostraron la presencia de Blastocystis hominis larvas sin
identificar y estructuras compatibles con esporos y la prueba de TSR demostroacute la
presencia de huevos de F hepatica El estudio ecograacutefico fue normal La serologiacutea de
ELISA presentaba siguientes valores de absorbancia 0448 nM (1) 0391 nM (2) 0492
nM (3) 0413 nM (4) 0418 nM (5) 0573 nM (6) 0456 nM (7) absorbancia promedio
0529 nM con resultado positivo en 2009 y valores de absorbancia 0492nM (1) 0466nM
(2) absorbancia promedio 0484nM con resultado positivo en 2010 No se efectuoacute
tratamiento por no conseguir TCBZ
Caso 3
Nintildea de nueve antildeos de edad siacutendrome doloroso abdominal asociado a emesis Foacutermula
leucocitaria 7100mm3 neutroacutefilos en cayado 1 neutroacutefilos segmentados 64
eosinofilos 284mm3 (4) basoacutefilos 0 linfocitos 26 monocitos 4 ceacutelulas de
irritacioacuten linfaacutetica 1 GOT 39 UIL GTP 47 UIL fosfatasa alcalina 330 UIL bilirrubina
total 125 mgdL bilirrubina directa 015 mgdL bilirrubina indirecta 110 mgdL proteiacutenas
totales 72 mgdL colesterol 181 mgdL albuacutemina 47 mgdL Con Telemann se
evidencian huevos de Blastocystis hominis y con la prueba de TSR escasos huevos de
F hepatica El ensayo de Elisa resultoacute en 2010 0596 nM (1) 0441 nM (2) 0359 nM (3)
0402 nM (4) 0420 nM (5) con valores promedios positivos de 0444 nM No se efectuoacute
tratamiento por no conseguirse TCBZ
Figura 8 Imagen microscoacutepica de un huevo de Fasciola hepatica obtenido con la teacutecnica
de Lumbreras en la materia fecal de una paciente de 3 antildeos del valle de Fiambalaacute
Catamarca
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Caso 4
Paciente mujer de 22 antildeos de edad natural y procedente del aacuterea serrana quien acude a
emergencia del Hospital San Juan Bautista San Fernando del Valle de Catamarca
Catamarca con un tiempo de enfermedad de 25 diacuteas caracterizado por cefalea dolor
abdominal agudo voacutemitos y urticaria Refiere que antes de su ingreso inicia un cuadro de
dolor abdominal tipo coacutelico de intensidad moderada desencadenado por la ingesta de
grasas el cual se acompantildea de hiporexia y voacutemitos de contenido alimentario en varias
oportunidades y bilioso en dos oportunidades Acude a la primer consulta en una cliacutenica
privada de la capital provincial presentando coacutelicos biliares recurrentes y fiebre
intermitente Durante el examen fiacutesico se detectoacute hepatomegalia Su vesiacutecula biliar
estaba ausente por colecistectomiacutea practicada a los 15 antildeos aunque presentaba
episodios de coacutelicos biliares por litiasis residual En los frotis y hepatogramas se
observaron 24000 leucocitosmm3 con neutroacutefilos segmentados 71 eosinofilos
2640mm3 (11) linfocitos 13 monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 1 GTP 100
UIL (IR hasta 40 UIL) TGO 64 UIL (IR hasta 42 UIL) fosfatasa alcalina 265 UIL (IR
100-400 UIL) bilirrubina total 092 mgdL bilirrubina directa 017 mgdL bilirrubina
indirecta 075 mgdL proteiacutenas 7 mgdL colesterol 166 mgdL albuacutemina 44 mgdL Las
muestras de materia fecal para realizar los exaacutemenes parasitoloacutegicos resultaron
Telemann positivo a E nana Willis Kato y la prueba de TSR negativas para F hepatica
todas realizadas en 3 oportunidades El ensayo de ELISA para anticuerpos efectuado en
el Departamento de Parasitologiacutea INEI ANLIS Carlos G Malbraacuten en Buenos Aires dio
resultado negativo en dos oportunidades
Por persistencia de la sintomatologiacutea se presentoacute en el Hospital San Juan Bautista Al
examen fiacutesico se encontroacute una paciente en mal estado general en regular estado de
nutricioacuten deshidratada con ictericia moderada de piel El examen del abdomen mostroacute
distensioacuten leve y palpacioacuten hepaacutetica dolorosa e irradiacioacuten a la zona lumbar Resto del
examen fiacutesico sin alteraciones
Los exaacutemenes hematoloacutegicos del ingreso mostraron hemoglobina 10 mgdL hematocrito
31 leucocitos 11000mm3 con desviacioacuten izquierda (11 de abastonados) y eosinofilos
770mm3 (7) Presentoacute elevacioacuten de bilirrubina total en 427 mgdL a predominio directo
(278) fosfatasa alcalina 595 UIL (VN 65-306) y elevacioacuten moderada de enzimas
hepaacuteticas TGO 267 UIL y TGP 482 UIL El tiempo de protrombina estuvo prolongado al
doble del control 266rdquo136rdquo (valor referidovalor control) (INR=226) al igual que el tiempo
de tromboplastina 336rdquo276rdquo Los resultados de glucosa creatinina electrolitos seacutericos
proteiacutenas totales albuacutemina globulinas y amilasa fueron normales
Se realizoacute colangiopancreatografiacutea retroacutegrada endoscoacutepica (CPRE) observando viacuteas
biliares extrahepaacuteticas dilatadas con imaacutegenes filiformes en coleacutedoco distal Se procedioacute
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a efectuar una papilotomiacutea retroacutegrada endoscoacutepica con barrido instrumental en canastilla
de Dormia extrayendo 3 paraacutesitos adultos vivos de F hepatica No se efectuoacute
tratamiento por no conseguir TCBZ
Figura 9 Ejemplar de F hepatica extraiacutedo del coleacutedoco utilizando CRTE en una
paciente de 22 antildeos en el Hospital San Juan Bautista Catamarca 2012
Caso 5
Paciente pediaacutetrico de ocho antildeos de edad sexo masculino Alumno de escuela primaria
Sin presencia de siacutentomas Foacutermula leucocitaria 4900 mm3 neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 64 eosinofilos 196mm3 (4) basoacutefilos 0 linfocitos 26
monocitos 4 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 1 GTP 47 UIL (IR hasta 40 UIL) TGO 39
UIL (IR hasta 42 UIL) fosfatasa alcalina 330 UIL (IR 100-400 UIL) bilirrubina total 125
mgdL bilirrubina directa 015 mgdL bilirrubina indirecta 110 mgdL proteiacutenas 72
mgdL colesterol 181 mgdL albuacutemina 47 mgdL La serologiacutea de ELISA presentaba
valores de absorbancia ˃410 nM (1) 0495 nM (2) 0447 nM (3) 0551 nM (4) 0627 nM
(5) 0383 nM (6) 0421 nM Absorbancia promedio 0487 nM con resultado positivo en
2010 La materia fecal examinada con la prueba de TSR confirmoacute la presencia de 14
huevos de F hepatica Sin tratamiento
Caso 6
Paciente mujer de 58 antildeos de edad casada de procedencia rural de profesioacuten
enfermera Dispepsia desde la nintildeez Consumiacutea berro cosechado a orillas del rio del lugar
y tambieacuten bebiacutea del agua del rio Prurito aleacutergico a repeticioacuten (tratado por dermatoacutelogo
quien antildeos atraacutes habiacutea diagnosticado Parasitosis Intestinal)
Por sus molestias de dolor abdominal en hipocondrio derecho tipo coacutelico acompantildeado de
naacuteuseas se automedicaba con antiespasmoacutedicos Meses antes de su consulta se
despertoacute de madrugada presentando voacutemitos de contenido alimentario y bilioso
concomitantemente tuvo escalofriacuteos y fiebre que cedieron momentaacuteneamente con
paracetamol Horas maacutes tarde persisten los siacutentomas y se adicionan ictericia hiporexia
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coluria prurito y paacutepulas que se presentaron primero en el cuero cabelludo y luego se
generalizaron a tronco y extremidades Fue atendida por 3 facultativos los cuales
indicaron varios exaacutemenes auxiliares una ecografiacutea que reportoacute la presencia de una
colecistopatiacutea no calculosa y un examen de orina que mostroacute leucocituria y geacutermenes
gramnegativos abundantes por lo que le prescribieron norfloxacina ademaacutes de ranitidina
y clorfeniramina Con este tratamiento se evidencioacute disminucioacuten de la intensidad del
prurito y desaparicioacuten de las paacutepulas la fiebre cedioacute aproximadamente a los 7 diacuteas la
condralgia disminuyoacute de intensidad pero persistiacutea al igual que el resto de los siacutentomas
por cuya razoacuten y relaciones familiares acudioacute a la emergencia del Hospital Regional de La
Rioja ldquoEnrique Vera Barrosrdquo presentaacutendose a consulta en octubre de 2012 con
sintomatologiacutea digestiva similar a la que padeciacutea previamente (epigastralgiacutea distensioacuten
abdominal posprandial coluria marcada y acolia)
Los hallazgos maacutes importantes del examen fiacutesico fueron fiebre precedida de escalofriacuteos
ictericia dolor a la palpacioacuten del hipocondrio derecho y puntildeopercusioacuten lumbar positiva
bilateral
Se realizaron exaacutemenes de laboratorio cuyos resultados fueron hemograma 11800mm3
gloacutebulos blancos 6300mm3 neutroacutefilos en cayado 2 neutroacutefilos segmentados 55
eosinofilos 708mm3 (6) basoacutefilos 0 linfocitos 34 monocitos 3 ceacutelulas de
irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT 17 UIL (VN 12 a 40) GTP 24 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa
alcalina 386 UIL (VN hasta 280 UIL) bilirrubina total 125 mgdL bilirrubina directa 099
mgdL bilirrubina indirecta 026 mgdL proteiacutenas totales 61 mgdL colesterol 226 mgdL
albuacutemina 33 mgdL
Una ecografiacutea de las viacuteas biliares sugirioacute la existencia de un caacutelculo enclavado en el
tercio distal del coleacutedoco Se plantearon las siguientes posibilidades diagnoacutesticas
infeccioacuten del tracto urinario y litiasis coledociana complicada con colangitis Recibioacute
gentamicina 80 mg Ev tid clindamicina 600 mg EV tid
La serologiacutea de ELISA presentoacute valores de absorbancia (1) 0596 nM (2) 0586 nM (3)
0404 nM (4) 0425 nM absorbancia promedio 0503 nM con resultado positivo en 2010 y
valores de absorbancia (1) 0338 nM (2) 0541 nM (3) 0440 nM absorbancia promedio
0441 nM en 2011 El estudio parasitoloacutegico seriado con la prueba de TSR no reportoacute la
presencia de huevos de F hepatica
Despueacutes de hospitalizada fue intervenida quiruacutergicamente con el diagnoacutestico
preoperatorio de coledocolitiasis Se realizoacute una colecistectomiacutea mixta exploracioacuten de
viacuteas biliares con litiasis residual y se dejoacute drenaje de Kehr Los hallazgos histopatoloacutegicos
macroscoacutepicos de la vesiacutecula biliar mostraron una pared edematosa congestiva
conservando espesor y elasticidad mucosa presentando aspecto atroacutefico con superficie
reticulada color verde paacutelida revestida por exudado fibrinoide espeso Se constata la
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presencia de una estructura lanceolada plana elaacutestica de superficie lisa que mide 13 x
1 cm con pequentildea ventosa en uno de sus polos Microscoacutepicamente se observa la pared
de vesiacutecula biliar con grados variables de reaccioacuten inflamatoria croacutenica representados por
focos de supuracioacuten y acuacutemulos de plasmocitos linfocitos y eosinofilos en la mucosa
discreta proliferacioacuten fibrinosa acompantildeada por infiltracioacuten de ceacutelulas polimorfonucleares
Diagnoacutestico histopatoloacutegico Fascioliasis hepaacutetica Colecistitis croacutenica supurada
(habilitada por paraacutesitos en su luz) Durante los 45 diacuteas posteriores al alta fue medicada
con Praziquantel
Caso 7
Mujer de 54 antildeos de edad que a la consulta refiere haber tenido episodios febriles de
375 a 38 degC anorexia y dolor en hipocondrio derecho de pocos diacuteas de evolucioacuten
Voacutemitos y hepatalgia Los exaacutemenes de laboratorio maacutes significativos mostraron gloacutebulos
rojos 4410000mm3 hemoglobina 1230 g hematocrito 43 Foacutermula leucocitaria
6700 mm3 neutroacutefilos en cayado 1 neutroacutefilos segmentados 52 eosinofilos 469mm3
(7) basoacutefilos 0 linfocitos 37 monocitos 3 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT
20 UIL (VN 12 a 40) GTP 17 UIL (VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 252 UIL (VN hasta 280
UL) bilirrubina total 141mgdL bilirrubina directa 025mgdL bilirrubina indirecta 116
mgdL proteiacutenas 81 mgdL colesterol 262 mgdL albuacutemina 47 mgdL
Reiterados exaacutemenes parasitoloacutegicos de materia fecal en fresco y seriados fueron
negativos La serologiacutea para F hepatica con el ensayo de ELISA resultoacute positiva en el
antildeo 2010 con los siguientes valores 0539 nM (1) 0377 nM (2) 0427 nM (3) 0334 nM
(4) 0432 nM (5) 0594 nM (6) y un resultado promedio 0451 nM
Fue seleccionada para practicarle una ecografiacutea abdominal que mostroacute una estructura
hepaacutetica conservada viacuteas biliares intrahepaacuteticas no dilatadas vesiacutecula ausente por
colecistectomiacutea y leve dilatacioacuten del coleacutedoco sin demostrar alteraciones el resto del
estudio paacutencreas y bazo normales Se observoacute pequentildea imagen de aspecto filiforme de
aproximadamente 1 cm de largo y se diagnosticoacute estructura compatible con F hepatica
Figura 10 Imagen ecograacutefica hepaacutetica con hepatomegalia Se observa aumento de la
ecogenicidad y una estructura de aspecto filiforme
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Caso 8
Sexo femenino 32 antildeos de edad ama de casa En el interrogatorio comenta haber
comido berro de los riachos en la zona casi todos los antildeos Al ser un caso con tres
estudios seroloacutegicos previos positivos y materia fecal negativa a la presencia de huevos
de F hepatica se le practica una ecografiacutea abdominal con resultado negativo
El coproloacutegico con la teacutecnica de Telemann demostroacute la presencia de Blastocystis hominis
y luego de varias repeticiones la teacutecnica de Lumbreras permitioacute el hallazgo de huevos de
F hepatica en el antildeo 2011 Los frotis y hemogramas presentaron los siguientes
resultados hematocrito 44 foacutermula leucocitaria 7700mm3 neutroacutefilos en cayado 1
neutroacutefilos segmentados 47 eosinofilos 385mm3 (5) basoacutefilos 0 linfocitos 40
monocitos 7 ceacutelulas de irritacioacuten linfaacutetica 0 GOT 23 UIL (VN 12 a 40) GTP 11 UIL
(VN 3 a 40) fosfatasa alcalina 290 UIL (VN hasta 280 UIL) bilirrubina total 106 mgdL
bilirrubina directa 038 mgdL bilirrubina indirecta 01 mgdL proteiacutenas totales 71 mgdL
colesterol 163 mgdL albuacutemina 42 mgdL
El empleo de procatepsina L1 durante tres antildeos consecutivos arrojoacute para la serologiacutea de
ELISA los siguientes resultados valores de absorbancia (1) 0476 nM (2) 0366 nM (3)
0551 nM (4) 0431 nM absorbancia promedio 0456 nM con resultado positivo en 2009
Valores de absorbancia (1) 0517 nM (2) 0580 nM (3) 0405 nM (4) 0457 nM (5) 0462
nM absorbancia promedio 0484 nM con resultado positivo en 2010 y (1) 0623 nM (2)
0570 nM absorbancia promedio 0597 nM con resultado positivo en 2011
8 RESULTADOS EN ANIMALES
81 - Estudios coproloacutegicos
811 - Prevalencia por exaacutemenes coproloacutegicos
La cantidad de muestras de materia fecal de distintas especies animales analizadas
permitioacute conocer que la prevalencia promedio de fasciolosis animal es 2674
(2881077) (Tabla 9)
Tabla 9 Prevalencia de F hepatica en diferentes especies de animales domeacutesticos Valle
de Fiambalaacute Catamarca Antildeos 2009-2011
Especie Positivos Total de animales Prevalencia Ovinos 114 322 3958 Asnos 56 192 1954 Llamas 53 210 1840 Caprinos 38 197 1319 Bovinos 18 72 625 Equinos 6 46 208 Porcinos 3 38 104
TOTAL 288 1077 10000 (χ2 = 21643 gl = 6 significancialt= 0000)
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Las diferencias estadiacutesticamente significativas se presentan entre ovinos-llamas
(p=0016741) ovinos-caprinos (p=0000099) ovinos-equinos (p=0002185) ovinos-
porcinos (p=0000782) asnos-equinos (p=0038298) y asnos-caprinos (p=0024745)
812 - Hallazgos de huevos de otros paraacutesitos gastrointestinales
Los resultados obtenidos indican ademaacutes la presencia en el ganado ovino del valle de
Fiambalaacute de coccidios y nematodes gastrointestinales Eimeria sp Haemonchus
contortus Trichostrongylus sp Nematodirus sp y Trichuris ovis
82 - Recuperacioacuten de ejemplares de F hepatica
De los hiacutegados de animales inspeccionados durante el proceso de faena (n=11) se
recuperaron en total 398 trematodos adultos Todos los paraacutesitos colectados se
encontraban sobre los 100 diacuteas post-infeccioacuten El nuacutemero de paraacutesitos recobrados en las
diferentes especies fueron 206 en ovinos 128 en cameacutelidos y 64 en bovinos
Al revisar los hiacutegados que presentaban fasciolosis croacutenica se observoacute una reaccioacuten
orgaacutenica con lesiones visibles de fibrosis hepaacutetica como consecuencia de la fase
migratoria y colangitis hiperplaacutesica por la presencia de los vermes adultos en los
conductos biliares (Veacutease anexo Figura 23 pp188) Tambieacuten se encontraron
agrandados los noacutedulos linfaacuteticos engrosamiento de los conductos y la superficie
presentaba consistencia dura al tacto en gran parte del oacutergano y sus bordes En el hiacutegado
del ejemplar bovino se observoacute una reaccioacuten orgaacutenica que produjo una intensa reaccioacuten
tisular mucho maacutes manifiesta que en los ovinos llamas y caprinos
La erosioacuten de la mucosa ocasionada por la actividad de los ejemplares adultos de F
hepatica en los conductos biliares provocoacute una reaccioacuten inflamatoria organizada en una
fibrosis peribiliar (Veacutease anexo Figura 24 pp188) El movimiento de los vermes extendioacute
la fibrosis a casi todo el aacuterbol biliar La colangitis hiperplaacutesica se presentoacute como resultado
del traumatismo originado por los trematodos adultos en la mucosa de los conductos
biliares Ante la extensa erosioacuten y necrosis de la mucosa biliar se desarrolloacute una intensa
reaccioacuten inflamatoria que interesoacute a la laacutemina propia adyacente La compresioacuten
extriacutenseca del canal biliar principal por las venas colaterales dilatadas junto con la
fibrosis pericoledocal causada por el proceso inflamatorio provocoacute trombosis portal
conduciendo a la dilatacioacuten de los conductos biliares intrahepaacuteticos hecho que permitioacute
observar en 3 ocasiones la formacioacuten de piedras biliares secundarias y en 2 la presencia
de liacutequido en el peritoneo de las ovejas
83 - Morfologiacutea microscoacutepica de F hepatica
Las mediciones realizadas dieron los siguiente datos promedios longitud del cuerpo
2438 plusmn 223 (mm) ancho del cuerpo 1044 plusmn 129 (mm) razoacuten LCAC 237 plusmn 034
longitud del cono 261 plusmn 030 ancho del cono 343 plusmn 046 (mm) aacuterea de la ventosa oral
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041 plusmn 007 (mm) aacuterea de la ventosa ventral 110 plusmn 036 (mm) aacuterea de distancia VO-VV
214 plusmn 022 (mm) Todas presentaban un cuerpo con forma de hoja aplanado de dorsal a
ventral con el cono cefaacutelico (Figura 11) muy visible situado en la parte anterior del cuerpo
del paraacutesito Datos comparativos se presentan en la Tabla 12 (Veacutease anexo pp 173)
A B
Figura 11 A y B Imaacutegenes microscoacutepicas de la estructura morfoloacutegica del cono cefaacutelico
de Fasciola hepatica obtenidas de un animal bovino faenado en el Valle de Fiambalaacute
Nota A Cono cefaacutelico VO ventosa oral I ciego intestinal F faringe VV cara ventral Detalle del
cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) aumento 4x B ventosa oral (297x)
Ademaacutes de estas caracteriacutesticas la ventosa oral redondeada se observoacute en el veacutertice del
cono seguido por la faringe muscular el estoacutemago y el esoacutefago bifurcado en dos ciegos
intestinales entre los que surgen las ramas secundarias el ciego intestinal se presenta
extendido hasta el extremo anterior del cuerpo (Figura 12 A) La ventosa ventral se
encuentra en la regioacuten media del cuerpo cerca de los aparatos reproductores y su
tamantildeo era maacutes grande que la ventosa oral En la Figura 12 B se observan niacutetidamente
las espinas ubicadas en el cono cefaacutelico
A B
Figura 12 A y 12 B Estructuras morfoloacutegicas de Fasciola hepatica halladas en un animal
bovino del Valle de Fiambalaacute Argentina observadas al microscopio
Nota (A) Cono cefaacutelico VO ventosa oral F faringe C cirro VV cara ventral I ciego intestinal
se extiende en la parte anterior y terminal del cuerpo Aumento 4x (B) Detalle del cono cefaacutelico
mostrando las espinas magnitud 120x
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En las muestras analizadas el sistema reproductor femenino estaba formado por un
ovario ramificado oviducto y el uacutetero lleno de huevos (Figuras 13 A B C) Las glaacutendulas
vitelinas muy ramificadas se ubicaban en posicioacuten lateral del cuerpo y extendidas desde
la regioacuten de la ventosa ventral al extremo posterior del cuerpo La glaacutendula de Mehlis que
se encuentra cerca del ovario en la parte media del cuerpo fue faacutecilmente observable El
sistema reproductor masculino presenta los testiacuteculos ramificados situados uno debajo
del otro sin llegar a la regioacuten posterior o a los lados del cuerpo teniendo las glaacutendulas
vitelinas como liacutemites Se observoacute cerca de la ventosa ventral la bolsa del cirro bien
formada (Figura 14 B)
A B C
Figura 13 A B y C Uacutetero con huevos de un espeacutecimen de Fasciola hepatica obtenido de
la necropsia de un animal bovino en el Valle de Fiambalaacute Aumento 10x
Nota (A) Ovario ramificado y oviducto (B) uacutetero lleno de huevos (C) Uacutetero lleno de huevos
(flechas)
Todos los ejemplares presentaron el tegumento cubierto de espinas (Figuras 14 A)
dirigidas hacia la parte posterior del cuerpo y se pueden comparar con las de otras
regioacutenes observadas (Veacutease anexo Figuras 25 26 27 y 28 pp189-190)
A B
Figura 14 Detalle del tegumento de una Fasciola hepatica mostrando las espinas
Nota (A) Las flechas indican las espinas aumento 10x (B) bolsa de cirro aumento 20x
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831 - Microscopiacutea de contraste por interferencia diferencial
Esta teacutecnica permitioacute visualizar las espinas en el tegumento de los todos especiacutemenes
recolectados (Figuras 15 A B y C) Los ejemplares del Valle de Fiambalaacute presentaban el
cuerpo cubierto con espinas pero en menos nuacutemero que los otros ejemplares
observados
A B C
Figura 15 Microfotografiacuteas tomadas de estructuras morfoloacutegicas de una F hepatica de
ganado bovino del valle de Fiambalaacute observadas con microscopio de contraste por
interferencia diferencial
Nota A y B Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) aumentos 10x y 20x
C Espinas con mayor resolucioacuten Noacutetese el aspecto tridimensional
84 - Variabilidad geneacutetica intraespeciacutefica
El anaacutelisis de 16 secuencias del gen CO1 de 309 bases de longitud cada una totalizando
4944 bases mostroacute una topografiacutea de agrupamiento que indica que la secuencia
