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disordini non neoplastici dei globuli bianchi disturbi quantitativi disturbi qualitativi
• linfoadenopatie • disordini linfoproliferativi
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mielopoiesi
staminaletotipotente
staminalecommitted
mieloblastopromielocitamielocitametamielocitaband cellGN
14 giorni
GN(pool marginale & circolante)
6-8 ore 2 giorni
GN
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proliferazione& maturazione
funzionale(50%)
riserva(50%)
riservaprogenitori
midollo sangue periferico
7 giorni 7 giorni 6-8 ore
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iporigenerativa
ridotta sopravvivenza
leucopenia(confermata)
aumentato consumo (sepsi grave)
aumentata distruzione
immuno-mediatafarmaciipersplenismoleucaferesiPNH
aumento pools di riserva e marginale
emodialisiviremiaipersensibilita’emolisiidiopatica
base metabolicaindotta da farmaci base citotossica
base idiosincrasicaaplasia, ipoplasia midollare congenita
acquisitafibrosi midollare, tumori metastatici, infezioni ematopoiesi inefficace
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proliferazione& maturazione
funzionale(25%)
riserva(75%)
riservaprogenitori
midollo sangue periferico
pseudoleucopenia
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proliferazione& maturazione
funzionale(90%)
riserva(10%)
riservaprogenitori
midollosangue periferico
Leucopenia iporigenerativa
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Leucopenia:
riduzione dei globuli bianchi al di sotto dei valori normali
granulocitopenia (riduzione dei GN, GE, GB)
neutropenia (GN < 1.500 /l)neutropenia di grado lieve GN 1.000-1.500 /l neutropenia di grado moderato GN 500 - 1.000 /l neutropenia grave GN < 500 /l agranulocitosi GN assenti
eosinofilopenia (< 40 /l) stress acuto (steroidi/adrenalina)infiammazione acuta (IL-5)sindrome di Cushingsomministrazione di steroidi
basofilopenia ( < 10 /l) stress acuto (steroidi/adrenalina)infiammazione acuta (IL-5)ipertiroidismo
monocitopenia (< 200 /l)
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Neutropenia: sintomi clinici:
riduzione risposte infiammatoriefebbredolorerubortumor
infezioni ricorrenticute (stafilococco aureo)intestinali (gram neg)genitourinarie (gran neg)afte mucosa orofaringeasepsi
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Cause piu’ frequenti di neutropenia acquisita(danno midollare)
infezioni viralimononucleosi infettiva (EBV, CMV)HBVHIVHSVVZVparotiterosoliainfluenzaRSVmorbilloparvovirus
infezioni battericheTBCbrucellositifo
funghiistoplasmosi
farmacichemioterapici antibiotici neuropsicotropicicardiovascolarianalgesicianti-istaminici
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Leucocitosi > 11.000 WBC/mmc
Neutrofilia GN > 7.500/mmc aumento fisiologico (demargination) farmaci
stress adrenalinaattivita’ fisica cortisone convulsioni beta-agonistiansia
infezioni batteriche acute
danno tessutale ed infiammazioneinfartoustionimalattie del collagenereazioni di ipersensibilita’
stati dismetaboliciinsufficienza renale acutaeclampsiaketoacidosi
splenectomia
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shift maturativo a sinistra
shift maturativo a destra
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shift maturativo a sinistraforte shift maturativo a sinistra
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ipersegmentazione: 3/100 con piu’ di 5 lobi1/100 con 6 lobicarenza di ferrocarenza di vitB12
disturbi qualitativi dei globuli bianchi (I)
granulazioni tossicheinfezioniinfiammazioni
anomalia di Pelger-Huet autosomico dominante(1:6000)benigno
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sindrome di Chediak-Higashiautosomica recessivararagrave
disturbi qualitativi dei globuli bianchi (II)
deficit di MPO monociti e GNautosomico recessivo(1:2000)benigno
Anomalia di May-Hegglinautosomico dominanteraro
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numero assoluto linfociti 800-2600/mmcnumero assoluto linfociti T 800-2200/mmc numero assoluto CD4+ >400/mmc numero assoluto CD8+ 250-750/mmc rapporto CD4/CD8 >0.9
