1. ELECTROFORESIS DE PROTEINAS: ASPECTOS TECNICOS Y APLICACIONES CLINICAS Servi-Med Biol. Carlos Bjar Lozano Laboratorios Clnicos

2. PORQUE ELECTROFORESIS DE PROTEINAS ?PORQUE ELECTROFORESIS DE PROTEINAS ? SU JUSTIFICACIN E IMPORTANCIASU JUSTIFICACIN E IMPORTANCIA Existen en el suero, cientos de protenas producidas por diversos rganos. A excepcin de las protenas del complemento hemoltico, las inmunoglobulinas y una gran variedad de hormonas, casi todas las protenas son sintetizadas en el hgado y vertidas al sistema circulatorio. Muchas de estas protenas, o son filtradas por el rin, absorbidas en el intestino o son metabolizadas en diversas clulas y rganos. Mediante electroforesiselectroforesis pueden evidenciarse variaciones significativas en la concentracin de estas protenas, y por ende, evidenciar alteraciones orgnicasevidenciar alteraciones orgnicas como: hematolgicas, inmunolgicas, renales, hepticas y gastrointestinales. Hasta hace un par de dcadas, el abordaje de estas alteraciones se basaba en el estudio de Protenas Totales y Relacin A/G POCO SENSIBLE 3. Este estudio se basa en la propiedad de las protenas para moverse segn su peso molecularpeso molecular y su carga elctricacarga elctrica, al colocar una muestra de suero del paciente en una matriz (Gel de Agarosa o Acetato de Celulosa) y aplicar un voltaje. En el suero (pH 7.4) hay protenas con carga + y pero, a un pH alcalino de 8.9, todas las protenas quedan con carga elctrica negativa y migrarn del Ctodo (-) hacia el Anodo (+) Son bsicamente 10 a 12 protenas las responsables de la formacin de las bandas caractersticas de la electroforesis de protenas. ELECTROFORESIS DE PROTEINASELECTROFORESIS DE PROTEINAS SU PRINCIPIO TCNICOSU PRINCIPIO TCNICO 4. ELECTROFORESIS DE PROTEINAS: Electroforograma de protenas o Proteinograma nodo (+) Pre- Albmina Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta B-1 B-2 Gamma Ctodo ( - ) Punto de aplicacin 5. ELECTROFORESIS DE PROTEINAS: Principales interferencias: Hemoglobina y Fibringeno nodo (+) Pre- Albmina Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta B-1 B-2 Gamma Ctodo ( - ) Punto de aplicacin Fibringeno: 340 kD entre Beta y GammaHemoglobina: 68 kD entre Alfa-2 y Beta 6. ELECTROFORESIS DE PROTEINAS: Componentes de las distintas fracciones Componente Concentracin Concentracin Prot. Totales 6.0 a 8.0 g/dL 100.0 % Pre-Albmina .016 a .040 g/dL 16.0 a 40.0 mg/dL Albmina 3.2 5.2 g/dL 52 65 % Globulinas Alfa-1 0.1 0.3 g/dL 2 5 % Globulinas Alfa-2 0.4 1.0 g/dL 7 13 % Globulinas Beta 0.5 1.1 g/dL 8 14 % Globulinas Gamma 0.8 1.8 g/dL 12 23 % 7. Fraccin: Albmina - Forma la primer banda de la electroforesis. Constituye del 50 % al 60 % de las protenas sricas. - Sirve como deposito mvil de aminocidos y como molcula transportadora de diversas hormonas y medicamentos. - Variantes: - Bisalbuminemia: dos bandas en la fraccin albmina. Puede inducirla la penicilina y cefalotina. No tiene implicaciones clnicas. - Disalbuminemia: albmina con diferente movilidad electrofortica y diferente capacidad para transportar sustancias (medicam, hormonas) - Medicin til en el diagnstico de insuficiencia heptica, deshidrata- cin aguda, prdida de protenas. - Cuando la concentracin srica es menor de 2 g/dL, se desarrollar edema. - Buen marcador para detectar los dficit nutricionales crnicos. - Los aumentos de albmina se relacionan casi siempre con deshidratacin que produce el consecuente aumento en el contenido proteico del plasma. - Disminucin importante por dao heptico (sntesis disminuida) o por prdida renal (proteinuria). 