Elektroforéza sérových bielkovín laboratórna prax a klinický

význam

Hunáková A., Kabelíková Z., Štefanec F., Oddelenie klinickej biochémie a hematológie

Nemocnice s poliklinikou Skalica

Kleiblove lekárske dni, Skalica, 2008

�Laboratórna prax pri elektroforéze sérových bielkovín – technické prevedenie a zhodnotenie vyšetrenia

�Klinický význam – prípady patologických obrazov elektroforetických typov v našom laboratóriu

�Pozoruhodné čísla– štatistické zhodnotenie záchytu paraproteínov v našom laboratóriu

Obsah

Princíp elektroforetického delenia bielkovín

� elektroforéza je pohyb elektricky nabitých častíc (iónov, molekúl) v poli jednosmerného elektrického prúdu.

� pohyb jednotlivých bielkovín v elektrostatickom poli určuje ich

výsledný elektrický náboj:

• katodický pohyb

• anodický pohyb

veľkosť molekuly – čím je molekula menšia, tým je pohyb rýchlejší

Technické vybavenie – modulárny ELFO systém sebia – hydragel protein K20

�Systémový aplikátor K20- umožňuje kvalitnú aplikáciu vzoriek biologického materiálu do nosiča - agarózového gélu – rozhodujúci význam na kvalitu delenia

�ELFO - komora K20 – separácia bielkovín na agarózových géloch v alkalickom tlmivom roztoku (pH 8,5)

� programovateľný zdroj MG 300–zdroj jednosmerného elektrického prúdu definovaných podmienok

�Počítačový program Phoresis- pre svoju činnosť potrebuje program bežný počítača skener EPSON PRO1680

Schéma rozdelenia sérových bielkovín v agarózovom géle

Frakcie, okrem albumínovej, sú zmesou rozličných bielkovín – spoločný majú iba elektroforetický pohyb

Alb

α1

α2

β1β2

γ

Alb

α1

α2

β1β2

γ

Softwarové denzitometrické vyhodnotenie elektroforézysérových bielkovín pomocou programu Phoresis firmy sebia.

Pre svoju činnosť potrebuje program bežný počítač a skener EPSON PRO 1680

Elektroforetická pohyblivosť sérových bielkovínfrakcie – denzitometrický záznam

Prednosti používaného elektroforetického systému

� Vysoká kvalita separácie sérových bielkovín

� Vysoká reprodukovateľnosťvýsledkov

� Rýchlosť vyšetrení(14 vzoriek do 2 hodín)

� Efektívne zhodnotenievýsledkov� kvalitatívne� kvantitatívne

Elektroforéza sérových bielkovínKlinický význam

� Patologické stavy • nárast podielu niektorej frakcie • pokles podielu frakcie resp. jej vymiznutie• nová frakcia s atypickou pohyblivosťou

� Klinická interpretácia výsledkov vyšetrenia je daná dlhoročnými skúsenosťami s klasickými elektroforetickými frakciami (Alb, α1,α2, β a γ)

� Elektroforetické typy

charakteristické zmeny podielu elektroforetických frakcií priradené ur čitým chorobným stavom na základe dlhoročnej empírie

• poukazujú obvykle na skupinu chorôb alebo stav spoločný väčšiemu počtu nozologických jednotiek

Elektroforetický gél po separácii sérových bielkovín

1 2 3 4 5 6 7

Polyklonálna gamapatia

Monoklonálna gamapatia

akútna fáza zápalu, zvýšené α1, α 2, znížený albumín

Hypogamaglo-bulinémia

Elektroforetický profil sérových bielkovínu zdravého človeka

Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta snefrotickým syndrómom

Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta sakútnym zápalom

Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta shypogamaglobulinémiou

Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta schronickou hepatitídou – polyklonálna gamapatia

Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta scirhózou pečene – polyklonálna gamapatia

β - γ mostík

Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta splazmocytómom – monoklonálna gamapatia

Elektroforetický profil sérových bielkovín u pacienta smonoklonálnou gamapatiou

najvyššia doposiaľ detegovaná koncentrácia paraproteínu

Elektroforetický profil sérových bielkovín pribiklonálnej gamapatii

Laboratórny postup pri detekcii paraproteínu v elektroforetickom profile bielkovín

1. jednoznačná prítomnosť paraproteínu (vyššie

koncentrácie), resp.podozrenie na jeho prítomnosť (nízke koncentrácie v oblasti γ, resp. podozrenie na prítomnosť vo frakcii β, resp. vzácne v α2)

2. Stanovenie koncentrácie imunoglobulínov v sére(IgG, IgM, IgA) – zvyčajne výraznejší nárast koncentrácie jedného z imunoglobulínov a pokles (až vymiznutie) iného (nie vždy)

3. Imunofixácia – potvrdenie prítomnosti paraproteínu a určenie typu paraproteínu(metóda je založená na princípe imunoprecipitačnej reakcie elektroforeticky rozdelených bielkovín s antisérami s rozdielnou špecificitou (anti-IgG, anti IgM, anti-IgA a anti kappa a anti lambda ťažkým a ľahkým reťazcom)

IgG - kappa Paraproteín neprítomný

Imunofixácia potvrdenie prítomnosti paraproteínu – určenie typu

Imunofixácia potvrdenie prítomnosti paraproteínu – určenie typu

IgM - kappa IgG - lambda

Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 – 2007podľa tried

6

23

3 2

0

5

10

15

20

25

IgM IgG IgA IgG + IgM

12

22

0

5

10

15

20

25

do 60r nad 60r

Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 – 2007podľa veku

muži53%

ženy47%

Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 – 2007v populácii mužov a žien

Náhodné záchyty

71%

"Očakávané" záchyty

29%

Paraproteíny - počet záchytov v rokoch 2005 – 2007„očakávané“ a náhodné záchyty

potvrdené po čase

eliminované11%

potvrdené74%

(podozrenie) nepotvrdené

15%

Paraproteíny v roku 2007 – imunofixácioupotvrdené, nepotvrdené a eliminované

Elektroforéza sérových bielkovín v súčastnosti:

Atribúty:

�kvalita

�reprodukovateľnosť

�rýchlosť

Klinický význam:

�elektroforetické typy

• priradené určitým chorobným stavom na základe dlhoročnej empírie

�významné skríningové vyšetrenie

• prítomnosť paraproteínu v sére

„Ak chceme objaviť nové krajiny, musíme najprv sústredene veľmi dlhý čas pozorovať pobrežie a vnímať aj jeho

najjemnejšie zákonitosti“

Ďakujem za pozornosť

Kleiblove lekárske dni, Skalica, 23.1.2008