UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
UNIDAD DE POSGRADO
“CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE Averrhoa
carambola L. (CARAMBOLA) FRENTE A
SISTEMAS GENERADORES DE RADICALES
LIBRES”
TESIS
Para optar el Grado Académico de Magister en Nutrición con mención en
Aspectos Biológicos de la Nutrición
AUTOR
Gisela Oliveira Bardales
Lima – Perú
2014
i
Esta Tesis se ejecutó en el “Laboratorio de Bioquímica Clínica y
Nutricional” del Centro de Investigación de Bioquímica y Nutrición de la
Facultad de Medicina de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos
con el Financiamiento del Segundo Concurso de Proyectos de
Investigación de la Facultad de Medicina - UNMSM.
ii
Jurado Informante
Dr. Emilio Teodoro Guija Poma Presidente
Dra. María Mercedes Soberón Lozano Miembro
Dra. Luzmila Victoria Troncoso Corzo Asesora
Jurado Examinador
Dr. Emilio Teodoro Guija Poma Presidente
Dra. María Mercedes Soberón Lozano Miembro
Dra. Luzmila Victoria Troncoso Corzo Asesora
Dr. Jorge Arroyo Acevedo Miembro
Dr. Sergio Gerardo Ronceros Medrano Miembro
iii
La vida no siempre es como nos gustaría, pero hay que darle gracias a Dios por los momentos buenos y malos, ya que de ellos se aprende más de lo que esperamos.
iv
DEDICATORIAS
A mi madre, por su inmenso amor. y su constante apoyo para seguir esforzándome en mis logros personales y profesionales. A mi padre (†), que desde el cielo se alegra con mis logros.
A mis hermanos, especialmente a Jéssica por su apoyo. Entusiasmo y preocupación para lograr mi objetivo
v
AGRADECIMIENTOS
A la Doctora Luzmila Victoria Troncoso Corzo, por su constante apoyo,
por su confianza e invalorable colaboración en el logro de este trabajo.
Por su entusiasmo y ejemplo para superar los obstáculos que se puedan
presentar en nuestro camino hacia el cumplimiento de nuestros objetivos.
A la Magister Ivonne Bernui Leo por su valioso aporte en esta tesis.
A todas las personas que de una u otra manera me mostraron su apoyo y
entusiasmo en la culminación de esta tesis.
vi
INDICE GENERAL
Lugar de Ejecución y Financiamiento ................................................. i
Jurado ................................................................................................. ii
Pensamiento ........................................................................................ iii
Dedicatorias ......................................................................................... iv
Agradecimientos .................................................................................. v
Indice General ..................................................................................... vi
Lista de Cuadros ................................................................................. vii
Lista de Tablas .................................................................................... viii
Lista de Figuras ................................................................................... ix
Resumen ............................................................................................. x
Abstract ............................................................................................... xi
Capítulo 1.- Introducción ...................................................................... 1
Capítulo 2.- Marco Teórico .................................................................. 6
Capítulo 3.- Metodología ..................................................................... 17
Capítulo 4.- Resultados y Discusión .................................................... 24
Resultados .......................................................................................... 24
Discusión ............................................................................................. 30
Conclusiones ....................................................................................... 37
Recomendaciones ............................................................................... 38
Referencias Bibliográficas ................................................................... 39
vii
Lista de Cuadros
Página
Valor nutricional de la carambola en base a 100 gramos
de parte comestible …………………………………………….. 16
viii
Lista de Tablas
Página
Tabla 1. Capacidad Antioxidante de Fruto y Hojas de
Averrhoa carambola L. (carambola) usando el método
DPPH* ........................................................................................ 25
Tabla 2. Capacidad Antioxidante del Fruto y Hoja de
Averrhoa carambola L. (carambola) usando el método
FRAP .......................................................................................... 26
Tabla 3. Contenido de vitamina C en Fruto y Hoja de
Averrhoa carambola L. (carambola) ........................................... 27
Tabla 4. Contenido de Polifenoles en Fruto y Hoja de
Averrhoa carambola L. (carambola) ........................................... 28
Tabla 5. Contenido de Flavonoides en Fruto y Hoja de
Averrhoa carambola L. (carambola) ........................................... 29
ix
Lista de Figuras
Página Figura 1. Poder reductor del Fruto y Hoja de Averroha carambola L. (carambola) frente al Ferricianuro de Potasio ................................................................................................ 26 Figura 2. Correlación de Polifenoles con la Capacidad Antioxidante según método FRAP en el Fruto y Hojas de Averrhoa carambola L. (Carambola)…….. ..................................... 29
x
RESUMEN
Las frutas y las hojas de las plantas son fuente de una gran diversidad de
compuestos con notables propiedades antioxidantes, que son de
particular importancia para el ser humano ya que constituyen un elemento
protector frente al efecto nocivo de los radicales libres. Objetivos.- El
objetivo del presente estudio fue evaluar la capacidad antioxidante del
extracto acuoso de Averrhoa carambola L. (carambola) frente a diversos
sistemas generadores de radicales libres. Metodología.- El estudio es de
tipo analítico, experimental, de tipo cuasi-experimental, transversal y
prospectivo. Se prepararon los extractos acuosos del fruto y hoja frescos
de Averrhoa carambola L. (Carambola), en los que se determinó
cuantitativamente los contenidos de polifenoles, flavonoides y vitamina C,
así como también se evaluaron sus propiedades mediante reacciones con
el radical libre estable DPPH*, el TPTZ-Fe+3 y su capacidad para reducir el
ferricianuro de potasio. Resultados.- El contenido de vitamina C fue más
elevado en el fruto, mientras que los polifenoles estuvieron en mayor
cantidad en la hoja; en cuanto a los flavonoides, éstos se encontraron en
semejante cantidad tanto en fruto como en hoja. Con respecto a la
capacidad de reaccionar con el radical libre estable DPPH*, el IC50 que
se obtuvo fue menor en la hoja, lo que indica que tiene una mejor
actividad frente al DPPH*, así como también el efecto antioxidante
evaluado con la técnica FRAP mostró un valor más elevado para la hoja.
También la hoja mostró tener un mayor poder reductor que el fruto sobre
el ferricianuro de potasio. Conclusión.- Los resultados muestran que la
hoja exhibe una mayor capacidad antioxidante que el fruto de la Averrhoa
carambola L. (carambola).
Palabras clave.- Capacidad antioxidante, Radicales libres, Averrhoa
carambola L., Frutos, Hojas.
xi
ABSTRACT
Fruits and leaves of plants are good resources of many diversity
compounds which have wonderful antioxidant properties, very important to
the man because they have substances that protect them against the
injurious effects of free radicals. Objectives.- The objective of this study
was to evaluate the aqueous extract Averrhoa carambola L. (carom)
antioxidant capacity against some free radicals producers systems.
Metodology.- The study is analytical, experimental, quasi-experimental,
transverse and prospective type. Aqueous extracts of fresh fruit and leaf of
Averrhoa carambola L. (carom), were used to determine content of
polyphenols, flavonoids and vitamin C and their antioxidant properties
were evaluated by reactions with the stable free radical DPPH*, TPTZ-Fe-
III and its reducing capacity of potassium ferricyanide. Results.- The
content of vitamin C was highest in the fruit, while polyphenols were higher
in leaves; however, flavonoids were similar in the fruit and leaves.
Regarding the ability to react with the free radical DPPH, the IC50 value
was lower in the leaves, indicating that has greater activity for reaction
with DPPH, likewise, the antioxidant capacity measured with the FRAP
technique yielded values higher than the fruit and their ability to reduce
potassium ferricyanide. Conclusion.- The results show that the leaves
exhibits a higher antioxidant capacity than the fruit of Averrhoa carambola
L (carom).
Key words.- Antioxidant capacity, Free radicals, Averrhoa carambola L.,
Fruits, Leaves.
1
CAPÍTULO 1.- INTRODUCCIÓN
1.1 Situación Problemática
El oxígeno, combustible necesario para la vida y signo evidente de la
evolución en los seres aeróbicos, nos hace pagar un importante precio
por ello, la oxidación, con lo cual el oxígeno se transforma en nuestro
principal agresor (Marsicano, 2004). Lo cierto es que todos los seres
vivos que consumen oxígeno para generar energía, liberan radicales
libres (Troncoso, L., 2002).
Los radicales libres son partículas inestables que perdieron un electrón y
son altamente reactivas (Halliwell, 1990).
Los radicales libres no son completamente dañinos, ya que nuestro
propio organismo los fabrica en cantidades moderadas para luchar contra
bacterias y virus. Los radicales libres producidos por el cuerpo para llevar
a cabo determinadas funciones son neutralizados fácilmente por nuestro
propio sistema antioxidante.
El problema para nuestras células se produce cuando se da un exceso
sostenido de radicales libres en nuestro sistema, a través de los años,
situación en la cual nuestro sistema antioxidante requiere de los
antioxidantes de la dieta.
2
El incremento de los radicales libres por encima de la cantidad de
sustancias antioxidantes, conduce al estrés oxidativo, lo que produce
daño celular (Pereira, M., 2012).
La incapacidad de nuestro cuerpo para neutralizar los radicales libres a
los que nos exponemos diariamente, nos obliga a recurrir a nutrientes
que tengan la propiedad de neutralizarlos (Halliwell, 2006). Podemos
decir que un nutriente tiene propiedades antioxidantes cuando es capaz
de neutralizar la acción de una molécula inestable, es decir un radical
libre, sin perder su propia estabilidad.
El consumo de frutas y verduras, ha sido asociado con la protección
contra ciertas enfermedades, tales como enfermedades cardiovasculares
y cerebrovasculares e incluso cáncer, dicha actividad que se atribuye a
los diferentes antioxidantes contenidos en ellos, como vitamina C,
vitamina E, beta-caroteno, también se debe a otros compuestos tales
como polifenoles y flavonoides (flavonas, isoflavonas, catequinas) que
son componentes que se consumen en la dieta y, que manifiestan una
fuerte capacidad antioxidante. Es por esta razón que resulta importante
determinar la capacidad antioxidante de las diferentes frutas y vegetales
(Wang, Cao & Prior, 1996; Sudha, Sangeetha Priya, Indhu Shree &
Vadivu kkarasi, 2011).