8. Bisalbuminemia tpica Fracciones Beta-1 y Beta-2 diferenciadas No asociado a ninguna patologa Inducida por penicilinas y otros antibiticos Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 9. La Albmina se encuentra dividida: bisalbuminemiabisalbuminemia Las dos fracciones de albmina no son simtricas, por lo que puede inferirse su induccin por frmacos como antibiticos No tiene implicaciones clnicas. Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 10. Fraccin: Alfa - 1 - Esta formada bsicamente por 3 componentes: - Antitripsina Alfa-1: Corresponde al 90 % de las protenas de esta banda, y se tie de forma muy intensa. Es un inhibidor de proteasas como los activadores de los factores de la coagulacin y del complemento hemoltico. - Alfa Feto-Protena: normalmente es no detectable su presencia, pero en CA heptico incrementa esta banda. - Lipoprotena Alfa y Glicoprotena cida Alfa-1 (Orosomucoide): Se tien dbilmente en este anlisis, por lo que no son representativas. - Se presentan elevaciones en procesos inflamatorios en los que hay produccin de reactantes de fase aguda. - Se observa disminucin en pacientes con dao heptico (cirrosis). - Por deficiencia congnita de alfa 1 antitripsina. - Aproximadamente un 75% de los adultos con deficiencia grave de Alfa- 1 Anti-tripsina desarrollarn enfisema. - Se desconoce el mecanismo que asocia la enfermedad heptica con dficit de Alfa-1 Antitripsina y el enfisema. 11. Albmina baja Alfa-1 elevada Proceso inflamatorio agudo en curso. Alfa-1 Anti-tripsina como reactante de fase aguda. Albmina = aumento falso del resto de las fracciones. Observar valores absolutos y porcentuales. Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 12. Fraccin Alfa-1 disminuida Disminucin crtica principalmente en pacientes con enfisema pulmonar Sueros envejecidos pierden esta fraccin. Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 13. Fraccin: Alfa - 2 Constituida por: 1.- Macroglobulina Alfa-2: - Peso Molecular = 725 KDa - Inhibidor de proteasas como la tripsina y la plasmina. - Reactante de fase aguda - Se eleva de 3 - 8 veces en procesos que aumentan la filtracin glomerular con prdida de protenas. 2.- Ceruloplasmina - Protena transportadora de hasta el 95 % de todas las reservas de cobre del organismo. - Hay formas heredadas y adquiridas de esta deficiencia. 3.- Haptoglobina: - Peso Molecular = 9 a 20 Kda - Protena transportadora de la Hb liberada por hemlisis de los g.r. - Disminuye en todo proceso de hemlisis. El complejo Haptog-Hb migra diferente que la haptog sola. - Se une especialmente a las HbA, HbF, HbS y HbC. - Es reactante de fase aguda - Aumenta en infecciones, procesos inflamatorios, neoplasias, traumatismos y uso de andrgenos. 4.- Lipoprotena de alta densidad (HDL): - Poco teida por colorantes de protenas, por lo que tiene poca influencia en esta electroforesis. 14. Fraccin: Alfa - 2 Aumento de esta fraccin: - Procesos inflamatorios agudos o crnicos - Condiciones neoplsicas - Infarto al miocardio - Sntesis aumentada de haptoglobina por procesos hemolticos. - SINDROME NEFROTICO (acumulacin de HDL) Disminucin de esta fraccin: - Fase aguda de procesos hemolticos - Anemia megaloblstica - Dao heptico severo (cirrosis, hepatitis, tumor heptico). 