Transcript
Page 1: pengecatan mikroorganisme

BAB I

PENDAHULUAN

I.1 LATAR BELAKANG

        Visualisasi mikroorganisme yang masih hidup tidaklah mudah, tidak hanya karena ukurannya

yang sangat kecil tetapi karena transparan dan pada umumnya tidak berwarna jika disuspensikan

dalam medium cair. Untuk mempelajari sifat mereka dan untuk mendiferensiasikan mikroorganisme

dalam grup yang spesifik untuk kepentingan diagnostik, pewarnaan bologis dan prosedur pewarnaan

dengan bantuan mikroskop cahaya menjadihal utama dalam mikrobiologi (Jawetz, 1995).

   Bakteri merupakan organisme yang sangat kecil (berukuran mikroskopis). Bakteri rata-rata

berukuran lebar 0,5-1 mikron dan panjang hingga 10 mikron (1 mikron = 10-3 mm). Itu berarti pula

bahwa jasad renik ini tipis sekali sehingga tembus cahaya. Akibatnya pada mikroskop tidak tampak

jelas dan sukar untuk melihat bagian-bagiannya. Untuk melihat bakteri dengan jelas, tubuhnya perlu

diisi dengan zat warna, pewarnaan ini disebut pengecatan bakteri (Irianto, 2006).

       Berdasarkan hal tersebut di atas, maka dilakukanlah praktikum ini untuk mengetahui teknik

pewarnaan mikroorganisme baik itu dengan cara pengecatan sederhana maupun pengecatan gram

dan pengecatan spora serta mengetahui morfologi mikroorganisme.

Page 2: pengecatan mikroorganisme

I.2 MAKSUD DAN TUJUAN PERCOBAAN

I.2.1 MAKSUD PERCOBAAN

Untuk mengetahui dan memahami cara pengecatan mikroorganisme dengan menggunakan

metode pegecatan morfologi, pengecatan differensial dan pengecatan khusus.

I.2.2 TUJUAN PERCOBAAN

1. Mengetahui dan memahami metode pengecatan morfologi yaitu pengecatan negatif

2. Mengetahui dan memahami metode pengecatan differensial yaitu pengecatan gram positif

dan gram negative serta pengecatan tahan asam

3. Mengetahui dan memahami metode pengecatan khusus yaitu pengecatan spora,

pengecatan kapsul, dan pengecatan flagel.

I.3 PRINSIP PERCOBAAN

1. Pengamatan morfologi bakteri dengan pengecatan sederhana berdasarkan penambahan

zat warna metilen biru dengan pengamatan di bawah mikroskop.

2. Pengamatan morfologi bakteri dan penetuan jenis bakteri dengan pengecatan negative

berdasrakan penambahan tetesan nigrosin pada ujung objek glass bersama inokulum yang

di geserkan dengan objek glass yang lain secra perlahan-perlahan hingga membentuk

lapisan tipis dan diamati dibawah mikroskop

3. Pengamatan warna bakteri dengan melakukan pengecatan gram pada bakteri

menggunakan tetesan Kristal violet, iod mordant, alcohol, dan safranin yang diteteskan

secara berturut-turut dan diamati di bawah mikroskop yang di tandai dengan perubahan

warna menjadi ungu untuk bakteri gram positif dan berwarna merah untuk bakteri gram

negative.

4. Pengamatan warna bakteri dengan melakukan pengecatan tahan asam menggunakan zat

warna karbol fuchsin lalu di cuci dengan alcohol asam sampai berwarna kemerahan dan

penambahan metilen blue kemudian di amati di bawah mikroskop.

5. Pengamatan struktur bakteri dengan melakukan pengecatan kapsul pada bakteri dengan

menggunakan zat warna Kristal violet lalu di bilas dengan larutan CuSO4, kemudian diamati

di bawah mikroskop.

6. Pengamatan struktur bakteri dengan melakukan pengecatan spora dengan menggunakan

zat warna malachite green dan di tambahkan dengan safranin kemudian di amati di bawah

mikroskop.

Page 3: pengecatan mikroorganisme

7. Pengamatan struktur bakteri dengan melakukan pengecatan flagel dengan menggunakan

zat warna mordant, lalu di panaskan selama 5 meniit lalu di amati di bawah mikroskop.

Page 4: pengecatan mikroorganisme

BAB III

METODE KERJA

III. 1 ALAT DAN BAHAN

III.1.1 ALAT

Adapun alat-alat yang di gunakan yaitu objeck glass, deck glass, ose lurus, ose bulat,

mikroskop, gegep, botsem, bunsen, kamera, baskom, gelas kimia, penangas air.

III.1.2 BAHAN

Adapun bahan-bahan yang di gunakan yaitu aquadest, metilen blue, Kristal violet,

safranin, karbol fuchsin, hijau malakit, alcohol, CuSO4, kertas saring, kertas koram dan tissue.

