diferenciação celular e terapia gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose,...
TRANSCRIPT
![Page 1: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/1.jpg)
Diferenciação Celular e Terapia Gênica
Martin Bonamino Divisão de Medicina Experimental – CPQ - INCA
![Page 2: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/2.jpg)
1953 a estrutura do DNA foi descrita e com isso foi descrito logo
em seguida o mecanismo da duplicação do DNA, explicando como
ele era transmitido de uma geração para outra.
Replicação semi-conservativa
![Page 3: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/3.jpg)
1966 – E.L. Tatum, no simpósio na Columbia University College of
Physicians and Surgeons in New York City intitulada: Reflections on
Research and the Future of Medicine:
“Finalmente nós podemos antecipar que os vírus serão usados
efetivamente para o benefício humano, em estudos com célula somática,
germinativas e possivelmente para terapia gênica. Nós podemos até ser
otimistas sobre a possibilidade de uma terapia baseada no isolamento ou
design, síntese e introdução de um novo gene em uma célula com um
gene defeituoso em um órgão em particular.”
1968 – New England Journal of Medicine recusa a publicação de um
artigo no qual French Anderson (pai da terapia gênica) teoriza a
possibilidade de atacar doenças hereditárias introduzindo no organismo o
gene correto ou substituindo aquele defeituoso.
![Page 4: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/4.jpg)
“Com objetivo de inserir um gene correto em uma célula contendo
uma mutação, será primeiro necessário isolar o gene em questão de
um cromossomo normal. Então esse gene tem que ser duplicado para
se ter várias cópias. E finalmente, será necessário incorporar a cópia
correta no genoma da célula defeituosa”; explicação de Dr. Anderson.
Enquanto as discussões das possibilidades de se resolver os
problemas genéticos sejam somente especulações, um dos métodos
mais promissores seria o desenvolvimento de vírus não patogênicos
capazes de transferir o material genético para a célula defeituosa.
Esses vírus seriam usados para infectar células em cultura contendo o
gene normal. Teoricamente, os vírus iriam incorporar a seqüência de
DNA desejada. Então os vírus seriam re-isolados, multiplicados em
cultura em massa, purificado e guardados para administração em
pacientes que sofressem da doença genética em questão....Isso seria
usado em benefício da humanidade.”
F.Anderson, 1968
![Page 5: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/5.jpg)
Histórico da Terapia Gênica Experimental:
1970 – Stanfield Rogers tratou 2 crianças com arginemia (falta de
arginase: altos níveis de arginina no sangue) – baseado na
observação que animais infectados com papiloma-vírus tinham níveis
reduzidos de arginina no sangue.
Premissas da terapia gênica: papiloma vírus – sem sucesso.
Conferência: “Ethical and Scientific Issues Posed by Human Uses of
Molecular Genetics" on May 15-16, 1975, in New York City
Artigo: Essas crianças eram epiléticas, tinham espasmos regulares,
eram grosseiramente retardadas, e progressivamente se tornavam
piores. Por essas razões, parece válido assumir o risco (que nós não
acreditávamos existir, de qualquer forma) da administração dos vírus
nessas crianças com o objetivo de substituir o gene da enzima
defeituosa.
![Page 6: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/6.jpg)
1977 – M. Wingler e R. Axel – 1º experimento bem sucedido
de transferência in vitro do gene da timidina cinase em célula
de mamíferos (Cell, Vol 11, 223-232, May 1977).
1980 – Martin Cline (primeiro trangênico) – terapia gênica
experimental em humanos não aprovada EUA, para
pacientes com ß- talassemia: células de medula óssea
geneticamente modificadas com gene da cadeia ß da
hemoglobina e reinfundida nas pacientes.
QUESÕES ÉTICAS
![Page 7: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/7.jpg)
Genes Dreams and Realities - (MacFarlane Burnet,
1971)
O estímulo para escrever esse livro veio da sensação de
que muito material sensacionalista têm sido escrito
sobre o futuro da medicina pelas descobertas da biologia
molecular.
