Separação de Biomoléculas Eletroforese em Gel de Acrilamida

Eletroforese em Gel de Acrilamida

• Metodologia de separação de biomoléculas

• Baseada no peso molecular (KDa) e/ou na carga das moléculas

• Pode ser realizada uma dimensão ou duas dimensões (2D)

• Pode ser em gel desnaturante ou não desnaturante

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Arranjo básico de um sistema de Eletroforese

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Diagramas de aparatos de corrida de gel (A) tubo; (B) eletroforese vertical; (C) Eletroforese horizontal; (D) horizontal de camada fina

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Gel de Agarose e de Acrilamida (A) Géis de agarose são formados por pontes de hidrogênio e interações hidrofóbicas entre os polímeros

(B) Géis de Acrilamida possuem ligações covalentes cruzadas entre camadas de polímeros

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Principais soluções utilizadas para confecção de géis

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Soluções finais de Gel – De corrida e Stack

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Diagrama de aparato de eletroforese vertical - montagem

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Montagem do aparato

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Montagem do Aparato

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Efeito de menisco na forma do gel. Adicionar água ou n-butanol acima do gel permite uma superfície reta para melhor formato das bandas

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Montagem do Aparato

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Montagem do Aparato

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Gel final corado

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(A) Gel de acrilamida para separação de DNA; (B) Gráfico tamanho (par de bases – bp) X distância percorrida; (C) Gráfico do log do tamanho (bp) X distância percorrida

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Exemplo de tabela de cálculo para encontrar o peso molecular

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Exemplo de tabela de cálculo para encontrar o peso molecular

Eletroforese em Gel de Acrilamida

Sistemas de blotting eletroforético (A) Sistema de transferência úmida (tank buffer)

(B) Sistema de transferência semi-úmido