III.2 CARA KERJA

A. Pengecatan Gram

1. Di pijarkan ose bulat dan diambil biakan dari suspensi.

2. Diletakkan di atas objek glass lalu di fiksasi.

3. Di tambahkan 1 tetes Kristal violet (gram A) tunggu hingga 30 detik.

4. Di bilas dengan air.

5. Di teteskan iodine (gram B) tunggu 60 detik kemudian bilas,

6. Di leteskan alcohol (gram C) tungguhingga 15-30 detik kemudian di bilas dengan

air. Diamati apakah warna ungu pudar atau tetap bertahan,

7. Kemudian di tetesi safranin, tunggu hungga 60 detik kemudian bilas. Tutu dengan

deck glass.

8. Di amati di bawah mikroskop pada perbesaran 40x.

B. Pengecatan Tahan Asam

1. Di pijarkan ose bulat dan di ambil biakan dari tabung suspense secara aseptis.

2. Di letakkan biakan di atas objek glas lalu di fiksasi.

3. Di letakkan keras saring diatas objeck glass lalu di tetesi karbol fuchsin (sambil

dipanaskan dan tunggu 2-5 menit).

4. Kertas saring kemudian di lepaskan kemudian bilas dengan air,

5. Di teteskan alcohol asam tunggu hingga 10-30 detik lalu bilas dengan air.

6. Kemudian di teteskan dengan metilen blue tunggu hingga 2 menit lalu bilas dengan

air.

7. Di amati di bawah mikroskop.

Page 5: pengecatan mikroorganisme

C. Pengecatan Sederhana

1. Di pijarkan ose bulat dan di ambil biakan dari tabung suspense secara aseptis.

2. Di letakkan biakan di atas objek glass kamudian fiksasi.

3. Di tetesi metilen blue kemudiaan tunggu hingga 60 detik.. setelah itu bilas dengan air.

4. Objeck glass kemudian di bersihkan dengan tissue.

5. Di tutupi dengan deck glass kemudian di amati di bawah mikroskop.

D. Pengecatan Spora

1. Di pijarkan ose bulat dan di ambil biakan dari tabung suspensi secara aseptis.

2. Di letakkan biakan di atas objeck glass kemudian fiksasi.

3. Di letakkan kertas saring di atas objeck glass lalu di panaskan di atas uap air.

4. Sambil di panaskan di tetesi malachite green kemudian tunggu hingga 5 menit.

5. Setelah 5 menit kertas saring kemudian di lepas dan di tetesi safranin, kemudian di

tunggu 30 detik

6. Kemudian bilas dengan air mengalir dan di keringkan dengan tissue

7. Diamati di bawah mikroskop.

E. Pengecatan Spora

1. Di pijarkan ose bulat dan di ambil biakan dari tabung suspense secara aseptis.

2. Di letakkan biakan di atas objek glass lalu di fiksasi.

3. Setelah itu di tetesi Kristal violet.

4. Di biarkan selama 4-7 menit kemudian di bilas dengan CuSO4.

5. Objek glass kemudian di bersihkan dengan tissue.

6. Amati di bawah mikroskop.

Page 6: pengecatan mikroorganisme

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

II.1 TEORI UMUM

Bakteri memiliki beberapa bentuk yaitu basil (tongkat), coccus, dan spirilum. Bakteri yang

berbentuk tongkat maupun kokus dibagi menjadi beberapa macam. Pada bentuk basil pembagiannya

yaitu basil tunggal, diplobasil, dan tripobasil. Sedangkan pada coccus dibagi menjadi monococcus,

diplococcus, sampai stophylococcus. Khusus pada spirilum hanya dibagi dua yaitu setengah

melengkung dan melengkung (Dwidjoseputro.1998).

Berbagai macam tipe morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum, dan sebagainya) dapat

dibedakan dengan menggunakan pewarna sederhana. Istilah ”pewarna sederhana” dapat diartikan

dalam mewarnai sel-sel bakteri hanya digunakan satu macam zat warna saja (Gupte, 1990).

Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya

bersifat basofilik (suka akan basa) sedangkan zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan

sederhana umumnya bersifat alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan positif). Faktor-faktor yang

mempengaruhi pewarnaan bakteri yaitu fiksasi, peluntur warna , substrat, intensifikasi pewarnaan dan

penggunaan zat warna penutup. Suatu preparat yang sudah meresap suatu zat warna, kemudian dicuci

dengan asam encer maka semua zat warna terhapus. sebaliknya terdapat juga preparat yang tahan

terhadap asam encer. Bakteri-bakteri seperti ini dinamakan bakteri tahan asam, dan hal ini merupakan

ciri yang khas bagi suatu spesies (Dwidjoseputro, 1994).

Pewarnaan bertujuan untuk memperjelas sel bakteri dengan menempelkan zat warna ke

permukaan sel bakteri. Zat warna dapat mengabsorbsi dan membiasakan cahaya, sehingga kontras sel

bakteri dengan sekelilingnya ditingkatkan.Zat warna yang digunakan bersifat asam atau basa. Pada zat

warna basa, bagian yang berperan memberikan warna disebut Kromotor bermuatan positif, zat warna

asam yang berperan memiliki muatan negatif. Zat warna basa lebih banyak digunakan karena memiliki

muatan positif antara lain Eosin, Congo Red, dan lain-lain. Contoh warna asam yaitu Crystal violet,

methylene Blue, Safranin, karbol fuchsin, Malachite green dan lain-lain. (UNSEOD, 2008). Pewarnaan

adalah suatu cara kerja pewarnaan yang paling berguna dan membutuhkan empat larutan dalam

prosesnya yaitu zat warna penutup, zat warna larutan dan zat warna pelunturan warna (Sutedjo,1991).