A cada passo, pode se dizer que com o conhecimento
restrito que se tem, a terapia gênica é possível em
princípio, porém os problema práticos exigiriam um
exercito de brilhantes cientistas para supera-los. Na
minha opinião não existe nenhuma motivação que leve
ao financiamento do governo para pesquisas nesse
campo.
![Page 8: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/8.jpg)
Final da década de 80 - 1º protocolo aprovado pelo NIH para teste de terapia
gênica em humano: objetivo de demonstrar transferência gênica eficiente.
Transferência de genes do sistema imune para um paciente em estágio
avançado de neoplasia maligna.
1990 – Primeira doença aprovada para terapia gênica em humanos. Terapia
somática (LINFÓCITOS): deficiência em adenosina deaminase:
imunodeficiência combinada – objetivo clínico-científico.
1992 – primeira terapia gênica direcionada à um órgão interno –
hipercolesterolemia familiar;
1992 - primeira terapia gênica utilizando vetores não virais diretamente em
tumores.
1996 – fundação da primeira sociedade de terapia gênica (American Society
of Gene Therapy)
1º Janeiro 1999 – 1º Journal: Human Gene Therapy
1999 – Primeira morte devido a terapia gênica: Jesse Gelsinger (18 anos)
deficiência na ornitina transcarbamilase.
![Page 9: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/9.jpg)
2000 – Primeira cura completa pela terapia gênica somática (stem
cells): tratamento da imunodeficiência combinada severa X-linked
(Bubble boy syndrome); 3 desenvolveram leucemia e 1 morreu
(2003).
2003 – Primeiro produto para terapia gênica aprovado para venda
em qualquer lugar do mundo, licenciado na China: vetor de
adenovírus contendo gene p53.
2004 – Mais de 3000 pacientes vêm sendo tratados por terapia
gênica pelo mundo e 619 novos protocolos de clinical trail foram
submetidos ao NIH/FDA.
2005 – Primeiro clinical trial para retinose pigmentar aprovado nos
EUA.
2006 – Primeiro clinical trial para distrofia muscular.
![Page 10: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/10.jpg)
Procedimentos técnicos necessários à terapia gênica em humanos
(FDA):
• isolamento do gene e suas seqüências reguladoras
• determinar quais são as células afetadas
• dispor de um mecanismo eficiente (vetores)
para inserir o gene nas células especificadas.
• dispor de tempo para análise.
• que todos os procedimentos não apresentem
efeitos colaterais indesejáveis.
![Page 11: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/11.jpg)
Os riscos da terapia gênica:
• Resposta imune a proteína produzida pelo gene inserido
causando inflamação.
• Mutação insercional.
• O gene saudável introduzido pode promover a síntese de muita
proteína, antes defeituosa, levando a outros problemas.
• Outros genes podem ser acidentalmente entregue as células.
• Os vetores pode atingir outras células não afetadas pelo defeito
genético, e então provocar algum problema.
• o vetor viral pode se tornar infectivo/ contagioso.
![Page 12: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/12.jpg)
•Transferência
(em pacientes com mutação não funcional ou deleção de um gene )
•Correção
(reverter mutação específica em um gene alvo)
•Amplificação
(aumentar a expressão do gene alvo)
•Indução de morte
(introdução de gene “killer”)
•Silenciamento
(inibição da expressão de um gene)
Engenharia genética
![Page 13: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/13.jpg)
Formas de aplicação do vetor na Terapia Gênica
In vivo:
# mais direto
# atinge diversas células
# promotores específicos
# direcionamento vetor
Ex vivo: # autólogo/ # seleciona somente célula com novo gene/ # - resp. imune
![Page 14: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/14.jpg)
Vetores para Transferência
Gênica
![Page 15: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/15.jpg)
Sistemas de entrega
Virais: Não virais:
Retroviruses Métodos físicos
Herpes simplex virus Métodos químicos
Adenovírus
Adenovírus associados
![Page 16: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/17.jpg)
Vetores não virais
• Mais recentes na terapia gênica
• Não imunogênicos
• Uso repetido
• Sem mutação insercional
• Transdução in vivo limitada
Principais barreiras:
1. Entrada na célula
2. Degradação citoplasmática
3. Transporte até o núcleo
4. Entrada no núcleo
![Page 18: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/18.jpg)
Métodos físicos:
Mecanismo de entrega dos vetores não virais
Injeção intracelular
ou microinjeção
Pequena
proporção de
células
Produção de
trangênicos
Injeção intramuscular
Vacinação para várias
doenças infecciosas:
gripe (1993), malária,
tuberculose, hepatite B,
HIV, ebola etc.
