CULTIVOS MICROBIANOS

CULTIVO EN SISTEMA CERRADO /

CULTIVO EN SISTEMA ABIERTO

CULTIVO EN SISTEMA CERRADO

Tambin llamado cultivo en medio no renovado

Crecimiento en un volumen fijo de medio de

cultivo

Condiciones constantes al principio de la

fase log, pero al aumentar el # de clulas

cambian las condiciones del medio,

afectando el crecimiento poblacional

Fase

Lag

Fase Log o

exponencia

l

Fase

estacionaria Fase de

muerte o

declinacin

logartmica

CULTIVO EN SISTEMA ABIERTO

Tambin llamado cultivo continuo o cultivo en medio renovado

Cultivo en que se aade constantemente medio fresco y se retira constantemente medio usado estado de equlibrio

Ej. Quimiostato y turbidostato

Permite controlar independientemente

la velocidad de crecimiento y la

densidad de la poblacin.

Usos

Experimentos fisiolgicos (poblacin

constante en fase log)

Ecologa microbiana (competitividad por

nutrientes a baja concentracin)

Quimiostato: se alimenta un recipiente de cultivo con un medio estril a la misma velocidad con que se gasta el medio que contiene los microorganismos

MEDICIN DE CRECIMIENTO

El crecimiento de poblaciones se mide por:

Estimando los cambios en el # de clulas

Cantidad de algn compuesto celular

Peso total seco de las clulas

Hay mtodos directos e indirectos

MTODOS DIRECTOS

RECUENTO DE CLULAS

TOTALES:

Recuento directo seco (en

portaobjetos)

Recuento directo lquido (en

cmaras de recuento)

Rpido

Econmico

Sencillo

No diferencia entre clulas vivas y muertas

Difcil contar clulas pequeas

Si no se puede teir requiere de microscopio de contraste de fases

No adecuado para bajas densidades celulares (< 106

clulas/mL)

Ventajas Desventajas

MTODOS DIRECTOS

RECUENTO DE CLULAS VIABLES: Tambin llamado recuento en placa o

recuento de colonias

Consiste en cuantificar el # de clulas de la

muestra que son capaces de formar colonias en

un medio slido adecuado

Se asume que cada clula viable puede formar una colonia

Resultado se expresa en UFC/mL

MTODO DE EXTENSIN ENPLACA

MTODO POR VERTIDO ENPLACA

C

MA

RA

DE

QU

EB

EC

Equipo

compuesto

por una lupa,

iluminacin y

recuadros

de medidas

definidas

para facilitar

el recuento

de las

unidades

formadoras

de colonias

(UFC/mL)

C

ON

TA

DO

RE

S M

OD

ER

NO

S

[ ] clulas podran generar colonias fusionadas y alterara el recuento

[ ] clulas no permitira un clculo estadsticamente significativo

Recuento debe oscilar de 30 a 300 UFC

dilucin de suspensiones celulares

.filtracin por membrana:

MTODOS INDIRECTOS

MEDIDA DE TURBIDEZ

Una suspensin bacteriana aparece

turbia porque las clulas dispersan la

luz que atraviesa la suspensin

#clulas dispersin de luz turbidez

Medicin por fotmetro o espectrofotmetro

Requiere de curva estndar

DETERMINACIN DE CONTENIDO

DE NITRGENO

Las bacterias contiene aprox. 14%

nitrgeno (peso seco)

Mtodo de anlisis qumico cuantitativo

para determinar el contenido de nitrgeno

y relacionarlo con la cantidad de clulas

microbianas

Usado en investigacin

Desventajas:

Muy laborioso

Solo puede hacerse en muestras

libres de otra fuente de nitrgeno

Solo aplica a poblaciones

concentradas

DETERMINACIN DE PESO SECO

Determina la masa celular

Ventajas: fcil y reproducible

Desventajas: aplica a suspensiones celulares muy densas

Usos: investigacin

MEDICIN DE CAMBIOS

QUMICOS ESPECFICOS

Ejemplo: la medicin de produccin

de cido al fermentar glucosa bajo

condiciones especficas, es

proporcional a la magnitud

poblacional

CULTIVO MIXTO / CULTIVO

PURO

CULTIVO MIXTO

La poblacin microbiana es grande y compleja

CULTIVO PURO

Formado de

poblaciones derivadas

de una sola clula

Para determinar las

caractersticas de

especies concretas de

microorganismos es

importante aislarlo

como cultivo axnico.

TCNICA DE ESTRIADO

.TCNICA DE DILUCIN YVERTIDO/ESPARCIDO

.TCNICA AISLAMIENTO DE UNA SOLACLULA

Micromanipulador

adaptado a

microscopio

Controla el movimiento

de una micropipeta de

tal manera de tomar

una sola clula de una

suspensin y

traspasarla a otro

medio

MANTENIMIENTO Y PRESERVACIN DE

CULTIVOS PUROS

Resiembra peridica a medios frescos

Bacteria Medio Tiempo

resistencia

T incubacin T almacenamiento

Bacillus Agar

nutritivo

12 meses o

mas

28 10

Pseudomonas Agar

nutritivo

3 meses 28 10

Clostridium Medio de

carne

cocida

6 meses o

mas

28 Ambiental

Mycobacterium Agar

glicerol

4 meses 30 10

Cultivos con capa de aceite

mineral: se cubre 1.5 cm por

encima de la superficie del medio.

Viabilidad de aos (algunos 15 a

20 aos)

Liofilizacin: secado rpido en

congelacin (20 aos)

Muy bajas temperaturas:

Nitrgeno lquido (-196 C)

Agente crioprotector(glicerol o dimetilsulfxido)

D

UD

AS

?

aislamiento de Salmonella sp. utilizando

agar Rambach