proveniente de la muestra de paraacutesito adulto de la zona denominada FhCO1-CAT-adult
corresponde al grupo FhAJ6280346 FhJF82467124 FhAJ628035 FhGQ231551
Fh628039 (Veacutease anexo Figura 29 pp 191) Este resultado se encuentra en
concordancia con el hecho de que la identidad de las secuencias proveniente del adulto
de F hepatica posee una identidad alta con dichos haplotipos (994 a 990 de identidad
nucleotiacutedica)
85 - Resistencia al triclabendazol
Se observa que las muestras expusieron patrones diferentes de amplificacioacuten al azar de
ADN polimoacuterfico por lo que fue posible evaluar la presencia de variaciones geneacuteticas
entre las cepas de una misma especie y distinguir entre cepas de trematodos TCBZ-
susceptibles calle 2 (cepa Cullompton) y TCBZ-resistentes calle 3 (cepa Sligo) (Figura
16) donde no se detectaron estos cambios geneacuteticos en la moleacutecula de tubulina
revelando una significativa divergencia geneacutetica entre especies demostrado por las
diferencias entre las bandas generadas por las especies de la poblacioacuten de Cajamarca
Peruacute Chubut Argentina y las procedentes de la Puerta de Tatoacuten en el valle de Fiambalaacute
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1 2 3 4 5 6 7 8
Figura 16 Patrones de amplificacioacuten por RAPD PCR de Fasciola hepatica aisladas de
hiacutegados obtenidos para la deteccioacuten de cepas resistentes a Triclabendazol (TCBZ)
comparados con las de otras zonas
Nota Obseacutervese que el patroacuten de bandeo en la calle 2 (cepa Cullompton sensible) y en la calle 3
(cepa Sligo resistente) son diferentes Desde la calle 4 en adelante son ejemplares procedentes
de Cajamarca Peruacute (4) Quebrada Grande (5) Casa Grande (7) y provincia de Chubut (8) La
mayoriacutea corre igual a las sensibles (2) pero la muestra de La Puerta (6) corre como la cepa
resistente (3)
9 RESULTADOS EN EL HOSPEDADOR INTERMEDIARIO DE F hepatica
91 Identificacioacuten de los caracoles
Las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla de los ejemplares recolectados en las
diferentes oportunidades coinciden con las descripciones de las familias Lymnaeidae
(n=2354 8686) Physidae (n=240 885) Chilinidae (n=81 298) y Planorbidae
(n=35 129) Los resultados moleculares revelaron la presencia de dos especies de
limneidos L neotropica y L viator De las muestras analizadas 26 (6842) fueron
identificadas molecularmente como L neotropica y 12 (3158) como L viator Se
comproboacute que ambas especies comparten las mismas vegas siendo el primer registro
para el NOA de L neotropica
92 Medicioacuten de moluscos
La coexistencia de las dos especies L neotropica y L viator en las vegas del valle de
Fiambalaacute proporcionoacute la posibilidad de un estudio de morfometriacutea comparativo para
evaluar si estas especies de vectores se pueden diferenciar anatoacutemicamente (Tabla 10)
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Tabla 10 Comparacioacuten de las mediciones de conchillas de limneidos entre las
poblaciones naturales de L viator y L neotropica colectadas en el valle de Fiambalaacute
2009-2011
Especie de limneido L viator L neotropica
Lugar y nuacutemero de especiacutemenes estudiados
Valle de Fiambalaacute (n = 12) Valle de Fiambalaacute (n = 26)
Valores extremos
miacutenimo y
Media (plusmn
desviacuteo estaacutendar SD)
Valores extremos
miacutenimo y
Media (plusmn
desviacuteo estaacutendar SD)
Caracteriacutestica de la conchilla maacuteximo maacuteximo
Largo (SL) 562-1085 921 (plusmn 152) 552-918 749 (plusmn 089) Ancho maacuteximo (SW) 311-579 488 (plusmn 084) 313-501 410 (plusmn 047) Largo de la apertura (AL) 297-605 473 (plusmn 083) 314-664 385 (plusmn 040) Ancho de la apertura (AW) 190-331 273(plusmn 042) 188-274 228 (plusmn 023) Longitud de la uacuteltima espira (LSL) 452-831 699 (plusmn 106) 442-893 576 (plusmn 060) Aacutengulo de la espira (SSA) 4130deg-5491deg 4704deg (plusmn 435) 3302deg-5468deg 4509deg (plusmn 592) SLSW ratio 167-202 189 (plusmn 010) 169-198 183 (plusmn 008) SLAL ratio 178-211 195 (plusmn 010) 175-210 194 (plusmn 010) SLLSL ratio 124-137 131 (plusmn 004) 123-138 130 (plusmn 004)
Nota Se incluye el rango con los extremos miacutenimo y maacuteximo y la media (plusmn desviacioacuten estaacutendar
entre pareacutentesis) Las mediciones se presentan en miliacutemetros (excepto el aacutengulo del espiral que es
en grados) n = Nuacutemero de especiacutemenes medidos
La conchilla de ambas especies es de color marroacuten a marroacuten claro coacutenica alargada de
paredes delgadas por lo general con 4 verticilos regulares convexos y hasta 55 verticilos
en los especiacutemenes maacutes largos La aguja es maacutes o menos acentuada o corta con un
aacutepice maacutes obtuso Las liacuteneas de crecimiento y el ombligo son poco pronunciadas La
escultura espiral es muy deacutebil y no se ve faacutecilmente La abertura es oval y casi toda
circular con peristoma delgado La forma de la conchilla de L viator y L neotropica es
muy similar tanto como el nuacutemero de espiras aunque los ejemplares de L viator a veces
pueden aparecer algo maacutes delgados (Figura 17)
La comparacioacuten de las mediciones de la conchilla y ratios (Tabla 10) muestra que la
relacioacuten del ancho y la maacutexima longitud de la conchilla se superpone en las dos especies
y por lo tanto la variabilidad de este paraacutemetro no se pudo utilizar para la diferenciacioacuten
de estas especies Un problema similar aparece en todos los demaacutes paraacutemetros de la
conchilla con excepcioacuten de la longitud media que no soacutelo alcanza un mayor largo
maacuteximo evidente sino tambieacuten una longitud maacutes grande de la conchilla en L viator en
comparacioacuten con L neotropica (1085 y 921 vs 918 y 749 mm)
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C D
Figura 17 Conchillas de L viator A) vista ventral B) vista dorsal escala 5 mm y
conchillas de L neotropica C) vista ventral D) vista dorsal escala 4 mm Especiacutemenes
colectados en vegas del valle de Fiambalaacute 2011
93 - Mantenimiento en el laboratorio
Se observoacute que los moluscos respondieron favorablemente a la alimentacioacuten con lechuga
y al cambio cada tres diacuteas del agua donde se encontraban lograacutendose el mantenimiento
de 180 caracoles del geacutenero Lymnaea criados en el laboratorio de los que se obtuvo el
desarrollo de 60 ejemplares que realizaron la puesta de masas de ovisaco dando lugar a
la eclosioacuten de 250 limneidos vivos
931 - Identificacioacuten de gasteroacutepodos infectados
Mediante el aplastamiento de los cuerpos de moluscos entre dos portaobjetos y la
posterior observacioacuten microscoacutepica de las formas intermedias de F hepatica se logroacute la
identificacioacuten de moluscos infectados 286 (13453) en su haacutebitat natural
9311 - Infeccioacuten del hospedador intermediario
La infeccioacuten plumiracidial de los caracoles en el laboratorio permitioacute observar la presencia
de los distintos estadios larvarios De los 70 limneidos infectados se sacrificaron 14
ejemplares obteniendo formas de esporocistos en 2 moluscos redias en otros 2 y
cercariacuteas en 2 ejemplares maacutes obteniendo una eclosioacuten de larvas del 4285 (614) Se
logroacute la visualizacioacuten de la emisioacuten de metacercarias de los moluscos mantenidos vivos
en las hojas de la vegetacioacuten con la que se alimentaban y en las paredes de los
recipientes donde se los dispuso
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932 - Identificacioacuten molecular de la infeccioacuten
9321 - PCR de Infeccioacuten
De las muestras obtenidas en la vega de Tatoacuten (n=120) y analizadas para verificar su
infeccioacuten con F hepatica en el Instituto Malbraacuten se diagnosticaron 3 moluscos
infectados (25) mostrando amplificacioacuten en el gel de electroforesis (Figura 18)
Figura 18 Liacutemite de deteccioacuten del ensayo de PCR por electroforesis en gel de agarosa
de los productos de amplificacioacuten utilizado como plantilla de ADN para la deteccioacuten de F
hepatica en muestras de limneidos del Valle de Fiambalaacute
Nota Calle M marcador de tamantildeo molecular (100 escalera pb) calles 1 25 ng de ADN de F
hepatica calle 2 mezcla de reaccioacuten calles 3-12 plantilla de ADN a partir de 10 especiacutemenes de
muestra de 1 evidenciando en la calle 3 amplificacioacuten calles 13-19 ejemplares de muestra 2 de la
mezcla de reaccioacuten
94 - Caracterizacioacuten molecular de limneidos
Los ADNr nucleares ITS-2 y ITS-1 el ADNmt 16S y los datos de la secuencia de
nucleoacutetidos cox1 reportados en esta tesis estaacuten disponibles en las bases de datos
GenBanktrade EMBL y DDBJ bajo los nuacutemeros de acceso indicados en la Tabla 13 (Veacutease
anexo pp 174)
941 - L neotropica
9411 - Marcadores moleculares
- ADNr ITS-2 Todas las muestras del valle de Fiambalaacute presentan la misma secuencia
con una longitud de 417 pb y 5683 de contenido de GC Cuando se compara con las
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ITS-2 de L neotropica haplotipo Lneo-H1 (AM412225) de la localidad tipo en el Peruacute no
se pudo encontrar diferencia en un nucleoacutetido El haplotipo Lneo-H2 de Venezuela
(JF514089) difiere de la secuencia de Argentina en la falta de una repeticioacuten de
microsateacutelites (AT) en las posiciones 402 a 403 y en una mutacioacuten en la posicioacuten 350 de
la secuencia de alineacioacuten de ambos haplotipos ITS-2 Otras cepas argentinas de L
neotropica disponibles en las bases de datos (KJ425597 = 415 pb KJ425598 = 415 pb
KJ425596 = 414 pb) soacutelo muestran algunas diferencias (deleciones) en el extremo 3 de
los ITS-2 aunque estas secuencias parecen incompletas en comparacioacuten con los
haplotipos completos descritos anteriormente para esta especie y por lo tanto deberaacute ser
revisada
- ADNr ITS-1 Un nuevo haplotipo para L neotropica se ha detectado en las vegas del
valle de Fiambalaacute Todas las muestras estudiadas presentaron los mismos ITS-1 con
secuencia de 535 pb y un contenido de GC 5645 Este nuevo haplotipo estaacute descrito
aquiacute como Lneo-HB Diferencias con el haplotipo Lneo-HA estaacuten a soacutelo dos inserciones
en la regioacuten poli-A en el extremo 3 (posiciones 512-529) siendo esta regioacuten de 16 o 18
consecutivo A en Lneo-HA y Lneo-HB respectivamente Los resultados BLASTN
muestran homologiacuteas del 98 con otras secuencias de L neotropica obtenidas en
Argentina (KJ425594 = 528 pb KJ425590 = 528 pb KJ425591 = 527 pb KJ425595 =
525 pb KJ425593 = 523 pb) y curiosamente con una de L viator (JF960165 = 533 pb)
las diferencias (indeles) aparecen de nuevo en el extremo 3 del espaciador ITS-1 Estas
otras secuencias parecen ser incompletas en comparacioacuten con los haplotipos completos
descritos anteriormente para esta especie y por lo tanto deberaacute ser revisada
9412 - Marcadores mitocondriales
- ADNmt 16S Soacutelo se detectoacute un haplotipo en las muestras estudiadas de las
poblaciones identificadas como L neotropica Esta secuencia parcial fue 435 pb de
longitud presenta un sesgo AT contenido de 6965 y resultoacute ser ideacutentica a la ya
encontrada en esta especie de limneido Lneo-16SA y que tambieacuten se informoacute en el
aacuterea endeacutemica de fasciolosis humana de Cajamarca Peruacute (HE610433) Con una
secuencia de 439 pb de largo de alineacioacuten de este haplotipo (Lneo-16SA) con otra L
neotropica aislada (de 429 a 431 pb) disponibles en GenBank aparecen 12 posiciones
variables la mayoriacutea de ellas se generan por el NtS1 aislado de Argentina (JN872471)
cuyas mutaciones (la mayoriacutea de ellos siempre A) deberaacute ser revisada (Veacutease anexo
Tabla 14 pp 175)
- ADNmt cox1 Todos los especiacutemenes colectados identificados como L neotropica
mostraron ideacutentica secuencia del fragmento de 672 pb cox1 y sesgada AT contenido de
6979 Esta secuencia se comparoacute con los 4 haplotipos cox1 descritos hasta hoy para
L neotropica y ha demostrado ser diferente en soacutelo una mutacioacuten en la posicioacuten 9 de la
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alineacioacuten con el haplotipo descrito previamente Lneo-cox1a de la localidad tipo de esta
especie (AM494008) Del mismo modo una mutacioacuten en la posicioacuten 375 es la uacutenica
diferencia con el haplotipo Lneo-cox1b informado de Mendoza Argentina Las
diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos con todos los haplotipos L neotropica (672 pb
de longitud) y otros aislamientos (655 pb de largo) que muestran secuencias muy
similares de acuerdo a los resultados de BLASTN se detallan en la Tabla 15 (Veacutease
anexo pp 176)
942 - L viator
9421 - Marcadores ribosomales
- ADNr ITS-2 Todos los ejemplares presentan los mismos ITS-2 de secuencia de 436 pb
y 5367 de contenido de GC Cuando se compara con los haplotipos ITS-2 de L viator
disponibles en GenBank la maacutes parecida a este haplotipo es Lvia-H2 (JN051366 de
Chile) siendo solamente maacutes corta en longitud debido a sitios polimoacuterficos
correspondientes a 8 indeles relacionados a un nuacutemero diferente de repeticiones en los
microsateacutelites GCTT y GCTC Estos microsateacutelites son (GCTT)2 (GCTC)1 en el valle de
Fiambalaacute mientras que (GCTT)4 y (GCTC)1 en Casa Blanca Chile El coacutedigo H3 se ha
atribuido a este nuevo haplotipo (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) Otras secuencias con
el haplotipo Lvia-H1 y otros aislamientos de L viator se muestran incompletos en el
extremo 3 del espaciador ITS-2 y se presentan en la Tabla 16 (Veacutease anexo pp 177)
- ADNr ITS-1 Todos los limneidos mostraron ideacutentica secuencia de ITS-1 de 570 pb y
5403 de contenido de GC Esta secuencia fue muy similar al haplotipo de L viator de
Chile (Lvia-HB JN051368) que difiere en soacutelo 5 sitios polimoacuterficos correspondiente a
una mutacioacuten y una repeticioacuten tetranucleotide (ATTG) El coacutedigo de HC se ha atribuido a
este nuevo haplotipo Diferencias detalladas con haplotipos de L viator HA de Argentina
y de Chile HB asiacute como con otros secuencias de L viator se muestran incompletas en el
extremo 5 del ITS-1 Se enumeran en la Tabla 17 (Veacutease anexo pp 178)
9422 - Marcadores mitocondriales
- ADNmt 16S Un nuevo haplotipo se ha detectado en las muestras estudiadas en el valle
de Fiambalaacute por lo cual se le asigna el nuevo coacutedigo Lvia-16SB Esta secuencia parcial
es de 436 pb de longitud y presenta un sesgo AT contenido de 6949 Este haplotipo es
muy similar al que se encuentra en esta especie de limneido Lvia-16SA (HE610434) que
difiere en soacutelo 2 de insercioacutensupresioacuten (indeles) Es importante sentildealar que se
detectaron muy pocas diferencias en este fragmento del 16S entre L neotropica y
especiacutemenes L viator ya estudiados en Argentina (soacutelo 5 posiciones variables 4
mutaciones y 1 indel) Por lo tanto se realizoacute un anaacutelisis comparativo de secuencias
incluyendo L neotropica y haplotipos L viator y otros haplotipos 16S aislados de la
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misma especie disponibles en el GenBank que muestran secuencias muy similares de
acuerdo con BLASTN (Veacutease anexo Tabla 18 pp 179)
- ADNmt cox1 Soacutelo una secuencia de nucleoacutetidos se encontroacute igual en todas las
muestras analizadas de 672 pb y un sesgo AT con contenido de 7004 Esta secuencia
resulta ser nueva y el nuevo coacutedigo haplotipo Lvia-cox1d fue exigido Cuando se
compara con los haplotipos descritos anteriormente en nucleoacutetidos de L viator cox1a
cox1b y cox1c las diferencias oscilan entre 6 y 11 el haplotipo Lvia-cox1a de Riacuteo Negro
Argentina (AM494010) aparece como el maacutes parecido Los resultados BLASTN
proporcionan una semejanza del 100 solamente con un fragmento cox1 maacutes corto de L
viatrix (VxC2 de 654 pb) de Mendoza (JN872450) Las diferencias de nucleoacutetidos y
aminoaacutecidos con haplotipos L viator y otros aislados se detallan en la Tabla 19 (Veacutease
anexo pp 180)
943 - Anaacutelisis comparativo de L neotropica vs L viator
A nivel de ADNr nuclear ITS-1 muestra ser un buen marcador en la distincioacuten entre estas
dos especies de limneidos El ITS-2 ofrece 60 posiciones variables (incluidas 29
mutaciones y 31 indeles) en una larga alineacioacuten de 464 pb en ambas especies y
respectivos haplotipos aislados Ademaacutes este marcador ofrece interesantes
microsateacutelites para la caracterizacioacuten de la poblacioacuten (Veacutease Anexo Tabla 16 pp 177)
El ITS-1 ofrece 119 posiciones variables incluyendo 93 mutaciones y 26 indeles en una
larga alineacioacuten de 580 pb El total de diferencias de caraacutecter entre especies son muy
claras y coexisten mostrando una gama de 57 a 59 (promedio de 5790) con un
promedio de p-distancia de 01163 (un total de 80 parsimonias en su respectiva
alineacioacuten) para distinguir las especies Una matriz de distancias por pares entre
secuencias de haplotipos ITS-2 y ITS-1 y aislamientos de L neotropica y L viator se
enumeran en la Tabla 20 (Veacutease anexo pp 181)
El nivel de los marcadores mitocondriales cox1 es excelente para distinguir las especies
y poblaciones cuando se utiliza como secuencia de nucleoacutetidos pero no cuando se
traduce a la proteiacutena que muestra identidad de secuencia de aminoaacutecidos en algunos
aislamientos de L neotropica y L viator A diferencia de los otros tres marcadores
utilizados 16S es el uacutenico que puede crear confusioacuten si se utiliza solo para lograr
diferenciacioacuten molecular entre ambas especies Las causas de esta afirmacioacuten son la
corta longitud del fragmento utilizado y el muy bajo nuacutemero de posiciones variables
obtenidas (25 de las cuales 19 son mutaciones y 6 indeles en una alineacioacuten de largo
442 pb 565) que logran generar una separacioacuten coherente entre ambas especies y
haplotipos (Veacutease anexo Tabla 18 pp179) El total de las diferencias de caracteres se
han utilizado para construir una matriz de distancia comparable entre 16S y secuencias
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de cox1 aisladas de haplotipos de L neotropica y L viator (Veacutease anexo Tabla 21 pp
182)
La informacioacuten proporcionada por los 4 marcadores moleculares utilizados y aplicados
para distinguir L neotropica y L viator se detalla en la Tabla 22 (Veacutease anexo pp 183)
Para la diferenciacioacuten entre estas dos especies ITS-1 aparece como el marcador con
mayor resolucioacuten y 16S como el de menor Para los anaacutelisis intraespeciacuteficos cox1
aparece como el mejor marcador y ITS-1 el peor La baja resolucioacuten del fragmento del
gen 16S para la distincioacuten de especies es digna de tenerse en cuenta Por ejemplo la
estimacioacuten de distancia media de 16S utilizando como modelo de sustitucioacuten de
nucleoacutetidos las diferencias totales (ts + tv) entre L neotropica y L viator es solo 856
siendo de 433 y 431 en las secuencias de L neotroacutepica y L viator respectivamente
(Veacutease anexo Tabla 22 pp 183)
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DISCUSIOacuteN
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101 - EN LOS SERES HUMANOS
La regioacuten endeacutemica en el valle de Fiambalaacute presenta las prevalencias maacutes altas e
intensidades registradas en el paiacutes demostrando ser un problema de Salud Puacuteblica con
singulares caracteriacutesticas epidemioloacutegicas En el presente estudio la prevalencia
obtenida por meacutetodos seroloacutegicos (3442) en Tatoacuten y aacutereas de influencia incluyendo
Riacuteo Grande es la maacutes alta reportada en la Repuacuteblica Argentina Esta prevalencia es
comparable a la encontrada por Marcos et al (2002) en pruebas seroloacutegicas (363) en
Mantaro asiacute como en el valle de Cajamarca tambieacuten en Peruacute por Gonzaacutelez et al (2011)
El estudio epidemioloacutegico realizado demuestra que esta zona puede ser clasificada como
una situacioacuten hiperendeacutemica humana en base a los criterios propuestos a la OMS por
Mas-Coma et al (1999 a) Los resultados obtenidos en esta investigacioacuten permiten la
descripcioacuten epidemioloacutegica del aacuterea y muestran factores que intervienen en el
mantenimiento del ciclo de la Fasciolosis a pesar que el subregistro y la falta de
denuncias epidemioloacutegicas contribuye a que la enfermedad sea subestimada La falta de
teacutecnicas de diagnoacutestico raacutepidas sensibles y econoacutemicas que esteacuten al alcance de todos
los centros de salud y sean uacutetiles tanto en la fase aguda como croacutenica de la enfermedad
seriacutea uno de los principales factores en la subestimacioacuten
Desde las aproximadamente 2500 personas infectadas registradas por Chen y Mott
(1990) en 42 paiacuteses de Asia Europa Ameacuterica Latina Aacutefrica del Norte y el Paciacutefico Oeste
entre 1970 y 1990 y el reporte global de la OMS (1995) en alrededor de 24 millones de
afectados hasta la estimacioacuten actual de Mas-Coma et al (2005) de 17 millones de
infectados a nivel mundial los casos reportados de Fasciolosis han ido aumentando en
los uacuteltimos 25 antildeos Tambieacuten para Mas-Coma (2009 a) es muy probable la
subestimacioacuten de la situacioacuten real debido al desconocimiento del estado de la
enfermedad en muchos paiacuteses
En Argentina no hay datos suficientes para conocer cabalmente la epidemiologiacutea y la
epizootiologiacutea de esta zoonosis parasitaria aunque sabemos que el problema existe (58
trabajos publicados con 555 casos) Sin embargo se presentan estudios como el de Pizzi
et al (1982) cuestionado por Barcat (2005) referido a 54 pacientes atendidos durante un
lapso de 5 antildeos en la provincia de Coacuterdoba
Las teacutecnicas disponibles para diagnoacutestico en los laboratorios cliacutenicos no son optimas
(Carnevale y Velaacutesquez 2011) ya que no se dispone faacutecilmente de antiacutegenos
estandarizados para realizar pruebas seroloacutegicas y seguramente muchos de los casos
observados no se notifican ni se publican por lo que se conoce soacutelo la punta del iceberg
La importancia de la infeccioacuten humana por F hepatica ha sido reconocida en antildeos
recientes por Mas-Coma et al (1999 c) Lo que maacutes sorprende es la capacidad de esta
enfermedad de llegar a causar situaciones epidemioloacutegicas problemaacuteticas en Salud
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Puacuteblica en medios tan diferentes y extremos como en la aridez del valle de Fiambalaacute a
nivel del mar en el delta del Nilo (Esteban et al 2003) y a 4000 m de altitud en el
Altiplano Boliviano (Mas-Coma et al 1999 a) y Peruano (Esteban et al 2002) en lugares
con alta pluviometriacutea y en lugares extremadamente secos en lugares de temperaturas
