1

Os exames laboratoriais so realizados a partir da solicitao mdica a fim de diagnosticar,

monitorar ou acompanhar o tratamento de um paciente.

Coleta de sangue venoso

Objetivo

Uma boa coleta de sangue permite segurana no resultado do exame, todos os

procedimentos devem ser realizados de forma a garantir a segurana do profissional, do paciente

e da amostra.

Desenvolvimento

O paciente deve ser orientado a manter um jejum de 10 a 14 horas, antes da coleta. Ele

fica livre somente para beber gua, a coleta deve ser preferencialmente realizada na parte da

manha e antes da pratica de exerccios fsicos.

A obteno do sangue pode ser por puno venosa, arterial, ou puno de pele (capilar), a

amostra tambm podem ser coletadas no dorso da mo, na veia femoral, veias jugulares, cordo

umbilical e seio sagital superior.

Normalmente usa-se a dobra do cotovelo ou a mo para a coleta.

Procedimento

Verificar quais exames ser realizado.

Identificar os tubos com o nome do paciente.

Retirar a agulha da embalagem estril e acoplar a seringa estril.

Colocar o garrote ao redor do brao acima do cotovelo.

Paciente abrir e fechar a mo vrias vezes.

Determinar a veia a ser puncionada.

Desinfetar a pele com lcool 70%.

Introduzir a agulha na pele e penetrar no interior da veia.

Aps a coleta, pedir para o paciente abrir a mo.

Soltar o garrote.

Retirar a agulha voltada para cima.

Distribuir nos tubos Inverter os que tiverem anticoagulantes.

OBS: quando se quer obter o soro do paciente, usa-se tubo sem anticoagulante, e se

deseja obter plasma, usa-se tubo com anticoagulante.

2

Concluso

Com os dias de estgio na rea de coleta, foi possvel obter prtica, aumentar confiana alm de

aprender as tcnicas utilizadas, para que na hora da coleta eu possa transmitir ao paciente

segurana e confiabilidade.

HEMATOLOGIA

Do ponto de vista da sua constituio, o sangue considerado como um sistema complexo

e relativamente constante, constitudo de elementos slidos (clulas sanguneas), substncia

lquida (soro ou plasma) e elementos gasosos (oxignio e gs carbnico). Embora no seja

necessrio conhecer todos os detalhes sobre os procedimentos analticos dos testes, essencial

conhecer o tipo de amostra necessria para cada tipo de anlise.

Tipo de Anlise - Tipo de Amostra

Bioqumica e Sorolgica - Soro ou plasma

Hematolgica - Sangue total com EDTA

Glicmica - Plasma com fluoreto de sdio

Coagulao - Plasma com citrato de sdio

Tubos para coleta

Cada tipo de amostra deve ser coletada em um tubo especfico para cada tipo de anlise,

sendo de extrema importncia conhec-los para a realizao de uma coleta de material biolgico. O

material colhido em recipiente inadequado ser rejeitado e descartado pelo laboratrio pois no ter

validade para a realizao da anlise. Todos os tubos devero ser homogeneizados imediatamente

aps a coleta. Deve-se invert-los de 5 a 8 vezes, suavemente. Tubos homogeneizados

inadequadamente podero conter pequenos cogulos sanguneos que diminuiro a utilidade do tubo.

Quando o paciente possui mais de um exame solicitado e estes exames necessitam de materiais

diferentes que devem ser coletados em recipientes diferentes, deve-se obedecer uma sequncia para

coleta dos materiais para que no haja contaminao dos aditivos de um tubo para outro, o que

ocasiona grandes alteraes em alguns parmetros analticos. A sequncia de coleta para tubos

plsticos de coleta de sangue tubo com citrato de sdio (tampa azul), tubo sem anticoagulante

(tampa vermelha ou tampa amarela), tubo com heparina (tampa verde), tubo com EDTA (tampa

roxa) e tubo com fluoreto de sdio (tampa cinza). Quando o paciente tiver apenas exames de

3

coagulao, dever ser coletado primeiro um tubo de descarte. Isso devido ao fato de o primeiro

fluxo de sangue coletado conter os fatores de coagulao, principalmente a protrombina, o que altera

os resultados.

Anlises de Coagulao

Quando se pretende fazer anlise de coagulao, dever ser colhida uma amostra de plasma

(CITRATO DE SDIO). Esta ser obtida atravs da coleta em tubo de citrato de tampa azul. Este tubo

contm Citrato de Sdio, o sangue colhido com anticoagulante deve ser cuidadosamente

homogeneizado por inverso de 5 a 8 vezes para evitar hemlise e a coagulao do sangue.

Anlises Bioqumicas e Sorolgicas

Quando se pretende fazer anlise bioqumica ou sorolgica, dever ser colhida uma amostra

de soro. Esta ser obtida atravs da coleta em tubo sem anticoagulante para que ocorra o processo de

coagulao. Portanto, a coleta deve ser feita no tubo de tampa vermelha sem gel ou no tubo de tampa

amarela com gel. Estes tubos contm ativador de cogulo e deve-se, imediatamente aps a coleta,

homogeneiz-los por inverso de 5 a 8 vezes para evitar hemlise, manter em repouso na posio

vertical por 30 minutos para retrair o cogulo e seguir a centrifugao a 3.000 rpm durante 10 minutos.

Anlises Bioqumicas

Quando se pretende fazer anlise bioqumica, gasometria ou outros exames, dever ser

colhida uma amostra de plasma (HEPARINA). Est ser obtida atravs da coleta em tubo de heparina

de tampa verde. Este tubo contm Heparina, o sangue colhido com anticoagulante deve ser

cuidadosamente homogeneizado por inverso de 8 a 10 vezes para evitar hemlise e a coagulao do

sangue.

Anlises Hematolgicas

Quando se pretende fazer anlise hematolgica, dever ser colhida uma amostra de sangue

total (EDTA). Esta ser obtida atravs da coleta em tubo de EDTA de tampa roxa. Este tubo contm

anticoagulante especfico para evitar a coagulao. O sangue colhido com anticoagulante deve ser

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cuidadosamente homogeneizado por inverso de 5 a 8 vezes para evitar hemlise e a coagulao do

sangue.

Anlises Glicmicas

Quando se pretende fazer anlise de glicemia, dever ser colhida uma amostra de plasma

(FLUORETO DE SDIO). Esta ser obtida atravs da coleta em tubo de tampa cinza. Este tubo

contm fluoreto de sdio com EDTA, o sangue colhido com anticoagulante deve ser cuidadosamente

homogeneizado por inverso de 5 a 8 vezes para evitar hemlise e a coagulao do sangue.

Sistema ABO e fator Rh

O tipo sanguneo em humanos condicionado por alelos mltiplos. So quatro os tipos de

sangue: A, B, AB e O. Cada um destes tipos caracterizado pela presena ou ausncia

de aglutinognio, nas hemcias, e aglutinina, no plasma sanguneo.

Os aglutinognios so substncias encontradas na membrana plasmtica das hemcias e que

funcionam como antgenos quando introduzidos em indivduos que no os possuam. Existem dois

tipos de aglutinognios: A e B.

As aglutininas so substncias presentes no plasma sanguneo e que funcionam como

anticorpos que reagem com antgenos estranhos. Existem dois tipos de aglutininas: anti-A e anti-

B. O contato entre um aglutinognio e sua aglutinina correspondente provoca a aglutinao do

sangue. Assim, indivduos com sangue Tipo A no podem doar sangue para indivduos do Tipo B,

e vice-versa. Indivduos do Tipo AB podem receber sangue de qualquer grupo. J os do Tipo O

podem doar para qualquer grupo.

Tipo Sanguneo Aglutinognio (hemcias) Aglutinina (plasma)

A A Anti-B

B B Anti-A

AB AB -----

O ----- Anti-A e Anti-B

Indivduos com sangue Rh+ possuem o fator Rh em suas hemcias e apresentam

aglutinao do sangue quando entram em contato com anticorpos anti-Rh. Aqueles que no

possuem o fator Rh em suas hemcias so chamados Rh- e no apresentam reao de

5

aglutinao quando em contato com anticorpos anti-Rh. Quando um indivduo Rh- recebe

sangue Rh+, ele passa a produzir anticorpos anti-Rh.

A eritroblastose fetal uma doena que pode ocorrer quando mes Rh- geram filhos Rh+.

Nestes casos, pequenos vasos da placenta se rompem e h passagem de sangue do filho para a

me. Em resposta, o sangue da me passa a produzir anticorpos anti-Rh. Numa prxima

gravidez, se o filho for Rh+, os anticorpos maternos iro atacar as hemcias do feto, provocando a

doena.

O cromossomo D o responsvel pela produo da maior parte do aglutinognio

conhecido como Rh, por isso o termo Rh pode ser substitudo pelo fator D

Determinao grupo ABO e Rh em lmina

Materiais

Laminas

Reagentes (anti-A, anti-B, anti-AB e anti-D)

sangue

Mtodo

1. Pegar quatro lminas e marca-las de acordo com o reagente a ser colocado. Colocar uma

gota de sangue em cada lmina e uma gota de cada soro de acordo com a marcao

realizada. Exemplo: uma gota do reagente anti-A na lmina marcada como anti-A.

Homogeneizar. Observar a presena de aglutinao macroscpica se houver aglutinao

significa que a hemcia possui antgeno correspondente. Exemplo: Houve aglutinao com

o reagente anti-A, significa que o sangue pode ser A. Se no houver aglutinao com

nenhum dos reagentes, o tipo sanguneo o O. Se houver aglutinao com o reagente

anti-D significa que o sangue Rh positivo.

Determinao grupo ABO em tubo

Materiais

Tubos

Pipetas

Reagentes (anti-a, anti-b, anti-ab e anti-d)

Sangue

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Centrfuga

Mtodos

1. Marcar trs tubos como anti-A, anti-B e anti-AB. Colocar duas gotas de sangue nos trs

tubos e duas gotas do reagente correspondente.

2. Centrifugar por 15 segundos em 3500 rpm. Ressuspender delicadamente o boto de

hemcias e examinar a presena ou no, de aglutinao.

Coombs Direto

O teste de Coombs direto um mtodo que permite a identificao da presena de anticorpos

fixados sobre as hemcias. Tecnicamente, baseia-se no fato de que os anticorpos que recobrem

as hemcias podem ser identificados pela adio de anticorpos antigamaglobulina humana.

Materiais

Tubos

Soro de coombs

Sangue

Soluo fisiolgica

Pipetas

Centrfuga

Mtodo

1. Colocar 2 gotas do sangue em um tubo, adicionar soluo fisiolgica e centrifugar a 3.000

rpm por um minuto,desprezar (com cuidado) o sobrenadante deixando o boto de

hemcias no fundo do tubo, repetir o procedimento mais duas vezes.

2. Colocar 2 gotas do soro de Coombs e centrifugar novamente por 15 segundos, agitar

levemente o tubo e observar se h aglutinao dos eritrcitos. Se houver aglutinao o

teste de coombs positivo, se no houver ele negativo.