Se llevó a cabo el presente estudio, para determinar la capacidad
antioxidante de Averrhoa carambola L. (carambola) frente a sistemas
generadores de radicales libres.
1.2 Formulación de Problema
¿La Averrhoa carambola L. (carambola) tiene capacidad antioxidante
frente a sistemas generadores de radicales libres?
3
1.3 Justificación
Actualmente existen muchos productos alimenticios consumidos por el
hombre que contienen antioxidantes sintéticos, pero al mismo tiempo
existen en la naturaleza numerosas especies que podrían brindarnos
alternativas de antioxidantes naturales, entre los cuales se encuentran la
vitamina C y los compuestos polifenólicos principalmente que, han sido
ampliamente estudiados por su efecto para contrarrestar algunas
enfermedades degenerativas.
Los antioxidantes son sustancias que inhiben o retardan el proceso
oxidativo, cuya actividad podría deberse a sus componentes polifenólicos
(Chaulya, Haldar & Mukherjee, 2010).
Los polifenoles constituyen uno de los principales compuestos con
actividad antioxidante, presentes en las plantas y alimentos. Los
flavonoides, son un tipo de polifenoles que se encuentran ampliamente
distribuidos en las plantas y son sustancias que manifiestan una potente
actividad antioxidante (Kalpna, Mital, & Sumitra, 2011).
Las plantas contienen diferentes sustancias antioxidantes, por lo cual es
relativamente difícil determinar la cantidad en la que se encuentra cada
una de ellas en la planta.
A pesar de los adelantos científicos en cuanto al conocimiento de las
enfermedades y su tratamiento, aún existen muchas dudas con respecto
a su origen (Venereo, 2002). En los últimos años se ha incrementado el
predominio de las enfermedades crónicas y enfermedades no
transmisibles, entre las cuales, las más frecuentes son las enfermedades
cardiovasculares y diversos tipos de cáncer, consideradas como las dos
primeras causas de muerte, siendo uno de los principales factores de
4
riesgo asociado con su desarrollo, la acción de las sustancias oxidantes
(Delgado & Martínez, 2009).
El oxígeno, elemento indispensable para la vida, se encuentra
generalmente en su forma más estable (O2) pero algunas veces puede
ocurrir que, por medio de reacciones bioquímicas de tipo redox, por
fagocitosis en una reacción inflamatoria bajo control, por exposición a
radiaciones ionizantes, rayos ultravioleta, contaminación del medio
ambiente, humo de cigarrillos o drogas, entre otras, se pueden generar
radicales libres, denominados también, especies reactivas de oxígeno,
siendo uno de sus principales blancos la molécula de ADN. Estos
ataques dañan a la célula produciendo pérdida de la homeostasis celular.
El conocimiento de los mecanismos del daño producido por las especies
reactivas de oxígeno se encuentra estrechamente vinculado con la
etiopatogenia de enfermedades de elevada morbilidad y mortalidad como
el cáncer (Zorrilla, Eirez, & Izquierdo, 2004).
Todo ello ha generado un incrementado interés por el estudio de los
procesos relacionados con las especies reactivas de oxígeno, los que
están íntimamente relacionados con el estrés oxidativo y la función que
cumplen los antioxidantes (Venereo, 2002; Zorrilla, Eirez, & Izquierdo,
2004).
El estudio acerca de la capacidad antioxidante de las frutas y verduras en
general plantea nuevos caminos para futuras investigaciones sobre los
posibles beneficios que estas especies estarían aportando a la salud
humana.
Para la presente tesis se formuló la siguiente pregunta ¿Cuál es la
capacidad antioxidante de la Averrhoa carambola L. (carambola) frente a
sistemas generadores de radicales libres?
5
1.4 Objetivos
1.4.1 Objetivo General
1.4.1.1 Determinar la capacidad antioxidante de Averrhoa carambola L.
(carambola) frente a sistemas generadores de radicales libres.
1.4.2 Objetivos Específicos
1.4.2.1 Determinar la capacidad antioxidante del fruto y hoja de Averrhoa
carambola L. (carambola) frente a sistemas generadores de radicales
libres.
1.4.2.2. Determinar la concentración de sustancias antioxidantes en el
fruto y hoja de Averrhoa carambola L. (carambola).
6
CAPÍTULO 2.- MARCO TEÓRICO
El oxígeno es un elemento necesario para los organismos aerobios, y al
mismo tiempo, paradójicamente tóxico para todas las formas de vida. El
oxígeno molecular (O2) es una sustancia muy reactiva, debido a lo cual
genera rápidamente una serie de compuestos denominados radicales
libres (Urbina-Bonilla, 2008).
Aproximadamente el 95% del oxígeno que consumen los organismos
aerobios se reduce completamente y forma H2O, proceso que ocurre
principalmente durante la respiración mitocondrial, y el 5% restante se
convierte en especies semirreducidas conocidas como ERO. Las ERO,
llamadas también especies reactivas de oxígeno, son sustancias
altamente tóxicas que atacan a los componentes de las células
(Martínez, 2005).
Otra fuente endógena de generación de radicales libres es la defensa
antimicrobiana, los macrófagos y leucocitos polimorfonucleares, los que
actúan sobre los microorganismos liberando radicales libres, ayudando
de esta manera a su eliminación. Esto ha demostrado que los radicales
libres no son completamente dañinos, sino que además tienen funciones
fisiológicas importantes para los organismos vivos (García, Saldaña &
Saldaña, 2012).
7
Los radicales libres pueden formarse a partir de reacciones metabólicas
dentro de la célula, así como también de manera espontánea si las
condiciones del medio son propicias para ello, como por ejemplo por
exposición a ciertos compuestos químicos, por el estrés oxidativo
producido durante el ejercicio físico muy intenso, por contaminantes del
aire, por radiaciones ionizantes, por drogas, bacterias o virus (Zamora,
2007a; Gutiérrez, 2007).
En situaciones patológicas la producción de radicales libres aumenta
enormemente, produciéndose lo que se conoce con el nombre de estrés
oxidativo, siendo diversos los factores que conducen a esta situación,
como por ejemplo, factores químicos como los metales pesados,
compuestos xenobióticos, componentes del tabaco, drogas como la
adriamicina, factores físicos como las radiaciones ultravioleta, factores
orgánicos y metabólicos como una dieta pobre en antioxidantes, diabetes
mellitus, ejercicio físico intenso, entre otros (Rodríguez, Menéndez &
Trujillo, 2001).
En 1954, Rebeca Gerschman sugirió por primera vez el efecto tóxico del
oxígeno al observar que al colocar animales de experimentación en un
ambiente de oxígeno puro en condiciones hiperbáricas, esto les
producía la muerte. Este efecto se interpretó asumiendo que esto podría
ser causado por los radicales libres que se generarían por la reducción
univalente del oxígeno, ya que las alteraciones histológicas eran muy
similares a aquéllas ocasionadas por las radiaciones electromagnéticas,
pero esta explicación no fue aceptada ya que se aceptaba la hipótesis de
Warburg, quien afirmaba que en la mitocondria prevalecía la naturaleza
tetravalente de las oxidaciones biológicas (Mayor-Oxilia, 2010).
8
Los radicales libres son especies químicas que pueden estar cargadas o
no, que presentan un electrón desapareado en su capa más externa
(Avello & Suwalsky, 2006a), lo que los torna altamente inestables y
reactivos, por lo cual están ávidos de captar un electrón a partir de una
molécula más estable, para alcanzar su estabilidad, convirtiendo a su
vez, a esta última, en un radical libre (Rodríguez, Menéndez, 2001;
Avello & Suwalsky, 2006b); a consecuencia de su elevada reactividad
que es muy cercana a las reacciones controladas por difusión, los
radicales libres tienen una vida media muy corta, de escasas
millonésimas de segundo (Castilla, Huerta, Carrasco & Rodrigo, 2003).
Entre las especies reactivas del oxígeno o sustancias prooxidantes más
comunes y de mayor importancia biológica están el radical hidroxilo
(HO*), el anión superóxido (O2.-) y el peróxido de hidrógeno (H2O2), este
último que, a pesar de no tener electrones desapareados, ya que no es
propiamente un radical libre, se encuentra estrechamente relacionado
con la generación de radicales hidroxilo, el cual reacciona rápidamente
con casi todo tipo de moléculas en los seres vivos, tales como lípidos,
proteínas y bases del ácido desoxirribonucleico (ADN) (Castilla, Huerta,
2003; Núñez, 2011a; Hidalgo, Fernández, Cabello, Rivas, Fontecilla,
Morales, 2006).
Los radicales libres tienen la propiedad de producir deterioro de los
alimentos (rancidez) y sobre todo dañan los tejidos in vivo, siendo las
probables causantes de varias enfermedades, como por ejemplo
psoriasis, enfermedades inflamatorias, cáncer, aterosclerosis y también
tienen que ver con el envejecimiento (Spielvogeli, 2008; Sánchez,
Martínez & Faure, 2011a).
9
Diversos estudios han mostrado que el oxígeno que el ser humano
incorpora en el proceso de respiración se transforma en anión superóxido
en la cadena respiratoria mitocondrial, y se ha calculado que la cantidad
de oxígeno que sufre esta transformación va del 2 al 5%. Estos radicales
libres que se generan en la respiración aerobia producen daño oxidativo
que, ocasiona una pérdida paulatina de los mecanismos homeostáticos,
lo que interfiere con los patrones de expresión génica, produciendo
pérdida de la capacidad funcional celular, que conlleva al envejecimiento
y a la muerte (Céspedes, Rodríguez, Llópiz & Cruz, 2000).
.
En condiciones fisiológicas en nuestro organismo, la generación de
radicales libres se mantiene en equilibrio con las sustancias
antioxidantes. Sin embargo, un exceso de radicales libres, o bien una
disminución de los sistemas de defensa antioxidante ocasiona ruptura de
este equilibrio, produciéndose daño o estrés oxidativo (Elejalde, 2001;
Cuerda, Luengo, Valero, Vidal, Burgos, Calvo et al., 2011).
El estrés oxidativo produce daño en las células debido a la oxidación de
los lípidos, proteínas, DNA y enzimas, lo que deriva en una reacción en
cadena, que genera mayor producción de radicales libres y por lo tanto
aumento del daño celular (Mesa-Vanegas, 2010).