constantes a lo largo del antildeo y en otros con variacioacuten de temperatura pronunciada seguacuten
las estaciones en focos relacionados con aguas permanentes y en focos con aguas
temporales como observaron en sus estudios Mas-Coma et al (2008 b)
1011 - Inmunodiagnoacutestico
Al igual que los obtenidos en Fiambalaacute todos los diagnoacutesticos realizados en el paiacutes a
partir de 2001 exceptuando los efectuados en Coacuterdoba por Nieto Sosa (2008 2012)
fueron confirmados mediante el ensayo de ELISA (Lloret et al 2005)(Rubel et al
2005)(Salomoacuten et al 2006)(Corti et al 2006)(Riacuteos et al 2008)(Carnevale et al 2012)
El nuacutemero de reportes de casos humanos se sigue incrementando en el mundo y los
trabajos publicados por Arjona et al (1995) demuestran en esta serie de casos que esta
enfermedad afecta a las personas con una prevalencia de hasta 72 por coprologiacutea y
100 por serologiacutea donde ELISA tiene una sensibilidad del 100 y una especificidad
superior al 90 para la deteccioacuten de anticuerpos
Los resultados obtenidos permiten sostener que a pesar de su uso extendido las pruebas
coproloacutegicas comunes son poco sensibles e inferiores a las pruebas seroloacutegicas que
muestran mayores valores de sensibilidad en la deteccioacuten de la fase aguda y croacutenica de
la infeccioacuten por F hepatica En Peruacute Coacuterdova et al (1997 1999) y OacuteNeill et al (1999)
realizaron estudios para el diagnoacutestico precoz y oportuno por medio de meacutetodos
seroloacutegicos que muestran una mayor especificidad y sensibilidad en la determinacioacuten de
esta helmintiasis Cornejo (2003) y Espinosa (2010) reconocen como limitacioacuten de las
pruebas seroloacutegicas que no distinguen entre infeccioacuten actual o pasada y por lo tanto un
resultado positivo en un paciente proveniente de una zona endeacutemica con un cuadro
cliacutenico no compatible con Fasciolosis puede resultar de una respuesta inmune a la
infeccioacuten en el pasado
La deteccioacuten de anticuerpos fue el meacutetodo empleado para el inmunodiagnoacutestico de
Fasciolosis en el valle de Fiambalaacute debido a su relativa simplicidad y la temprana
seroconversioacuten (usualmente 1-2 semanas) durante la infeccioacuten primaria comparada con
el periacuteodo de patencia tardiacutea (2-3 meses) hallada por Hillyer (1999) Sin embargo se tuvo
en cuenta que su positividad no puede ser de modo alguno considerada como un criterio
de infeccioacuten activa ya que Espino (1997) ha demostrado que muchos pacientes ya
curados mantienen elevados niveles de anticuerpos contra el paraacutesito por periacuteodos que
pueden llegar hasta 2 o 3 antildeos
Shaker (1994) en estudios epidemioloacutegicos realizados en Egipto empleoacute ELISA para
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detectar anticuerpos circulantes contra F hepatica en suero de pacientes infectados
enfrentados a un antiacutegeno purificado por inmunoafinidad desde homogeneizados del
paraacutesito adulto ELISA resultoacute ser 100 sensible y tuvo una especificidad de 93
Entonces planteoacute que ELISA puede ser usada como una buena prueba de screening
mientras que el ensayo inmunoenzimaacutetico de electrotransferencia (EITB) serviriacutea como
un test confirmatorio en el inmunodiagnoacutestico de Fasciolosis
En Chile Apt (1992) sostiene que el meacutetodo ELISA posee una sensibilidad de 976 y
especificidad de 938 mientras para Castro (2010) la teacutecnica de ELISA utilizando los
productos de E-S del paraacutesito tiene una sensibilidad de 100 y una especificidad de
978 aunque Zulantay (1992) utilizando un IgG ELISA y un antiacutegeno somaacutetico soluble
de F hepatica obtuvo una sensibilidad de 923 y una especificidad de 994 en tanto
los valores predictivos positivo y negativo fueron de 916 y 994 respectivamente
Para el desarrollo de esta investigacioacuten se utilizoacute antiacutegeno E-S del paraacutesito y para
evaluar la deteccioacuten de anticuerpos anti-F hepatica en los sueros humanos se aplicoacute un
ELISA con una sensibilidad y especificidad en la prueba de 100
1012 - Eosinofilia
En lo que respecta a los exaacutemenes auxiliares llevados a cabo el dato maacutes importante del
hemocitoloacutegico es la eosinofilia elevada registrada en el 3238 de los casos estudiados
en esta tesis sin que se encontraran elementos inmaduros en las muestras como reporta
Siciliano (1982)
En Fasciolosis como en otras parasitosis la eosinofilia es el hallazgo de laboratorio maacutes
frecuentemente encontrado seguacuten su porcentual y valor absoluto en sangre perifeacuterica
(Arjona et al 1995) Las alteraciones del hemograma demuestran eosinofilia marcada
(47) para Blancas et al (2004) y leucocitosis con desviacioacuten a la izquierda como lo
manifiesta Atias (1991)
Asiacute para el total de pacientes estudiados la eosinofilia elevada es el hallazgo maacutes
frecuente (n= 60) lo que concuerda con los trabajos de Rubel et al (2005) y Nieto Sosa
(2008) siendo uno de los datos que orienta el diagnoacutestico haciacutea la Fasciolosis Para
Lloret et al (2005) la leucocitosis con hipereosinofilia creciente fue una anomaliacutea
universal con valores del 38 al 62 y estuvo presente en todos sus pacientes mientras
que Giffoniello (1983) la reporta del 30-50 seguacuten Miguel (1985) en 80 y para Siciliano
(1989) en 93
En Peruacute Cosme et al (2001) reportan 37 casos de Fasciolosis en los que el 918 de los
pacientes presentoacute eosinofilia El porcentaje de pacientes con eosinofilia en determinado
grupo de estudio depende mucho del porcentaje de pacientes agudos en cada caso
Vera (1989) hace notar que en 83 de 134 pacientes (619) en etapa croacutenica no se
presentoacute eosinofilia por lo que su ausencia en un paciente dado no descarta la
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posibilidad de la enfermedad y esto podriacutea explicar el escaso nuacutemero de individuos con
diagnoacutestico de Fasciolosis que al no sospechar su diagnoacutestico como lo afirman Marcos
et al (2002) no se solicitoacute el anaacutelisis parasitoloacutegico respectivo Cabe destacar que algunos
pacientes clasificados en fase croacutenica son realmente casos en transicioacuten (final de la fase
aguda y comienzo del periodo de ovoposicioacuten)
Seguacuten Arjona et al (1995) la eosinofilia se presenta en el 95 de los pacientes siendo la
mayoriacutea agudos Mientras Marcos et al (2007 a) refiere haberla encontrado en el 46 de
los pacientes (todos en fase croacutenica) De esto se deduce que con respecto a la
eosinofilia y la Fasciolosis cabe mencionar que las maacutes altas tasas de eosinofilia se
observan en la fase aguda o invasiva y estadios tempranos de la fase croacutenica llegando
incluso a cifras muy altas (70-80) como se menciona anteriormente Para Blancas et al
(2004) la eosinofilia no siempre estaacute presente en la fase croacutenica Solo 47 de los 277
casos implicados en un interesante estudio hospitalario de maacutes de 30 antildeos teniacutea
eosinofilia (Blancas et al 2004) mientras que el 50 de los sujetos con Fasciolosis
croacutenica teniacutea eosinofilia en aacutereas endeacutemicas (Marcos et al 2002)
Tambieacuten en Peruacute donde la eosinofilia estuvo presente en el 47 de los casos croacutenicos
se demuestra que en esta fase puede encontrarse y seriacutea importante para poder
sospechar el diagnoacutestico de esta parasitosis Sin embargo muchos individuos con
Fasciolosis croacutenica no presentan eosinofilia y esto seriacutea otro punto importante al igual
que las caracteriacutesticas cliacutenicas lo que explicariacutea la falta de personas diagnosticadas
previamente con Fasciolosis en los hospitales del valle de Fiambalaacute ya que no se
investigoacute este diagnoacutestico
La eosinofilia puede ser el primer signo a sospechar sobre Fasciolosis en las zonas
endeacutemicas pero tambieacuten estos sujetos pueden tener muacuteltiples paraacutesitos intestinales que
pueden aumentar el conteo de eosinofilos especialmente helmintos o pueden tener otra
patologiacutea como asma Se deberaacute tener presentes estas asociaciones que requieren un
enfoque integral de diagnoacutestico En resumen si un paciente proviene de un aacuterea
endeacutemica se sospecha de cualquier anomaliacutea del tracto biliar y presenta eosinofilia
puede ser Fasciolosis y se deberaacute incluir para el diagnoacutestico diferencial
1013 - Proteiacutenas totales y enzimas hepaacuteticas
Otro rasgo de la infeccioacuten por F hepatica fue la presentacioacuten de hiperproteinemiacutea quizaacutes
debido a cambios de volumen del agua plasmaacutetica por deshidratacioacuten (aporte insuficiente
de agua voacutemitos o diarreas severas) La hiperproteinemiacutea puede ser debida a
deshidratacioacuten o a un aumento en la concentracioacuten de proteiacutenas especiacuteficas
(inmunoglobulinas policlonales en infecciones) pero estas no fueron analizadas
Para analizar el impacto del valor del laboratorio se diferenciaron los datos aportados por
aquellas determinaciones como el hemograma de las especiacuteficas en patologiacutea
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hepatobiliar Las determinaciones especiacuteficas en patologiacutea hepatobiliar incluyen las
enzimas de citoacutelisis (GOT o AST y GPT o ALT) para que reflejen alteraciones del
pareacutenquima hepaacutetico y la elevacioacuten de FAL (3619) la bilirrubina (BT) directa (BD) e
indirecta (BI) La fosfatasa alcalina se halla elevada como enzima de colestasis aunque
los valores registrados son inferiores al reporte de Siciliano et al (1989) donde el
laboratorio reveloacute fosfatasa alcalina aumentada en el 43 de los casos Nieto Sosa et al
(2012) encontraron GOT GPT y FAL elevadas en todos los pacientes de un grupo
familiar estudiado
1014 - Geacutenero
En la mayoriacutea de los estudios sobre la Fasciolosis humana y su incidencia en las
diferentes zonas de endemicidad los aspectos referidos a la epidemiologiacutea de la
enfermedad en funcioacuten del sexo del hospedador definitivo accidental arrojan resultados
contradictorios obtenieacutendose zonas donde las prevalencias e intensidades de infeccioacuten
eran diferentes si bien en la mayoriacutea de las veces de forma no significativa
De acuerdo con esta afirmacioacuten en los resultados obtenidos en el valle Fiambalaacute tanto
dentro de los casos positivos como en el grupo de negativos los mayores porcentuales
corresponden al sexo femenino (mujeres 60 40 en hombres) sin embargo la
prevalencia no presenta asociacioacuten estadiacutesticamente significativa
La diferencia no significativa entre prevalencia y sexo puede ser explicada por la similitud
de roles por geacutenero y por la ingesta de varios tipos de vegetales crudos o agua como
factores de riesgo para la infeccioacuten por F hepatica Estos resultados concuerdan con las
investigaciones realizadas en zonas tan distantes como Satipo Peruacute llevadas a cabo por
Delgado (1995) y las de Brooker (1999) quien trabajoacute en Kenia
Del mismo modo como ocurre con casi todas las enfermedades infecciosas las tasas de
prevalencia e intensidad entre los sexos variacutean en funcioacuten de los papeles y
responsabilidades de cada uno Sin embargo si tanto hombres como mujeres comparten
condiciones econoacutemicas y sociales similares sus estructuras fisioloacutegicas pueden
responder de forma diferente a un mismo riesgo
De ese modo Apt et al (1992) ha realizado numerosos estudios en las distintas zonas
endeacutemicas de Fasciolosis en Chile donde la prevalencia de parasitacioacuten animal es
elevada En aacutereas rurales hiperendeacutemicas para Fasciolosis animal los resultados de
Fasciolosis humana obtenidos en relacioacuten al geacutenero mostraban que las mujeres eran
parasitadas de forma maacutes frecuente que los hombres 732 frente al 268
respectivamente
Estudios epidemioloacutegicos muy interesantes llevados a cabo en Bolivia por Esteban et al
(1999 2002) en regiones de alta endemicidad de Fasciolosis humana encontraron
prevalencia de hasta un 682 (media 154) aunque no existiacutean diferencias en cuanto
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al geacutenero de individuos analizados Farag et al (1979) en trabajos anteriores en Egipto
mostraban diferencias significativas en cuanto a la prevalencia de infeccioacuten por
Fasciolosis en funcioacuten del geacutenero afectando maacutes a las mujeres con un 103 frente a un
44 en hombres
De ese modo los estudios referidos muestran que tanto en Bolivia como en Peruacute
(Esteban et al 1999 2002) las diferencias relativas a la prevalencia de infeccioacuten por F
hepatica en funcioacuten del geacutenero no eran significativas al igual de lo encontrado en el
presente trabajo Por el contrario en Egipto (Curtale et al 2007)(Esteban et al 2003) al
igual que en Chile (Apt et al 1992 1993) si existiacutean diferencias significativas en la
prevalencia de infeccioacuten dependiendo de si afectaba a hombres o mujeres
1015 - Grupos etarios
El estudio demuestra que la infeccioacuten es maacutes frecuente en los pacientes de los grupos
etarios menores de 19 antildeos a diferencia del estudio reportado por Biagi (1957) en la
poblacioacuten de Atlixto (zona endeacutemica mexicana) que mostroacute como la frecuencia de
reacciones positivas aumentaba de manera rectiliacutenea en los adultos
Datos similares a los obtenidos en esta investigacioacuten se observan en la casuiacutestica
estudiada por Alban (2002) sobre casos de Fasciolosis en el Hospital de Cajamarca
Peruacute donde su mayor poblacioacuten correspondioacute a los grupos etarios menores de 20 antildeos
Tambieacuten en Peruacute Marcos (2002 2005) observa en zonas endeacutemicas que la mayoriacutea de
casos son nintildeos en edad escolar (5-15 antildeos) siendo maacutes propensos que los adultos a
convertirse en infectados como lo ejemplifica en los niveles maacutes altos de prevalencia de
infeccioacuten y para desarrollar eventos mecaacutenicos adversos despueacutes del tratamiento
debido al tamantildeo maacutes pequentildeo de sus conductos biliares y por lo tanto a una mayor
probabilidad de bloqueo (Marcos et al 2007 b)(Cornejo et al 2003)(Valencia et al
2005)(Gabrielli et al 2011)
Los resultados tambieacuten coinciden con estudios de campo reportados en el valle de
Mantaro (zona endeacutemica peruana) donde Naacutequira (2000) obtiene 93 de muestras
positivas en los menores de 20 antildeos Valero et al (2003 2006 2008) y Girones et al
(2007) sostienen el gran impacto de esta enfermedad en la morbilidad de nintildeos con
infecciones croacutenicas
Sin embargo los resultados del valle de Fiambalaacute difieren de la casuiacutestica hospitalaria
encontrada en Coacuterdoba por Siciliano (1980) donde la edad promedio en que se
presenta la enfermedad es de 355 antildeos ( a pesar de tener en cuenta que en el Hospital
Rawson de la ciudad de Coacuterdoba se atienden personas adultas) y en Peruacute donde
Blancas (2004) sostiene que las poblaciones maacutes importantes correspondieron a los
grupos comprendidos entre los 20 y 39 antildeos y Peacuterez (1986) que observa la mayor
proporcioacuten de enfermos entre 15 a 49 antildeos
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Los adultos suelen ser los maacutes afectados en aquellos lugares en los que la Fasciolosis
humana es poco frecuente como lo describen Carrada y Escamilla (2005) en Francia o
los casos de turistas que veranean en zonas serranas de Coacuterdoba Argentina
diagnosticados por Siciliano (1980) y Nieto Sosa (2006) Tambieacuten los observados por
Maco et al (2002) en profesiones ligadas al campo relacionadas al pastoreo o cuidado
del ganado constituyeacutendose en grupos de riesgo y donde la enfermedad se muestra
seguacuten Mas-Coma y Bargues (1997 a) en agregados familiares
1016 - Estudios coproloacutegicos
Uno de los aspectos investigados para el diagnoacutestico definitivo de Fasciolosis fue el
hallazgo de huevos en materia fecal aun reconociendo que el estudio
coproparasitoloacutegico presenta baja sensibilidad y requiere la recoleccioacuten de muestras
seriadas En este sentido la teacutecnica coproloacutegica maacutes rentable eficaz y sensible resultoacute la
TSR descrita por Lumbreras et al (1962)
A pesar de los bajos resultados obtenidos (4 casos) la TSR al compararla con las otras
teacutecnicas maacutes complejas y de mayor costo como la teacutecnica de Kato-Katz o el meacutetodo de
concentracioacuten eacuteter-formol permitioacute la identificacioacuten de los casos positivos A diferencia de
los reportes de otros autores donde los estudios coproparasitoloacutegicos dieron excelentes
resultados como en Mendoza donde Salomoacuten et al (2006) utilizando las teacutecnicas de
Faust Sheather y Lumbreras comprobaron positivos a dos pacientes o los casos
reportados por Nieto Sosa (2008) de Coacuterdoba y San Luis donde hallaron huevos de F
hepatica en 15 pacientes
En un estudio muy interesante Lumbreras et al (1962) comparando el anaacutelisis directo de
heces y el procedimiento de sedimentacioacuten raacutepida para investigar huevos de F hepatica
en materia fecal obtienen un resultado significativo de 919 a 9081 de positividad
Villegas et al (2012) en el Altiplano Boliviano regioacuten de alta endemicidad de Fasciolosis
humana encontraron prevalencias de hasta 217 a diferencia del presente trabajo
donde solo fue posible confirmar por anaacutelisis de materia fecal 416 de los casos
estudiados correspondientes a pacientes sintomaacuteticos en su fase croacutenica entre ellos dos
nintildeos
Cabe destacar que por razones logiacutesticas la toma de muestras seriadas para el examen
de heces fue soacutelo de 3 diacuteas consecutivos lo que pudo reducir el hallazgo de huevos
debido a la ovoposicioacuten intermitente del paraacutesito Es importante sentildealar ademaacutes que las
personas no cooperaron con la toma de muestras
De los casos positivos encontrados llama la atencioacuten el de la paciente a la que se extrajo
especiacutemenes de F hepatica con CPRE quien previamente resultoacute negativa a los
distintos coproparasitoloacutegicos que se le realizaron y a los ELISA practicados Lo mismo
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ocurrioacute con la paciente en la que se halloacute un ejemplar durante una intervencioacuten quiruacutergica
y tambieacuten dio negativo al anaacutelisis de materia fecal aunque eacutesta fue positiva al ELISA
A pesar de no formar parte de los objetivos del presente estudio las demaacutes teacutecnicas
coproparasitoloacutegicas utilizadas permitieron demostrar la existencia de huevos de varios
paraacutesitos presentes tanto en nintildeos como en adultos presentaacutendose casos donde
conviviacutean hasta 3 paraacutesitos distintos al igual que el trabajo de Esteban (1999) quien
diagnostica parasitosis coexistentes con Fasciolosis mencionando la presencia de
Blastocystis hominis tal como lo observado en el valle de Fiambalaacute
1017 - Siacutentomas y signos
La presentacioacuten cliacutenica patogeniacutea situacioacuten epidemioloacutegica y patrones de transmisioacuten de
Fasciolosis humana es ampliacutesima no soacutelo por las dificultades diagnoacutesticas en la fase
aguda de la enfermedad sino por el hecho de que estudios de Valero et al (2003 2006
2008) en los uacuteltimos antildeos han venido a demostrar serios problemas cliacutenicos y
patogeacutenicos durante la muy prolongada fase de cronicidad que en humanos se estima
del orden de 135 antildeos
Queda demostrado en este estudio que lamentablemente la casuiacutestica en sucesos
cliacutenicos no refleja su frecuencia quizaacutes porque la mayoriacutea de los casos que llegan a los
centros hospitalarios lo hacen por complicaciones de la fase croacutenica (cuadros
obstructivos biliares colangitis colecistitis etceacutetera) y los siacutentomas de la Fasciolosis de
la viacutea biliar son tan semejantes a los que produce la litiasis biliar que los pacientes llegan
a la cirugiacutea con este uacuteltimo diagnoacutestico siendo el hallazgo del paraacutesito un hecho
inesperado durante la intervencioacuten como lo revelan los trabajos de Del Valle y Donovan
(1923) Cuenya (1944) Longo y Dariacuteo (1953) Logaldo (1955) Ahualli y Arias (1961)
Cantildeas et al (1964) Padilla et al (1970) Carena et al (1972) y Andrada et al (1983) igual
que lo ocurrido con dos pacientes de Fiambalaacute
En esta investigacioacuten al analizar la sintomatologiacutea se observa que el dolor abdominal es
el maacutes frecuente presente en el 2553 de los casos Estos datos contrastantes con
otros estudios hospitalarios como los obtenidos en Peruacute por Picoaga (1980) 88 y
Alban (2002) que hablan de 88 y 84 respectivamente o en Chile donde el dolor
abdominal para Faiguenbaum (1962) fue el maacutes habitual en 70 de los casos
Los siacutentomas que siguieron en frecuencia en este estudio fueron naacuteuseas y voacutemitos
(2411) diarrea (1702) fiebre (992) valores muy proacuteximos a los obtenidos en
Peruacute donde Picoaga (1980) reporta naacuteuseas y voacutemitos en 30 anorexia en 27 y
diarrea soacutelo en 16 en tanto para Alban (2002) voacutemitos en 28 la hiporexia en el 26
las naacuteuseas en 17 la diarrea en 12 y la peacuterdida de peso en el 13 En Chile
Faiguenbaum (1962) encuentra maacutes frecuente la diarrea (36) y la peacuterdida de peso
(36) Faacutebregas et al (1976) en Cuba presenta porcentajes maacutes bajos diarrea 26
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voacutemitos 22 anorexia 19 peacuterdida de peso y naacuteuseas 15 A pesar de estos
porcentajes es de destacar que los siacutentomas son inespeciacuteficos y ayudan poco a precisar
el diagnoacutestico
Respecto a la semiologiacutea del dolor abdominal se observa que en cuanto a localizacioacuten
es maacutes frecuente en epigastrio (5454) e hipocondrio derecho (4545) lo que
concuerda con estudios de Cornejo (1951) en Peruacute Faacutebregas et al (1976) observa el
dolor epigaacutestrico presente en el 59 y en hipocondrio derecho en el 37 de sus
pacientes El mismo orden se mantiene en Chile (Faiguenbaum 1962) pero con
porcentajes menores (26 y 19 respectivamente) Al igual que en Peruacute (Picoaga
1980)(Cornejo 1951) el dolor tipo coacutelico ha sido el que maacutes frecuentemente se ha
observado en este estudio
En la Repuacuteblica Argentina de acuerdo al examen fiacutesico para el total de pacientes
atendidos en los grupos agudo croacutenico y pediaacutetrico los hallazgos maacutes frecuentes fueron
dolor a la palpacioacuten en hipocondrio derecho y signo de Murphy (Longo y Daraiacuteo 1953)
(Ahualli y Arias 1961)(Cantildeas et al 1964)(Padilla et al 1970)(Andrada et al 1983)