Coombs indireto

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A prova de Coombs indireto atualmente chamada de pesquisa de anticorpos irregulares

(PAI). Esta prova avalia a presena de anticorpos irregulares circulantes no soro de doadores de

sangue, receptores, gestantes, pacientes com suspeita de anemia hemoltica por presena de

anticorpos, entre outros.

O teste antiglobulina humano baseia-se na aglutinao de hemcias sensibilizadas

previamente com anticorpos humanos ou fraes do complemento atravs do anti-soro AGH

(SORO DE COOMBS).

Materiais

Tubos

Centrfuga

Banho-maria

Soro de coombs

Hemcias com tipagem conhecida

Soluo fisiolgica

Mtodo

1. Preparar uma suspenso salina a 5% com hemcias conhecidas quanto ao antgeno e

cujo anticorpo correspondente se deseja detectar (o mais comum a deteco de

anticorpos anti- Rh positivo, anti-D). As hemcias devem ser compatveis com o soro

quanto ao sistema ABO (comumente empregam-se hemcias do grupo O Rh positivo).

2. Colocar duas gotas da suspenso em um tubo de 12 x 75 mm e lavar trs vezes com

soluo salina.

3. Adicionar duas gotas do soro a ser testado.

4. Misturar e incubar em banho a 37C, durante 30 a 45 minutos.

5. A seguir, lavar as hemcias trs vezes com soluo salina e adicionar o soro de Coombs

(duas gotas).

6. Agitar e centrifugar a 1.000 r.p.m. por 15 segundos.

7. Proceder leitura: presena de aglutinao significa teste de Coombs Indireto Positivo,

ausncia de aglutinao significa Teste de Coombs Indireto Negativo.

Esfregao

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A realizao do esfregao sanguneo etapa significativa em um hemograma, pois possibilita

a leucometria diferencial, a estimativa do nmero de leuccitos e plaquetas por microlitro de

sangue, a avaliao morfolgica das clulas sanguneas e tambm a pesquisa de parasitas

sanguneos.

Materiais

Sangue

Lminas

Lpis

Mtodo

1. Preparar duas lminas novas e desengorduradas. Colocar uma gota de sangue pequena

em uma das extremidades da lmina. Tomar a outra lmina e coloca-la frente da gota

num ngulo de 45, fazer um ligeiro movimento para trs at o sangue se espalhar

totalmente na borda da lmina. Com um movimento uniforme, para frente, fazer esta

lmina deslizar sobre a outra, ela arrastar atrs de si o sangue que se espalhar em fina

camada. Imediatamente aps, agita a lmina ao ar at o esfregao secar-se

completamente e identificar com lpis.

Colorao de Lmina

Os corantes para esfregaos sanguneos so uma mistura de corantes de caractersticas

neutras, dependentes do pH da soluo corante, que em condies apropriadas coram os

componentes nucleares e citoplasmticos dos leuccitos, com predominncia de tons vermelhos

(quando cidos) e azulados diversos (quando bsicos).

Materiais

Corante (Leishman, Rosefeldou Wright)

Lamina com esfregao

gua destilada

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Mtodos

2. Preencher a lmina com o corante, deixar por 3-5 minutos.

3. Adicionar gua destilada sobre o corante e a lmina, deixar por 15 minutos.

4. Escorrer o corante e lavar em gua corrente, secar e examinar ao microscpio, as

hemcias ficam com colorao rsea e os leuccitos azuis.

Contagem de Plaquetas

As plaquetas, tambm chamadas de trombcitos, so clulas sanguneas produzidas na

medula ssea e que atuam na formao de cogulos de sangue, a fim de impedir uma hemorragia

sempre que houver necessidade.

Materiais

Lmina corada

Microscpio

Mtodo

1. Em um esfregao corado, contar as plaquetas em 10 campos que contenham 100

hemcias. Somar e multiplicar por 1000.

Valores de referncia: 150.000 a 400.000/mm

Contagem total de eritrcitos

Materiais

Cmara de Neubauer

Pipetas

Tubos

Lquido de Gower

Sangue

10

Lamnula

Microscpio

Mtodo

1. Pipetar 4ml do lquido de Gower e 20l do sangue

em um tubo, homogeneizar.

2. Colocar a lamnula sobre a cmara de Neubauer e

preencher um dos lados da cmara com a

diluio.

3. Levar ao microscpio e contar as hemcias de

cinco quadrados mdios centrais, como na figura

abaixo.

Clculo

n de eritrcitos/mm3 = n de eritrcitos contados 10.000

Valores de referncia: Homens adultos: 4,6 a 6,2 milhes/ml de sangue venoso

Mulheres adultas: 4,2 a 5,4 milhes/ml de sangue venoso

Crianas: 3,8 a 5,5 milhes/ml de sangue venoso

Contagem total de leuccitos

Materiais

Cmara de Neubauer

Pipetas

Tubos

Lquido de Turk

Sangue

11

Lamnula

Microscpio

Mtodo

1. Pipetar 400l do lquido de Turk e 20l de sangue em

um tubo de ensaio, homogeneizar.

2. Colocar a lamnula sobre a cmara de Neubauer e

preencher um dos lados da cmara com a diluio.

3. Levar ao microscpio e contar os leuccitos de quatro

quadrados laterais maiores, como na figura abaixo.

Clculo

n de leuccitos/mm3 = n de leuccitos contados 50

Valores de referncia: 3.800 a 9.800/mm3

Hematcrito

O hematcrito um exame de diagnstico que serve para avaliar a percentagem dos glbulos

vermelhos ou hemcias no volume total de sangue, ajudando a identificar a anemia.

Materiais

Capilar

Sangue

Papel ou gaze

Bico de bunsen

Centrfuga

Mtodo

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1. Encher dois teros de um capilar com sangue com anticoagulante, limpar a extremidade

com papel ou gaze.

2. Fechar a extremidade do tubo na chama, protegendo o sangue com o dedo e rotacionando

lentamente o capilar para que ele feche por igual, sem formar deformaes na ponta.

3. Centrifugar por 5 minutos a 11.500 rpm.

4. Fazer a leitura no carto especial alinhando o incio da coluna de hemcias em zero e o

final do plasma em 100% e obtenha o resultado em porcentagem.

Valores de referncia: Homens: 40% a 50%

Mulheres: 35% a 45%

Crianas at 1 ano: 34% a 40%

Recm-nascidos: 50% a 60%

Hemoglobina

A hemoglobina uma protena presente nos eritrcitos (hemcias), constituindo

aproximadamente 35% de seu peso. um pigmento presente no sangue responsvel por

transportar o oxignio, levando-o dos pulmes aos tecidos de todo o corpo.

Materiais

Regente de cor

Padro

gua destilada

Sangue

Tubos

Pipetas

Espectrofotmetro

Mtodo

1. Identificar 3 tubos como branco, teste e padro. Adicionar no tubo padro 5ml do reagente

de cor e 20l do padro. No tubo teste colocar 5ml do reagente de cor e 20l do sangue

total.

2. Misturar e esperar 5 minutos.

3. Determinar as absorbncias em 540nm, acertando o zero com gua destilada. A cor

estvel por vrias horas.

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Clculos

Hemoglobina (g/dl) =absorbncia do teste

absorbncia do padro 10

Fator de calibrao =10

absorbncia do padro

Hemoglobina (g/dl) = fator de calibraoabsorbncia do teste

Valores de referncia: Homens: 12,5 17,5 g/dl

Mulheres: 11,5 15,5 g/dl

VCM

O volume globular mdio (VGM) ou volume corpuscular mdio (VCM) mede o tamanho das

hemcias. Um VCM elevado indica hemcias macrocticas, ou seja, hemcias grandes. VCM

reduzidos indicam hemcias microcticas, isto , de tamanho diminudo.

Clculo

VCM =hematcrito

eritrcitos 10

Valores de referncia: Macrocitose = 98fl

Normocitose = 80 98fl

Microcitose = 80fl

HCM

O HCM (hemoglobina corpuscular mdia) ou HGM (hemoglobina globular mdia) o peso

da hemoglobina dentro das hemcias.Quando as hemcias tm poucas hemoglobinas, elas so

ditas hipocrmicas. Quando tm muitas so hipercrmicas.

Clculo

14

HCM =hemoglobina

eritrcito 10

Valores de referncia: Hipercromia = 32pg

Normocromia = 27-32pg

Hipocromia = 27pg

CHCM

O CHCM (concentrao de hemoglobina corpuscular mdia) ou CHGM (concentrao de

hemoglobina globular mdia) avalia a concentrao de hemoglobina dentro da hemcia.

Clculo

CHCM =hemoglobina

hematcrito 100

Valores de referncia: Normocromia = 31 35%

Hipocromia = 31%

Contagem de reticulcitos

O reticulcito uma clula jovem que representa uma fase intermediria entre os eritroblastos

da medula ssea e os eritrcitos maduros, anucleados e j totalmente hemoglobinizados.

Materiais

Sangue

Corante azul cresil brilhante

Lminas

Mtodos

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Fazer um esfregao com uma gota de azul cresil brilhante e uma gota de sangue total. Incubar por

15 minutos a 37C.

Clculo

Reticulcitos =

n de hemcias contadas

Valores de referncia: 0,5 a 1,5%

Concluso

Podemos concluir que alm da importncia da coleta do material biolgico a ser analisado,

de suma importncia observar bem o exame a qual o paciente foi solicitado, para que este seja

armazenado e analisado de forma correta. Devemos sempre colocar a identificao nos tubos em

primeiro lugar, alm de conferir o laudo do exame com o cadastro do paciente, pra assegurar que

no haja erros na emisso de resultados.

Uroanlise

A urina composta por 96% de gua e 4% por substncias provenientes da dieta e do

metabolismo. Constituda por uria e outras substncias qumicas orgnicas e inorgnicas

dissolvidas em gua que podem sofrer alterao devido a alimentao, atividade fsica,

metabolismo orgnico e funo endcrina.

Para a realizao do exame, a urina considerada padro ou mais adequada para anlise

a primeira amostra da manh. Esta amostra deve ser colhida imediatamente aps acordar, pela

manh, em jejum e antes de realizar qualquer atividade. recomendado, ainda que esta amostra

seja colhida aps oito horas de repouso e, pelo menos quatro horas aps a ltima mico. A

primeira amostra da manh considerada como amostra padro para a realizao do exame de

urina porque ela mais concentrada que as outras amostras e porque nesta amostra se verifica

maior crescimento das bactrias eventualmente presentes na bexiga, assim o resultado da analise

realizada reflete melhor as condies do paciente.

Uma outra amostra a segunda amostra da manh, sendo obtida com mais facilidade no

laboratrio que a primeira amostra da manh. Deve ser colhida de duas a quatro horas aps a

primeira mico do dia, podendo sofrer alteraes devido a ingesto de alimentos e lquidos no

desjejum. Com o objetivo de aumentar a concentrao de eventuais bactrias presentes na bexiga

pode-se recomendar a restrio de ingesto de lquido aps as 2 horas.

