Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultas de Farmacia y BioquímicaEscuela de Farmacia y Bioquímica

QUÍMICA ORGÁNICA II

«IDENTIFICACIÓN Y ACTIVIDAD BIOLÓGICA DE COMPUESTOS

ACTIVOS EN ANEMONAS,ERIZOS Y ESTRELLA DE MAR»

INTEGRANTES:

- Karen Kheyd, Chávez Dávila.- Arnaldo Joseph, Navarro Soto.- Carlos Alberto, Carreal Gómez.- Richard Kevin, Guerra Caballero.

PROFESOR: César Máximo, Fuertes Ruiton.

LUGAR DE LA RECOLECCION DE

LAS MUESTRAS

Playas de Ancón (Lima – Perú),exactamente en una lugar

llamado por sus pobladores como “Playa los descalzos” encontrado en esta zona una variedad de animales

marinos , sobre todo de invertebrados.

CARACTERISTICAS DE LAS MUESTRAS

Stichaster Striatus ( estrella de mar)

Familia: stichasteridae

Clase :asteroidea.

Phymactis papillosa (anémona de mar)

Familia: actiniidae.

Clase : anthozoa

Tetrapygus niger (erizo de mar)

Familia : equinodermos.

Clase : equinoideos

PARTE EXPERIMENTAL:

INVERTEBRADO: «Phymactis papillosa» (Anemona de mar) y Tetrapigus niger (erizo de mar)

1. PESADO DE LAS ANÉMONAS Y ERIZOS DE MAR :

18 anémonas de mar y 33 erizos de mar

2. SECADO :

Porcentaje de humedad: 78,64% (anémona), porcentaje de humedad (erizo): 85 %

PULVERIZADO DE LA MUESTRA

Una vez secada la muestra de estrellas de mar , se trituro manualmente y se pulverizo usando un mortero , convirtiéndolo hasta polvo (toda la muestra).

Anémona de mar

Estrella de mar

Erizo de mar

MACERADO DE LA MUESTRA

Se dejó reposar por una semana la muestra del pulverizado de la muestra, extrayendo los metabolitos que son afines en polaridad al solvente, estando entre estos los alcaloides

IDENTIFICACION DE ALCALOIDES

ESTRELLA DE MAR

ANEMONA DE MAR

ERIZO DE MAR

Cromatografía en capa fina silica gel.Fase móvil: cloroformo/metanol (3ml:1,5ml).

Anemona>Estrella> Erizo

Se uso reactivo de dragendorff.

AISLAMIENTO DE ALCALOIDES EN

ANEMONA DE MAR

El extracto etanólico se acidulo con HCl concentrado obteniendo el clorhidrato del alcaloide y luego se llevo a la pera de bromo .

La fase acuosa se alcalinizó con NaCO3, luego se lavo con cloroformo consecutivamente 3 veces obteniendo finalmente el alcaloide puro.

Proceso de la identificación y aislamientode saponinas en Estrellas de mar

1. PESADO DE LAS ESTRELLAS DE MAR :

Peso : 1247g

2. SECADO :

Peso después del secado:387,2 g Porcentaje de humedad  igual a 68,95%.

19 estrellas de mar (stichaster striatus)

Se extrajo 1g de la muestra de estrella mar y se disolvió con una cierta cantidad de cloroformo en un tubo de ensayo, luego se procedió a agitarlo fuertemente y constantemente durante varios minutos , a final dio como resultado espuma que se mantuvo durante 1 minuto.

Prueba de índice afrosimétrico

MACERADO DE LA MUESTRA:

Se maceró 100g de la muestra en 200ml de etanol, dejándolo así durante una semana , agitándolo cada 24 horas para que el solvente extraiga los metabolitos de la muestra ( saponinas ).

FILTRADO DEL MACERADO

se hizo el filtrado del extracto etanólico obteniendo 130ml.

Se extrajo 10ml del extracto etanólico en un beaker y se evaporo en baño maria.

1 gramo y lo colocamos en un tubo de ensayo y le agregamos 6ml a 10 ml de agua y se procedió a hacer la prueba de espuma nuevamente, dando resultados positivos.

COMPROBACION DE SAPONINAS EN CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

Se preparó el revelador : Reactivo de vainillina , para la comprobación de saponinas.

Fase estacionaria: placa silica gel

Se hizo 3 cromatografias en capa fina con diferentes sistemas de solventes:

Fase móvil A: Fase móvil B : Fase móvil C:(n-butanol; ácido acético; agua) (Acetato de etilo ; metanol; agua (2ml de acetato de etilo (7:1:2) y acido acético) (7.5:2 : 0.3:0.2) +4 gotas de metanol)

Cada placa fue revelada con el reactivo de vainillina usando el atomizador , los resultados dieron positivo con la fase móvil A , donde se halló presencia de saponinas en lugar del sembrado con el extracto etanólico.

Sembrado de las muestras

AISLAMIENTO DE SAPONINAS:

Se preparó la cromatografía en columna donde se uso: - Kieselgel 0.2 – 0.5 mm (30 – 70 mesL ASTM), (Silica gel para cromatografía en columna)-Lana de vidrio.b)Se pesó la silica gel ( en polvo) siendo su peso 15,4 g.

se preparó el sistema de solventes n-butanol , ácido acético y agua (7:2.1) . Total: 100ml.

CROMATOGRAFIA EN COLUMNA

Se usó 79 viales donde cada vial tuvo aproximadamente 0.5ml de la muestra de saponinas aislada en el proceso del goteo. 

Obtencion de l aislamiento.

IR

PARTE EXPERIMENTAL

INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)

Se han propuesto muchas reacciones de color par detectar la presencia de estos compuestos, siendo los mas usuales: la reacción de Liebermann Burchard.