(Giffoniello et al 1983) (Lloret et al 2005) hepatomegalia (Padilla et al 1970) palidez y
fiebre (Andrada et al 1983) aunque en los datos de los pacientes del valle de Fiambalaacute
es de destacar en algunos casos la hepatomegalia y la ictericia presente en adultos
Por lo tanto es correcto afirmar que el escaso nuacutemero de individuos diagnosticados
cliacutenicamente de Fasciolosis no presentan sintomatologiacutea biliar claacutesica como coacutelico biliar
observado por Andrada et al (1983) o signo de Murphy (Longo y Daraiacuteo 1953) y esto
pudiera ser una de las causas que explicariacutea el escaso nuacutemero de individuos
diagnosticados cliacutenicamente de Fasciolosis
1018 - Imaacutegenes
En la presente tesis doctoral soacutelo 3 observaciones (75) coexistieron con litiasis 5
(125) con colecistectomiacutea y 29 (725) con vesiacutecula normal Se encontroacute un caso
ecograacutefico que mostraba una imagen factible del paraacutesito El estudio realizado mostroacute
una imagen clara aplanada y alargada perfectamente compatible con F hepatica con
estructura hepaacutetica conservada viacuteas biliares intra y extrahepaacutetica no dilatadas Se
informoacute tambieacuten ausencia de vesiacutecula biliar por colecistectomiacutea y leve dilatacioacuten del
coleacutedoco sin demostrar alteraciones en el resto del estudio Descripciones semejantes
son reportadas en Peruacute por Gonzaacutelez-Carbajal et al (2001) y Meacutexico por Vaacutezquez et al
(2007)
Blancas et al (2004) describioacute los hallazgos principales de 27 ecografiacuteas abdominales
(desde 1989 al 2002) realizadas en el Hospital Cayetano Heredia de Lima Estas fueron
hepatomegalia en el 37 imaacutegenes sospechosas de F hepaacutetica en 30 colecistitis en
26 y litiasis en 15 y Alban (2002) en el hospital de Cajamarca reportoacute 8 ecografiacuteas
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(de 101 casos de Fasciolosis) de los cuales cinco (63) tuvieron caacutelculos y dos (25)
pared vesicular engrosada
La tomografiacutea axial computada es utilizada por Arjona et al (1995) mencionando su
utilidad especialmente en el reporte de 1520 pacientes con Fasciolosis y Van Beers et al
(1994) con presencia de ejemplares en viacuteas biliares El presente estudio no contoacute con la
posibilidad de emplear TAC en los pacientes
1019 - Teacutecnicas invasivas
A raiacutez de los estudios realizados para esta tesis fueron hallados como se expresoacute antes
en el momento de llevar a cabo intervenciones quiruacutergicas ejemplares vivos de F
hepatica en dos pacientes femeninos La primera presentaba el coleacutedoco muy dilatado y
de paredes sumamente engrosadas sin evidencia de litiasis El segundo reporte se
refiere a la coexistencia de litiasis y Fasciolosis en el coleacutedoco de las que se extrajo
estructuras adultas del paraacutesito En Peruacute Alban (2002) refiere situaciones similares al
haber encontrado especiacutemenes en 2162 (12) colecistectomiacuteas practicadas en el
hospital de Cajamarca durante 5 antildeos
En una de las pacientes del valle de Fiambalaacute fue extraiacutedo un ejemplar por CPRE con
cesta de Dormia convirtieacutendose en una muy buena alternativa para evitar cirugiacuteas
mayores como ya habiacutea publicado Veerappan (1991) o en Cuba donde Martiacutenez et al
(2000) reportan resultados satisfactorios comprobando la presencia del paraacutesito en las
viacuteas biliares por CPRE y procediendo a la extraccioacuten de especiacutemenes bajo visioacuten directa
con canastillas helicoidales
Durante esta investigacioacuten uno de los casos citados al que se le practicoacute una
colecistectomiacutea permitioacute la confirmacioacuten por ELISA realizado al extraerse un ejemplar de
F hepatica
102 - EN LOS ANIMALES
1021 - Estudios coproloacutegicos
Seguacuten Boray (1969) y Mas-Coma et al (1999) los hospedadores definitivos maacutes
importantes de F hepatica son los ovinos y los bovinos mientras para Acha y Szyfres
(1986) muchos animales de especies domeacutesticas o silvestres pueden infectarse Este
estudio muestra que entre ellas herbiacutevoros poligaacutestricos -cameacutelidos- o monogaacutestricos -
equinos y mulares- actuacutean como importantes hospedadores alternativos existiendo
diferencias en el desarrollo de la infeccioacuten en las distintas especies estudiadas
determinadas entre otros factores por su diferente susceptibilidad a la infeccioacuten tal como
lo sostienen Dixon (1964) o Reddington et al (1986) Esto se manifiesta durante el curso
de la investigacioacuten por los porcentajes de hospedadores infectados y los niveles de
excrecioacuten de huevos de F hepatica en materia fecal obtenidos
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En el valle de Fiambalaacute los mayores porcentajes de muestras positivas corresponden a
los ovinos y asnos-mulares (3958 al 1954) siendo tambieacuten alto el porcentaje en
llamas y caprinos El anaacutelisis de estos porcentajes considera el sistema de alimentacioacuten
utilizado ya que es determinante de la epidemiologiacutea de la enfermedad como lo
demuestran Cordero del Campillo et al (2002) Las muestras analizadas proveniacutean de
animales sometidos a los manejos tradicionales de produccioacuten en la zona lo que limita
sus preferencias de haacutebitat y sus haacutebitos forrajeros independientemente de la especie
raza o categoriacutea etaria
En contraste a lo observado por Olaechea (1994) en el caso de los ovinos y los caprinos
ambas especies deben pastorear en las vegas (ambientes pantanosos) incluso los
caprinos incorporan una proporcioacuten considerable de especies arbustivas en su dieta
(Mintildeoacuten et al 1991)(Aguirre et al 2005) Estos animales al verse obligados a consumir
forrajes contaminados de la zona ademaacutes de infectarse tambieacuten se transforman en
contaminadores continuos del aacuterea Cafrune et al (1996) sostienen que los cameacutelidos
sudamericanos se infectan de los ovinos aunque los altos porcentajes de llamas
positivas (184) hallados en Tatoacuten y Riacuteo Grande deben relacionarse a la susceptibilidad
que manifiestan a la infeccioacuten por trematodes y a ser poblaciones que habitaban antes de
la introduccioacuten de los ovinos a la zona
Pereyra y Leiras (1991) estudiaron que los rumiantes invierten maacutes de un tercio del diacutea
pastando y como las ovejas cabras y cameacutelidos se alimentan en los mismos lugares y
tienen acceso a los mismos ambientes las probabilidades de consumir metacercarias al
alimentarse seriacutean las mismas
Frente a la prevalencia (2674) obtenida en esta tesis el meacutetodo de diagnoacutestico
coproparasitoloacutegico utilizado presentoacute porcentajes maacutes elevados que los datos de Aguirre
et al (2005) 2367 Rossanigo et al (1983) 99 Moreira et al (2004) 2353 y Mariacuten
(2009) 216
Resultados similares a los mostrados fueron observados en la regioacuten norte del Altiplano
boliviano zona altamente endeacutemica (2586) por Ueno et al (1975) La prevalencia por
F hepatica en el estado de Santa Catarina Brasil donde Da Serra-Freire y Nuernberg
(1992) luego de analizados 12 antildeos de muestreos presentan un 2786 en promedio La
distribucioacuten geograacutefica de establecimientos agropecuarios en Uruguay muestran tropas
con porcentajes mayores a 20 de animales infectados en cualquier aacuterea del territorio
como lo registran Loacutepez y Hernaacutendez (1961) y Nari y Cardozo (1976) Chile presenta una
tasa promedio (3012) tanto en bovinos como en la infeccioacuten caprina (Alcaiacuteno y Apt
1989) Seguacuten Pascal y Goacutemez (1986) tambieacuten se encuentran presentes en Venezuela
con 215
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Boray (1969) sostiene que los huevos de F hepatica eliminados en la materia fecal
dependen de factores relacionados con el hospedador (edad estado inmune y
nutricional) y con el trematode (intensidad del parasitismo y duracioacuten de la infeccioacuten)
factores que explican el amplio rango de resultados encontrados en esta tesis (desde
104 en porcinos 184 en llamas hasta 3958 en ovinos) Las diferencias
estadiacutesticamente significativas de prevalencia en ovinos supera ampliamente las
encontradas en las demaacutes especies esto se relaciona con su alta susceptibilidad y pone
en evidencia su potencial como contaminador de las pasturas
En la zona de estudio existen algunos factores particulares a tener en cuenta la
ganaderiacutea normalmente es mixta con lo cual las diferentes especies de animales ademaacutes
de pastorear en ambientes compartidos consumen las mismas metacercarias los
hospedadores tienen similitud en el tracto digestivo y estaacuten muy relacionados
filogeneacuteticamente (ungulados)
Por la dispersioacuten del alimento en grandes extensiones del terreno y consecuente baja
infestacioacuten de los pastos no era esperable encontrar infecciones altas Los lugares con
una gran contaminacioacuten de los pastos presentan los pocos eventos de pastoreo que los
animales pueden utilizar y de ese modo ingerir metacercarias e infectarse En el valle de
Fiambalaacute F hepatica se halla concentrada en los sitios huacutemedos conocidos como vegas
aunque la trashumancia y largas distancias logran que se disperse ampliamente
La explicacioacuten es que esta prevalencia alcanza para mantener el ciclo de transmisioacuten a lo
largo del tiempo ademaacutes recordemos que el paraacutesito posee una gran capacidad de
multiplicacioacuten asexual en el hospedador intermediario seguacuten Ollerenshaw (1971 a) por
cada miracidio que penetra al caracol pueden emerger entre 800 y 4000 cercarias Otra
explicacioacuten razonable es pensar que existen en los campos compartidos por varios
propietarios -comuneros- otros hospedadores definitivos domeacutesticos o silvestres que
tambieacuten aportan huevos al ambiente tal como lo propone Olaechea (2004)
Los herbiacutevoros como hospederos definitivos desempentildean dentro de la cadena
epidemioloacutegica un papel importante en la diseminacioacuten de la Fasciolosis y ello podriacutea
estar influyendo en los altos iacutendices que se encuentran en humanos sin embargo Mas-
Coma (2005) presenta zonas donde los casos humanos podriacutean ser independientes de la
infeccioacuten animal
1022 - Necropsias
La necropsia como teacutecnica tambieacuten permitioacute establecer un diagnoacutestico de certeza No
necesitoacute de la confirmacioacuten mediante estudios histopatoloacutegicos y seroloacutegicos
complementarios como los planteados por Robles y Uzal (1991) porque las lesiones y los
paraacutesitos hallados confirman el agente etioloacutegico causante de la enfermedad
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Los cambios de tamantildeo en la viacutescera pudieron ser debidos a un estado de caquexia
apareciendo un hiacutegado maacutes pequentildeo del normal y con una falsa imagen de distensioacuten de
la vesiacutecula biliar No se encontraron depresiones de color rojo oscuro correspondientes a
telangiectasias ni procesos degenerativos acompantildeados de coloracioacuten amarillenta
(esteatosis) o congestioacuten croacutenica que diera lugar a una coloracioacuten rojo oscura
entremezclada con aacutereas amarillentas (hiacutegado de nuez moscada) como sostiene Ruager
(1969)
A diferencia de los hallazgos de Morales y Pino (1977) la apertura de la vesiacutecula biliar no
presentoacute alteraciones del contenido ni en la superficie mucosa Los canaliacuteculos biliares
presentaron engrosamiento manifiesto y en el interior de estos se observoacute la presencia de
ejemplares de F hepatica material semisoacutelido color negro fibrosis y calcificacioacuten de los
conductos biliares que podriacutea actuar como una barrera mecaacutenica confiriendo una
significativa resistencia frente a futuras reinfecciones tal como lo plantean en su trabajo
Rojo Vaacutezquez y Ferre-Peacuterez (1999)
En el tubo digestivo el intestino delgado no presentoacute intususcepcioacuten o necrosis tampoco
reaccioacuten fibrino-purulenta alrededor de la lesioacuten o adherencia a la pared abdominal ni el
abomaso con formaciones nodulares muacuteltiples de miliacutemetros de diaacutemetro distribuidas en
toda la mucosa como describieron Dimattia et al (2013)
En los animales con paraacutesitos la extraccioacuten de las formas juveniles a nivel del
pareacutenquima hepaacutetico y de las adultas en los canales biliares se vio favorecida por la
necropsia siendo importante que las mismas se realizaran a nivel de campo al ser maacutes
faacutecil praacutectica y econoacutemica su ejecucioacuten
1023 - Morfologiacutea microscoacutepica
Los trabajos de Rosa (1969) utilizando la microscopiacutea con fines taxonoacutemicos favorecieron
la profundizacioacuten en el conocimiento de la estructuras de F hepatica A posteriori la
microscopiacutea de campo claro ha sido utilizada en el estudio morfoloacutegico de las diferentes
etapas de desarrollo de los trematodos (Jamjoom y Shalaby 2006) En la uacuteltima deacutecada
esta teacutecnica ha traiacutedo importantes contribuciones en paraacutesitos adultos y huevos de F
hepatica como lo muestran Valero et al (2005 2012) y Periago et al (2008)
En el presente estudio se observaron similitudes morfoloacutegicas entre ejemplares adultos
originarios del valle de Fiambalaacute que no difieren de los especiacutemenes de las otras zonas
de Latinoameacuterica estudiados En lugares separados por grandes distancias geograacuteficas
los trabajos de Arauacutejo et al (1995) en Goiacuteas Brasil o los de Periago et al (2006) en
Espantildea y Valero et al (1999) en Bolivia tienen diferencias alomeacutetricas ontogeacutenicas El
aspecto de los huevos uterinos no difiere de los detallados previamente en la literatura
por Hussein et al (2010)
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Fue importante la observacioacuten de tubeacuterculos y espinas en el tegumento porque su
presencia contribuye a la creacioacuten del haacutebitat de los helmintos Por otra parte el
tegumento es la regioacuten de la interaccioacuten del paraacutesito con el hueacutesped por eacutel no solo entran
nutrientes al paraacutesito sino que tambieacuten como lo sentildealaron Moreau y Chauvin (2010)
desarrolla estrategias para la evasioacuten de la respuesta inmune del hueacutesped
A pesar de las numerosas ventajas ofrecidas por estudios de microscopiacutea de campo
brillante en Helmintologiacutea como demostraron Szmygiel et al (2014) la caracterizacioacuten de
ciertos detalles morfoloacutegicos observados en este estudio como afirman Singh et al (2014)
requiere el uso de otras teacutecnicas tales como el contraste de interferencia diferencial que
permitioacute la observacioacuten tridimensional de las estructuras Los resultados obtenidos
muestran por primera vez que el uso integrado de las dos teacutecnicas en F hepatica
permiten observar la presencia de espinas con resultados fiables Los ejemplares de F
hepatica presentan similitud morfoloacutegica cuando se analizan por microscopiacutea de campo
claro siendo necesario el uso integrado de diversas teacutecnicas microscoacutepicas para una
mejor comprensioacuten de la morfologiacutea del paraacutesito
102 4 - Variabilidad geneacutetica intraespeciacutefica
La Fasciolosis se encuentra distribuida por Ameacuterica Latina Europa Aacutefrica y Asia (Mas-
Coma 2004 a b 2005 2007) con una enorme capacidad de adaptacioacuten y expansioacuten
incluso a medios inhoacutespitos (Mas-Coma et al 2003) relacionada tanto con el cambio
global (Mas-Coma 2007 a) como con el cambio climaacutetico (Mas-Coma et al 2008) por lo
que el marcador CO1 utilizado permitioacute diferenciar ejemplares adultos de F hepatica y
conocer si los polimorfismos son poblacionales o individuales Para ello se procedioacute a
estudiar los paraacutesitos mediante meacutetodos moleculares optando por la secuenciacioacuten de
genes y espaciadores del ADN como dianas maacutes adecuadas y aportando el maacuteximo de
informacioacuten para el estudio epidemioloacutegico Por la manera de manifestarse la
enfermedad se sugiere la conveniencia de ofrecer una base de genes sobre la cual las
regiones puedan proceder a describir sus situaciones epidemioloacutegicas incluyendo los
estudios sobre transmisioacuten para caracterizar el paraacutesito en los distintos lugares y
comprender el polimorfismo de los trematodes involucrados en cada lugar permitiendo
constituir un marcador de gran utilidad para los estudios epidemioloacutegicos y las estrategias
de control (Mas-Coma 2005) Las secuencias de ADN constituyen el uacutenico meacutetodo capaz
de diferenciar especies y tambieacuten diferenciar poblaciones y cepas (Bargues y Mas-Coma
2005) de modo que sean vaacutelidos para la distincioacuten de la variabilidad intraespeciacutefica con
caraacutecter sistemaacutetico (subespecies) pero tambieacuten de cepas geograacuteficas razas
susceptibles o resistentes a la transmisioacuten etceacutetera
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1025 - Resistencia antiparasitaria
Si bien se recuperaron ejemplares procedentes de animales sacrificados en el valle de
Fiambalaacute no habiacutea datos sobre la susceptibilidad o resistencia a antihelmiacutenticos en las F
hepaticas obtenidas sin embargo ya que ninguacuten tipo de tratamiento antihelmiacutentico se
lleva a cabo en los campos donde los animales fueron criados era poco probable aislar
susceptibles a los compuestos fasciolicidas incluyendo albendazoles (ABZ) por lo que
es importante la identificacioacuten de la sensibilidad y de los ejemplares resistentes de La
Puerta de Tatoacuten
En aislamientos de F hepatica ABZ-susceptibles en la cuenca del Salado tales como la
cepa Cullompton ABZ mostroacute excelente actividad y alta eficacia ovicida (Aacutelvarez et al
2009) incluso a concentraciones tan bajas como 005 nmolml No obstante en los
aislamientos del Centro de Diagnoacutestico Veterinario Facultad de Ciencias Veterinarias
Universidad Nacional de La Plata para Sanabria et al (2013) no fue inhibida incluso en
la maacutes alta concentracioacuten probada (5 nmolml)
Entre los paraacutesitos obtenidos se ha aislado una cepa del trematode resistente al
triclabendazol la cual seraacute utilizada en futuras investigaciones Los resultados
preliminares utilizando RAPD-PCR con ADN de cepas de F hepatica sensibles o
resistentes al triclabendazol en el valle de Fiambalaacute presentaron diferencias significativas
entre ellas las cuales podriacutean ser uacutetiles en la deteccioacuten de cepas de campo de F
hepatica resistentes al triclabendazol (Scarcella et al 2011) Los resultados obtenidos
son altamente indicativos de la presencia de F hepatica TCBZ-resistente en animales del
valle de Fiambalaacute
Tal como lo proponen Olaechea et al (2011) las estrategias para minimizar el desarrollo
de resistencia antiparasitaria necesitan incluir el uso de combinaciones sineacutergicas de
drogas junto con el disentildeo de programas integrados de manejo y la buacutesqueda de
alternativas a los faacutermacos en particular las vacunas (Fairweather y Boray 1999)
Melero et al (1991) por primera vez en el paiacutes utilizaron triclabendazol para un
tratamiento humano en la ciudad de Coacuterdoba y a partir de ese caso se indica como
droga de eleccioacuten en las personas enfermas de Fasciolosis Se cuenta con una amplia
revisioacuten sobre el uso de TCBZ en el control de la Fasciolosis (OMS 2006) donde se
alerta sobre la gravedad que la resistencia al faacutermaco demostrada en animales se
presente en humanos especialmente en nintildeos (Hillyer et al 2001)(Esteban et al 2002)
A pesar que en diciembre de 1997 el Comiteacute de Expertos de la Organizacioacuten de las
Naciones Unidas (ONU) recomendoacute incluir al triclabendazol en la lista de drogas
esenciales (Savioli et al 1999) el triclabendazol de uso veterinario ha sido utilizado en
Argentina para el tratamiento de la Fasciolosis humana mostrando una buena eficacia y
tolerabilidad con escasos efectos adversos (Jave et al 1999)
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103 - EN LOS LIMNEIDOS
Lymnaea viator era la uacutenica especie involucrada en la transmisioacuten de F hepatica en la
provincia de Catamarca Bacigalupo la citoacute por primera vez en 1939 al encontrarla en los
alrededores de la ciudad de San Fernando del Valle En la deacutecada de 1980 fue
reconocida en trabajos arqueoloacutegicos realizados por Morton (1986) en el departamento
Santa Mariacutea mientras Ubaid (1989) la halloacute en el departamento Pacliacuten y en este estudio
en el valle de Fiambalaacute En los restantes departamentos donde se presenta la infeccioacuten
por F hepatica se desconoce queacute especie de limneido actuacutea como hospedador
intermediario ya que no se han llevado a cabo estudios epidemioloacutegicos integrales y la
prevalencia de Fasciolosis en el ganado bovino es estimada sin corroborar los datos en
los decomisos de hiacutegados en mataderos municipales
Desafortunadamente la mayoriacutea de las especies de limneidos presentan un fenotipo
similar con caracteriacutesticas morfoloacutegicas y morfomeacutetricas que hacen muy difiacutecil su
diferenciacioacuten lo que a veces incluso impide su clasificacioacuten La similitud morfoloacutegica
puede ser consecuencia para Bargues et al (2012) de una evolucioacuten convergente hacia
la adaptacioacuten a un comportamiento anfibio
1031 - Caracteriacutesticas fenotiacutepicas
El estudio fenotiacutepico realizado en el valle de Fiambalaacute ha demostrado que en la
variabilidad intraespeciacutefica de L neotropica y L viator existe superposicioacuten en todas las
caracteriacutesticas de la conchilla con excepcioacuten de la longitud maacutexima que puede ser maacutes
larga en L viator Desafortunadamente no hay ninguna conclusioacuten definitiva sobre esta
caracteriacutestica potencialmente diferente dependiendo del crecimiento de la conchilla
Ademaacutes las dos especies coexisten en las mismas colecciones de agua recordando una
situacioacuten similar que Mera y Sierra (2010) encuentra en muchos lugares de la provincia
de Mendoza donde hay superposicioacuten de especies Tambieacuten para Bargues et al (2011 a)
un fenoacutemeno que lleva a la confusioacuten entre los limneidos se debe a la imposibilidad de
distinguir entre especies y a las repercusiones para la transmisioacuten de la enfermedad
atribuidas a L truncatula y L schirazensis
Se presentan en Catamarca varias zonas endeacutemicas de Fasciolosis animal en las que no
se conoce la especie de limneido involucrada En algunos departamentos o regiones
donde pueden coexistir varios caracoles intermediarios no se sabe cuaacutel es el principal y
