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Esterilizacin en Microbiologa

Nombre: Luis Huentemil Ortiz

Asignatura: Procesos Bsicos de Laboratorio

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ndice Portada..1

ndice...................................................................................2

Introduccin3

Marco Terico4

Esterilizacin, Desinfeccin y Asepsia.4

Pasteurizacin.5

Principios Bsicos de Descontaminacin:

Limpieza....6

Desinfeccin, Esterilizacin, Calor.7

Calor seco, Calor Hmedo..8

Qumicos.9

Procedimiento10

Materiales..10

Procedimiento.11

Resultados.12

Conclusiones.12

Bibliografa.13

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Introduccin

En los distintos tipos de laboratorio de microbiologa, la limpieza y

descontaminacin de partculas y microorganismos presentes en los

materiales, es fundamental para el proceso de medio de cultivo y

manipulacin en la siembra, sin verse afectado por bacterias e infecciones en

los instrumentos.

Por ello, este informe explica el concepto de esterilizacin, los mtodos

de limpieza y desinfeccin segn los tipos de materiales, las ventajas y

desventajas de los distintos mtodos y que factores utilizan para la muerte

de los microorganismos.

Se pondr diferenciar los tipos de esterilizacin, entre fsico y qumicos,

la forma en que afectan la estructura y funcionamiento de las clulas

microscpicas. Los equipos que se deben utilizar para esterilizar

instrumentos de diferentes materiales, y segn la dificultad para la

desinfeccin y eliminacin de microorganismos patgenos y no patgenos.

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Marco Terico

Para explicar la teora de la esterilizacin en la microbiologa, primero

debemos conocer ciertas definiciones de conceptos que se ocuparn en este

informe:

Esterilizacin: significa la eliminacin de toda forma de vida de un medio o

material, lo que se lleva a cabo generalmente por medios fsicos, por

ejemplo, filtracin, o por muerte de los organismos por calor, productos

qumicos u otra va. Esta definicin excluye por lo tanto cualquier tcnica que

resulte solamente en un dao a los microorganismos o atenuacin de la

actividad de cualquier tipo.

Desinfeccin: se aplica a la remocin o destruccin por cualquier va de

organismos vivos que pueden causar dao particular o infeccin. No significa

por lo tanto la destruccin de todos los microorganismos, sino solamente de

aquellos que pueden producir un resultado no deseado. Un antisptico es un

desinfectante, o sea un agente qumico usado para destruir microorganismos

dainos. Se utiliza en general para agentes a ser aplicados en animales o

humanos.

Asepsia: es la exclusin continuada de microorganismos contaminantes. As

por ejemplo el cultivo de microorganismos en el laboratorio es llevado a cabo

aspticamente como en muchas fermentaciones industriales. El medio de

cultivo es esterilizado para remover toda forma de vida y luego inoculado con

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el cultivo requerido. Se dice entonces que el sistema se mantiene en

condiciones aspticas.

Pasteurizacin: es el trmino aplicado al proceso que se utiliza para la

destruccin de algunos de los microorganismos posiblemente presentes en

materiales sensibles al calor como la leche y cerveza. Consiste en calentar la

leche, por ejemplo a 62 C, mantenerla a esta temperatura 30 minutos y

despus enfriarla lo ms rpidamente posible. Esta tcnica no es de ninguna

manera un procedimiento de esterilizacin. Es solamente un mtodo para

destruir organismos patgenos y al mismo tiempo disminuir el nivel de

aquellos organismos que ms pueden deteriorar la leche.

En un laboratorio, todo material que sea utilizado para procesos de

microbiologa deber cumplir una serie de condiciones sanitarias e higinicas,

adems de una total asepsia del material que se va a utilizar, aunque no

siempre es estrictamente necesario. Depender de las prcticas que se

realizarn en el momento.

Por lo que todo material que pase por el laboratorio, se le debe tener

en cuenta que:

- Todo material utilizado para la realizacin de recogida de un tipo de

muestra que posteriormente ser analizada en el laboratorio, debe estar

totalmente esterilizada.

- Todo material utilizado para la realizacin de pruebas oportunas, ya sean

placas petri, tubos de ensayo, medios de cultivo, pipetas, hazas de siembra,

entre otros, debern estar esterilizados.

- Es fundamental que todo material que tenga que estar en contacto con un

germen est esterilizado.

- Antes de cualquier esterilizacin, el material debe estar limpio o

desinfectado.

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- Conviene, si es econmicamente viable, utilizar material desechable.

- El material de uso asptico deber guardarse separadamente del sptico.