PROCEDIMIENTO:

Muestra problema pocas gotas de HOAc 3 ml de Ac2O/H2SO4 (50:1)

Las saponinas triterpenoide dan color rosado o purpura, mientras que las

saponinas esteroidales dan azul-verdoso

PARTE EXPERIMENTAL

INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar) Prueba de

hemólisis

Se aplicó una gota de sangre

Luego de adicionar una gota de sangre se colocó

una gota de saponina

PARTE EXPERIMENTAL

INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar) Índice

Hemolítico

MATERIALES :-Centrifuga, micropipeta , fiola , pipeta ,sangre humana, tubos de ensayo y suero fisiológico.

Centrifugado por 15 minutos

Se agrega los elementos

formes separado del plasma a la

fiola.

Se enrasa con suero fisiológico 9% hasta aprox.

100ml.Se agrega la M.S y M.E a los tubos en cantidades de 0.1,0.2,... Hasta 1ml, luego se completa hasta 5ml con la solución de la fiola. En total fueron 10 tubos para la M.E y 10 tubos para la M.S

RESULTADOS

RESULTADOS:

INVERTEBRADOS: «Tetrapygus niger» (erizo de mar), «Phymactis papillosa» (Anemona de mar) y «Stichaster striatus» (estrella de mar)

Anémona de mar

Erizo de mar

Estrella de mar

RESULTADOS:

INVERTEBRADO: «Phymactis papillosa» (Anemona de mar)

Extracto clorofórmic

o

Extracto etanólico

Mancha naranja, obtenida después del

aislamiento

RESULTADOS:

INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)

Prueba de

espuma

CCF con el reactivo de vainillina

sulfúrica

Prueba de cromatografía

en columna

Extracto clorofórmico

Extracto

etanólico

Siembra a partir de los viales con saponina

Espuma estable por más de 5

minutos

RESULTADOS:

INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)

Prueba de Liebermann-Burchard

Se observó que en el orificio A cambió de coloración a un rojizo tenue evidenciando que la muestra posee saponinas de tipo triterpenoide

A B C

RESULTADOS:

INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)

Prueba de hemólisis

Una gota de sangre diluida

Una gota de sangre diluida

Saponina

estándar

Saponina de la

estrella de mar

Una gota de sangre

diluida sin saponina

RESULTADOS:

INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)

Índice Hemolítico

Actividad

Biológica

Muestra estándar , con resultado

positivo.

0,1; 0,2; 0,3;0,4; 0,5;0,6;0,7;0,8;0,9 ;1ml

0,1;0,2;0,3;0,4;0,5;0,6;0,7;0,8;0,9; 1mlLa muestra de las saponinas que

contenía 0.1g de nuestro muestra seca más 10ml de suero fisiológico.

1 2 3 4 ....

A partir del tubo 4 de la M.S , los tubos restantes mostraron hemolisis

de la sangre iguales que en la muestra estándar, tenían coloreado

de rojo (liberación de la Hb).Por tanto se considera un resultado

positivo.Tubo de ensayo numero 4

En esta imagen se muestra 2 tubos ( el de 0,1ml y el 0,2 ml) y se nota los eritrocitos que han sedimentado , ya que la muestra de saponinas en esos tubos se llenaron con una concentración baja , pareciéndose a la muestra en blanco. Se concluye que en nuestra muestra de saponinas a mayor concentración a un volumen determinado en los tubos surge la hemolisis .

En el tubo 1 , cuyo contenido es de 0,1ml de M.S ; se observa los eritrocitos que no han sido afectados y han precipitados.

En el tubo 2, cuyo contenido es de 0,2,ml de M.S , la coloración ha aumentado ,debido a la concentración de M.S.

Esta imagen pertenece a la muestra estándar , muestra pura de

saponinas, donde la

M.E. reacciono

con toda las saponinas.

Cálculos: Índice Hemolítico

0,1g saponina MP ------------------> 10ml suero fisiológico

X ------------------> 0,4 ml

X= 0,004 g

0,004 g ------------------> 5 ml

1 g ------------------> X

X = 1250,00 (I.H)

RESULTADOS:

INVERTEBRADO: «Stichaster striatus» (estrella de mar)

Espectroscopia Infrarroja

(IR)

Se presume que entre las

señales 1385-1380 cm -1 se

encuentra el gen dimetilEste pico

demuestra el grupo -

OH

Discusiones y conclusiones

Discusiones

Aislamiento de

saponinas

Cromatografía en columna:

teoría de platos teóricos.

Desplazamiento (elución) con

eventual separación de constituyentes

Discusiones• Actividad hemolítica: interacción entre saponina y

membrana de eritrocito (lisis)

HEMÓLISIS

Discusiones• Alcaloides son los únicos metabolitos que pueden

pasar de medio ácido a básico y reestablecer su estructura

Sales (clorhidrato

s)Alcaloides

Discusiones

SAPONINA ESTEROIDAL

Absorciones del espiroacetal (4 bandas) entre 800 y 1000 cm-1

SAPONINA TRITERPENOIDE

Grupo “gem”(1380 cm-1 )

Conclusiones• % humedad: (erizo>anémona>estrella de mar)

CCF con Rvo Dragendorff : resultado positivo.

• Solventes utilizados: para saponinas: (n-butanol, ac. acetico y agua), para macerado (etanol y cloroformo)

Conclusiones

Identificación de

saponinas

Índice afrosimétrico

Ensayo de Lieberman-Bouchman

Espectroscopía IR

Cromatografía en columna

Conclusiones• Comprobación de actividad hemolítica,

característico de las saponinas, lo que indica que este animal tiene compuestos muy prometedores para el ámbito farmacéutico y a nivel de industria.