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Linfocitopenia:
< 1.500 /l adulti< 3.000 /l bambini
terapia con steroidi/ chemioterapia / radioterapia
infezioni virali/battericheHIVTBC
neoplasielinfoma di Hodgkinleucemia acutatumori solidi
malattie cronichesarcoidosilupussclerosi multiplamiastenia gravesindrome di Guillain Barre’
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Linfocitosi
assoluta(>4000/mm3)
relativa(<4000/mm3)
neutropenianormale nei bambini sotto i 2 anni infezione virale acuta ipertiroidismo morbo di Addison
influenza pertosse tubercolosi parotite varicella Herpes Simplex Virus rosolia Brucellosi mononucleosi infettiva epatite virale farmaci CLL
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LINFOADENOPATIA
definizione:linfonodi di dimensioni anormalilinfonodi di consistenza anormalelinfonodi palpabili in numero aumentato
epidemiologia:eta’ > 40 anni: 4% rischio di tumoreeta’ < 40 anni: 0.4% rischio di tumore
linfoadenopatialocalizzata: 1 sola area interessatageneralizzata: 2 o piu’ aree interessate non contigue
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Cause piu’ frequenti di linfoadenopatia
infezioni tumori linfaticiEBV linfoma di HodgkinToxoplasmosi linfoma non-HodgkinCytomegalovirus LLCFebbre da graffio di gatto LLAFaringite LMATubercolosiScarlattina tumori metastaticiVaricella Zoster Virus melanoma
HBV carcinoma mammarioHIV carcinoma polmonare
Rosolia carcinoma gastricoparotite carcinoma prostatico
carcinoma renalemalattie del collagene e vasculiti tumori del collo
RALES
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Anamnesi
graffio da gatto (Toxoplasmosi) ingestione di carne cruda (Toxoplasmosi) puntura di zecca (Lyme Disease) esposizione alla TBCtossicodipendenze (IV)trasfusioniviaggi in Africa, Asia, Australia
Leishmaniafebbre tifoide
Diagnosi:
emocromo ed ematochimici completisierologia per HIV, EBV, toxo, CMV, HBV, HCVRx toraceEco addomeBiopsia linfonodale (FNA o biopsia)
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linfonodo iperplastico linfoma diffuso a piccole cellule
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(^) incremento del 150% dal 1950, con netto incremento per NHL rispetto ad HD(*) notevole variabilità a seconda dell'età: 70 casi/100.000 adulti di oltre 80 anni
PatologiaNo/100.000/
per anno
Linfomi (^) 15-20
Mielomi 3-5
Leucosi Acute 8-10
Leucosi Croniche (*) 5-10
Incidenza delle principali neoplasie ematologiche
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Tabella 1. Dati complessivi di incidenza di linfomi in diversi stati Europei nel periodo 1985-1992e negli Stati Uniti d’America nel periodo 1990-1996.
Nazione No. di casi/anno/100.000 abitanti§
Maschi Femmine TotaleDanimarca 19,5 14,5 16,8Finlandia 20,9 15,8 18Francia 16,2 10,7 13,2Gran Bretagna 15,0 9,8 12,2Italia* 17,2 12,6 14,7Olanda 21,8 12,2 16,4Spagna 10,4 8,7 9,5Stati Uniti d’America 19,4 12,1 15,5Media 17,5 12,0 14,5§ i valori sono stati ottenuti dal lavoro citato in referenza 18 e dai dati del SEER Cancer StatisticsReview, 1973-1996, accesso a: http://www-seer.ims.nci.nih.gov*i dati si riferiscono al registro di Firenze, ottenuti su una popolazione di 1,2 milioni
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Lymphoid malignancies: the last 50 years
Incidence +150%
Mortality + 90%
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Several factors may explain the lower increase in mortality compared to incidence, in particular:
BETTER DIAGNOSIS
MORE EFFECTIVE THERAPY
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Fattori associati ad aumentato rischio di insorgenza di linfoma non-Hodgkin (I)
Fattori generali di rischio aumentato
Età avanzata Sesso maschile Razza bianca Stato socioeconomico avanzato
Stato di immunodepressione
Congenita sindrome di Wiskott-Aldrich (WAS) common variable immunodeficiency (CVID) ataxia teleangectasia (AT) severe combined immunodeficiency (SCID) X-linked lymphoproliferative disorder (XLP)
