DIAGNOSTICUL DE LABORATOR IN INFECTIILE CU STAFILOCOC

CLASIFICARE

• FAMILIA Micrococcaceae

• GENUL Micrococcus si Staphylococcus

• SPECII S. aureus S.saprophyticus S.epidermidis M.luteus

MORFOLOGIE

PATOGENITATE

•Stapylococcus aureus – infectii cutanate (impetigo, furuncule, foliculite), infectii mediate de toxine (toxiinfectii alimentare, TSS),alte infectii (bacteriemii, endocardite, pneumonii, empiem, osteomielite, artrite septice)•Staphylococcus epidermidis – bacteriemii,

endocardite, plagi chirurgicale, infectii urinare, infectii oportuniste datorate cateterelor•Staphylococcus saprophyticus – infectii urinare,

infectii oportuniste

Factorii de virulenta

• Capsula bacteriana sau slyme layer (glicocalix)• Peptidoglicanul• Acidul teichoic – are specificitate de specie : - polizaharidul A (S.

aureus) -polizaharidul B (S.epidermidis)• Proteina A• Clumping factorul

ENZIME EXTRACELULARE

• Coagulaze (libere sau legate)• Hialuronidaze• Nucleaze• Proteaze• Lipaze• Esteraze

EXOTOXINE•Citolitice (citotoxine, citolizine) Alfa-

toxina – hemolizina Beta-toxina – sfingomielinaza Gama- toxina – actiune hemolitica

Delta- toxina – actiune citopatica si enterotoxinicaLeukocidine

•Enterotoxine•Exotoxine exfoliative•Enterotoxine pirogene

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR

•Examinarea microscopica• Izolarea• Identificarea

EXAMINAREA MICROSCOPICA

• Intre lama si lamela•Pe frotiuri fixate si colorate: Gram, albastru de

metilen si May-Grunwald Giemsa

IZOLAREA

•Medii de cultura simple: bulion glucozat, geloza simpla;

•Medii de cultura complexe: geloza sange, mediul de cultura hiperclorurat Chapman (evidentiaza fermentarea manitei, caracter de patogenitate al stafilococului).

IDENTIFICAREA

•Caractere morfologice•Caractere de cultura•Caractere metabolice•Caractere de patogenitate

CARACTERELE DE CULTURA

• Medii lichide – tulbura uniform mediul de cultura cu depozit moderat la fundul tubului• Medii solide – colonii S sau M, pigmentate in alb, aureu

sau citrin - pe geloza sange tulpinile de S.aureus dar si S. haemoliticus, produc o zona de hemoliza clara, neta, de tip alfa

CARACTERE METABOLICE• Fermentarea hidratilor de carbon – 94% din tulpinile de S. aureus

fermenteaza manita

CARACTERE METABOLICE• Testul catalazei – stafilococii poseda o catalaza capabila sa transforme

peroxidul de hidrogen in oxigen si apa Catalaza

2H2O2 O2 + 2H2OStreptococci vs. Staphylococci

Catalase POS

Staphylococcus

Catalase NEG

CARACTERE DE PATOGENITATE

•Testul pigmentogenezei: stafilococii citrini sunt nepatogeni, cei albi sunt 20% patogeni si 80% nepatogeni, cei aurei sunt 80-90% patogeni si 10-20% nepatogeni;•Testul hemolizei: cei hemolitici sunt patogeni;•Testul fermentarii manitei;•Testul coagulazei.

IDENTIFICAREA COAGULAZEI LIBERE

- Se efectueaza in tuburi de hemoliza, punand in contact 0,5ml plasma liofilizata de iepure cu 0,5 ml din cultura in bulion, incubata in prealabil timp de 18-24 de ore la 37 de grade.

- Se agita amestecul punandu-le in etuva la 37 de grade.

- Se citeste reactia prin inclinarea usoara a tubului- aparitia unu cheag de fibrina complet semnifica o reactie pozitiva.

Coagulaza Fibrinogen Fibrina

S. aureus

Coagulase POS

Staphylococcus aureus

Coagulase NEG

IDENTIFICAREA CLUMPING-FACTORULUI

- Factorul de afinitate pentru fibrinogen, un receptor proteic pentru un fragment al fibrinogenului prezent la nivelul peretelui bacterian al S.aureus, permite constituirea unui agregat bacterian in prezenta fibrinogenului in solutie.

- Se determina aglutinarea pe lama a stafilococilor, proveniti dintr-o cultura de 24 de ore la 37 de grade C pe geloza inclinata, in prezenta unei picaturi de plasma umana diluata 1/5.

TRATAMENT

•Drenarea zonelor afectate• In cazul infectiilor profunde - peniciline semi-sintetice - cefalosporine - eritromicina - clindamicina•Endocardite -penicilina semi-sintetica + un aminoglicozid