Pero, el ser humano está protegido del estrés oxidativo gracias a que su
organismo cuenta con un sistema de protección formado por compuestos
y enzimas antioxidantes como la superóxidodismutasa, catalasa y
peroxidasa, las cuales participan en las transformaciones de dichas
especies (Céspedes, Rodríguez, 2000; Zapata, Gerard, Davies &
Schvab, 2007). Un antioxidante es toda sustancia que retarda o previene
la oxidación de diversas sustancias oxidables (García, Vicente, Rojo &,
Sánchez, 2001).
10
Los antioxidantes tienen acción estabilizadora sobre los radicales libres
inhibiendo la peroxidación lipídica, proceso que está involucrado en el
desarrollo de diversas enfermedades comunes, en las que se incluyen la
aterosclerosis y desórdenes neurodegenerativos como la enfermedad de
Alzheimer entre otras (Beneficios de la vitamina C en fumadores con
enfermedad coronaria, 2000).
Según su modo de acción es posible diferenciar a los antioxidantes
denominados primarios, debido a que actúan interrumpiendo la reacción
en cadena que producen los radicales libres y, generando como
consecuencia de ello un radical libre menos activo, y también es posible
observar la existencia de antioxidantes secundarios, que tienen acción
preventiva y, actúan atrapando los iones metálicos que producen la
descomposición del peróxido de hidrógeno, generando como
consecuencia de ello el radical hidroxilo (Pastene, Gómez, Speisky &
Núñez-Vergara, 2009).
Los antioxidantes facilitan el uso fisiológico del oxígeno por las
mitocondrias de las células, lo cual ayuda a disminuir el estrés oxidativo y
por consiguiente ayuda en la prevención de enfermedades crónicas no
transmisibles (Zamora, 2007b).
Los antioxidantes naturales han alcanzado una gran importancia por la
relación directa que manifiestan con la disminución del riesgo a producir
enfermedades coronarias y cáncer, entre otras. Numerosos
antioxidantes, presentes en las frutas y verduras, entre los cuales se
encuentran la vitamina E (α-tocoferol), vitamina C (ácido ascórbico), ß-
caroteno (pro-vitamina A), compuestos fenólicos y flavonoides, se han
relacionado a efectos positivos en la salud debido a su efecto
antioxidante (Rojas-Barquera & Narváez-Cuenca, 2009a).
11
También tenemos la glutatión peroxidasa, que parece ser uno de los
antioxidantes naturales más importantes, contiene selenio en su
estructura, el cual es importante por su efecto sinérgico con la vitamina E
(Spielvogeli, 2008).
Entre las funciones de la vitamina E, la más importante es su función
antioxidante, la que se basa en su capacidad de protección de las
membranas celulares impidiendo su oxidación por acción de los radicales
libres, lo que induciría a la aparición de enfermedades cardíacas o
posibles cánceres. Esta vitamina junto con las vitaminas A y C conforma
el grupo de vitaminas antioxidantes (Sayago, Marín, Aparicio, & Morales,
2007).
El ácido ascórbico o vitamina C es uno de los antioxidantes hidrosolubles
que se encuentra en mayor concentración en el plasma de la sangre
humana, actúa modificando las moléculas de superóxido y de otras
formas reactivas de oxígeno, a los cuales cede un electrón para
estabilizarlos, protegiendo de esta manera a los lípidos del daño
oxidativo (Chimeneos, 2008a).
El ß-caroteno es liposoluble y dentro del organismo se convierte en
vitamina A, potente antioxidante presente en vegetales verdes
(espinaca, acelga) y amarillos (zanahoria y ajo entre otros). Otros
pigmentos carotenoides que proporcionan color rojo, amarillo o
anaranjado a algunas plantas son la luteína, zeaxantina y licopeno que
se encuentran en el mango, melocotón, tomate, etc. También tenemos
los compuestos fenólicos que confieren a las plantas coloraciones roja,
azul o amarilla, siendo los más conocidos los polifenoles, que se
encuentran en el té verde y las proantocianidinas que están presentes en
el vino tinto (Chimeneos, 2008b).
12
Algunas veces, nuestra defensa endógena antioxidante no es
completamente efectiva en su acción contra los radicales libres, por lo
cual es recomendable el consumo de una dieta rica en sustancias
antioxidantes naturales, las cuales se encuentran generalmente en las
frutas y verduras (Avello & Suwalsky, 2006c). Su consumo constituye una
de las mejores formas de prevenir la formación de especies reactivas de
oxígeno en exceso, (Núñez, 2011b) ya que constituyen una importante
alternativa como fuente potencial de antioxidantes, debido a que
contienen diversos compuestos químicos muy activos en bajas
concentraciones, pero que se pueden complementar o actuar de manera
sinérgica (Restrepo, Cortés & Rojano, 2010).
Los compuestos polifenólicos, son los antioxidantes más abundantes de
la dieta, cumplen esta acción gracias a su propiedad quelante de metales
de transición y su acción atrapadora de radicales libres (Pérez, 2003).
Algunos polifenoles se encuentran sólo en determinados tipos de
alimentos (flavanonas en cítricos, isoflavonas en soya), pero hay otros
como la quercetina que se puede encontrar en una gran variedad de
plantas (frutas, verduras, cereales, leguminosas, té, vino). Los alimentos
contienen una mezcla de polifenoles y, el contenido de éstos en una
planta depende de algunos factores ambientales como la luz, el grado de
madurez o grado de conservación, así como también del clima entre
otros factores agronómicos. El té, el vino y el cacao, son alimentos muy
ricos en polifenoles, los cuales constituyen una buena fuente de defensa
antioxidante (Quiñones, Miguel & Aleixandre, 2012).
Los flavonoides como la catequina y quercetina son capaces de captar
directamente especies reactivas de oxígeno (ERO) como el anión
superóxido (Luis & Aller, 2008). Los polifenoles tienen muchos efectos
13
beneficiosos sobre la salud, especialmente sobre el sistema
cardiovascular, lo que se debe a sus propiedades antioxidantes. Actúan
atenuando la oxidación de las lipoproteínas de baja densidad (LDL)
(Quiñones, Miguel & Aleixandre, 2012).
La vitamina C, vitamina E, vitamina A, y los β-carotenos constituyen parte
muy importante de la defensa antioxidante exógena (Muedas, La Rosa &
Robles, 2008a). Las vitaminas C y E protegen contra la aparición de
enfermedades cardiovasculares, siendo la vitamina E (tocoferol) el
antioxidante liposoluble más importante (Zamora, 2007c, Márquez,
Yépez, Sútil-Naranjo & Rincón, 2002).
Existen numerosos estudios que han demostrado que muchas plantas
producen sustancias antioxidantes, constituyendo éstas, por lo tanto, una
fuente importante de antioxidantes naturales (Sánchez, Martínez &
Faure, 2011b). Esto ha hecho que sea cada vez mayor el interés en la
búsqueda de antioxidantes de origen natural, que en su mayoría se debe
a la presencia de compuestos fenólicos, los cuales son poderosos
secuestradores de especies reactivas de oxígeno, además de tener la
capacidad de inhibir enzimas generadoras de radicales libres, por cuyo
motivo, la búsqueda de poderosos componentes antioxidantes en los
alimentos constituye un objetivo de alta prioridad (Doroteo, 2013a).
En un estudio sobre la evaluación del efecto antioxidante de extractos
hidroalcohólicos de Uncaria tomentosa (uña de gato), Zea Mays (maíz
morado), Smallantus sonchifolius (yacón), Lepidium meyenii (maca),
Krameria triandra (ratania) y Physallis peruviana (aguaymanto), se ha
observado que los extractos más activos son los de ratania y uña de
gato, casi tanto como el antioxidante utilizado como control, que en este
trabajo fue la rutina. Igualmente, la capacidad antioxidante total de
14
ratania y uña de gato fueron mayores que la de los otros extractos
(Doroteo, 2013b).
En otro estudio realizado para determinar la capacidad antioxidante total
en alimentos convencionales y regionales de Chiapas, México, el cual
tuvo como objetivo evaluar la capacidad antioxidante total de 24
alimentos convencionales y nueve propios de la región del estado de
Chiapas, dio como resultado que la guayaba, papaya, manzana y
naranja fueron las frutas que destacaron por sus mayores valores de
capacidad antioxidante total, lo que se sustenta en parte por sus
elevados niveles de vitamina C, carotenos y polifenoles, que son
fitoquímicos con poder reductor que se encuentran en los alimentos
(Gutiérrez, Ledesma, García & Grajales, 2007).
En un trabajo de investigación en el que se evalúa la capacidad
antioxidante total de lámina flexible de mango (Mangifera indica) y el
contenido de polifenoles totales en láminas flexibles de mango, se
observó un mayor contenido de estos compuestos en la lámina en
comparación con lo que se obtuvo en el fruto, lo cual se atribuyó a un
mayor contenido de azúcares (Brix°), ya que la estructura química de los
polifenoles presenta uno o más anillos bencénicos con radicales
hidroxilos generalmente unidos a azúcares. Los resultados sugieren que
el consumo de la lámina flexible de mango constituye una alternativa de
consumo de compuestos antioxidantes y nutritivos en la dieta
(Hernández-Varela, Moncayo, Fernández & Sulbarán, 2013).
Dentro de la gran variedad de frutas que se consumen en diversas zonas
tropicales, como nuestra Amazonía, se encuentra la Averrhoa carambola
L. (carambola), llamada también fruta estrella, planta perteneciente a la
familia de las oxalidáceas, cuyos frutos son bayas de color amarillento,
15
de sabor dulce ligeramente ácido (Vasconcelos, Araujo, Silva & Conde,
2005; De Souza, Raga & Zucchi, 2000a) que se consume como fruta
fresca, en jugos y dulces caseros. La planta es de crecimiento lento,
relativamente pequeña y raramente excede los 8 metros, tiene hojas
compuestas de color verde claro brillante en la parte superior y opaco en
la parte inferior, que forman parte de la farmacopea indígena del Brasil
donde se usan como febrífugo, antiescorbútico y antidisentérico (
Andrade & Martins, 2007).