Page 7: pengecatan mikroorganisme

Macam-macam pewarnaan :

A.    Pewarnaan negatif

            Pada pewarnaan ini merupakan pewarnaan tidak langsung  karena yang di warnai adalah latar

belakangnya, sedangkan bakerinya sendiri tidak mengalami pewarnaan. Zat warna yang di gunakan

adalah nigrosin.Nigrosin tidak akan mempenetrasi cell bakteri sehingga cell tidak akan menyerap zat

warna dan zat warna hanya mewarnai background.(Presscout :2002)

B.     Pewarnaan sederhana

Pewarnaan sederhana adalah pewarnaan yang menggunakan zat warna yang tunggal 

bertujuan untuk mengindentifikasi morfologi sel bakteri. Pada pewarnaan ini zat warna yang kami

gunakan adalah gentiana violet. Sel dari bakteri akan menyerap Kristal violet sehingga sell menjadi

warna ungu dan mudah untukdiidentifikasi morfologi, struktur dan bentuk dari sel bakteri.

(Presscout:2002)

C.     Pewarnaan gram  

Pewarnaan gram atau metode gram adalah  salah satu teknik pewarnaan yang paling penting

dan luas di gunakan untuk mengidentifikasi bakteri. Dalam proses ini, olesan bakteri yang sudah

terfiksasi dikenai larutan-larutan berupa zat pewarna Kristal violet, larutan yodium, larutan akohol

(bahan pemucat) dan zat pewarnaan tandingannya berupa zat warna safranin. Metode ini diberi nama

berdasarkan penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian Gram (1853-1938) yang mengembangkan

teknik ini pada tahun 1884 untuk  membedakan antara pneumokokus dan bakteri Klebsiela,

pneumonia. Bakteri yang telah diwarnai dengan metode ini  dibagi menjadi dua kelompok yaitu, bakteri

gram positf dan bakteri gram negatif. Bakteri garam positif akan mempertahankan zat pewarna kristal

violet dan karenanya akan tampak berwarna ungu tua di bawah mikroskop. Adapun bakteri gram

negatif akan kehilangan zat pewarna Kristal violet setelah dicuci dengan alkohol dan sewaktu diberi zat

pewarna tandingnya yaitu dengan zat pewarna karbol fucshin atau safranin akan tampak berwarna

merah. Perbedaan warna ini disebabkan oleh perbedaan dalam struktur kimiawi dinding selnya

(Pelczar, 2007).

      Bakteri gram positif adalah bakeri yang mempertahankan zat warna metal ungu sewaktu

proses pewarnaan gram. Bakteri jenis ini akan berwarna biru atau ungu di bawah mikroskop sedangkan

bakteri gram negatif akan berwarna merah atau merah muda. Perbedaan klasifikasi antara kedua jenis

bakteri ini  terutama berdasarkan pada perbedaan struktur dinding sel bakteri .Bakteri gram negatif

Page 8: pengecatan mikroorganisme

adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat metal ungu pada metode pewarnaan gram. Bakteri

gram-positif akan mempertaahankan warna ungu gelap setelah di cuci dengan alkohol.

Sementara bakteri gram-negatif tidak. Pada uji pewarnaan gram suatu pewarnaan penimbal

(conterstain) ditambahkan setelah metil ungu, yang membuat semua bakteri gram-negatif menjadi

berwarna merah atau merah muda. Pengujian ini berguna untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri

ini berdasarkan perbedaan struktur dinding selnya. (Pelczar, 2007).

D.    Pewaranaan spora/ flagel

Spora bakteri adalah bentuk bakteri yang sedang dalam usaha mengamankan diri  terhadap

pengaruh buruk dari luar. Spora bakteri mempunyai fungsi yang sama seperti kristal amoeba, sebab

bakteri dalam bentuk spora dan amoeba dalam bentuk kristal merupakan suatu fase dimana kedua

mikroorganisme itu berubah bentuk untuk melindungi diri terhadap faktor luar yang tidak

menguntungkan. Endospora hanya terdapat pada bakteri yang memiliki tubuh dinding  yang tebal yang

sangat refraktif, dan sangat resisten. Di hasilkan oleh semua spesies basillus, clostidum, dan

sporosarcina. Bakteri yang mampu membentuk endospora dapat tumbuh dan bereproduksi selama

banyak generasi sehingga sel vegetatif. Namun pada beberapa tahapan di dalam pertumbuhanya,

terjadi sintesis protoplasma baru dalam sitoplasma vegetatifnya yang di maksudkan untuk menjadi

spora (Pelczar, 2007).

Bentuk spora ada yang bulat, ada pula yang bulat panjang. Hal ini tergantung oleh

spesisesnya. Endospora ada yang lebih kecil ada pula yang lebih besar dari pada diameter sel induk.

Letak sel di dalam sel serta ukurannya dalam pembentukannya  tidaklah sama pada semua spesies.

