cuaderno practicas toxi molecular sevilla

5/9/2018 Cuaderno Practicas Toxi Molecular Sevilla - slidepdf.com

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Area de Toxicología. Universidad de Sevilla http://www.area.us.es/toxicologia - 1 -

Area de ToxicologíaUniversidad de Sevilla

PRÁCTICAS

DE

TOXICOLOGÍA

Curso 200 -200

Alumno/a:

Asignatura:Toxicología (L. Farmacia)Toxicología Molecular (L. Bioquímica)

Profesorado:- Dra. Ana Mª Cameán Fernández- Dra. Isabel Mª Moreno Navarro- Dra. Angeles Mencía Jos Gallego- Dra. Silvia Pichardo Sánchez- Dra. Ana Isabel Prieto Ortega

Rev. 4




PT01: SEGURIDAD EN EL MANEJO DE PRODUCTOS QUIMICOS

El riesgo que supone el manejo de sustancias químicas viene determinado por la exposición a las mismos y por el peligro que éstas representan. Para poder protegernos adecuadamente nosotros mismos y el medio ambiente,hemos de poner en práctica medidas preventivas que tengan en cuenta ambos factores para asegurar su correctay segura manipulación, el adecuado almacenamiento y su correcta eliminación.

1.1. - LA EXPOSICIÓNLas características de la exposición incluyen fundamentalmente la duración del periodo de contacto, junto con laintensidad (concentración) y las circunstancias de la misma. En un anexo se incluyen las “normas generales deseguridad en el laboratorio”, cuyo fin primordial consiste en tratar de evitar la exposición.

Con relación a las vías potenciales de entrada de los compuestos al ser humano, destacan:- Vía respiratoria: Es la más frecuente e importante en medios laborales. Los contaminantes (polvos, humos,

aerosoles, gases, vapores) son inhalados y absorbidos rápidamente por los pulmones.- Vía digestiva: suele producirse por aspiración al pipetear, por conservar un producto en un envase de

alimentos, o por comer o fumar con las manos contaminadas.- Vía percutánea: Además de provocar efectos corrosivos e irritantes, diversos compuestos modifican las

barreras facilitando la entrada de otros, o atraviesan las membranas siendo absorbidos directamente hacia lasangre.

1.2. - EL ETIQUETADO: LEGISLACIÓNTodos los productos químicos son caracterizados previamente a su comercialización siguiendo lasrecomendaciones de la Unión Europea a través de las Directivas relativas a la clasificación, envasado y etiquetadode sustancias y preparados peligrosos, que están traspuestas a las legislaciones nacionales. Las legislacionesnacionales incluyen de forma concreta las indicaciones de peligrosidad que deben aplicarse a cada sustancia. Elloincluye, por lo tanto, indicaciones para el correcto etiquetado de los mismos, para que cualquier persona puedaconocer de forma rápida cuales son los riesgos asociados a su uso.

El Real Decreto 363/1995, de 10 de marzo, por el que se aprueba el Reglamento sobre notificación de sustanciasnuevas y clasificación, envasado y etiquetado de sustancias peligrosas (BOE de 5 de junio de 1995) supone lattransposición de la Directiva 67/548/CEE del Consejo, de 27 de junio de 1967, relativa a la aproximación de lasdisposiciones legales, reglamentarias y administrativas en materia de clasificación, embalaje y etiquetado de las

sustancias peligrosas (DO 196 16.08.67 p.1). Por otra parte, el Real Decreto RD 255/2003, publicado en el BOEde 4/03/2003, aprueba el Reglamento sobre Clasificación, Envasado y Etiquetado de Preparados Peligrosos,transposición de la Directiva 99/45/CEE, dándose en el mismo una guía para el correcto etiquetado de cadapreparado considerado como peligroso.

Las etiquetas de los productos fitosanitarios, químicos y reactivos contienen una valiosa información toxicológicaque a menudo no es tenida en cuenta. Podrían evitarse en gran medida los peligros para la salud y el medioambiente siguiendo las recomendaciones que dichas etiquetas contienen. La sistemática empleada por dichosreglamentos para la caracterización e indicación de la peligrosidad, sea de sustancias o de preparadosconsiderados como tales, se basa en la obligatoria inclusión en la etiqueta del envase de uno o dos símbolos opictogramas de peligrosidad, según corresponda, acompañado de los números y textos de las indicacionessobre los riesgos específicos (frases R) y las frases de seguridad o consejos de prudencia (frases S),relativos a la manipulación de productos peligrosos.

1.3. - CRITERIOS DE TOXICIDAD La legislación sobre sustancias químicas peligrosas clasifica a las mismas en tres categorías.

CATEGORIADL50 oralratamg/Kg.

DL50 cutánearata o conejomg/Kg.

CL50 inhalatoriaen ratamg/L, 4 hr

Muy tóxicasTóxicasNocivas

<2525-200200-2000

<5050-400400-2000

<0.500.50-22-20

DL50: dosis letal media; CL50: concentración letal media




1.4. - LOS PICTOGRAMAS O SÍMBOLOS DE PELIGROSIDADLos símbolos de peligrosidad o pictogramas que aparecen en las etiquetas informan mediante un dibujo, delpeligro que conlleva su manejo y de las precauciones que deberán aplicarse. Existen 10 símbolos distintos. Loscuatro primeros están relacionados con la posibilidad de provocar una explosión, iniciar un incendio o favorecer laamplitud de incendios ya declarados. Es fundamental que las sustancias que lleven cualquiera de estos símbolos

se almacenen en el laboratorio en lugares convenientes, debidamente aisladosy alejados de las fuentes de calor. Los otros seis símbolos están relacionadoscon el potencial tóxico de las sustancias para los seres vivos, sus propiedadescorrosivas e irritantes

- EXPLOSIVOS: Sustancias y preparados que pueden explosionar bajo elefecto de una llama o que son más sensibles a los choques o a la fricciónque el dinitrobenceno.

- COMBURENTES: Sustancias y preparados que en contacto con otros,particularmente con los inflamables, originan una reacción fuertementeexotérmica.

- INFLAMABLES: Sustancias y preparados cuyo punto de destello sea igualo superior a 21°C e inferior o igual a 55°C.

- EXTREMADAMENTE INFLAMABLES: Sustancias y preparados líquidoscuyo punto de destello sea inferior a 0°C, y su punto de ebullición inferior oigual a 35°C.

- TÓXICOS: Sustancias y preparados que por inhalación, ingestión openetración cutánea puedan entrañar riesgos graves, agudos o crónicos eincluso la muerte.