Esta planta ampliamente cultivada en la Selva peruana, es originaria de
Asia, probablemente Indonesia y Malasia, pero, crece fácilmente en
climas tropicales (Vasconcelos, Araujo, Silva & Conde, 2005; De Souza,
Raga & Zucchi, 2000b; Vasconcelos, Gondim, Cruz, Mafra & Silva,
2008).
El fruto de la Averrhoa carambola L. (carambola) contiene carotenoides y
polifenoxidasas, que le conferirían actividad antioxidante, por lo cual
tendría la capacidad de neutralizar a los radicales libres, acción que
podría ser importante en la prevención de la generación de éstos y, por lo
tanto de algunas enfermedades producidas por ellos, como por ejemplo
la ateroesclerosis (Castillo, Castillo & Huamán, 2013).
Estudios sobre la composición de este fruto han reportado la presencia
de vitamina C y compuestos fenólicos, entre otras sustancias con
capacidad antioxidante (Carvajal de Pabón, 2011).
En el siguiente cuadro se muestra el valor nutricional de la Averrhoa
carambola L. (carambola).
16
Valor nutricional de la carambola en base a 100 gramos de parte comestible
Componentes
mayores (g) Minerales (mg) Vitaminas (mg)
Agua 90.00 Calcio 5.00 Caroteno (A) 90.00
Proteína 0.50 Fósforo 18.00 Tiamina (B1) 0.04
Grasa 0.30 Hierro 0.40 Riboflavina (B2) 0.02
Carbohidrato 9.00 Niacina (B5) 0.30
Fibra 0.60 Vitamina C 35.00
Ceniza 0.40
Fuente. Cañizares A., Bonafine O., & Vargas A. (2012). Frutales no tradicionales.
Aprovechamiento industrial del tamarindo estrella o carambola. INIA Divulga. Revista de
Difusión de Tecnología Agrícola, pecuaria, pesquera y acuícola, 23, 2-9.
Un estudio realizado en Brasil reporta el uso en medicina folclórica de las
hojas de Averrhoa carambola L. (carambola) como un estimulante del
apetito, diurético y antidiarreico, asi como también útil para el tratamiento
de la diabetes (Ferreira, E. B. et al. 2008).
Todo ello ha generado nuestro interés para el desarrollo de este trabajo.
17
CAPÍTULO 3.- METODOLOGÍA
a) Tipo de Estudio
Es un estudio de tipo analítico, experimental, de tipo cuasi-experimental
transversal y prospectivo.
b) Materiales
El sulfato ferroso hexahidratado (Fe-II) que se usó fue adquirido de la
Sigma Chemical Company. El ácido acético, metanol, radical 2,2-difenil-
1-picrilhidrazil, reactivo de Folin-Ciocalteu, carbonato de sodio, cloruro
férrico hexahidratado (Fe-III), acetato de sodio anhidro, ácido acético
glacial, nitrito de sodio, fosfato de potasio monobásico y cloruro de
aluminio se adquirieron de la Merck Darmstadt, siendo todos los
reactivos usados de grado para análisis.
Material Biológico
El fruto y hojas frescos de Averrhoa carambola L. (carambola) se
adquirieron en el Instituto de Investigaciones de la Amazonía Peruana-
Iquitos (IIAP), se transportaron adecuadamente vía aérea a la ciudad de
Lima y se trasladaron rápidamente al Laboratorio de Bioquímica y
Nutrición “Leonidas Delgado Butrón y Emilio Guija Poma” del Centro de
Investigación de Bioquímica y Nutrición de la Facultad de Medicina de la
UNMSM.
18
Preparación de la Muestra
Se pesó 25 g de Averrhoa carambola L. (carambola), luego se cortó en
trozos pequeños, y se llevó a una probeta. Posteriormente, se completó
con agua destilada hasta 100 mL, y se licuó. Esta solución se filtró
usando gasa, y el líquido filtrado se centrifugó a 15 000 g durante 15
minutos. El sobrenadante obtenido se usó para realizar las diferentes
determinaciones analíticas (Troncoso & Guija, 2007).
c) Métodos
Determinación de la Capacidad Antioxidante (Método FRAP)
Para la determinación de la capacidad antioxidante se utilizó el método
“Ferric Reducing Antioxidant Power” (FRAP), propuesto por Benzie y
Strain, adaptado por Szollosi y Vargas (Szollosi & Vargas, 2002). El
reactivo FRAP se preparó mezclando 0.1 mol/L de buffer acetato de
sodio (pH 3.6), 10 mmol/L 2,4,6-Tripyridyl-s-Triazine (TPTZ) y 20 mmol/L
de cloruro férrico. En un tubo de ensayo se colocó 1 mL de la solución
FRAP con 0.050 mL de muestra y 0.950 mL de agua destilada. Luego se
agitó y se llevó a baño maría a 37°C durante 15 minutos, al final de los
cuales se leyó a 593 nm en un espectrofotómetro marca NV 203
Spectrophotometer.
También, se preparó un blanco que contenía el reactivo FRAP y agua
destilada. El ensayo se hizo por triplicado. Las absorbancias de las
muestras se ubicaron en una curva estándar de Fe (II), para obtener su
concentración, expresando los resultados como mmoles de Fe (II)/100 g
de muestra fresca (Chuquimia, Alvarado, Peñarrieta, Bergenstahl &
Akeeson, 2008).
19
Fundamento del método.- Este método se basa en la reducción del
complejo TPTZ-Fe3+ a TPTZ-Fe2+por acción de los compuestos
antioxidantes, dando un color azul que absorbe a 593 nm, cuya
intensidad está en relación directa con la capacidad reductora de la
muestra analizada (Carvajal de Pabón, 2011).
Determinación de la Capacidad Antioxidante (Método del DPPH*)
Para la determinación de la capacidad antioxidante se utilizaron
volúmenes de muestra comprendidos entre 0.02 y 0.15 mL a los cuales
se añadió metanol, tampón acetato 0.1 M, pH 6.0 y 0.5 mL de solución
del radical libre estable DPPH*, completando un volumen total de 3 mL
en cada tubo. Luego se dejó en reposo en la oscuridad durante 30
minutos, a cuyo término se leyó en el espectrofotómetro a 517 nm. Los
resultados se expresan como IC50 (mg/mL). Paralelamente se preparó un
tubo blanco y, un tubo control que no contenía muestra.
Fundamento del método.- La reacción se basa en que el radical libre
estable DPPH* de un color azul intenso, sustrae un átomo de hidrógeno
proveniente de una sustancia donadora de electrones, y como
consecuencia de ello se produce una disminución del color del DPPH*
hasta tornarlo pardo claro (Muedas, La Rosa & Robles, 2008b).
Determinación de Vitamina C (Método Folin-Ciocalteau)
Para la determinación de vitamina C se midió 0.2 mL de reactivo Folin-
Ciocalteu al 10%, luego se añadió 0.5 mL de ácido tricloroacético (TCA)
al 10% y se agitó para homogenizar. Posteriormente, se añadió 0.05mL
de muestra y 1.25 mL de agua destilada; se dejó en reposo a
temperatura ambiente durante 10 minutos y se leyó en el
espectrofotómetro a 760 nm La determinación se realizó por triplicado y
con un blanco de muestra. Para realizar los cálculos se preparó una
20
curva estándar de ácido ascórbico utilizando concentraciones conocidas
de esta vitamina, y los resultados se expresan como mg de ácido
ascórbico/100 g de muestra fresca.
Fundamento del método.- El fundamento de la determinación de
vitamina C radica en el poder reductor que ejerce esta vitamina sobre el
reactivo Folin-Ciocalteau en medio ácido, tornándolo de color azul, cuya
intensidad guarda relación con la concentración de vitamina C.
Determinación de Polifenoles Totales (Método Folin-Ciocalteau)
La determinación de polifenoles totales se llevó a cabo utilizando el
método utilizado por Singleton, Orthofer y Lamuela-Raventos (Singleton,
Orthofer & Raventos, 1999). En un tubo de ensayo se colocó 1.0 mL de
reactivo Folin-Ciocalteau, 0.05 mL de muestra y se dejó en reposo
durante 5 minutos, luego de los cuales se agregó 0.95 mL de solución de
carbonato de sodio al 7.5% y se llevó a baño maría a 45º durante 15
minutos. Posteriormente se leyó en el espectrofotómetro a 725 nm. Se
trabajó por triplicado, usando un blanco que no tenía muestra.
Fundamento del método.- El reactivo está compuesto por una mezcla
de ácidos fosfowolfrámico y fosfomolíbdico en medio básico, los que
sufren reducción al oxidar los compuestos fenólicos, originando un
complejo wolframio-molibdeno de color azul cuya absorbancia es
dependiente de la concentración de los polifenoles de la muestra y se
midió en un espectrofotómetro a 725 nm. Los resultados se expresan
como mg equivalentes de ácido gálico/100 g de muestra fresca
(Kuskoskiet, 2005; Kodama, Goncalvez, Lajolo & Genovese, 2010a;
Dewanto, Orthofer & Lamuela-Raventos, 1999).
21
Determinación de Flavonoides
En un tubo de ensayo se colocó 0.200mL de muestra, 1.300mLde agua
destilada y 0.075 mL de NaNO2 al 5%. Se dejó en reposo por 5 minutos y
luego se añadió 0.125mL de AlCl3 al 10% y nuevamente se dejó en
reposo por 6 minutos, luego se agregó 0.5 mL de NaOH 1 M y 0.300 mL
de agua destilada. Se leyó a 510 nm en un espectrofotómetro, y con
dichas lecturas se obtuvo la concentración de flavonoides, utilizando una
curva estándar que se preparó utilizando diferentes concentraciones
conocidas de (+)-catequina. Los resultados se expresan como mg
equivalentes de (+)-catequina/100 g de muestra fresca (Chuquimia,
Alvarado, Peñarrieta, Bergenstahl & Akeeson, 2008; Kodama,
Goncalvez, Lajolo & Genovese, 2010b).
Fundamento del método.- Los flavonoides reaccionan con AlCl3 y
NaNO2, formando un complejo flavonoide-aluminio de color rosado tenue
en medio alcalino, cuya intensidad está en relación directa a la
concentración de flavonoides.
