Diagnóstico de Laboratorio de microbiología

maestra Altagracia Jiménez

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Pasos Importantes Precedentes al Diagnóstico

Elección de la muestra apropiada Obtención adecuada de la muestra evitando

contaminación de la Flora Normal Transporte rápido de la muestra al laboratorio Entrega de la información esencial

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Enfoques del trabajo de Laboratorio Observación al microscopio luego de la tinción Obtención del cultivo puro por inoculación Identificación del Microorganismo mediante

reacciones bioquímicas Determinar su sensibilidad a varios antibióticos

“Algunos procedimientos bacteriológicos se hacen por pruebas serológicas que determinan la presencia de anticuerpos específicos.”

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HemocultivosSospecha de septicemia, endocarditis,

osteomielitis, meningitis o neumonía.

Podemos Encontrar:

• cocos Gram positivos

•Estafilococo aureus

•Estreptococo pneumoniae

•Bacilos Gram negativos

•E. Coli

•Klebsiella Neumoniae

•Pseudomonas aeruginosa

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Hemocultivos

Se necesitan:

• 3 muestras de sangre de 10 ml en 24 H

• Se agregan 100 ml de un medio de cultivo enriquecido con infusión de cerebro corazón.

• Se observa por turbidez o producción de CO2 por 7 días o mas

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Cultivo Exudado faríngeo

Difteria, faringitis gonococcica o aftas

Podemos Encontrar:

• Estreptococos beta hemolíticos Grupo A.

Se necesitan:

•Hisopo para obtener muestras de la faringe, amigdalas y fosa tonsilar

•Inocular este material en agar sangre de carnero, haciendo estrias

•24 H de incubación a 35° C

•Disco de bacitracina, para determinar microorganismos del grupo A.

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Cultivo de Esputo

Neumonía, tuberculosis y absceso pulmonar

Podemos Encontrar:

• Estreptococos pneumoniae

•Bacilo Klebsiella pneumoniae

Se necesitan:

•Muestra de Esputo en Agar Sangre de carnero (revela colonias características y se identifica con pruebas serológicas o bioquímicas)

•Frotis de la muestra teñido con Gram

•Inducción de esputo, aspirado transtraqueal, lavado bronquial o biopsia pulmonar (con este se evita la flora normal).

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Liquido Cefalorraquídeo (LCR)

Meningitis, encefalitis, abscesos cerebrales y empiemas subdurales

Podemos Encontrar:

• Nesseria Meningitidis

•Haemophilus Influenzae

•Estreptococcus pneumoniae

Se necesitan:

•Prueba de quellung

•Inmunofluorescencia con antisueros específicos

•Agar sangre

•Agar chocolate

•35° C y atmósfera 5% CO2

•Agregar hematina nicotinamida adenina dinucleotido (determina H. Influenzae) 8

Liquido Cefalorraquídeo (LCR) Meningitis Sub-Aguda

Podemos Encontrar:

• Mycobacterium Tuberculosis

•Cryptococcus neoformans

Se necesitan:

•Tinción Por Acido Resistentes del LCR (posible no observar M. Tuberculosis)

•Se cultiva y las placas se dejan por un mínimo de 6 semanas

•C. neoformans, levadura en forma de yemas con capsula notable

•Tinción de India en LCR

•Prueba Inmunológica, detecta presencia de anfígenos capsulares en LCR, se identifica N. meningitidis, S. Pneumoniae, H. Influenzae, Estreptococo grupo B, C. Neumoformans

•Análisis mas comunes: Aglutinación de partículas de caucho y contrainmunoelectroforesis. 9

9

Cultivo de Heces

Estos se practican en personas con gastroenteritis.Los patógenos bacterianos mas frecuentes causan diarrea como son: Shigella. Salmonella Campylobacter E. Coli

El examen Microscópico se hace de dos formas:9. Tinción con azul metileno.10. Tinción de Gram.