Sebagai contoh beberapa spora adalah sental yang dibentuk ditengah-tengah sel, yang kedua adalah

terminal yang dibentuk diujung, ketiga yaitu  subterminal yang dibentuk di dekat ujung. Pada umumnya

sporulasi itu mudah terjadi jika keadaan medium memburuk dan zat-zat yang timbul sebagai zat-zat

pertukaran zat bertimbun-timbun dan faktor-faktor luar lainya merugikan tetapi pada beberapa spesies

mampu membentuk spora meskipun tidak terganggu oleh faktor luar. Sporulasi dapat di cegah, jika

selalu diadakan pemindahan piaraan ke medium yang baru, beberapa spesies bakteri dapat kehilangan

kemampuanya untuk membentuk spora. Spora dapat tumbuh lagi menjadi bakteri apabila keadaan di

luar menguntungkan. Mula-mula air meresap ke dalam spora, kemudian spora mengembang dan kulit

spora menjadi retak karenanya  keretakan ini dapat terjadi pada salah satu ujung. Tetapi juga dapat

terjadi di tengah-tengah spora. Hal ini merupakan ciri khas bagi beberapa spesies bacillus, jika kulit

Page 9: pengecatan mikroorganisme

spora pecah di tengah-tengah maka masing-masing pecahan akan merupakan suatu tutup pada kedua

ujung bakteri (Pelczar, 2001).

Adapun faktor-faktor yang mempengaruhi pewarnaan bakteri sebagai berikut: (Sutedjo, 1991).

1.      Fiksasi

Fiksasi perlu dilakukan sebelum pewarnaan bakteri karena berguna merekatkan sel bakteri

pada gelas objek, membunuh bakteri, melepaskan granula (butiran) protein menjadi gugusan reaktif

(NH3+) membuat sel-sel lebih kuat, mencegah terjadinya otolisis sel, mengubah avinitas, fiksasi dapat

dilakukan secara fisik atau dengan bahan kimia.

2.      Peluntur zat warna

Peluntur zat warna berguna untuk menghasilkan kontras yang lebih baik pada bayangan

mikroskop. Pada umumnya, sel-sel yang mudah diwarnai akan lebih mudah pula dilunturkan warnanya.

Sedangkan sel-sel yang sukar diwarnai akan lebih sukar dilunturkan warnanya.

3.      Substrata

Merupakan zat warna asam atau basa dapat bereaksi dengan senyawa-senyawa tertentu.

Oleh karena itu, senyawa-senyawa organik seperti protein, karbohidrat, lemak dan asam nukleat akan

mempengaruhi pewarnaan. Berdasarkan jenis zat warna yang diserap oleh sel, maka dapat dibedakan

tiga macam sel yaitu: sel-sel asidofil, basodill dan sudanofil.

4.      Intensifikasi warna

Zat warna dapat diintensifikasikan dengan cara menambahkan mordan, yaitu zat kimia yang

dapat menyebabkan sel-sel bakteri dapat diwarnai lebih intensif karena zat warna terikat lebih kuat

daripada jaringan sel. Mordan dibagi atas dua macam, yaitu mordan asam dan mordan basa. Mordan

asam adalah mordan yang bereaksi dengan zat-zat warna basa. Sedangkan mordan basa adalah

mordan yang bereaksi dengan anion zat warna asam.

5.      Zat warna penutup atau zat warna lawan

Zat warna lawan adalah suatu zat warna basa yang berbeda warnanya dengan zat warna

mula-mula yang digunakan. Gunanya adalah untuk memberikan warna pada sel-sel yang berbeda

warnanya dengan zat warna mula-mula. Zat warna penutup diberikan pada akhir pewarnaan dengan

tujuan untuk memberikan kontras pada sel-sel yang tidak menyerap zat warna utama (Sutedjo, 1991).

Page 10: pengecatan mikroorganisme

CH3

N

CH3

S

N

CH3

N

CH3

Cl-

II.2 URAIAN BAHAN

1. Aquadest

Nama resmi : AQUA DESTILLATA

Nama lain : Air suling/aquadest

RM/BM : H2O/18,02

Pemerian : Cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau, dan tidak mempunyai rasa

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

Kegunaan : Sebagai Pembesih

2. Metilen Biru

Nama resmi : Methylthionini Chloridum

Nama lain : Biru metilen, Metilen biru

RM/BM : C16H18CIN3S.2H2O / 372,90

Pemerian : Serbuk hablur mengkilat seperti logam atau suram kehijauan tua atau

serbuk warna coklat, hampir tidak berbau, dan higroskopik

Kelarutan : Larut dalam 40 bagian air, dalam 110 bagian etanol dan dalam 450

kloroform P.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat

Kegunaan : Sebagai zat warna basa

Rumus bangun :

3. Karbolfuchsin

Nama resmi : fuchsine: 4-[(4-Aminofenil)-(4-imino-1-sikloheksa-2,5-dienilidena)]

Nama lain : Biru metilen, Metilen biru

Page 11: pengecatan mikroorganisme

RM/BM : C20H20N3.HCl/ 337,86

Pemerian : cairan

Kelarutan : Mudah larut dalam air, Metanol, dan dietil ater

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat

Kegunaan : Sebagai zat warna basa

Rumus bangun :

4. Kristal Violet (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : Kristal violet

Pemerian : Hablur berwarna hijau tua

Kelarutan : Sukar larut dalam air; agak sukar larut dalam etanol (95%) P dan dalam

asam asetat glasial P. Larutannya berwarna lembayung tua

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

Kegunaan : Sebagai cat utama atau gram dalam pengecatan gram

Rumus bangun : :

5. Safranin (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : Safranin

Pemerian : Serbuk halus berwarna biru keunguan.

