cromatografia aspectos generales

CROMATOGRAFÍA ASPECTOS GENERALES

OBJETIVOS: • LOS PRINCIPIOS BÁSICOS

DE LA CROMATOGRAFÍA.• TIPOS DE CROMATOGRAFÍA.• APLICACIONES

CROMATOGRAFÍA ASPECTOS GENERALES

LA CROMATOGRAFÍA ES UN PROCEDIMIENTO FÍSICO-QUÍMICO DE

SEPARACIÓN DE LOS CONSTITUYENTES DE UN MEZCLA.

(DESTILACIÓN, LA FILTRACIÓN ETC.)

ANÁLISIS QUÍMICO. F. Rouessac, A. Rouessac, 2003, Mc Graw Hill.QUÍMICA ANALÍTICA CONTEMPORANEA. J.F. Rubinson, K.A. Rubinson,2000, Pearson Education.

CONCEPTOS GENERALES

Fase móvil: consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico).

Fase estacionaria: se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.

Los componentes de la mezcla interaccionan en forma diferente con la fase estacionaria y con la fase móvil.

Los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando.


TIPOS DE CROMATOGRAFÍA

Cromatografía plana: La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales técnicas son:

Cromatografía en papel y Cromatografía en capa fina

Cromatografía en columna: La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen:

Cromatografía de líquidos.

Cromatografía de gases.

Cromatografía de fluidos supercríticos.


CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA

Consiste en la aplicación de una muestra compleja a una columna de cristal.

Contiene una matriz sólida porosa que está inmersa en el solvente.

Se bombea una gran cantidad de solvente a través de la columna.

Las diferentes mezclas se van retrasando de manera distinta según sus interacciones con la matriz.

Se pueden separar de acuerdo a su carga, su hidrofobicidad, su tamaño o su capacidad de unirse a grupos químicos particulares.


CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA


CROMATOGRAFÍA INTERCAMBIO IÓNICO

Se realiza sobre matrices que tienen una carga neta.

Carga negativa: intercambio de cationes

Carga positiva: intercambio de aniones

La carga de la matriz de la columna así como la carga de la muestra dependerá del pH del solvente y de su fuerza iónica

Se usa en la separación de moléculas grandes (proteínas y ácidos nucleicos).



Funcionamiento

En unas condiciones determinadas serán retenidas en la columna las muestras que tengan una carga complementaria a la de la matriz de la gel, siendo eluidas las restantes.

Para eluir las muestras retenidas se puede variar la carga iónica del solvente o su pH de forma que se alcance el punto isoeléctrico de la muestra de interés o el de la matriz, neutralizando de este modo la fuerza que retiene a la muestra en la columna.



FASES ESTACIONARIAS



ANÁLISIS QUÍMICO. F. Rouessac, A. Rouessac, 2003, Mc Graw Hill.QUÍMICA ANALÍTICA CONTEMPORANEA. J.F. Rubinson, K.A.

Rubinson,2000, Pearson Education.

CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN

La cromatografía de exclusión molecular o de filtración en gel, separa las muestras en base a su tamaño.

La matriz de la columna esta formada por un polímero entrecruzado con poros de tamaños determinados.

Las muestras de mayor tamaño migran a lo largo de la columna con mayor velocidad que las de tamaño pequeño.

Las muestras de menor tamaño, entran en los poros y se mueven a lo largo de la columna lentamente porque tienen que atravesar los laberintos que se encuentran en el interior de las bolas de polímero en su marcha a lo largo de la columna


CROMATOGRAFIA DE EXCLUSIÓN


CROMATOGRAFÍA DE GASES


CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

MONTAJE EXPERIMENTAL

FORENSIC EXAMINATION OF FIBRES. J. Robertson,1999, Print ISBN: 978-0-7484-0816-0eBook ISBN: 978-0-203-48451-7 CAP 11.

APLICACIONES EN COLORANTES

REACTIVE BLACK BO-R2907LOT NO:0698/11

REACTIVE BLACK WNN I522-L106130

FASE ESTACIONARIA: TLC SILICA GEL 60

FASE MOVIL: 2PROPANOL-ETANOL-AMONIACO-PIRIDINA(4:1:3:2)



REACTIVE BLACK BO-R2907LOT NO:0698/11

REACTIVE BLACK WNN I522-L106130


FASE MOVIL: 2PROPANOL-ETANOL-AMONIACO-PIRIDINA-AGUA(8:3:4:4:3)



FASE MOVIL: 2PROPANOL-ETANOL-AMONIACO-PIRIDINA-AGUA(8:3:4:4:3)

FASE MOVIL: 2PROPANOL-ETANOL-AMONIACO-PIRIDINA(4:1:3:2)



FASE MOVIL: 2PROPANOL-ETANOL-AMONIACO-PIRIDINA (4:1:3:2)FASE ESTACIONARIA: TLC SILICA GEL 60 (ACIDOS)


ROJO RAINOFIX TED: MA ICL12010

REACTIVE RED ED

ROJO CESPERSE R: 141210.08

FASES MOVILES:

Xileno-Piridina (4:1)

Xileno-metanol-Ciclohexanona(20:2:1)

Varsol-etil acetato-ciclohexanona(5:4:1)

DISPERSOS


ROJO CESPERSE R: 141210.08

MARINO CESPERSE EXSF 300%: 141210.08


PARDO DIRECTEX CN 070911-03

PARDO DIRECTEX B

240311-02


FASE MOVIL: 2-PROPANOL-

ETANOL-AMONIACO-

PIRIDINA-AGUA


DIRECTOS

APLICACIONES EN SURFACTANTES

Surfactantes: Se visualizan como manchas de color azul con azul de bromofenol (50 mg disueltos en 100 ml metanol más 0,4 ml de ácido acético) sobre placas de sílice.

Al rociar las placas, despues del proceso cromatografico, con una solución de amarillo de pinacryptol (100 mg en 100 mL de agua caliente), se observan manchas naranjas bajo la influencia de la luz ultraviloleta.

Pinacryptol yellow

HANDBOOK OF DETERGENTS: PART C: ANALYSIS. U. ZOLLER, H. WALDHOFF, 2004, Print ISBN: 978-0-8247-0351-6 eBook ISBN: 978-1-4200-3033-4


Matissek recomienda lo siguiente para la separación de surfactantes:Fase estacionaria: silica gel 60, fase móvil: etanol / ácido acético (9:1 v / v), distancia de separación: 10 cm. Pinacryptol como reactivo de visualización.

Armstrong y Stine Recomiendan lo siguiente para la separación de surfactantes: Fase estacionaria: Silica gel 60, Fase móvil: diclorometano/metanol/acido acético (8:1:1 v/v)

Matissek Armstrong y Stine

HANDBOOK OF DETERGENTS: PART C: ANALYSIS. U. ZOLLER, H. WALDHOFF, 2004, Print ISBN: 978-0-8247-0351-6 eBook ISBN: 978-1-4200-3033-4

RETROALIMENTACIÓN