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A amostra randmica colhida a qualquer momento do dia sendo recomendvel que o

intervalo de tempo entre a ltima mico e a coleta da amostra seja de pelo menos duas horas. A

composio pode , certamente, influenciada pelos alimentos e lquidos ingeridos durante o dia. A

utilizao da amostra randmica inevitvel em situao de emergncia e urgncia, frequentes

em ambiente hospitalar. Entretanto, a utilizao da amostra randmica narealizao do exame de

urina deve considerar a elevada possibilidade de resultados falsos negativos assim como

resultados falsos positivos dentre os constituintes avaliados na realizao do exame.

Em crianas, a obteno da amostra de urina realizada atravs de coletor auto aderente,

sendo substitudos aps 30 minutos mesmo que a criana no tenha urinado para evitar

contaminao.

O armazenamento das amostras servem para manter a integridade dos elementos e para a

estabilidade qumica, sendo que o tempo de coleta e transporte no deve ultrapassar 1 hora,

sendo conservada em refrigerador caso no seja possvel o transporte no tempo estipulado.

Dessa forma, pode ser traada a importncia do exame de urina para diagnsticos

posteriores, bem como tratamentos de possveis infeces ou outro tipo de patologia.

Objetivo

O objetivo deste relatrio demonstrar, por meio de materiais e mtodos a importncia do

exame de urina, de forma que sejam exposto seus componentes e possveis resultados. O

paciente deve ser orientado na hora da coleta a realizar a assepsia do local, caso no seja

necessrio este dever ser relatado no exame, para que o mdico saiba o mtodo utilizado para a

coleta.

Material

Amostra biolgica

Fita reagente

Estante

Centrfuga

Lminas

Lamnulas

Refratmetro

Tubos

Microscpio

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Mtodo

1. Colocar a urina em um tubo para a medio de volume, e em outro tudo separar a

quantidade que ser centrifugada.

2. Colocar a fita reagente e esperar 2 minutos para a leitura, comparar os resultados

na embalagem das fitas. Colocar uma gota da urina no refratmetro para que seja

medida a densidade da urina. Levar o tubo para a centrifuga por 5 minutos,

desprezar o sobrenadante e utilizar o sedimento do final do tudo.

3. Colocar em uma lmina o sedimento, cobrir com a lamnula e analisar no

microscpio na objetiva de 40x.

A anlise divida em trs partes, sendo:

1. - Exame Fsico

Aspecto

A urina pode ser considerada lmpida, ligeiramente turva e turva. A urina pode apresentar

turvao quando h presena de grandes quantidades de hemcias, clulas epiteliais,

cristais e bactrias, alm da presena de matria gordurosa.

Odor

Em situaes normais, a urina apresenta odor caracterstico, ligeiramente aromtico,

alterando aps algum tempo de repouso. Quanto a urina entra em estado de

decomposio, seu odor ptrido ou amoniacal, devido fermentao bacteriana.

Cor

A urina, em situaes normais, apresenta cor amarela, variando do tom claro e escuro. A

urina pode apresentar colorao vermelha ou castanha em casos de hematria, alm de

apresentar variaes de colorao devido a certos alimentos ingeridos, como por exemplo

a beterraba. Em casos de ingesto de medicamentos, a urina pode apresentar colorao

bastante variada como vermelha, verde, laranja, etc.

Densidade

medida a densidade da urina com a finalidade de verificar a capacidade de concentrao

e diluio do rim, bem como o estado de hidratao do paciente, diabetes inspido e

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inadequao da amostra por baixa concentrao. A densidade da urina normal varia de

1016 a 1020, no volume de 24 horas.

2. - Exame Qumico

pH

Embora um individuo sadio produza a primeira urina da manh com pH ligeiramente cido,

entre 5,0 e 6,0, o pH normal das outras amostras do dia pode varias de 4,5 a 8,0. A urina

noturna tem pH mais baixo por causa da acidose respiratria fisiolgica do sono.

O pH urinrio importante na determinao de acidose respiratria ou metablica;

alcalose respiratria ou metablica, anormalidades na secreo e reabsoro de cidos e

bases pelos tbulos renais; precipitao de cristais e formao de clculos;

acompanhamento de tratamento das infeces do trato urinrio e determinao de

amostras insatisfatrias.

Protenas

A determinao de protenas a mais indicativa de doena renal, pois a presena de

proteinria pode ser indicativo de doenas renais incipientes. A urina em estado normal

possui pequenas quantidades de protena, em mdia menos de 10 mg/dL ou 150 mg por

24 horas, e a principal protena encontrada a albumina, sendo observada atravs de fitas

reativas. O resultado qualitativo normalmente representado por negativo, trao e positivo.

O resultado positivo acompanhado pelo nmero de cruzes, dado pelo grau de

intensidade da reao.

Glicose

Anlise bioqumica mais utilizada na deteco e controle da diabetes mellitus Alm disso, a

anlise utilizada para determinar deficincia da reabsoro tubular, leses no sistema

nervoso central, distrbios da tireide, latncia de diabetes durante a gravidez. Em adultos,

a excreo de glicose na urina de em mdia 130 mg durante 24 horas, sendo observada

atravs de tira reativa contendo glicose oxidase.

Bilirrubina

A bilirrubina um composto amarelo muito pigmentado, sendo produto da degradao da

hemoglobina. Sua presena na urina pode ser a primeira indicao de hepatopatias,

sendo, muitas vezes,detectada bem antes do desenvolvimento da ictercia porque o limiar

renal de eliminao de bilirrubina menor que 2 mg/dL, enquanto que os indivduos com

ictercia apresentam concentrao de bilirrubina direta no sangue maior que 2,5 mg/dL.

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Urobilinognio

Tal como a bilirrubina, o urobilinognio um pigmento biliar resultante da degradao da

hemoglobina e derivado da bilirrubina pela ao da flora bacteriana intestina.

Normalmente, o adulto excreta menos de 4 mg por dia, visto que uma parte do

urobilinognio reabsorvido, retornando ao fgado. Valores aumentados podem indicar

cirrose heptica, ictercias parenquimatosas e constipao crnica.

Sangue

O sangue pode ser encontrado na urina em forma de hemcias ntegras (hematria), ou

presente como hemoglobina. Em condies normais, a hemoglobina destruda e

metabolizada no retculo endotelial e quando no ocorre uma metabolizao normal ocorre

a ultrapassagem do limiar renal para hemoglobina (100 a 300 mg/dL), no sendo

reabsorvida e sofrendo eliminao renal.

A hematria pode ocorrer em casos de clculos renais, glomerulonefrite, pielonefrite,

tumores, trauma e exposio a produtos ou drogas txicas.

Cetonas

Geralmente, quantidades mensurveis de cetonas no so vistas na urina, pois toda a

gordura metabolizada completamente degradada em dixido de carbono e gua. Quando

o uso de carboidratos fica comprometido e o estoque de gordura precisa ser metabolizado

para o suprimento de energia, pode-se detectar cetonas na urina.

Nitrito

A determinao de nitrito na urina til para diagnostico das infeces da bexiga, pois

muitas vezes os casos so assintomticos ou os sintomas so inespecficos. Quando h

presena de nitritos, ocasionalmente constatado a presena de bactrias, pois essas so

responsveis pela transformao do nitrato em nitrito.

3. - Exame Microscpico

Leuccitos

Os leuccitos so os glbulos brancos que permanecem com suas caractersticas

morfolgicas intactas. Quando h presena de leuccitos na urina isso pode ser o principal

indicativo de inflamao nas vias urinrias.

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Hemcias

A presena de hemcias na urina pode ser um indicador de infeces e traumas.

Clulas epiteliais

So encontradas em urinas normais, em nmero varivel, principalmente em urina de

mulher e mais intensamente durante a gestao.

Cilindros

Os cilindros so clulas agrupadas e possuem suas caractersticas especificas

dependendo da sua formao. Os tipos de cilindros so:

- Cilindros hialinos no indicam doena, mas pode ser um sinal de desidratao.

- Cilindros bacterianos

- Cilindros hemticos sangue.

- Cilindros leucocitrios indicam inflamao dos rins.

- Cilindros de clulas epiteliais indicam leso dos tbulos.

- Cilindros granulares

- Cilindros creos inflamao sria dos rins

- Cilindros adiposos indicam proteinria.

- Cilindros largos

Cristais

A presena de cristais na urina pode depender do pH, e em urinas cisas, so encontrados

os uratos amorfos, oxalatos de clcio e cido rico. Em urinas alcalinas, encontramos

fosfatos amorfos, fosfato triplo ou amonaco-magnesiano, carbonato de clcio e fosfato de

clcio. Os cristais de maior importncia so:

- Cristais epiteliais so as prprias clulas do trato urinrio que descamam.

- Cristais de cido rico

- Cristais de cestinha

- Cristais de bilirrubina

- Cristais de colesterol

- Cristais de magnsio amnio-fosfato.

Resultado

21

Os resultados esperados sero avaliados de acordo com o valor de referncia, bem como

a anlise da urina por meio fsico, qumico e microscpico para que seja estipulado o estado em

relao aos componentes da urina, levando em considerao as substncias consideradas

normais, e com alterao.

Concluso

O exame de urina , sem duvida, um meio preciso para avaliao da funo renal,

disfunes metablicas, bioqumicas e microbiologias, alm de possibilitar a avaliao de outras

patologias. Para isso, de extrema importncia o uso de tcnicas sensveis e especificas para o

bom desenvolvimento da anlise. Com este estgio aprendemos a importncia de orientar o

paciente a realizar a coleta de forma correta, alm de tomar as medidas preventivas para

assegurar a integridade da amostra, fornecendo segurana e confiabilidade de resultados.

Parasitologia

O exame parasitolgico das fezes utilizado para diagnosticar os parasitos intestinais, por

meio da pesquisa das diferentes formas parasitrias que so eliminadas nas excrees fecais,

alm do estudo das funes digestivas, dosagem da gordura fecal, pesquisa de sangue oculto,

entre outras. A coleta deve ser realizada em quantidade aproximada de 30g em recipiente limpo e

seco, de preferncia de boca larga, ou ainda, na proporo de uma parte de fezes para trs do

conservador, quando este j est acondicionado no recipiente para a conservao do material,

evitando a contaminao por urina. Em crianas, no utilizar as fezes da fralda quando estiverem

diarricas ou lquidas, solicitar coletores infantis disponveis. No caso de fezes consistentes,

encaminhar condicionalmente para o responsvel do setor verificar se para a analise, a

quantidade suficiente. Encaminhar ao laboratrio em at 3 horas se em temperatura ambiente

ou em at 6 horas se refrigerada.

