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1/42

32

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2/42

1 ml

0.1 ml 1 ml

1 ml

1 ml

.

0.1 ml

1 / 10010-3

1 / 1010-1

0.1/ 101/ 10010-5

1/1010-6

1/1010-7

10-8

25 UFC2 UFC

1 ml

10-7

1 ml

10-6

265 UFC

1 ml

TMTC

Cuntas colonias viablestengo?1. Escojo el plato que tenga

entre 25 250 UFC.2. Utilizo la frmula de:

UFC * (1/factor dedilucin)

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3/42

1. :

2. D : FC/ ( )

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4/42

C

.

A :

().

I .

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5/42

G ()

C ()

E ()

()

()

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Ya se han discutido mtodosde clasificacin por morfologay medios de cultivo.

Ahora utilizaremos tincionescon el fin de poder seguircaracterizando a las bacterias.

Espiroquetas

Coco

Bacilo

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.

E

. (

)

(

).

.

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8/42

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,

D

:

E:

E: G

,

.

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(-)

(-)

(-)(-)

(-)

(-)

(-)

(-)

-

(-)

(-)

(+)

methylene blue

Tincin simple: un solo tinte , afinidad por carga con componentes

de la superficie de la clula

Ejemplo : azul de metileno

(-)(-) (-)

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Tincin diferencial: permite detectar tipos distintos de clulas

Pasos de la

Tincin Gram

Cristal violeta (1minuto)

Lavar con agua

Azul-Violeta Rojo

Stre tococcus s .

Lavar con aguaAlcohol etlico al95% (20 segundos)

Lavar con aguaSafranina (1 minuto)

Lavar con aguaSecar con bibolous

paperGram+= azul-violeta,Gram = rojo

Desventajas de tcnicas detincin:

requieren fijar la muestracon calor: (clulas mueren)

calor + qumicos puedendistorsionar la forma originalde las clulas

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(C),

.

A , C. A . A

.

A 95%, . .

C, .

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Gram Negativo Gram Positivo

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Gram +

Su pared celular contiene unacapa gruesa de

peptidoglicano

Gram -

Reaccin se basa en ladiferencia en la composicin

qumica de la pared bacteriana.

Su pared celular contiene unacapa fina de peptidoglicano

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G M G M G M G M

Peptidoglicano: polmero de dos azcares modificadas (N-acetil glucosaminay N-acetil cido murmico ) y tetrapptidos

enlace , 1-4

Pared celular procariota

G M G M G M G M

G = N-acetil glucosaminaM = N-acetil cido murmico (murena)

3 4

tetrapptido (4 amino cidos)

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G

/

.

G +

/

.

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:

.

. . .

F

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Laminilla

Gram + (Bacillus cereus)

Gram (E. coli)

1. Cubrir frotis con tinte cristal violeta (1 minuto).2. Enjuague con agua destilada para remover el exceso de tinte.3. Cubrir frotis con yodo (1 minuto).

4. Enjuague con agua destilada.5. Enjuague la laminilla con alcohol etlico 95% (no exceder los 30 seg).6. Enjuague la laminilla con agua destilada.

7. Cubrir frotis con tinte safranina (1 minuto).8. Enjuague con agua destilada para remover el exceso de tinte.

9. Secar laminillas con papel bibulous para remover el exceso de agua.

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C

F: (

(, )

, .

, .

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cpsula

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C 1%

C 20%

E C4 .

.

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().

D .

C 1% (57 ).

E C4

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.

E I I (

Tincin de Cpsulas

.

.

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Tincin de CpsulasTincin simple-negativa

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= .

.

.

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En condicionesambientales hostilesocurre esporognesis la

cual forma la endospora.

En condicionesambientales favorables,ocurre germinacin, lo cualforma la clula vegetativa(bacteria).

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, .

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,

.

A, , .

, .

: D ,

. G , G + .

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Beaker

Agua

Parrilla demetal Laminilla con

frotis

1. Cubrir frotis con tinte verde malaquita y

permita que el colorante humee, pero nohierva.

2. Espere 5 minutos. Si durante los 5 minutos

Hot Plate

el tinte se seca aada ms tinte.

3. Enjuague la laminilla con agua destilada.

4. Coloque tinte safranina (30 seg).

5. Seque la laminilla en papel bibulous.

6. Observe y dibuje la coloracin, morfologa yarreglo de las bacterias bajo el microscopio.

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Espora (colorverde)

Clula vegetativa (color rojo)

Bacillus cereus

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.

() .

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C (5%).

.

+

A .

.

A: ( )

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Observar laminillas!!!

Mycobacterium tuberculosis

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() ().

2 :

( : )

( )

Mobiluncusspp.

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Resumen resultados de tinciones

Tincin Gram (estructura de pared celular)

Tincin de esporasTincin de cpsula

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C

?

G?

C ?

G

?

C ?