Determinación del Poder Reductor
Para la determinación del poder reductor se utilizaron volúmenes de
muestra comprendidos entre 0.020 y 0.100 y se añadió agua destilada,
tampón acetato 0.2 M pH 6.6, luego se agregó 1 mL de ferricianuro de
potasio 0.1% y se incubó a 50 °C durante 20 minutos. Se agregó 1 mL de
TCA al 10% haciendo un volumen de 4 mL en total. De esta mezcla se
midió 2 mL, se colocó en otro tubo y se le agregó 0.5 mL de agua
destilada y 0.5 mL de solución de FeCl3 0.1% y se leyó en un
espectrofotómetro a 700 nm.
Fundamento del método.- La reacción se basa en el poder reductor de
la sustancia antioxidante que transforma el ferricianuro de potasio en
22
ferrocianuro de potasio, este compuesto reacciona con el FeCl3
produciéndose una intensa coloración verde esmeralda, cuya intensidad
es dependiente de la concentración de los antioxidantes que se
encuentran en la muestra (Oyaizu M. (1986).
d) Análisis Estadístico
Para realizar el análisis estadístico de los resultados se procedió a utilizar
las estadísticas descriptivas de promedios y desviación estándar, con
excepción de los polifenoles que se trabajó con la mediana.
Para saber si había diferencia estadísticamente significativa entre los
resultados del fruto y la hoja, se comprobó previamente si tenían
distribución normal a través de las pruebas de normalidad de
Kolmogorov-Smirnov y Shapiro-Wilk, observándose que todos los
resultados presentaban normalidad (p > 0.05) con excepción de los
polifenoles.
Por lo tanto, las pruebas estadísticas que se utilizaron fueron la U de
Mann-Whitney para la Capacidad Antioxidante del IC50 (DPPH*) y la t de
Student para la Capacidad Antioxidante del Método FRAP y para las
concentraciones de Vitamina C, Polifenoles totales y Flavonoides, con un
α < 0.001.
Para el Poder Reductor se utilizó el Coeficiente de Correlación de
Pearson (r) entre concentración del fruto y el Poder Reductor (α < 0.001)
y entre concentración de la hoja y el Poder Reductor (α < 0.01). Además,
se utilizó la prueba estadística t de Student para comprobar si había
diferencia estadísticamente significativa entre el Poder Reductor de fruto
y hoja, a un α < 0.001.
23
Todos estos procedimientos se realizaron utilizando el programa
estadístico SPSS versión 21.
24
CAPÍTULO 4.- RESULTADOS Y DISCUSIÓN
RESULTADOS
La determinación de la capacidad antioxidante de fruto y hoja de la
Averrhoa carambola L. (carambola) se realizó utilizando tres técnicas
distintas, el método del radical libre estable DPPH* y el método FRAP y
el poder reductor, así como también se determinó el contenido de
vitamina C, polifenoles totales y flavonoides con los extractos acuosos
preparados a partir del fruto y hoja de Averrhoa carambola L.
(carambola). Los resultados obtenidos se han referido a 100 gramos de
muestra fresca.
La capacidad antioxidante total del extracto acuoso del fruto y hoja de
Averrhoa carambola L. (carambola) se determinó utilizando el radical
libre estable DPPH*. Se determinó la actividad antioxidante del extracto
acuoso del fruto y hoja de Averrhoa carambola L. (carambola)
preparando soluciones de concentraciones comprendidas en un rango de
1.6 a 12.5 mg/mL de muestra, observándose que a medida que aumenta
la concentración, aumenta también la capacidad antioxidante, es decir,
hay una relación directa entre la concentración de la muestra y su
capacidad antioxidante, resultado obtenido al realizar esta determinación
25
utilizando el radical libre estable DPPH*. El IC50 (Concentración
Inhibitoria del extracto que logra atrapar el 50% de los radicales libres
DPPH* de la solución preparada a 0.5 mM), es igual a 3.75 mg/mL para
el fruto y 2.91 mg/mL para la hoja de carambola, es decir, la hoja tiene
una mejor capacidad antioxidante frente al radical libre estable DPPH*
(Tabla 1), observándose una alta diferencia estadísticamente significativa
(p = 0.000) con un α < 0.001.
Tabla 1. Capacidad Antioxidante del Fruto y Hojas de Averrhoa
carambola L. (carambola) por el método DPPH*
Carambola DPPH* p valor(&&)
IC50 (mg/mL)&
Fruto 3.75 ± 0.20
0.000
Hoja 2.91 ± 0.01
(&) Promedio ± D.E.
(&&) α < 0.001
Asimismo, de acuerdo a los resultados obtenidos en la evaluación de la
capacidad antioxidante, utilizando la técnica FRAP, se observa que el
fruto de Averrhoa carambola L. (carambola) muestra un valor FRAP de
1.288 mmoles de Fe+2/100 gramos de fruto fresco, mientras que la hoja
muestra un valor FRAP igual a 1.618 mmoles de Fe+2/100 gramos de
hoja fresca (Tabla 2), mostrando una alta diferencia estadísticamente
significativa (p = 0.000) con un α < 0.001.
26
Tabla 2. Capacidad Antioxidante del Fruto y Hoja de Averrhoa
carambola L. (carambola) por el método FRAP
Carambola
FRAP
p valor(&&) (mmoles de Fe+2/100 g de
muestra fresca)&
Fruto 1.288 ± 0.03
0.000
Hoja 1.618 ± 0.08
(&) Promedio ± D.E.
(&&) α < 0.001
Al usar la técnica del Poder Reductor frente al ferricianuro de potasio
(Figura 1) para evaluar la capacidad antioxidante, se observó una mayor
tendencia reductora de la hoja de la Averrhoa carambola L. (carambola),
y este poder reductor aumenta a medida que aumenta la concentración
de la muestra.
Figura N°1. Poder reductor del Fruto y Hojas de Averrhoa carambola L.
(carambola) frente al Ferricianuro de Potasio.
27
En cuanto al contenido de vitamina C, el fruto de la carambola reportó un
contenido de 62.22 mg/100 gramos de fruto fresco, lo que haría pensar
que este componente estaría favoreciendo su acción antioxidante frente
a la presencia de radicales libres, lo cual no se daría en la hoja, ya que
éstas presentan un menor contenido de vitamina C, igual a 33.62 mg/100
gramos de hoja fresca, como se observa en la Tabla 3, existiendo una
alta diferencia estadísticamente significativa (p = 0.000) con α < 0.001.
Tabla 3. Contenido de vitamina C en Fruto y Hoja de
Averrhoa carambola L. (carambola).
Carambola
Vitamina C
(mg/100 g de muestra)&
p valor(&&)
Fruto
62.22 ± 7.49
0.000
Hoja 33.62 ± 1.48
(&) Promedio± D. E.
(&&) α < 0.001
La acción antioxidante de los polifenoles es bastante conocida en
relación a su capacidad para secuestrar especies reactivas de oxígeno
(Pastene, 2009b). La actividad antioxidante de un alimento guarda
relación directa con su contenido de compuestos polifenólicos, los cuales
actúan neutralizando las especies reactivas de oxígeno (EROS). La
evaluación de la capacidad antioxidante de las frutas permite conocer su
actividad antioxidante que adquirirá el organismo a través de su
consumo.
En relación a la determinación de polifenoles totales mediante el Método
Folin-Ciocalteau, el contenido de polifenoles totales en el fruto de
28
carambola, fue 120.2 mg equivalentes de ácido gálico/100 gramos de
fruto fresco, mientras que para la hoja se obtuvo un valor de 239.5 mg
equivalentes de ácido gálico/100 gramos de hoja fresca (Tabla 4),
observándose una marcada diferencia estadísticamente significativa (p =
0.000) con un α < 0,001
Tabla 4. Contenido de Polifenoles Totales en Fruto y Hoja
de Averrhoa carambola L. (carambola).
Carambola
Polifenoles (mg Eq. de Ácido gálico/100 g
de muestra) p valor (&&&)
Mediana (&) P25 – P75 (&&)
Fruto 117.8 114.8 – 131.6
0.000
Hoja 250.6 240.2 – 265.8
(&) Mediana (&&) Percentil (&&&) α < 0.001
Con respecto a la determinación de flavonoides, se obtuvo para el fruto
un contenido de 5.22 mg Equivalentes de catequina/100 gramos de fruta
fresca y para la hoja 5.66 mg Equivalentes de catequina/100 gramos de
hoja fresca (Tabla 5), no existiendo diferencia estadísticamente
significativa.
29
Tabla 5. Contenido de Flavonoides en Fruto y Hoja de
Averrhoa carambola L. (carambola).
Carambola
Flavonoides
(mg Eq. de Catequina/100 g
de muestra)&
p valor(&&)
Fruto
5.22 ± 1.18
0.508
Hoja 5.66 ± 1.49 (N.S.)
(&) Promedio ± D.E.
(&&) α < 0.001
En el presente trabajo, también se observó una alta correlación directa
entre el contenido de polifenoles y la capacidad antioxidante, usando el
método FRAP (Figura 2), observándose, que el fruto con
aproximadamente la mitad de polifenoles que la hoja presenta una similar
capacidad antioxidante.
Figura N°2. Correlación de Polifenoles con la Capacidad Antioxidante según método
FRAP en el Fruto y Hojas de Averrhoa carambola L. (carambola)
30
DISCUSIÓN
Numerosos estudios epidemiológicos muestran que, cada vez es más
evidente la existencia de una relación inversa entre el consumo de
alimentos que contienen sustancias antioxidantes y el riesgo de que se
produzcan diversas enfermedades crónicas no transmisibles en el ser
humano (Rodríguez, Menéndez & Trujillo, 2001).
Asimismo, se ha observado una disminución del daño producido por los
radicales libres cuando se han usado dietas que contienen sustancias
antioxidantes. A pesar de estas evidencias, aún es necesario ahondar en
los estudios en cuanto a la capacidad antioxidante de los alimentos,
especialmente frutas y verduras, ya que se siguen descubriendo nuevos
compuestos antioxidantes con elevada acción protectora y su acción en
el organismo humano aún se continúa investigando ya que los radicales
libres no solamente afectan a las proteínas, lípidos y ADN, sino que
afectan las vías de señalización celular, hecho que constituye una de las
estrategias para prevenir o diseñar nuevos medicamentos, y ello sería de
gran utilidad debido a que permitiría reducir los efectos nocivos de los
radicales libres (Pastene, 2009a).
