ehrlichiosis y anaplasmosis canina 2011

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Ehrlichiosis y Anaplasmosis caninaRoberto Mujica, M.V. Esp. Enero, 2011

bla, bla, bla, bla, bla, llueve sobre mojadoFito Pez y Joaqun Sabina Cantautores y filsofos

Son enfermedades febriles, infecciosas, no contagiosas, inmunosupresoras, anemizantes y con tendencias hemorrgicas, causadas por microorganismos de la familia Anaplasmataceae: Ehrlichia sp. y Anaplasma sp.

Taxonoma molecularReino: Bacteria Phylum: Proteobacteria Clase: Alphaproteobacteria Orden: Rickettsiales Familia: Anaplasmataceae Gnero: Ehrlichia, Anaplasma, Neoricketsia, Wolbachia Tamao del ADN: 1315030 bp Nmero de genes: 984 conocidosUlrich LE, Zhulin IB, 2010

ARBOL FILOGENETICO FAMILIA Anaplasmataceae

(Laboratory of Molecular, Cellular and Environmental Rickettsiology, OSU. 2010)

Familia Anaplasmataceae: Ehrlichia sp., Anaplasma sp.Son pequeas bacterias en forma de cocos, pleomrficas, gram (-), intracelulares obligadas Se replican dentro de vacuolas rodeadas de membrana, vacuola parasitfora, dentro del citoplasma de un tipo especifico de clulas hospedadoras, granulocitos, mononucleares y/o plaquetas, formando racimos llamados Mrulas Son transmitidas por vectores, garrapatas o tremtodos, donde se replican y pasan a animales y humanosLab. Of Molecular, Cellular and Environmental Rickettsioly, O.S.U. 2010

Infeccin en caninosMononucleares: E. canis, E. chaffeensis, N. risticii y N. helminthoeca Granulocitos: E. ewingii y A. phagocytophilum. Tambien E. canis(Arraga C.M., 2006)

Plaquetas: A. platys. Tambin se sospecha de E. canis Sangre de perros en Sudfrica: nuevo genotipo de Ehrlichia estrechamente relacionado a E. ruminantum, por PCR, pero las mrulas no han sido vistas(Harvey J. W., 2005)

Son frecuentes las coinfecciones con estas especies de bacterias, y con Babesia canis, Mycoplasma haemocanis (Hemobartonella), Hepatozoon canis y con bacterias, parsitos, hongos o virus oportunistas (criptococosis, criptosporidiosis, Distemper canino)

Ojo con Bartonella vinsonii ssp. Berkhoffii , parece una ehrlichiosis complicada con problemas cardacos RECORDAR QUE LA EHRLICHIOSIS ES UN SINDROME DE INMUNODEFICIENCIA

Infeccin en humanos en VenezuelaE. canis por PCR en humanos asintomticos(Prez M., Rikihisa Y., Wen H., 1996)

E. canis, comparacin molecular y antignica de muestras provenientes de garrapatas, perros y un humano asintomtico(Unver, A., M. Perez, N..Orellana, H. Huang, and Y. Rikihisa. 2001)

E. canis por PCR en 6/20 (30%) humanos sintomticos a HME. La secuencia del gen 16S rRNA determin que es la misma cepa: E. canis Ehrlichia Humana Venezolana(Perez M., Bodor M., Zhang C., Xionq Q., Rikihisa Y. 2006)

Un microorganismo parecido a A. platys en plaquetas de humanos con sntomas (por ME, en Maracaibo)(Arraga C.M., Palmar M., Parra O., Salas P.1999)

Trabajos publicados por Lic. Miriam Prez, M.Sc., Profesora jubilada del DCV-UCLAE. canis por PCR en humanos asintomticos (Prez M., Rikihisa Y., Wen H., 1996)Primer reporte de Ehrlichia canis en humanos, en Suramrica. El ADN de la cepa aislada fue secuenciada, se determin estrecha relacin con E. canis var. Oklahoma. Se sugiere que es una nueva cepa capaz de producir afeccin asintmatica en humanos. Se registra como Ehrlichia Humana Venezolana HVE