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Medios de cultivos

Para cultivar salmonella y shigella se usan: MacConkey. SELECTIVO Agar eosina azul de metileno (EMB). SELECTIVO TSI Suero contra antigeno O.

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shigella

salmonella

campylobacter campylobacter jeuni

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Urocultivos

Los cultivos de orina se efectúan cuando se sospecha de pielonefritis o cistisis.

La causa mas común por la cual ocurren infecciones urinarias son por:3. E. Coli.4. Enterobacter.5. Proteus.6. Streptococcus faecalis.

Para hacer esta determinación:9. Asa calibrada.10. Diluciones.11. Escrutinio.

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E. coli

Streptococcus faecalis14

Cultivo de Exudado genital.

Los cultivos de exudado de vía genitales se llevan a cabo en forma primaria en muestras tomadas de pacientes con escurrimiento genital anormal y/o infectados con enfermedades de transmisión sexual.

Las bacterias Patógenas mas importantes son:

4. Neisseria gonorrhoeae.

El Diagnostico de LAB. es por examen microscópico de un frotis teñido con Gram. y por cultivo.

6. Treponema pallidum.

No puede cultivarse de modo que se hace con microscopio y serología.

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Neisseriaea gonorrhoeae treponema pallidum

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Cultivo de heridas y AbscesosGran variedad de microorganismos intervienen en heridas infectadas y

abscesos.

Los abscesos de cerebro , pulmones y abdomen a menudo se relacionan con anaerobios como:

4. Bacteroides fragilis.5. Cocos Gram. Positivos (Staphylococcus aureus y Streptococcus

pyogenes).6. Clostridium perfringens (Heridas traumáticas).7. Staphylococcuaureus (Heridas quirúrgicas).8. Pasteurella multocida , Rabdovirus ( mordedura de perro)

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Bacteroides fragilis.

Staphylococcu aureus

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Antígeno, Antisuero, Anticuerpo

Antigeno (da lugar a la formacion de aticuerpos) Anticuerpos

Bacteriolisinas Opsoninas Aglutininas Precipitinas Hapteno o Bloqueante

Antisuero (contiene anticuerpos – Inmunidad Pasiva)

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Identificación de Microorganismos Mediante Antisueros

Reacción de Hinchazón Capsular (Quellumng) S. Pneumoniae H. Influenzae tipo B N. Meningitidis Grupos A y B

Prueba de Aglutinación en Porta Objetos Salmonella Shigella

Aglutinación de Latex Varias especies de Estreptococcus Cryptococcus Neoformans H. Influenzae tipo B N. Meningitidis

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Reacción de Contrainmunoelectroforesis S. Pneumoniae H. Influenzae N. Meningitidis Estreptococcus Grupo B

Análisis Inmunosorbente con Enzima Enlazada (ELISA) Infecciones Bacterianas Infecciones Virales Infecciones Micoticas

Pruebas con Anticuerpo Fluorescente Anticuerpo Antinuclear

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Identificación de Anticuerpos en Suero

mediante uso de Antígenos Conocidos

Aglutinación en Portaobjetos o Tubo Fiebre Tifoidea Peste Leptospirosis

Pruebas Serológicas para Sífilis Sin Treponema (VDLR, RPR) Treponémicas (Usan T. Pallidum) prueba FTA-ABS, TPI.

Se cultiva el antígeno en testículos de conejo Se inhibe el movimiento de las espiroquetas 22

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Bacilos Gram Negativos que afectan las Vías Respiratorias

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Haemophilus Influenzae

Enfermedad: Meningitis, otitis media y neumonía Característica: Son bacilos o cocobacilos Gram negativos,

pequeños e inmóviles, Exclusivo de los humanos La forma más virulenta es la Haemophilus influenzae capsulada tipo b (Hib), por su componente capsular polirribosol-ribitol-fosfato (PRP)*.