Expressão de 3 meses
![Page 19: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/19.jpg)
![Page 20: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/20.jpg)
Gene Guns 1980
DNA
Alta pressão de hélio -
Intradérmica
Vacinação
Expressão 1 mês
Mais dispendiosa
Eletroporação (1982 mamíferos): célula não incorporam DNA naturalmente
Não é usado em
humanos
![Page 21: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/21.jpg)
Mecanismo de entrega dos vetores não virais
Métodos químicos
• Complexar e condensar o DNA
• Fosfato de cálcio
![Page 22: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/22.jpg)
Complexação e condensação do DNA
Polímeros ou lipídeos catiônicos ou a mistura de polímeros com lipídeos
endocitados
![Page 23: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/23.jpg)
Sistemas biomoleculares específicos de transferência,
recombinação e expressão gênica;
Vetores por excelência;
Vêm evoluindo há milhões de anos na natureza em
associação com bactérias, plantas e animais;
Principais barreiras dos vetores não virais:
1. Entrada na célula
2. Degradação citoplasmática
3. Transporte até o núcleo
4. Entrada no núcleo
![Page 24: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/24.jpg)
![Page 25: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/25.jpg)
Vetores
Doenças hereditárias
Doença
Gene relacionado
Tecido alvo
Vetor
Enfisema
pulmonar
a-1-antitripsina
Trato respiratório
Lipossomas
Fibrose
cística
CFTR
Trato respiratório
Adenovírus
Vírus Adeno-
associado
Lipossomas
(SCID)
Adenosina
desaminase
Linfócitos
Células progenitoras
hematopoiéticas
Retrovírus
![Page 26: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/26.jpg)
Doenças adquiridas
Doença
Gene relacionado
Tecido alvo
Vetor
AIDS
Ribozimas
RNAm
Anticorpos
Linfócitos
Retrovírus
Câncer
Genes supressores de
tumores
HTK-ganciclovir
Pulmões,
Fígado
Cérebro
Retrovírus,
Adenovírus
Retrovírus
Parkinson
Dopamina (tirosina
hidroxilase)
Tecido nervoso
Vírus da herpes
![Page 27: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/27.jpg)
![Page 28: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/28.jpg)
Geração de Vetores Retrovirais para Terapia Gênica
![Page 29: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/30.jpg)
![Page 31: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/31.jpg)
Novos vetores retrovirais?
MLV x Lentivírus
Integra em células em proliferação Não necessita proliferação
Amplamente testados em trials clínicos
Mutagênese insercional
Pouco testados em trials clínicos
Mutagênese insercional?
![Page 32: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/32.jpg)
![Page 33: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/33.jpg)
![Page 34: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/34.jpg)
HIV-1
POL
VPR VPU
VIF
TAT
REV
NEF GAG ENV
Y
U3RU5
GA
RRE
RU5
PROM TRANSGENE
RU5 Y
Vetor de transferência
LTR LTR
RRE
NEF U3RU5
SD SA
Vetores lentivirais derivados do HIV-1
![Page 35: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/35.jpg)
![Page 36: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/36.jpg)
![Page 37: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/37.jpg)
Células 293T Rev
Empacotador
Envelope (VSV, RD114)
Transferência (EF1a-PPT-GFP / EF1a-PPT-CD20 )
Vetor Viral
Transfecção para geração de
vetores virais
![Page 38: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/38.jpg)
Procedimentos Caros – Estrutura complexa
Produção dos vetores
Validação dos produtos
Verificação da inserção do gene
Gene funcional
Número de cópias/célula
RCR
![Page 39: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/39.jpg)
![Page 40: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/40.jpg)
![Page 41: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/41.jpg)
![Page 42: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/42.jpg)
![Page 43: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/43.jpg)
![Page 44: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/44.jpg)
SCID
![Page 45: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/45.jpg)
SEVERE COMBINED
IMMUNODEFICIENCY
• Severe Combine Immunodeficiency Disease (SCID) is a disorder characterized by a marked deficiency of both B-lymphocyte and T- lymphocyte function.