- La limpieza de mesas de trabajo, suelo, y en general superficies de

laboratorio, se realizar mediante desinfeccin y de forma peridica,

detectando el grado o riesgo de posible contaminacin ambiental.

- Se deber tener el conocimiento y destreza para trabajar en condiciones de

total asepsia, al menos en la inmensa mayora de los casos, por lo que se

debern conocer los mtodos de descontaminacin existentes para la

prevencin de accidentes laborales.

- La manipulacin de todo material y/o muestra deber se la adecuada

siguiendo el protocolo de trabajo preciso, teniendo en cuenta las medidas

cautelares para la prevencin de accidentes laborales.

Principios Bsicos de Descontaminacin; Limpieza, desinfeccin y

esterilizacin:

Limpieza: se destruye el germen por tcnicas de esterilizacin o desinfeccin,

y posteriormente se limpian. A partir de aqu, se deber hacer la limpieza de

los materiales.

Se separan los materiales de uso sptico del de uso asptico, se deber

tener cuidado con dejar por mucho tiempo el material metlico en agua.

Primero se debern limpiar con agua fra, ya que el calor hace que los

residuos como pus y sangre se adhieran ms.

Se lavarn con agua caliente y jabn frotando especialmente los sitios

o lugares ms angulosos, tras el lavado y enjuagado se volvern a aclarar con

agua destilada. Se secarn y se comprobar su estado y se proteger la

integridad y limpieza del material si fuese necesario.

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Desinfeccin: este mtodo en la microbiologa se utilizar para la

determinacin y descontaminacin de superficies inertes y para la

desinfeccin de manos, piel, mucosas, etctera.

Materiales de superficies inertes: se utilizan sobre todos los mtodos

qumicos, es decir, los desinfectantes (detergentes, hipoxlitos, etc.) van a

producir la destruccin de todo tipo de grmenes patgenos, pero no

destruyendo los grmenes no patgenos.

Desinfeccin manos, piel y mucosa: la desinfeccin sobre tejidos vivos

corresponden a tcnicas de antisepsia y lo que se aplica en ellos no son

desinfectantes, sino antispticos. Estos antispticos son sustancias

antimicrobianas que se aplican a los tejidos vivos y reducen la posibilidad de

infeccin, sepsis o putrefaccin, a diferencia de los desinfectantes que actan

en superficies inertes.

Esterilizacin: ste mtodo es utilizado en la microbiologa para la

reutilizacin de cualquier material que pueda y que deba utilizarse como

material asptico. Existen distintas tcnicas que van a producir la destruccin

de cualquier forma de vida. Se le denomina al mtodo tcnico o proceso que

tiene por objeto la destruccin completa y absoluta de los microorganismos.

Los medios utilizados se basan en acciones en el protoplasma y que

determina la supresin de la vida de estos elementos unicelulares. Los

medios pueden ser fsicos o qumicos:

Calor:

Las actividades metablicas de un organismo son el resultado de ciertas

reacciones qumicas, ya que son influenciadas por la temperatura, y los

procesos de vida estn tambin influenciados por ella. Ciertos

microorganismos son capaces de crecer a ciertos rengos de temperatura,

pero cuando se utilizan temperaturas menores o mayores al rango, puede

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llegar a ser un factor destructor para los microorganismos. Las temperaturas

mayores a los rangos, tienen poderes destructores; y las temperaturas

menores al rango, tienen un factor esttico, aunque algunas de las clulas en

la poblacin mueren.

Calor seco:

Generalmente se considera que el calor destruye los microorganismos a

travs de la oxidacin de sus constituyentes intracelulares. Se utiliza calor

directo en la llama, para esterilizar materiales domsticos como esptulas,

varillas, boca de tubos y balones, hazas de metal, etctera. O, aire caliente de

160 a 180 C durante una o dos horas, de lo contrario no funciona al no

penetrar los microorganismos, se recomienda para materiales de vidrio.

Horno de Esterilizacin

Calor Hmedo:

El empleo de este calor da mejores resultados. La destruccin de los

microorganismos se produce por destruccin de las protenas. Algunos

mtodos como la ebullicin no son eficaces, ya que algunas esporas soportan

esta condicin por muchas horas, sirve ms bien como desinfeccin que una

esterilizacin. Otra forma de aplicar calor hmedo es por bao Mara a

100C. Pero el mtodo ms seguro y rpido, es el de vapor de agua saturado

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a presin; se emplea para esterilizacin de toda clase de materiales y

lquidos, con la nica misin de no ser coagulables por el calor.

Autoclave

Qumicos:

Los agentes qumicos pueden afectar a las clulas de modos diferentes.