Puede adoptar dos formas encapsulada y no encapsulada. Requiere de dos factores para su crecimiento:

Factor X (protoporfirinas) Factor V (nicotinamida adenina dinucleótidoNAD)

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Enfermedades infecciosas asociadas con especies de Haemophilus

Enfermedad Especies más frecuentes Muestras

Meningitis

H. Influenzae tipo b

LCR, sangre

Epiglotitis Sangre, secreciones laríngeas

Faringitis aguda,laringotraqueobronquitis

Hisopado o secreciones laríngeas

Neumonía Esputo, aspirados traqueales, lavados bronquiales

Bacteriemia Sangre

Otitis media

H. influenzae no tipificable

Drenaje conducto auditivo,miringotomía

Bronquitis Esputo, aspirados traqueales, lavados bronquiales

Sinusitis agudaH. influenzae no tipificable

H. parainfluenzae

Aspirado senos paranasales

Tracto genital,obstétricas, perinatales

Uretrales, endocervicales, sangre, LCR

Conjuntivitis,fiebre purpúrica brasileña

H. influenzae var aegyptus Hisopado conjuntival

Endocarditis H. aphrophilusH. papaphrophilusH. parainfluenzae

Sangre

Chancro blando H. ducreyi Hisopado ulceral y endocervical, aspirado bubones 25

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Diagnostico de laboratorio: Frotis teñido por Gram mas agar chocolate enriquecido con factor X y V. En suero o liquido cefalorraquideo puede identificarse un antigeno capsular

En el Agar Chocolate, las colonias que se desarrollan, son lisas, humedas, transparentes u opacas, convexas y pueden producir un olor caracteristico debido a la produccion de Indol. Las cepas capsuladas tienen apariencia brillante y mucosa.

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Estos factores se encuentran en el interior de los hematíes. Es por esto HAEMOPHILUS = atracción por la sangre

Como necesitan medios de cultivos enriquecidos se les denomina bacterias exigentes.

Hábitat Y transmisión: forman parte de la flora, naso-oro-faringea normal y se transmiten mediante gotitas respiratorias

Tratamiento: Ampicilina y Cloramfenicol para la meningitis. Ceftriaxona o Cefuroxima contra la resistencia

Prevención: Vacuna Hib, Rifampicina 27

Especie Hemólisis Factor X

Factor V Glucosa Sacarosa Lactosa Manosa

H. influenzae – + + + – – – 27

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Legionella PneumophilaEnfermedades: Neumonía Atípica o enfermedad del legionario.

Características:

•Bacilos Gram Negativos

•Proliferan en medios enriquecidos con hierro y cisteina

Hábitat y transmisión: Vias respiratorias superiores; se trasmite por las micro gotitas de saliva de una persona a otra.

Patogenia: solo tiene endotoxinas, no se conocen toxinas, enzimas o factores de virulencia.

Diagnstico de Laboratorio: frotis teñido con impregnación argéntica o anticuerpo fluorescente, cultivo en agar carbon extracto de levadura con hierro y cisteina.

Tratamiento: Eritromicina

Prevención: no se dispone vacuna para su tratamiento.

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Bordetella PertussiEnfermedades: Tos ferina.

Características: bacilos Gram negativos pequeños

Hábitat y transmisión: en las vías respiratorias humanas y se trasmite por micro gotitas respiratorias

Patogenia: produce 2 toxinas: toxina pertussis, que estimula la adenilactociclasa; y adenilactociclasa extracelular, que inhibe la lisis por facocitosis. Posee fimbrias con proteinas hematoglutinantes, que ayudan a la adherencia al epitelio respiratorio

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Diagnostico de Laboratorio: Frotis teñido por Gram y cultivo en agar Bordet-Gengou, las pruebas serológicas no son útiles

Tratamiento: Eritromicina

Prevención: La vacuna contiene microorganismos Lisados, tiene efectos secundarios como lesión cerebral, que puede limitar su uso. Se suministra a niños en la combinación de DPT, en combinación con toxoides diftéricos y tetánicos.

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Bibliografía

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GRACIAS!

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