Determinación de proteínas plasmáticas y séricas.

Las proteínas plasmáticas (pp) son un grupo heterogéneo de proteínas con diversas funciones, pesos moleculares y densidades de carga eléctrica, pero en general se incluyen principalmente en dos grupos:

albúmina y globulinas (en esta última fracciónestán incluidos fibrinógeno, complemento y

anticuerpos, entre otras proteínas).

concentración:

La concentración de las proteínas plasmáticas se obtiene a partir de sangre con anticoagulante;

Las proteínas plasmáticas pueden ser determinadas a partir del plasma que se encuentra en la parte superior de un tubo capilar centrifugado para la determinación del hematocrito (Hto).

Las alteraciones encontradas en las pp son hiperproteinemias e hipoproteinemias.

La concentración de proteínas en el plasma, está en función del:

equilibrio hormonalnutrición balance hídricoDatos generales del paciente: especie, raza,

edad, sexo; así como los datos de historia clínica y datos de anamnesis (información sobre el problema actual).

Técnica utilizada.

Electroforesis y desintometria (proteinograma electroforético).

La electroforesis

Es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico. La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), o bien a través de una matriz porosa (electroforesis en gel), tambien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.

La variante de uso más común para el análisis de mezclas de proteínas o de ácidos nucleicos utiliza como soporte un gel.

Al poner la mezcla de moléculas y aplicar un campo eléctrico, éstas se moverán y deberán ir pasando por la malla del gel (una red tridimensional de fibras cruzadas), por lo que las pequeñas se moverán mejor, más rápidamente.

Así, las más pequeñas avanzarán más y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida.

Divisiones del electroforesis:

electroforesis de zona (separación en función de la carga).

isoelectroenfoque.

separación por tamaño en tamiz molecular (también aplicable a ácidos nucléicos).

Electroforesis de zona

Su carga neta depende del pH del medio. Normalmente, la separación electroforética de proteínas se hace a pH alcalino, en el que la mayoría de las proteínas presentan una carga global negativa. También se puede trabajar a pH ácidos, pero no demasiado bajos, ya que las proteínas precipitan en medio ácido (básicamente se usa en la detección de variantes de la hemoglobina).

Isoelectroenfoque

En lugar de separar las proteínas en función de su carga a un pH dado, se separan en función de su punto isoeléctrico (pI):

el pI es el pH en el que la carga neta de la proteína es nula, y depende de la composición aminoacídica de la proteína.

Separación por tamaño

Permite separar proteínas y ácidos nucléicos. En el caso de las proteínas, deben ser

tratadas con SDS (sodio dodecil sulfato) para que su carga sea negativa y todas migren hacia el ánodo ,la separación se hace en medios de soporte en el que se ha creado un tamiz molecular (matriz), que hace que las proteínas más pequeñas corran más que las más grandes.

Visualización de las proteínas.

Una vez separadas las proteínas, deben fijarse y teñirse para poder ser visualizadas.

Hay diferentes protocolos en función de lo que se quiere estudiar:

fijación por calor o química tinción en caso de estudios no específicos

(proteinograma y electroforesis) fijación mediante anticuerpos previa a la

tinción en caso de estudiar proteínas específicas (Inmunofijación).

Tinciones:

La tinción con plata no es utilizada si se desean hacer análisis por espectrometría de masas (MS) pero es más sensible que la tinción con Azul de Coomassie.

La tinción fluorescente es muy sensible y compatible con MS pero los costos de tinción son elevados.

Una tinción sensible y barata es la denominada "Blue Silver" o Coomassie G250 . Además, esta tinción es compatible con MS. esta compuesta por azul de coomassie diluido en una solución coloidal y se utiliza agua destilada para desteñir el gel de poliacrilamida.

¿Dónde se aplica?

pueden analizarse las proteínas contenidas en diferentes líquidos biológicos:

sangreplasma (el líquido sanguíneo sin células) suero (plasma sin fibrinógeno) orina LCR líquido sinovial saliva lágrimas Así como alimentos, especialmente lácteos y cereales.

Principales proteínas del plasma sanguíneo

ALBUMINAS: es la mas abundante de las proteínas del plasma.

GLOBULINAS: La fracción de globulinas es sumamente compleja. En general las globulinas contienen proteínas conjugadas de dos tipo principales: glicoproteínas (beta) y lipoproteínas (alfa)

GAMA O INMUNOGLOBULINAS

La fracción de globulinas α presenta dos tipos en el proteinograma α1 y α2, excepto en pequeños rumiante y en el cerdo. La mayoría son sintetizadas en el hígado y entre ellas se encuentran:

Globulinas α1:ANTITRIPSINAPROTROMBINATRANSCORTINA

Globulinas α2:CERULOPLASMINAHAPTOGLOBINAMACROGLOBULINAERITROPOYETINA

b-globulinas : entre ellas hallamos las glicoproteínas:proteínas del complementoFerritina

GAMA O INMUNOGLOBULINAS: Son anticuerpos formados por el organismo

frente a la presencia de sustancias que son reconocidas como extrañas a él y son sintetizadas por las células plasmáticas derivadas de linfocitos B.

Concentración:

La concentración total de proteínas plasmáticas varía entre 6 – 8 g/dl.

En clínica tiene cierto interés conocer la relación entre las concentraciones de albúminas y globulinas (a:g) cuyo valor normal es en término medio, 0,8 a 1.

La disminución de este valor es un hallazgo frecuente en clínica.

Relación albúmina:globulinas (rel. A:G)

Es un valor calculado, obtenido de dividir la albúmina entre las globulinas.

Disminución de la relación A:G. Aumento de globulinas por disminución de albúmina.

Elevación de la relación A:G. Hipogammaglobulinemia (frecuente en becerros),

inmunodeficiencia congénita, inmunodeficiencia adquirida.

densitometría,

procedimiento que mide la intensidad de la coloración en los distintos sectores de la tira coloreada, se puede obtener un trazado que dibuja una serie de ondas o picos en correspondencia con cada una de las bandas. La superficie de cada pico es proporcional a la intensidad de color y tamaño de las bandas originales. Este trazado suele designarse proteinograma electroforético.

Proteinograma de referencia para las distintas especies:

varía de acuerdo a diferentes factores fisiológicos a saber:

especie sexo edad (recién nacidos, viejos) estado fisiológico (gestación y lactancia), estado metabólico (hidratación, hormonas), actitud productiva (puesta de huevos,

lactancia...) factores ambientales (efectos nutricionales,

estrés).

Alteraciones:

El término disproteinemia:se refiere a cualquier alteración en la cantidad

de proteínas de la sangre.

Hiperproteinemias.

La causa más frecuente de este tipo de alteración se relaciona con:

Hemoconcentración. Algunos signos clínicos que se pueden mencionar son:

vómito, diarrea, poliuria, ascitis, fiebre, sudoración profusa y, en equinos, en algunos casos de síndrome abdominal agudo. Se recomienda efectuar perfil de laboratorio para detectar otras alteraciones concomitantes como: eritrocitosis, hiperalbuminemia,

hipergammaglobulinemia e hiperazotemia prerrenal.

Hipoproteinemias.

Se deben considerar las siguientes causas:Disminución en la síntesis proteica, provocada

por insuficiencia hepática, alimentación con escasa cantidad de proteínas, síndrome de mala digestión (insuficiencia exocrina pancreática), síndrome de mala absorción (enteropatía con pérdida de proteínas) e insuficiencia cardiaca congestiva. Pérdida de proteínas, por vía renal (glomerulonefropatía), a través del intestino (diarrea con pérdida de proteínas), por quemaduras, hemorragia.