E. canis, comparacin molecular y antignica de muestras provenientes de garrapatas, perros y un humano asintomtico (Unver, A., M. Perez, N..Orellana, H. Huang, and Y. Rikihisa. 2001)Caracterizaron por secuenciacin del gen 16S rRNA (1408 pares de bases) la cepa aislada de caninos y garrapatas, llamndola Ehrlichia Canina Venezolana. La compararon con la HVE aislada en 1996 y fue idntica (100% similar) y con la Ehrlichia canis var. Oklahoma evidenciando su estrecha relacin (99,9% similar)

Infeccin humana con Ehrlichia canis acompaados por signos clnicos en Venezuela(Perez M., Bodor M., Zhang C., Xionq Q., Rikihisa Y. 2006 ) E. canis por PCR en 6/20 (30%) humanos sintomticos a HME. La secuencia del gen 16S rRNA determin que es la misma cepa: E. canis Ehrlichia Humana Venezolana

Ehrlichiosis en felinosReporte de un gato con poliartritis y aplasia medular, positivo a E. canis por PCR. Anteriormente haban reportado gatos + por serologa y observacin de mrulas en el frotis. (Breitschwerdt, E. et al. 2002)Reporte de un gato con infeccin por A. phagocytophilum en Finlandia. Sntomas: fiebre, depresin, anorexia, prdida de peso, secrecin ocular y nasal. Diagnstico por PCR (Heikkika H. et al. 2010) Reporte de un caso de un gato con A. platys en Brasil. Sntomas: anuria, disuria, estreimiento, TBCpenia leve. Diagnstico por PCR. (Lima F. et al. 2010)

Actualmente, una caso por frotis en Laboratorio Clnico DCV-UCLA (sangre congelada para hacer PCR. Chavier H., Cortez A., Rodrguez V.)

TRANSMISION: Rhipicephalus sanguineusE. canis, E.ewingii(?),A.platys (?) Ampliamente difundida a nivel mundial Transmisin transestadial Perodo infectante: 155 dias NO hospedador intermediario Transfusiones de sangre pueden transmitirla

Tambien es vector de: Babesia canis, Hepatozoon canis, Bartonella vinsonii

Ciclo de vida

Incidencia en una zona endmica en Venezuela33% de perros del CEC + a E. canis por PCR 100% de garrapatas R. sanguineus + a E. canis por PCR(Unver A., Prez M., Orellana N., Huang H., Rikihisa Y., 2001)

31% de perros del CEC + a E. canis por PCR(Huang H, Unver A., Prez M., Orellana N., Rikihisa Y., 2005)

Incidencia en una zona endmica en Venezuela:16% de perros del CEC + a A. platys por PCR Todos asintomticos 100% garrapatas R. sanguineus - a A. platys por PCR Incidencia en otras partes del mundo: 33% de perros en una perrera en Carolina del Norte , E.E.U.U., + a A. platys por PCR 32% de perros en una perrera Okinawa, Japn, + a A. platys por PCR 5% de los perros asintomticos y 35% de los TBCpnicos + a A. platys por IFA en Florida, E.E.U.U. 50% + a A. platys por IFA en Louisiana, E.E.U.U.(Huang H, Unver A., Prez M., Orellana N., Rikihisa Y., 2005)

PatogeniaPerodo de incubacin: 7 a 21 das posterior a la picadura de una garrapata infectadaFase aguda: Sndrome Febril Ehrlichia canis se replican en clulas fagcticas mononucleares en bazo, hgado, ndulos linfticos para despus diseminarse. Afectan endotelio vascular: vasculitis

Fase subclnica: con o sin tratamiento Fase crnica(Harrus S., et al, 1999; Rikihisa Y., 1999).

