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Disciplina: Preparações citológicas e análises citogenéticas
Maria Isabel Afonso da Silva
Pós-Graduação em Genética
Basofilia e Acidofilia: coloração do Panótico
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Substratocatiônico
Substratoaniônico
Coranteaniônico
Corantecatiônico
Acidofilia
Basofilia
Afinidade eletrostática: um corante ionizado em uma solução reage com um substrato de carga
iônica oposta.
Reações Citoquímicas Mediadas por Ligações Eletrostáticas
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Basofilia Corantes Básicos (Catiônicos)
Azul de metileno
Azul de toluidina
Azul de alcian
Substrato carregado negativamente (aniônico) reage eletrostaticamente com um corante carregado positivamente (catiônico).
Corantes:
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Basofilia
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Fosfatos
(ácidos nucléicos)
Sulfatos
(Glicosaminoglicanos sulfatados)
Carboxilas
(Proteínas e açúcares ácidos)
Grupamentos negativos
Basofilia
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Xilydine Ponceau
Sírius Red
Orceína
Fast green
Os corantes reagem com os elementos que possuem cargas positivas na célulaEx: proteínas, que podem apresentar radicais básicos de seus aminoácidos ionizados (NH3+).
Reação de Acidofilia - Corantes ácidos (Aniônicos)
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Grupamentos se ionizam na dependência de pHs diferenciados
Obtidos a partir de solução tampão em que os corantes são diluídos
Reação de Acidofilia
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SUBSTRATO CORANTE EXEMPLOS
BASOFILIA
- aniônico
+ catiônico
- Azul de Toluidina - Azul de metileno - Azul de alcian - Hematoxilina
ACIDOFILIA
+ catiônico
- aniônico
- Xylidine ponceau - Sirius red - Fast Green - Eosina - Orceína
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Hematoxilina (+)
Substratos (-)
Núcleos
(grupam/os fostato do DNA e RNA)
ácidos nucleicos, aminoácidos ácidos (aspártico, glutâmico).
Azul
Eosina (-)
Substratos (+)
Citoplasma
(grupam/o NH2+)
aminoácidos básicos (lisina, arginina, histidina)
Rosa
Hematoxilina Eosina
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(Mus muscullus) (ASSIS & AZEREDO-
OLIVEIRA, 2002)
Hematoxilina Eosin
G
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A
Ep
ML
V
A
L
Normal
Próstata
5.0 µm
5.0 µm
Glândulas acessórias de morcego
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Basofilia: Como a hematoxilina- grupamentos fosfatos dos ácidos nucléicos (Núcleo)
Como a eosinaAmino de resíduos protéicos (NH3)- (núcleo e Citoplasma)
Acidofilia:
• Coloração de rotina para análise geral da morfologia das células sanguíneas• Facilita a identificação e diferenciação dos leucócitos
Panótipo (Hematocor-BiológicaR)
Reação de Acidofilia/Basofilia-Mediadas por Ligações Eletrostáticas
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PANÓTICO RÁPIDO LB
1)Finalidade:Conjunto para coloração rápida em hematologia.
2) Princípio:A extensão hematológica é submetida à ação de um fixador e duas soluções corantes, por meio de imersões, ao final da última, encontra-se pronto para leitura.
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CORANTE RAPIDO PARA HEMATOLOGIA COM1 FIXADOR-TRIARILMETANO E CORANTES / 2-XANTENO / 3-TIAZINA (de 500 ml)
O material deve ser mantido em temperatura ambiente, em local fresco, seco e protegido da incidência direta de luz solar
Panótico rápido 1: compõe-se por uma solução de triarilmetano a 0,1%. Panótico rápido 2: compõe-se por uma solução de xantenos a 0,1%. Panótico rápido 3: compõe-se por uma solução de tiazinas a 0,1%.
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Phrynops geoffroanus ou “Cágado-de-Barbelas”
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Amostras Sanguíneas
Punção Cardíaca
Seio venoso cervical
Descartada a primeira gota – técnica de esfregaço – extensões sangüíneas - fixação.
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Hemograma
• Contagem de trombócitos• Contagem diferencial dos leucócitos:
- monócitos
- linfócitos
- neutrófilos
- azurófilos
- heterófilos
- eosinófilos
- basófilos
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Células Vermelhas de Quelônios
Atuam na inflamação, promovem fagocitose; como célula hemostática
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Monócito• Combate a doenças infecciosas. • 3% a 20%
Linfócitos
• Citoplasma basofílico.• Resposta imune - infecção viral.•15% a 90%
Neutrófilo
• Respondem à infecções bacterianas.• 0,5% a 10%
Azurófilo+Monócito
2% a 5%
Células brancas de Quelônios
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Eosinófilo+Heterófilo
• Encontrados em infecções parasitárias.• 7% a 20%
Heterófilo
• Combate a infecções bacterianas.• 20% a 40%
Basófilo
• Reações imunes. • 10% a 25%
Células brancas de Quelônios
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Constituem o maior nº de células do sangueEm média 4,5 milhões na mulher e 5,5 milhões no homem.Medem aproximadamente 7,5 um de diâmetro
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Agranulócitos:• Núcleo sem segmentação e apenas granulações azurofílicas, quase imperceptíveis: • linfócitos e monócitos.
Granulócitos:• Núcleos lobulados de forma variável (polimórficos)• grânulos citoplasmáticos proeminentes, cujas características tintoriais diferem conforme a classe à qual pertence o granulócito: • neutrófilos, eosinófilos ou basófilos.
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Neutrófilo
• 40-70%• Medem 12-15um de diâmetro.• O citoplasma é acidófilo, com muitos grânulos finos. • O núcleo possui cromatina em grumos, com 2-5 lóbulos distintos• Função fagocitária.
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Linfócito
•20-50%• Medem de 6-12 um de diâmetro.• Possuem citoplasma basófilo, pequeno, escasso. • O núcleo apresenta-se esférico com cromatina bastante condensada.Linfócitos T: imunidade celularLinfócitos B: produção de anticorpos.
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Monócito
•2-10%• diâmetro de 12-20 um.• Apresenta um núcleo irregular, frequentemente lobulado, e citoplasma cinza-azulado opaco, com grânulos azurófilos finos.• São células precursoras do sistema fagocítico mononuclear.
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Eosinófilo
•0-8%• São ligeiramente maiores do que os neutrófilos: 12-17 um.• O núcleo é geralmente bilobulado, mas pode ser trilobulado.• Os grânulos são esféricos e maiores, preenchem o citoplasma e coram-se de avermelhado (eosina).• São importantes nas doenças alérgicas e parasitárias
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Basófilo
• 0-3%• Apresentam o citoplasma com granulações pretas e grandes, irregulares, que têm afinidade por corantes básicos.• O núcleo tem dois segmentos, geralmente encobertos pelas granulações.• Estão envolvidos nas reações imediatas de hipersensibilidade (asma).
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Plaquetas
• São pequenos fragmentos citoplasmáticos presentes no sangue circulante. • Medem 2-4um de diâmetro.• Atuam na coagulação sanguínea, na retração e dissolução de coágulos