15. Fraccin Alfa-2 muy elevada (acumulacin de HDL ) Albmina disminuida. Patrn observado en Sndrome NefrticoSndrome Nefrtico ColesterolColesterol Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 16. Alfa-2 y Beta aumentados en cifra % pero normal en concentracin g/dL: Imagen compatible con proceso maligno Fenmeno inducido por disminucin en Albmina Disminucin real en gama globulinas. Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 17. Fraccin: Beta Esta fraccin puede dividirse en dos bandas: Beta-1 y Beta-2 1) Fraccin Beta-1 (ms andica, polo +) - Est constituida principalmente por Transferrina ( o Beta-1 glicoprotena). Tiene un papel fundamental en la dinmica del hierro; bsicamente acarreo de sitios de depsito (hgado) hacia los sitios donde hay clulas que estn sintetizando Hb (eritropoyesis en la mdula sea). - Existen distintos tipos de transferrina, P.M. 80 90 Kda que corren todos en Beta-1 posicin. - Aumento: La Tf es abundante en la leche materna: aumento en suero de bebes lactantes y madres lactando. En pacientes con deficiencia en hierro aumenta para compensar el dficit de Fe de una forma precoz. - Disminuye: Enfermedad heptica, nefrosis, anemia crnica, neoplasias, y en procesos infecciosos. 18. Fraccin: Beta 2) Fraccin Beta-2 (ms catdica, polo -) - Esta fraccin incluye principalmente la fraccin C3 del complemento y en menor grado, C4. - Esta fraccin se degrada rpidamente aun en muestras refrigeradas, ya que C3 es degradado en componentes menores de movilidad electrofortica Beta-1. - Ya que tanto la va clsica como la alterna del complemento convergen en C3, variaciones significativas de los niveles sricos de C3 correlacionan estrechamente con variaciones en esta banda. - Varios procesos autoinmunes como Lupus, A.R. y otros, suelen cursar con disminucin de esta banda por consumo de C3. - La protena de Bence-Jones (en orina) presenta movilidad en esta zona, por lo que puede inducir su elevacin (Cadenas ligeras de IgS). - La lipoprotena Betalipoprotena Beta (de baja densidad) se ubica en esta banda. Abarca Beta-1 y Beta-2 e inclusive hasta inicio de la regin gamma. - Corren en esta fraccin tambin, la Beta-2-microglobulina y la hemopexina, menos representativas en proporcin del resto de los componentes citados. 19. Fraccin: Beta Padecimientos que afectan los niveles de la Fraccin Beta-2 1. Hipogamaglobulinemias y padecimientos con prdida de inmunoglobulinas 2. En enfermedades malignas: Enf. Hodgkin, Leucemia granuloctica crnica, mieloma mltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, gamopatas monoclonales 3. Hipergamaglobulinemia policlonal 4. Hepatopatas crnicas, 5. Enfermedades autoinmunes: Lupus, AR, S. Sjgren, esclerodermia, etc 6. Varios tipos de infecciones crnicas como: - Bacterianas: TB, lepra, osteomielitis, endocarditis bacteriana. - Parasitarias: tripanosomiasis, paludismo, Kala-Azar. - Micticas: Actinomicosis, nocardiosis - Virales: Mononucleosis infecciosa (VEB), bartonelosis, linfogranuloma venreo 7. Frecuentemente una alteracin de esta banda, va acompaada de alteraciones en otras bandas. 20. Fraccin: Gamma-Globulinas - Esta fraccin esta formada por las 5 inmunoglobulinas: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE ESTA METODOLOGIA NONO DISCRIMINA LAS CONCENTRACIONES INDIVIDUALES DE CADA INMUNOGLOBULINA - SU FUNCION ES EVALUAR LA CONCENTRACION GLOBAL DE INMUNOGLOBULINAS. - Una banda monoclonal obliga a determinarse InmunoelectroforesisInmunoelectroforesis para definir la paraprotena anormal que se esta produciendo. - La Protena C Reactiva corre dentro de esta banda, pero su concentracin es tan baja en proporcin a las IgS, que no altera el patrn de corrimiento aun en fase aguda. 