- MUY TÓXICOS: Sustancias y preparados que por inhalación, ingestión openetración cutánea puedan entrañar riesgos extremadamente graves agudos o crónicos e incluso la muerte.

- CORROSIVOS: Sustancias y preparados que en contacto con los tejidosvivos puedan ejercer sobre ellos una acción destructiva.

- NOCIVOS: Sustancias y preparados que por inhalación, ingestión openetración cutánea puedan entrañar riesgos de gravedad limitada.

- IRRITANTES: Sustancias y preparados no corrosivos que por contactoinmediato, prolongado o repetido con la piel o mucosas puedan provocar

una reacción inflamatoria.- PELIGRO BIOLÓGICO: bacterias y virus que entrañen peligro parapersonas y/o animales.

- PELIGROSOS PARA EL MEDIO AMBIENTE: Sustancias y preparadoscuya utilización presenta o puedan presentar riesgos inmediatos o diferidospara el medio ambiente.

1.5. - OTRAS DENOMINACIONES DE PELIGROSIDAD

- ASFIXIANTES: Capaces de afectar a las personas por asfixia. Dos grupos:Simples: Porque desplazan el oxígeno del aire. Sólo son peligrosos a concentraciones elevadas.

Químicos: Impiden la llegada del oxígeno a los sitios requeridos.- CARCINOGÉNICOS: Sustancias y preparados que por inhalación, ingestión o penetración cutánea, puedenproducir cáncer o aumento de su frecuencia.

1ª Categoría: Mediante estudios epidemiológicos se ha visto una relación causa-efecto entre exposición ycáncer humano.2ª Categoría UE o 2A según IARC: Sustancias probablemente carcinogénicas en el hombre, después derealizar estudios a largo plazo en animales y de otras informaciones.3ª Categoría UE o 2B según IARC: Sustancia sospechosa, o posiblemente carcinóngena. Pero no sedispone de datos y los estudios en animales no aportan pruebas suficientes para clasificarlos en la 2ª.

- MUTAGÉNICOS: Sustancias que por inhalación, ingestión o penetración cutánea pueden producir alteracionesen el material genético de las células. Categorías igual que en los carcinogénicos.- TERATOGÉNICOS: Sustancias y preparados que por inhalación, ingestión o penetración cutánea puedenproducir alteraciones en el feto durante su desarrollo intrauterino, causando malformaciones.

1ª Categoría: Asociación causa-efecto2ª Categoría: Se dispone de suficientes elementos de juicio.- ALERGENOS: Sustancias químicas que al contacto con la piel y las mucosas o su entrada en el organismo,provoca una reacción anormal del sistema de defensa inmunológico.




Debe tenerse en cuenta que aunque muchas sustancias o preparados no requieran indicación de peligrosidad, nopor ello deben considerarse inocuas, sobre todo si se tiene en cuenta su capacidad de reacción con otrosproductos. Por todo ello, es recomendable que al manipular cualquier producto químico, se tomen las debidasprecauciones, tanto en los considerados como peligrosos, como en los no considerados como tales.

1.6. - PRODUCTOS FITOSANITARIOSSon productos fitosanitarios los insecticidas, bactericidas, fungicidas, desinfectantes, herbicidas, abonos,tratamientos postcosecha, fitorreguladores, productos nutricionales y fertilizantes. En cualquier caso sualmacenamiento y eliminación estarán controlados. Teniendo en cuenta que la toxicidad de los productosfitosanitarios puede variar para productos con la misma riqueza y presentación, por motivos tales como lascaracterísticas del producto, los disolventes u otros coadyuvantes que contengan y la fase de recalificación en quese encuentren, aparecen las siguientes notaciones en las etiquetas de los productos:- Peligrosidad para el hombre y animales domésticos: Después del término "hombre" aparecen una o más

de las notaciones siguientes, en orden creciente de peligrosidad: Baja, Irritante Xi, Nocivo Xn, Tóxico T, MuyTóxico T+. Si el producto fuera explosivo o inflamable aparecen las letras E o F.

- Peligrosidad para la fauna terrestre: Después del término "terrestre" pueden aparecer las letras siguientes;A, B, C.

- Peligrosidad para la fauna acuícola: Después del término "acuícola " pueden aparecer las letras siguientes;A, B, C.

- Peligrosidad apícola: Después del término "apícola" pueden aparecer una o más de las letras siguientes; A,B, C, D.

En todos los casos la peligrosidad de un producto aumenta según la serie: A, B, C, D.

1.7. - FRASES R (Riesgo) o INDICACIONES SOBRE RIESGOS ESPECÍFICOS Las frases de riesgo especifican el peligro que conlleva el manejo de los productos químicos, tanto a corto como alargo plazo. Constituyen una ampliación de la información proporcionada por el símbolo de peligrosidad. Existen64 frases de riesgo distintas, numeradas correlativamente (R1). R64) y cerca de 50 frases de riesgo combinadas(Ver anexo).

1.8. - FRASES S (Seguridad) o CONSEJOS DE PRUDENCIALas frases de seguridad o consejos de prudencia dan indicaciones sobre la manera adecuada de almacenar ymanejar los productos químicos. Existen 62 frases distintas de seguridad numeradas correlativamente (S1). S62) yunas 40 frases de seguridad combinada (ver anexo)

1.9. - ALMACENAMIENTO DE SUSTANCIAS PELIGROSAS Tan importante como manejar correctamente los productos químicos es almacenarlos adecuadamente. Desde elpunto de vista de la toxicidad, aquellas sustancias que sean muy tóxicas deben ser almacenadas de forma que selimite su extensión tras una rotura accidental del recipiente. Es importante prestar especial atención en el caso desólidos y líquidos volátiles ya que una de las vías de intoxicación más común en los laboratorios es la inhalatoria.Debe tenerse en cuenta además la posibilidad de que dos productos inocuos, mezclados dejen de serlo, o de queen ocasiones un producto aumente la toxicidad de otro.Hay sustancias cuyo efecto es acumulativo, por lo que exposiciones prolongadas a bajas dosis pueden ser muypeligrosas. Hay que asegurarse de que los recipientes que contienen este tipo de productos estén bien cerrados.

