Objetivos

Diferencias las caracterisitcas bioqumicas de cada cepa conservada

Diferenciar las especies mas importantes de Stafilococcus en humanos asi como sus

caractristicas bioqumicas,

Reconocer las especies de estreptococos y las enfermedades que generan

Estafilococo

Procedimiento:

Sobre una placa Con Agar ADN se hizo siembra dibujando una estra simple

Luego de incubar por 24 horas cobre las colonias de estafilococo se aadi solucin de 1 N de HCl.

Y se observ lo siguiente, opacidad y halo circundante a la colonia del estafilococo debido a la

precipitacin del ADN polimerizado despus de agrega el HCl.

Estafilococo Agar ADN

Estreptococo beta-hemoltico

MATERIALES

Cepa conservada de Streptococcus B hemoltico

Mechero

Lmina porta

Batera de coloracin Gram

Microscopio ptico

Isopos estriles

Medios de cultivo: Agar sangre y Agar azida

PROCEDIMIENTO

1. Con el isopo estril, tomar muestras de secrecin farngea y sembrarlo en

la placa de agar azida y agar sangre.

2. Efectuar extendidos en lminas porta objetos

3. Colocar la lmina con la materia de coloracin Gram, siguiendo la tcnica.

4. Secar y observar al microscopio ptico.

RESULTADOS

Se observa el halo transparente en las muestras de agar azida y agar

sangre.

Se trata de un estreptococo beta hemoltico y por lo tanto tiene la propiedad

de causar lisis total de los eritrocitos.

El agar azida es un medio de cultivo que favorece el crecimiento de las

bacterias gram positivas, por eso fomenta esta reaccin.

AGAR azida estreptococo

LECTURA A LAS 24 HORAS

Objetivos

Difereniar las caractersticas microscpicas del streptococus penumonia y del

Streptococus sp.

S. Pneumoniae Streptococus sp.

MBRA DE MUESTRAS BIOLGICAS PARA EL AISLAMIENTO DE NEISSERIA

1. PROCEDIMIENTO:

Se sembr la cepa conseguida sobre el agar Thayer Martin

2. RESULTADOS

AGAR THAYER MARTINA)

No se observ crecimiento de Neisseria gonorrhoeae.

TINCION GRAM

Uno de los mejores mtodos para identificar infecciones de areas

genitales de gonococo.

Hombres (secrecin uretral), evidencia diplococos gran negativos

intracelulares en los PMNs , es diagnostico (97-98%).

Mujeres (muestras cervicales), puede mostrar falsos positivos, porque flora

normal tan bien esta presentes diplococos negativos.

Se us una lmina preparada anteriormente en el laboratorio de

Microbiologa de la UNFV, y se observ.

Se observan bacterias en forma de diplococos, gram negativos (Neisseria

Gonorrhoeae) en la todo el campo de observacin de la lmina brindada.

PRUEBA BIOQUMICA (DEGRADACION DE CARBOHIDRATOS) PARA

IDENTIFICAR LAS ESPECIES DE NEISSERIA

- Manera de diferenciar Neisseria Gonorrhoeae (fermenta solo glucosa) y

Neisseria Meningitidis (fermenta glucosa y maltosa)

Caractersticas Crecimiento a 22 C

Fermentacin de azcares

Especies Glucosa Maltosa Sacarosa Lactosa

N. Meningitidis - + + - -

N. Gonorrhoeae - + - - -

N. Lactmica - + / - + - +

Moraxella catarrhalis + - - - -

N. Sicca + + + + -

N. Flavescens + - - - -

ESTUDIO DEL GENERO BRUCELLAE

Objetivos

Reconocer las caractersticas microscpicas de este genero

Reconocer las caractersticas bioqumicas de este genero

PROCEDIMIENTO

El rpocedimiento fue segn la gua de practica de microbiologa medica

Resultados

ESTUDIO DE LOS GENEROS HAEMOPHILUS Y BORDETELLA

GNERO HAEMOPHILUS

1. Procedimiento:

En agar sangre:

- Sembrar por agotamiento y por puntura la muestra de Haemophilus y de

Staphilococcus aureus, para lo cual se necesit la secrecin farngea de dos

alumnos y se dividi la placa en dos.

2. Resultados

Agar chocolate

Agar sangre: Fenmeno de satelitismo

Tincin Gram:

Se obtuvo la siguiente imagen al microscopio con aumento de 100X

3. Interpretacin:

En agar sangre:

La cepa de Haemophilus influenzae creci en la zona hemoltica creada por Staphylococcus

aureus en la placa. La hemlisis de los eritrocitos por S. aureus libera nutrientes para el

crecimiento de H. influenzae (NAD o factor V). El NAD se difunde por el medio y estimula el

crecimiento de Haemophilus en la periferia de Staphylococcus.

H. influenzae no crecer fuera de la zona hemoltica de Staphylococcus aureus. Esto es

conocido como SATELITISMO.