• Patients get all kinds of infections
• Lots of very different genetic defects
• Half of cases are X-linked
• In humans with XSCID T cell are defective but B cells are normal.
• One form of the autosomal recessive disease is due to a deficiency of Adenosine Deaminase.
• Bone marrow transplantation is very effective but the chances of a successful transplant depend in part on the degree of infection and/or failure to thrive present at the time of transplantation.
![Page 46: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/46.jpg)
![Page 47: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/47.jpg)
SCID can result from defects in the IL-2 receptor subfamily:
(A) defective expression of the common chain, or
(B) defective receptor signaling due to a missing tyrosine kinase
40-50% of SCID cases
T- B+ phenotype
Rare
![Page 48: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/48.jpg)
T- B- SCID
• Adenosine Deaminase Deficiency (ADA) – ADA is an enzyme in the purine salvage pathway
• pathway is important for T& B-cell development & differentiation
• T- B- phenotype
– Accounts for about 20% of all SCID cases
– Autosomal recessive
– Treatment • Bone marrow transplant
• Continuous enzyme supplement
• Gene Therapy
Purine nucleoside phosphorylase deficiency and recombinase
deficiencies (RAG-1 and -2) also cause SCID of the T-B- phenotype
![Page 49: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/49.jpg)
![Page 50: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/50.jpg)
X-linked
agammaglobulinemia
(XLA)
![Page 51: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/51.jpg)
• Patients make normal (or even increased) amounts of IgM
• But can’t make IgG, IgA, or IgE!
• defective CD-40L expression
• X-linked in most cases
• Patients also have a defect in cell-mediated immunity
• Patients have recurrent bacterial infections and infections with intracellular pathogens (Pneumocystis jiroveci)
Hyper-IgM Syndrome
T cell
B cell
![Page 52: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/52.jpg)
![Page 56: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/56.jpg)
• SCID:“Imunodeficiência combinada severa”
• “bubble boy disease”
• Doença genética recessiva
• Mutação no gene para a adenosina deaminase (ADA)
• Morte de precursores hematopoiéticos: falência do sistema imunológico
SCID
![Page 57: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/57.jpg)
![Page 58: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/58.jpg)
Imunodeficiências: Vetores retrovirais Transdução estável do transgene
![Page 59: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/59.jpg)
Results from First Human Gene Therapy Clinical Trial
Two years after receiving their last infusions of genetically altered cells to boost their
weakened immune systems, the first patients ever to undergo gene therapy are still
healthy and benefiting from the treatment.
According to a historic research paper published today in Science, the two girls still
have white blood cells bearing copies of the replacement ADA gene. Patient 1, whose
health improved significantly following gene therapy, has maintained a normal white
blood cell count as well as measurable levels of the ADA enzyme, which was almost
nonexistent prior to the treatment. Both girls also have developed stronger immune
systems, showing improved immune reactions in a battery of tests conducted over the
course of the four-year study.
![Page 60: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/60.jpg)
![Page 61: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/61.jpg)
Sustained Correction of X-Linked Severe Combined Immunodeficiency by
ex Vivo Gene Therapy
Hacein-Bey-Abina, Salima; Le Deist, Francoise; Carlier, Frederique; Bouneaud,
Cecile; Hue, Christophe; De Villartay, Jean-Pierre; Thrasher, Adrian J.;
Wulffraat, Nicolas; Sorensen, Ricardo; Dupuis-Girod, Sophie; Fischer, Alain;
Cavazzana-Calvo, Marina.
CD34+ bone marrow cells from five boys
with X-linked severe combined
immunodeficiency were transduced ex vivo
with the use of a defective retroviral vector.
Integration and expression of the (gamma)c
transgene and development of lymphocyte
subgroups and their functions were
sequentially analyzed over a period of up to
2.5 years after gene transfer.