21. Inmunoelectroforesis para definir paraprotena de un Mieloma Definicin de Gammopata BiclonalGammopata Biclonal: aparecen dos bandas monoclonales definidas en la electroforesis de protenas. La Inmunoelectroforesis define las Inmunoglobilinas producidas. Electroforesis en Gel de agarosa Inmunoelectroforesis para definir inmuno- globulina anormal: Biclonal IgG-IgM Kappa 22. Fraccin: Gamma-Globulinas - Elevacin de la Gamma Globulinas:Elevacin de la Gamma Globulinas: - Infecciones crnicas (principalmente virales, como Epstein Barr) - Enfermedad heptica - Enfermedades autoinmunes (Lupus, A.R.) - Sndromes malignos como mielomas y linfomas - Disminucin de Gamma Globulinas:Disminucin de Gamma Globulinas: - Agamaglobulinemia - Envejecimiento (edad del paciente) - Algunos medicamentos principalmente mielotxicos (QT, Antibiticos) - Algunos padecimientos malignos como LLC. - Su disminucin explica estados de inmunodepresin, con causa aSu disminucin explica estados de inmunodepresin, con causa a determinar por otros mtodos (laboratorio y clnica).determinar por otros mtodos (laboratorio y clnica). 23. Disminucin en fraccin Gama: Paciente con disminucin en respuesta inmune Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 24. Fraccin Gama ausente: AAgamaglobulinemia puragamaglobulinemia pura Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 25. Fraccin Gama con base angosta y altura mayor que la base: Banda MonoclonalBanda Monoclonal Dx: MielomaDx: Mieloma Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 26. Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Banda monoclonal: 65.3 % Albmina: 18.2 % Inicia tratamiento Anlisis de patrones electroforticos 27. Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Banda monoclonal: 38.8 % Buena respuesta a tratamiento con disminucin de gama y aumento de albmina Anlisis de patrones electroforticos 28. Electroforesis en Acetato de Celulosa Reproducibilidad 1 1 2 2 3 3 4 4 1. Banda policlonal 2. Banda monoclonal 3. Normal 4. S. Nefrtico (puente Beta-Gama) Inmunofijacin para definir inmunoglobulina anormal 29. Inmunofijacin para definir paraproteina anormal Inmunoelectroforesis o Inmunofijacin. 3. IgA kappa 4.- IgG Lambda 1. IgG Lambda 2.- Suero normal 1 1 2 2 3 3 4 4 1. Banda policlonal 2. Banda monoclonal 3. Normal 4. S. Nefrtico (puente Beta-Gama) 30. Reporte de Electroforesis de Protenas Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 31. REPORTE DE ELECTROFORESIS - ProteinogramaProteinograma del paciente con la ImagenImagen de su corrimiento electrofortico. - Informacin auxiliar para interpretacin (principales patrones encontrados. - Identificacin del paciente - Resultados, con valores normales en % y g/dL. 32. Anlisis de patrones electroforticos La disminucin de la albmina induce una pseudoelevacin del resto de las fracciones. Desnutricin severa? Deshidratacin ? Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 33. Protenas normales Alfa-2 muy elevada y Beta muy disminuida Sndrome Nefrtico? Banda Monoclonal? No es comn banda monoclonal en ese sitio se sugiere practicar inmunoelectroforesis. Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 34. Albmina esta muy disminuida Alfa-2 y Beta en proporcin muy aumentada Paciente con proceso heptico maligno. Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 35. En un mieloma, hay otros componentes que dan informacin adems de la banda monoclonal: Alfa-2 : S. Nefrtico + Neoplasias + Procesos inflamatorios Beta : enfermedades malignas) Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 36. Fracciones Beta y Gama unidas en una sola banda ancha: Puente Beta-Gama Cirrosis HepticaCirrosis Heptica Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 37. Puente Beta-Gama Proteinas disminuidas Cirrosis HepticaCirrosis Heptica Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 38. Banda policlonal invadiendo fraccin Beta. Discriminacin entre cirrosis, policlonal o eventual monoclonal mediante inmunoelec- troforesis (verificar cambios hematolgicos y PFHs) Puente Beta-Gama no suele dar un pico tan alto Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 39. Banda Monoclonal atpica. Definir paraprotena producida mediante inmunoelectroforesis: define diagnstico y pronstico. Albmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Valor % 52.0 65.0 2.0 5.0 7.0 13.0 8.0 14.0 12.0 23.0 Valor g/dL 3.2 5.2 0.1 0.3 0.4 1.0 0.5 1.1 0.8 1.8 Prot. Totales 6.0 8.0 g/dL Relacin A/G > 1.0 Anlisis de patrones electroforticos 40. 1. La electroforesis de protenaselectroforesis de protenas es un mtodo de abordaje sensible para detectar innumerables alteraciones de estados patolgicos y disfuncin de varios rganos, que no pueden definirse por otros mtodos. 2. Es importante realizar estudio de inmunoelectroforesisinmunoelectroforesis a toda muestra con banda monoclonal para definir la paraprotena producida y definir el diagnstico, pronstico y tratamiento. No es til realizar la inmunoelectroforesis en el seguimiento de este padecimiento, ya que su principal utilidad es diagnstico. 3. Debe usarse la electroforesis de protenaselectroforesis de protenas para evaluar respuesta a tratamiento (seguimientoseguimiento) en pacientes con banda monoclonal. 4. Puede realizarse electroforesis de protenaselectroforesis de protenas en el seguimiento de un padecimiento cuya anormalidad fue detectada por este mtodo, observando la correccin de la anormalidad de imagen encontrada. 5. Sugerir la realizacin de electroforesis de protenaselectroforesis de protenas a pacientes con fenmeno de RouleauxRouleaux, mayores de 50 aos de edad (sobre todo si hay datos clnicos de fiebre, dolor seo y alteraciones hematolgicas). 6. Se sugiere reducir el uso de la cuantificacin de Protenas yProtenas y Relacin A/GRelacin A/G por lo limitado de la informacin que provee. ELECTROFORESIS DE PROTEINASELECTROFORESIS DE PROTEINAS 41. En caso de sospecha clnica de gamopata monoclonal, una regin gama srica normal no excluye diagnstico. Debe realizarse Electroforesis de Protenas en OrinaElectroforesis de Protenas en Orina: ELECTROFORESIS DE PROTEINASELECTROFORESIS DE PROTEINAS Protena de Bence-Jones: Eliminacin por orina, de cadenas ligeras de las inmunoglobulinas, las que se producen en exceso. Observada en pacientes con Mieloma, Macroglobulinemia de Waldenstrm y en algunos casos de Amiloidosis. Enfermedad de cadenas pesadas: Pueden eliminarse por orina en estos padecimientos. Producen solo la fraccin Fc de las inmunoglobulinas (principalmente IgG, IgA, IgM e IgD), de ah el nombre de enfermedad de cadenas pesadas. Suero del paciente Orina del paciente concentrada 20 X 42. Electroforesis de Protenas de Lquido CefalorraqudeoElectroforesis