Kelarutan : Tidak larut dalam air, mudah larut dalam etanol

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat

Kegunaan : Sebagai zat warna lawan (Counterstain)

Rumus Bangun :

Page 12: pengecatan mikroorganisme

6. Iodium (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : Iodum

Nama lain : Iodium

RM/BM : I/126,91

Pemerian : Keping atau butir, berat, mengkilat, seperti logam; hitam kelabu;

bau khas

Kelarutan : Larut dalam lebih kurang 3500 bagian air, dalam 13 bagian etanol

(95%) P, dalam lebih kurang 80 bagian gliserol P dan dalam lebih

kurang 4 bagian karbondisulfida P; larut dalam kloroform P dan

dalam karbontetraklorida P

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat

Kegunaan : Sebagai zat warna pada pewarnaan gram

7. Malachite Green

Nama resmi : Malachite Green

Pemerian : Hablur berwarna hijau tua

Kelarutan : Sukar larut dalam air; agak sukar larut dalam etanol (95%) P dan

dalam asam asetat glasial P. Larutannya berwarna lembayung tua

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik

Kegunaan : Zat warna primer pada pengecatan spora

Rumus Bangun :

8. CuSO4 0,01 M (Dirjen POM, 1979)

Nama Resmi : CUPRI SULFAS

Nama Lain : Tembaga (II) Sulfat

RM / BM : CuSO4.5H20 / 249,6

Pemerian : Serbuk hablur atau keabuan bebas dari sedikit warna biru.

Kelarutan : Larut dalam air dan etanol (95 %) P.

Penyimpan :Dalam wadah tertutup rapat

Kegunaan : Sebagai pereaksi

Page 13: pengecatan mikroorganisme

9. Etanol (Dirjen POM, 1979)

Nama Resmi : AETHANOLUM

Nama lain : Alkohol, etanol

RM / BM : C6H6O / 46

Pemerian : Cairan tidak berwarna, jernih mudah menguap, rasa panas dan

bau khas.

Kelarutan : Mudah larut dalam air dan eter.

Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat dan terindung dari cahaya

Kegunaan : Sebagai zat decolorizing

II.3. URAIAN MIKROORGANISME

II.3.1. Bacillus sp.

Klasifikasi

Kingdom : Procaryotae

Divisi : Bacteria

Kelas : Schizomycetes

Bangsa : Eubacteriales

Suku : Bacillaceae

Marga : Bacillus

Jenis : Bacillus sp

Morfologi Bacillus sp.

Merupakan bakteri berbentuk batang, tergolong bakteri gram positif, motil, menghasilkan

spora yang biasanya resisten pada panas, bersifat aerob (beberapa spesies bersifat anaerob fakultatif),

katalase positif, dan oksidasi bervariasi. Tiap spesies berbeda dalam penggunaan gula, sebagian

melakukan fermentasi dan sebagian tidak (Barrow, 1993). Ditambahkan Claus & Barkeley (1986) genus

Bacillus mempunyai sifat fisiologis yang menarik karena tiap-tiap jenis mempunyai kemampuan yang

berbeda-beda, diantaranya : (1) mampu mengdegradasi senyawa organik seperti protein, pati, selulosa,

hidrokarbon dan agar, (2) mampu menghasilkan antibiotik; (3) berperan dalam nitrifikasi dan dent

rifikasi; (4) pengikat nitrogen; (7) bersifat khemolitotrof, aerob atau fakutatif anaerob, asidofilik,

psikoprifilik, atau thermofilik.

II.3.2. Lactobacillus sp

Klasifikasi

Page 14: pengecatan mikroorganisme

Kingdom : Procaryotae

Divisi : Bacteria

Kelas : Bacili

Bangsa : Eubacteriales

Suku : Bacillaceae

Marga : Lactobacillus

Jenis : Lactobacillus sp

Morfologi

Bakteri yang mendekati genus ini mempunyai ciri-ciri morfologi sebagai berikut: warna koloni

putih susu atau agak krem, bentuk koloni bulat dengan tepian seperti wol. Sel berbentuk batang dan

biasanya tetap, berukuran 0,5-1,2 x 1,0-10,0 μm. Mereka biasanya berbentuk batang panjang tapi

kadang-kadang hampir bulat, biasanya bentuk rantai yang pendek, Gram +, tidak motil, oksidase

positif, katalase negatif, metil red positif, optimum pada suhu 30-370C dan tumbuh baik pada NaCl 3-

7%.

Menurut Holt et al (1994), bakteri Lactobacillus sp. ini termasuk Gram +, tidak berspora, tidak

motil oleh flagel peritrichous, fakultatif anaerob, kadang-kadang mikroaerofilik, sedikit tumbuh di udara

tapi bagus pada keadaan di bawah tekanan oksigen rendah, dan beberapa anaerob pada isolasi.

