eletroforese revisado
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7/26/2019 Eletroforese REVISADO
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ELETROFORESE
Reviso Elaborada Pelos Alunos:
Ademir Da Silva : 4207004 Luciana Vidal:42071
Adolfo Torres: 4206884 Kelly Fraso:420714
Caroline Cury: 4207026 Beatriz Oliveira:4207
Helena de Andrade :4207087 Talita Gonalves:420
Renata Lopes: 4207149 Marcela Arajo:4207
Michelle Martins: 4207177
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O QUE?
A eletroforese uma tcnica que consiste na migrao de moionizadas, de acordo com suas cargas eltricas e pesos molecem campo eltrico. Molculas com carga negativa migram papositivo (ando) e molculas com carga positiva migram para
negativo (catdo). Para substncias anfteras(ex: protenas),de adquirirem carga positiva ou negativa em funo do pH, indispensvel manter constante o pH do meio durante a eletrpelo uso de solues-tampo.
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ESQUEMA SIMPLIFICADO DO PROCESSO
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TIPOSDEELETROFORESE: EMGEL
uma tcnica de separao de molculas onde as partculas carregadas negativamente pelo detergente dodecil sulfato d(SDS), com exceo do DNA, que j possui carter de ction, em um determinado gel durante a aplicao de uma diferenpotencial em direo a um eletrodo positivo, sendo que este
por uma corrente eltrica, e posteriormente so aplicadas sogel.Os principais tipo de gis usados so a agarose e apoliacrilamida
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EMGELDEAGAROSE
A agarose um polissacardeo composto por gar e pectina. O uma mistura do p de gar com a soluo tampo. Em seguidase brometo de Etidium, que tem afinidade com o DNA e revela presena de UV( ultra violeta)os cidos nucleicos.
Quando a mistura esfriar o gel estar duro, interessante colo
pente no gel durante o endurecimento, o pente cria poos que utilizados para a colocao das amostras. Podemos ver esse prcomo uma corrida, os as menores partculas se movem mais r
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EMGELDEPOLIACRILAMIDA
A poliacrilamida uma mistura de dois polmeros, acrilamidbisacrilamida.
Basta adicionar os dois polmeros nas concentraes desejadasuporte de vidro e na presena de um catalisador. Esse gel mtxico e difcil de ser preparado, sendo o gel de agarose mais u
Existem dois tipos de gel de poliacrilamida:Desnaturante: Separa e purifica fitas simples de DNA, e convenDesnaturante pois polimerizado pela uria.
No Desnaturante: Separa e purifica fitas duplas de DNA.
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ETAPASDAELETROFORESEEMGEL
Preparao do gel Aplicao das amostras Eletroforese Colorao Anlise dos resultados
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Eletroforesehorizontal:
agarose
Eleforesevertical:poliacrilamida
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Eletroforese capilarA eletroforese capilar uma tcnica analtica de separao em que os commistura de ons ou molculas. So separados de acordo com sua habilidaresposta um campo eltrico aplicado, atravs de um meio condutor que
tampo aquoso.
A separao dos analitos ocorre enquanto os componentes da amostra mde um campo eltrico atravs de um tubo capilar preenchido com uma seletrlito.
O capilar liga os dois reservatrios entre os quais se aplicam uma diferenA deteco do componentes geralmente feita prxima extremidade opamostra e a anlise registrada em um eletroferograma, um grfico de inem funo do tempo.
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Eletroforese capilar em gel
A CE em gel utiliza matrizes gelatinosas como meio de se uma poderosa tcnica para separao de macromolcula
protenas e molculas de DNA.A CE em gl permite a anmolculas em baseadas em seu tamanho , em que a separafeita em gis fsicos ou qumicos ou em solues polimricaquais o tamanho molecular e concentrao determinam aseletividade por efeitos de peneiramento. Esta tcnica pos
vantagens quanto sua rapidez , alto poder de resoluo, tempo de anlise e possibilidade de automao quando comanalises tradicionais como as de em gel de poliacrilamida cromatografia por excluso de tamanho.
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Eletroforese de fronteira mvel
Na eletroforese por fronteira mvel, uma quantidade r
amostra e colocada em um tubo, preenchido com uma tampo. Apos a aplicao do campo eltrico, os compoamostra migram em determinada direo com uma velcaracterstica que depende da mobilidade do componeseparao completa nunca e atingida, pois apenas os
componentes de maior mobilidade podem ser parcialmpurificados, enquanto que as bandas dos outros composofrem diversos graus de sobreposio
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A eletroforese capilar de zona (CZE)
A eletroforese de zona em soluo livre a tcnic
utilizada e tem essa denominao devido ao fato capilar e os reservatrios conte do os eletrodos scom um tampo( denominado eletrlito carreadoconduz a corrente eltrica e fornece a capacidade
tamponada. A amostra, contendo uma mistura iintroduzida no capilar como uma banda de pequeespessura. Sob a influncia do campo eltrico as inicas da amostra e do tampo migram para o ecorrespondente, isto , cations em direo ao cat
ando em direo ao anodo.
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IsactoforeseEm isatocoforese, a amostra e inserida entre solucoes, o elider e o eletrolito terminador. Ambos, cations e anions podeterminados por esse modo, entretanto em misturas dist
eletrolito lider deve conter um cation cuja mobilidade e mmobilidade de qualquer componente cationico da amostralado, o eletrolito terminador deve conter o cation de menomobilidade. Quando o campo eletrico e estabelecido, gradidiferentes de potencial evolvem cada banda, de tal forma
os cations migram com velocidade constante e unica. Em onde cations de menor mobilidade estao presentes, o campmais intenso. Entretanto, estes solutos movem-se com a mvelocidade que os solutos de maior mobilidade, estes ultimsubmetidos a campo eletrico mais fraco. Consequentemen
velocidades das bandas individuais sao auto-normalizada
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Bibliografia :
A tcnica de eletroforese: importncia e aplicaes em anlises genticas (documento do acervo de pes
EMBRAPA, por Sandra Watusi Brammer1).
Estudos de reconhecimento biomolecular por eletroforese capilar, por Sandro Hildebrando
A tcnica de eletroforese para anlise de DNA e proteinas, por DR Francisco Prosdcimo
Determinao simultnea de nions por eletroforese capilar: caractersticas e aplicaes, por Rosana Co
Marina F. M. Tavares e Srgio Massaro
Aplicaes da eletroforese capilar na anlise de bi marcador alfa 1 glicoprotena cida, no controle de qu
bi frmaco interferem alfa 2ae na avaliao de estabilidade enantiosseletiva do frmaco israpidina, por F
Armani aguiar