1.10. - ELIMINACIÓN DE RESIDUOS Debido al peligro que suponen los residuos químicos para la salud y preservación del medio ambiente, se hace

necesaria una adecuada eliminación de los mismos. Como norma general, los residuos se acumularán enrecipientes que convenientemente etiquetados se eliminarán como ordena la ley, atendiendo a sus característicasquímicas y toxicidad. Es importante recordar que los recipientes que los contienen también están clasificadoscomo residuos. La información específica sobre un compuesto puede encontrarse en catálogos o solicitarse a lasfirmas que lo producen. Desde el punto de vista práctico, los residuos pueden clasificarse como:

Residuos tóxicos y peligrosos:- Acidos y disoluciones ácidas- Bases y disoluciones básicas- Residuos orgánicos no disolventes- Sales y disoluciones de sales- Aceites minerales- Metales y disoluciones de metales

- Disolventes orgánicos clorados- Disolventes orgánicos no clorados

- Mercurio y sus derivados- Otros compuestos no clasificados

Otros tipos de residuos:- Residuos radioactivos- Residuos biológicos peligrosos- Residuos biológicos asimilables a urbanos

- Otros residuos asimilables a urbanos - Objetos cortantes y punzantes




NORMAS GENERALES DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Generales• Las instalaciones deben ser adecuadas para prevenir accidentes y exposiciones• El acceso debe ser restringido. Nunca quedarse solo en el laboratorio• Disponer de información clara sobre operaciones de riesgo• Recordar siempre los riesgos físicos, químicos y biológicos, las vías de entrada de los mismos, y tratar de

prevenir la exposición y accidentes

Hábitos personales• Es imprescindible el uso de la bata, manteniéndola abrochada. • No fumar, comer, beber ni aplicarse cosméticos, ni guardar alimentos ni bebidas en los frigoríficos del

laboratorio• Es conveniente el uso de gafas protectoras.• Emplear guantes, mascarillas y bata desechable cuando se manipulen productos muy peligrosos, o cuando se

prevea la posibilidad de exposición (polvos finos, aerosoles).• Poner suma atención en cuanto a la presencia de llamas abiertas u otras posibles fuentes de ignición • No colocar objetos personales en mesas de trabajo o poyatas. • Llevar recogidos los cabellos. No llevar pulseras, colgantes o mangas anchas por el peligro de engancharse. • Avisar si se padece alguna alergia.• Lavarse las manos antes de abandonar el laboratorio, y quitarse la bata

Hábitos laborales • No exponerse ni exponer a los demás: ante la menor duda, preguntar • No tocar con las manos ni probar los productos químicos. • Evitar inhalar los productos químicos, sus polvos, vapores o aerosoles. Utilizar la vitrina de gases cuando sea

necesario.• No pipetear con la boca. • No mezclar reactivos a menos que se tenga seguridad de que puede hacerse.• No llenar los tubos de ensayo más de dos centímetros por debajo del borde. En las valoraciones no llenar los

recipientes por encima de la mitad de su capacidad.• Cerrar las botellas inmediatamente con su tapón correspondiente.

• Calentar los tubos de ensayo inclinados y utilizando pinzas. No dirigir hacia uno mismo ni hacia los demás,tubos de ensayo, matraces, etc. que estén calentándose o emitiendo vapores.

• Utilizar gradillas y soportes. No llevar tubos de ensayo ni productos en los bolsillos de la bata.• Tomar los tubos de ensayo con los dedos nunca con la mano.• No reintegrar reactivos a su recipiente de origen para no contaminarlo. No tomar reactivos en exceso.• Trabajar siempre sobre la mesa o poyata. • Utilizar encendedores piezoeléctricos largos; no emplear cerillas ni encendedores de bolsillo. No abandonar

los mecheros encendidos sin atender.• Cuando se quiera hervir líquidos (p. ej. destilación), se deben calentar con plato poroso en su interior.• Si se debe calentar algún disolvente orgánico, se empleará manta o placa calefactora, nunca mechero.• Tratar con delicadeza el material de vidrio, y con cuidado los equipos eléctricos, y los gases a presión o vacío.• El empleo de material radioactivo exige autorización del manipulador y las instalaciones.•

La utilización de animales debe hacerse por personal competente en centros registradosPreparación de disoluciones• Limpiar antes la balanza si estuviera sucia, y después de usarla. Usar una brocha o un papel, nunca soplar. • Pesar el reactivo sólido sobre papel no absorbente, de aluminio o directamente en un vaso de precipitados.

Disolverlo en vaso de precipitados. Verter la disolución en un matraz aforado y enrasar con el disolvente. • Lavar inmediatamente la espátula • Los ácidos se añaden diluidos, y muy lentamente, sobre las bases o el agua. Los agentes oxidantes se

añaden diluidos y muy lentamente, sobre los agentes reductores, y viceversa.

Para terminar • Al finalizar una reacción u operación, recoger materiales, reactivos, equipos etc., evitando acumulaciones

innecesarias.

• Asegurarse de la desconexión de aparatos, agua, gases, etc.• Limpiar el lugar de trabajo. Fregar con mucha precaución todo el material de vidrio usado, que tendrá que

ser aclarado con agua destilada.• Por último, eliminar correctamente los residuos producidos.




NATURALEZA DE LOS RIESGOSESPECIFICOS ATRIBUIDOS A LASSUSTANCIAS Y PREPARADOSPELIGROSOS (FRASES R)

- R1 Explosivo en estado seco.- R2 Riesgo de explosión por choque, fricción,

fuego u otras fuentes de ignición.- R3 Alto riesgo de explosión por choque, fricción,

fuego u otras fuentes de ignición.- R4 Forma compuestos metálicos explosivos muy

sensibles.- R5 Peligro de explosión en caso de

calentamiento.- R6 Peligro de explosión, en contacto o sin

contacto con el aire.- R7 Puede provocar incendios.- R8 Peligro de fuego en contacto con materias

combustibles.- R9 Peligro de explosión al mezclar con materias

combustibles.- R10 Inflamable.- R11 Fácilmente inflamable.- R12 Extremadamente inflamable.- R14 Reacciona violentamente con el agua.- R15 Reacciona con el agua liberando gases

extremadamente inflamables.- R16 Puede explosionar en mezcla con

sustancias comburentes.- R17 Se inflama espontáneamente en contacto

con el aire.- R18 Al usarlo pueden formarse mezclas aire-

vapor explosivas/inflamables.

- R19 Puede formar peróxidos explosivos.- R20 Nocivo por inhalación.- R21 Nocivo en contacto con la piel.- R22 Nocivo por ingestión.- R23 Tóxico por inhalación.- R24 Tóxico en contacto con la piel.- R25 Tóxico por ingestión.- R26 Muy tóxico por inhalación.- R27 Muy tóxico en contacto con la piel.- R28 Muy tóxico por ingestión.- R29 En contacto con agua libera gases tóxicos.- R30 Puede inflamarse fácilmente al usarlo.- R31 En contacto con ácidos libera gases tóxicos.- R32 En contacto con ácidos libera gases muy

tóxicos.- R33 Peligro de efectos acumulativos.- R34 Provoca quemaduras.- R35 Provoca quemaduras graves.- R36 Irrita los ojos.- R37 Irrita las vías respiratorias.- R38 Irrita la piel.- R39 Peligro de efectos irreversibles muy graves.- R40 Posibilidad de efectos irreversibles.- R41 Riesgo de lesiones oculares graves.- R42 Posibilidad de sensibilización por inhalación.-

R43 Posibilidad de sensibilización en contactocon la piel.- R44 Riesgo de explosión al calentarlo en

ambiente confinado.