II.3.3. Salmonella sp

Klasifikasi

Kingdom :Bacteria

Phylum :Proteobacteria,

Class :Gamma Proteobacteria,

Ordo :Enterobacteriales,

Family :Enterobacteriaceae,

Genus :Salmonella

Morfologi

Salmonella sp. pertama ditemukan (diamati) pada penderita demam tifoid pada tahun

1880 oleh Eberth dan dibenarkan oleh Robert Koch dalam budidaya bakteri pada tahun 1881

(Todar, 2008). Salmonella sp. adalah bakteri bentuk batang, pada pengecatan gram berwarna

merah muda (gram negatif). Salmonella sp. berukuran 2 μ sampai 4 μ × 0;6 μ mempunyai flagel

(kecuali S. gallinarum dan S. pullor um), dan tidak berspora (Julius, 1990). Habitat Salmonellasp.

Page 15: pengecatan mikroorganisme

adalah di saluran pencernaan (usus halus) manusia dan hewan. Suhu optimum pertumbuhan

Salmonella sp. ialah 37oC dan pada pH 6-8 (Julius, 1990).

II.3.4. Streptococcus sp

Klasifikasi

Kingdom : Monera

Divisio : Firmicutes

Class : Bacilli

Order : Lactobacilalles

Family : Streptococcaceae

Genus : Streptococcus

Species : Streptococcus mutans

Morfologi

Streptococcus mutans tumbuh dalam suasana fakultatif anaerob (Lehner, 1992;

Michalek dan Mc Ghee, 1982). Enzim-enzim ini bersifat spesifik untuk subtsrat sukrosa yang

digunakan untuk sintesa glukan dan fruktan. Pada metabolisme karbohidrat, enzim

glikosiltransferase menggunakan sukrosa untuk mensintesa molekul glukosa dengan berat

molekul tinggi yang terdiri dari ikatan glukosa alfa (1-6) dan alfa (1-3) (Michalek dan Mc Ghee,

1982). Ikatan glukosa alfa (1-3) bersifat sangat pekat seperti lumpur, lengket dan tidak larut

dalam air. Kelarutan ikatan glukosa alfa (1-3) dalam air sangat berpengaruh terhadap

pembentukan koloni Streptococcus mutans pada permukaan gigi. Ikatan glukosa alfa (1-3)

berfungsi pada perlekatan dan peningkatan koloni bakteri ini dalam kaitannya dengan

pembentukan plak dan terjadinya karies gigi. (Roeslan dan Melanie, 1988).

II.3.5. Pseudomonas sp

Klasifikasi

Kingdom : Bacteria

Phylum : Proteobacteria

Page 16: pengecatan mikroorganisme

Class : Gamma Proteobacteria

Order : Pseudomonadales

Family : Pseudomonadaceae

Genus : Pseudomonas

Morfologi

Bentuk selnya berupa batang lurus, atau kadang-kadang serupa bola. diameter koloni 0,5-0,8

μm. Koloni muncul di atas permukaan media NA. Koloni bakteri berwarna kuning, permukaan koloni

mengkilat. Termasuk ke dalam bakteri gram negatif, motil dan katalase positif.

II.3.6. Vibrio coma sp

Klasifikasi

Kingdom : Eubacteria

Divisi : Bacteri

Class : Schizomycetes

Ordo : Eubacteriales

Family : Vibrionaceae

Genus : Vibrio

Spesies : Vibrio coma

Morfologi

Secara umum, morfologi atau struktur tubuh dari bakteri Vibrio bila diisolir dari faeces

penderita atau dari biakkan yang masih muda adalah batang bengkok seperti koma, tetapi akan

berbentuk batang lurus bila diambil atau didapat dari biakan yang sudah tua. Mempunyai sifat

Gram negatif dengan ukuran 1 – 3 x 0,4 – 0,6 µm tetapi ada beberapa literatur yang mengatakan

bahwa Vibrio berukuran panjang (1,4 – 5,0) µm dan lebar (0,3 – 1,3) µm.

II.3.7. Stapphylococus

Klasifikasi

Kingdom : Bacteria

Filum : Firmicutes

Kelas : Cocci

Page 17: pengecatan mikroorganisme

Ordo : Bacillales

Famili : Staphylococcaceae

Genus : Stapphylococus

Morfologi

S.aureus adalah bakteri berbentuk bulat,bersifat gram positif, biasanya tersusun dalam

rangkaian tidak beraturan seperti buah anggur. Beberapa diantaranya tergolong flora normal pada

kulit dan selaput mukosa manusia, menyebabkan penanahan, abses, berbagai infeksi piogen dan

bahkan septi kimia yang fatal.S.aureus mengandung polisakarida dan protein yang berfungsi

sebagai antigen dan merupakan substansi penting didalam struktur dinding sel, tidak membentuk

spora, dan tidak membentuk flagel (Jawetz,E.2005)

II.3.8 Eschericia coli

Klasifikasi

Kingdom : Protista

Divisi : Schizophyta

Kelas : Bacteria

Ordo : Eubacteriales

Famili : Euterobacteriales

Genus : Eschericia

Spesies : Eschericia coli

Morfologi

Bakteri Escheria Coli merupakan kuman dari kelompok gram negatif, berbentuk

batang dari pendek sampai kokus, saling terlepas antara satu dengan yang lainnya tetapi ada juga

yang bergandeng dua-dua (diplobasil) dan ada juga yang bergandeng seperti rantai pendek, tidak

membentuk spora maupun kapsula, berdiameter ± 1,1 – 1,5 x 2,0 – 6,0 µm, dapat bertahan hidup

di medium sederhana dan memfermentasikan laktosa menghasilkan asam dan gas, kandungan

G+C DNA ialah 50 sampai 51 mol % (Pelczar dan Chan, 1988:949).