cuaacutel el potencial tal como Iturbe y Muntildeiz (2012) demuestran que ocurre en Cuzco Peruacute
En el valle de Fiambalaacute como biotopo de colecta se halloacute ademaacutes L neotropica que
adquiere importancia en la dispersioacuten geograacutefica y colonizacioacuten de nuevas poblaciones
de limneidos introducidos en Argentina
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1032 Importancia de las influencias ambientales
A diferencia de lo que sostienen Pino et al (1995) las condiciones climaacuteticas de la zona
de estudio que podriacutean parecer desfavorables a la presencia de limneidos (escasos diacuteas
de lluvia y temperatura maacutexima elevada) es relevante sentildealar la importancia de las
condiciones micro climaacuteticas para el desarrollo del ciclo bioloacutegico del trematodo
Para Malone et al (1998) la asociacioacuten entre la proporcioacuten de casos de Fasciolosis y la
zona de estudio estaacute relacionada con la temperatura del lugar En la mayoriacutea de las
regiones donde la enfermedad se presenta el ciclo de vida se completa maacutes raacutepidamente
porque las temperaturas pueden ser ideales para el raacutepido desarrollo del paraacutesito en su
hospedador intermedio mientras que en otras regiones pueden tardar hasta maacutes de un
antildeo para completarlo
Como consecuencia la expresioacuten de la enfermedad y la proliferacioacuten se pueden retrasar
o incluso verse minimizada Conforme a Mas-Coma (2001) las mayores altitudes no son
consideradas negativas y se atribuye a que el terreno montantildeoso presenta depresiones
con acumulacioacuten de agua especialmente en eacutepocas de alta precipitacioacuten que se tornan
las ideales para el haacutebitat del caracol hecho que no pudo demostrarse en este estudio
por sobre los 2800 msnm
La precipitacioacuten como variable es abordada en sus estudios de Fasciolosis por Malone
et al (1998) al sostener que proporciona una condicioacuten adecuada para el haacutebitat de
caracoles Aunque el mayor riesgo de ocurrencia de la enfermedad se produce en
lugares donde el valor de la precipitacioacuten anual es alto asociada con la consiguiente
humedad del suelo en la zona de estudio de esta tesis no se ha visto disminuido el
desarrollo de los caracoles a pesar de un menor volumen de precipitacioacuten
1033 - Estudios en el laboratorio
En el laboratorio las teacutecnicas de criacutea e infeccioacuten experimental de caracoles se mostraron
aptas para el mantenimiento de los moluscos y para la confirmacioacuten como hospedador
intermediario de F hepatica en la regioacuten Son teacutecnicas sencillas simples y que no
requieren muchos cuidados salvo el inconveniente de la contaminacioacuten del medio donde
se los conserva En cuanto a las incubaciones de huevos para la obtencioacuten de miracidios
utilizados en la infeccioacuten de los limneidos se obtuvieron resultados de infeccioacuten
relativamente bajos (no maacutes del 4285)
Para el diagnoacutestico de infecciones de F hepatica en su hospedador intermediario Pointer
et al (2006) utilizan la observacioacuten mediante el examen microscoacutepico de los estadios en
desarrollo dentro del molusco con o sin el aplastamiento del caracol En la tesis se
comprueba que estos procedimientos son tediosos y requieren largas horas de trabajo
ademaacutes de un ojo entrenado en la identificacioacuten parasitaria debido a que las infecciones
en el periacuteodo prepatente (sin emisioacuten de cercarias) son difiacuteciles de identificar Por otra
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parte el miracidio que ingresoacute recientemente soacutelo puede visualizarse mediante cortes
histoloacutegicos La emisioacuten de cercarias utilizada en este trabajo puede ofrecer baja
sensibilidad de deteccioacuten de los estadios tempranos del paraacutesito pero ha demostrado
resultados positivos
Otra dificultad en la deteccioacuten e identificacioacuten del trematode se produce cuando los
caracoles colectados en el campo mueren antes de llegar al laboratorio o durante el
periacuteodo de observacioacuten para la emisioacuten de cercarias La muerte del hospedador
intermediario con la consiguiente lisis tisular hace imposible la observacioacuten de las larvas
que pudieran estar presentes hecho no ocurrido en este estudio ya que el porcentaje de
limneidos muertos fue bajo
1034 - Identificacioacuten microscoacutepica y molecular
Si se considera a la microscopiacutea como la prueba de referencia que arroja los resultados
absolutos (prueba ldquogold standardrdquo) la especificidad para la teacutecnica de PCR utilizada en
esta investigacioacuten resultariacutea baja Seguacuten Cucher et al (2005) esto podriacutea interpretarse
como que la teacutecnica molecular es altamente inespeciacutefica dado el mayor nuacutemero de
positivos obtenidas por la misma Sin embargo la PCR se fundamenta en la identificacioacuten
genoacutemica del paraacutesito dentro del caracol realizando estudios detallados de la secuencia
del amplicoacuten generado y deberiacutea ser considerada tan especiacutefica como la microscopiacutea En
cuanto a la sensibilidad empleando a la microscopiacutea como prueba ldquogold standardrdquo la
PCR detecta la totalidad de los individuos infectados y un mayor nuacutemero de ejemplares
infectados imperceptibles por anaacutelisis directo De acuerdo con Hamburger et al (2004) al
considerar como verdaderos positivos a aquellos caracoles que fueron detectados por
PCR la sensibilidad del anaacutelisis parasitoloacutegico directo seraacute baja debido a que los
estadios larvales dentro del molusco pueden no detectarse Esto demuestra la menor
sensibilidad del anaacutelisis directo frente a la teacutecnica molecular la cual presentoacute un miacutenimo
de deteccioacuten comparable a una porcioacuten de un miracidio mientras que el anaacutelisis directo
se limita a detectar solamente cercarias y en algunos casos redias
Los resultados obtenidos por microscopiacutea oacuteptica son un reflejo del balance entre las
condiciones abioacuteticas que deben enfrentar el paraacutesito y su hospedador intermediario y la
iacutentima relacioacuten que se establece entre ambos una vez que el miracidio logra ingresar al
caracol Esto es asiacute porque ambos organismos son absolutamente dependientes de las
condiciones de humedad y temperatura del medio para poder sobrevivir y cumplir su ciclo
de vida y porque los valores de prevalencia obtenidos por el anaacutelisis directo
corresponden a las infecciones exitosas en las que el paraacutesito logroacute sobrevivir al sistema
de defensa interno del molusco Por lo tanto se infiere que la regioacuten del valle de
Fiambalaacute es apta para el desarrollo de ambos organismos por los factores mencionados
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anteriormente o porque la susceptibilidad del hospedador a la infeccioacuten la infectividad
del trematode o la oferta de paraacutesito son elevadas
En este trabajo se utilizoacute la teacutecnica de microscopiacutea para detectar infeccioacuten en limneidos y
se identificoacute a F hepatica a partir de la morfologiacutea de las redias y cercarias por
considerar que estas teacutecnicas son maacutes econoacutemicas para detectar infeccioacuten en caracoles
provenientes del campo En un todo de acuerdo con Fried (1997) se observoacute que las
cercarias identificadas morfoloacutegicamente como de F hepatica se enquistaron sobre
distintas superficies lo que permitioacute ratificar su identidad ya que las pocas especies de
trematodos que presentan metacercarias con este comportamiento poseen una
morfologiacutea muy distinta a la de F hepatica
El meacutetodo molecular debe ser empleado para detectar infecciones naturales aplicarse en
estudios epidemioloacutegicos a gran escala y para establecer la distribucioacuten geograacutefica del
paraacutesito estudiando nuevas zonas sin reportes de enfermedad Tambieacuten puede aplicarse
a determinar la prevalencia de infeccioacuten El liacutemite de deteccioacuten obtenido puede ser
considerado satisfactorio desde el punto de vista bioloacutegico ya que seguacuten la teacutecnica
desarrollada por Kaplan et al (1995) un umbral de deteccioacuten miacutenimo de 1ng es suficiente
para detectar la presencia de un miracidio a las 4 horas post-infeccioacuten Por lo tanto la
teacutecnica utilizada en esta tesis posee la sensibilidad necesaria para detectar al paraacutesito de
forma temprana en su hospedador intermediario
Aunque la determinacioacuten de la infeccioacuten por microscopiacutea y morfologiacutea posee ciertas
ventajas frente a otras teacutecnicas maacutes modernas como las de PCR ya que permiten
identificar distintos estadios larvales y tambieacuten se pueden reconocer infecciones exitosas
a partir del hallazgo de formas infectivas como lo demostraron Caron et al (2008) la
identidad de las formas inmaduras tambieacuten pudo ser confirmada por PCR
A pesar que Rognlie et al (1996) observaron con respecto al hospedador intermediario
que F hepatica es capaz de propagarse infectando unos pocos caracoles dentro de una
poblacioacuten seguramente debido a su gran capacidad de multiplicacioacuten asexual dentro del
hospedador intermediario los limneidos observados en el laboratorio no presentaron
numerosas formas intermedias que permitieran reconocerlas faacutecilmente
La prevalencia de infeccioacuten natural por F hepatica registrada en limneidos durante el
estudio fue de 25 considerando soacutelo a los caracoles estudiados en el Instituto Malbraacuten
Este nivel de infeccioacuten es similar al 2 registrado en L truncatula en la provincia de
Neuqueacuten por Rubel et al (2005) y en L viatrix en la provincia de Mendoza por Issia et al
(2008) y superior al 07 registrado en L viatrix en los valles Andino-Patagoacutenicos de la
provincia de Chubut por Kleiman et al (2007) o a los 014 y 122 presentados por
Ueta (1980) en Brasil Estos valores estaacuten dentro del rango de variabilidad que presenta
la prevalencia de infeccioacuten natural por F hepatica en su hospedador intermediario que
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para Malone et al (1984) y Rognlie et al (1996) oscila entre 001 y 883 no soacutelo
entre especies de caracoles sino para una misma especie entre regiones como afirma
Gutieacuterrez et al (2005) Esta variabilidad tambieacuten refleja la dificultad para comparar el rol o
la importancia de las distintas especies de limneidos en la transmisioacuten de F hepatica Lo
que siacute es posible afirmar es que con bajas prevalencias en el caracol se observan
prevalencias mayores a 25 en el hospedador definitivo como tambieacuten lo demuestran
Kleiman et al (2007) Rubel et al (2005) y esta tesis lo cual refleja la eficiencia en la
transmisioacuten de F hepatica
Esta comparacioacuten permite concluir que en la zona de estudio Lymnaea spp es un
hospedador intermediario capaz de multiplicar al paraacutesito exitosamente y asegurar la
endemicidad de la infeccioacuten Las caracteriacutesticas que le ayudan a F hepatica a adaptarse
y establecerse exitosamente en ambientes con distintas condiciones son como afirman
DeKock et al (1989) su capacidad para reproducirse por autofecundacioacuten su alto
potencial reproductivo y su tolerancia a un amplio rango de temperaturas como
demostraron Harris y Charleston (1977 c)
1035 - Caracteriacutesticas moleculares
Las secuencias obtenidas demuestran la presencia de L neotropica en el valle de
Fiambalaacute lo que confirma el primer hallazgo de esta especie en Catamarca y en las
provincias del noroeste El hallazgo antildeade complejidad a la transmisioacuten y a la
epidemiologiacutea de Fasciolosis Las caracteriacutesticas ecoloacutegicas de este limneido que vive
en colecciones pequentildeas y superficiales de agua frecuentadas por el ganado sugieren
que puede ser llevado de un lugar al otro permaneciendo en el barro seco de las pezuntildeas
de los animales que las transportan de modo similar a como plantea Mas-Coma et al
(2009) ocurre con L truncatula
L viatrix L truncatula y L neotropica son limneidos muy similares desde el punto de
vista fenotiacutepico incluyendo para Samadi et al (2000) y Pointier et al (2006) las
caracteriacutesticas de la conchilla y la anatomiacutea del caracol o caracteriacutesticas ecoloacutegicas
seguacuten Euzeby (1971) Mera y Sierra (2001) y Ciocco y Scheibler (2008) Esta semejanza
planteoacute un gran problema en el trabajo de campo al no poder tener manera de
diferenciarlos por lo que se recurrioacute a obtener secuencias del marcador de ADN para
poder distinguir entre una y otra especie
Por otra parte el problema de la diferenciacioacuten tambieacuten se refiere a varias teacutecnicas
moleculares que no muestran suficiente precisioacuten Por ejemplo las teacutecnicas moleculares
que se basan en el gen 18S ARNr o partes de eacutel como la heacutelice E10-1 de la regioacuten
variable V2 que es uacutetil para la diferenciacioacuten de limneidos europeos utilizada por
Bargues y Mas-Coma (1997) evidentemente no son uacutetiles en la Argentina debido a la
existencia de especies como L viator y L neotropica que presentan ideacutentica secuencia
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18S En consecuencia la teacutecnica recientemente propuesta por Duffy et al (2009) basada
en la secuencia 18S en estrategia de PCR en tiempo real para la discriminacioacuten raacutepida
entre las principales especies de limneidos de Argentina no se puede aplicar porque no
distingue entre estas dos especies
Todo sugiere que probablemente errores de clasificacioacuten de limneidos se pueden incluir
en varios de los estudios sobre Fasciolosis realizados en Argentina en la que L viator
participa especialmente en la transmisioacuten de la enfermedad Muchos de estos trabajos
probablemente incluiacutean L neotropica o incluso L truncatula Por lo tanto se necesitan
anaacutelisis moleculares apropiados para evaluar la distribucioacuten geograacutefica de cada una de
estas tres especies de limneidos en Argentina para las que aparecen ITS-2 ITS-1 y cox1
como los marcadores maacutes uacutetiles
1036 - Lymnaea neotropica
Las poblaciones de L neotropica del valle de Fiambalaacute presentan secuencias ideacutenticas
para los cuatro marcadores de ADN utilizados incluyendo dos nuevos haplotipos de ITS-
1 y cox1 (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) El nuevo haplotipo ITS-1 (Lneo-HB) no es de
utilidad dada la uniformidad hasta ahora detectada en el nivel de los separadores de
ADNr nuclear Del ITS-1 soacutelo se conoce el haplotipo (Lneo-HA) previamente informado
de Lima (localidad tipo) (Bargues et al 2007 a) y Cajabamba (Bargues et al 2012) en el
Peruacute y tambieacuten en Perdriel Departamento de Lujaacuten de Cuyo Mendoza Argentina (Mera
y Sierra et al 2009) El nuevo haplotipo del marcador de ADN mitocondrial (Lneo-cox1e)
se diferencia de otros haplotipos cox1 descritos para la especie en paiacuteses como Peruacute
Venezuela y Argentina Este uacuteltimo nuevo haplotipo Lneo-cox1e soacutelo muestra identidad
con la secuencia cox1 del NTC2 aislada (JN872453) e informada anteriormente para la
misma especie de limneidos en Mendoza (Standley et al 2013) aunque el fragmento
disponible a partir de ese aislamiento es maacutes corto (655 pb vs 672 pb)
Los haplotipos encontrados en los otros dos marcadores en L neotropica uno en ADNr
ITS-2 (Lneo-H1) y el otro en el ADNmt 16S (Lneo-16SA) fueron informados en Perdriel
(Mera y Sierra et al 2009) Tambieacuten se detectaron estos dos haplotipos ITS-2 y 16S en el
Peruacute en la localidad de Lima (Bargues et al 2007 a) y tambieacuten en Cajamarca (Bargues
et al 2012)
1037 - Lymnaea viator
De L viator se han encontrado en esta investigacioacuten 4 nuevos haplotipos ADNr ITS-2 y
ITS-1 y ADNmt 16S y cox1 (Veacutease anexo Tabla 13 pp 174) La deteccioacuten en la
poblacioacuten de limneidos de un nuevo haplotipo en todos los marcadores estudiados es
realmente sorprendente Previamente en diferentes localidades de Chile Argentina y
Uruguay fueron descritos haplotipos y se aislaron secuencias de los mismos marcadores
de ADN (Veacutease anexo Tablas 16-19 pp 177-180)
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El anaacutelisis de secuencias de los 4 marcadores de ADN de L neotropica y L viator
disponibles en las bases de datos de secuencias muestra que varias secuencias fueron
depositadas sin verificar antes si la misma ya estaba alliacute Por ejemplo en el nivel ITS-2
los nuacutemeros de secuencia de adhesioacuten HQ283265 y JN614465 correspondientes a L
viator de Riacuteo Negro Argentina son ideacutenticos a la secuencia AM412224 de L viator
ventricosa H1 de la localidad tipo que es tambieacuten de Riacuteo Negro (Bargues et al 2007 a)
Del mismo modo el nuacutemero de ITS-1 secuencia de adhesioacuten HQ283254 es ideacutentica a la
secuencia AM412227 de L viator ventricosa HA de la localidad tipo de Riacuteo Negro
(Bargues et al 2007 a) Situaciones similares se encuentran en secuencias de ADNmt tal
como la secuencia de L neotropica 16S JN872473 que es ideacutentica a HE610433 y que es
el haplotipo Lneo-16SA de la localidad tipo de la especie (Bargues et al 2012) Tambieacuten
la secuencia cox1 de L viator nuacutemero JN614397 de Riacuteo Negro es ideacutentica a AM494010
de Lvia-cox1a de la localidad de Riacuteo Negro (Bargues et al 2007 a) Ademaacutes las
secuencias depositadas en las bases de datos como pertenecientes a L Viator ITS-1
(JF960165 y JF960166) en realidad pertenecen a L neotropica aunque la adscripcioacuten de
las especies fue corregida en la publicacioacuten (Sanabria et al 2013)
Desde el punto de vista taxonoacutemico-sistemaacutetico hay que sentildealar que estas 2 especies de
limneidos han sido re-atribuidas al geacutenero Galba en la literatura reciente (Standley et al
2013) Este cambio parece ser precipitado dadas las diferencias en los acuerdos de rama
que aparecen en diferentes aacuterboles filogeneacuteticos en funcioacuten de las especies incluidas en
los anaacutelisis (ver Bargues et al 2011 a) Por lo tanto ambas especies se mantienen aquiacute
en el geacutenero Lymnaea sensu lato conforme a artiacuteculos anteriores sobre el mismo tema
(Bargues et al 2007 a 2011 a b c 2012)
El hallazgo de un alto nuacutemero inusual de haplotipos de ADN en ambas especies de
limneidos y los factores climaacuteticos extremos (casi total falta de precipitaciones y de
humedad) impropio de F hepatica y del desarrollo de los caracoles de agua dulce
demuestran que los focos de transmisioacuten son completamente aislados A su vez se
puede concluir que tanto los limneidos como F hepatica llegaron al valle a traveacutes de la
introduccioacuten de ganado Por otra parte las diferencias de ADN en relacioacuten con otras
poblaciones de L neotropica y de L viator estudiadas previamente en Argentina
sugieren que este fenoacutemeno de introduccioacuten fue independiente de los movimientos de
extensioacuten que permitieron que estas dos especies de limneidos se expandan por el paiacutes
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CONCLUSIONES
Los hallazgos del estudio sobre la epidemiologiacutea de la Fasciolosis realizado en el valle de
Fiambalaacute y los correspondientes anaacutelisis en seres humanos animales y hospedadores
intermedios han permitido establecer ciertos hechos y alcanzar una serie de conclusiones
que a continuacioacuten se enumeran
La endemia poblacional de Fasciolosis estariacutea determinada por los siguientes
factores a) la presencia de reservorios en animales infectados b) los caracoles
limneidos susceptibles (hospedadores intermediarios) que amplifican la
produccioacuten de cercarias
El nuacutemero de casos de Fasciolosis humana diagnosticados en el valle de
Fiambalaacute es mucho mayor que los encontrados en otras regiones del paiacutes
transformaacutendola en una zona endeacutemica donde los ejemplares de F hepatica y los
hospedadores intermedios presentan caracteriacutesticas morfoloacutegicas y moleculares
particulares
Debido a la importancia cliacutenica y patogenicidad de la Fasciolosis los anaacutelisis de
prevalencia obtenidos permiten concluir que la presencia de Fasciolosis humana
debe ser considerada como una patologiacutea infecciosa de gran importancia en
Salud Puacuteblica
La prevalencia en seres humanos obtenida mediante estudios inmunoloacutegicos
convierten a la regioacuten estudiada en la de prevalencia maacutes elevada de la Repuacuteblica
Argentina y debe ser considerada como hiperendeacutemica
La comparacioacuten de diferentes metodologiacuteas de diagnoacutestico permite afirmar que
con la teacutecnica de ELISA se logroacute el mayor nuacutemero de diagnoacutesticos demostrando
relaciones estadisticamente significativas con la edad y la eosinofilia
El presente estudio sobre la epidemiologiacutea de la Fasciolosis humana abarcoacute 305
pacientes siendo la mayor casuiacutestica estudiada en Argentina y reveloacute una mayor
predominancia en la edad comprendida entre 5 y 19 antildeos
El dolor abdominal tipo coacutelico en epigastrio e hipocondrio derecho es el siacutentoma
maacutes frecuente en Fasciolosis ya sea en la fase aguda o croacutenica de la
enfermedad tanto en nintildeos como en adultos
La hepatomegalia y la eosinofilia caracteriacutesticas de la fase aguda no estaacuten
presentes necesariamente en todos los pacientes croacutenicos por lo que su ausencia
no descarta la posibilidad de esta parasitosis en estos casos
La interpretacioacuten de las manifestaciones cliacutenicas el uso de teacutecnicas de
diagnoacutestico por imaacutegenes la aplicacioacuten de meacutetodos de diagnoacutestico etioloacutegico
mediante microscopiacutea en materiales de heces y el uso de herramientas aplicadas
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a diferentes especiacutemenes bioloacutegicos permitieron mediante su utilizacioacuten
sistemaacutetica e integrada realizar el diagnoacutestico e identificacioacuten de Fasciolosis
El estudio ha estimado por primera vez en la provincia de Catamarca una alta
prevalencia de Fasciolosis en la poblacioacuten animal -cameacutelidos sudamericanos
mulares y rumiantes menores- con la teacutecnica de SDSS que permitioacute una faacutecil
identificacioacuten de huevos en heces
El uso integrado de diversas teacutecnicas microscoacutepicas permitioacute una mejor
comprensioacuten de la morfologiacutea de F hepatica Los resultados demostraron
diferencias en las muestras de cada localidad principalmente en la distribucioacuten y
cantidad de espinas en el tegumento
El marcador CO1 muestra que los ejemplares adultos extraiacutedos de hiacutegados de los