- R45 Puede causar cáncer.- R46 Puede causar alteraciones genéticas

hereditarias.- R48 Riesgo de efectos graves para la salud en

caso de exposición prolongada.- R49 Puede causar cáncer por inhalación.- R50 Muy tóxico para los organismos acuáticos.- R51 Tóxico para los organismos acuáticos.

- R52 Nocivo para los organismos acuáticos.- R53 Puede provocar a largo plazo efectos

negativos en el medio ambiente acuático.- R54 Tóxico para la flora.- R55 Tóxico para la fauna.- R56 Tóxico para los organismos del suelo.- R57 Tóxico para las abejas.- R58 Puede provocar a largo plazo efectos

negativos en el medio ambiente.- R59 Peligroso para la capa de ozono.- R60 Puede perjudicar la fertilidad.- R61 Riesgo durante el embarazo de efectos

adversos para el feto.- R62 Posible riesgo de perjudicar la fertilidad.- R63 Posible riesgo durante el embarazo de

efectos adversos para el feto.- R64 Puede perjudicar a los niños alimentados

con leche materna.- R65 Nocivo: si se ingiere puede causar daño

pulmonar.- R66 La exposición repetida puede provocar

sequedad o formación de grietas en la piel.- R67 La inhalación de vapores puede provocar

somnolencia y vértigo

Combinación de las Frases R

Las frases R se combinan entre sí siempre que esnecesario.

CONSEJOS DE PRUDENCIA RELATIVOSA LAS SUSTANCIAS Y PREPARADOSPELIGROSOS (FRASES S).

- S1 Consérvese bajo llave.- S2 Manténgase fuera del alcance de los niños.- S3 Consérvese en lugar fresco.- S4 Manténgase lejos de locales habitados.- S5 Consérvese en (líquido apropiado a

especificar por el fabricante).- S6 Consérvese en. (gas inerte a especificar por

el fabricante)- S7 Manténgase el recipiente bien cerrado.- S8 Manténgase el recipiente en lugar seco.- S9 Consérvese el recipiente en lugar bien

ventilado.- S12 No cerrar el recipiente herméticamente.- S13 Manténgase lejos de alimentos, bebidas y

piensos.- S14 Consérvese lejos de. (materiales

incompatibles a especificar por el fabricante).- S15 Conservar alejado del calor.- S16 Conservar alejado de toda llama o fuente de

chispas. No fumar.- S17 Manténgase lejos de materiales

combustibles.




- S18 Manipúlese y ábrase el recipiente conprudencia.

- S20 No comer ni beber durante su utilización.- S21 No fumar durante su utilización.- S22 No respirar el polvo.- S23 No respirar los

gases/humos/vapores/aerosoles[denominación(es) adecuada(s) a especificar por el fabricante].

- S24 Evítese el contacto con la piel.- S25 Evítese el contacto con los ojos.- S26 En caso de contacto con los ojos, lávense

inmediata y abundantemente con agua yacúdase a un médico.

- S27 Quítese inmediatamente la ropa manchadao salpicada.

- S28 En caso de contacto con la piel, láveseinmediata y abundantemente con. (productos aespecificar por el fabricante).

- S29 No tirar los residuos por el desagüe.- S30 No echar jamás agua a este producto.- S33 Evítese la acumulación de cargas

electrostáticas.- S35 Elimínense los residuos del producto y sus

recipientes con todas las precauciones posibles.- S36 Úsese indumentaria protectora adecuada.- S37 Úsense guantes adecuados.- S38 En caso de ventilación insuficiente, úsese

equipo respiratorio adecuado.- S39 Úsese protección para los ojos/la cara.- S40 Para limpiar el suelo y los objetos

contaminados por este producto, úsese. (aespecificar por el fabricante).

-

S41 En caso de incendio y/o de explosión norespire los humos.- S42 Durante las fumigaciones/pulverizaciones,

úsese equipo respiratorio adecuado.[Denominación(es) adecuada(s)a especificar por el fabricante].

- S43 En caso de incendio, utilizar. (los medios deextinción los debe especificar el fabricante).(Si elagua aumenta el riesgo, se deberá añadir: "Nousar nunca agua").

- S45 En caso de accidente o malestar, acúdaseinmediatamente al médico (si es posible,muéstrele la etiqueta).

- S46 En caso de ingestión, acúdaseinmediatamente al médico y muéstrele laetiqueta o el envase.

- S47 Consérvese a una temperatura no superior a. ºC (a especificar por el fabricante).

- S48 Consérvese húmedo con. (medio apropiadoa especificar por el fabricante).

- S49 Consérvese únicamente en el recipiente deorigen.

- S50 No mezclar con. (a especificar por elfabricante).

- S51 Úsese únicamente en lugares bienventilados.

- S52 No usar sobre grandes superficies enlocales habitados.

- S53 Evítese la exposición. Recábenseinstrucciones especiales antes del uso.

- S56 Elimínense esta sustancia y su recipiente enun punto de recogida pública de residuosespeciales o peligrosos.

- S57 Utilícese un envase de seguridad adecuadopara evitar la contaminación del medio ambiente.

- S59 Remitirse al fabricante o proveedor paraobtener información sobre surecuperación/reciclado.

- S60 Elimínense el producto y su recipiente comoresiduos peligrosos.

- S61 Evítese su liberación al medio ambiente.Recábense instrucciones específicas de la fichade datos de seguridad.

-

S62 En caso de ingestión no provocar el vómito:acúdase inmediatamente al médico y muéstrelela etiqueta o el envase.

- S63 En caso de accidente por inhalación, alejar a la víctima fuera de la zona contaminada ymantenerla en reposo.

- S64 En caso de ingestión, lavar la boca conagua (solamente si la persona está consciente).

Combinación de las Frases S

Las frases S tambien se combinan como ocurría conlas R.