de Protenas de Lquido Cefalorraqudeo para investigar bandas oligoclonalesbandas oligoclonales. Estas, son inmunoglobulinas (sntesis intratecal) que indican la presencia de una inflamacin en el sistema nervioso central y puede ser un signo de esclerosis mltiple (apoyan diagnstico, sin ser patognomnicas). ELECTROFORESIS DE LIQUIDOELECTROFORESIS DE LIQUIDO CEFALORRAQUIDEOCEFALORRAQUIDEO 43. Ms del 95% de los pacientes con esclerosis mltiple presentan bandas oligoclonales en el lquido cefalorraqudeo indicando una sntesis intratecal de inmunoglobulinas. No hay correlacin entre la presencia de bandas y el proceso desmielinizante. Las Bandas pueden estar presentes aunque el nivel de inmunoglobulinas en LCR sea normal Una vez que la respuesta oligoclonal est establecida se mantiene durante la vida del paciente (excepto en los procesos infecciosos). Se sugiere correr la electroforesis del LCR simultneamente con el suero del paciente para clculo de ndices proteicos (NO HEMOLISIS) Las bandas oligoclonales se encuentran presentes en otros procesos como: neurosfilis, meningitis aguda bacteriana o viral, leucoencefalopatas, panencefalitis esclerosante subaguda, panencefalitis progresiva por rubola, neuritis ptica y otros procesos autoinmunes o infecciosos. ELECTROFORESIS DE LIQUIDOELECTROFORESIS DE LIQUIDO CEFALORRAQUIDEOCEFALORRAQUIDEO 44. Diagnstico y seguimiento de las distintas enfermedades neurolgicas que cursan con alteraciones de la concentracin y composicin de las protenas del LCR. Aumento de la sntesis o liberacin de protenas (globulinas) in situ Evaluacin del grado de afectacin de la integridad de la Barrera Hemato-Enceflica consecutivo a infecciones, inflamacin o traumatismo. Aumento del paso de protenas por ruptura de la integridad de la BHE Obstruccin a la libre circulacin del LCR Procesos degenerativos-destructivos del SNC Proteinas del LCR: Paso de protenas Plasma LCR = 80 % (difusin pasiva) Sntesis intratecal de protenas: < 20 % ESTUDIO DE LAS PROTEINAS DELESTUDIO DE LAS PROTEINAS DEL LIQUIDO CEFALORRAQUIDEOLIQUIDO CEFALORRAQUIDEO 45. ELECTROFORESIS DE LIQUIDOELECTROFORESIS DE LIQUIDO CEFALORRAQUIDEOCEFALORRAQUIDEO Para corrimiento en muestras sin diluir y tincin con oro coloidal, usar una muestra de suero normal como control, diluida 1:20 (suero / sol. salina) Para corrimiento con muestras concentradas, ajustar concentracin de protenas segn la siguiente tabla: Protenas de L.C.R. de 15 a 45 mg/dL (suero es de 6.0 a 8.0 g/dL) Protenas totales iniciales en la muestra (L.C.R. / orina) Concentracin a efectuar: (aproximar a 2 g/dLaproximar a 2 g/dL) < 30 mg/dL 80 X 40 100 mg/dL 40 X 100 300 mg/gL 20 X 300 600 mg/dL 10 X > 600 mg/dL 5 X 46. ELECTROFORESIS DE LIQUIDOELECTROFORESIS DE LIQUIDO CEFALORRAQUIDEOCEFALORRAQUIDEO Mtodo de Concentracin mediante Columna de Minicon CS15 (Milipore) Cuantificacin de Protenas en LCR y ajuste de concentracin 47. INDICES DE PROTEINAS YINDICES DE PROTEINAS Y GLOBULINAS DEL SUERO / LCRGLOBULINAS DEL SUERO / LCR 48. CAUSAS DE AUMENTO DE PROTEINAS DELCAUSAS DE AUMENTO DE PROTEINAS DEL LIQUIDO CEFALORRAQUIDEOLIQUIDO CEFALORRAQUIDEO Por aumento del paso de protenas desde el plasma Hemorragia cerebral Meningitis bacteriana Meningitis viral 30 150 mg/dL 80 500 mg/dL 30 100 mg/dL Por aumento de sntesis intratecal Neurosfilis Esclerosis Mltiple Meningitis tuberculosa Sndrome de Guillain-Barre 50 150 mg/dL 25 50 mg/dL 50 300 mg/dL 100 400 mg/dL