El ensayo FRAP mide la capacidad de reducir el complejo amarillo
férrico-TPTZ a un complejo azul ferroso-TPTZ. Un estudio realizado para
31
determinar la capacidad antioxidante de frutas y verduras cultivados en
Chile (Araya, Clavijo & Herrera, 2007), presentó valores, para el kiwi
(0.504 mmoles Fe-II/100 g de muestra), manzana fuji (0.458 mmoles Fe-
II/100 g de muestra), manzana roja (0.671 mmoles Fe-II/100 g de
muestra) y pera (0.485 mmoles Fe-II/100 g de muestra), que son mucho
menores a los obtenidos para el fruto (1.288 mmoles de Fe-II/100 g de fruto
fresco) y la hoja (1.618 mmoles de Fe- II/100 g de hoja fresca) de Averrhoa
carambola L. (carambola).
Asimismo, en un estudio realizado con el propósito de establecer la
contribución de la vitamina C a la capacidad antioxidante total de frutas y
verduras utilizando la técnica FRAP, se observó que la fresa tiene el
valor más elevado (1.59 mmoles Fe-II/100 g de fruta fresca), semejante a
lo obtenido en el presente estudio en fruto (1.288 mmoles Fe-II/100 g de
fruta fresca) y hoja (1.618 mmoles Fe-II/100 g de hoja fresca) de
Averrhoa carambola L. (carambola), correspondiéndole valores menores
al limón (1.04 mmoles Fe-II/100 g de fruta fresca), naranja (0.94 mmoles
Fe-II/100 g de fruta fresca), uva (0.80 mmoles Fe-II/100 g de fruta
fresca), manzana verde (0.63 mmoles Fe-II/100 g de fruta fresca),
mandarina (0.54 mmoles Fe-II/100 g de fruta fresca), mango (0.51
mmoles Fe-II/100 g de fruta fresca), plátano (0.42 mmoles Fe-II/100 g de
fruta fresca), piña (0.35 mmoles Fe-II/100 g de fruta fresca) y pera china
(0.15 mmoles Fe-II/100 g de fruta fresca) que tiene el valor de FRAP más
bajo (Szeto, 2002).
La capacidad antioxidante de la hoja (1.618 mmoles Fe-II/100 g de hoja
fresca) evaluada en el método FRAP es mayor que la encontrada en el
fruto (1.288 mmoles Fe-II/100 g de fruta fresca) de Averrhoa carambola L
(carambola).
32
En un estudio donde se evalúa la capacidad antioxidante de diversos
genotipos de mora por el método FRAP se obtuvo valores mucho
mayores que con el fruto y la hoja de carambola, como podemos
observar con el Rubus cyri Juz (0.0714 mmoles Fe-II/g de fruta), Rubus
georgicus Focke (0.0963 mmoles Fe-II/g de fruta), Rubus insularis F.
Aresch (0.0971 mmoles Fe-II/g de fruta) y Rubus ursinus (Cham &
Schitdl) G4-19 (0.0935 mmoles Fe-II/g de fruta) y Rubus ursinus G4 bulk
(0.0798 mmoles Fe-II/g de fruta), del mismo modo sucede con la
frambuesa Rubus niveus Thumb, pero, los valores del fruto y hoja de la
carambola son semejantes a la frambuesa Rubus innominatus S. Moore.
La vitamina C es un nutriente esencial para los humanos. Una deficiencia
en su ingesta causa una enfermedad llamada escorbuto. Esta vitamina
se encuentra en forma natural en diversas frutas y verduras (Davey M.,
2000). Se ha relacionado el contenido de vitamina C de las frutas y
verduras con efectos positivos en la salud, debido a su acción
antioxidante y, por lo tanto su ingesta puede contribuir a una adecuada
actividad antioxidante en el organismo humano (Rojas-Barquera &
Narváez-Cuenca, 2009b). La cantidad de la vitamina C en las frutas y
verduras se modifica ampliamente, presentando el camu camu el valor
más elevado, sobrepasando los 2000 mg/100 g de fruta fresca (Andrade,
Aragao, Galeazzi & Ferreira, 1995), en contraste, la acerola (1,300
mg/100 g de fruta fresca) y la rosa canina (1,000 mg/100 g de fruta
fresca) presentan contenido mucho más bajo que el camu camu (Davey,
Montagu, Inzé, Sanmartin, Kanellis, Smirnoff, Benzie, Strain, Favell y
Fletcher, 2000). En lo que respecta al contenido de vitamina C de la
Averrhoa carambola L. (carambola), el fruto presenta casi el doble (62.22
mg/100 g de fruto fresco) que lo encontrado en la hoja (33.62 mg/100 g
de hoja fresca).
33
Se debe mencionar, que el fruto de la carambola tiene valores de
vitamina C semejantes al kiwi (60 mg/100 g), fresa (60 mg/100 g),
naranja (50 mg/100 g), y limón (50 mg/100 g), mientras que la hoja tiene
valores mayores que, la piña (12-25 mg/100 g), el plátano (10-30 mg/100
g), la mora (15 mg/100 g), las manzanas (2-10 mg/100 g), y la granada
(6 mg/100 g).
Al evaluar la capacidad antioxidante de la Averrhoa carambola L.
(carambola) con la técnica del DPPH* encontramos que la hoja presenta
un menor IC50 (2.91 mg/mL) que el fruto (3.75 mg/mL), lo que demuestra
que la hoja tiene una mayor capacidad antioxidante, esto podría
explicarse por la mayor concentración de polifenoles que tiene la hoja
(239.5 mg equivalentes de ácido gálico/100 g de hoja fresca) con
respecto al fruto (120.2 mg equivalentes de ácido gálico/100 g de fruta
fresca), como se ha observado en otros trabajos donde el efecto
antioxidante es ejercido, principalmente, por los polifenoles, como se
puede observar para el Abdean blackberry (2,167 mg equivalentes de
ácido gálico/100 g de fruta).
Los valores de polifenoles pueden verse modificados dependiendo de los
métodos utilizados para la extracción como lo señalan en algunas
publicaciones (Garzón, 2009), al parecer el mejor solvente utilizado para
la extracción de polifenoles es el metanol, por su polaridad y su
capacidad de solubilización para dichos compuestos (Sobhy, Mohsen &
Anmar, 2009). Por otro lado, la concentración de polifenoles también va a
ser afectada por los suelos de donde proceden y la estación del año en
que se producen (Connor, Luby, Tong, Finn & Hancock, 2005).
En una publicación (Reddy, 2010) donde investigan sobre la actividad
antioxidante, muestran que los polifenoles se encuentran en valores
34
altos, semejantes a los hallados en la hoja de la carambola (239.5 mg
equivalentes de ácido gálico/100 g de hoja), como el mango (307 mg
equivalentes de ácido gálico/100 g de muestra), manzana (232 mg
equivalentes de ácido gálico/100 g de muestra) y granada (219 mg
equivalentes de ácido gálico/100 g de muestra), pero otros como la
naranja (70 mg equivalentes de ácido gálico/100 g de muestra), papaya
(62 mg equivalentes de ácido gálico/100 g de muestra), piña (48 mg
equivalentes de ácido gálico/100 g de muestra) y plátano (43 mg
equivalentes de ácido gálico/100 g de muestra) se encuentran en valores
menores a los del fruto de la carambola (120.02 mg equivalentes de
ácido gálico/100 g de muestra) y hoja (239.5 mg equivalentes de ácido
gálico/100 g de muestra) de carambola.
En otro estudio (Wolfe, 2003) sobre capacidad antioxidante en cáscara
de diversas variedades de manzana muestran en sus resultados que el
contenido de polifenoles en pulpa y pulpa + cáscara de las variedades
Rome beauty, Idared , Cortland y Golden delicious son semejantes (entre
90-110 y entre 20-180 mg equivalentes de ácido gálico/100 g de muestra
respectivamente) al encontrado en el fruto (120.2 mg equivalentes de
ácido gálico/100 g de fruto) de la carambola, mientras que la hoja de la
carambola (239.5 mg equivalentes de ácido gálico/100 de hoja) muestra
contenidos menores que los encontrados en las cáscaras de dichas
variedades de manzanas (entre 300 y 600 mg equivalentes de ácido
gálico/100 g de muestra).
En diversas publicaciones mencionan que la capacidad antioxidante de
los alimentos de origen vegetal se debe principalmente a la alta
concentración de polifenoles, flavonoides o vitamina C, y en el presente
trabajo, se observó una alta correlación directa entre el contenido de
polifenoles y la capacidad antioxidante usando el reactivo FRAP,
35
evidenciándose que, al parecer, el fruto muestra una mayor actividad de
los polifenoles ya que con la mitad de éstos logra similar capacidad
antioxidante que la hoja de la Averrhoa carambola L. (carambola).
Asimismo, se observó que el contenido de flavonoides en fruto (5.222 mg
equivalentes de catequina/100 g de fruto) y hoja (5.663 mg equivalentes
de catequina/100 g de hoja) de la carambola son mucho menores que el
contenido de pulpa (40 y 50 mg equivalentes de catequina/100 g de
muestra), pulpa + cáscara (50 y 90 mg equivalentes de catequina/100 g
de muestra) y cáscara (150 y 300 mg equivalentes de catequina/100 g de
muestra) de manzana de las variedades Rome beauty, Idared, Cortland y
Golden delicious mostradas por Wolff, 2003.
La frambuesa tiene un alto contenido de compuestos fenólicos,
observándose en las variedades Heritage, Kiwigold, Goldie y Anne
valores entre 359 - 512 mg equivalentes de ácido gálico/100 g de fruta;
pero específicamente, con respecto a su contenido de flavonoides dichos
valores se encuentran entre 63 - 103 mg equivalentes de catequina/100
g de fruta (Bickers y Athar, 2006), que son mayores que los encontrados
en el fruto (5.222 mg equivalentes de catequina/100 g de fruto) y en la
hoja (5.663 mg equivalentes de catequina/100 g de hoja) de la
carambola.