Referencias:- Bello J, López de Cerain A, Ezpeleta O, Jiménez A, Pérez C, Alvarez L (2000) Toxicología. Guía de Practicas,

Newbook, Navarra- Cameán AM, Moreno IM, López-Artíguez M, Repetto G y Repetto M (2000) Preparación y realización de un

programa de prácticas experimentales para asignaturas del Area de Toxicología: motivación positiva en elaprendizaje teorico-práctico de Toxicología. Instituto de Ciencias de la Educación, Universidad de Sevilla.

- Repetto M (2001) Evolución, Estado Actual, Retos y Tendencias de la Toxicologia al Iniciar el Milenio. CD-ROM. Area de Toxicología. Universidad de Sevilla. Sevilla

Para saber más:http://www.msc.es/salud/ambiental/http://www.forpas.us.es/uma

http://www.us.es/sgprl/http://www.mtas.es/insht/ipcsnspn/spanish.htmhttp://www.tc.gc.ca/canutec/erg_gmu/erg2000_menu.htm




Realización de la práctica de seguridad en el manejo de productos químicos.Contesta las siguientes preguntas:

¿Es inocuo un producto etiquetado sin pictogramas?

¿Cuáles son los dos factores fundamentales que condicionan la exposición?

¿Qué significa la notación Xn?

Definir el significado del pictograma

¿Qué significa la frase de seguridad S51?

¿Cuál es la clave de riesgo que identifica a los compuestos capaces de causar quemaduras?

¿Cómo se clasifica un compuesto con una DL50 de 300 mg/Kg. ?

¿Cuáles son los riesgos de un producto etiquetado con R18?

¿Por qué no debe fumarse en presencia de compuestos químicos?

¿Qué indica el símbolo? ¿Qué precauciones deben tomarse?

¿Qué claves identifican a la frase de riesgo siguiente? : “Tóxico: riesgo de efectos graves para la salud en caso deexposición prolongada por inhalación, contacto con la piel e ingestión”.

¿En que contenedor de residuos debe depositarse un frasco con restos de cloroformo?

¿Cuál es el significado de Xi?

¿Qué indican los consejos de prudencia S3/9/49?

¿Cuál es la principal vía de entrada al organismo de contaminantes en el laboratorio?

Dibuja el pictograma correspondiente a comburente.

¿Qué precauciones de manejo deben tomarse para un compuesto etiquetado con el consejo de seguridad S 18?

¿Qué significa T+?

¿Puede tirarse por el desagüe un producto cuya etiqueta no tiene pictogramas, frases R ni S?




PT02: EXTRACCION DE TÓXICOS ORGÁNICOS

OBJETIVOS.1. Aplicar los procesos de extracción en medio ácido y medio básico para extraer alcaloides y barbitúricos enmuestras biológicas.2. Aplicar la cromatografía en capa fina (CCF) para identificar tóxicos no volátiles (alcaloides) en muestrasbiológicas.

La extracción que se describe a continuación sólo es útil en el caso de muestras sencillas, exentas de lípidos yprótidos. Si la muestra es compleja se recurrirá a otros procedimientos Stas-Otto, electrodiálisis, ultrafiltración, etc.

TÉCNICA:A 10 ml de la disolución problema, se añaden 2 ml de HCl 1N. Se agita con 10 ml de diclorometano en vitrinadurante aproximadamente 2 minutos, aliviar los gases que se forman en la reacción. Se separa la fase orgánica(inferior), que puede contener drogas de carácter ácido.

La fase acuosa ácida se alcaliniza con 3 ml de NaOH 1N, se extrae durante 2 minutos, con 10 ml dediclorometano, se separa la fase orgánica (inferior) y se deseca. Este residuo contendrá las drogas de carácter básico.

La fase orgánica donde han quedado retenidas las drogas ácidas, se agita con 10 ml de una disolución tampón depH=5.6. Los barbitúricos, al tener un carácter ácido débil se ionizan a partir de un pH=5, y por tanto permaneceránen la fase orgánica, pasando los ácidos orgánicos más fuertes como el salicílico a la fase acuosa. A esta faseacuosa se adicionan 5 ml de HCl 1N y se agita durante 2 minutos con 10 ml de diclorometano. Ambas fasesorgánicas se evaporan a sequedad, en tubos de ensayos, para su posterior utilización.

Àcido Salicílico: Reactivo de Trinder Los compuestos fenólicos con el Fe 3+ dan lugar a complejos coloreados.

Reactivos:a) Reactivo de Trinder:Cloruro mercúrico 40 g

Agua destilada ..850 mlCalentar hasta disolución, enfriar y añadir

Nitrato férrico .40 gÁcido clorhídrico 1 N 120 ml

10 ml de Problema

Fase orgánica(salicílico y barbitúrico)

Fase acuosa(alcaloides y tóxicos básicos)

Fase acuosa Fase orgánica Fase orgánica Fase acuosa

Fase acuosa

Fase orgánica

2 ml de ClH 1N10 ml de Diclorometano

10 ml de tampón fosfato pH=5.6 3 mlNaOH 1N10 ml de diclorometano

Concentrar residuo AConcentrar residuo B

Concentrar residuo C

10 ml de Problema

Fase orgánica(salicílico y barbitúrico)

Fase acuosa(alcaloides y tóxicos básicos)

Fase acuosa Fase orgánica Fase orgánica Fase acuosa

Fase acuosa

Fase orgánica

2 ml de ClH 1N10 ml de Diclorometano

10 ml de tampón fosfato pH=5.6 3 mlNaOH 1N10 ml de diclorometano

Concentrar residuo AConcentrar residuo B

Concentrar residuo C

5 ml de HCl 1N10 ml de diclorometano




b) Disolución patrón de ácido salicílico: Disolver 250 mg de ácido salicílico ó 290 mg de salicilato sódicoanhidro en 1 litro de agua. Esta solución contiene 250 ppm de ácido salicílico. Conservar en nevera.

Técnica:Disolver el residuo C en 5 ml exactos de NaOH 0.1N. En tubos de ensayo colocar 0, 0.5, 1, 2, y 3 ml de ladisolución patrón de ácido salicílico y en otro tubo 2 ml del residuo C disuelto. Completar todos los tubos hasta 3ml con agua destilada y adicionar 5 ml de reactivo de Trinder. Medir absorbancia a una λ de 535 nm.

Expresar el resultado en ppm de la disolución problema inicial.

Barbitúricos. Reacción de Parri.

Se basa en la formación de complejos coloreados de barbitúricos con sales de cobalto, en un medio protofílico. Elcolor varía de un barbitúrico a otro.

Reactivos:Acetato de cobalto en metanol al 0.1%, e isopropilamina en metanol al 5%.