En agar Chocolate:

Crecimiento macroscpico de Haemophilus influenzae se observan colonias, pequeas, blancas

y brillantes sobre agar chocolate, en ambas muestras esto se debe a que este microorganismo

requiere para su crecimiento los factores V (NAD) y X (hemina) de los glbulos rojos, componentes

del medio de cultivo agar chocolate que contiene sangre hemolizada.

Al microscopio:

Las especies de Haemophilus se tien de color rosado.

Aparece como bacilos o cocobacilos pequeos gram (-).

GNERO BORDETELLA

Bordetella pertussis es el agente etiolgico e la tos ferina, enfermedad prevenible con la

vacunacin, que afecta exclusivamente al humano y se localiza en las vas areas superiores.

Pertenece al gnero Bordetella y fue aislada por primera vez en un cultivo puro en 1906 por

Bordet y Bengou

AGAR DE BORDET BENGOU:

La base de agar BordetGengou es una modificacin del medio originalmente descrito por Bordet y

Gengou para el cultivo de Bordetellapertussis

Caractersticas del medio de cultivo:

Las colonias de BORDETELLA PERTUSSIS son prcticamente transparentes, poco definidas,

brillantes y de dimetro inferior a 1 mm con un estrecho halo de hemlisis tipo: beta.

BORDETELLA PARAPERTUSSIS tiene un crecimiento ms rpido. Las colonias son similares y

dan una coloracin verde oscura al medio.

El medio se debe incubar en aire a 35C y en una cmara humidificada durante 7-12 das

LMINA OBSERVADA EN PRACTICA

AISLAMIENTO DE ENTEROPATOGENO COPROCULTIVO

Objetivos Identificar los entero-patgenos ms frecuentes en los coprocultivos

Identificar mediante la diferenciacin bioqumica los diferentes entero.patogenos

Identificacin presuntiva y rpida de bacterias entricas gram negativas por los medios TSI

y LIA

Procedimiento Se us una muestra, proporcionada por el laboratorio de microbiologa, en medio de transporte

CARY Y BLAIR (CB) y se procedi a la siembra.

1ero. se realiza un aislamiento primario a partir de la muestra problema en los siguientes medios

Medio Mac Conkey (MC)

Medio Salmonella Shiguella (SS)

Caldo selenito

2do en base a los resultados obtenidos en el aislamiento primario se siembra en los medios:

Tubos de TSI (3)

Tubos de LIA (3)

Resultados:

1. Procedimiento bsico primario

1 se realiza un aislamiento primario a partir de la muestra problema

Estra por agotamiento

Puntura

Puntura Para mantener un cultivo extra de las

cepas (Enterobacterias)

Medio Mac Conkey colonias Medio Salmonella Shiguella colonias negras y blancas

2do. Siembra en tubos TSI y LIA

Se har la siembra de la siguiente manera

MEDIO / COLONIAS TSI LIA

Agar Salmonella Shiguella colonias negras Tubo A Tubo A Agar Mac conkey Tubo B Tubo B Agar Salmonela Shiguella colonias blancas Tubo C Tubo C

2. identificacin bacteriana .

TUBO A

MEDIO TSI Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): Las colonias fermenta glucosa (+),

lactosa (+) y sacarosa (+)

Ausencia de ennegrecimiento del medio indica que las colonias no producen cido

sulfhdrico: cido sulfrico (-)

No hay presencia de gas. Gas (-)

MEDIO LIA Pico violeta / fondo violeta (superficie alcalina / profundidad alcalina): Descarboxilacin

de la lisina (+)

Ausencia de color rojo vino en el pico: Desanimacin negativa (-)

TUBO B

MEDIO TSI Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): Las colonias fermenta glucosa (+),

lactosa (+) y sacarosa (+)

Presencia de ennegrecimiento del medio indica que las colonias producen cido

sulfhdrico: cido sulfrico (+)

No hay presencia de gas. Gas (-)

MEDIO LIA Pico violeta / fondo violeta (superficie alcalina / profundidad alcalina): Descarboxilacin

de la lisina (+)

Pico violeta

(medio

alcalino):

desanimacin

(-)

Pico amarillo

(medio cido):

sacarosa (+)

y lactosa (+)

Fondo

amarillo

(medio cido):

Glucosa (+)

Ausencia de color rojo vino en el pico: Desanimacin negativa (-)

TUBO C

MEDIO TSI Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): Las colonias fermenta glucosa (+),

lactosa (+) y sacarosa (+)

Ausencia de ennegrecimiento del medio indica que las colonias no producen cido

sulfhdrico: cido sulfrico (-)

presencia de gas. Gas (+)

MEDIO LIA Pico violeta / fondo violeta (superficie alcalina / profundidad alcalina): Descarboxilacin

de la lisina (+)

Pico violeta

(medio

alcalino):

desanimacin

(-)

Cuerpo violeta

(medio alcalino):

Descarboxilacin

(+)

Pico amarillo

(medio cido):

sacarosa (+)

y lactosa (+)

Fondo

amarillo

(medio cido):

Glucosa (+)

cido sulfrico

(+)

ausencia de color rojo vino en el pico: Desanimacin negativa (-)

3.- Tipificacin Bacteriana: Se hizo la lectura segn la tabla de la gua que es un patrn de laboratorio.