Page 18: pengecatan mikroorganisme

BAB IV

HASIL PENGAMATAN

IV. I Tabel Pengamatan

A. Pengecatan Sederhana

Kelompok Kode Bakteri Bentuk

1 A Streptococcus2 B Batang (basil)

3 C Batang (basil)

4 D Batang (basil)

5 E Batang (basil)

6 F Batang (basil)

7 G Bulat (coccus)

8 H Batang (basil)

B. Pengecatan Gram

Kelompok Kode Bakteri Bentuk

1 A Gram Negative2 B Gram Negative

3 C Gram Negative

4 D Gram Positif

5 E Gram Negative

6 F Gram Negative

7 G Gram Negative

8 H Gram Positif

C. Pengecatan Tahan Asam

Kelompok Kode Bakteri Hasil

1 A Tidak Tahan Asam (biru)2 B Tidak Tahan Asam (biru)

3 C Tidak Tahan Asam (biru)

Page 19: pengecatan mikroorganisme

4 D Tidak Tahan Asam (biru)

5 E Tidak Tahan Asam (biru)

6 F Tidak Tahan Asam (biru)

7 G Tidak Tahan Asam (biru)

8 H Tidak Tahan Asam (biru)

D. Pengecatan Spora

Kelompok Kode Bakteri Hasil

1 A Tidak berspora2 B Tidak Berspora

3 C Tidak Berspora

4 D Tidak Berspora

5 E Tidak Berspora

6 F Tidak Berspora

7 G Tidak Berspora

8 H Tidak Berspora

E. Pengecatan Kapsul

Kelompok Kode Bakteri Hasil

1 A Tidak berkapsul2 B Tidak berkapsul

3 C Tidak berkapsul

4 D Tidak berkapsul

5 E Berkapsul

6 F Tidak berkapsul

7 G Berkapsul

8 H Tidak berkapsul

Page 20: pengecatan mikroorganisme

VI. 3 Gambar Pengamatan

Page 21: pengecatan mikroorganisme

BAB V

PEMBAHASAN

Bakteri merupakan organisme yang sangat kecil (berukuran mikroskopis). Bakteri rata-rata

berukuran lebar 0,5-1 mikron dan panjang hingga 10 mikron (1 mikron = 10-3 mm). Itu berarti pula

bahwa jasad renik ini tipis sekali sehingga tembus cahaya. Akibatnya pada mikroskop tidak tampak

jelas dan sukar untuk melihat bagian-bagiannya. Untuk melihat bakteri dengan jelas, tubuhnya perlu

diisi dengan zat warna, pewarnaan ini disebut pengecatan bakteri  Berbagai macam tipe morfologi

bakteri (kokus, basil, spirilum, dan sebagainya) dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna

sederhana. Istilah ”pewarna sederhana” dapat diartikan dalam mewarnai sel-sel bakteri hanya

digunakan satu macam zat warna saja.

Praktikum ini dilakukan untuk mengetahui dan melakukan teknik pewarnaan mikroorganisme

baik itu dengan cara pengecatan sederhana, pengecatan gram, pengecatan tahan asam dan

pengecatan spora serta mengetahui morfologi mikroorganisme.

Dari hasil percobaan, suspense biakan kode “A” adalah bakteri Streptococcus mutans. Di

dapatkan bahwa bakteri ini merupakan bakteri berbentuk Streptococcus (bulat) , termasuk bakteri gram

negative, tidak berspora, dan tidak memiliki kapsul. Adapun menurut literature didapatkan hasil bahwa

bakteri ini merupakan organisme gram positif, berbentuk bulat, tidak membantuk spora dan tahan

asam. Oleh karena itu, beberapa hasil pengamatan tidak sesuai dengan literature.

Suspensi biakan pada kode “B” adalah bakteri Eschericia coli. Pada hasil pengamatan di

dapatkan bahwa bakteri ini merupakan bakteri gram negative, berbentuk batang hingga kokus, tidak

tahan asam, dan kapsul tidak terlihat jelas, begitupun dengan spora. Hal ini sesuai dengan literature

yang menyatakan bahwa bakteri E.coli termasuk bakteri gram negative berbentuk batang. Adapun

Page 22: pengecatan mikroorganisme

suspense biakan bakteri kode “C” merupakan bakteri Pseudomonas aeruginosa. Dari hasil pengamatan

di dapatkan bakteri tersebut memiliki morfologi berbentuk basil (batang), tidak tahan asam, tidak

memiliki kapsul, merupakan bakteri gram negative dan tidak memiliki spora. Hal ini telah sesuai dengan

literature dimana bakteri Pseudomonas aeruginosa terdiri dari sejumlah bakteri gram negative,

berbentuk batang, tidak berspora dan tidak mempunyai selubung.