Técnica:

Disolver el residuo B en 2 ml de cloroformo y comprobar la existencia de barbitúricos añadiendo 0.2 ml de acetatode cobalto y 0.6 ml de solución de isopropilamina. En caso positivo se obtiene una coloración violeta que secompara con la de un patrón de barbitúrico.La reacción de Parri debe realizarse en un medio estrictamente anhidro, por lo que se debe operar con materialabsolutamente seco.

Alcaloides. Investigación por CCF

Reactivos:Fase estacionaria: silicagel-G con indicador de fluorescenciaFase móvil: cloroformo/dietilamina (9:1)

Técnica:Disolver el residuo A en 0.5 ml de acetona y depositar varias gotas en la placa de cromatografía. En la mismaplaca depositar varias gotas de los distintos patrones de alcaloides. El orden de elución de algunos alcaloides enestas condiciones es el siguiente: quinina, atropina y estricnina.




CUESTIONARIO

1. Esquematice la forma no ionizada de sus tóxicos

2. ¿Cómo identificó los alcaloides de su muestra problema?

3. ¿Cómo identificó los barbitúricos de su muestra problema?

4. ¿Qué técnica se ha usado en la práctica para la determinación de ácido salicílico?

5. Desde el punto de vista químico ¿cómo se comportan los alcaloides (atropina, quinina y estricnina en un medioácido y en un medio básico?

6. Desde el punto de vista químico ¿cómo se comportan los barbitúricos en un medio ácido y en un medio básico?

7. Teniendo en cuenta que valores de salícilico en orina de 500 mg /L son letales, ¿Cuál es la interpretacióntoxicológica del resultado?




PT03: LA COLINESTERASA PLASMATICA COMO BIOMARCADOR; LA BIOACTIVACIONDE UN PLAGUICIDA

OBJETIVOS1. Distinción entre diana y biomarcador 2. Medida de la actividad enzimática por una técnica colorimétrica3. Ensayo in vitro de la inhibición de la enzima colinesterasa plasmática por insecticidas organofosforados

4. Comprobar la bioactivación de un plaguicida: Observar la diferente actividad anticolinesterásica del insecticidaparatión y su metabolito paraoxón

FUNDAMENTOLos insecticidas organofosforados deben su actividad biológica a la inhibición de la Acetilcolinesterasa (AChE),enzima fijada a la membrana plasmástica responsable de la hidrólisis fisiológica del neurotransmisor acetilcolina libe-rado en el espacio sináptico, impidiendo la normal degradación de éste, que produciría una sobreestimulación delsistema nervioso. Por lo tanto, su función biológica in vivo en sistema nervioso y en otros muchos tejidos es:

AChEAcetil-colina ----------- Ac. acético + colina

El centro activo de la enzima es muy característico y presenta dos lugares de unión. El primero de ellos, el lugar aniónico, es una zona con carga negativa que se combina con la positiva del átomo de nitrógeno cuaternario del

sustrato. El segundo, o sitio esteárico, tiene carga positiva y se combina con el grupo carboxílico del enlace éster y esel responsable de la afinidad y de la actividad hidrolítica.

Los inhibidores de la AChE pueden dividirse en dos grupos según que la acción sea reversible o irreversible. La inhibi-ción es reversible cuando la actividad enzimática se recupera al eliminar el inhibidor. Se comportan como talesmuchos compuestos, entre los que destacan la propia ACh en exceso, fisostigmina, cocaína, morfina, codeína,cafeína, otros opiáceos; metales como el sodio, cinc, cobre, plomo, mercurio, y litio; toxinas como la botulínica yvenenos de serpientes y arañas; anestésicos; bloqueantes musculares; antihistamínicos H2; benzodiocepínicos,barbitúricos y cardiotónicos; plaguicidas organoclorados como lindano, endosulfán y dieldrin, y el paraquat. Loscarbamatos son el modelo de inhibidores reversibles y pueden usarse preventivamente frente a otros inhibidores.

Se conocen también compuestos capaces de inducir la actividad de la enzima. Entre ellos figuran disolventes orgá-nicos como etanol, hexano, tricloroetileno, cloruro de metileno, y tolueno; metales como aluminio, magnesio, calcio,estaño y vanadio; micotoxinas como la ocratoxina A, citrinina y zearalenona; agentes físicos como las radiaciones

ionizantes y los campos magnéticos de baja frecuencia; salicilatos, hipolipemiantes, antidepresivos, vitamina A,insulina, adrenalina, histamina, prostaglandina, e incluso algunos organofosforados a bajas dosis. Aunque elmecanismo de inducción no está bien establecido, se postula la activación de tipo alostérico en el caso del aluminio,inducción de la síntesis enzimática por agentes de tipo hormonal como la sustancia P, o facilitación de la uniónenzima-sustrato por fluidificación de la membrana para la AChE.

Aunque la AchE se encuentra distribuida en muchos tejidos (eritrocitos, riñón, páncreas, bazo, linfocitos), sulocalización preferente es en la placa motora y en el sistema nervioso central, concretamente en la sustancia gris, yaque en la blanca predomina la pseudocolinesterasa.

A pesar de que la AChE (EC 3.1.1.7) es la diana de acción de estos compuestos conocidos comoanticolinesterásicos, la determinación de la butirilcolinesterasa, pseudocolinesterasa o colinesterasa plasmática(ChE) (EC 3.1.1.8) se emplea de forma tradicional como biomarcador para la intoxicación por organofosforados.

Aunque no se conocen bien las funciones fisiológicas de la ChE, que es sintetizada en el hígado, su inhibiciónsuele producirse de forma paralela a la de la AchE.

En el ensayo utilizado, la butiriltiocolina (BuSCh) es hidrolizada específicamente por la enzimapseudocolinesterasa, formándose ácido butírico y tiocolina.

ChEButiril-tiocolina ----------- Ac. butírico + tiocolina

Esta reacción se pone de manifiesto en presencia de ácido 5,5´-ditiobis-(2-nitrobenzoico) (DTNB) que reaccionaestequiométricamente con la tiocolina dando 5-tio-2-nitrobenzoato (TNB), un compuesto de color amarillo. Elaumento en la absorbancia a 410 nm tras la incubación de la muestra biológica con el sustrato (BuSCh) puedeusarse como una medida de la actividad de la enzima.