O exame coproparasitolgico consiste na anlise das fezes para que seja observada a

presena de protozorios ou helmintos. Os protozorios so os cistos unicelulares, enquanto os

helmintos so os ovos e as larvas. Os mais importantes no mbito laboratorial so:

- Protozorios

Giardia lamblia

A Giardia lamblia um parasita monoxnico, de ciclo biolgico direto. A facilidade de

manter esse ciclo in vitrocontribui para o desenvolvimento de vrias pesquisas. As formas

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infectantes para homens e animais so os cistos, sendo estes, portanto, os responsveis

pela disseminao da doena. A transmisso ocorre por via fecal-oral: de forma indireta,

por meio da ingesto de gua e alimentos contaminados, ou de forma direta, de pessoa a

pessoa por meio de mos contaminadas ou entre homossexuais masculinos. A

transmisso direta tambm pode ocorrer a partir do contato direto com animais infectados.

A ingesto de 10 a 25 cistos suficiente para iniciar a infeco num hospedeiro humano.

Ao ser ingerido, o cisto alcana o estmago, onde o meio cido inicia o processo de

desencistamento. Esse processo completa-se no intestino delgado, principalmente

duodeno e jejuno, onde ocorre o rompimento dos cistos e a liberao dos trofozotos. Cada

cisto maduro com quatro ncleos libera dois trofozotos binucleados. Por reproduo

assexuada, num processo de diviso binria longitudinal, os trofozotos multiplicam-se e

colonizam o intestino. Eles se mantm aderidos mucosa intestinal por meio do disco

suctorial. O ciclo se completa pelo encistamento, processo no qual o trofozoto se retrai,

condensa e secreta uma membrana resistente, composta inclusive de quitina. J no

interior dos cistos formados ocorre nucleotomia, o que origina cistos maduros

tetranucleados que sero eliminados para o meio exterior. O processo de encistamento

ocorre na poro final do leo e principalmente no ceco do hospedeiro, mas ainda no est

totalmente esclarecido. Supe-se a influncia de fatores dentro ou fora do parasita, dentre

os quais se destacam o PH intestinal, e estmulo de sais biliares e o destacamento do

trofozoto da mucosa, sendo este ltimo o fator de maior destaque, supostamente

provocado pela resposta imune local. Os cistos so excretados junto com as fezes do

hospedeiro, mas no so eliminados de forma contnua. Eles so definidos como a forma

infectante, mas no se sabe ainda se necessitam de um perodo de maturao, ou se j

so infectantes logo aps serem excretados. Se mantidos em condies favorveis de

temperatura e umidade, os cistos podem se manter viveis por at dois meses no meio

ambiente. O elevado nmero de cistos eliminados pelas pessoas parasitadas, a alta

resistncia do cisto aos fatores ambientais e tambm a transmisso direta por contato com

animais contaminados torna ainda mais preocupante a disseminao desta doena.

A forma sintomtica aguda da infeco por girdia dura poucos dias e apresenta diarria

(89%) aquosa e explosiva de odor ftido, indisposio (84%), gases (74%), distenso,

dores abdominais (70%), nusea (68%), anorexia (64%) e perda de peso (64%). A

presena de muco e sangue nas fezes raramente ocorre. J a forma sintomtica crnica

da giardase pode persistir por vrios anos com a presena de episdios diarricos

contnuos, intermitentes ou espordicos. Alm disso, pode apresentar esteatorria

(aumento de gordura nas fezes), perda de peso mais significativa e m absoro intestinal.

23

As principais complicaes da giardase crnica esto relacionadas m absoro de

gorduras e nutrientes como, por exemplo, algumas vitaminas e o ferro.

Entamoeba histolytica

A amebase uma infeco sintomtica ou assintomtica causada pela Entamoeba

histolytica. A E. histolyticase locomove e obtm alimentos com o auxilio de pseudpodes

do tipo lobpodes, vive na luz do intestino grosso do hospedeiro, mas pode originar a

forma invasiva da doena, ao penetrar a submucosa e alcanar rgos como fgado,

pulmes, crebro, e possui duas formas evolutivas: trofozoito e cisto. O trofozoto

corresponde forma vegetativa que habita a luz do intestino grosso e pode,

ocasionalmente, provocar leses na mucosa intestinal, no fgado, no pulmo, na pele e at

no crebro. O trofozoto uninucleado e mede entre 15 e 60 micrmetros e se locomove

pela emisso de pseudpodes. Seu citoplasma pode ser diferenciado em ectoplasma - o

qual hialino- e endoplasma-onde se encontram os ncleos e os vacolos digestivos. No

apresentam mitocndrias, reticulo endoplasmtico e aparelho de Golgi. O cisto a forma

de resistncia, geralmente esfrico ou oval, variando de 8 a 20 micrmetros de dimetro.

Consiste em um citoplasma que apresenta de um a quatro ncleos, pequenos vacolos e

incluses citoplasmticas envolvidas por uma parede csticas.

O ciclo de vida de Entamoeba histolytica monoxnico e relativamente simples. No ciclo

encontram-se quatro estgios: cisto, metacisto, trofozoto e pr-cisto. O inicio do ciclo

ocorre a partir da ingesto dos cistos maduros junto de gua e alimentos contaminados. O

cisto passa, ento, pelo estmago e pelo intestino delgado, resistindo ao do suco

gstrico e das secrees intestinais. De fato, estas substncias contribuem para a

formao de uma fenda na parede do cisto, a qual permite o incio do processo de

desencistamento que ocorre principalmente na poro distal do leo e ceco. A partir deste

processo liberada uma forma tetranucleada (metacisto) que por diviso binria da origem

a oito trofozotos uninucleados. Esses trofozotos multiplicam-se por diviso binria e

colonizam o intestino grosso, principalmente na regio do ceco. Em geral, os trofozotos

vivem como um comensal, aderidos na mucosa intestinal alimentando-se de bactrias e

detritos. Dando continuidade ao ciclo, muitos desses trofozotos diminuem de tamanho e

se arredondam formando o pr-cisto, etapa que marca o incio do processo de

encistamento. O pr-cisto secreta ao seu redor uma membrana glicoprotica, denominada

parede cstica, formando assim um cisto uninucleado. Esses cistos tornam-se

tetranucleados e podem ser excretados juntamente com as fezes do hospedeiro,

possibilitando a infeco de outro ser humano.

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Moscas, baratas e outros artrpodes atuam como vetores mecnicos e contribuem para a

distribuio dos cistos de E. histolytica, principalmente em reas onde predominam

populaes de nvel scio-econmico mais baixo, bem como precrias condies de

saneamento bsico.

A amebase intestinal apresenta duas formas clnicas principais: colite no-disentrica e

colite disentrica (disenteria amebiana). A colite no-disentrica a forma clnica mais

comum entre os indivduos sintomticos infectados por Entamoeba histolytica. Essa forma

clnica caracterizada por evacuaes diarricas ou no, com duas a quatro dejees

dirias. O indivduo pode eliminar fezes pastosas ou moles e, eventualmente, com sangue

ou muco. Ao longo da infeco pode ocorrer alternao entre funcionamento intestinal

normal e quadros de diarria. Esto presentes na maioria dos casos, ainda, sintomas

intestinais como flatulncia, desconforto abdominal e clicas. Pode ocorrer, mais

raramente, febre. A colite disentrica uma forma clnica menos comum, tendo sido

observada em cerca de 10% dos indivduos com amebase intestinal. Essa forma clnica

apresenta evoluo aguda e caracterizada pela presena de dores abdominais, clicas

intestinais intensas, diarria lquida com evacuaes mucossanguinolentas e febre

moderada.

Cryptosporidium sp

O protozorio do gnero Cryptosporidium apresenta alta capacidade de veiculao hdrica

e, por isso, causa grande preocupao s empresas de saneamento e indstria da gua.

Apesar de tambm ocorrer em pacientes imunocompetentes, a criptosporidiose humana

considerada uma infeco oportunista devido sua alta prevalncia em indivduos

imunodeprimidos, como os portadores de HIV/AIDS. Nesses pacientes, a diarreia

provocada pela doena grave e recorrente.

Os esporozotos e merozotos pertencentes ao gnero Cryptosporidium possuem um

complexo apical (visvel apenas em microscpio eletrnico) constitudo por estruturas

como roptrias, micronemas, grnulos eltron-densos, microtbulos sub-peculiarese anis

apicais. Por isso, so classificados no filo Apicomplexa. Os oocistos possuem um formato

que varia de esfrico a ovoide, medindo de 3 a 8,5 m de dimetro de acordo com a

espcie. Em sua maioria, apresentam uma parede cstica dupla e espessa, mas 20% deles

tm parede fina que se rompe ainda dentro do hospedeiro. Internamente a eles, h quatro

esporozotos que so libertados ou nas fezes, ou no tubo digestivo do hospedeiro aps

a dissoluo da sutura presente em sua parede. O esquizonte aparece no intestino j sem

complexo apical. esfrico, apresenta ncleo volumoso, nuclolo evidente e mede de 4 a

6 m de dimetro.

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A transmisso ocorre principalmente pela ingesto de oocistos, que so as formas

evolutivas infectantes, esporulados (via fecal-oral). As principais fontes so animais ou

humanos que estejam eliminando oocistos. Os oocistos podem ser veiculados pelos

alimentos, pela gua, pelo ar, por insetos, no vesturio e tambm pelo contato ntimo entre

pessoas. Criao de gados e ovelhas tem sido relacionada infeco humana. Foi

observado que durante um surto de febre aftosa em 2001 no Reino Unido, em que um

grande nmero de bovinos foram sacrificados, o nmero de casos de criptosporidiose

reduziu de forma significativa. A autoinfeco pode ocorrer se os oocistos libertarem seus

quatro esporozotos no intestino delgado do hospedeiro.

O ciclo composto de (1) merogonia ou esquizogonia (reproduo assexuada), (2)

gametognese (reproduo sexuada com produo de gametas), (3) formao do zigoto

(fertilizao) e (4) esporogonia (formao do oocisto e liberao de esporozotos).

A infeco humana faz-se por via fecal-oral, quando os oocistos so ingeridos. No

estmago h a dissoluo de sua membrana e a liberao de quatro esporozotos. O

protozorio capaz de encistar tambm fora do trato gastrointestinal, como no trato

respiratrio, na conjuntiva do olho e no sistema reprodutor.

Os esporozotos possuem um complexo apical (roptrias, micronemas, anel polar, etc.) que

importante para sua aderncia s clulas epiteliais do intestino.

O Cryptosporidium se aloja nas clulas epiteliais atravs de um vacolo parasitforo

extracitoplasmtico. Este vacolo formado por uma expanso da membrana celular e

dos microvilos, que acabam por envolver completamente o parasito, assim o parasito fica

coberto por um complexo de vrias membranas de ambos os organismos.

Aps o estabelecimento dos esporozotos nas clulas epiteliais, ocorre a diferenciao em

trofozotos unicelulares. Ocorre ento a merogonia ou esquizogonia, que um processo de

muitas divises nucleares que produziro merozotos. Este processo forma 8 (oito)

merozotos alongados (tipo I) que so liberados no intestino e infectam outras clulas. Esta

segunda gerao capaz de formar quatro merozotos cada (tipo II). Os merozotos tipo II

so capazes de repetir o ciclo assexuado ou produzir gametcitos (gametogonia). A

gametogonia produz um macrogametcito e cerca de 16 microgametcitos. A unio destes

formar o zigoto que progredir para oocisto.