Pada suspense biakan kode “D” merupakan bakteri Lactobacillus acidophilis. Dari hasil

pengamatan ditemukan bahwa bakteri ini memiliki bentuk batang (basil), tidak tahan asam, merupakan

bakteri gram positif dan tidak memiliki kapsul. Hal ini sesuai berdasarkan literature yang di peroleh,

bahwa bakteri Lactobacillus acidophilus memiliki bentuk menyerupai batang , tergolong bakteri gram

positif, dan tidak membentuk spora (Siswanti, 2002).

Suspensi biakan kode “E” adalah bakteri Salmonella thyposa. Dari hasil praktikum didapatkan

data berupa bakteri ini tergolong gram negative. tidak tahan asam, dan tidak memiliki spora. Selain itu,

morfologinya berbentuk basil dan tidak memiliki kapsul. Hal ini sesuai dengan literature yang di peroleh

yang menyebutkan bahwa Salmonella sp. adalah bakteri bentuk batang, pada pengecatan gram

berwarna merah muda (gram negative) dan tidak berspora. Suspensi biakan pada kode “F” ialah

bakteri Vibrio cholera. Hasil pengamatan menunjukkan bahwa bakteri ini berbentuk batang, tergolong

gran negative, tidak tahan asam, tidak berspora dan tidak memiliki kapsul. Hasil yang di peroleh pada

saat praktikum sesuai dengan literature yang menjelaskan bahwa bakteri jenis ini merupakan bakteri

berbentuk basil, bakteri gram negative yang tidak tahan asam. Jenis bakteri ini juga tidak memiliki

kapsul dan tidak memiliki spora.

Susprensi biakan bakteri kode “G” yakni bakteri Staphylococcus aureus. Berdasarkan hasil

pengamatan di dapati bahwa bakteri ini berbentuk bulat (coccus), meruoakan bakteri gram negative,

tidak tahan asam, tidak berspora dan memiliki kapsul. Hal tersebut tidak sesuai dengan literature.

karena bakteri Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif, tidak berspora, tidak tahan

asam dan memiliki kapsul.

Adapun suspense biakan bakteri kode “H” merupakan bakteri Bacillus sp. Data yang di

peroleh dari pengamatan yakni bakteri ini memiliki bentuk basil, tidak berkapsul, tidak tahan asam. tidak

berspora dan tergolong bakteri gram positif, Hal ini tidak sesuai dengan literature yang menyebutkan

bahwa Bacillus sp.merupakan bakteri gram positif, berbentuk batang (basil). Kebanyakan anggota

genus Baciluus sp. dapat membentuk endospora yang di bentuk secara intraseluler sebagai respon

terhadap kondisi lingkungan yang kurang menguntungkan.

Page 23: pengecatan mikroorganisme

Bacillus sp. memiliki S-layer yang merupakan lapisan crystalline. Bagian kapsul kebanyakan

anggota Bacillus sp. mengandung D atau L-glutamic acid, sedangkan beberapa lainnya memiliki kapsul

yang mengandung karbohidrat.

Dari hasil yang di peroleh, bahwa ada beberapa bakteri yang memiliki ketidaksesuaian dengan

pustaka. Hal ini di sebabkan oleh adanya beberapa factor kesalahan. Diantaranya yaitu:

1. Kurang memperhatikan durasi waktu saat pengecatan, sehinggan zat warna kurang

meresap ke dalam sel bakteri dan memperlihatkan hasil yang tidak sesuai dengan

pustaka.

2. Bahan/zat warna yang digunakan kurang baik sehingga warna yang dihasilkan kurang

sesuai.

3. Kurang hati-hati dalam pengerjaan. Diantaranya, terlalu banyak meneetskan zat warna

pada preparat, terlalu tebal saat menggoreskan suspense bakteri sehingga susah diamati

di bawah mikroskop. Adapun saat di keringkan dengan tissue bakteri ikut hilang dan

terlalu banyak di bilas dengan aquadest..

Page 24: pengecatan mikroorganisme

DAFTAR PUSTAKA

Dwidjoseputro, D. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djambatan.

Pelczar, M.J.2007. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : UI Press.

Sutedjo, M.1991. Mikrobiologi Tanah. Jakarta : Rhineka Cipta.

Ditjen,POM. 1995. Fakrmakope Indonesia edisi IV. Jakarta : DEPKES RI

Anonim. 2013. BAB II Tinjauan Pustaka Lactobacillus sp (online) . http://digilib.unila.ac.id/2807/13/BAB

%20II.pdf : Diakses pada 8 April 2015

Anonim. 2014. Salmonella sp (online). http://itd.unair.ac.id/files/pdf/protocol1/Salmonella%20sp.pdf :

Diakses pada 8 April 2015

Anonim. 2014. Streptococcus sp (online). http://digilib.unimus.ac.id/files/disk1/114/jtptunimus-gdl-

sodikinkur-5696-2-babiik-s.pdf : Diakses pada 8 April 2015

Saliifiroh. 2013. Bacillus sp (online) . http://digilib.unimus.ac.id/files/disk1/139/jtptunimus-gdl-sailifiroh-

6928-3-babii.pdf : Diakses pada 8 April 2015


Top Related