Algunos organofosforados como los ésteres fósforotionato y fosforoditioato son débiles agentesanticolinesterásicos, debiendo su actividad biológica a la biotrasformación que tiene lugar en el hígado de losvertebrados y en el tracto digestivo y cuerpo graso de los invertebrados. Un ejemplo típico de activaciónmetabólica es la del paratión, un débil inhibidor de las colinesterasas, que se reduce a paraoxón, un fuerte agente




anticolinesterásico formado por desulfuración oxidativa en el enlace P-S, en una reacción catalizada por oxidasasde función mixta [Paration, O,o-dietil-o-(4-nitrofenil)fosforotioato, C10H14NO5PS, Paraoxon, para-nitrofenildietilfosfato, C10H14NO6P]

En la práctica se pretende determinar la actividad enzimática de sueros expuestos in vitro a paratión y paraoxón,comparándola con la del suero control no tratado. El paraoxón puede prepararse por derivatización del paratióncon vapor de bromo, siguiendo la técnica RTLC (reaction thin layer chromatography) que requiere cantidadesmínimas del compuesto.

Reactivos- Tampón fosfato, pH 7.4, 0.2 M

- Sol A: 17.8 g de Na2HPO42H2O en 500 mL de agua; Sol B: 6 g de NaH2PO4 en 250 mL de agua- Añadir aproximadamente 81 mL de la sol B a 19 de la A para ajustar el pH a 7.4

- Butiriltiocolina 24 mM (76.08 mg en 10 mL de agua)- DTNB 0.5 mM (9.90 mg en 50 ml tampón fosfato)- Paratión 1 g / L- Paraoxon 1 g / L- Plasma diluido 1:100; 0.1 mL de plasma en 10 mL de tampón fosfato

Aparatos y Material - 3 Tubos de ensayo, 1 Tubo de centrífuga, Pipetas o micropietas 1 y 0.1 mL, Cubetas 1 cm paso de luz, Baño

termostático a 30 º C, Espectrofotómetro visible, Gradillas, Cronómetro

Normas de seguridad:La utilización de muestras humanas y de dos plaguicidas exige adoptar estrictas medidas de seguridad, así comoel control de los residuos.

Procedimiento experimental Consiste en el ensayo enzimático de la actividad colinesterásica tras la exposición a los plaguicidas:1. Preparar 3 tubos de ensayo rotulados P1 ("Suero No tratado"), P2("Paratión") y P3 ("Paraoxón").2. Añadir 1 mL de suero diluido a cada uno de los tres tubos.3. Añadir 1 mL de agua destilada al tubo P1; 1 mL de la disolución de paratión al tubo P2 y 1 mL de paraoxón al

tubo P3.4. Incubar los tubos en baño termostático a 30 °C durante 20 minutos.5. Añadir 1 mL de DTNB 0.5 mM a todos los tubos.6. Preparar el espectrofotómetro para leer la absorbancia a 410 nm.7. Iniciar la reacción enzimática en el primer tubo, añadiendo 0.1 mL del sustrato (BuSCh 24 mM); mezclar y

trasvasar rápidamente el contenido a una cubeta. Ajustar la referencia a cero (blanco), y con ayuda de uncronómetro, anotar las absorbancias cada 30 seg. durante un periodo de 3 min (anotar el momento exacto de

la lectura si no se hace a los tiempos predeterminados).8. Repetir el paso anterior para el tubo P2 y luego para el tubo P3

Tiempo / Absorbancias: Tubo P1 Tubo P2 Tubo P3(suero) (suero+paratión) (suero+paraoxón)

0 seg. 0 0 0

30

60

90

120

150180




Cálculos1. Representar gráficamente la absorbancia de cada tubo frente al tiempo, comprobando su linealidad.2. Calcular la velocidad de hidrólisis enzimática (actividad enzimática) del sustrato en la mezcla de reacción, a

partir de la fórmula siguiente:

R=velocidad de hidrólisis en la mezcla de reacción (mol/L/min) = ∆A/min 106 mol/L/min13600

3. Calcular el porcentaje de actividad enzimática con paratión y paraoxón, en las condiciones experimentales delensayo, con respecto al control.

4. ¿Qué hubiéramos obtenido de haber determinado acetilcolinesterasa cerebral con los reactivoscorrespondientes para esta enzima?

5. ¿Podríamos haber ensayado acetilcolinesterasa en suero?

6. ¿Son relevantes los resultados con lo que ocurriría in vivo?

Referencias:- Arufe MI, Romero JL, Gamero JJ, Vizcaya MA, Moreno MJ (1997) Oxidación de insecticidas

anticolinesterásicos: un experimento sencillo para ilustrar la importancia de la bioactivación en toxicología.Revista de Toxicología 14: 84

- Repetto G, Sanz P, Repetto M. In vivo and in vitro Effect of Trichlorfon on esterases of the Red CrayfishProcambarus Clarkii. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 41: 597-603 (1988)

- Repetto G, Sanz P, Repetto M. Comparative in vitro effects of sodium arsenite and sodium arsenate onneuroblastoma cells. Toxicology 92: 143-154 (1994).




PT04: DETECCION DE CANNABINOIDES EN MUESTRAS VEGETALES PORCROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

Objetivos:Es preciso realizar rápidamente la identificación presuntiva de la posible presencia de cannabis en dos muestrasvegetales. Se sugiere el empleo de una reacción coloreada y una técnica de cromatografía en capa fina.

Introducción:La planta Cannabis sativa, variedad índica, pertenece a la Familia Cannabináceas, originaria de Asia Central ycultivada en extremo Oriente desde tiempos remotos. Las denominaciones más generalizadas del "polvo" son"Has" (Jas), "Haschish" (Jachis), "Chocolate". Corresponde esta fracción a unos pelillos huecos de tamañomicroscópico alojados en las hojas y flores femeninas, cuyo interior está relleno de una sustancia aceitosa quecontiene los principios activos, entre ellos, los tres fundamentales: cannabinol (CBN), tetrahidrocannabinol (THC) ycannabidiol (CBD). Este polvillo untuoso al tacto, cuyo colorido varía desde el amarillo limón hasta el verde oscuroo marrón, es frecuentemente prensado formando pastillas de consistencia dura que serán protegidas por plásticoo papel de aluminio.

Son muy numerosos los sistemas colorimétricos y de cromatografía en capa fina que se han descrito en laliteratura para la separación e identificación analítica de los constituyentes cannábicos.

Reactivos - Eter de petróleo- Reactivo de Duquenois: Acetaldehido 1 mL, Vainillina 1 g y Alcohol etílico100 mL.- Azul B: 0.25 g de azul B (dicloruro de 3,3´-dimetoxibifenil-4,4´-bis (diazonium)) en 50 mL de Na OH 0.2 M.