Normalmente estes oocistos possuem parede espessa e contm quatro esporozotos.

Estes oocistos so liberados no meio ambiente atravs das fezes, onde podem sobreviver

por meses. Porm alguns oocistos possuem parede delgada, que se rompe facilmente e

acabam por liberar os esporozotos dentro do hospedeiro, este processo chamado de

autoinfeco.

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Os principais sinais e sintomas da criptosporidiose so: diarria aquosa, fezes mucosas,

desidratao, perda de peso, anorexia, dor abdominal, febre, nuseas e vmitos. No

incomum acontecer tambm dores nas articulaes, mialgias, vertigens e at a sndrome

de Reiter (conhecida como artrite reativa) em crianas.

- Helmintos

Ascaris lumbricoides

Ascaridase, ascaridiose ou ascarase, popularmente conhecida como lombriga, uma

doena infecto-parasitria causada pelo Ascaris lumbricoides, nematide que parasita

principalmente o trato gastrointestinal humano, causando diversos sintomas de acordo

com o percurso desenvolvido pelas larvas durante sua migrao no organismo do

hospedeiro, at alcanar sua maturidade reprodutiva e chegar ao seu habitat natural. Sua

frequncia na populao varia em funo das condies climticas, ambientais, e do grau

de desenvolvimento socioeconmico, tendo alta prevalncia em pases em

desenvolvimento e, consequentemente, grande impacto na sade pblica e no meio social

e sanitrio desses pases. Trata-se de uma das principais helmintases, causadora na

maioria dos casos de uma infeco leve e benigna, mas que pode ocasionar, entretanto,

graves complicaes para o hospedeiro, como interferncia no seu estado nutricional,

desenvolvimento fsico e mental, sobretudo na populao infantil.

Os ovos eliminados pelas fmeas de Ascaris lumbricoides podem ser frteis ou infrteis.

Caso a fmea tenha sido fecundada pelo macho, os espermatozides acumulam-se nos

teros ou ovidutos e fertilizam os ovos. Os ovos frteis medem 60x45 micrmetros e tm

forma esfrica ou oval, contendo a clula germinativa no segmentada, alm de

apresentar alta resistncia quando liberados no meio ambiente. So sensveis a

temperaturas elevadas, ambiente seco e anaerobiose: sobrevivem por at dois anos em

temperaturas de 5 a 10C, mas podem morrer em poucos minutos em temperaturas acima

de 50C. Podem tambm sobreviver por at trs meses na ausncia de oxignio e por at

seis anos em solos midos e sombreados. Se no fecundadas as fmeas eliminam ovos

infrteis, os quais no podem evoluir posteriormente. Esses so mais alongados, com 80 a

90 micrmetros de comprimento, citoplasma granuloso e casca mais delgada. Ovos

infrteis aparecem nas fezes de indivduos com infeces unissexuais, ou seja, infectados

somente por fmeas, ou quando apresentam um grande nmero de fmeas jovens e no

fecundadas.

Os ovos de Ascaris lumbricoides so eliminados juntamente com as fezes do indivduo

infectado. Ao atingir um ambiente com temperatura entre 15 a 35C e umidade mnima de

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70%, em duas a oito semanas os ovos frteis originam larvas que sofrem mudas dentro da

casca. Esse perodo de embrionamento dos ovos ocorre no meio exterior e requer a

presena de oxignio. Forma-se inicialmente uma primeira larva, L1, dentro do ovo. Essa

apresenta um esfago com duas dilataes, sendo do tipo rabditide. Uma semana aps,

a larva L1 sofre muda, transformando-se em L2 e em seguida outra muda, transformando-

se em L3, a qual apresenta um esfago retilneo ou filariide. Essa larva L3, ou de terceiro

estgio, a forma infectante e pode permanecer vivel por vrios meses. Os ovos

contendo a forma infectante, ao serem ingeridos, tm sua casca amolecida no estmago e

sofrem ao dos sulcos digestivos no duodeno, onde liberam suas larvas. Essa ecloso

deve-se a fatores como temperatura, pH, presena de agentes redutores e concentrao

de CO2 no intestino do prprio hospedeiro. Ao serem liberadas, as larvas atravessam a

parede intestina, ao nvel do ceco, e por meio dos vasos linfticos ou veias do sistema

porta, alcanam o fgado em cerca de quatro a cinco dias. A partir da, atingem o corao

direito e os pulmes, nos quais realizam o ciclo pulmonar, cerca de quatro a cinco dias

aps a ingesto dos ovos. Nos pulmes, aps cerca de oito ou nove dias, as larvas L3

continuam sua evoluo e sofrem uma terceira muda, originando larvas L4, as quais

atravessam as paredes dos capilares alveolares e atingem os alvolos. J nos alvolos,

ocorre uma quarta muda, originado L5. Aps duas semanas, as larvas sobem pelos

bronquolos, brnquios, traquia e laringe, quando so expelidas ou deglutidas com as

secrees brnquicas at atingir o estmago e o intestino. A ltima muda ocorre no

intestino, jejuno geralmente, e origina larvas nas formas juvenis, as quais crescem e se

desenvolvem sexualmente em aproximadamente dois meses.

O Ascaris lumbricoides, na sua forma adulta, alimenta-se de produtos semi-digeridos no

intestino do hospedeiro, j que apresentam as enzimas necessrias para digesto de

protenas, carboidratos e lipdeos. Os scaris adultos so aerbios facultativos, porm,

normalmente no meio em que se encontram, seu metabolismo quase inteiramente

anaerbio. Eles realizam movimentos constantes para se manterem aderidos luz do

intestino, e tm uma longevidade mdia de dois anos. O ciclo biolgico do Ascaris

lumbricoides do tipo monoxnico, ou seja, possui um nico hospedeiro. A nica forma

infectante desse parasita o ovo embrionado contendo larvas de terceiro estgio, e a via

de penetrao no ciclo a oral.

A fase de invaso larvria geralmente assintomtica, mas quando h elevadas cargas

larvrias pode causar hepatomegalia e mais raramente ictercia. Durante a passagem das

larvas pelos pulmes ocorre a eosinofilia pulmonar aguda (Sndrome de Loeffler),

caracterizada por um quadro respiratrio de intensidade varivel no qual h presena de

tosse, dispnia, sibilos e dor retroesternal. Vermes adultos de Ascaris lumbricoides em

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grande nmero podem ocluir o intestino a partir da compactao e formao de um "bolo

de scaris". Podem, ainda, causar volvos (retoro do intestino) e intussuscepo

intestinal (invaginao de uma poro do intestino para dentro de outra).

Taenia solium e Taenia saginata

Tenases so infeces causadas pelos vermes adultos de platelmintos cestoides do

gnero Taenia. Os parasitas desse gnero so heteroxnicos, por possurem um

hospedeiro intermedirio e um definitivo. A Taenia saginata e a Taenia solium podem

habitar o intestino delgado do homem, tornando este o seu nico hospedeiro definitivo. A

Taenia solium, na sua forma larvar ou cisticerco, encontrada em rgos ou tecidos de

sunos, seus hospedeiros intermedirios. J a Taenia saginata tem como hospedeiros

intermedirios os bovinos. Os quadros mais observados no caso de infeces sintomticas

incluem manifestaes generalizadas do aparelho digestrio, podendo originar deficincias

nutricionais. Quando o homem ingere larvas de T. solium ocorre o desenvolvimento de

outra doena, denominada cisticercose humana.

A transmisso da tenase ocorre por meio da ingesto de carne crua ou malcozida, de

origem suna ou bovina, contaminada com os cisticercos de cada espcie de tnia.

Aps serem liberadas por um indivduo infectado para o meio exterior, as proglotes

grvidas cheias de ovos, se rompem por contrao da sua musculatura, ou decomposio

de sua estrutura pela dessecao, e liberam milhares de ovos no solo. Se mantidos em

condies adequadas de umidade e protegidos da luz solar, esses ovos podem se manter

infectantes por vrios meses.

O hospedeiro intermedirio, no caso da T. solium o porco, e no caso da T. saginata o

boi, ingere os ovos, os quais atingem o estmago, sofrem a ao da pepsina e passam a

ter sua casca amolecida pela ao conjunta da bile, do colesterol e da tripsina ao

chegarem ao intestino. O embrio hexacanto ento liberado, penetra na mucosa

intestinal com auxlio dos acleos, permanecendo a por aproximadamente quatro dias.

Aps esse perodo, penetram nas vnulas, atingindo as veias e os vasos linfticos do

mesentrio. Atingem a circulao e so transportados a muitos rgos e tecidos, at o

local de implantao, podendo se alojar em vrios locais, principalmente no crebro e nos

msculos de maior movimentao, como masseter, lngua e corao. O embrio pode

crescer at cerca de um cm e manter alguma quantidade de lquido em seu interior,

originando uma estrutura denominada cisticerco, no prazo de 10 ou 12 semanas. No caso

da T. solium, o cisticerco denominado Cysticercus cellulosae e no caso da T. saginata,

Cysticercus bovis, que pode sobreviver por at dois anos.

29

Ao ingerir carne crua ou malcozida de porco ou boi contaminada, o homem adquire a

infeco. O cisticerco ingerido sofre ao do suco gstrico e atinge o duodeno. Na mucosa

do intestino delgado, aps evaginao, o cisticerco fixa-se por meio do esclex e a partir

da transforma-se numa tnia adulta, que pode atingir vrios metros de comprimento.

Aps trs meses do incio da infeco, as proglotes grvidas comeam a ser eliminadas.

As proglotes grvidas de T. solium so desprovidas de movimentos prprios, em virtude da

musculatura menos desenvolvida, sendo eliminadas passivamente com as fezes do

hospedeiro. A T. saginata apresenta uma capacidade locomotora maior, sendo possvel a

eliminao ativa de suas proglotes pelo nus e raramente pela boca do hospedeiro. Vrias

proglotes grvidas se desprendem do estrbilo diariamente. T. solium libera em uma nica

vez de trs a seis proglotes, enquanto a T. saginata libera de oito a nove.

Ao ingerir os ovos ou anis de T. solium, o homem assume o papel de hospedeiro

intermedirio e desenvolve a cisticercose. Nesse caso, o embrio penetra a mucosa

duodenal, atinge a circulao passa a localizar-se em rgos como crebro, olhos e tecido

celular subcutneo.

A tenase geralmente assintomtica. Como no h invaso das mucosas, a maioria das

manifestaes clnicas ocorrem devido a presena do verme no intestino associada

competio por nutrientes entre o parasito e o hospedeiro. Alm disso, a absoro dos

excretos do verme podem causar alguns sintomas como cefalia e irritabilidade. Sendo

assim, o sintoma mais comum a dor abdominal inespecfica, mas pode ocorrer tambm

nuseas, adinamia, perda de peso, alteraes no apetite, obstipao intestinal ou diarria

e prurido anal. Na tenase por T. saginata pode ocorrer sintomas abdominais agudos

devido a migrao das proglotes seguida por obstruo do apndice ou vias biliares e

pancreticas.

