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Diagnóstico de virus

fitopatógenosCurso: “Diagnóstico de

enfermedades vegetales.”9 de junio de 2011

Vivienne Gepp

Dos páginas web• Diagnosing Plant Diseases Caused by Viruses:

Serological Approaches. International Plant DiagnosticNetwork Training on New and Emerging Pathogens. Antigua, Guatemala. 2006. http://www.intpdn.org/files/eSerologyForPlantVirusDetection.pdf

• How Do You Diagnose a Virus Infection in a Plant? http://www.freshfromflorida.com/pi/enpp/pathology/florida_viruses/Diag/What%20is%20it.html

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Características generales

Virus fitopatógenos:• Acido nucleico + proteína • 90% ARN , 1 cadena

Viroides: • ARN • cadena simple, circular

Criterios de clasificación

• Huésped• Síntoma

• Forma • Tamaño• Ácido nucleico

Ej. Tobacco mosaic virusTMV

Tobacco mosaic tobamovirus

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Clasificación

• Familias• Géneros• Especies

• Grupos• Virus

Criterios de clasificación

• Forma • Tamaño• Ácido nucleico

• Forma de transmisión• Tipo de síntoma

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Género Luteovirus

• Potato leafroll luteovirus• Barley yellow dwarf luteovirus

Dificultades en el diagnóstico de virus:

• pequeño tamaño

• poca diversidad morfologica

• síntomas similares

• síntomas variables: – cultivar

– condiciones ambientales

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Técnicas de diagnóstico

• Biológicas• Físicas• Serológicas• Moleculares

• ¿Una técnica es suficiente para el diagnóstico?

Diagnóstico por propiedades biológicas:

1. Plantas huéspedes:– ¿Cuál(es)?– Síntomas

2. Infección de plantas indicadoras: – ¿Cuál(es)?– Síntomas

3. Transmisión: – ¿Cómo?

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Síntomas

• Macroscópicos

• Microscopicos:– Cuerpos de inclusión– Efectos citopatológicos

(en núcleo, cloroplastos, mitocondrias)

APS. Illustrated Glossary of Plant Pathology. http://www.apsnet.org/edcenter/illglossary/Pages/I-M.aspx

Diagnóstico por síntomas

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Diagnóstico por síntomas

Síntomas - cloróticos

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Síntomas necróticos

Síntomas necróticos

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Síntomas

¿Específicos de virus?

Síntomas

¿Síntomas específicos de virus?

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Los síntomas dependen de:

Planta

Patógeno Ambiente

Los síntomas dependen de:

variedadej. TSWV

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Plantas indicadoras

• Nicotiana spp., Solanum spp., Chenopodium spp., Cucumus spp., Phaseolus spp., Vicia spp., Pisum spp., Brassica spp, etc. según los casos.

Plantas indicadoras

• ¿Cuáles inocular?• ¿Cómo reaccionan?

– Susceptible o no, sin síntomas– Síntomas: locales y/o sistémicos

• Fuentes de información: – Bibliografía, – Intenet

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Internet

• Association of Applied Biologists. Descriptions of Plant Viruses. http://www.dpvweb.net/

• Brunt, A.; Crabtree K.; Dallwitz, M.; Gibbs, A.; Watson, L. and Zurcher , E. PlantViruses Online. Descriptions and Listsfrom the VIDE Database. http://www.agls.uidaho.edu/ebi/vdie/refs.htm

Plantas indicadoras

• Sin síntomas• Lesiones locales • Síntomas sistémicos

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Plantas indicadoras

Tospovirus en Impatiens sp.

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Blackberry chlorotic ringspot Ilarvirus

Métodos de transmisión

• Por injerto • Mecánica = por savia• Por vectores:

– pulgones– trips– moscas blancas– otros insectos– nematodos

http://www.fruitdisease.co.uk/virusresearchpage3.asp

Wikipedia. Strawberryvein banding virus

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Transmisión por injerto

http://www.fruitdisease.co.uk/virusresearchpage3.asp

Wikipedia. Strawberryvein banding virus

VIRUS INDEXING PROCEDUREShttp://www2.bioversityinternational.org/publications/Web_version/117/ch5.htm

Transmisión mecánica

1. Macerado de planta enferma2. Abrasivo (carborundum)3. Planta sana

= Transmisi= Transmisióón n ““por jugospor jugos””

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Transmisión por pulgones

TTéécnicas basadas en cnicas basadas en caractercaracteríísticas fsticas fíísicassicas

Forma y tamañoPropiedades de sedimentación

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Microscopio electrónico

Partículas de virus:

Sombreadas

Con tinción negativa

Fuente: Walkey, 1991

Forma y tamaño

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TTéécnicas que dependen cnicas que dependen de la protede la proteíína del virusna del virus

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SerologSerologííaa• Antígeno

• Anticuerpo

• Antisuero

– Policlonal

– Monoclonal

Serología

1. Producción de antisuero

2. Técnicas serológicas - diagnóstico

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Técnicas serológicas (1)

• Reacción antígeno -anticuerpo

• Precipitación

• Aglutinación

Técnicas serológicas

• Difusión

http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0100-

41582001000400016&script=sci_arttext

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Técnicas serológicas

• Difusión

Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

Enzyme Linked ImmunoSorbant Assay(ELISA)

http://bioscienceden.blogspot.com/2010/11/enzyme-linked-immunosorbant-assay-elisa.html

How Do You Diagnose a Virus Infectionin a Plant?

http://www.freshfromflorida.com/pi/enpp/pathology/florida_viruses/Diag/What%2

0is%20it.html

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Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

http://www.alibaba.com/product-gs/321516400/Tetanus_IgG_Elisa_Kit.html

Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

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Serología – ventajas:

• Especificidad• Rapidez• Sensibilidad• Menor dependencia de condiciones

biológicas e ambientales• Semi-cuantitativo (ELISA)

Serología - desventajas

• Detecta sólo la proteína del virus

• Cada antisuero detecta UN virus/género/raza

• Posibles reacciones cruzadas

• Disponibilidad de antisueros

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Hibridación de ácidos nucleicos

“Northern blot” – Fuente: Techniques of Molecular Biology. http://8e.devbio.com/printer.php?ch=1&id=32

Hibridación de ácidos nucleicos

• Dot blot • DNA microarray

http://biochemistry.stanford.edu/research/brown.html