En cuanto al poder reductor de Averrhoa carambola L. (carambola) se
obtuvo un mayor poder reductor con la hoja a las diferentes
concentraciones utilizadas, que estuvo comprendida entre 0.833 mg/mL y
4.177 mg/mL, el mismo que guarda una relación directa con la
concentración, es decir, a mayor concentración de la muestra mayor
poder reductor.
36
El poder reductor de un alimento guarda estrecha relación con su
capacidad antioxidante, ya que evidencia la eficiencia que tendrían los
componentes de una muestra biológica para ceder electrones o átomos
de hidrógeno a un radical libre y, de esta manera, evitar su propagación y
por consiguiente el daño potencial que ocasionaría a una célula. El
comportamiento anteriormente descrito se ha observado en cuatro
variedades de Flammulina velutipes, hongos que se diferencian por tener
colores diferentes, habiendo mostrado una mayor capacidad reductora
en la muestra III conocida como variedad Fxuexin (Zhang, Jin, Ly, Fan,
Pan & Fan, 2013). Asímismo, la Caryota urens L., exhibe una capacidad
reductora similar a la observada con los hongos anteriormente descritos
(Ananth, Sivasudha, Rameshkumar, Jeyadevi & Aseervatham, 2013).
37
CONCLUSIONES
1. La hoja de la Averrhoa carambola L. (carambola) tiene una mayor
capacidad antioxidante que el fruto, demostrado por el método FRAP,
corroborado por un mayor poder reductor y un menor valor IC50
(DPPH*).
2. La vitamina C en el fruto, se encuentra en mayor concentración que en
la hoja de Averrhoa carambola L. (carambola), mientras que la
concentración de polifenoles totales fue mayor en la hoja, pero, siendo
los del fruto los más eficientes. Por otro lado, los flavonoides presentan
una concentración semejante en fruto y hoja.
3. La Averrhoa carambola L. (carambola) tiene una buena capacidad
antioxidante frente a sistemas generadores de radicales libres.
38
RECOMENDACIONES
1. Incentivar un mayor consumo del fruto de Averrhoa carambola L.
(carambola).
2. Promover la formulación de productos utilizando el fruto y la hoja de
Averrhoa carambola L. (carambola).
3. Seguir realizando más estudios sobre la actividad antioxidante del fruto
y hoja de Averrhoa carambola L. (carambola).
39
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Ananth, D., Sivasudha, T., Rameshkumar, A., Jeyadevi, R. &
Aseervatham, S. (2013). Comparative Study on antioxidant activity of four
varities of Flammulina velutipes with different colour. International Journal
of Food Science & Technology, 48:1057-1064.
Andrade, A., & Martins, G. (2007). Aspectos morfológicos de folhas na
diferenciacao de variedades de carambola. Revista Brasileira de
Fruticultura, 29(2), 386-388.
Andrade, J., Aragao C., Galeazzi, M., Ferreira, S. (1995). Changes in the
concentration of total vitamin C during maturation and ripening of camu-
camu (Myrciaria dubia (H.B.K.) McVaugh) fruits cultivated in the upland of
Brasilian central Amazon. Acta Horticulturae 370: 177-180.
Araya, H., Clavijo, C. & Herrera, C. (2006). Antioxidant capacity of fruits
and vegetables cultivated in Chile. Archivos Lationamericanos de
Nutrición, 56(4), 361-365).
40
Avello, M., & Suwalsky, M. (2006). Radicales libres, antioxidantes
naturales y mecanismos de protección. Atenea (Concepción), (494), 161-
172.
Beneficios de la vitamina C en fumadores con enfermedad coronaria.
(2000). Revista Panamericana de Salud Pública, 8(5), 357-357.
Bickers, D., & Athar M. (2006). Oxidative stress in the Pathogenesis of
Skin Disease. Journal of Investigative Dermatology, 126, 2565-2575.
Cao, G., Wang, H., & Prior, R. (1996).Total Antioxidant Capacity of Fruits.
Journal Agricultural Food Chemistry, 44(3), 701-705.
Carvajal de Pabón, L. (2011). Algunas especies de Passiflora y su
capacidad antioxidante. Revista Cubana de Plantas Medicinales, 16(4),
354-363.
Castilla, R., Huerta, P., Carrasco, R., & Rodrigo, R. (2003). Estrés
oxidativo y daño renal. CIMEL, 8 (1), 44-53.
Castillo, K., Castillo, H., & Huamán, J. (2013). Efecto de la Averrhoa
carambola L. o “carambola” vs. gemfibrozilo sobre el perfil lipídico en
Rattus rattus var. albinus. Acta Médica Peruana, 30(3), 136-141.
Céspedes, E., Rodríguez, K., Llópiz, N., & Cruz, N. (2000). Un
acercamiento a la teoría de los radicales libres y el estrés oxidativo en el
envejecimiento. Revista Cubana de Investigación Biomédica, 19(3), 186-
190.
Connor A., Finn C., & Alspach P. (2005). Genotypic and Environmental
Variation in Antioxidant Activity and Total Phenolic Content among
41
Blackberry and Hybridberry Cultivars. Journal of American Society of
Horticulaturae Science, 130(4), 527-533.
Chand, N., Chaulya, Kanti, P., Mukherjee, A. (2010). In vitro free radical
scavenging activity of methanol extract of rhizome of Cyperus tegetum
Roxb. (Cyperaceae). International Journal of Current Pharmaceutical
Research, 2(3), 39-43.
Chimeneos, E. (2008). Aspectos prácticos en la prevención del cáncer
oral. Avances en Odontoestomatología, 24(1), 61-67.
Chuquimia, F., Alvarado, J., Peñarrieta, J., Bergenstahl, B., & Akeeson,
B. (2008). Determinación de la capacidad antioxidante y la cuantificación
de compuestos fenólicos y flavonoides de cuatro especies vegetales de
la región andina de Bolivia. Revista Boliviana de Quimica. Bolivia, 25(1),
75-83.
Cuerda, C., Luengo, M., Valero, A., Vidal, A., Burgos, R., Calvo, L., et al.
(2011). Antioxidantes y diabetes mellitus: revisión de la evidencia.
Nutrición Hospitalaria, 26 (1), 68-78.
Davey. M. (2000). Plant L-ascorbic acid: Chemistry, function, metabolism,
bioavailability and effects of processing. Journal of the Science of Food
and Agriculture, 80, 825-860.
De Souza, M., Raga, A., & Zucchi, A. (2000). Incidencia de Anastrepha
obliqua (Macquart) y Ceratitis capitata (Wiedemann) (Diptera:
Tephritidae) en carambola (Averrhoa carambola L.) en ocho localidades
del estado de Sao Paulo, Brasil. Anales de la Sociedad de Entomolía.
Brasil, 29(2), 367-371.
42
Delgado, L., & Martínez, G. (2009). El estrés oxidativo en la enfermedad
cardiovascular: evidencias para un tratamiento más integral. Revista
Cubana de Farmacia, 43(1).
Dewanto, V., Orthofer, R., & Lamuela-Raventos, R. (1999). Analysis of
total phenols and other oxidation substrates by means of Folin-Ciocalteu
reagent. Methods of Enzymology, 299(1), 152-178.
Doroteo, V., Díaz C., Terry. C., & Rojas. R. (2013). Compuestos fenólicos
y actividad antioxidante in vitro de 6 plantas peruanas. Revista de la
Sociedad Química del Perú, 79(1), 13-20.
Elejalde, J. (2001). Estrés oxidativo, enfermedades y tratamientos
antioxidantes. Anales de Medicina Interna, 18(6), 326-335.
Enfermedades producidas por radicales libres. (1997). Revista
Panamericana de Salud Pública, 1(5), 399-400.
Ferreira, E. B. (2008). Hypoglycemic effect of hidroalcoholic extracts of
leaves of Averrhoa carambola L. (Oxalidaceae). Revista Brasileira de
Farmacognosia, 18(3), 339-343.
García, B., Saldaña, A., & Saldaña, L. (2013). El estrés oxidativo y los
antioxidantes en la prevención del cáncer. Revista Habanera de Ciencias
Médicas, 12 (2), 187-196.
García, M., Vicente, L., Rojo, M. &, Sánchez, E. (2001). Plantas con
propiedades antioxidantes. Revista Cubana de Investigación Biomédica,
20(3), 231-235.
43
Garzón G., Riedl K., & Schwartz S. (2009). Determinacion of
Anthocyanins, Total Phenolic Content, and Antioxidant Activity in Andes
Berry (Rubus glaucus Benth). Journal of Food Sciencie: Food Chemistry,
74(3), 227-232.
Guerra, E. (2001). Estrés oxidativo, enfermedades y tratamientos
antioxidantes. Análisis de Medicina Interna, 18(6), 326-335.
Guija, H., Troncoso L. & Guija. E. (2005). Propiedades prooxidantes del
camu camu (Myrciaria dubia). Anales de la Facultad de Medicina.
Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 66(4), 261-268.
Gutiérrez, T., Hoyos, O., Páez, M. (2007) Determinación del contenido de
ácido ascórbico en uchuva (Physalis peruviana L.), por cromatografía
líquida de alta resolución (CLAR). Facultad de Ciencias Agropecuarias,
5(1), 70-79.
Gutiérrez, A., Ledesma, L., García, I., & Grajales, O. (2007). Capacidad
antioxidante total en alimentos convencionales y regionales de Chiapas,
México. Revista Cubana de Salud Pública, 33(1).
Gutiérrez, J. (2006). ¿Qué sabe usted acerca de… radicales libres?
Revista mexicana de Ciencias Farmacéuticas, 37(4), 69-73.
Halliwell, B. (1992). Free radicals, antioxidants and human disease:
where are we now? Journal of Laboratory Clinical Medical, 119 (6), 598-
620.
44
Hernández-Varela, J., Moncayo, A., Fernández, V., & Sulbarán, B.
(2013). Actividad antioxidante de lámina flexible de mango (Mangifera
indica). Revista de la Sociedad Química del Perú, 79(2), 175-177.
Hidalgo, M., Fernández, E., Cabello, A., Rivas, C., Fontecilla, F., Morales,
L. et al. (2006). Evaluación de la respuesta oxidante en Chiton granosus
Frembly 1928 (Mollusca: Polyplacophora) a contaminantes oxidativos.
Revista de biología marina y oceanografía, 41(2), 155-165.