Schistosoma mansoni

O S. mansoni apresenta vrias fases no seu ciclo evolutivo, alm de dimorfismo sexual, e

cada uma possui suas prprias caractersticas:

Macho mede aproximadamente 1cm de comprimento; tem cor esbranquiada, com

tegumento recoberto de minsculas projees, as tubrculos; em sua poro anterior

apresenta as ventosas oral e ventral (acetbulo); na poro posterior encontrado o canal

ginecforo; apresenta ainda: esfago bifurcado ao nvel do acetbulo, ceco terminando na

extremidade posterior e sete a nove massas testiculares que se abrem no canal

ginecforo.

Fmea mede cerca de 1,5 cm de comprimento; apresenta cor mais escura, devido ao

ceco com sangue semidigerido, e tegumento liso; a poro anterior semelhante do

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macho; a posterior preenchida pelas glndulas vitelognicas e ceco; apresenta ainda:

vulva, tero (com um ou dois ovos) e ovrio.

Ovo mede por volta de 150m de comprimento por 60 de largura, possui formato oval e

um espculo voltado para trs; o ovo maduro usualmente encontrado nas fezes possui um

miracdio formado, visvel por causa da transparncia da casca.

Miracdio

Os mecanismos de transmisso so: autoinfeco externa ou direta (principal responsvel

pela cronicidade da doena), heteroinfeco ou primoinfeco, infeco indireta,

retroinfeco e autoinfeco indireta (o meio mais raro).

O hbitat do verme na fase adulta o intestino grosso e suas mediaes, vivem aderidos

mucosa ou livres na luz intestinal e alimentam-se do contedo intestinal. Eventualmente

so encontrados no apndice cecal.

As fmeas fecundadas produzem cerca de 11.000 (onze mil) ovos, de modo que seu tero

ocupa toda a regio entre o esfago e o incio da cauda. Parece muito bem fundada a ideia

de que os machos morrem aps a primeira cpula e so eliminados nas fezes. As fmeas

fecundadas se libertam do ceco e migram para a regio retal e anal. Elas atravessam o

nus do hospedeiro e depositam seus ovos na pele da regio perianal, onde causam

intenso prurido. Os ovos so liberados com a forma embrionria do helminto. Aps a

oviposio o ciclo de vida do verme chega ao fim e ele em alguns momentos este estar

morto. A durao mdia da vida desses vermes de 40 dias. A forma embrionria

conhecida como sendo o primeiro estgio desse verme. No interior do ovo (em condies

de anaerobiose) ele pode se desenvolver at o segundo estgio, conhecido como

giriniforme. Os terceiros e quarto estgio so encontrados dentro dos ovos na regio

perianal (em condies de aerobiose). O quinto estgio conhecido como larva rabditoide

e a forma infectante para o homem. Na regio perianal a maturao do ovo (at o quinto

estgio) acontece em mdia em quatro horas. Eles so muito sensveis a desseco,

resistindo em mdia 16 horas em regies secas. A protena presente na casca dos ovos

extremamente pegajosa e causa intenso prurido na pele, o que leva ao hospedeiro coar a

regio. Isto vai provocar a disseminao dos ovos para o prprio hospedeiro (autoinfeco)

ou para outras pessoas (heteroinfeco), atravs das mos contaminadas. Os ovos

aderidos na pele e nas roupas tambm se disseminam pelo ambiente, provocando

infeco de outras pessoas, mesmo distncia. Os ovos podem, ainda, ficar aderidos

roupa de cama e serem disseminados pelo ar quando este material for manejado. Ao

serem ingeridas, as larvas sofrem ao do suco gstrico e duodenal e eclodem no intestino

delgado do hospedeiro, onde liberam pequenas larvas, que vo evoluir para vermes

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adultos e migrar lentamente para o intestino grosso. No ceco os vermes reiniciam seu ciclo

biolgico.

O sintoma mais frequentemente encontrado o prurido anal intenso, predominantemente

durante a noite, quando h uma reduo da temperatura corporal (nus e regio perianal).

O prurido causado pela presena do ovo do verme na pele da regio perianal. A coceira

constante acaba por lesionar as estruturas perianais, podendo ser encontrado um nus

avermelhado, congesto e at mesmo recoberto por muco, que chega a ser sanguinolento.

Alguns pontos hemorrgicos podem ser encontrados na regio que sofreu o trauma. As

escoriaes produzidas na pele podem servir como porta de entrada para novas infeces.

Objetivo

O exame parasitolgico das fezes tem como objetivo a anlise das fezes para que seja analisado

parasitos intestinais, por meio da pesquisa das diferentes formas parasitrias.

Mtodos

Mtodo de Sheater ou Faust

Tem como finalidade exame coproparasitolgico qualitativo com princpio centrfugo-flutuao

para pesquisa de cistos e oocistos de protozorios intestinais.

Materiais

- Soluo B de acar

- Copos descartveis ou Becker

- Coador (tamis)

- Palitos de madeira

- Tubo de centrfugae centrfuga

- Lmina e lamnula

- Ala bacteriolgica

- Fezes

- Sulfato de zinco a 33%

- Lugol

Mtodo

Sheater

1. Utilizar 11 ml da soluo B com 1 g de fezes. Homogeneizar aos poucos a soluo

juntamente com as fezes em um copo plstico.

32

2. Coar com tamis para outro copo. Preencher o tubo de centrfuga, e levar para a centrfuga

por 10 minutos a 1600 rpm.

3. Flambar a ala bacteriolgica, esfriando em recipiente com gua.

4. Pegar uma gota da flutuao e pingar em uma lmina, cobrindo com a lamnula.

5. Observar no microscpio em objetiva de 100x.

Faust

1. Pegar 1 g de fezes e homogeneizar em 10 ml de gua em um copo plstico.

2. Coar com tamis para outro copo.

3. Colocar a suspenso no tubo de centrfuga e levar para a centrfuga 3x a 2500 rpm

durante 1 minuto, descartando o sobrenadante entre uma centrifugao e outra.

4. Homogeneizar tudo com 10 ml de sulfato de zinco e centrifugar novamente por 1 minuto a

2500 rpm.

5. Coletar 1 gota do sobrenadante com ala bacteriolgica e colocar na lmina, colocando

uma gota de lugol.

6. Observar no microscpio em objetiva de 100x.

Mtodo de Willis

Tem por finalidade o exame coproparasitolgico qualitativo com princpio de flutuao para

pesquisa de ovos de helmintos.

Materiais

- Soluo hipersaturada de cloreto de sdio

- Copos descartveis

- Coador (tamis)

- Gaze

- Palitos de madeira

- Borel

- Placa de Petri

- Lminas e lamnulas

- Fezes

Mtodo

1. Pegar 3,0 gramas de fezes e homogeneizar em 40 ml de soluo de NaCl em um

copo plstico.

2. Coar com tamis e gaze para outro copo.

33

3. Sobre uma placa de Petri, preencher um borel com a suspenso de fezes coadaat

formar um menisco convexo na borda do borel.

4. Colocar a lmina sobre o menisco, com cuidado para no formar bolhas, deixando

a lmina em repouso de 10 a 15 minutos.

5. Cobrir com lamnula e observar no microscpio em objetiva de 100x.

Mtodo de Hoffman

Tem por finalidade exame coproparasitolgico qualitativo com princpio de sedimentao para

pesquisa de ovos de helmintos.

Materiais

- gua

- Copos descartveis

- Coador (tamis)

- Gaze

- Palitos de madeira

- Clice de sedimentao

- Pipeta Pasteur

- Lminas e lamnulas

- Fezes

Mtodo

1. Pegar de 5 a 10g de fezes e homogeneizar em 250 a 300 ml de gua.

2. Filtrar a suspenso de fezes para um clice de sedimentao e aguardar cerca de

25 minutos.

3. Desprezar 2/3 do sobrenadante.

4. Acrescentar gua at a borda do clice e aguardar cerda de 25 minutos. Repetir o

procedimento at a soluo ficar limpa.

5. Pipetar o sedimento para a lmina, cobrindo com a lamnula.

6. Observar no microscpio em objetiva de 40x.

Concluso

Sendo o exame parasitolgico de fezes um dos mais solicitados na rotina laboratorial, de

extrema importncia o entendimento dos princpios, aplicao e indicao dos diversos mtodos

34

parasitolgicos disponveis para o diagnstico dos parasitos intestinais. Tambm devemos estar

atentos quanto ao perodo de exposio e de analise a ser realizado com a amostra.

Imunologia

Beta-HCG Ltex

Finalidade do teste

Sistema para deteco qualitativa da gonadotrofina corinica humana (hCG) por

aglutinao direta do ltex em amostras de urina, usando partculas de ltex revestidas com

anticorpo monoclonal. Somente para diagnostico in vitro.

Significado clnico

A gonadotrofina corinica humana um hormnio glicoproteico produzido pela placenta

durante a gravidez. Homens sadios e mulheres sadias no-gravidas no possuem nveis de HCG

detectveis.

Normalmente, encontra-se presente no soro e urina de mulheres gravidas aps o stimo

dia da concepo. O HCG secretado 6 a 8 dias aps a concepo, aumentado rapidamente ate

um pico de 50.000 a 200.000 um/mL na 6 a 8 semana. A partir de ento, sua concentrao

comea a cair, atingindo aps a 20 semana, um plateau de 5.000 a 20.000 um/mL para o

restante da gravidez.

Alm da gravidez, valores altos de HCG podem ser encontrados em enfermidades

trofoblsticas de origem gestacional e no gestacional. Essas situaes devem ser identificadas

antes de se fazer o diagnostico de uma gravidez.

Procedimento

1. Pipetar 25 L da urina do paciente em umas das reas da placa de reao.

Emoutras duas reas da placa de reao, colocar uma gota do Controle Positivo e

uma gota do Controle Negativo.

2. Adicionar 25 L do Ltex HCG (bem homogeneizado) as reas de reao,

contendo a urina Teste, o Controle Positivo e o Controle Negativo. Usando palitos

distintos, misturar bem a urina com o ltex. Inclinar a placa de reao, lenta e

cuidadosamente, para frente e para tras, com movimentos oscilatrios em planos

35

diferentes, por 2 minutos. Pode-se utilizar um mixer com uma rotao de 100 rpm

por 2 minutos. Aps os 2 minutos realizar a leitura dos resultados sobre uma luz

artificial para verificar presena ou no de aglutinao macroscpica.

Resultados

Positivo

Aglutinao visvel (ntida), indicando presena de hCG na amostra analisada em

concentraes superiores a 200 mUl/mL.

Negativo

Ausncia de aglutinao, indicando presena de hCG na amostra analisada em

concentraes inferiores a 200 mUl/mL (200UI/L).