PATRON LABORATORIO En TSI:

Citrato de

Simons

Gas H2S Indol Lisina Motilidad Ornitina Sacarosa Ureasa Lactosa Gelatinasa Glucosa

Klebsiella V V - V V - - V V + - +

salmonella V V V - V + V - - - - +

echerichia V + - + + V V V - + - +

Cuerpo violeta

(medio alcalino):

Descarboxilacin

(+)

Pico amarillo

(medio cido):

sacarosa (+)

y lactosa (+)

Fondo

amarillo

(medio cido):

Glucosa (+)

Pico violeta

(medio

alcalino):

desanimacin

(-)

Gas (+)

INDOL (+) INDOL (-)

DESCARBOXILACION Escherichia coli

Edwarsiella

Salmonella typhi

Arizona

Klebsiella serratia

Enterobacter

DESAMINACION Proteus vulgaris

Providencia

Proteus mirabilis

NEGATIVO

Citrobacter

Yersinia

Shigella

Escherichia coli

Yersinia

Serratia

Shigella

Enterobacter

RESULTADOS DE TUBO EN LABORATORIO

Citrato de

Simons

Gas H2S Indol Lisina Motilidad Ornitina Sacarosa Ureasa Lactosa Gelatinasa Glucosa

Tubo A

- - - + + - +

Tubo B

- + + + - +

Tubo C

+ - + + + - +

En LIA:

TUBO A TUBO B TUBO C

DESCARBOXILACION Positivo

positivo positivo

DESAMINACION Negativo

negativo negativo

4.- Conclusiones (Diagnostico en laboratorio) Finalmente con todas estas caractersticas arrojadas, se logr tipificar a la bacteria:

Tubo A: Klebsiella, una enterobacter gram (-), anaerobia facultativa

Tubo B: Salmonella, una enterobacter gram (-), anaerbico facultativo

Tubo C: Escherichia, una enterobacter gram (-), anaerbica facultativa

ESTUDIO DE BACILOS AEROBICOS ESPORULADOS: BACILLUS

Objetivos

Diferenciar las 2 especies de este gnero: Bacillus anthracis y Bacillus

subtilis.

Reconocer las diferencias bioqumicas del Bacillus subtilis con

respecto a la accin sobre el almidn, presencia de hemolisis, accin

sobre las protenas (gelatina) y movilidad.

Observar las caractersticas estructurales frente al microscopio.

Bacillus subtilis Agar almidn: hidrolisis (+)

ESTUDIO DE BACILOS AEROBICOS NO ESPORULADOS: CORYNEBACTERIUM

Objetivos

Observar la formacion de colonias negras por la reduccin del componente telurito del

agar.

Observar la caractersticas gentica y morfolgica: grnulos metacromaticos

Corynebacterium diphterieae Agar ATK

BACILOS ANAEROBICOS ESPORULADOS: GENERO CLOSTRIDIUM

OBJETIVOS

Determinar la condicin de un medio anaerbico

Verificar el crecimiento lento de este genero

La capacidad de crecer en un medio reductor como el caldo de

carne(bifsico)

Clostridium sp. Caldo de carne

FAMILIA PSEUDOMONADACEAE

OBJETIVOS

Reconocer el medio selectivo para las Pseudomonas

Reconocerlos frente al microscopio

PROCEDIMIENTO

Se inoculo el agar cetrimida (medio selectivo) para la inoculacin por medio de estra por

agotamiento.

Resultados

Se obtuvo colonias transparentes, redondas, lisas de bordes irregulares; Estas colonias producen

un pigmento verde (pioverdina)

FAMILIA SPIROCHAETACAE y LEPTOSPIRACEAE

OBJETIVOS

Identificar las caractersticas microscpicas de la Borrelia y Leptospiras

Diferenciar las caractersticas propias de cada genero

PROCEDIMIENTO

Se obtuvo sarro dentario de un alumno voluntario, esta muestra se fij mediante un extendido en

una lmina porta objetos.

Al extendido se le aplico la tincin gram y se llev al microscopio.

Resultados

leptospira Borrelia

GENERO MICOBACTERIUM

OBJETIVOS

Determinar el medio selectivo para el crecimiento de BK: Lowenstein Jensen

Observar y reconocer microscpicamente la especie tuberculosis

Reconocer los diferentes exmenes para la deteccin del Micobacterium tuberculosis

OBSERVACIN DE LMINAS COLOREADAS CON RICKETTSIAS. COLORACIN

DE MACHIAVELLO

OBJETIVOS

Reconocer microscpicamente la bacteria

Identificar la epidemiologia de las rickettsiosis

OBSERVACION DE CULTIVO Y LMINAS COLOREADAS CON BARTONELLA

OBJETIVOS

Reconocer el gnero Bartonella en el microscopio

Reconocer e identificar la morfologa bacilar y cocoide frente a los

hemates.