Acquisita trapianto d’organo (fegato, cuore, polmone, rene e midollo emopoietico) terapie con immunosoppressori AIDS
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Cronica stimolazione antigenica
Malattie autoimmuni Sindrome di Sjögren Tiroidite di Hashimoto Artrite reumatoide Lupus eritematoso sistemico Morbo celiaco Gastrite da Helicobacter pylori Flogosi croniche intestinali Dermatite erpetiforme
Sostanze tossiche e farmaci
Utilizzate per lo più in ambiente lavorativo Erbicidi Pesticidi Solventi Tinture per capelli Fumo Difenilidantoina
Virus
EBV HTLV-I HTLV-II HHV-8 HHV-6 HIV HCV
Fattori associati ad aumentato rischio di insorgenza di linfoma non-Hodgkin (II)
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APPROCCIO DIAGNOSTICO:
biopsia linfonodale
biopsia osteo-midollare
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iperplasia linfonodale
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Linfoma di Hodgkin
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Linfoma follicolare a piccole cellule clivate
Linfoma diffuso a piccoli linfociti
Linfoma diffusoa grandi cellule
PTLD
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APPROCCIO DIAGNOSTICO:
biopsia linfonodale
biopsia osteo-midollare
tipizzazione immunofenotipica
tipizzazione citogenetica
tipizzazione molecolare
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diagnosis of hematological malignancies:
1950: morfologia
1960: citochimica
1970: citogenetica
1980: mAbs
1990: biologia molecolare
2000: genomics and proteomics
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ANALISI AL FACS DI LINFOCITI OTTENUTI DA UN LINFONODO DI LINFOMA FOLLICOLARE
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Consequences of chromosomal translocations
regulatory coding
regulatory coding regulatory coding
regulatory coding
regulatory codingregulatory coding
translocation translocation
fusion protein (leukemia) deregulated transcription (lymphoma)
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t(8;14)(q24;q32) Burkitt cMYC IgH t(2:8)(q12;q24) Burkitt cMYC Ig-kappa t(8;22)(q32;q11) Burkitt cMYC Iglambda t(1;14)(q21;q32) ALL BCL9 IgH t(14;18)(q32;q21)FCL BCL2 IgH t(11:14)(q13;q32)MCL BCL1 IgH t(14;19)(q32;q13)B-CLL BCL3 IgH t(11;14)(p13;q11)T-ALL TCL2 TCR t(14;16)(q32;q23)MMe c-MAF IgH t(4;14)(p16;q32) MM FGFR3 IgH t(11;14)(q13;q32)MM BCL1?? IgH t(6;14)(p25;q32) MM IRF4 IgH t(9;14)(p13;q32) LPL PAX5 IgH inv(14)(q11;q32) PTCL TCR IgH
Chromosomal translocations in lymphoid malignancies
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normal bone marrow and karyotype
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Fluorescence In Situ Hybridisation (FISH)
In situ hybridisation is a technique to directly identify a specific region of DNAor RNA in a cell. Complementary probes linked to molecules such as biotin or fluorescein can be used to visualise the target, which can be chromosomes, interphase nuclei or tissue biopsy.
Advantages and Disadvantages of FISH Techniques
Direct in situ technique is relatively rapid and sensitive. No cell culture needed. Result easier to interpret than karyotype. Can combine FISH with immunostaining ie FICTION FISH will only provide information about the probe being tested, other aberrationswill not be detected.
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Illustration of FISH technique in metaphase and interphase cells. Normal interphase cells show 2 green spots (BCL-1) and 2 red spots (IgH). Abnormal interphase cells show 3 green spots and 2 red spots, but there must be co-localisation of 1 red and 1 green spot.
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FISH
CD5+ B-cell lymphoproliferative disorders
Trisomy 12, t (11;14), deletion 13q14, deletion of 17p(p53), deletion of 11q
Diffuse large B-cell lymphoma
3q27 deletion, t (14;18).
Suspected Burkitt lymphoma
t (8;14)
Suspected follicular lymphoma or CD5- B-cell lymphoproliferative disorder in bone marrow
t (14;18)
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