animales no se diferencian de otros en las comparaciones efectuadas en distintas
localizaciones
El uso de faacutermacos antihelmiacutenticos es la uacutenica herramienta que se dispone en el
presente frente a Fasciolosis aunque el fenoacutemeno de resistencia encontrado es
un hecho altamente preocupante y es necesario definir nuevas estrategias de
tratamiento
Por los resultados obtenidos se concluye que las condiciones ambientales a
pesar de sus caracteriacutesticas extremas en el valle de Fiambalaacute son favorables
para la mantencioacuten y desarrollo de los caracoles en las zonas donde se localizan
fuentes permanentes de agua
Las teacutecnicas de criacutea e infeccioacuten experimental se mostraron aptas para el
mantenimiento del molusco en el laboratorio y para la confirmacioacuten de la infeccioacuten
natural y experimental de los limneidos con formas larvarias de F hepatica
La prevalencia general de limneidos naturalmente infectados en colectas
realizadas en las vegas estudiadas denota la expansioacuten de F hepatica en el valle
de Fiambalaacute a niveles preocupantes
Las especies de limneidos halladas no se diferencian por su aspecto externo
(morfologiacutea de la conchilla) y fueron necesarios estudios moleculares para
diferenciarlos
Se demostroacute que los caracoles recolectados en la zona de estudio hospedadores
intermediarios de F hepatica son de las especies L viator y L neotropica las
que cohabitan en los mismos biotopos
El hallazgo de L neotropica constituye el primer registro en Catamarca y la
Regioacuten Noroeste Argentina
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La infeccioacuten natural por F hepatica en L neotropica constituye el primer
reconocimiento para la Argentina
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RECOMENDACIONES
Las soluciones para los problemas mencionados no pueden ser pensadas desde una
perspectiva uacutenica ni desvinculada del aacutembito regional La situacioacuten hallada en el aacuterea
indica que para el estudio de Fasciolosis es imperioso el trabajo en equipos
multidisciplinarios que aborden el tema desde un enfoque integral
Es necesario contar en los Centros de Salud con teacutecnicas de diagnoacutestico de mayor
sensibilidad y especificidad tanto para la cliacutenica para determinar casos agudos o como
prueba de tamizaje La ausencia de implementacioacuten de meacutetodos diagnoacutesticos confiables
en el Aacuterea Programaacutetica es el principal factor que lleva a subestimar esta zoonosis
Los enfermos infectados por F hepatica muchas veces pasan por los servicios cliacutenicos
sin ser jamaacutes diagnosticados resultando preciso corregir tan grave deficiencia Los
pacientes que presentan dolor abdominal y una alta eosinofilia deben ser
cuidadosamente estudiados con el fin de descartar esta parasitosis
Se comproboacute que Fasciolosis es endeacutemica en la regioacuten y la situacioacuten debe ser
reconocida como una emergencia de Salud Puacuteblica para la aplicacioacuten de las teacutecnicas
diagnoacutesticas de sedimentacioacuten raacutepida y ELISA y agilizar la implementacioacuten de la terapia
farmacoloacutegica con triclabendazol (Egatenreg) o el uso de futuras drogas en casos de
resistencia
Por otro lado aunque no es propoacutesito de esta tesis es difiacutecil estimar el impacto
econoacutemico de la Fasciolosis humana -que se demostroacute afecta principalmente a los nintildeos-
pero los efectos de la infeccioacuten y las secuelas no solo tienen un impacto econoacutemico en el
Sistema de Salud sino tienen un impacto negativo considerable en el desarrollo y la
salud de los pacientes infectados especialmente en los grupos etarios maacutes joacutevenes
La informacioacuten obtenida contribuye a identificar el riesgo en la regioacuten y deberiacutea permitir
en adelante dirigir las actividades de prevencioacuten y control asiacute como estimular al personal
de salud en la buacutesqueda de este diagnoacutestico durante su actividad asistencial
La infeccioacuten por F hepatica afecta significativamente tanto a los animales como al ser
humano en esta regioacuten y se requiere que las autoridades de los Ministerios
correspondientes tengan una mayor participacioacuten en el control de esta parasitosis tanto
desde el punto de vista educativo como para controlar el efecto que tienen los animales
como hospedadores definitivos en la diseminacioacuten de la Fasciolosis puesto que estaacuten
expuestos a constante reinfeccioacuten
Para tratar de interrumpir la transmisioacuten de la Fasciolosis en los seres humanos se
requieren dos medidas paralelas La primera consiste en establecer programas eficaces
de Salud Puacuteblica Veterinaria para contener las fuentes de infeccioacuten en los animales La
segunda consiste en educar a las personas que viven en las aacutereas endeacutemicas sobre los
riesgos de consumir las plantas acuaacuteticas no cocidas agua y sobre la importancia de la
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eliminacioacuten segura de los desechos humanos Ademaacutes se propone gestionar
calentadores solares individuales que permitan en cada vivienda obtener agua hervida
para consumo e higiene de vajillas y verduras
Se precisa el control de la Fasciolosis animal que concurrentemente incluya el
tratamiento masivo del ganado para evitar la infeccioacuten humana Los resultados sugieren
que de no contar con planeamientos estrateacutegicos teacutecnicamente bien estructurados la
probabilidad de emergencia de paraacutesitos resistentes a triclabendazol es alta y deberiacutea
tratarse a los animales con fasciolicidas alternativos como clorsulon o closantel que han
mostrado alta efectividad de cura de la infeccioacuten La gran dependencia de un uacutenico
faacutermaco pone liacutemites y torna necesarias estrategias de tratamiento de la Fasciolosis En
caso que la resistencia se desarrolle auacuten maacutes la perspectiva seraacute alarmante
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Rica Editorial Libro Universitario Regional 2003 186 p
170
Universidad Nacional de Catamarca - Secretariacutea de Ciencia y Tecnologiacutea Editorial Cientiacutefica Universitaria
ISBN 978-987-661-270-8
Yamaguti S Bieber D Ringold G Mansour T The Digenic Trematodes of Vertebrates
Vol 1 and 2 Systema Helminthum Volume I Interscience Publishers NY 1958 1074 p
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ANEXOS
171
172
Universidad Nacional de Catamarca - Secretariacutea de Ciencia y Tecnologiacutea Editorial Cientiacutefica Universitaria
ISBN 978-987-661-270-8
Tabla 11 Caracteriacutesticas climaacuteticas del valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina de acuerdo con los diferentes sistemas de clasificacioacuten climaacutetica y los diferentes iacutendices climaacuteticos utilizados
Foco de transmisioacuten Valle de Fiambalaacute
Coordenadas 27deg29acute52acuteS 67deg35acute 535uml W
Altitud en metros 1630
Clase Koeppen BWk B = Clima aacuterido
D = Deseacutertico
k = Friacuteo
Clima Budyko Deseacutertico Iacutendice de sequiacutea por radiacioacuten 9236 Budyko evaporacioacuten en mmantildeo 151 Budyko escorrentiacutea en mmantildeo 0 Budyko evaporacioacuten en 100 Budyko escorrentiacutea en 0
Aridez Aacuterido Iacutendice de aridez 009 Iacutendice de humedad en -91 Iacutendice De Martonne 6 Deacuteficit de precipitacioacuten en mmantildeo 1547
Iacutendice continental de Gorczynski 385
173
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ISBN 978-987-661-270-8
Tabla 12 Datos comparativos de los tamantildeos obtenidos en ejemplares de F hepatica
del valle de Fiambalaacute con las de diferentes lugares estudiados
Paraacutemetros Catamarca Salta Cordeiro Larvas Galicia
Largo del cuerpo (mm) Ancho del cuerpo (mm)
2438 plusmn 223
1044 plusmn 129
1492 plusmn 182
878 plusmn 080
2068 plusmn 268
1073 plusmn 186
3447 plusmn 337
1233 plusmn 206
1625 plusmn 20
971 plusmn 125
Razoacuten LCAC Largo del cono(mm) Ancho del cono (mm) Aacuterea de la ventosa oral(mm) Aacuterea de la ventosa ventral(mm) Distancia VO- VV (mm)
237 plusmn 034
261 plusmn 030
343 plusmn 046
041 plusmn 007
110 plusmn 036
214 plusmn 022
171 plusmn 022
180 plusmn 023
285 plusmn 032
042 plusmn 004
120 plusmn 015
139 plusmn 018
196 plusmn 031
314 plusmn 085
250 plusmn 063
039 plusmn 006
090 plusmn 037
144 plusmn 021
286 plusmn 048
365 plusmn 060
481 plusmn 035
046 plusmn 016
120 plusmn 018
258 plusmn 020
------------------
174 plusmn 025
317 plusmn 032
041 plusmn 012
098 plusmn 028
------------------
L viator
17
4
Tabla 13 ADN ribosomal nuclear y haplotipo de ADN mitocondrial para la identificacioacuten de coacutedigo L neotropica y L viator colectados en el
valle de Fiambalaacute Catamarca Argentina
Especies de limneidos
Poblaciones ADNr ITS-2 ADNr ITS-1 ADNmt 16S ADNmt cox1
Lugar H Acc No H Acc No H Acc No H Acc No
Valle de Fiambalaacute Tinogasta
Nomenclatura de la combinacioacuten H
L neotropica Provincia de Catamarca 1 AM412225 B KT215347 16S-
A HE610433 e KT215350 Lneo-1B16SAcox1e
Valle de Fiambalaacute Tinogasta
Provincia de Catamarca 3 KT215348 C KT215349
16S-
B KT215352 d KT215351 Lvia-3C16SBcox1d
Nota H = haplotipo = Nuevos haplotipos para las correspondientes especies de limneidos = Haplotipos solamente preliminares debido a la secuencia
del gen incompleto
175
17
5
Tabla 14 Diferencias de nucleoacutetidos encontradas en el fragmento de la secuencia del gen 16S ADNmt de las poblaciones de L neotropica
estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos 16S aislados de la misma especie disponibles en GenBank
L neotropica haplotipos y aislamientos Paiacuteslugar Posicioacuten del Nucleoacutetido Largo GenBank (pb)
33 3333 1667777767 7777 4690124990 1348
L neo-16SA L neo-16SA
L neo-16S Aislada NtS1 L neo-16S Aislada NtS2 L neo-16S Aislada NtS3
L neo-16S Aislada NtS4
Peruacute Lima Cajamarca Argentina Tatoacuten Catamarca
Argentina Mendoza Argentina Mendoza
Argentina Mendoza Chivilcoy
Argentina Chivilcoy
TTCTTGCCCG A--G --
AAAAAAAT T-- Ghellip-- --
CTT TTGT
425 435 429 429 429
431
HE610433 HE610433 JN872471 JN872472 JN872473
JN872474
Nota Posicioacuten = nuacutemeros referidos a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con M EGA 60 = Ideacutenticas - =
Indeles = Trabajo propio Coacutedigos de haplotipos solamente provisionales debido a secuencias incompletas del gen
176
17
6
Tabla 15 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontradas en la secuencia de fragmento ADNmt del gen cox1 de las poblaciones de L
neotropica estudiadas de las colectas del valle de Fiambalaacute y otros haplotipos cox1 y aislamientos de la misma especie disponibles en
GenBank
L neotropica haplotipos
and aislamientos
Paislocalidad Nucleoacutetido posicioacuten Largo (bp)
Amino acido posicioacuten
GenBank
11 1111122222 2222233333 3333333333 4444444444 5555555555 55666666 1122
233334455 5667788912 4788912244 4777701233 4566777899 0222567889 0122335778 88333456 12722
9401392814 7076827676 4469865803 9136968139 5703358113 5369984032 1623132032 68039210 12315823
L neo-cox1a Peru Lima Peru
Cajamarca L neo-cox1b Argentina
Mendoza L neo-cox1c Venezuela
Carabobo L neo-cox1d Venezuela
Falcon L neo-cox1e Argentina
TatonCatamarca
TCAACCGAGT AGTCTTATTT ATTACAAATT ATAAAATTAA CTTAGAGACT ATGATTTTAG GGTCTCGAGA TAATTTTG 672 DIGIGAW F AM494008
helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphellipAhelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 672 S FN356741
helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphellipGhelliphellip TCGhelliphelliphellip hellipGhelliphelliphelliphelliphellip hellipThelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 672 JF461485 TGGTTTTTC TACTACTACA TAAGTGTTCA GCCTTAATC AAThellipTACTA TCTGCATA AAGTAhellipTTTG CTTACACA 672 V JF461486 Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 672 XXXXXXXX
L neo-cox1
aislada NtC3 Argentina Mza
B Aires Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 ---- JN872454
L neo-cox1 aislada NtC2
L neo-cox1
Argentina Mza Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphellipChelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 ---- JN872453 Argentina Mza Chelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphellipThelliphellip helliphelliphelliphelliphellip 655 --V-- JN872452
aislada NtC1
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizadas con MEGA 60 =
Ideacutenticas iquest= Aminoaacutecido indeterminado - = No secuenciado = Trabajo actual Coacutedigos soacutelo provisionales debidos a secuencias incompletas del Haplotipo
del gen
177
L via aislada VxI3 Argentina Lima Mendoza GCTTGC------- ------------------- --------C helliphelliphellip-- -------------- ----------------
L viaventricosa H1 Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT------------- CTCGC helliphellip--
L via aislada LVX3 Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT-------------- CTCGC helliphelliphellip-- GCTTGCTTGC TT-------------- CTCGC hellip hellip helliphellip-------
L viatrix Argentina Rio Negro GCTTGCTTGC TT-------------- -------- helliphelliphelliphelliphelliphellip hellip--- ----------------
423 JX536272 451 AM412224 451 JN614465 445 HQ283265
L via aislada VxI1 Argentina Agua Escondido Mza GCTTGCTTGC TT--------------- GCC--- ------------------ ------------------- --------------- 435 JX536268 L via aislada VxI2 Argentina Azufre Mendoza GCTTGCTTGC TTGCTTGCTT -------- --- ----------------- ------------------- ---------------- 416 JX536269 L via aisalda VxI4 Argentina Linero Mendoza - 436 JX536273
17
7
Tabla 16 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia ADNr ITS-2 de L viator en el valle de Fiambalaacute y otros de Argentina
y haplotipos ITS-2 aislados en la misma especie disponibles en el GenBank
L viator haplotipos Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank
y aislamientos (pb)
134444 4444444444 4444444444 4444444444 5555666666 6666777777 8888690223 3333333334 4444444445 5555555556
6789012345 6789012345 1234241130 1234567890 1234567890 1234567890
L via-H3
L via-H2 Argentina Tatoacuten Catamarca
Chile Casa Blanca Valparaiacuteso
-------------------- -------------------- ---- --GTGTTT TATATTATTA TCTTCTTTCT TTTTTTTCTC GCTTGCTT--- ----------------- ------- helliphellip-
436
443 KT215348
JN051366
Nota Posicioacuten = nuacutemeros referidos a posiciones variables obtenidos en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con MEGA 60 =
Ideacutenticas El sombreado corresponde a las posiciones de microsateacutelites - = Supresiones (en el aacuterea de microsateacutelites) = Trabajo actual =
secuencias ITS-2 incompletas en el 3
178
17
8
Tabla 17 Sitios polimoacuterficos que se encuentran en la secuencia del ADNr ITS-1 de L viator colectados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de
Argentina y haplotipos ITS-1 y aislamientos disponibles en GenBank
L viator haplotipos y Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank aislamientos
111111222234 1 1111111112 2222222223 3333333334 444446000034277729
1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 123451345683278988
(pb)
L via-HA L via-HB L via-HC L viatrix L via Aislada LVX3 L via Aislada Paysandu L via Aislada VxI1 L via Aislada VxI2 L via Aislada VxI3 L via Aislada VxI4
Argentina Rio Negro Chile Casa Blanca Valparaiacuteso
Argentina Tatoacuten Catamarca Argentina Rio Negro Argentina Rio Negro
Uruguay Paysanduacute Argentina Agua Escondido Mendoza Argentina
Azufre Mendoza Argentina Lima Mendoza
Argentina Linero Mendoza
ATCATTAACG AGTAGCAACA CAACATAACC TTACACTCGC ACAAGG----GCC----A
A ATTGTTGA--
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellipA ----TTTGA--
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip--------------
A hellip----T---------
helliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip----TGAC
---------- GAGTAGC A ----TTGA-- ---------- ---------- ---------- ---------------------------------------------------------- -----C----TTGA-- ---------- ---------- - Ahelliphellip ----TTGA--
---------- --------- Ahelliphellip-----ATTGA-
-
568
574 570 568
567 572
560 525 549
550
AM412227
JN051368 KT215349 HQ283254
JN614428 JF960167
JX536268 JX536269 JX536272 JX536273
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizados con MEGA 60 =
Ideacutenticas El sombreado corresponde a la posicioacuten de microsateacutelites - = Supresiones = Trabajo actual = ITS-2 secuencias incompletas 5 final
179
17
9
Tabla 18 Diferencias de nucleoacutetidos que se encuentran en la secuencia del gen ADNr 16S y fragmentos del gen
mitocondrial de L neotropica y L viator estudiados en el valle de Fiambalaacute y otros sitios de Argentina y haplotipos 16S
aislados en la misma especie disponibles en el GenBank
L neotropica y Viator haplotipos y Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Largo GenBank aislamientos (pb)
11112 233333333 116667 77777823394 607777778
346890 12345096982 122345681
L neotropica haplotipo L neo-16SA L neotropica haplotipo L neo-16SA
G neotropica aislado NtS1 G neotropica aislado NtS2 G neotropica aislado NtS3 G neotropica aislado NtS4
Peruacute Lima Peruacute Cajamarca Argentina Tatoacuten Argentina
Mendoza Argentina Mendoza
Argentina Mendoza Chivilcoy
Argentina Chivilcoy
CTTCCTT-GA CCAAG-C-TC GA-T-G -hellip helliphellip--hellip hellip-- hellipAAAAmdashA AA--hellip TT--- G--- --hellip ---- --- helliphellip-- hellip----
C--- helliphellip--T TTTGT
425 437 429 429 429
431
HE610433 HE610433 JN872471 JN872472 JN872473
JN872474
L viator haplotipo Lvia-16SA Chile Casa Blanca Valparaiacuteso --- helliphellipGGATT-C ---- 426 HE610434 L viator haplotipo Lvia-16SB Argentina Tatoacuten Catamarca --- helliphellipGGA-TTC ---- 438 KT215352 G viatrix aislado VxS2 Argentina Agua Escondido amp Azufre Mendoza --- helliphellipGGA-T-C ---- 429 JN872460 G viatrix aislado VxS9 Argentina Cholila Chubut Ghelliphellip--- helliphellipGGA-T-C hellip---- 429 JN872467 G viatrix aislado VxS8 Argentina Linero Mendoza --- GhellipA--T-C ---- 429 JN872466 G viatrix aislado VxS10 Argentina Lima Mendoza hellipChellip--- GhellipA--T-C ---- 429 JN872468 G viatrix aislado VxS4 Argentina Azufre Mendoza AA--- hellipGGA----T-C ---- 429 JN872462 G viatrix aislado VxS12 Argentina Linero Mendoza --- GAGA----T-C hellip---- 429 JN872470 G viatrix aislado VxS6 Argentina Azufre Mendoza GGAC --hellipGGA--T-C TT----- 429 JN872464 G viatrix aislado VxS5 Argentina Azufre Mendoza AAAA GGA--T-C hellip---- 430 JN872463 G viatrix aislado VxS11 Argentina Linero Mendoza GAC --hellipGA--T-C T TT--- 429 JN872469 G viatrix aislado VxS3 Argentina Azufre Mendoza GGhelliphellipGAC --helliphellipGGA-T-C TT---- 429 JN872461 G viatrix aislado VxS7 Argentina Azufre Mendoza hellipCAAAA GGA-T-C -- 430 JN872465 G viatrix aislado VxS1 Argentina Agua Escondido Mendoza GA AhellipGGA-T-CT TTA--- 431 JN872459
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten (se deben leer verticalmente) realizadas con
MEGA 60 = Ideacutenticas - = Indel = Trabajo actual Coacutedigos de Haplotipos soacutelo provisionales debido a secuencias incompletas del gen
180
1
1234567890 122222 2333334444 45556
1111111112 2222222125 7789212233 4447991678 84882 66666 6666 66666 6677
1234567890 1234567232 2568438905 3464259792 70230 34567 8901 1234567890 693523
18
0
Tabla 19 Diferencias de nucleoacutetidos y aminoaacutecidos encontrados en la secuencia del fragmento de ADNmt del gen cox1 de L viator
estudiado en el valle de Fiambalaacute de otros sitios de Argentina y haplotipos cox1 aislados de la misma especie disponibles en el
GenBank
L viator haplotipos y aislamientos
Paiacuteslugar Posicioacuten del nucleoacutetido Larg o
(pb)
Posicioacuten del aminoaacutecido
1122
1 276922
GenBank
L via-cox1a Argentina Riacuteo Negro ATATTGGTAC TCTATATATA ATCTTTGCCC CCGCTCGATG CCCGTTTCTA CTCTTTGATT TTTT 672 DIGTLYMIFG LSTLWF AM494010 L via-cox1b Chile Casa Blanca Valparaiacuteso T T helliphellipTThelliphellipA helliphelliphellipCCTC CTGChelliphellip hellip 672 helliphelliphellip KC JN051373 L via-cox1c Chile Casa Blanca Valparaiacuteso hellipT helliphelliphelliphellipT helliphellipTThelliphellipA helliphelliphellipCCTC TCTGChelliphellip hellip 672 helliphelliphellip KIC JN051374 L via-cox1d Argentina Tatoacuten Catamarca T T hellipTT TAhelliphelliphelliphellipC 672 hellip F KT215351 L via aislado VxC1 Argentina-Mendoza ---------------- hellipT T TAT helliphelliphellip TAhelliphelliphellipCG ---------- ------- 654 ------helliphellip F-- JN872449 L via aislado VxC2 Argentina-Mendoza ---------------- T helliphelliphelliphellipT TT TAhelliphelliphellipC ---------- ------- 654 ------ F-- JN872450 L via aislado VxC3 Argentina Chubut ---------------- helliphelliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphelliphelliphellip hellipC hellip ---------- -------- 654 ------ -- JN872451 L via aisladio LVX2 Argentina Rio Negro ------------------ ------------------ -------------------- helliphelliphelliphellip helliphelliphelliphelliphellip helliphelliphelliphellip 644 ------------------ JN614397
Nota Posicioacuten = nuacutemeros que se refieren a posiciones variables obtenidas en la alineacioacuten hecha con MEGA 60 = Ideacutenticas = Am inoaacutecido
indeterminado - = No secuenciado = Trabajo actual El sombreado corresponde a fragmentos maacutes cortos Coacutedigos soacutelo provisionales Haplotipo
debido a secuencias incompletas del gen
181
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Cod Haplotipos y aislamientos paraITS-1 000 000 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 1 KJ425594 L neotropica aislada Zavaliacutea 000 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 2 KJ425590 L neotropica aislada General Loacutepez 000 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 3 AM412228 L neotropica Lneo-HA 000 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 4 KJ425591 L neotropica aislada Caseros
1 AM412225 L neotropica Lneo-H1 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 5 J5F960165 L viator aislada San Pedro1 2 KJ425597 L neotropica aislada Zavaliacutea 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 6 KJ425595 L neotropica aislada Caseros 3 KJ425598 L neotropica aislada Caseros 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 7 KJ425593 L neotropica aislada Constitucioacuten 4 KJ425596 L neotropica aislada Constitucioacuten 000 000 000 5700 5700 5800 5800 5800 5700 5800 5900 5800 5900 8 KT215347 L neotropica Lneo-HB 5 JF514089 L neotropica Lneo-H2 400 400 400 400 000 100 100 100 000 100 200 100 200 9 AM412227 L viator ventricosa Lvia-HA 6 JN051366 L viator Lvia-H2 1300 1300 1300 1300 1600 100 100 100 000 100 200 100 200 10 HQ283254 L viator 7 JX536268 L viator aislado VxI1 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 000 100 000 100 000 100 11 JN614428 L viator aislada LVX3 8 JX536272 L viator aislado VxI3 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 000 100 000 100 000 100 12 JN051368 L viator Lvia-HB 9 JN614465 L viator aislado LVX3 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 100 000 100 000 100 13 JX536268 L viator aislada VxI1 10 HQ283265 L viator 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 000 100 200 100 200 14 JF960167 L viator aislada Paysanduacute 11 AM412224 L viator Lvia-H1 1400 1400 1400 1400 1700 100 100 200 000 000 100 000 100 15 JX536272 L viator aislada VxI3 12 JX536269 L viator aislado VxI2 1400 1400 1400 1400 1700 300 300 400 400 400 400 100 200 16 JX536273 L viator aislada VxI4 13 JX536273 L viator aislado VxI4 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 100 100 100 100 300 100 17 JX536269 L viator aislada VxI2 14KT215348 L viator Lvia-H3 1300 1300 1300 1300 1600 000 000 100 100 100 100 300 000 18 KT215349 L viator Lvia-HC