Chagas - HAI

Finalidade

Eritrcitos de aves estabilizados, sensibilizados com componentes antignicos do

Trypanossoma cruzi altamente purificados, mostram aglutinao quando reagem com anticorpos

contra esses antgenos presentes no soro do paciente.

Importncia clnica

A doena de Chagas ou Tripanossomase Americana uma infeco endmica, de

evoluo essencialmente crnica, causada por um protozorio, o Trypanossoma cruzi, e

transmitida ao homem por um inseto, o triatomneo.

Imunologicamente, 3 estgios podem ser considerados: agudo, latente ou indeterminado e

crnico. Na fase aguda, verificam-se febre, miocardiopatia, linfoadenopatia, hepatoesplenomegalia

e parasitemia. A multiplicao intracelular dos parasitas nos msculos lisos e estriados e clulas

do sistema retculo endotelial acarreta a formao de pseudocistos. Na fase intermediria ou

latente no h sintomas. A doena pode evoluir para a fase crnica com sinais de miocardiopatia,

degenerao das clulas ganglionares do sistema nervoso central e perifrico, hipertrofia e

dilatao de certos rgos, tais como esfago e clon.

Pelos altos ndices de prevalncia e morbidade, ela se tornou um dos maiores problemas

de sade pblica em toda a Amrica Latina.

Como a minoria dos indivduos com sorologia positiva para T. cruzi desenvolve evidncias

clnicas da doena crnica, as informaes prestadas pelo laboratrio clnico tornam-se decisivas

no diagnstico etiolgico.

36

Vrios so os mtodos utilizados para o diagnstico da doena de Chagas: reao de

fixao de complemento, aglutinao, precipitao, imunofluorescncia, hemaglutinao e

imunoenzimtico.

Destes, os mais utilizados so reaes de hemaglutinao indireta (HAI), as reaes de

imunofluorescncia indireta (IFI) e os imunoenzimticos (ELISA).

Materiais

suspenso de hemcias sensibilizadas

soluo diluente

2-mercaptoetanol

soro controle positivo

soro controle negativo

amostra/soro

tubos

pipetas

placa de microtitulao

Mtodo

1. Colocar a placa de microtitulao sobre um pano mido para neutralizar as foras

eletrostticas.

2. Pegar 10ml da soluo diluente e acrescentar 70l de 2-mercaptoetanol.

3. Diluir em um tubo de ensaio 10l da amostra com 0,31ml da soluo diluente com

2-mercaptoetanol preparada anteriormente.

4. Pipetar 50l do soro controle positivo, negativo e da diluio da amostra nas

respectivas cavidades da placa, sugere-se A1 controle positivo, A2 controle

negativo e A3 amostra testada.

5. Adicionar 25l da suspenso de hemcias sensibilizadas em cada cavidade.

6. Agitar a placa por vibrao mecnica ou batendo, com os dedos nas bordas da

placa por 3 a 4 minutos. Deixar em repouso por 1 a 2 horas em temperatura

ambiente, em local livre de vibraes. Fazer a leitura

Resultado

Reao negativa: quando as hemcias depositam no fundo da cavidade formando um

boto.

37

Reao positiva: quando as hemcias se depositam no fundo da cavidade como um

tapete, as vezes com bordas irregulares.

Fator Reumatide - Ltex

Finalidade

Sistema para determinao qualitativa e semiquantitativa, em lminas, dos fatores

reumatoides em soro. Somente para uso diagnstico in vitro.

Significado clnico

Soro com teores de fatores reumatoides superior a 8 U.I/mL levam a aglutinao do ltex,

o que evidenciado pela formao de grumos finos ou grosseiros.

A positividade de fator reumatoide em pacientes portadores de artrite reumatoide oscila

entre 70% e 85 %.

Fator reumatoide est presente em numerosas patologias onde o sistema imunolgico

altamente estimulado. Citam-se endocardite bacteriana subaguda, malria, sfilis, tuberculose,

hepatite crnica, hansenase (lepra), leishmaniose, sarcoidose, mononucleose infecciosa, calazar,

linfomas, macroglobulinemia, poliarterite nodosa, lpus eritematosos sistmico, leucemia mieloide

crnica, infeco viral crnica e doenas autoimunes.

A presena de fator reumatoide no estabelece o diagnostico de artrite reumatoide, bem

como a sua ausncia no o afasta.

Materiais

kit reagentes ( FR -Ltex, controle positivo, controle negativo, lmina e hastes para

homogeneizao);

tubos de ensaios

pipetas semiautomticas de 25 uL e 200 uL;

ponteiras descartveis;

cronometro

amostra (soro)

Procedimento

Teste Qualitativo

1) utilizar soro no diludo;

38

2) os reagentes e amostras devem ser ambientados antes da realizao do teste. a

sensibilidade do reagente diminui em temperatura baixas;

3) adicionar ao primeiro crculo da 25 uL de soro, ao segundo do controle positivo e ao

terceiro 25 uL do controle negativo;

4) Homogeneizar o FR Ltex e adicionar 25 Ul do mesmo em cada circulo;

5) Homogeneizar as duas gotas, com uma haste plstica. Utilizar uma haste para cada

teste;

6) Imprimir movimentos circulares lmina durante 2 minutos.

7) Fazer a leitura com a seguinte interpretao.

Resultados

Teste positivo: ntida aglutinao.

Teste negativo: suspenso homognea.

Valores de Referncia: Inferior a 8 U.I /ml

Teste Semiquantitativo

1) Rotular 6 tubos de 1 a 6;

2) Colocar, a partir do tubo 1, 200 uL de soluo fisiolgica (salina);

3) Transferir 200 uL de soro para o tubo 1, homogeneizar, transferir para o tubo 2, e assim

sucessivamente, at o tubo 6.

4) Teremos ento as diluies que se seguem, com as respectivas equivalncias.

TUBO

1 2 3 4 5 6

Diluio Soro

no

diludo

1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64

FR.

U.I/mL

8 16 32 64 128 256 512

Resultado

39

Proceder ao teste como descrito para teste qualitativo. Ser considerada positiva a maior

diluio da amostra que apresentar aglutinao. Expressar o resultado em U.I /mL

HIV

A sigla AIDS significa Sndrome da Imunodeficincia Adquirida, O vrus da AIDS

conhecido como HIV e encontra-se no sangue, no esperma, na secreo vaginal e no leite

materno das pessoas infectadas com o vrus.

Fundamentos do mtodo

Os poos da policubeta esto recobertas com antgenos recombinantes dos vrus HIV-1 e

HIV-2. A amostra incubada nos poos, se ela contm anticorpos contra HIV-1 ou HIV-2 ocorrer

a unio com os antgenos sensibilizados na policubeta. O material no unido deve ser removido

por lavagem. No passo seguinte adicionado o conjugado, que contm os mesmos antgenos do

que a policubeta, conjugados com peroxidase. Se a amostra contm os anticorpos, ser unido o

conjugado. O conjugado no unido removido por lavagem. A seguir adicionada uma soluo

contendo tetrametilbenzidina e perxido de hidrognio. As amostras reativas desenvolvero cor

azul claro que se torna amarela quando a reao parada com cido sulfrico.

Significado clnico

Os vrus da imunodeficincia humana (HIV-1 e HIV-2) so os agentes causadores da

Sndrome da Imunodeficincia Adquirida (SIDA). Estes retrovrus so transmitidos pela exposio

a certos fludos corporais infectados, principalmente secrees genitais e sangue ou produtos

contaminadosderivados do sangue e por passagem atravs da placenta A evidncia sorolgica da

infeco por HIV-1 e HIV-2 pode ser obtida determinando a presena de antgenos e anticorpos

no soro de indivduos nos quais suspeita infeco. Os antgenos podem, geralmente, ser

detectados na fase agudae durante a fase sintomtica da enfermidade. Os anticorpos podem ser

detectados ao longo de toda a infeco, comeando na fase aguda ou imediatamente depois dela.

O ensaio de HIV 1+2 ELISA 3 Generacin foi desenvolvidopara detectar anticorpos contra HIV-1,

HIV-1 grupo O e HIV-2.

Procedimento

Amostra (Soro ou plasma).

40

1- Levar os reagentes e amostras a temperatura ambiente antes de iniciar a prova.

2- Preparar o volume necessrio de Tampo de Lavagem diludo.

3- Colocar no suporte de tiras, a quantidade de poos requeridos para a quantidade de

determinaes a serem realizadas, incluindo 2 poos para o Controle Positivo (CP) e 3 para o

Controle Negativo (NC).

4- Colocar a Amostra (A) e os controles de acordo com o seguinte esquema:

A CP CN

Controle Positivo --- 50L ---

Controle Negativo --- --- 50L

Amostra 50L --- ---

Conjugado 100L 100L 100L

Revelador 100L 100L 100L

Stopper 100L 100L 100L

5- Para evitar a evaporao, cobrir a policubeta com fita adesiva fornecida e incubar

durante 30 2 minutos a 37C 1oC.

6- Depois da incubao, eliminar o lquido de cada poo por completo, lavar 5 vezes

segundo as instrues de lavagem (VIDE PROCEDIMENTO DE LAVAGEM)

7- Acrescentar o Conjugado;

8- Para evitar a evaporao, cobrir a policubeta com fita adesiva. Incubar durante 30 2

minutos a 37oC 1oC.

9- Lavar 5 vezes segundo as instrues de lavagem.

10- Colocar o Revelador transvasando a um recipiente limpo somente o volume

necessrio. No voltar o Revelador remanescente ao frasco original. Evitar o contato do reagente

com agentes oxidantes.

11- Incubar durante 30 2 minutos a temperatura ambiente (18-25oC), protegido da luz.

12- Acrescentar o Stopper;

13- Ler a absorbncia em espectrofotmetro em forma bicromtica a 450/600-650 nm ou a

450 nm.

Nota: recomenda-se realizar sempre a leitura em forma bicromtica. Caso a leitura for

monocromtica, realizar um branco de reagentes que dever ser subtrado das leituras das

amostras

Interpretaes dos resultados

a) Com instrumental ptico

41

A presena ou ausncia de anticorpos anti-HIV-1 ou HIV-2 determinada relacionando a

absorbncia da amostra com o valor do Cut-off.

Cut-off = CN + 0,250 CN: promdio das D.O. do Controle Negativo

Exemplo: 0,018 + 0,250 = 0,268

Amostras No Reativas: so consideradas aquelas com absorbncias menores ao valor

Cut-off.

Amostras Reativas: so consideradas aquelas com absorbncias maiores ou iguais ao

valor Cut-off.

b) Interpretao visual

Se escolhido este tipo de interpretao, deve ser considerada No Reativa toda amostra

que no apresente uma cor maior do que aquela dos Controles Negativos. Pelo contrrio, uma

amostra nitidamente amarela considerada

Reativa. Toda amostra inicialmente reativa, deve ser repetida por duplicado. Se uma ou

ambas repeties fossem positivas, a amostra deve ser considerada reativa. Uma amostra

inicialmente reativa pode ser no reativa nas duas repeties. Isto pode ser devido :

- Contaminao cruzada de um poo no reativo por uma amostra reativa.