![Page 62: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/62.jpg)
Resultados do protocolo de Terapia
Gênica para X-SCID
• Viviam normalmente em casa sem necessidade do ambiente estéril (“bolha”) ;
• Possuiam contagens normais de células T nos compartimentos CD4 e CD8;
• Responderam a várias imunizações infantis, incluindo difteria, tétano e pólio produzindo células T e anticorpos específicos contra os patógenos.
• A produção de anticorpos apresentava níveis que permitiam evitar as infusões periódicas de imunoglobulinas.
3,5 anos após a Terapia Gênica
14 das 15 crianças com X-SCID tratadas:
Alain Fischer, Necker Hospital, Paris
![Page 63: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/63.jpg)
![Page 64: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/64.jpg)
![Page 65: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/65.jpg)
![Page 66: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/66.jpg)
Mutagênese insercional causada por vetores retrovirais
Ativação cis
Interferência com elementos de
controle da expressão gênica
Ativação cis
Alteração do produto gênico
MLV LMO2
![Page 67: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/67.jpg)
•Translocações envolvendo LMO2: leucemia T
•c: vantagem seletiva aos clones corrigidos
•Ambiente linfopênico:
Expansão exaustiva dos clones transduzidos?
Indução de expansão clonal?
•LMO2: hotspot para integração dos MLV, especialmente pela expressão na linhagem T
Cada patologia e protocolo de terapia gênica tem sua particularidade
Causa das leucemia
![Page 68: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/68.jpg)
Risco:
- Mutagênese insercional
Prevenção:
- Refinamento dos protocolos de transdução
(número de cópias próvirus/célula), menos
estímulo e tempo de cultura
- Menor número de células transduzidas
Risco:
- Terapia ineficaz por baixo número de progenitores?
RISCO / BENEFíCiO: TERAPIA GÊNICA x TMO APARENTADO
![Page 69: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/69.jpg)
![Page 70: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/70.jpg)
![Page 71: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/71.jpg)
Phagocyte Dysfuncions
Leukocyte Adhesion Deficiencies
-leukocyte interaction with vascular
endothelium is disrupted
Diminished intracellular killing
of organisms, resulting from
defective lysosomes
Diminished intracellular killing
of organisms, resulting from
defective respiratory burst
![Page 72: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/72.jpg)
Prevents adhesion and
migration
Respiratory burst defect,
chronic TH1 stimulation
Respiratory burst defect
Respiratory burst defect
Vesicle fusion defect
Defects in phagocytic cells
![Page 73: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/73.jpg)
Atividade antimicrobiana
![Page 74: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/74.jpg)
![Page 75: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/75.jpg)
•Expansão clonal de células
Corrigidas com inserções próximas
a genes promotores de proliferação
•Contagem celular normal: células
Modificadas sujeitas à regulação
fisiológica
•O percentual de células com o
transgene nos compartimentos T e B
manteve-se baixo
![Page 76: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/76.jpg)
Terapia gênica
Imunodeficiências:
Correção funcional de genes alcançada
Desafios:
Aumentar o número de patologias tratadas
Melhorar os protocolos terapêuticos para minimizar os riscos
• novos vetores
• melhor regulação gênica
• melhores transduções
• sistema de segurança (gene suicida?)
![Page 77: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/77.jpg)
Jesse Gelsinger
Tratamento com vetor adenoviral:
- Falência múltipla de órgãos
- Toxicidade hepática devido à carga de vetores virais administrada
- Tropismo do vetor viral pelo fígado
- Possível recombinação do vetor utilizado
Terapia Gênica: Riscos dos protocolos in vivo
![Page 78: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/78.jpg)
Adenovírus – resposta imune
Washingtonpost:
Teen Dies Undergoing Gene Therapy
By Rick Weiss and Deborah Nelson
Washington Post Staff Writers
Wednesday, September 29, 1999; Page A1 Jesse Gelsinger
• Distúrbio metabólico de origem genética – deficiência da ornitina
descarboxilase – não metabolização da amônia
• 1/40.000 - fatal após 72hs de vida
• JG – forma parcial do distúrbio, controlado por medicamentos
• Convidado a participar do “clinical trial phase I” - 6.000.000.000
adenovírus/kg – artéria hepática. Falecimento 4 dias após injeção.