Cod Haplotipos y aislamientos para ITS-2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
18
1
Tabla 20 Distancias por pares entre secuencias de haplotipos ITS-2 e ITS-1 aislados de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60
Nota Por abajo de la diagonal = diferencias de caracteres totales a las ITS-2 por encima de la diagonal = diferencias de caracteres totales a las ITS-1 Las
correspondencias del coacutedigo de Haplotipo se enumeran en la Tabla 13
182
18
2
Tabla 21 Distancias por pares entre 16S y secuencias en haplotipos cox1 en aislamientos de L neotropica y L viator seguacuten MEGA 60 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Cod Haplotipo y aislamiento para 16S 000 800 100 000 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 1 HE610433 L neotropica Lneo-16SA 800 100 000 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 2 KT215347 L neotropica Lneo-16SB 900 800 900 1300 1300 1300 1400 1200 1200 1100 1100 1200 1000 1100 1300 1200 1100 3 JN872471 L neotropica aislado NtS1
1 AM494008 L neotropica Lneo-cox1a 100 500 600 600 600 700 500 600 800 600 1100 900 1000 1000 1000 1000 4 JN872472 L neotropica aislado NtS2 2 FN356741 L neotropica Lneo-cox1b 100 500 500 500 500 600 400 500 700 500 1000 800 900 1100 900 900 5 JN872473 L neotropica aislado NtS3 3 JF461485 L neotropica Lneo-cox1c 600 700 1000 1000 1000 1100 900 1000 1200 1000 1100 1300 800 1100 1400 800 6 JN872474 L neotropica aislado NtS4 4 JF461486 L neotropica Lneo-cox1d 7000 7100 7200 000 000 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 7 HE610434 L viator Lvia-16SA 5 KT215350 L neotropica Lneo-cox1e 000 100 600 7000 000 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 8 KT215352 L viator Lvia-16SB 6 JN872452 L neotropica aislado NtC1 100 200 700 7100 100 100 100 200 200 200 500 300 600 600 400 400 9 JN872460 L viator aisladoVxS2 7 JN872453 L neotropica aislado NtC2 000 100 600 7000 000 100 200 300 300 300 400 400 700 500 500 500 10 JN872467 L viator aislado VxS9 8 JN872454 L neotropica aislado NtC3 100 200 700 7100 100 200 100 100 300 100 600 400 500 700 500 500 11 JN872466 L viator aislado VxS8 9 AM494010 L viatrix ventr Lvia-cox1a 2800 2900 3300 6600 2800 2900 2800 2700 400 200 700 500 600 800 400 600 12 JN872468 L viator aislado VxS10 10 JN051373 L viator Lvia-cox1b 3300 3400 3800 7000 3300 3400 3300 3400 1100 400 700 100 800 800 200 600 13JN872462 L viator aislado VxS4 11 JN051374 L viator Lvia-cox1c 3400 3500 3900 7100 3400 3500 3400 3500 1200 100 700 500 600 800 600 600 14JN872470 L viator aislado VxS12 12 KT215351 L viator Lvia-cox1d 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 500 1200 1300 800 300 100 900 300 15JN872464 L viator aislado VxS6 13 JN872449 L viator aislado VxC1 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 700 1400 1500 200 900 900 300 700 16JN872463 L viator aislado VxS5 14 JN872450 L viator aislado VxC2 2900 3000 3200 6500 2900 3000 2900 2800 500 1200 1300 000 200 400 1000 200 17JN872469 L viator aislado VxS11 15 JN872451 L viator aislado VxC3 2900 3000 3400 6600 2900 3000 2900 2800 100 1200 1300 600 800 600 1000 400 18 JN872461 L viator aislado VxS3 16 JN614397 L viator aislado LVX2 2800 2900 3300 6600 2800 2900 2800 2700 000 1100 1200 500 700 500 100 800 19 JN872465 L viator aisladoVxS7
20 JN872459 L viator aisladoVxS1 Cod Haplotipo y aislamiento para cox1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Nota Debajo de la diagonal = diferencias de caracteres totales cox1 por encima de la diagonal = diferencias de caracteres totale s 16S Las
correspondencias del coacutedigo de Haplotipo se enumeran en la Tabla 13
Tabla 22 Promedio de las distancias geneacuteticas entre y dentro de L neotropica y L viator
Grupos
ITS-2
ITS-1
16S
cox1
analizados
L neotropica vs
1515
5790
856
3520
L viator (00354) (01163) (00202) (00554) L neotropica 160 000 (000) 433 1961 (solo) (00040) (00102) (0031) L viator (solo) 139 087 431 753 (0012)
(00035) (00017) (00102)
Nota Se utiliza como modelo de sustitucioacuten de nucleoacutetidos las diferencias totales (ts + tv) y los
meacutetodos p-distancias (entre pareacutentesis) Se muestra la serie de diferencias de base por sitio desde
un promedio de todos los pares de secuencias entre y dentro de grupos Menos del 5 de las
brechas de alineacioacuten los datos que faltan y las bases ambiguas se les permitioacute cualquier
posicioacuten (todas las posiciones con menos del 95 de cobertura de sitio han sido eliminadas)
183
Figura 19 Consentimiento Informado
184
Figura 20 Recoleccioacuten de datos de las viviendas Valle de Fiambalaacute Catamarca
185
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Figura 21 Planilla de recoleccioacuten de datos de las personas Valle de Fiambalaacute
Catamarca Argentina
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Figura 22 Graacuteficas de comparacioacuten de temperaturas promedio mensual en grados
centiacutegrados y precipitacioacuten-aridez entre las localidades de Rio Grande y Tatoacuten
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Figura 23 Diseccioacuten de conductos biliares de un hiacutegado de Lama glama donde se
observan ejemplares de Fasciola hepatica intracanaliculares Valle de Fiambalaacute
Catamarca 2010
Figura 24 Apertura de un conducto biliar intrahepaacutetico en un hiacutegado de Ovis orientalis
aries Se observa un ejemplar de F hepatica colangitis croacutenica con lesiones de la
mucosa biliar hipertrofiada estrecheces inflamatorias fibrosas y piedras Valle de
Fiambalaacute Catamarca 2010
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Figura 25 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino de la provincia de
Salta observadas al microscopio
Nota (A) Cono cefaacutelico VO ventosa oral I ciego intestinal F faringe E esoacutefago C cirro
Ampliacioacuten de 4x (B) Uacutetero lleno de huevos (flechas) C Cirro I ciego intestinal VV ventosa
ventral Aumento 10x
Figura 26 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado bovino del municipio de
Cordeiro RJ Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota Porcioacuten final del cono cefaacutelico que muestra las espinas (flechas) e I ciego intestinal
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Figura 27 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de bovinos de la provincia de Salta
Argentina observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) VO ventosa oral
Figura 28 Estructuras morfoloacutegicas de F hepatica de ganado del municipio de Lavras
MG Brasil observadas al microscopio con contraste de interferencia diferencial
Nota (A B) Porcioacuten final del cono cefaacutelico mostrando las espinas (flechas) e I ciego intestinal
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Figura 29 Anaacutelisis filogeneacutetico de F hepatica basado en las secuencias de CO1 FhC01-
CAT-adult
Nota corresponde a la muestra analizada de la zona Las letras y nuacutemeros detraacutes de Fh indican el
nuacutemero de acceso de GenBank de las correspondientes secuencias PwAF219379 corresponde
a Paragonimus westermani CO1 (AF219379) usado como grupo externo El aacuterbol filogeneacutetico se
construyoacute mediante el anaacutelisis de maacutexima verosimilitud utilizando el paquete de
programas PHYLIP
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TRABAJOS CIENTIacuteFICOS A PARTIR DE LA INFORMACIOacuteN GENERADA EN
ESTA TESIS
ANEXO 1121 - TRABAJOS PUBLICADOS
Capiacutetulo de Libro
ldquoFasciolosis o Distomatosisrdquo en ldquoParasitosis Regionalesrdquo Costamagna SR (Compilador)
Editorial de la Universidad Nacional del Sur Red de Editoriales de Universidades
Nacionales Cap 36 419-434
193
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Buacutesqueda Bibliograacutefica de Casos Humanos con
Fasciola Hepatica en Argentina Malandrini J B Carnevale S Soria C C Velaacutesquez J N Molina V E
UNCa Anlis Malbraacuten Hospital Muntildeiz Maestro Quiroga (primera cuadra) 4700-Catamarca brunomalandriniyahoocomar
Bibliographical Search Fasciola hepatica Cases in Humans in Argentina
Summary The case series published in Argentina referred to human cases that presented fasciolosis is scarce As a cause of not being a notificable disease only isolated cases are reported and epidemiological and ecosystem details are not investigated Who detected a case is not required to inform it and on the other hand not all cases diagnosed are published Besides the lack of diagnostic techniques in most health networks complicates the detection of infection and promotes the understated The aim of this study was to report the number of published human cases with fascioliasis in Argentina from 1950 to 2010 It was performed a bibliographical search in the databases of the Science and Technology Secretary in libraries of universities and major scientific institutes of the country There were found presentations of 218 infected people since the first description made in Resistencia Chaco until the publication of cases in Catamarca In discrimination cases female gender (5466) was significantly more frequent than among men Of the total found six patient (4) had an acute process and 144 correspond to chronic illness Six provinces reported sick Catamarca is that with greater number of cases In the bibliographic tonnage carried with exception of some imprecise data in the province of Cordoba the number of diagnosed patients is low Despite the number of total cases reported in the country confirm that it is a secondary or occasional zoonosis and that it does not exist a close relationship between animal and human high incidence the substantial increase in the number of infected warrants a change in category transforming it in a serious public health problem in some regions
Keywords Research Bibliography Humans Fasciola hepatica Argentina
mdash Ciencia Vol 6 Nordm 21 Agosto 2011 Paacutegina 59 mdash
195
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Colecta e Identificacioacuten de Moluscos en la Cuenca
del Riacuteo Abaucaacuten Malandrini J B Soria C C Saldantildeo M B Mozo G M Camantildeo M C Covarrubia N
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa Maestro Quiroga primera cuadra 4700 SFVde Catamarca brunomalandriniyahoocomar
Collection and Identification of Mollusks in Abaucan River
Basin Summary Fasciola hepatica (unca or uncaca) has a digenetic life cycle which means an obligatory intermediate host belonging to the family of freshwater snails Lymnaeidae (Pulmonata Lymnaeidae) at which they develop and multiply the asexual forms This host predominantly in our country is Limnaea viatrix gastropod mollusk amphibian so it prefers soils with humidity The ecology of fasciolosis is closely linked with that of the snails that serve as intermediaries When the miracidia penetrate the foot they head for the liverpaacutencreas where they transform into esporocitos then rediae (first and second generation) and leave as cercariae Physiographic characteristics soil composition and climatic factors determine the rate of reproduction and epidemiological dynamics The aim of this study was to identify snails found in the river Abaucaacuten basin province of Catamarca The study was carried out with mollusks collected in backwaters and wetlands along the river at the height of the ford the road (Medanitos- Taton) where there was a lot of these specimens and domestic animals infected with fluke The specimens were collected by hand and transported to the laboratory in containers with water and mud of the place where they were studied She gathered a sample of 1236 shells The 9150 (n=1131) were identified as the genus Lymnaea spp and 849 (n=105) belonging to the genus Physae spp In those identified as Lymnaea viatrix there were not found infection of intermediate forms of Fasciola hepatica The identification shows the presence of snails involved in the cycle of F hepatica in the study area The spread of the parasite and the increase of fasciolosis in human beings who inhabit the valley make studies needed to relate epidemiological findings
Keywords Mollusks Limnaea Collection Identification Abaucaacuten river
mdash Ciencia Vol 6 Nordm 22 Septiembre 2011 Paacutegina 39 mdash
196
197
198
BIOLOGIacuteA EN AGRONOMIacuteA
Volumen 4 No 1 Marzo de 2014 ISSN 1853-5216 Universidad Nacional de Catamarca Secretariacutea de Ciencia y Tecnologiacutea ‐Editorial Cientiacutefica Universitaria ISSN 1853-5216
FASCIOLOSIS EVALUACIOacuteN DE TEacuteCNICAS PARASITARIAS EN HECES DE ANIMALES CON HIacuteGADOS
DECOMISADOS EN MATADEROS
Martiacutenez M Constanza Malandrini J Bruno Soria Claudia
Caacutetedra de Parasitologiacutea Facultad de Ciencias de la Salud - Universidad Nacional de Catamarca
Avda Belgrano y Maestro Quiroga C P 4700 San Fernando del Valle de Catamarca Argentina
E-mails conimartinez48hotmailcom
Recibido 04072013 Aceptado 07112013
RESUMEN
En la provincia de Catamarca fasciolosis es una enfermedad endeacutemica produciendo un gran dantildeo
econoacutemico de importancia en salud puacuteblica Afecta principalmente a los bovinos presentaacutendose
en sus formas aguda y croacutenica La demostracioacuten microscoacutepica de huevos de Fasciola hepatica en
materia fecal es el principal procedimiento de diagnoacutestico econoacutemico faacutecil de realizar y
sumamente especiacutefico El objetivo del trabajo es determinar las diferencias existentes entre la
presencia del paraacutesito en hiacutegados de animales positivos en las faenas y el valor diagnoacutestico de dos
teacutecnicas coproparasitoloacutegicas utilizadas para demostrar la infeccioacuten en los mismos bovinos Se
estudiaron en los mataderos de los municipios de Andalgalaacute Capital Fiambalaacute El Alto e Icantildeo 13
animales que desde tres meses previos al estudio no recibieron tratamiento fasciolicida Los
hiacutegados fueron decomisados en la inspeccioacuten sanitaria y la materia fecal de esos ejemplares se
recogioacute en frascos con solucioacuten salina formolada al 10 Se identificoacute y transportoacute al laboratorio
Paralelamente se analizaron preparados de 88 muestras de heces por meacutetodo directo y con la
teacutecnica de sedimentacioacuten indicando positividad la deteccioacuten de un solo huevo
En hiacutegados analizados se encontraron formas adultas del paraacutesito y lesiones fibroacuteticas en el
pareacutenquima de las muestras de materia fecal cuatro submuestras resultaron positivas al meacutetodo
directo y 78 al de sedimentacioacuten De los resultados obtenidos se observan limitaciones en la
sensibilidad Para optimizar el diagnoacutestico y evitar los falsos negativos se deberaacuten recoger
muestras fecales en forma seriadas y aumentar el nuacutemero de pruebas cuando presentan
resultados negativos
PALABRAS CLAVE Fasciola hepatica Fasciolosis Diagnoacutestico Coproloacutegico
79
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Elsevier Editorial System(tm) for Acta Tropica Manuscript Draft (En prensa Recibido 30062015)
Title Human fascioliasis endemic areas in Argentina Multigenic phenotypic and environmental characterisation of the snail vectors Lymnaea neotropica and L viator
Article Type Research Paper Keywords Fascioliasis human infection Lymnaea neotropica L viator Lymnaeidae vectors rDNA mtDNA phenotype environment Argentina
Corresponding Author Dra MD Bargues PhD Corresponding Authors Institution University of Valencia First Author MD Bargues PhD Order of Authors MD Bargues PhD J Bruno Malandrini PhD Patricio Artigas PhD Claudia C Soria PhD Jorge N Velasquez PhD Silvana Carnevale PhD Lucia Mateo Master Messaoud Khoubbane PhD Santiago Mas-Coma Prof Dr
Abstract In South America fascioliasis stands out due to the human endemic areas in many countries In Argentina human endemic areas have recently been detected A study was performed in two localities of Catamarca province where lymnaeids were collected in areas described as human endemic (i) locality A beside Taton and Rio Grande villages (ii) locality B close to Recreo town The presence of Lymnaea neotropica and L viator in locality A and of L neotropica in locality B was proved by sequencing of rDNA ITS-2 and ITS-1 and mtDNA 16S and cox1 For the differentiation between these two species ITS-1 shows the highest resolution whereas 16S the less For intraspecific analyses cox1 is the best marker and ITS-1 the worst The intraspecific variability of L neotropica and L viator overlap in all shell features except maximum shell length which may be longer in L viator The desertic-arid conditions surrounding locality A the semiaridity-aridity surrounding locality B and the very low yearly precipitation in both localities are very different from the typical environmental characteristics of fascioliasis transmission foci In these localities lymnaeids are confined to lateral river side floodings and small man-made irrigation systems The two and four new haplotypes in L neotropica and L viator respectively and the extreme climatic factors demonstrate that these transmission foci are isolated environments presenting water availability depending only on the rivers flowing from neighbouring mountains
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ANEXO 1122 - PRESENTACIONES EN CONGRESOS y JORNADAS
4tas Jornadas Universitarias de Ciencias Exactas y Naturales Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca 2009 Presentacioacuten oral
PRESENCIA DE HUEVOS DE PARAacuteSITOS ZOONOTICOS EN VARIAS ESPECIES ANIMALES DE LA LOCALIDAD DE TATOacuteN
Malandrini Jorge Soria Claudia Cecilia Molina Viviana
Mozo Matilde Camantildeo Cecilia Saldantildeo Belen
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa Maestro Quiroga SN 4700- Catamarca brunomalandriniyahoocomar Aacuterea Vinculacioacuten Ciencia Tecnologiacutea y Sociedad
RESUMEN
Casos de parasitosis son observados frecuentemente en las faenas provinciales y en los registros de decomisos en mataderos a su vez el empleo de estudios coproloacutegicos ha mejorado la capacidad de diagnosticar los cuadros El objetivo del presente trabajo fue examinar muestras de materia fecal de distintos animales para reconocer las especies presentes El estudio se llevoacute a cabo en la localidad de Tatoacuten Fiambalaacute departamento Tinogasta provincia de Catamarca durante los meses de marzo a julio de 2009 Se tomaron muestras de materia fecal (n=78) de animales poli y monogaacutestricos ubicados cerca de las viviendas Las heces se conservaron en recipientes cerrados con solucioacuten salina formolada 5 Para la deteccioacuten se utilizoacute un meacutetodo de sedimentacioacuten en buacutesqueda de Fasciola hepatica con cinco gramos de materia fecal de cada muestra Para el reconocimiento de los huevos se observoacute al microscopio (100x y 400x) La variable fue la presencia de huevos en heces considerando positividad la deteccioacuten de un solo ejemplar con la teacutecnica empleada Se confirmoacute la presencia de distintas especies parasitarias Fasciola hepatica Ascaris suum Oxiuris equi Ostertagia spp Trichuris ovis Haemonchus contortus Trichostrongylus spp Uncinaria stenocephala Toxocara canis y tenias Se hallaron infectadas todas las muestras de materia fecal observadas No se efectuaron recuentos de huevos por gramo
Debates Reflexiones e Interrogantes en la Educacioacuten en Ciencias Antildeo 2009
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca
- 160-
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1er Congreso Nacional de Medicina Tropical Ministerio de Salud Presentacioacuten en
Poster Jujuy 2010
205
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JORNADAS DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE PARASITOLOGIA VETERINARIA
XIX ENCUENTRO RIOPLATENSE DE VETERINARIOS ENDOPARASITOacuteLOGOS ldquoHacia la conferencia mundial de la WAAVP Buenos Aires 2011rdquo
18 al 20 de mayo de 2010
Descripcioacuten de los grupos de Investigacioacuten y Ensentildeanza dependientes de Universidades de Argentina
FASCIOLOSIS UNA ZOONOSIS TRANSMITIDA POR ALIMENTOS DESDE UN ENFOQUE MULTIDISCIPLINARIO DEL EQUIPO DE SALUD
Red de Helmintos Caacutetedra de Anatomiacutea y Fisiologiacutea Animal Comparada Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca Servicio de Inmunologiacutea Parasitaria Departamento de Parasitologiacutea ANLIS ldquoCarlos G Malbraacutenrdquo Hospital de Enfermedades Infecciosas ldquoFrancisco J Muntildeizrdquo MALANDRINI Jorge Bruno CARNEVALE1 Silvana VELASQUEZ2 Jorge Neacutestor SORIA Claudia Cecilia MOLINA1 Viviana Edith MARTINEZ Constanza COVARRUBIA Neacutelida Noemiacute PIZARRO Mariacutea del Carmen Magister en Ciencias de la Salud Meacutedico Veterinario Investigador III Doctora en Ciencias Bioloacutegicas Magister en Epidemiologiacutea Gestioacuten y Poliacuteticas de Salud Bioacuteloga Investigadora Adjunta Conicet Magister en Administracioacuten Sanitaria Meacutedico infectoacutelogo y microbioacutelogo Magister en Tecnologiacutea de Alimentos Licenciada en Bromatologiacutea Bioquiacutemica Meacutedica Veterinaria Licenciada en Bromatologiacutea Bromatoacuteloga Facultad de Ciencias de la Salud Universidad Nacional de Catamarca Maestro Quiroga sn 4700 - San Fernando del Valle de Catamarca Catamarca Argentina TeFax (54-3833) 441831 e-mail brunomalandriniyahoocomar 1Servicio de Inmunologiacutea Parasitaria Departamento de Parasitologiacutea ANLIS ldquoCarlos G Malbraacutenrdquo Veacutelez Sarsfield 563 Ciudad Autoacutenoma de Buenos Aires Argentina TeFax (54-11) 4301-7437 e- mail silvanaanlisgovcomar 2Hospital de Enfermedades Infecciosas ldquoDr Francisco J Muntildeizrdquo Sala de Hepatopatiacuteas Infecciosas Av Uspallata 2272 Ciudad Autoacutenoma de Buenos Aires (1282) Argentina Te (54-11) 4304-2180 e-mail jorsilspeedycom Aacuterea temaacutetica Ciencias Meacutedicas y Salud
