diagnóstico laboratorial de vih sida

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Health & Medicine

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  • Diagnstico Laboratorial

    VIH - SIDABlgo. Hernan Daniel Cornejo Pacherres Laboratorio Referencial Regional de VIH Direccin de Laboratorios de Salud PblicaDireccion Regional de Salud - Cajamarca

  • RNATranscriptasareversaProtesaIntegrasagp 40gp 120BicapaLipidica p 17p 24p 9

  • PRUEBA DE MONITOREO DE PACIENTES VIH POSITIVOSCARGA VIRAL DE VIH

    RECUENTO DE CD4 / CD8

  • CARGA VIRAL

    DE VIH-1

  • Carga Viral VIH-DefinicionesCuantificacin de copias de RNA viral/ml en el plasma de personas infectadas por VIH Cuantificacin de virus circulante que se encuentra en el plasmaNmero de partculas de VIH libres en el plasma de los pacientes

    CARGA VIRAL VIH = VIREMIA

  • UTILIDAD Predecir la progresin clnica de la infeccin

    VIH-SIDA. Indicar al mdico tratante el momento ptimo

    para iniciar el tratamiento antirretroviral. Monitorizar el tratamiento con antirretrovirales:Tratamiento eficaz (reduccin a niveles indetectables) Fracaso terapeutico (resistencia,adherencia)

    Estimar el riesgo de transmisin ,especialmente

    materno-fetal

  • PRUEBAS RNA DISPONIBLES Reaccin en Cadena de la Polimerasa ( PCR Polimerasa Chain Reaction.) DNA Ramificado (bDNA, branched Chain DNA assay Amplificacin basado en cidos nucleicos ( NASBA, nucleic acid sequence-based amplification).

    Reportado como nmero de copias o copias /ml

  • RECOMENDACIONES

    Se debe escoger slo un mtodo de ensayo para carga viral de VIH-1 y debe ser utilizado consistentemente en un slo individuo

    Ensayos deben realizarse despus de un mes de vacunados o de un proceso infeccioso agudo (vacunas contra la gripe, hepatitis provocan aumento de carga viral)

  • OBTENCION DE MUESTRAS Y ESTABILIDADObtencin de Sangre en tubos con EDTA o Citrato

    Tubos con heparina no son aceptables Preferiblemente se usan tubos con EDTA

    La sangre se diluye un 15% en tubos de citratoEstabilidad del RNA en la sangre es mejor en EDTA que en CitratoSepara el plasma antes de 3-6 horas desde la centrifugacin

  • Almacenar y enviar el plasma congelado a 2-8C

    HIV RNA es estable en plasma a 2-8C durante 5 dias

    HIV RNA es estable en plasma durante 3 ciclos de congelacin y descongelacin

    OBTENCION DE MUESTRAS Y ESTABILIDAD

  • AMPLICOR HIV MONITOR PREPARACION200uL PlasmaEstndar Interno de Cuantificacin de RNA

    AMPLIFICACIONSimple Transcripcin reversa y PCR

    DETECCIONFormato similar a los ELISAResultado colorimtrico

    RESULTADOS24 tests en 6 horas

  • Qu es Citometra de Flujo?

    Medicin simultnea de mltiples caractersticas fsicas y qumicas de clulas en suspensin.

    Las mediciones son hechas sobre el principio clula-por-clula en un promedio rutinario de 500 a 4000 clulas por segundo.

  • Qu puede decirnos un Citmetro de Flujo acerca de una clula?Su tamao relativo (Forward ScatterFSC)

    Su granularidad relativa o complejidad interna (Side ScatterSSC)

    Su Intensidad fluorescente relativa (FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)

  • FACSCountPrincipios del ProcedimientoMuestra: Sangre Completa no lisadaMtodo: IF Directa a 02 colores.El instrumento detecta: dos colores y el tamao celular.CD3 fluorescencia roja, CD4/CD8 fluorescencia amarilla.Reactivo o facspet contiene Acs. que ligan al Ag. linfocitario respectivo.

  • FACSCountPrincipios del ProcedimientoReactivos: adems de los Acs. Especficos poseen un nmero conocido de Beads o perlas de referencia que funcionan como standard de fluorescencia y cuantificacin para calcular recuentos absolutos de CD4, CD8 y CD3.Fijacin: Realizada antes del anlisis para preservar la integridad de la unin de Acs.