Fase Aguda:Fiebre Depresin Anorexia Linfoadenomegalia Secrecin ocular o nasal Prdida de peso leve Tiempos de coagulacin VasculitisAnemia no regenerativa leve a moderada Leucopenia / neutropenia Trombocitopenia Hiperglobulinemia Hipoalbuminemia

(Harrus S., et al, 1999; Rikihisa Y., 1999; Harvey J. W., 2005).

SubclnicoCrnico

Meses o aos Trombocitopenia y leucopenia severas Hipoplasia o Aplasia medular Hemorragias Signos de SNC Signos oculares Sndrome de inmunodeficiencia: Infecciones secundarias Muerte por complicaciones

DiagnsticoEjemplares con signos clnicos de la enfermedad y contacto con garrapatas, 7 a 21 das antes Una combinacin de signos clnicos, anormalidades hematolgicas, y hallazgos de laboratorio (Mark Neer T., 2002). Anormalidades hematolgicas mas comunes anemia no regenerativa (82%) trombocitopenia (82%) leucopenia (32%) pancitopenia (18%)producida por hipoplasia de clulas precursoras en la mdula sea, ocurre en fase crnica grave y con mayor frecuencia en perros de la raza Pastor Alemn

(Mark Neer T., 2002).

Diagnstico Visualizacin de la mrula de la E. canis dentro de las clulas afectadas Pruebas serolgicas: deteccin de anticuerpos sricos especficos Inmunofluorescencia indirecta IFI Elisa: Snap 4X (Laboratorios IDEXX, Maine, U.S.A)(Harrus S., et al, 1998; Ewing S. A., 2001, Mark Neer T., 2002).

Tcnicas de biologa molecularReaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) para la amplificacin del ADN de la E. canis Secuenciacin del ADN obtenido por PCR PCR en tiempo real (RT PCR) Western Inmuno blott(Couto G., 2002; Harvey J. W, 2005; Arraga C. M., 2006)

Visualizacin de la mrula dentro de las clulas afectadasFrotis sanguneo Frotis de capa blanca Frotis por aposicin de Pulmn, Hgado, Bazo, Mdula sea Limitantes: mtodo poco sensible, depende de la existencia de leucocitos infectados en la muestra de examinada, nivel de parasitemia, fase de la enfermedad habilidad tcnica para identificar al microorganismo(Harrus S., et al, 1998; Ewing S. A., 2001, Bulla C., et al, 2004).

Pruebas Serolgicas

Inmunofluorescencia Indirecta

Test de ELISA: Snap 4X de IDEXX

E. canis IFA/Western Blot

Limitantes de pruebas serolgicasLa seroconversin al antgeno apropiado es retrospectivo Puede haber reaccin cruzada dentro de individuos del mismo gnero (E. canis con E. chaffeensis y E. ewingii) En reas endmicas da positivos a trombocitopnicos por otras causas (sndrome paraneoplsico, TBCpenia inmunomediada)(Harrus S., et al, 1998; Ewing S. A., 2001, Mark Neer T., 2002).

Tnicas de biologa molecularVentajas: Alta sensibilidad y especificidad Posibilidad de detectar variaciones mnimas en la secuencia de bases del ADN (variaciones entre cepas)

Desventajas: Altos costos y tcnicas delicadas

Reaccin en cadena de polimerasa (PCR) Mecanismo de replicacin in vitro de ADN, dirigido por la enzima ADN-polimerasa Mimetizacin de la Replicacin del ADNExtraccin de ADN Amplificacin del gen 16s rRNA de E. canis Electroforesis en gel de agarosa

RT PCR

PCR en tiempo real (RT PCR): Proceso de amplificacin y deteccin se producen de manera simultanea en un mismo tubo vial cerrado Por fluorescencia se puede medir durante la amplificacin la cantidad de DNA sintetizado por PCR.

Tratamiento Curativo:Tetraciclinas: Recuperacin rpida, 24 horas Doxiciclina: 10 mgs/kg/da V.O. SID o dividida en dos tomas/dia x 14 dias (consenso internacional) Oxitetraciclina: 22 mgs/kg

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