• University of Pennsylvania and Genova (Dr.James Wilson)
• 691 eventos adversos pré-clínicos não publicados
![Page 79: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/79.jpg)
![Page 80: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/80.jpg)
![Page 81: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/81.jpg)
![Page 82: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/82.jpg)
![Page 83: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/83.jpg)
![Page 84: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/84.jpg)
Gene transfer of a regulated ß-globin gene in
HSCs would reduce the imbalance between a-
and ß-globin chains in erythroid cells
Transplantation of autologous, genetically
corrected HSCs would represent an alternative
therapy for thalassemic patients lacking a suitable
bone marrow donor
Gene therapy for ß-thal
![Page 85: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/85.jpg)
Gene therapy for ß-thal
![Page 86: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/86.jpg)
![Page 87: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/87.jpg)
Beta Thalassemias
• Result from Point Mutations on genes
• Severity depends on where the hit(s) lie
b0-no b-globin synthesis;
b+ reduced synthesis
• Disease results in an overproduction of a-
globin chains, which precipitate in the cells
and cause splenic sequestration of RBCs
• Erythropoiesis increases, sometimes
becomes extramedullary
![Page 88: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/88.jpg)
21_11.jpg
Patient
Purification of CD34+ cells
Transduction
ß-globin vector
TERAPIA GENICA DELLA ß-TALASSEMIA
Infusion of genetically-corrected cells
Gene therapy for ß-thalassemia
![Page 89: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/89.jpg)
efficient gene transfer into target cells
adequate level of transgene expression
persistence of gene expression
regulation of gene expression
tolerance to transgene product
safety
The success of gene therapy is based on:
![Page 90: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/90.jpg)
ß-globin locus
LCR
![Page 91: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/91.jpg)
gag
pro pol env Frame 2
Frame 3
Frame 1
ORFs
vif
vpr
tat vpu
rev
nef
RRE
PPT PBS
Genomic RNA Y
SD SA SA CAP U3 R R U5
Proviral DNA RRE
PBS PPT
(A)n
U3 R U5 U3 R U5
SD SA R
3’LTR
U3
5’LTR
RRE GA PROMOTER TRANSGENE
U5 U5 R
Lentiviral vectors (1996)
Y
GAG
PRO POL
RRE
TAT
REV
VIF
U
R
ENV NEF
3’LTR 5’LTR
HIV-1 DNA
![Page 92: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/92.jpg)
Lentiviral vectors in GT:
the French trial
![Page 93: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/93.jpg)
Terapia Celular/Terapia Gênica
Science, 2007
![Page 94: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/94.jpg)
Terapia Celular/Terapia Gênica
Science, 2007
Uso de células
autólogas – Não
há rejeição
imunológica
Indução das iPS
com os mesmos 4
genes, mas c-myc
desligado depois
para prevenir
tumores.
![Page 95: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/95.jpg)
Reversão do fenótipo
![Page 96: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/96.jpg)
Possibilidades Infinitas
• Qualquer doença com uma única mutação genética
pode ser tratada
• Regeneração tecidual
• Testes de toxicidade in vitro
• Testes de iPS para terapia estão em andamento
![Page 97: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/97.jpg)
![Page 98: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/98.jpg)
Zinc Finger Nucleases – Inserção sítio dirigida
![Page 99: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/99.jpg)
![Page 100: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/100.jpg)
![Page 101: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/101.jpg)
![Page 102: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/102.jpg)
Reconhecer o tumor…..