Los mecanismos involucrados son escasamente conocidos, pero se pueden

encontrar cuatro formas diferentes de operar.

1.- Coagulacin de las protenas: muchas de las protenas celulares son

enzimticas y se encuentran en una forma de dispersin coloidal. Si se hacen

precipitar y coagular esas protenas, pierde su capacidad funcional y la clula

muere.

2.- Desorganizacin de la membrana celular: la membrana celular obra

como una barrera selectiva, permitiendo el paso a unas soluciones, pero no

a otras. Las sustancias que se concentran en la membrana celular pueden

alterar sus propiedades fsicas y qumicas, impidiendo su funcin normal. De

ello puede resultar la inhibicin de la clula o su molde.

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3.- Eliminacin de los grupos sulfhidrilos libres: muchas de las encimas de

las clulas contienen cistena y tienen cadenas laterales terminadas con

enlaces SH (grupos sulfhidrilos). Estas encimas no pueden funcionar a

menos que los grupos sulfhidrilos permanezcan libres y reducidos. Si se han

inutilizados, se produce una amplia perturbacin en la clula, de la que se

puede resultar su muerte.

4.- Antagonismo Qumico: las encimas llevan a cabo su funcin cataltica en

virtud de su afinidad para sus sustratos naturales. Si estructuralmente un

compuesto se parece a un sustrato en los aspectos esenciales, la encima

tendr afinidad por dicho compuesto. Si esta afinidad es suficientemente

intensa, el compuesto tomar el lugar de un sustrato normal de la encima o

impedir la reaccin normal, inhibiendo, como consecuencia de ello, la

reproduccin de la clula.

Procedimiento

Materiales:

- papel kraft

- hilo

- algodn

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- cinta adhesiva

- 2 pipetas graduadas

- 3 placas petri

- 3 tubos de ensayo

- mondadientes

- horno de esterilizacin

Procedimiento:

1.- Realizar un lavado de los materiales de vidrio con agua fra y detergente o

jabn, repasar por los lados ms curvos de los instrumentos y aclarar con

agua destilada. Luego dejarlos secar por escurrimiento.

2.- Al estar secos los materiales, se proceden a tapar los orificios superiores

de los tubos de ensayo y de las pipetas con algodn.

3.- Despus se deben envolver en forma cuidadosa y ordenada, todos los

materiales con papel kraft. En los tubos y pipetas, el envoltorio debe ser

individual, no as en las placas, que se puede poner una sobre la otra.

4.- Amarrar con hilo el envoltorio de placas para evitar la cada de una de

ellas.

5.- En un mondadientes, poner un poco de algodn en la punta y enrollarlo,

luego amarrarlo con hilo o con cinta adhesiva. La forma debe ser similar a la

de un cotonito.

6.- Luego de haber envuelto los materiales, se deben sellar los lados con cinta

adhesiva para evitar la entrada del aire caliente.

7.- Al estar los materiales listos, ponerlos en el horno de esterilizacin a una

temperatura entre los 160 y 180 C a una o dos horas. Su uso despus de la

esterilizacin debe ser con total asepsia, ya que si los materiales tienen

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contacto con la intemperie, son contaminados y deben ser nuevamente

esterilizados.

Resultados

La limpieza de los instrumentos antes de la esterilizacin, permiti

eliminar la mayora de las impurezas impregnadas en el vidrio de los

instrumentos, con agua destilada y solucin de agua con cloro.

La esterilizacin en el horno fue exitosa, ya que visualmente se vea sin

impurezas ni marcas en el vidrio. Se notaba en el papel kraft, cierta humedad

desde dentro del papel, probablemente por el agua del lavado de los

materiales y el vapor debido al calor seco de la estufa.

Los materiales de vidrio estaban en condiciones para trabajar en

laboratorio microbiolgico.

Conclusiones Del ensayo de esterilizacin realizado, podemos concluir que el calor

seco de la estufa, da mejores resultados que el calor hmedo, debido a

factores que los diferencian como las horas que se ocupan, los insumos, los

equipos y la eficacia del calor seco.

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El uso del papel kraft y su sellado, es para evitar que el calor entre

directamente al material, para ello el papel transmite el calor, evapora el

resto de agua que est dentro del material, y logra una mayor esterilizacin.

El calor directo se utiliza para los instrumentos de metal y la boca de

tubos y balones, a la hora de extraer una muestra de medio de cultivo.

Bibliografa http://www.biologia.edu.ar/microind/esterilizaci%C3%B3n.htm

Esterilizacin y conceptos importantes.

Esterilizacin, Procesos Bsicos de Laboratorio, Enrique Reveco

Fisher.