Disciplina Cientiacutefica Parasitologiacutea (Coacutedigo Nordm 1212) Campo de aplicacioacuten Salud Puacuteblica (Coacutedigo Nordm 3237) Categoriacutea Proyecto Orientado Tipo de Actividades Investigacioacuten Aplicada con desarrollo tecnoloacutegico El equipo se conformoacute en 1994 Las necesidades profesionales hicieron necesario integrar un grupo con investigadores provenientes de distintas disciplinas que fue desarrollando estudios epidemioloacutegicos de fasciolosis en Regioacuten del arroyo El Juncal La Toma San Luis 2003
Estudio de foco a partir de un caso humano de fasciolosis en la localidad de Lonco pueacute Neuqueacuten Argentina 2003 Estudio de foco para un caso de fasciolosis humana en Neuqueacuten Argentina 2005 Confirmacioacuten etioloacutegica de un brote de distomatosis hepaacutetica en Mendoza 2006 Diagnoacutestico de Fasciola hepatica con la teacutecnica de ELISA en el Departamento de Tinogasta Catamarca 2006-2009 Actualmente se lleva a cabo un estudio observacional transversal y cuantitativo utilizando datos primarios Para el anaacutelisis de fasciolosis hepaacutetica en las distintas especies se emplean meacutetodos de diagnoacutestico inmunoloacutegicos parasitoloacutegicos y cliacutenicos El trabajo se decidioacute continuarlo en la provincia de Catamarca debido a la previa aparicioacuten de casos humanos y la alta prevalencia de fasciolosis detectada no soacutelo por la inspeccioacuten veterinaria en la faena de ganado bovino en mataderos y frigoriacuteficos que trabajan con control profesional sino tambieacuten en situaciones de campoEl universo de estudio comprende a) Poblacioacuten humana que habita el valle de Fiambalaacute b) Ganado bovino ovino caprino equino porcino y cameacutelidos sudamericanos
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JORNADAS DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE PARASITOLOGIA VETERINARIA
XIX ENCUENTRO RIOPLATENSE DE VETERINARIOS ENDOPARASITOacuteLOGOS ldquoHacia la conferencia mundial de la WAAVP Buenos Aires 2011rdquo
18 al 20 de mayo de 2010
c) Plantas acuaacuteticas de consumo humano presentes en los cursos de agua para la buacutesqueda de metacercarias d) Caracoles compatibles con el geacutenero Lymnaea para su determinacioacuten taxonoacutemica estudio de la emisioacuten de cercariacuteas y verificacioacuten de la infeccioacuten e) Agua de riacuteos arroyos Agua de consumo en las viviendas El ensayo de ELISA y micro-ELISA para la deteccioacuten de anticuerpos anti-rproCL1 de F hepatica
en humanos se desarrolloacute y fue puesto en praacutectica desde 2001 La teacutecnica de ampliacioacuten en cadena de la polimerasa fue desarrollada para determinar la infeccioacuten por Fasciola hepatica en caracoles del geacutenero Lymnaea con infeccioacuten natural utilizada posteriormente para comparar el anaacutelisis directo con el molecular y diagnoacutesticos por PCR en caracoles Lymnaea columella y Lymnaea viatrix colectados
Los avances del grupo de trabajo incluyen
- Clonado expresioacuten y produccioacuten de antiacutegeno recombinante procatepsina L1 de Fasciola hepatica en vector procarionte Resp Carnevale S Participan Malandrini J Soria C - Desarrollo del ensayo inmunoenzimaacutetico empleando el antiacutegeno recombinante para la deteccioacuten
de fasciolosis en hospedadores definitivos (humanos y ganado) Resp Carnevale S Participan Velaacutesquez J Martiacutenez C Malandrini J - Desarrollo de un meacutetodo molecular basado en la amplificacioacuten geacutenica utilizando como blanco el gen de la subunidad 1 de la citocromo c oxidada de F hepatica para la identificacioacuten en hospedadores intermediarios Carnevale S Participan Soria C Covarubia N Pizarro MC - Aplicacioacuten de las metodologiacuteas desarrolladas y de meacutetodos de deteccioacuten directa en aacutereas endeacutemicas mediante estudios transversales Malandrini J Participan Velaacutesquez J Soria C - Desarrollo de reactivos parasitarios Resp Carnevale S Participan Molina V Pizarro MC - Estudios epidemioloacutegicos Resp Malandrini J Participan Soria C Velaacutesquez J Covarrubia N
Martiacutenez C
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23rd International Conference of the World Association Advancement Veterinary
Parasitology (waapv) Presentacion en poster Buenos Aires 2011
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23rd International Conference of the World Association Advancement Veterinary
Parasitology (waapv) Presentacion en poster Buenos Aires 2011
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VII Jornadas Universitarias de Ciencias Exactas y Naturales VII Jucen - Educacioacuten en
Ciencias y Tecnologiacutea 2012 Modalidad oral
Buacutesqueda de caracoles intermediarios del ciclo de Fasciola hepatica en
Tinogasta
Tomassi Carla A Soria Claudia C Malandrini Jorge B Facultad de Ciencias de la Salud-UNCa Maestro Quiroga sn 4700-Catamarca carla_cat1991hotmailcom
Los moluscos constituyen el segundo de los Phyla maacutes numerosos en especies luego de los artroacutepodos
Desde el mar colonizaron ambientes salobres y dulceacuiacutecolas soacutelo los caracoles (gasteroacutepodos) invadieron
el medio terrestre Le han brindado al hombre una serie de beneficios tales como alimento herramientas
medicina Contrariamente la malacofauna acarrea tambieacuten efectos perjudiciales a la Salud Puacuteblica (hombre
y ganado) enfermedades zoonoticas y especies invasoras
Caracoles de la familia Lymnaeidae son hospedadores intermediarios de Fasciola hepatica Linneo
(Trematoda Digenea Fasciolidae) por ello el objetivo del trabajo fue identificar las especies de moluscos
encontrados en el valle de Fiambalaacute
El estudio se lleva a cabo con ejemplares recolectados en remansos y vegas a orillas de riacuteos los lugares
escogidos para la buacutesqueda se escogieron de aquellos donde previamente se diagnosticaron animales con
infecciones naturales de Fasciola hepatica
Los especiacutemenes colectados (N 256) en forma manual en los causes de agua del Riacuteo Abaucaacuten y afluentes
(27ordm30acuteS 67ordf35acuteO) entre los meses de octubre y noviembre se transportan en envases plaacutesticos rotulados
con un algodoacuten huacutemedo hasta el laboratorio El material se fijoacute en alcohol 70 y la identificacioacuten de la
especie se realiza en base a las caracteriacutesticas morfoloacutegicas de la conchilla y oacuterganos internos
El reconocimiento de conchillas pequentildeas alargadas lisas con estriacuteas longitudinales muy apretadas dextro
compuestas por cinco anfractos muy convexos separados por una sutura profunda permitieron la
identificacioacuten de los gasteroacutepodos como pertenecientes a los limneidos
Palabras clave Buacutesqueda Limneidos Fasciola hepatica Tinogasta
Eje temaacutetico Desarrollo del pensamiento cientiacutefico
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
VARIABILIDAD GENEacuteTICA INTRAESPECIacuteFICA DE FASCIOLA HEPATICA
EN ARGENTINA
Silvana Carnevale1 Laura Kamenetzky2 Jorge Bruno Malandrini3 Mariacutea Laura
Pantano1 Marcela Larroza4 Claudia Cecilia Soria3 Olga Edith Feres Escaacutendar1
Jorge Neacutestor Velaacutesquez5
1ANLIS ldquoDr Carlos G Malbraacutenrdquo 2IMPaM UBA-CONICET 3Universidad Nacional de Catamarca 4INTA Bariloche 5Hospital de Infecciosas ldquoDr F J Muntildeizrdquo Argentina
e-mail jorgeysilvanaspeedycomar
Fasciola hepatica es un trematode que presenta variabilidad intraespeciacutefica en aislamientos de diferentes regiones del mundo Objetivo Analizar los haplotipos de F hepatica
circulantes en distintas regiones de Argentina Materiales y meacutetodos Se obtuvieron adultos
del paraacutesito de hiacutegados bovinos naturalmente infectados de las provincias de Salta
Catamarca y Riacuteo Negro Se conservaron en etanol 70ordm y se procesaron para la extraccioacuten de
ADN empleando kit comercial Se llevaron a cabo reacciones de PCR para la
amplificacioacuten del marcador molecular correspondiente al gen
mitocondrial de la subunidad 1 de la citocromo c oxidasa (COI) Los amplicones obtenidos
se secuenciaron automaacuteticamente Las filogenias fueron reconstruiacutedas utilizando el
algoritmo de maacutexima parsimonia implementado en el programa PAUP los aacuterboles se
obtuvieron mediante 1000 reacuteplicas bootstrap La adicioacuten de secuencias fue al azar con 5
repeticiones Resultados El anaacutelisis de las secuencias de CO1 mostroacute diferencias en las
muestras de las tres provincias analizadas La muestra de Salta resultoacute ideacutentica a otras
analizadas previamente de las provincias de Catamarca y San Luis correspondiendo al
grupo FhAJ6280346 FhJF82467124 FhAJ628035 FhGQ231551 Fh628039 Para la
muestra de Riacuteo Negro se observoacute un polimorfismo propio no descripto en las secuencias
actualmente disponibles en el GenBank La muestra de Catamarca fue ideacutentica a las
secuencias descriptas FhAJ628035 FhJF824674 Conclusiones El marcador CO1 permitioacute
diferenciar adultos de las tres localizaciones Se analizaraacuten maacutes ejemplares para verificar si
los polimorfismos son poblacionales o individuales
Palabras clave Fasciola hepatica anaacutelisis filogeneacutetico haplotipo
Financiamiento ANLIS Mundo Sano
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XXIII Congreso Brasileiro de Parasitologiacutea III Encontro de Parasitologia do Mercosul
Florianoacutepolis Brasil 2013 Presentacioacuten poster
DESARROLLO DE UN MEacuteTODO DE AMPLIFICACIOacuteN GEacuteNICA PARA EL
DIAGNOacuteSTICO DE FASCIOLOSIS EN HOSPEDADORES DEFINITIVOS
Mariacutea Laura Pantano1 Silvana Carnevale1 Laura Kamenetzky2 Jorge Bruno
Malandrini3 Claudia Cecilia Soria 3 Vanesa Raquel Bastin1 Jorge Neacutestor Velaacutesquez4
1ANLIS ldquoDr Carlos G Malbraacutenrdquo 2IMPaM UBA-CONICET 3Universidad Nacional de
Catamarca 4Hospital de Infecciosas ldquoDr F J Muntildeizrdquo Argentina
e-mail jorgeysilvanaspeedycomar La fasciolosis es una zoonosis parasitaria distribuida mundialmente que causa severas
peacuterdidas econoacutemicas en el ganado Objetivo Desarrollar un meacutetodo de PCR para la
identificacioacuten de Fasciola hepatica en muestras de heces de ovinos Materiales y meacutetodos
Se emplearon 19 muestras de ovinos infectados (examen coproparasitoloacutegico positivo) y
11 muestras negativas para F hepatica 6 de ellas con coccidios yo nematodes
gastrointestinales recolectadas en solucioacuten salina formolada 5 Se emplearon 2 g de
muestra lavados con solucioacuten fisioloacutegica y concentrados por centrifugacioacuten con eacuteter para la
purificacioacuten de ADN Se ensayaron protocolos manuales y empleando kits comerciales
seleccionando procedimientos estaacutendar de lisis proteoliacutetica extraccioacuten con fenol-
cloroformo y precipitacioacuten etanoacutelica La teacutecnica de PCR se llevoacute a cabo utilizando primers
con el fin de amplificar un fragmento del gen mitocondrial de la subunidad 1 de la
citocromo c oxidasa (CO1) con tamantildeo esperado de amplicoacuten de 405 pares de bases Se
determinoacute el liacutemite de deteccioacuten empleando cantidades conocidas de ADN de adultos
Resultados La teacutecnica de PCR permitioacute la deteccioacuten de todas las muestras positivas y no
se obtuvieron productos de amplificacioacuten con muestras negativas ni parasitadas con otros
organismos Los primers fueron analizados tambieacuten con las secuencias disponibles en
banco de otros trematodes de ovinos mostrando especificidad El liacutemite de deteccioacuten
resultoacute de 5 pg de ADN de F hepatica Conclusiones El meacutetodo de PCR resulta una
herramienta sensible y especiacutefica para la deteccioacuten de ADN de F hepatica en heces de
hospedadores definitivos Palabras clave Fasciola hepatica PCR ADN
Financiamiento ANLIS Mundo Sano UNCa
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III Congreso Internacional de Educacioacuten en Ciencia y Tecnologiacutea 5deg Congreso de Educacioacuten en Ciencia y Tecnologiacutea Facen - UNCA 2013
Estudio comparativo de teacutecnicas para la obtencioacuten de cuerpos de
caracoles de la Familia Lymnaidae (Gasteropoda Pulmonata) para su
identificacioacuten taxonoacutemica en la provincia de Catamarca
Tomassi CA Soria CC Malandrini JB Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
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Fasciolosis es una zoonosis parasitaria con un ciclo de vida donde participa como
hospedero intermedio un caracol de agua dulce Los moluscos de la Familia Lymnaeidae
(Gasteroacutepoda Pulmonata) modelan la transmisioacuten de Fasciola hepatica de acuerdo a la
especie de caracol involucrado L viator fue considerado durante antildeos como el uacutenico
hospedero involucrado en la epidemiologiacutea de la enfermedad en Argentina Estudios
recientes demuestran la presencia de otras especies y que los caracoles intervinientes en
los casos humanos y animales inclusive de la misma zona seriacutean de distintas especies
El objetivo del presente trabajo fue reportar los resultados comparativos obtenidos con
distintas teacutecnicas utilizadas para la observacioacuten morfoloacutegica de caracoles que permitan
identificar los principales hospederos intermediarios que intervienen en la parasitosis
Se colectaron a mano caracoles (n = 673) de una vega ubicada a la vera del riacuteo Abaucaacuten
(27deg29acute52rdquo S - 67deg35acute535 O) a 1650 m nm y se trasladaron vivos al laboratorio Los
moluscos se separaron en lotes iguales y se enfrentaron para estudio con tres teacutecnicas
directa de Railliet seguacuten Paranaense (1994) y la propuesta de Pointier para poder obtener
la separacioacuten de su cuerpo conchilla aparato reproductor masculino y una porcioacuten de su
pie permitiendo una mejor observacioacuten de los oacuterganos internos de los caracoles para su
reconocimiento taxonoacutemico e identificacioacuten por morfologiacutea Paralelamente se sacoacute la parte
blanda del limneido en busca de formas intermedias de F hepatica en el hepatopaacutencreas
del molusco
Los resultados permiten afirmar que la teacutecnica recomendada por Pointier es de muy faacutecil
aplicacioacuten ademaacutes de ser maacutes econoacutemica y permiten acercar nuevos conocimientos sobre
la enfermedad y los actores involucrados en el mantenimiento y difusioacuten de la parasitosis
Palabras clave Teacutecnicas Lymneidos Identificacioacuten Taxonomiacutea Catamarca
Eje temaacutetico Desarrollo de propuestas de ensentildeanza que contribuyan a la
transversalizacioacuten de contenidos cientiacuteficos
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7mo Encuentro de Docentes Investigadores 2do Encuentro de Joacutevenes Investigadores
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poster
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El reto del desarrollo sostenible Estrategias y Acciones Diaacutelogos y Propuestas Edicioacuten
2014 Liacutenea Cientiacutefica 1ordf Ed Catamarca Universidad Nacional de Catamarca E-Book
ISBN 978-950-746-227-6 1 Medio Ambiente CDD 577
Infeccioacuten Experimental de Hospedadores Intermediarios de
Fasciola hepatica
Tomassi Carla A Malandrini Jorge B Soria Claudia C
Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
Maestro Quiroga sn 4700 Catamarca
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RESUMEN
Fasciolosis es una enfermedad que cada vez con mayor frecuencia afecta al ser humano se
presenta en el hombre Siendo Catamarca una zona endeacutemica tanto para los animales como para
las personas se hace necesario conocer detalladamente el ciclo de vida en el hueacutesped
intermediario un caracol del geacutenero Lymnea para poder actuar en su control La diseccioacuten de
caracoles permite visualizar la produccioacuten de cercariacuteas y detectar la infeccioacuten en caracoles
provenientes de campo El objetivo del trabajo fue desarrollar la infeccioacuten de moluscos Lymnea
para observar su ciclo bioloacutegico in vitro y comprobar su capacidad de actuar como hospedadores
intermediarios La infeccioacuten se logroacute mediante la eclosioacuten de huevos de F hepatica previamente
embrionados estos proveniacutean de bilis de animales infectados lavados con solucioacuten fisioloacutegica
isotoacutenica decantados en un vaso de precipitado y mantenidos a 25 degC durante ocho diacuteas Por
accioacuten a la luz artificial (30 minutos) se consiguioacute la apertura del opeacuterculo y posterior salida del
miracidio Se pusieron en contacto 50 miracidios por molusco durante dos horas Se observoacute bajo
la lupa la presencia de miracidios de no estar se consideroacute que penetraron en el caracol (n=74)
Se verificoacute a los tres diacuteas sacrificando los moluscos (n=14) separando las partes blandas de la
conchilla y colocaacutendolas entre dos portaobjetos para visualizarlos al microscopio Se obtuvieron
esporocistos en dos moluscos redias en otros dos y cercarias en dos ejemplares maacutes El ensayo
permitioacute comprobar su intervencioacuten en el ciclo de Fasciola hepatica como hospedadores
intermediarios y demostrar la presencia de los distintos estadios larvarios en el interior del cuerpo
de los caracoles
ndash 149 ndash
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XI Jornadas Cientiacuteficas Regionales en Ciencias de la Salud XI Jornadas Estudiantiles
Regionales Instituto Universitario de Ciencias de las Salud Fundacioacuten Barceloacute La Rioja
2014 Modalidad oral
HALLAZGO E IDENTIFICACIOacuteN DE MOLUCOS INTERMEDIARIOS DEL CICLO DE
Fasciola hepatica EN LAGUNA BLANCA CATAMARCA
Tomassi Carla A (1) - Soria Claudia C(1) - Malandrini Jorge B (1)
Fasciolosis es una enfermedad parasitaria zoonoacutetica transmitida por alimentos causada por
Fasciola hepatica Linneaus 1758 (Trematoda Fasciolidae) que utiliza como hospedadores
intermediarios caracoles de agua dulce de la familia Lymnaeidae El paraacutesito no se encuentra en
regiones donde las condiciones no son las adecuadas para el desarrollo de los caracoles
Pertenecen al phylum Mollusca y a la clase Gasteropoda y las especies de intereacutes se encuentran
en la subclase Euthyneura o Pulmonata Son anfibios y viven en el barro en ambientes de aguas
poco profundas sujetos a las inundaciones y desecaciones Su distribucioacuten no es uniforme porque
dentro de cada haacutebitat pueden concentrarse en aacutereas pequentildeas con canales de drenaje y
filtraciones En la provincia de Catamarca se demostroacute la presencia de lymneidos en casi todos los
departamentos y en diferentes ecosistemas
El objetivo del presente trabajo fue hallar ejemplares de lymeneidos en la localidad de Laguna
Blanca y relacionar su presencia con diagnoacutesticos efectuados en muestras de materia fecal
animales de distintas especies
Los caracoles se colectaron en forma manual (n=490) en tres vegas de la localidad ldquoLas Lomitasrdquo
(26deg3acute21rdquoS-66deg56acute334 O) (706) ldquoCasa Paredrdquo (26deg35acute04rdquoS-66deg56acute47 O) (218) y ldquoHuasi
Cieacutenagardquo (26deg34acute50rdquoS-66deg56acute333 O) (76) y 17 muestras de materia fecal de ovejas (13) llamas
(2) y cabras (2) que pastaban en las vegas
Los moluscos fueron transportados vivos en frascos hermeacuteticos con agua del mismo curso al
laboratorio malacoloacutegico de la facultad de Ciencias de la Salud donde se realizoacute la identificacioacuten
de los geacuteneros en base a la morfologiacutea de su conchilla Las determinaciones parasitoloacutegicas se
llevaron a cabo seguacuten teacutecnica de Dennis Stone y Swason
Se comproboacute la presencia de caracoles del geacutenero Lymnea en las tres vegas En ldquoCasa Paredrdquo
(3452) en ldquoHuasi Cieacutenagardquo (1194) y en la vega ldquoLas Lomitasrdquo (5354) se determinoacute
ademaacutes presencia de moluscos del geacutenero Physa (5205) Los anaacutelisis coproparasitologicos
resultaron positivos confirmando la presencia del parasito en animales (7647)
Los hallazgos realizados y los antecedentes humanos de la enfermedad en otras zonas de la
provincia ameritan estudios epidemioloacutegicos que los involucren
1 Facultad de Ciencias de la Salud UNCa
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ANEXO 1123 ndash PREMIOS Y DISTINCIONES
217
XXVIII Jornadas de Actualizacioacuten en Ciencias Veterniarias Colegio Medico
Veterinario de la Provincia de Coacuterdoba 2009 Distinguido con Mencioacuten Especial
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Segunda mencioacuten Premio Anual AAPAVET Rioplatense 2012 ldquoDr Rauacutel Martiacuten Mendyrdquo
OCTUBRE de 2012
Volumen XXIX Ndeg 294 ISSN 1852-317X
Se otorgoacute el Premio Anual AAPAVET Rioplatense 2012 ldquoDr Rauacutel Martiacuten Mendyrdquo
El H Jurado integrado por los Drs Ricardo A Moriena (FCV UNNE) Oscar S Anziani (INTA Rafaela) y Cristian Lucas (Actividad privada) dictaminoacute en forma unaacutenime otorgar los siguientes premios
Categoriacutea Investigacioacuten Original
Primer Premio
ldquoIntroduccioacuten de la vacuna EG95 contra la Equinococcosis Ovina en un Programa de Control Obtencioacuten de informacioacuten baacutesica anaacutelisis espacial y primer estudio de impactordquo
Edmundo Larrieu Eduardo Herrero Guillermo Mujica Joseacute L Labanchi Daniel Araya Claudio
Grizmado Arnoldo Calabroacute Gabriel Taimoacuten Guillermo Ruesta Alicia Peacuterez Antonio Gati Graciela
Santillaacuten Marta Cabrera Marcos Arezzo Marcos Seleiman Laura Cagioacuten Mariela Garciacutea Cachau Cristian A Alvarez Rojas Charles G Gauci David D Heath Roberto Lamberti y Marshall W
Lightowlers
1ordf Mencioacuten
ldquoEquinococcosis Neotropical presencia del ciclo silvestre de Echinococcus vogeli en la Provincia de Misiones Argentinardquo
Katherina Alicia Vizcaychipi
Consultores Antonio DrsquoAlessandro Federico Camiccia Marcela A Cucher Karen E DeMatteo Eduardo Guarnera Ariana Gutieacuterrez Marcia Helou Natalia Maccharoli Laura C Prada Miguel A
Rinas Mara Rosenzvit y Graciela Ineacutes Santillaacuten
2ordf Mencioacuten
ldquoEstudio epidemioloacutegico de Fasciolasis en el aacuterea del Departamento Tinogasta Catamarca (Argentina)rdquo
Jorge Bruno Malandrini Jorge N Velaacutesquez Claudia C Soria Mordf Laura Pantano Laura Kamentzky y Silvana Carnevale
Categoriacutea Monografiacutea Original
Primer Premio ldquoParaacutesitos y enfermedades emergentes y re-emergentes calentamiento global cambio climaacutetico
transmisioacuten y migracioacuten de especies Evaluacioacuten de la participacioacuten del hombrerdquo G Mauricio Bulman y Jorge C Lamberti
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Primer premio I Congreso Internacional e Zoonosis y Enfermades Emergentes VII
Congreso Argentino de Zoonosis Asociacion Argentina de Zoonosis Buenos Aires 2011
Modalidad Poster