… poupar tecidos saudáveis
Imunoterapia – O papel dos linfócitos T
![Page 103: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/103.jpg)
Enxerto: Precursores hematopoiéticos + Linfócitos (T)
Transplante de precursores hematopoiéticos
![Page 104: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/104.jpg)
![Page 105: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/105.jpg)
Doença do Enxerto Contra o Hospedeiro (DECH)
x
Enxerto Contra Leucemia (ECL)
![Page 106: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/106.jpg)
Doença do Enxerto Contra o Hospedeiro
![Page 107: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/107.jpg)
Os linfócitos T estão intimamente
ligados ao efeito antitumoral e à
Doença do Enxerto Contra o Hospedeiro
Eliminar os linfócitos T do enxerto
evita a DECH, mas impede o efeito ECL
![Page 108: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/108.jpg)
Enxerto contra Leucemia (ECL)
Appelbaum, 2001
![Page 109: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/109.jpg)
Enxerto contra Leucemia (ECL)
Appelbaum, 2001
![Page 110: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/110.jpg)
Enxerto contra Leucemia (ECL)
Appelbaum, 2001
![Page 111: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/111.jpg)
Enxerto contra Leucemia (ECL)
Appelbaum, 2001
![Page 112: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/112.jpg)
Gene suicida para o tratamento da DECH aguda
Cell culture
Gene
transfer
Collect donor
PBMC
Select transgene
Positive T cells
For Infusion GVHD
Drug treatment
for transgene-positive
T cell elimination
Activation of T cells
BMT Recipient
![Page 113: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/113.jpg)
Sistema de gene suicida HSV-TC
HSV
TC
HSV
TC
Cinases
Celulares
Bonini et al, Science 1997
![Page 114: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/114.jpg)
Limitações
Timidina
Cinase
Proteína imunogênica Seleção de mutantes não funcionais da proteína TC Ganciclovir - uso no pós transplante
![Page 115: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/115.jpg)
![Page 116: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/116.jpg)
![Page 118: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/118.jpg)
![Page 119: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/119.jpg)
![Page 120: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/120.jpg)
Terapia gênica e Câncer
Explorando o sistema imunológico
![Page 121: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/121.jpg)
![Page 122: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/122.jpg)
![Page 123: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/123.jpg)
Imunoterapia
![Page 124: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/124.jpg)
Transferência adotiva de células T
![Page 125: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/125.jpg)
Transferência adotiva de células T
![Page 126: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/126.jpg)
Transferência adotiva de células T
![Page 127: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/127.jpg)
Evasão Tumoral
![Page 128: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/128.jpg)
Reconhecimento de Tumores
Antígenos Tumorais
![Page 129: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/129.jpg)
129
Tumor Infiltrating Lymphocytes
![Page 130: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/130.jpg)
Terapia Gênica na Imunoterapia?
![Page 131: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/131.jpg)
Recurrent colorectal cancer
labeled with a monoclonal
antibody conjugated to a
radioisotope. Tumor as red
spots located in the pelvic
region, while blood vessels
are outlined by circulating
antibody (green).
Anticorpos Monoclonais
![Page 132: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/132.jpg)
Redirecionamento de linfócitos para a eliminação de tumores
![Page 133: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/133.jpg)
Receptor quimérico de antígeno (CAR)
• Reconhecimento independente de MHC
• Alta afinidade pelo antígeno
•Dispensa seleção de clones reativos do paciente
![Page 134: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/134.jpg)
Ativação da Célula T
![Page 135: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/135.jpg)
A estimulação de células T requer múltiplos sinais
![Page 136: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/136.jpg)
CD19
Biagi et al, 2005
![Page 137: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/137.jpg)
Kershaw et al, 2005
![Page 138: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/138.jpg)
CD20
CD3z
Resposta anti-CD20
NIH3T3
NK92
![Page 139: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/139.jpg)
Brentjens et al, 2007
![Page 140: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/140.jpg)
Blood, Julho 2010
D+143
![Page 141: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/141.jpg)
Pule et al, Nature Medicine 2008
Neuroblastoma em pacientes pediátricos
CAR anti GD2
![Page 142: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/142.jpg)
![Page 143: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/143.jpg)
![Page 144: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/144.jpg)
![Page 145: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/145.jpg)
![Page 146: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/146.jpg)
![Page 147: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/147.jpg)
![Page 148: Diferenciação Celular e Terapia Gênica - lance-ufrj.org · gripe (1993), malária, tuberculose, hepatite B, HIV, ebola etc. Expressão de 3 meses . Gene Guns 1980 DNA Alta pressão](https://reader031.vdocuments.mx/reader031/viewer/2022022707/5be3750a09d3f20a668b69eb/html5/thumbnails/148.jpg)