Es extemporaneo- HCl Concentrado- Hexano / Eter dietílico (80:20); preparar 200 mL- Cloroformo.- Patrón: solución en éter de petróleo de CBD, THC y CBN

Material:- Placas de aluminio recubiertas de gel de sílice de 0.2 mm de espesor de capa.- 2 Tubos de ensayo

- 2 Tubos de centrifuga de 12 mL- 2 Embudos- Papel de filtro- Baño de agua en caliente- Probetas- Pipetas 5 mL- Tanque de desarrollo- Pulverizador - Secador de pelo- Capilares

Normas de seguridadSe emplean compuestos corrosivos, irritantes, nocivos e inflamables

Procedimiento1 ExtracciónLas muestras vegetales se encuentran en tubos de ensayo en la gradilla.Añadir aproximadamente 5 mL de éter de petróleo y calentar a ebullición en la vitrina de gases, introduciéndolointermitentemente en un baño de agua a unos 80 º C (dirigir siempre la boca del tubo hacia donde no haya nadie).

Filtrar a través de un embudo con papel de filtro a un tubo de ensayo.Se vuelve a añadir al residuo sólido 5 mL de éter de petróleo y se calienta de nuevo a ebullición en el bañoSe filtra recogiendo este filtrado sobre el anterior.Se divide el líquido, pasando 1/3 del extracto a un tubo de centrífuga, que se evapora hasta pequeño volumen,aproximadamente 1 gota, y se destina a cromatografía en capa fina. Los 2/3 del tubo de ensayo se evaporanhasta casi sequedad.




2 Análisis cualitativoA) Reacciones Coloreadas

Al residuo seco se le añade primero, 2 mL del reactivo de vainillina (Duquenois y Mustafa) y a continuación envitrina de gases otros 2 mL de HCl concentrado.

Si se produce una fugaz sucesión de colores, amarillo, verde, azul, que termina en violeta, en lamuestra había cannabis.Para confirmarlo se añade al líquido un volumen igual de cloroformo y se agita;la capa inferior se colorea también en violeta si hay cannabis. Otras plantas dan colores diferentesen una o ambas fases líquidas.

B) Cromatografía en capa fina (C.C.F.) Se corta un trozo de placa de aproximadamente 5 x 10 cm.Se siembra sobre la placa en una pequeña línea el extracto etéreo de la muestra.Se desarrolla la placa en un tanque conteniendo Hexano / Eter dietílico (80:20), hasta que el frente alcance 3cm del borde superior.Se retira la placa del tanque, se seca con un secador y se le somete una vez seca a un nuevo desarrollo.Se seca de nuevo y se revela en vitrina de gases pulverizando con solución de Azul B en NaOH 0.2 M.Aparecen las manchas del CBD, THC y CBN con coloraciones que varían desde el rojo, naranja hasta elvioleta sobre fondo blanco o ligeramente amarillo. Comparar con los factores de referencia teóricos (Rf):CBN: violeta, Rf: 0,45-0,71THC: rojo, Rf: 0,5-0,77CBD: naranja, Rf: 0,55-0,82

Resultado¿Hay presencia de cannabis en las muestras?

¿Qué cannabinoide predomina?

Calcula los factores de referencia (Rf)

Dibuja la placa:




PT05: DETERMINACION DE NITRATOS EN HOJAS DE LECHUGA

Objetivos:Determinar los nitratos presente en el alimento. De esta forma sabremos la cantidad de dicho alimento que sepodría consumir para no superar la IDA, en el caso de que éste fuera la única fuente de nitratos.

Fundamento:

El ión nitrato es precursor del ión nitrito, sustancia que tras exposición aguda da lugar a metahemoglobinemia ytras exposición crónica puede dar lugar a compuestos N-nitroso, que son reconocidos carcinógenos.El ión nitrato reacciona con la brucina para dar lugar a un producto de reacción de color rojo, que pasa alanaranjado y se estabiliza en el amarillo. En medio sulfúrico concentrado no interfieren los nitritos. Dan reacciónanáloga a oxidantes enérgicos como IO-

3, ClO-3 y CrO2-

4, sustancias que no se encuentran normalmente en losalimentos.

Reactivos:Disolución madre de 400 g/mL de NO-

3, preparada a partir de KNO3 anhidro, previamente desecado a 105ºCdurante 1 hora.Disolución de trabajo de 80 g/mL de NO-

3, preparada a partir de la anterior.H2SO4 30 N.Reactivo colorimétrico: Se disuelven 0'1 g de brucina y 0'01 g de ácido sulfanílico en aproximadamente 7 mL deagua destilada caliente. Se añaden 0'3 mL de HCl concentrado y una vez a temperatura ambiente se completahasta 10 mL.

Método:

Se pesan exactamente 10 g de hojas de lechuga y se trituran. Se tratan con 200 mL de agua destilada y se pasa aun matraz erlenmeyer y se mantiene a 80ºC durante 20 min. Una vez frío el líquido extractivo, se filtra y se diluyehasta 250 mL. Se introducen 0, 0.25, 0.50, 0.75, y 1 mL de la disolución de trabajo de NO-

3 en matraces aforadosde 25 mL, y se completa su volumen hasta 1 mL con agua destilada. En otro matraz se introducen 1 mL del líquidoextraído. A continuación se añade, a todos ellos, 0.5 mL de la disolución de brucina y 5 mL de sulfúrico, con pipetay en la campana, lentamente y agitando. Se deja 10 min en oscuridad. Se añaden 12 mL de agua destilada y sellevan a oscuridad durante 10 min y seguidamente se mantiene a temperatura ambiente durante 10 min.Posteriormente, se enrasan, agitan con cuidado y se mide la absorbancia a 410 nm frente al blanco.

BIBLIOGRAFÍAK Fytianos, P Zarogiannis. Nitrate and nitrite accumulation in fresh vegetables from Greece. Bull Environ ContamToxicol 62 (1999) 187.

Cálculos:

1.- ¿Cuál es el fundamento de la determinación de nitratos?

2.- ¿Por qué se realiza la reacción en medio ácido?

3.- En condiciones normales ¿podría haber interferencias en la determinación de nitratos con sustancias como

IO-3, ClO-3 y CrO2-4?

BRUCINA




4.- Teniendo en cuenta que, según la legislación europea, el contenido máximo de nitratos expresado en mgNO3/kg de lechuga debe encontrarse entre 2000-4500, calcular los nitratos que hay en la muestra en mg/kg delechuga.

5.- Teniendo en cuenta que la ingesta diaria admisible (IDA) para los nitratos es de 3’65 mg/Kg/día, calcular cuánta cantidad del producto analizado se podría ingerir por día, si el peso estándar de un individuo es de 70 Kg yno tuviera otras fuentes de nitratos.

6.- Si sólo tuviéramos un método de determinación de nitritos, ¿cómo podríamos medir los nitratos en la muestra?

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