- Contaminao da amostra durante a dispensao, impreciso no dispensado da amostra,

Conjugado e/ou Revelador no poo.

- Reutilizao de ponteiras.

- Contaminao do poo com hipoclorito ou outros agentes oxidantes.

Em certos casos, uma amostra no reativa pode apresentar uma reao falsamente

reativa, tanto na anlise inicial como em suas repeties. Algumas causas destes fenmenos

podem ser:

- Contaminao de uma amostra durante sua extrao, processamento ou conservao.

- Presena de substncias interferentes, tais como autoanticorpos, frmacos, etc.

- Dispensao e / ou aspirao ineficiente da soluo de lavagem (sistema obstruido).

Teste VDRL

Introduo

42

A sfilis uma doena infecciosa humana produzida por uma espiroqueta, o Treponema

pallidum. Ela primeiramente uma doena transmitida sexualmente. Outras possveis viam de

transmisso a transfuso de sangue infectado, hoje praticamente eliminada atravs de triagem

sorolgica de rotina, e a perinatal (sfilis congnita) transmitida in tero, pelos treponemas

procedentes da me infectada para o feto em desenvolvimento.

Clinicamente, aps um perodo de incubao que varia de 10 a 90 dias, pois

inversamente relacionado com a quantidade do inoculado, ocorre, em 85% dos pacientes, o

surgimento de um cancro, que uma leso solitria e indolor, caracterizando a sfilis primaria.

Aproximadamente 4 a 10 semanas aps o aparecimento do cancro, surgem

frequentemente sintomas como perda de peso, cefalia, anorexia, mialgia, artralgia, mal-estar,

febre baixa, linfodenopatia generalizada e exantema (presente Treponema pallidum in tero em 75

a 100% dos casos), o que caracteriza a sfilis secundria. Podem ocorrer tambm neste estgio

manifestaes de comprometimento do sistema nervoso central. Aps as manifestaes primrias

ou secundrias, ocorre o perodo conhecido como sfilis latente, caracterizado por testes

sorolgicos positivos e ausncia de achados clnicos. Pode ter durao de 1 a 2 anos. Sem

tratamento, cerca de um tero dos pacientes apresenta sfilis terciria, que pode manifestar-se

como goma (15%), sfilis cardiovascular (10%) ou neurossfilis (8 a 10%).

Os testes sorolgicos para sfilis so classificados como no-treponmicos, usados mais

comumente para a triagem, como o VDRL e o, e treponmicos, usados como testes confirmatrios

para os soros reativos nos testes de triagem, como o, (Veneral Disease Research Laboratory) e

o RPR (Rapid Plasma Reagin) e treponmicos, usados como testes confirmatrios para os soros

reativos nos testes de triagem, como o TPHA (Treponema pallidum Hemagglutination) o FTA-

Abs (FluorescentTreponemalAntibodyAbsorption) e ELISA (Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay).

Objetivo

O VDRL um teste de floculao, no-treponmico, para diagnstico da sfilis, atravs da

pesquisa de anticorpos no soro, plasma ou lquido cefalorraquidiano (LCR), com a grande

vantagem sobre o VDRL clssico por consistir em uma suspenso estabilizada e pronta para uso.

Princpio do Mtodo

Quando a suspenso antignica do VDRL misturada com o soro, plasma ou lquido

cefalorraquidiano (LCR) que contenham anticorpos (reaginas), as partculas de antgeno floculam

e o resultado da reao observado ao microscpio. A ausncia de floculao indica resultado

negativo.

Materiais necessrios

43

Tubos de ensaio para diluio e titulao

Pipetas sorolgicas

Estante para tubos e rack de ponteiras

Recipiente para descarte de material

Placa escavada

Salina a 0,9%

Amostra

Soro ou plasma no inativados e lquido cefalorraquidiano (LCR), livre de hemlise, lipemia

e contaminao. Em caso de necessidade, as amostras podem ser conservadas no mximo por 4

a 6 semanas a -20 C.

Procedimento

Teste qualitativo

Objetivo: para triagem e eliminao das amostras no reagentes.

1. Pipetar 50 l das amostras e soros controles nas cavidades da placa escavada.

2. Pipetar 20 l da suspenso antignica homogeneizada nas mesmas cavidades das

amostras. No necessrio misturar esses dois componentes.

3. Agitar a placa durante 4 minutos a 180rpm.

4. Imediatamente aps os 4 minutos, observar ao microscpio.

OBS: Para evitar o efeito de pr-zona sugerimos que o teste qualitativo seja realizado com

soro, plasma ou lquido cfalo- raquidiano (LCR) puro e diludo.

Resultados das leituras

Reao Negativa: AUSNCIA de agregados. Aspecto homogneo.

Reao Fracamente Positiva: PRESENA de pequenos agregados dispersos.

Reao Positiva: PRESENA de mdios e grandes agregados.

Teste semiquantitativo

1. Fazer diluio da amostra em soluo salina a 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 e mais se

necessrio.

44

2. Pipetar 50 l de cada diluio em cada cavidade da placa escavada.

3. Pipetar 20 l da suspenso antignica homogeneizada em cada diluio. No

necessrio misturar.

4. Agitar a placa durante 4 minutos a 180rpm.

5. Imediatamente aps os 4 minutos, observar ao microscpio.

Ttulo da amostra

Ser o da ltima diluio onde, ainda, se visualiza a presena de agregados.

Interpretao

Podem ocorrer reaes falso-positivas com o VDRL em condies como: imunizaes,

infeces, gravidez, malria, doenas auto-imune (lpus eritematoso sistmico etc.), doenas

malignas etc. Se o VDRL for positivo deve-se realizar um teste confirmatrio, especfico para

treponema.

PCR Ltex

Introduo

A Protena C Reativa (PCR) juntamente com a velocidade de hemossedimentao (VHS) e

as mucoprotenas fazem parte das chamadas reaes de fase aguda, que quando alteradas

caracterizam atividades inflamatrias inespecficas, auxiliando o diagnstico e o controle evolutivo

da inflamao.

A PCR aparece muito precocemente no soro de pacientes afetados por uma variedade de

processos inflamatrios e necrose de tecidos, tais como infeces bacterianas, doena reumtica

aguda, infarto de miocrdio, certas doenas virais, tuberculose pulmonar ativa, artrite reumatoide

e neoplasia maligna.

O aumento da PCR uma resposta inespecfica atividade inflamatria, sendo suas

caractersticas mais marcantes o aparecimento precoce, vem como o seu rpido desaparecimento

( 1 a 2 semanas).

Objetivo

Pesquisar PCR, em amostras de soro, usando-se partculas de ltex revestidas com

anticorpo monoclonal anti-PCR por aglutinao indireta.

Procedimento

45

a) Teste qualitativo

1.Pipetar 25l do soro do paciente em uma rea do carto-teste.

2. Homogeneizar a suspenso de ltex (1) e pipetar 25 l na mesma rea da amostra.

3. Misturar muito bem o soro com o ltex, espalhando-se cuidadosamente com uma vareta

plstica.

4.Atravs de movimentos suaves de rotao, sob uma boa fonte de luz, observar durante 2

minutos a formao de uma eventual aglutinao.

Observao: Para cada srie de testes devem se fazer controles positivo e negativo para

verificar a correta execuo da tcnica e o estado de conservao dos reativos.

Efeito pr-zona pode ocorrer em concentraes superiores a 400 mg/litro. Se houver

suspeita de nveis superiores a este, a amostra dever ser diluda.

Resultados das leituras

Resultado Positivo: Aglutinao ntida. Concentrao igual ou superior a 6 mg/litro.

Resultado Negativo: Total ausncia de aglutinao. Concentrao inferiora6mg/litro.

Observao: A sensibilidade do teste de 6 mg/litro. Portanto, consideram-se soros

negativos os que possuam menos que 6 mg/litro.

b) Teste Semiquantitativo:

1. Diluir o soro do paciente em salina (NaCl a 0,9%) 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 e mais, se

necessrio.

2.Pipetar 25l de cada diluio em cada rea do carto-teste.

3.Homogeneizar a suspenso de ltex (1) e pipetar 25l em cada rea onde se encontra a

diluio daamostra.

4. Misturar muito bem o soro com o ltex, espalhando-se cuidadosamente com uma vareta

plstica (uma para cada diluio).

5.Atravs de movimentos suaves de rotao, sob uma boa fonte de luz, observar durante 2

minutos a formao de aglutinao. O ttulo da amostra corresponder a maior diluio em que

ocorrer aglutinao. A concentrao de PCR ser dada pelo seguinte clculo:

Concentrao (mg/litro)=6 x D,onde6asensibilidade do teste e D, a maior diluio que

apresenta aglutinao.

Exemplo: Se o ttulo obtido for 1:8, a concentrao aproximada de PCR existente na

amostra ser: 6x8= 48 mg/litro.

46

Toxoplasmose

Objetivo

O exame laboratorial baseado na pesquisa da presena do parasito ou presena de

anticorpos especficos. Na toxoplasmose podem ser identificadas duas formas distintas: a

congnita e a adquirida.

Procedimentos

Teste qualitativo:

1. Colocar a placa sobre um pano mido para neutralizar as foras eletrostticas.

2. Usar 1 cavidade da placa por amostra, incluindo sempre os controles positivo e

negativo, prontos para o uso.

3. Pipetar 25L do soro controle positivo, negativo e da diluio 1/32 de cada amostra

nas respectivas cavidades da placa.

4. Adicionar 25L da suspenso homognea de hemcias em cada cavidade.

5. Agitar a placa por vibrao mecnica (agitador da placa) ou batento com os dedos

nas bordas da placa por 3 a 4 minutos.

6. Deixar em repouso por 1 a 2 horas em temperatura ambiente, em local livre de

vibraes.

7. Fazer a leitura.

Interpretao

Soros que do reao negativa so informados como no reagentes, significam

ausncia de infeco atual ou pregressa para toxoplasmose. Nos casos em que ocorre reao

negativa, mas com suspeita clnica de toxoplasmose, deve-se repetir o teste aps alguns dias,

pois pode tratar-se de perodo pr-sorolgico. Todos os soros que apresentam reao positiva

devero ser testados quantitativamente para determinao da fase da doena.

Teste semiquantitativo

1. Partir de uma diluio do soro de 1/32 conforme terceiro item do teste qualitativo.

2. Pipetar 25L da soluo diluente a partir da segunda cavidade da placa at a

diluio que se pretende estudar.

3. Transferir 25L da diluio do soro 1/32 para a primeira e segunda cavidade.

Homogeneizar bem o soro com diluente na segunda cavidade (diluio 1/64) e

47

transferir 25L para a terceira cavidade (diluio 1/128) e assim sucessivamente,

desprezando 25L no final.

4. Pipetar 25L da suspenso homognea de hemcias em todas as cavidades.

5. Agitar a placa por vibrao mecni