diagnóstico laboratorial de vih sida

Diagnstico Laboratorial

VIH - SIDABlgo. Hernan Daniel Cornejo Pacherres Laboratorio Referencial Regional de VIH Direccin de Laboratorios de Salud PblicaDireccion Regional de Salud - Cajamarca

RNATranscriptasareversaProtesaIntegrasagp 40gp 120BicapaLipidica p 17p 24p 9

PRUEBA DE MONITOREO DE PACIENTES VIH POSITIVOSCARGA VIRAL DE VIH

RECUENTO DE CD4 / CD8

CARGA VIRAL

DE VIH-1

Carga Viral VIH-DefinicionesCuantificacin de copias de RNA viral/ml en el plasma de personas infectadas por VIH Cuantificacin de virus circulante que se encuentra en el plasmaNmero de partculas de VIH libres en el plasma de los pacientes

CARGA VIRAL VIH = VIREMIA

UTILIDAD Predecir la progresin clnica de la infeccin

VIH-SIDA. Indicar al mdico tratante el momento ptimo

para iniciar el tratamiento antirretroviral. Monitorizar el tratamiento con antirretrovirales:Tratamiento eficaz (reduccin a niveles indetectables) Fracaso terapeutico (resistencia,adherencia)

Estimar el riesgo de transmisin ,especialmente

materno-fetal

PRUEBAS RNA DISPONIBLES Reaccin en Cadena de la Polimerasa ( PCR Polimerasa Chain Reaction.) DNA Ramificado (bDNA, branched Chain DNA assay Amplificacin basado en cidos nucleicos ( NASBA, nucleic acid sequence-based amplification).

Reportado como nmero de copias o copias /ml

RECOMENDACIONES

Se debe escoger slo un mtodo de ensayo para carga viral de VIH-1 y debe ser utilizado consistentemente en un slo individuo

Ensayos deben realizarse despus de un mes de vacunados o de un proceso infeccioso agudo (vacunas contra la gripe, hepatitis provocan aumento de carga viral)

OBTENCION DE MUESTRAS Y ESTABILIDADObtencin de Sangre en tubos con EDTA o Citrato

Tubos con heparina no son aceptables Preferiblemente se usan tubos con EDTA

La sangre se diluye un 15% en tubos de citratoEstabilidad del RNA en la sangre es mejor en EDTA que en CitratoSepara el plasma antes de 3-6 horas desde la centrifugacin

Almacenar y enviar el plasma congelado a 2-8C

HIV RNA es estable en plasma a 2-8C durante 5 dias

HIV RNA es estable en plasma durante 3 ciclos de congelacin y descongelacin

OBTENCION DE MUESTRAS Y ESTABILIDAD

AMPLICOR HIV MONITOR PREPARACION200uL PlasmaEstndar Interno de Cuantificacin de RNA

AMPLIFICACIONSimple Transcripcin reversa y PCR

DETECCIONFormato similar a los ELISAResultado colorimtrico

RESULTADOS24 tests en 6 horas

Qu es Citometra de Flujo?

Medicin simultnea de mltiples caractersticas fsicas y qumicas de clulas en suspensin.

Las mediciones son hechas sobre el principio clula-por-clula en un promedio rutinario de 500 a 4000 clulas por segundo.

Qu puede decirnos un Citmetro de Flujo acerca de una clula?Su tamao relativo (Forward ScatterFSC)

Su granularidad relativa o complejidad interna (Side ScatterSSC)

Su Intensidad fluorescente relativa (FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)

FACSCountPrincipios del ProcedimientoMuestra: Sangre Completa no lisadaMtodo: IF Directa a 02 colores.El instrumento detecta: dos colores y el tamao celular.CD3 fluorescencia roja, CD4/CD8 fluorescencia amarilla.Reactivo o facspet contiene Acs. que ligan al Ag. linfocitario respectivo.

FACSCountPrincipios del ProcedimientoReactivos: adems de los Acs. Especficos poseen un nmero conocido de Beads o perlas de referencia que funcionan como standard de fluorescencia y cuantificacin para calcular recuentos absolutos de CD4, CD8 y CD3.Fijacin: Realizada antes del anlisis para preservar la integridad de la unin de Acs.