Jagota, S.K., & Dani, H.M. (1982). A new colorimetric technique for the
estimation of vitamin C using Folin phenol reagent. Analysis
Biochemistry, 127 (1), 178-182.
Kalpna, R., Mital, K., & Sumitra, Ch. (2011) Vegetable and fruit peels as a
novel source of antioxidants. Journal of Medicinal Plants Research, 5(1),
61-71).
Kodama, D., Goncalvez, A., Lajolo, F., & Genovese, M. (2010).
Flavonoids, total phenolics and antioxidant capacity: comparison between
commercial Green tea preparations. Ciencia y Tecnología de Alimentos.
Brasil, 30(4), 1077-1082.
Kuskoski, E. M., Asuero, A. G., Troncoso A. M., Mancini-Filho J. &
Roseane F. (2005). Aplicación de diversos métodos químicos para
determinar actividad antioxidante en pulpa de frutos. Food Sience and
Technology (Campinas), 25 (4), 726-732.
Luis, D., & Aller, R. (2008). Papel de los flavonoides del té en la
protección cardiovascular. Anales de Medicina Interna (Madrid), 25(3),
105-107.
45
Márquez, M., Yépez, E., Sútil-Naranjo, R., & Rincón, M. (2002). Aspectos
básicos y determinación de las vitaminas antioxidantes E y A.
Investigación clínica, 43(3), 191-204.
Marsicano, I. J. (1994). Los radicales libres. GEN Revista de la Sociedad
Venezolana de Gastroenterología, 48 (1), 39-44.
Martínez, G. (2005). Especies reactivas del oxígeno y balance redox,
parte I: aspectos básicos y principales especies reactivas del oxígeno.
Revista Cubana de Farmacia, 39(3).
Mayor-Oxilia, R. (2010). Estrés oxidativo y sistema de defensa
antioxidante. Revista del Instituto de Medicina Tropical, 5(2), 23-29.
Mesa-Vanegas, A., Gaviria, C., Cardona, F., Sáez-Vega, J., Trujillo, S.,
Rojano, B. (2010). Actividad antioxidante y contenido de fenoles totales
de algunas especies del género Calophyllum. Revista Cubana de
Plantas Medicinales, 15(2), 13-26.
Moyer, A., Hummer, E., Finn, E., Frei, B., & Wrolstad, E. (2002).
Anthocyanins phenolics and antioxidant capacity in diverse small fruits:
Vaccinium, Rubus and Ribes. Journal Agricultural Food Chemistry.
50:519-525.
Muedas, G., La Rosa, A., & Robles, J. (2008). Evaluación electroquímica
de la actividad antioxidante del extracto alcohólico de la Bauhinia
guianensis var. Kuntiana Aubl. Revista de la Sociedad Química del Perú,
74(4), 233-246.
46
Muñoz, A. (2007). Evaluación de la capacidad antioxidante y contenido
de compuestos fenólicos en recursos vegetales promisorios. Revista de
la Sociedad Química del Perú, Lima, 73(3), 142-149.
Núñez, A. (2011). Terapia antioxidante, estrés oxidativo y productos
antioxidantes: retos y oportunidades. Revista Cubana de Salud Pública,
37(5), 644-660.
Oyaizu M. (1986). Studies on products of browning reactions:
antioxidative activities of products of browning reaction prepared from
glucosamine. Journal of Nutrition, 44: 307-315.
Pastene, E. (2009). Estado actual de la búsqueda de plantas con
actividad antioxidante. Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas
Medicinales y Aromáticas, 8(6), 449-455.
Pastene, E., Gómez, M., Speisky, H., & Núñez-Vergara, L. (2009). Un
sistema para la detección de antioxidantes volátiles comúnmente
emitidos desde especias y hierbas medicinales. Química Nova, 32 (2),
482-487.
Pereira, M., Steffens, R., Jablonski, A., Hertz, P., Ríos, A., Vizzotto, M., &
Flores, A. (2012). Characterization and Antioxidant Potential of Brazilian
Fruits from the Myrtaceae Family. Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 60, 3061-3067.
Pérez, G. (2003). Los flavonoides: antioxidantes o prooxidantes. Revista
Cubana de Investigación Biomédica, 22(1), 48-57.
47
Quiñones, M., Miguel, M., & Aleixandre, A. (2012). Los polifenoles,
compuestos de origen natural con efectos saludables sobre el sistema
cardiovascular. Nutrición Hospitalaria, 27(1), 76-89.
Reátegui, O., Guija, E., Soldevilla, P., Castillo, J., & Pérez-Reyes, S.
(2008). Determinación de la capacidad antioxidante de néctares de
frutas. Científica Perú, 5(2), 19-26.
Reddy, K., Sreeramulu, D., & Raghumath, M. (2010) Antioxidant activity
of fresh and dry fruits commonly consumed in India. Food Research
International, 43:285-288.
Restrepo, A., Cortés, M., & Rojano, B. (2010). Potenciación de la
capacidad antioxidante de fresa (Fragaria ananassa Duch.) por
incorporación de vitamina E utilizando la técnica de impregnación a
vacío. Vitae. Revista de la Facultad de Química Farmacéutica.
Universidad de Antioquia. Medellín, Colombia, 17(2), 135-140.
Rodríguez, M., Menéndez, R., & Trujillo, Y. (2001). Radicales libres en la
biomedicina y estrés oxidativo. Revista Cubana de Medicina Militar, 30
(1), 15-20.
Rojas-Barquera, D., & Narváez-Cuenca, C. (2009). Determinación de
vitamina C, compuestos fenólicos totales y actividad antioxidante de
frutas de guayaba (Psidiumguajava L.) cultivadas en Colombia. Química
Nova, 32(9), 2336-2340.
Sánchez, J., Martínez, G., & Faure, R. (2011). Efecto protector de los
polifenoles de Rhizophora mangle L. sobre el daño oxidativo a proteínas
y ADN. Revista Cubana de Plantas Medicinales, 16 (1), 1-12.
48
Sayago, A., Marín, M., Aparicio, R., & Morales, M. (2007). Vitamina E y
aceites vegetales. Grasas y aceites, 58(1), 74-86.
Sebal, H., Souli, A., Chehimi, L., Rtibi, K., Amri, M., El-Benna, J., & Sakly
M. (2013). In vitro and in vivo antioxidant properties of Tunisian carob
(Ceratoniasiliqua L.). Journal of Medicinal Plants Research, 7(2), 85-90.
Singleton, V., Orthofer, R., & Lamuela-Raventos, R. (1999). Analysis of
total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of
Folin-Ciocalteau reagent. Methods of enzymology, 299 (1), 152-178.
Sohby M., Ammar A., (2009). Total phenolic contents and antioxidant
activity of corn tassel extracts. Food Chemistry, 112, 595-598.
Spielvogeli, H. (2008). El lado oscuro del oxígeno. SCIENTIFICA, 6(1),
57-61.
Szeto Y., Tomlinson B., & Benzie I. (2002). Total antioxidant and ascorbic
acid content of fresh fruits and vegetables: implications for dietary
planning and food preservation. British Journal of Nutrition, 87, 53-59.
Szollosi, R. & Varga, I. (2002). Total antioxidant power in some species of
Labiatae (Adaptation of FRAP method). Acta Biologica Szegadiensis, 46
(3-4), 125-127.
Sudha, G., Sangeetha, M., Indhu, R. & Vadivukkarasi, S. (2011). In vitro
free radical scavenging activity of raw pepino fruit (Solanum muricatum
Aiton). International Journal of Current Pharmaceutical Research, 3(2),
137-140.
49
Troncoso, L. & Guija, E. (2007). Efecto antioxidante y hepatoprotector del
Petroselinum sativum L. (perejil) en ratas, con intoxicación hepática
inducida por paracetamol. Anales de la Facultad de Medicina, 68 (4),
333-343.
Urbina-Bonilla, A. (2008). Nuevo papel de los radicales libres de oxígeno
en el ejercicio ¿otra paradoja? Colombia Médica, 38(3), 266-275.
Vasconcelos, C., Araujo, M., Silva, B., & Conde-García, E. (2005).
Negative inotropic and chronotropic effects on the guinea pig atrium of
extracts obtaines from Averrhoa carambola L. leaves. Brazilian Journal of
Medical and Biological Research, 38(7), 1113-1122.
Vasconcelos, L., Gondim, S., Cruz, S., Mafra, A., Silva, A.., & Conde-
Garcia, A. (2008). Aqueous leaf extract of Averrhoa carambola L.
(Oxalidaceae) reduces both the inotropic effect of BAY K 8644 on the
guinea pig atrium and the calcium current on GH3 cells. Revista Brasileira
de Farmacognosia, 18(4), 539-543.
Venereo, J. ( 2002). Daño oxidativo, radicales libres y antioxidantes.
Revista Cubana de Medicina Militar, 31 (2), 126-133.
Wang, H., Cao, G., & Prior, Ronald, (1996). Total Antioxidant Capacity of
Fruits. Journal Agricultural Food Chemistry, 44(3), 701-705.
Wolfe, K., Wu, X., & Liu, H. (2003). Antioxidant activity of Apple peels.
Journal of Agricultural Food Chemistry. 51:609-614.
50
Zamora, D. (2007). Antioxidantes: micronutrientes en lucha por la salud.
Revista chilena de Nutrición, 34(1), 17-26.
Zapata, K., Cortés, F., & Rojano, B. (2013). Polifenoles y actividad
antioxidante del fruto de guayaba agria (Psidiumaraca). Información
Tecnológica, 24(5), 103-112.
Zapata, L., Gerard, L., Davies, C., Schvab, M. (2007). Estudio de los
componentes antioxidantes y actividad antioxidante en tomates. Ciencia
Docencia y Tecnología, 18(35), 175-193.
Zhang, Z., Jin, Q., Ly, G., Fan, L., Pan, H. & Fan, L. (2013). Chemical
constituents, in vitro antioxidant and antimicrobial potential of Caryota
urens L. Free Radicals and Antioxidants. 3:107-112.
Zorrilla, A., Eirez, M., & Izquierdo, M. (2004). Papel de los radicales libres
sobre el ADN: carcinogénesis y terapia antioxidante. Revista Cubana de
Investigación Biomédica, 23 (1), 51-57.
